第44讲 微生物的培养技术和应用 课件 2026届高三生物一轮复习（人教版）

该高中生物学高考复习课件聚焦“微生物的培养技术和应用”专题，覆盖培养基配制、无菌技术、纯培养、选择培养与计数等高考核心考点，依据考情分析明确近3年山东、湖南等多省卷以简答题或选择题高频考查，对接高考评价体系中实验操作逻辑与图表分析能力要求，构建系统的考点梳理框架。 课件亮点在于“真题演练+核心素养培养”的备考策略，融入2023-2025年广东、江苏等多省高考真题，通过平板划线法灼烧目的分析、稀释涂布平板法计数公式应用等典型题型解析，培养学生科学思维与探究实践素养。特设易错点警示如灭菌与消毒区别，帮助学生掌握实验答题技巧，教师可据此精准定位复习重点，提升备考效率。

讲师：xxx 第44讲 微生物的培养技术和应用 Never 1 考情分析 考点要求 考查形式 近3年出现频率 考查能力 微生物的培养技术 简答题或选择题 2025年山东卷、湖南卷、广东卷、河北卷、江西卷、北京卷、天津卷等；2024年江苏卷、山东卷、重庆卷、浙江卷等；2023年重庆卷、北京卷全国卷、山东卷、广东卷等。 1. 基础概念理解 （如：灭菌、培养基类型、接种方法）； 2. 实验操作逻辑 （如：步骤顺序、无菌技术应用）； 3. 图表分析能力 （如：解读实验结果、数据推理）； 4. 实际应用迁移 （如：结合场景设计实验、解决问题）。 微生物的选择培养与计数 简答题或选择题 2 思维导图构建 培养基的组成与功能 微生物的培养技术和应用 无菌技术 物理状态分：固体培养基、液体培养基、半固体培养基 微生物的选择培养和计数 功能分：选择培养基和鉴别培养基；成分分：合成培养基和天然培养基 种类 碳源、氮源、水和无机盐，除了营养物质外，培养基还要满足微生物对PH、氧气、特殊营养物质的需求。 培养基组成 消毒：煮沸消毒法、巴氏消毒法、化学药剂消毒法、紫外线消毒 灭菌：灼烧灭菌法、干热灭菌法、湿热灭菌法 选择培养基：允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基 微生物的数量测定 微生物的纯培养 常用方法：平板划线法和稀释涂布平板法 概念：由单一个体繁殖所获得的微生物群体是纯培养物，获得纯培养物的过程就是纯培养。 间接计数法--稀释涂布平板法；选择30-300个菌落的平板进行计数 直接计数 —计数板计数法 考点一 微生物的基本培养技术 温故知新 无细胞结构 原核细胞 真核细胞 微生物类群 病毒：新冠病毒等RNA病毒； 噬菌体等DNA病毒 细菌：蓝细菌、大肠杆菌等； 放线菌：链霉菌等 单细胞真菌：酵母菌、霉菌等； 原生生物：草履虫、衣藻等 链霉菌，放线菌目的一属 5 1. 是研究和应用微生物的前提，也是发酵工程的重要基础。 2.实验室培养微生物的条件： ①为微生物提供合适的 条件； ②要确保 ，并将需要的微生物分离出来。 防止杂菌污染，获得纯净的微生物培养物 微生物结构简单、形体微小，眼睛看不到，若想得到纯净的微生物，就必须对其进行培养和分离。 营养和环境 其他微生物无法混入 培养基 无菌技术 有无 凝固剂琼脂 液体培养基 固体培养基 半固体培养基 液体培养基应用于工业或扩大培养 固体培养基应用于微生物的分离和鉴定，活菌计数 半固体培养基则常用于观察微生物的运动及菌种保藏等 一、培养基的配制 1.定义： 人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。 2.作用： 用以培养、分离、鉴定、保存微生物或积累其代谢物。 3.种类： （1）按物理性质分 微生物在固体培养基表面生长，可以形成肉眼可见的菌落。 微生物生长繁殖产生的菌落 沙门氏菌 毛霉 区分依据：形状、大小、光泽度、颜色、透明度等。 菌落是鉴定菌种的重要依据 按用途 选择培养基 鉴别培养基 如含抗生素的培养基 如不加氮源的培养基 伊红亚甲蓝（大肠杆菌） 酚红（分解尿素菌） 刚果红（分解纤维素菌） 加高浓度NaCl的培养基 （2）按用途分 （3）按化学性质分 按化学性质 天然培养基 合成培养基 含化学成分不明确的天然物质 一般用于工业生产 计算 称量 溶化 灭菌 选择培养基 鉴别培养基 允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。 在培养基中加入某种指示剂或化学药品,用以鉴别不同种类的微生物。 以尿素为唯一氮源的培养基可用于选择培养_____________； 以纤维素为唯一碳源的培养基可用于选择培养_______________。 尿素分解菌 纤维素分解菌 伊红美蓝培养基（大肠杆菌） 大肠杆菌的代谢产物（有机酸）能与伊红美蓝结合，从而形成深紫色、并带有绿色金属光泽的菌落。