第10单元 2 第44讲 微生物的培养技术及应用(课件PPT)-【金版新学案】2026年高考生物高三总复习大一轮复习讲义(人教版 不定项)
2025-12-15
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教辅
资源信息
| 学段 | 高中 |
| 学科 | 生物学 |
| 教材版本 | - |
| 年级 | 高三 |
| 章节 | - |
| 类型 | 课件 |
| 知识点 | 微生物的培养与应用 |
| 使用场景 | 高考复习-一轮复习 |
| 学年 | 2026-2027 |
| 地区(省份) | 全国 |
| 地区(市) | - |
| 地区(区县) | - |
| 文件格式 | PPTX |
| 文件大小 | 7.81 MB |
| 发布时间 | 2025-12-15 |
| 更新时间 | 2025-12-15 |
| 作者 | 山东正禾大教育科技有限公司 |
| 品牌系列 | 金版新学案·高考大一轮复习讲义 |
| 审核时间 | 2025-11-08 |
| 下载链接 | https://m.zxxk.com/soft/54746490.html |
| 价格 | 5.00储值(1储值=1元) |
| 来源 | 学科网 |
|---|
摘要:
该高中生物学高考复习课件聚焦微生物培养技术及应用专题,覆盖培养基配制、无菌技术、微生物分离纯化与计数等核心考点,严格对接课标要求,结合2024年全国甲卷、山东卷等考情分析考点权重,归纳实验分析、方法辨析等常考题型,构建系统复习框架。
课件亮点在于高考真题深度融入与应试技巧指导,通过2024年浙江选考脲酶实验、山东卷酵母菌培养等真题解析,培养科学思维与探究实践素养,如通过消毒与灭菌比较表、平板划线操作正误判断等突破易错点,助力学生掌握实验步骤规范与结果分析方法,教师可据此精准把握高考命题趋势,提升复习效率。
内容正文:
第44讲 微生物的培养技术及应用
第十单元 生物技术与工程
高三一轮复习讲义 人教版 (不定项)
课标要求
1.阐明无菌技术在微生物培养中的应用。
2.概述微生物分离和纯化及测定微生物数量的常用方法。
3.通过配制培养基、灭菌、接种和培养等实验操作获得纯化的酵 母菌菌落。
4.分离土壤中分解尿素的细菌,并进行计数。
考情分析
1.微生物的基本培养技术
(2024·江西卷T11;2024·全国甲卷T37;2024·浙江6月选考T14;2024·江苏卷T3;2023·全国乙卷T37;2022·天津卷T3;2021·天津卷T1)
2.微生物的选择培养和计数
(2024·山东卷T15;2024·江苏卷T9;2024·重庆卷T13;2023·山东卷T15;2023·广东卷T10;2023·北京卷T16;2022·全国甲卷T37;2022·全国乙卷T37)
考点一 微生物的基本培养技术
考点二 微生物的选择培养和计数
知识小结
真题体验
课时测评
情境命题
内容索引
微生物的基本培养技术
考点一
返回
必备知识 整合
1.培养基的配制
(1)培养基的概念、用途和类型
①概念:人们按照微生物对__________的不同需求,配制出供其生长繁殖的营养基质。
②用途:用以培养、分离、鉴定、保存微生物或积累其________。
营养物质
代谢物
③培养基的种类(按物理性质分)
培养基种类 培养基特点 作用
固体培养基 加凝固剂,如______ 微生物的分离与鉴定,活菌计数,保藏菌种
半固体培养基 容器放倒不致流出,剧烈震动则破散 观察微生物的运动、分类鉴定
液体培养基 不加凝固剂 常用于工业生产、微生物的扩大培养
琼脂
(2)培养基的配方
①主要营养物质:水、______、氮源、无机盐。
②其他条件:pH、特殊营养物质和氧气。如下表:
微生物 乳酸杆菌 霉菌 细菌 厌氧微生物
特殊需求 添加________ pH调至______ pH调至中性或弱碱性 无氧
碳源
维生素
酸性
2.无菌技术
(1)目的:获得______的微生物培养物。
(2)关键:防止______污染。
(3)消毒与灭菌的比较
项目 消毒 灭菌
作用强度 较为______的 强烈的
作用程度 杀死物体表面或内部一部分微生物 杀死物体内外______的微生物
芽孢和孢子 一般不能杀灭 能杀灭
适用对象 实验操作的空间、操作者衣着和双手 微生物培养器皿、接种用具和培养基等
常用方法 煮沸消毒法、______消毒法等 ______灭菌法、干热灭菌法、灼烧灭菌法等