· 一般都含有碳源、氮源、水、无机盐 碳源 无机碳源：CO2、CO32-、HCO3- 有机碳源：糖类、脂质、蛋白质、有机酸、石油等 自养微生物 异养微生物 功能：①构成细胞物质和一些代谢产物②有机碳既是碳源又是能源。 氮源 无机氮源：NH4＋、NO3-、NH3等 有机氮源：牛肉膏、蛋白胨、尿素、氨基酸等 功能：主要用于合成蛋白质、核酸及含氮代谢产物等。 含C、H、O、N的有机物是异养型微生物的碳源、氮源、能源。 无机盐 功能：提供无机营养 调剂PH 维持渗透压 水 功能：良好的溶剂 维持生物大分子结构的稳定 4.培养基的配方： 特殊条件：pH、O2和特殊营养物质 例： 个 性 定 制 ④培养厌氧微生物时，需要提供_____的条件。 ①培养乳酸杆菌时，需要在培养基中添加_______； ②培养霉菌时，需要将培养基调至_____； ③培养细菌时，需要将培养基调至_____________； 维生素 酸性 中性或弱碱性 无氧 特殊营养物质：主要指生长因子(微生物生长所必须的、微量的、自身不能合成或合成很少的有机物) 种类：维生素、氨基酸、碱基、嘌呤、嘧啶、胺类等 来源：酵母膏、蛋白胨、动植物组织提取液等 1.目的：__________________________。 2.关键：________________。 获得纯净的微生物培养物 防止杂菌污染 项目 消毒 灭菌 作用强度 较为______ _______的物理、化学因素 消灭微生物 的数量 物体表面或内部　　 　微生物 物体内外的　　 微生物 能否消灭 芽孢、孢子 消灭 芽孢 能消灭 芽孢和孢子 适用对象 操作空间、操作者 的衣着和手等 接种环、接种针、 玻璃器皿、培养基等 常用方法 温和 强烈 一部分 所有 部分 全部 煮沸消毒法、巴氏消毒法、化学药剂消毒法、紫外线消毒法 湿热灭菌、干热灭菌、灼烧灭菌 灭菌的效果比消毒要好。活体生物材料、操作者的手等只能消毒，而不能灭菌。 二、无菌技术 消毒和灭菌的实质都是使微生物的蛋白质或核酸变性 获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵，要注意以下几个方面： ①对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。 ②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。 ③为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。 ④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。 无菌技术除了用来 外，还能 。 防止实验室的培养物被其他外来微生物污染 有效避免操作者自身被微生物感染 生物消毒法是指利用生物或其________除去环境中的部分微生物的方法。 （1）消毒 ①煮沸消毒法：最常用的方法，针对某些实验器具、餐具、饮用水等，采用在100℃煮沸5~10min的方法，达到消毒的目的。 ②巴氏消毒法：62-65℃下煮30min 或 80-90℃下煮30s-1min。 ③化学药剂消毒法：用70%酒精擦拭双手；氯气消毒水源。 ④紫外线消毒法：用紫外灯照射30min接种室、接种箱、超净工作台 代谢物 利用某些微生物可以净化污水、污泥，原因是? 有的微生物能够寄生于多种细菌体内，使细菌裂解 （不包括芽孢和孢子） 消毒指使用较为温和的物理、化学或生物等方法杀死物体表面或内部一部分微生物。 (2)灭菌 是指使用强烈的理化方法杀死物体内外所有的微生物。 （包括芽孢和孢子） 灭菌方法有 、 、 。 灼烧灭菌 干热灭菌 湿热灭菌 ①接种环、接种针、试管口等使用 ； ②玻璃器皿、金属用具等使用 ，所用器械是 ； ③培养基、无菌水等使用 ，所用器械是  。  灼烧灭菌法 干热灭菌法 干热灭菌箱 高压蒸汽灭菌法 高压蒸汽灭菌锅 知识拓展 芽 孢 和 孢 子 芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。例如，有的细菌的芽孢煮沸3小时以后才死亡。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜(如温度、水分适宜)的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌。 孢子：细菌、原生动物、真菌和植物等产生的一种有繁殖作用的无性生殖细胞。能直接发育成新个体。 芽孢：有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体(不是繁殖体)，叫作芽孢。 3.注意事项 (1)实验操作时，应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品接触。 (2)为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在超净工作台并在酒精灯火焰附近进行。 最常用的接种方法是______________和__________________。 灭菌 分离 平板划线法 稀释涂布平板法 (1)培养物： (2)纯培养物： 接种于培养基内，在合适条件下形成的含特定种类微生物的群体 (3)纯培养： 获得纯培养物的过程 1.培养物、纯培养物、纯培养的概念 配制培养基、________、接种、________和培养等。 由单一个体繁殖所获得的微生物群体 概念： 步骤： (4)接种方法： 三、微生物的纯培养 分散的微生物(单一个体)在适宜的 表面或内部可以繁殖形成肉眼可见的、有一定形态结构的 。 2.菌落 1. 概念： 2.特征： 固体培养基 子细胞群体 形状、大小、光泽度、颜色、透明度等。 —是鉴定菌种的重要依据 3.获得单菌落的方法： ①平板划线法 ②稀释涂布平板法 毛霉 3.微生物的纯培养步骤 平板划线法 将接种后的平板倒置，放入恒温培养箱中培养一段时间。 (可用于计数) 接种和分离 制备培养基 培养 ①配制培养基 ②灭菌 ③倒平板 培养基：湿热灭菌（高压蒸汽灭菌法） 培养皿：干热灭菌 温度：50℃左右 操作：酒精灯火焰附近 稀释涂布平板法 培养 对照 将一个未接种的平板倒置，放入相同环境中培养相同时间。 （包括配制培养基、灭菌、接种、分离和培养等） 平板划线法 3．平板划线的具体操作见下面的流程图： ①将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环的金属丝烧红。 ②在火焰旁冷却接种环，并拔出装有酵母菌培养液的试管的棉塞 ③将试管口通过火焰 ④将已冷却的接种环伸入菌液中，蘸取一环菌液 ⑤将试管口通过火焰，并塞上棉塞 ⑥在火焰附近将皿盖打开一条缝隙，用接种环在培养基表面迅速划三至五条平行线，盖上皿盖。注意不要划破培养基 ⑦灼烧接种环，待其冷却后，从第一次划线的末端开始作第二次划线。重复以上操作，作第三、四、五次划线。注意不要将最后一次的划线与第一次划线相连。 灼烧时期 目的 取菌种前 每次划线前 接种结束后 杀死接种环上原有微生物。 杀死上次划线残留菌种,使下次划线菌种直接来自上次划线末端 杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。 4．平板划线法的几个要注意的问题 （1）灼烧接种环的目的是什么？ （2）第二次及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？ 划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。 （3）接种结束后，为什么要将一个未接种的培养基和一个已接种的培养基放在一起培养，未接种的培养基表面如果有菌落生长，说明了什么？ 培养未接种的培养基的作用是对照，未接种的培养基经过培养后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的；若有菌落形成，说明培养基灭菌不彻底，或培养基被污染了，需要重新制备。 ⑤在灼烧接种环之后，要等其冷却后再进行划线以免接种环温度太高，杀死菌种。 第1区划线 接种环灭菌 第2区划线 接种环灭菌 第3区划线 接种环灭菌 接种环灭菌 1 2 3 4 5 ①接种环只蘸一次菌液,在培养基不同位置连续划线多次 小结：平板划线法在划线时注意的问题 ④划线后,培养皿倒置培养 ②划线首尾不能相接 ③每次划线前接种环进行灼烧灭菌，待冷却后再开始画线 1.在实验室培养微生物，需要人为地为微生物提供适宜的营养和环境条件。下列关于培养基配制的说法正确的是(　　) A.培养基中需要碳源、氮源、水和无机盐齐全 B.培养基中必须添加琼脂 C.培养基制备中均需调节pH至酸性 D.无论哪种培养基均需要灭菌 D 课堂随练 2. 灭菌、消毒、无菌操作是生物学实验中常见的操作。下列叙述正确的是(　　) A．动、植物细胞DNA的提取必须在无菌条件下进行 B．微生物、动物细胞培养基中需添加一定量的抗生素以防止污染 C．为防止蛋白质变性，不能用湿热灭菌法对牛肉膏蛋白胨培养基进行灭菌 D．可用湿热灭菌法对实验中所使用的微量离心管、细胞培养瓶等进行灭菌 D 3.下图为微生物的实验室培养的有关操作，下列相关叙述错误的是(　　) A．