纯净
杂菌
温和
所有
巴氏
湿热
3.微生物的纯培养
(1)概念辨析
固体培养基
(2)酵母菌的纯培养操作步骤
湿热灭菌(高压蒸汽灭菌)法
干热灭菌法
灼烧灭菌
平板划线法
恒温培养箱
28
(3)平板划线法操作步骤
1.正误判断
(1)(2023·山东卷)平板涂布时涂布器使用前必须进行消毒。 ( )
(2)(2023·山东卷)接种后未长出菌落的培养基可以直接丢弃。 ( )
(3)(2023·江苏卷)通常细菌培养基用高压蒸汽灭菌法灭菌,酵母菌培养基用过滤除菌法除菌。 ( )
考教衔接
×
×
×
2.语言组织
(1)(2023·新课标卷)从豆科植物的根瘤中分离根瘤菌进行培养,可以获得纯培养物,此实验中的纯培养物是__________________________。
(2)(经典高考题)在细菌培养时,培养基中能同时提供碳源、氮源的成分是________(填“蛋白胨”“葡萄糖”或“NaNO3”)。通常,制备培养基时要根据所培养细菌的不同来调节培养基的pH,其原因是_______________
_______________________。硝化细菌在没有碳源的培养基上______(填“能够”或“不能”)生长,原因是_________________________________
______。
由根瘤菌繁殖形成的单菌落
蛋白胨
繁殖所需的最适pH不同
不同细菌生长
能够
硝化细菌可以利用空气中的CO2作为
碳源
3.情境分析
如图为采用平板划线法对酵母菌进行纯化操作的示意图,回答下列问题。
(1)用图中字母和箭头表示平板
划线操作的正确步骤:_______
_________________。
(2)在划线操作结束时,仍然需
要灼烧接种环吗?为什么?
提示:需要;划线结束后灼烧
接种环,能及时杀死接种环上
残留的菌种,避免污染环境和感染操作者。
d→b→
f→a→e→c→h→g
(3)在第二次以及其后的划线操作时,为什么总是从上一次划线的末端开始划线?
提示:划线后,线条末端菌种的数目比线条起始处要少,每次从上一次划线的末端开始,能使菌种的数目随着划线次数的增加而逐步减少,最终能得到由单个微生物繁殖而来的菌落。
(4)接种结束后,为什么要将一个未接种的培养基和一个已接种的培养基放在一起培养,未接种的培养基表面如果有菌落生长,说明了什么?
提示:培养未接种的培养基的作用是对照,未接种的培养基经过培养后无菌落生长,说明培养基的制备是成功的;若有菌落生长,说明培养基灭菌不彻底,或培养基被污染了,需要重新制备。
培养基营养成分的作用和主要来源
核心归纳
考向1 培养基的使用和无菌技术分析
1.(2021·山东卷)解脂菌能利用分泌的脂肪酶将脂肪分解成甘油和脂肪酸并吸收利用。脂肪酸会使醇溶青琼脂平板变为深蓝色。将不能直接吸收脂肪的甲、乙两种菌分别等量接种在醇溶青琼脂平板上培养。甲菌菌落周围呈现深蓝色,乙菌菌落周围不变色。下列说法错误的是
A.甲菌属于解脂菌
B.实验中所用培养基以脂肪为唯一碳源
C.可将两种菌分别接种在同一平板的不同区域进行对比
D.该平板可用来比较解脂菌分泌脂肪酶的能力
关键能力 提升
√
根据题意,甲、乙两种菌分别接种在醇溶青琼脂平板上,二者都能生存,甲周围呈现深蓝色,说明培养基的脂肪被分解为脂肪酸和甘油,脂肪酸使平板呈现深蓝色,脂肪的分解需要脂肪酶的催化,说明甲能够分泌脂肪酶,属于解脂菌,A正确;乙周围不变色,说明乙不能分泌脂肪酶分解脂肪,没有脂肪酸的产生,不能利用脂肪,但由于乙能在该培养基上生存,说明该培养基中除了脂肪作为碳源外,还存在别的碳源,否则乙不能在该培养基上生存,B错误;为了便于比较结果,可以将两种菌接种到同一平板的不同区域,C正确;菌落周围深蓝色的直径越大,说明解脂菌分泌脂肪酶的能力越强,D正确。
2.(2022·湖北卷)灭菌、消毒、无菌操作是生物学实验中常见的操作。下列叙述正确的是
A.动、植物细胞DNA的提取必须在无菌条件下进行
B.微生物、动物细胞培养基中需添加一定量的抗生素以防止污染
C.为防止蛋白质变性,不能用湿热灭菌法对牛肉膏蛋白胨培养基进行灭菌
D.可用湿热灭菌法对实验中所使用的微量离心管、细胞培养瓶等进行灭菌
√
动、植物细胞DNA的提取不需要在无菌条件下进行,A错误;动物细胞培养基中需添加一定量的抗生素以防止污染,保证无菌环境,但微生物的培养基中不能加入抗生素,因为抗生素会杀死某些微生物,B错误;一般用湿热灭菌法对牛肉膏蛋白胨培养基进行灭菌,防止杂菌污染,C错误。