步骤①中，需将接种工具灼烧至变红，以杀灭杂菌 B．步骤②中，将接种工具冷却时不宜距酒精灯火焰太远 C．图中接种方法的目的是使菌种逐渐稀释，经培养后获得单个菌落 D．接种后应将培养皿倒置培养，培养后可以根据结果进行微生物计数 D 课堂随练 4.(2024·江苏南京调研)如图为实验室培养和纯化大肠杆菌过程中的部分操作步骤，下列说法正确的是(　　) A．步骤①后需将培养基灭菌并调节pH B．步骤①②③操作时需要在酒精灯火焰附近进行 C．步骤③到④的过程中，接种环共灼烧处理了5次 D．步骤①结束后需倒置平板，步骤④结束后不需要 B 课堂随练 5.灭菌、消毒、无菌操作是生物学实验中常见的操作。下列叙述正确的是(　　) A.动、植物细胞DNA的提取必须在无菌条件下进行 B.微生物、动物细胞培养基中需添加一定量的抗生素以防止污染 C.为防止蛋白质变性,不能用湿热灭菌法对牛肉膏蛋白胨培养基进行灭菌 D.可用湿热灭菌法对实验中所使用的微量离心管、细胞培养瓶等进行灭菌 D 课堂随练 考点二 微生物的选择培养和计数 人为提供有利于目的菌生长的条件（包括营养、温度和pH等），同时抑制或阻止其他微生物的生长。 在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基称为选择培养基。 1.实验室中微生物筛选的原理： 2.选择培养基的概念： 不加氮源的无氮培养基 不加含碳有机物的无碳培养基 分离自养型微生物 分离固氮菌 分离酵母菌、霉菌等真菌 分离金黄色葡萄球菌 分离能消除石油污染的微生物 加高浓度食盐 石油是唯一碳源 一、选择培养基 加入青霉素的培养基 项目 选择培养基 鉴别培养基 原理 用途 举例 图示 加入不影响甚至促进目标微生物生长，而抑制或阻止其他种类微生物生长的化学物质 加入某种指示剂或化学药品(不影响微生物正常生长)，使微生物的某种代谢产物与培养基中的特定指示剂或化学药品发生反应 培养、分离出目标微生物 鉴别目标微生物 培养酵母菌和霉菌时，可在培养基中加入青霉素，抑制细菌的生长；利用以尿素为唯一氮源的培养基来培养可分解尿素的细菌 可用伊红亚甲蓝培养基鉴定饮用水或乳制品中是否含有大肠杆菌(若有，则菌落呈深紫色，并有金属光泽 二、选择培养基与鉴别培养基的比较 怎么证明一个选择培养基具有选择性呢？ 应该设置基础培养基（如牛肉膏蛋白胨培养基）或完全培养基作为对照 基础培养基 选择培养基 Q：如果让你分离土壤中分解尿素的细菌，你应该怎么设计呢？ 尿素［CO(NH2)2］含氮量高，化学性质稳定，是一种重要的农业氮肥，尿素不能直接被农作物吸收，土壤中的细菌将尿素分解成NH3，再被转化为NO3-、NH4+等被植物吸收 。 土壤中的细菌分解尿素是因为他们能合成脲酶。 CO(NH2)2 + H2O 2NH3 + CO2 脲酶 分解尿素细菌鉴定原理： 细菌合成的脲酶将尿素分解为氨，氨会使培养基的碱性增强，pH升高，因此可以通过检测培养基pH的变化来判断是否发生了该化学反应，进而判断该菌是否为尿素分解细菌。 CO(NH2)2 + H2O 2NH3 + CO2 脲酶 呈碱性，遇酚红指示剂呈 色。 红 在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，培养某种细菌后，如果pH升高，指示剂将变红： 分解纤维素的细菌鉴定： 纤维素能与刚果红形成红色复合物，但纤维素水解产物纤维二糖和葡萄糖不能与刚果红形成红色复合物。 在以纤维素为唯一碳源的培养基中加入刚果红，接种土壤微生物培养，菌落周围出现透明圈，说明这些细菌能分解纤维素。 透明圈 1.从物理性质来讲，两者属于_____培养基，判断依据是__________________；该类培养基的主要用途为_______________。 2.从用途上来讲，培养基二属于_____培养基，目的是为了获得_________。 3.两种培养基共有的培养基成分有：_____________________； 培养基一的碳源为_______，氮源为_______； 培养基二的碳源为_______，氮源为_______。 培养基一 牛肉膏 5.0g 蛋白胨 10.0g NaCl 5.0g 琼脂 20.0g 蒸馏水 定容到1000ml 培养基二 KH2PO4 1.4g NaH2PO4 2.1g MgSO4·7H2O 0.2g 葡萄糖 10.0g 尿素CO(NH2)2 1.0g 琼脂 15.0g 蒸馏水 定容到1000ml 固体 添加了凝固剂琼脂 分离、鉴定、计数 选择 能分解尿素的微生物 碳源、氮源、无机盐、水 牛肉膏 蛋白胨 葡萄糖 尿素 课堂随练 ②火焰旁将10g土样加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中,充分摇匀,制成菌液。取1mL上清液加入盛有9mL无菌水的试管中，依次等比稀释。 1×10 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL 1×102 1×103 1×104 1×105 1×106 1×107 9mL无菌水 90mL无菌水 10g ①铲取土壤，将样品装入纸袋中 1.梯度稀释 三、微生物的选择培养 ③取0.1mL菌液，滴加到培养基表面。 ④将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中。 ⑤将涂布器放在火焰上灼烧，待酒精燃尽、涂布器冷却后，再进行涂布。 ⑥用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使涂布均匀。 各梯度分别涂布3个平板1个不涂布作空白对照 2.涂布平板 主要方法 稀释涂布平板法 平板划线法 主要步骤 接种工具 菌体获取 能否用于计数 共同点 系列梯度稀释操作和涂布平板操作 接种环在固体培养基表面连续划线 涂布器 接种环 从适宜稀释度的平板上的菌落中挑取菌体 在具有显著的菌落特征的区域挑取菌体 可以计数，但是操作复杂，需涂布多个平板 不能计数 使培养基上形成由单个细菌细胞繁殖而来的子细胞群体——菌落 比较：稀释涂布平板法和平板划线法的比较 待涂布的菌液被培养基吸收 将平板倒置 30～37℃恒温培养1～2d后进行计数 3.微生物的培养 当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。 4.间接计数法——活菌计数法(即稀释涂布平板法) ①原理： ②计数原则: 选择30-300个菌落的平板进行计数； 统计的菌落往往比活菌的实际数目低； 每个稀释度至少取3个平板取其平均值； 因为当两个或多个细胞连在一起时，繁殖后形成的还是一个菌落 重复实验，减少偶然因素对实验结果的影响 ③某同学在稀释倍数为106的培养基中测得平板上菌落数的平均值为234个(涂布平板时所用稀释液的体积为0.1 mL)，那么稀释倍数为106的试管中细菌的浓度是 个/mL，稀释倍数为10的锥形瓶中细菌的浓度为 个/mL，所以每克样品中的细菌数是 个。 2.34×103 2.34×108 2.34×109 每g样品中菌落数＝ (C÷V)×M M代表稀释倍数 C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数 V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL) ④计算公式: 复习：显微镜直接计数法 原理： 利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计数一定容积的样品中微生物的数量 方法： 用计数板计数（计菌体） 缺点： 不能区分死菌与活菌而使计数结果偏大 常用于相对较大的酵母菌细胞、霉菌孢子等的计数 对细菌等较小的细胞进行观察和计数 项目 间接计数法(稀释涂布平板法) 直接计数法(显微镜计数法) 缺点 结果 比较：间接计数法和直接计数法 当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落 不能区分活菌和死菌 比实际值偏小 比实际值偏大 1.实验目的： （1）从土壤中分离出能够分解尿素的细菌 （2）统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌 2.实验原理： 绝大多数微生物都能利用葡萄糖，但是只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素。利用以尿素作唯一氮源的选择培养基，可以从土壤中分离出分解尿素的细菌。 葡萄糖 10.0g 尿素 1.0g KH2PO4 1.4g Na2HPO4 2.1g MgSO4·7H2O 0.2g 琼脂 15.0g 蒸馏水 1000ml KH2PO4和Na2HPO4的作用是： ①提供无机盐； ②调节pH。 3.研究思路； 土壤取样 制备培养基 样品稀释与取样涂布 微生物的培养与观察 四、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 4.实验步骤： 土壤取样 →从接近中性且潮湿的土壤中取样。先铲去表层土，在距离地表3-8cm的土壤层取样。 →以尿素为唯一氮源（选择培养基） →不同微生物，稀释度不同，以保证菌落数 在30～300之间、适于计数的平板 →培养温度30-37℃，不同的微生物往往需要不同的培养温度和培养时间 →每隔24h统计一次菌落的数目，选菌落数目稳定时作为结果纪录 →稀释涂布平板法 配制土壤溶液和培养基 样品梯度稀释 接种 培 养 计数计算 5.结果分析与评价 内容 现象 结论 有无杂菌污染的判断 选择培养基的筛选作用 样品的稀释操作评价 重复组的结果评价 对照的培养皿中无菌落生长 对照的培养皿中有菌落生长 未被杂菌污染 被杂菌污染 牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数目大于选择培养基上的数目 选择培养基具有筛选作用 得到3个或3个以上菌落数目在30～300的平板 操作成功 若选取同一种土样，统计结果应接近 1.某生物兴趣小组完成了“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”的实验，具体操作流程如下图所示。下列相关叙述错误的是(　　) A．在酒精灯火焰附近称取土壤并将其倒入锥形瓶中 B．梯度稀释时可用移液管或微量移液器进行操作 C．振荡的目的是增加尿素分解菌的浓度 D．由图示菌落计数结果可知10 g土样中的菌株数约为3.2×107个 C 课堂随练 ２.脲酶催化尿素水解，产生的氨可作为细菌的氮源。脲酶被去除镍后失去活性。下列叙述错误的是（     ） A．镍是组成脲酶的重要元素 B．镍能提高尿素水解反应的活化能 C．产脲酶细菌可在以NH4Cl为唯一氮源的培养基生长繁殖 D．以尿素为唯一氮源的培养基可用于筛选产脲酶细菌 B 课堂随练 3.下列是某同学分离高产脲酶菌的实验设计，不合理的是(　　) A．选择农田或公园土壤作为样品分离目的菌株 B．在选择培养基中需添加尿素作为唯一氮源 C．适当稀释样品是为了在平板上形成单菌落 D．可分解酚红指示剂使其褪色的菌株是产脲酶菌 D ４.下列关于细菌和酵母菌实验的叙述正确的是（　　） A．通常酵母菌培养基比细菌培养基有更高的碳氮比 B．通常细菌的生长速度比酵母菌快，菌落比酵母菌落大 C．通常细菌培养基用高压蒸汽灭菌法灭菌，酵母菌培养基用过滤除菌法除菌 D．血细胞计数板既可用于酵母菌的数量测定，也可用于细菌的数量测定 A 课堂随练 5.土壤中有些细菌可以利用原油中的多环芳烃。为筛选出能高效降解原油的菌株并投入除污，某研究小组进行了相关实验。下列有关叙述错误的是(　　) A．选择被原油污染的土壤取样，使用稀释涂布平板法或平板划线法进行分离 B．配制以多环芳烃为唯一碳源的选择培养基进行培养，可提高目的菌的浓度 C．将土壤稀释液彻底灭菌后再接种到培养基上，可以有效防止杂菌的污染 D．在分离纯化菌种后，需借助生物化学的方法对分离的菌种做进一步的鉴定 C 6.筛选淀粉分解菌需使用以淀粉为唯一碳源的培养基。接种培养后,若细菌能分解淀粉,培养平板经稀碘液处理,会出现以菌落为中心的透明圈(见下图),实验结果见下表。 下列有关该实验的叙述,错误的是(　　) A.培养基除淀粉外还含有氮源等其他营养物质 B.筛选分解淀粉的细菌时,菌液应稀释后涂布 C.以上两种细菌均不能将淀粉酶分泌至细胞外 D.H/C值反映了两种细菌分解淀粉能力的差异 C 菌种 菌落直径(C)/mm 透明圈直径(H)/mm H/C 细菌Ⅰ 5.1 11.2 2.2 细菌Ⅱ 8.1 13.0 1.6 课堂随练 7.为筛选苯胺(C6H7N)高效降解菌，科研人员先通过增大苯胺浓度驯化培养苯胺降解菌，再从浓度为1000 mg/L的培养液中取1 mL加入9 mL无菌水中进行等浓度梯度稀释(10－2、10－3、10－4、10－5和10－6)，然后从每种浓度中取0.1 mL稀释液涂布在三个平板(含500 mg/L苯胺的培养基)，最后统计稀释液10－5平板平均菌落数为62个。下列说法错误的是(　　) A．选择培养基应以苯胺作为唯一的碳源和氮源 B．驯化培养的目的是筛选降解效率更高的菌株 C．不选择10－3稀释度的平板进行菌落计数是由于它的菌落数大于300 D．1 000 mg/L浓度驯化培养液中1 mL苯胺降解菌的数量为6.2×106 D 课堂随练 真题感知·命题洞见 1.(2025·黑吉辽卷)科研人员通过稀释涂布平板法筛选出高耐受且降解金霉素(C23H23ClN2O8。)能力强的菌株,旨在解决金霉素过量使用所导致的环境污染问题。下列叙述错误的是( ) A.以金霉素为唯一碳源可制备选择培养基 B.逐步提高培养基中金霉素的浓度有助于获得高耐受的菌株 C.配制选择培养基时,需确保 pH 满足实验要求 D.用接种环将菌液均匀地涂布在培养基表面 D 真题跟练 55 2．