考向2 微生物的纯培养技术的应用
3.(2024·湖南卷)微生物平板划线和培养的
具体操作如图所示,下列操作正确的是
A.①②⑤⑥
B.③④⑥⑦
C.①②⑦⑧
D.①③④⑤
由图可知,②中拔出棉塞后应握住棉塞上部;⑥中划线时不能将培养皿的皿盖完全拿开,应只打开一条缝隙;⑦中划线时第5次的划线不能与第1次的划线相连;⑧中平板应倒置培养。①③④⑤正确,D正确。
√
返回
微生物的选择培养和计数
考点二
返回
1.区分选择培养基与鉴别培养基
必备知识 整合
种类 特点 用途 举例
选择培养基 允许特定种类的微生物生长,同时抑制或阻止其他种类微生物生长 从众多微生物中分离所需的微生物 加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌
鉴别培养基 根据微生物的代谢特点在培养基中加入某种指示剂或化学药品,进而产生特定的颜色或其他变化 鉴别不同种类的微生物 用______________琼脂培养基鉴别大肠杆菌
伊红-亚甲蓝
知识拓展 常见选择培养基举例:①缺少氮源的培养基可以筛选能利用大气中N2的微生物。②含青霉素的培养基可淘汰细菌,筛选出真菌。③无有机碳源的培养基可筛选出自养微生物。
2.微生物的选择培养和数量测定
(1)稀释涂布平板法步骤
①依次等比稀释
②涂布平板
培养基
(2)微生物的数量测定
①利用稀释涂布平板法计数
a.为了保证结果准确,一般选择菌落数为30~300的平板计数,并且在同一稀释度下,应至少对___个平板进行重复计数,并求平均值,然后计算:
b.统计结果往往比实际值少。原因是________________________________
__________________________。
3
当两个或多个细胞连在一起时,平
板上观察到的只是一个菌落
②利用显微镜直接计数
a.需用细菌计数板或血细胞计数板。
b.统计结果往往比实际值高。原因是______________________。
将活菌和死菌一起计数
3.土壤中分解尿素的细菌的分离与计数的实验操作
(1)实验原理
(2)操作步骤
菌落
(3)实验结果分析与评价
4.分解纤维素的微生物的分离
(1)分离方法与原理
(2)纤维素分解菌的培养基成分及鉴定原理
刚果红
1.正误判断
(1)(2023·山东卷)利用以尿素为唯一氮源的平板能分离出合成脲酶的微生物。 ( )
(2)(2022·江苏卷)某同学欲分离产脲酶菌,可在选择培养基中添加尿素作为唯一氮源。 ( )
(3)(2021·浙江6月选考)稀释涂布平板法和平板划线法均能得到单菌落,都可用于细菌计数。 ( )
考教衔接
√
√
×
2.语言组织
(1)(2022·全国乙卷)若以制糖废液作为碳源,为进一步确定生产S的最适碳源浓度,某同学进行了相关实验(用菌株C可生产S)。请简要写出实验思路:____________________________________________________________
______________________________________________________________。
设计一系列不同浓度的制糖废液分别培养菌株C,测定不同浓度制糖废液中S产量,寻找S产量最大时对应的碳源浓度,确定最适碳源浓度
(2)(2022·河北卷)枯草芽孢杆菌为好氧微生物,液体培养时应采用________
(填“静置”或“摇床震荡”)培养。培养过程中抽样检测活菌数量时,应采用________________(填“稀释涂布平板法”或“显微镜直接计数法”),其原因是__________________________________________________
______________________________________________________________。
(3)(2023·全国乙卷)在粉碎的秸秆中接种菌T,培养一段时间后发现菌T能够将秸秆中的纤维素大量分解,其原因是______________________。
摇床震荡
稀释涂布平板法
用稀释涂布平板法在培养基上看到的每一个菌落都来自一个活细胞,而显微镜直接计数法会将死亡的枯草芽孢杆菌也计算在内
菌T能够分泌纤维素酶
3.情境分析
(1)甲、乙、丙三位同学用稀释涂布平板法测定同一培养液的酵母菌数。在对应稀释倍数为106的培养基中,得到以下三种统计结果。
①甲同学在该浓度下涂布了一个平板,统计的菌落数为230,该同学的统计结果是否真实可靠?为什么?
提示:不可靠;为增加实验的说服力与准确性,应设置重复实验,在同一稀释度下至少涂布3个平板,统计结果后计算平均值。
②乙同学在该浓度下涂布了3个平板,统计的菌落数分别为12、272、236,该同学将12舍去,然后取平均值。该同学对实验结果的处理是否合理?为什么?
提示:不合理;微生物计数时,如果实验中出现重复实验的结果差别很大的情况,应分析实验过程中可能的影响因素,找出差异的原因,而不能简单地将结果舍弃后进行计数。
③为什么要选取菌落数目稳定时的记录作为结果?
提示:尽量缩小统计的菌落数与实际活菌数的差值,因为繁殖慢的菌体开始看不出明显的菌落特征。
④丙同学在稀释倍数为106的培养基中测得平板上菌落数的平均值为259个(涂布平板时所用稀释液的体积为0.1 mL),那么稀释倍数为106的试管中细菌的浓度是___________个/mL。每克样品中的细菌数是___________个。
2.59×103
2.59×109
(2)采用平板划线法和稀释涂布平板法能将单个微生物分散在固体培养基上,之后经培养得到的单菌落一般是由单个微生物繁殖形成的纯培养物。如图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图,分析下列问题。
①获得图A效果和图B效果的接种方法分别是什么?
提示:获得图A效果的接种方法为稀释涂布平板法,获得图B效果的接种方法为平板划线法。
②某同学在纯化土壤中的细菌时,发现培养基上的菌落连成了一片,最可能的原因是什么?应当怎样操作才可避免此种现象?
提示:最可能的原因是菌液浓度过高或划线时在划下一区域前未将接种环灼烧灭菌;采取的措施是增大稀释倍数或每次划新区域前先将接种环灼烧灭菌。
③接种操作为什么一定要在火焰附近进行?图B所示操作过程中需要灼烧接种环几次?
提示:火焰附近存在着无菌区域。需要灼烧6次。
1.选择培养基三种常见制备方法或实例
(1)加入某些特定的物质(前提是培养基具备全部营养成分)
核心归纳
(2)改变培养基的营养成分
(3)利用培养基“特定化学成分”分离
2.微生物的鉴别方法
菌落特征鉴别法 根据微生物在固体培养基表面形成的菌落的形状、大小、隆起程度和颜色等特征进行鉴别
指示剂鉴别法 如以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂(碱性情况下呈红色),培养某种微生物后,培养基变红说明该种微生物能够分解尿素
染色鉴别法 如利用刚果红染色法,根据培养基中出现以纤维素分解菌为中心的透明圈来筛选分解纤维素的微生物
3.两种纯化方法的比较
项目 平板划线法 稀释涂布平板法
分离结果
关键操作 接种环在固体培养基表面连续划线 ①依次等比稀释;②涂布平板操作
项目 平板划线法 稀释涂布平板法
接种用具 接种环 涂布器
优点 可以观察菌落特征,对混合菌进行分离 可以计数,可以观察菌落特征
缺点 不能计数 操作复杂,需要涂布多个平板
共同点 都要用到固体培养基;都需进行无菌操作;都会在培养基表面形成单个的菌落;都可用于观察菌落特征
考向1 微生物的选择培养
1.(2023·广东卷)研究者拟从堆肥中取样并筛选能高效降解羽毛、蹄角等废弃物中角蛋白的嗜热菌。根据堆肥温度变化曲线(如图)和选择培养基筛选原理来判断,下列最可能筛选到目标菌的条件组合是
A.a点时取样、尿素氮源培养基
B.b点时取样、角蛋白氮源培养基
C.b点时取样、蛋白胨氮源培养基
D.c点时取样、角蛋白氮源培养基
关键能力 提升
√
由图可知,随着堆肥时间的延长,堆肥温度先升高后保持稳定,a点时堆肥温度最低,c点时堆肥温度最高。该实验的目的是筛选能高效降解羽毛、蹄角等废弃物中角蛋白的嗜热菌,应该用以角蛋白为唯一氮源的培养基进行筛选培养,且应该在高温条件下取样,即c点时取样,D符合题意。
考向2 微生物的分离与计数实例分析