（2025·云南·高考真题）黄酒是我国古老的发酵酒之一，传统酿制中，先用蒸煮过的小麦或麸皮为原料，对之前发酵留存的少量酒曲（曲种）进行扩大制曲；再将酒曲和蒸煮后的糯米、大米混合处理一段时间后，添加足量酒母（含酵母菌）完成发酵，压榨成品。下列说法错误的是（　　） A．小麦、麸皮等原料为酒曲中微生物的生长繁殖提供了碳源和氮源等营养物质 B．为避免制曲过程被杂菌污染影响黄酒品质，扩大制曲前需对留存的酒曲灭菌 C．糯米、大米蒸煮后立即与酒曲混合会导致酶空间结构改变而降低其催化效率 D．将酒曲混合糯米、大米处理一段时间，是为了获得酒母发酵时的底物葡萄糖 B 真题跟练 3.（2025·湖南·高考真题）采集果园土壤进行微生物分离或计数。下列叙述正确的是（　　） A．稀释涂布平板法和平板划线法都能用于尿素分解菌的分离和计数 B．完成平板划线后，培养时需增加一个未接种的平板作为对照 C．土壤中分离得到的醋酸菌能在无氧条件下将葡萄糖分离成乙酸 D．用于筛选尿素分解菌的培养基含有蛋白胨、尿素和无机盐等营养物质 B 真题跟练 4.（2025·江苏·高考真题）从种植草莓的土壤中分离致病菌，简易流程如下：制备土壤悬液、分离、纯化、鉴定。下列相关叙述正确的是（     ） A．制备的培养基可用紫外线照射进行灭菌 B．将土样加入无菌水混匀，梯度稀释后取悬液加入平板并涂布 C．连续划线时，接上次划线的起始端开始划线 D．鉴定后的致病菌，可接种在斜面培养基上，并在室温下长期保存 B 真题跟练 5.(2023广东卷)研究者拟从堆肥中取样并筛选能高效降解羽毛、蹄角等废弃物中角蛋白的嗜热菌。根据堆肥温度变化曲线(如下页左上图所示)和选择培养基筛选原理来判断,下列最可能筛选到目标菌的条件组合是(　　) A.A点时取样、尿素氮源培养基 B.B点时取样、角蛋白氮源培养基 C.B点时取样、蛋白胨氮源培养基 D.C点时取样、角蛋白氮源培养基 D 真题跟练 学以致用·能力提升 一、教材知识链接 1．培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？   2．为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 3．平板冷凝后，为什么要将平板倒置？     可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。 通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。 平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以减少使培养基中的水分过快地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。 学以致用·能力提升 4．在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？ 5．为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？ 操作的第一步灼烧接种环是为了 ，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环， 。 不能。因为空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此不能用这个平板培养微生物。 每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端 避免接种环上可能存在的微生物污染培养物； 能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者 6．在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？ 7．在第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？ 以免接种环温度太高，杀死菌种。 划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。 二、教材深挖拓展 1.如图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图，请分析并回答下列问题。 (1)获得图A效果和图B效果的接种方法分别是什么？ (2)某同学在纯化土壤中的细菌时，发现培养基上的菌落连成了一片，最可能的原因是什么？应当怎样操作才可避免此种现象？ 提示　获得图A效果的接种方法为稀释涂布平板法，获得图B效果的接种方法为平板划线法。 提示　最可能的原因是菌液浓度过高或划线时在划下一区域前未将接种环灼烧灭菌；采取的措施是增大稀释倍数或每次划新区域前先将接种环灼烧灭菌。 (3)接种操作为什么一定要在火焰附近进行？ (4)接种结束后，为什么要将一个未接种的培养基和一个已接种的培养基放在一起培养，未接种的培养基表面如果有菌落生长，说明了什么？ 提示　火焰附近存在着无菌区域。 提示　培养未接种的培养基的作用是对照，未接种的培养基经过培养后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的；若有菌落形成，说明培养基灭菌不彻底，或培养基被污染了，需要重新制备。  2.甲、乙两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数。在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下两种统计结果。 (1)甲同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为230，该同学的统计结果是否真实可靠？为什么？ (2)乙同学在该浓度下涂布了3个平板，统计的菌落数分别为21、212、256，该同学将21舍去，然后取平均值。该同学对实验结果的处理是否合理？为什么？ 提示　不可靠。为增加实验的说服力与准确性，应设置重复实验，在同一稀释度下至少涂布3个平板，统计结果后计算平均值。 提示　不合理。微生物计数时，如果实验中出现重复实验的结果差别很大的情况，应分析实验过程中可能的影响因素，找出差异的原因，而不能简单地将结果舍弃后进行计数。 (3)在稀释涂布平板法中，为何需至少涂布3个平板？ (4)为什么要选取菌落数目稳定时的记录作为结果？ 3.在富含纤维素的环境中寻找纤维素分解菌的原因是 。 提示　作为重复实验，统计时取平均值，以减少偶然因素对实验结果的影响，增强实验结果的说服力。 提示　尽量缩小统计的菌落数与实际活菌数的差值，避免因为繁殖慢的菌体开始看不出明显的菌落特征，使统计结果不准确。 提示：由于生物与环境的 相互依存关系，在富含纤维素的环境中纤维素分解菌的含量相对较高，从这种土样中获得目的微生物的概率高于普通环境 三、新情景素材速递 1．下图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图，请分析并回答下列问题： (1)获得图A效果和图B效果的接种方法分别是什么？ (2)某同学在纯化土壤中的细菌时，发现培养基上的菌落连成了一片，最可能的原因是什么？应当怎样操作才可避免此种现象？ (3)接种操作为什么一定要在火焰附近进行？ 提示：获得图A效果的接种方法为稀释涂布平板法，获得图B效果的接种方法为平板划线法。 提示：最可能的原因是菌液浓度过高或划线时在划下一区域前未将接种环灼烧灭菌。应采取的措施是增大稀释倍数或每次在新区域划线前先将接种环灼烧灭菌。 提示：火焰附近存在无菌区域。 2．结合情境，分析以下问题： (1)经多次规范操作、重复实验，平板上均出现________________的菌落，初步证明鲜牛奶中存在金黄色葡萄球菌。 (2)甲、乙两位同学用稀释涂布平板法测定某一土壤样品中微生物的数量，在同一稀释倍数下得到以下结果： 甲同学涂布了3个平板，统计的菌落数分别是110、140和149，取平均值133；乙同学涂布了3个平板，统计的菌落数分别是27、169和176，取平均值124。有人认为这两位同学的结果中，乙同学的结果可信度低，其原因是 。 金黄色葡萄球菌 乙同学的结果中，1 个平板的计数结果与另外2个相差悬殊，结果的重复性差 3．结合教材，分析并回答下列问题： (1)分离培养酵母菌通常使用______________(填“牛肉膏蛋白胨”“MS”或“马铃薯蔗糖”)培养基，该培养基应采用________灭菌法灭菌。若将酵母菌划线接种在平板上，培养一段时间后可观察到菌落，菌落的含义是 。 (2)采用下表配方配制的培养液分离果胶酶产生菌时，该表X处的成分应是 (填“葡萄糖”或“果胶”)，不选另一种成分的原因是 。 K2HPO4 MgSO4 NaNO3 FeSO4 X H2O 0．1 g 0．5 g 3 g 0．01 g 2 g 加至1 L 马铃薯蔗糖 高压蒸汽　 分散的微生物在适宜的固体培养基 表面或内部繁殖形成的肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体 果胶 大多数微生物以葡萄糖作为 碳源，不具有选择作用 讲师：xxx 2026年高考一轮复习 感谢观看 THANK YOU 我爱生物 71 Lavf58.12.100 Tencent APD MTS $