2.(不定项)(2025·黑龙江佳木
斯模拟)自生固氮菌是土壤中能
独立进行固氮的细菌。科研人
员进行了土壤中自生固氮菌的
分离和固氮能力测定的研究,
部分实验流程如图。已知步骤④获得的3个平板的菌落数分别为90、95、100,对照组平板为0。下列叙述错误的是
A.步骤②振荡20 min的目的是扩大菌种数量,属于选择培养
B.步骤④→⑤使用接种环划线接种,使用前需要灼烧灭菌
C.1 g土壤中平均自生固氮菌数约为9.5×106个
D.所用培养基应加入碳源、氮源、无机盐、水和琼脂
√
√
√
步骤②需充分振荡的主要
目的是使土壤中的微生物
充分释放到无菌水中,A
错误;由题图可知,步骤
④→⑤平板中的菌落分布
均匀,故步骤④→⑤所用的接种工具是涂布器,接种方法是稀释涂布平板法,B错误;1 g土壤中平均自生固氮菌数约为(90+95+100)/3÷0.1×104=9.5×106个,C正确;本实验需要分离的自生固氮菌可以利用空气中的氮气作为氮源,故所用培养基中不能加入氮源,D错误。
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知 识 小 结
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真 题 体 验
返回
1.(2024·浙江6月选考)脲酶催化尿素水解,产生的氨可作为细菌的氮源。脲酶被去除镍后失去活性。下列叙述错误的是
A.镍是组成脲酶的重要元素
B.镍能提高尿素水解反应的活化能
C.产脲酶细菌可在以NH4Cl为唯一氮源的培养基上生长繁殖
D.以尿素为唯一氮源的培养基可用于筛选产脲酶细菌
√
脲酶被去除镍后失去活性,说明镍是组成脲酶的重要元素,A正确;脲酶催化尿素水解的机理为降低化学反应所需的活化能,镍作为脲酶的重要组成元素,应该与降低尿素水解反应的活化能有关,B错误;产脲酶细菌可利用NH4Cl里的氮源进行代谢活动,因此产脲酶细菌可在以NH4Cl为唯一氮源的培养基上生长繁殖,C正确;产脲酶细菌能利用脲酶催化尿素分解产生NH3,NH3可作为细菌生长的氮源,不能产脲酶的细菌则无法分解尿素,因此以尿素为唯一氮源的培养基可用于筛选产脲酶细菌,D正确。
2.(2024·重庆卷)养殖场粪便是农家肥的重要来源,其中某些微生物可使氨氮化合物转化为尿素进而产生NH3,影响畜禽健康。为筛选粪便中能利用氨氮化合物且减少NH3产生的微生物。兴趣小组按图进行实验获得目的菌株,正确的是
A.①通常在等比稀释后用
平板划线法获取单个菌落
B.②挑取在2种培养基上
均能生长的菌株用于后续
的实验
C.③可通过添加脲酶并检测活性,筛选得到甲、乙
D.粪便中添加菌株甲比乙更有利于NH3的减少
√
平板划线法无需稀释,A
错误;由图可知,②筛选
不能在尿素唯一氮源培养
基上生长,而能在牛肉膏
蛋白胨培养基上生长的菌
株用于后续的实验,B错
误;所筛选出的菌株之所以不能利用尿素,可能是由于不产生脲酶或分泌脲酶抑制剂,所以③可通过添加脲酶并检测活性,筛选得到甲、乙,C正确;粪便中可能还含有其他能产生脲酶的菌株使甲能够产生NH3,所以粪便中添加菌株乙比甲更有利于NH3的减少,D错误。
3.(2024·山东卷)酵母菌在合成色氨酸时需要3种酶X、Y和Z,trpX、trpY和trpZ分别为相应酶的编码基因突变的色氨酸依赖型突变体。已知3种酶均不能进出细胞,而色氨酸合成途径的中间产物积累到一定程度时可分泌到胞外。将这3种突变体均匀划线接种到含有少量色氨酸的培养基上,生长情况如图。据图分析,3种酶在该合成途径中的作用顺序为
A.X→Y→Z
B.Z→Y→X
C.Y→X→Z
D.Z→X→Y
√
根据题意可知,trpX能合成酶Y和酶Z,不能合成
酶X;trpY能合成酶X和酶Z,不能合成酶Y;trpZ
能合成酶X和酶Y,不能合成酶Z。已知3种酶均不
能进出细胞,而色氨酸合成途径的中间产物积累
到一定程度时可分泌到胞外。分析题图可知,
①trpX在靠近trpY区域一侧、trpZ区域一侧均能生
长,说明trpX可以利用trpY、trpZ色氨酸合成途径中分泌到胞外的中间产物合成色氨酸;②trpY在靠近trpZ区域一侧可以生长,说明trpY可以利用trpZ色氨酸合成途径中分泌到胞外的中间产物合成色氨酸;③trpZ不能生长。
由①②分析可知,trpX、trpY均可合成色氨酸合成
途径所需的最后一种酶,又因为trpX能合成酶Y和
酶Z,trpY能合成酶X和酶Z,故trpX、trpY均可合
成的酶为酶Z;由①分析可知,trpY、trpZ均能合
成色氨酸合成途径的中间产物,故trpY、trpZ均可
合成色氨酸合成途径所需的第一种酶,又因为trpY
能合成酶X和酶Z,trpZ能合成酶X和酶Y,故trpY、trpZ均可合成的酶为酶X。综上,酶X为色氨酸合成途径所需的第一种酶,酶Z为色氨酸合成途径所需的最后一种酶,则酶Y为色氨酸合成途径所需的第二种酶,即3种酶在该合成途径中的作用顺序为X→Y→Z,A正确。
4.(2024·全国甲卷)合理使用消毒液有助于减少传染病的传播。某同学比较了3款消毒液A、B、C杀灭细菌的效果,结果如图所示。回答下列问题。
(1)该同学采用显微镜直接计数法和菌落计数法分别测定同一样品的细菌数量,发现测得的细菌数量前者大于后者,其原因是____________________
________________________________________________________。
前者将活菌和死菌一
起计数,后者存在多个活菌形成一个菌落的情况且只计数活菌
显微镜直接计数法把死菌和活菌一起计数。菌落计数法计数只计活菌数,还可能存在多个活菌形成一个菌落的情况,故前者测得的数量多于后者。
(2)该同学从100 mL细菌原液中取1 mL加入无菌水中得到10 mL稀释菌液,再从稀释菌液中取200 μL涂布平板,菌落计数的结果为100,据此推算细菌原液中细菌浓度为______个/mL。
从100 mL细菌原液中取1 mL加入无菌水中得到10 mL稀释菌液,即稀释了10倍,1 mL细菌原液中细菌个数=(菌落数÷菌液体积)×稀释倍数=(100÷200 μL)×10=5 000个,所以细菌原液中细菌浓度为5 000个/mL。
5 000
(3)菌落计数过程中,涂布器应先在酒精灯上灼烧,冷却后再涂布。灼烧的目的是__________________________________________________________
_______,冷却的目的是_______________________。
菌落计数过程中,涂布器应先在酒精灯上灼烧,冷却后再涂布。灼烧的目的是杀死涂布器上可能存在的微生物,防止涂布器上可能存在的微生物污染,冷却的目的是防止温度过高杀死菌种。
杀死涂布器上可能存在的微生物,防止涂布器上可能存在的微生
物污染
防止温度过高杀死菌种
(4)据图可知杀菌效果最好的消毒液是_____,判断依据是_______________
_____________________________________(答出两点即可)。
A消毒液活菌数减少量最多,且减少得最快,效率最高,因此A消毒液杀菌效果最好。
A
A消毒液活菌数
减少量最多,且减少得最快,效率最高
(5)鉴别培养基可用于反映消毒液杀灭大肠杆菌的效果。大肠杆菌在伊红-亚甲蓝培养基上生长的菌落呈______色。
大肠杆菌在伊红-亚甲蓝培养基上生长的菌落呈深紫色。
深紫
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营养缺陷型菌株的筛选
情境
命题44
返回
情境素材
当某单一营养缺陷型菌株所需的营养大类确定后,就要确定其生长所需的特殊营养物质。首先对特殊营养物质进行编组,如表是对15种特殊营养物质进行的编组,编组完成后,将沾有组合特殊营养物质的滤纸片放在涂有试验菌甲、乙、丙的培养基上,培养并观察其生长情况,三种试验菌的生长谱如图所示。
组别 组合特殊营养物质
A 1 2 3 4 5
B 2 6 7 8 9
C 3 7 10 11 12
D 4 8 11 13 14
E 5 9 12 14 15
据上图分析,下列叙述不正确的是
A.实验中所用的培养基应为不
含特殊营养物质的基本培养基
B.试验菌甲、乙自身分别不能
合成特殊营养物质13、2
C.若缺少的特殊营养物质为10、11中的一种,则在培养基上均会出现两个生长圈
D.试验菌丙的生长谱结果可能是由于所加营养物质浓度过高,产生了抑
菌圈
命题角度
√
本实验要确定某单一营养缺
陷型菌株所需的特殊营养物
质,该菌在不含特殊营养物
质的基本培养基上不能生存,
加入特殊营养物质才能生存,A正确。与其他组(A、B、C、E组)相比,D组含有特殊营养物质13,试验菌甲在D组上能生存,在其他组上不能生存,因此推测试验菌甲不能合成特殊营养物质13;同理,A组和B组共同含有的特殊营养物质是2,试验菌乙在A组和B组上能生存,在其他组上不能生存,因此推测试验菌乙不能合成特殊营养物质2,B
正确。
与其他组相比,A组含有特殊
营养物质1,据此推测试验菌
丙不能合成特殊营养物质1,
由B项分析可知,甲、乙不能
合成的分别为13、2,故这三种菌都能合成10和11,因此无论培养基中是否缺乏这两种营养,三种菌都能生存,因此若缺少的特殊营养物质为10、11中的一种,培养基上均会出现5个生长圈,C错误。试验菌丙的生长谱结果可能是由于所加营养物质浓度过高,抑制了滤纸片周围的菌种的生长,因此产生了抑菌圈,D正确。
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1.(2025·徐州模拟)培养基是人们按照培养对象对营养物质的不同需求配制的营养基质。下列有关培养基的配制和使用的叙述,正确的是
A.微生物培养基的组成成分必须含有碳源、氮源、水和无机盐
B.用动、植物的体细胞进行细胞培养,均可用固体培养基
C.接种前要了解固体培养基是否被污染可接种蒸馏水来培养检测
D.使用过的微生物培养基应进行高压蒸汽灭菌处理后再丢弃
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微生物培养基不一定都含有碳源、氮源,如培养自养型微生物的培养基中不需加入碳源,分离自生固氮菌的培养基中不需加入氮源,A错误;动物的体细胞进行细胞培养用液体培养基,植物的体细胞进行细胞培养用固体培养基,B错误;接种前,检测培养基是否被污染的方法是将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间,观察培养基上是否有菌落产生,C错误;使用过的微生物培养基应进行高压蒸汽灭菌处理后再丢弃,以防止微生物污染环境和感染操作者,D正确。
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2.(2025·无锡模拟)下列操作不能达到灭菌目的的是
A.使用高压锅处理器皿
B.在火焰上灼烧接种环
C.用干热灭菌箱处理金属用具
D.防疫期间用苯酚喷洒教室
使用高压锅处理器皿,即高压蒸汽灭菌,能达到灭菌的目的,A不符合题意;在火焰上灼烧接种环,即灼烧灭菌,能达到灭菌的目的,B不符合题意;用干热灭菌箱处理金属用具,可以达到灭菌的目的,C不符合题意;防疫期间用苯酚喷洒教室,属于消毒,不能达到灭菌的目的,D符合题意。
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3.为纯化菌种,在鉴别培养基上划线接种纤维素降解细菌,培养结果如图所示。下列叙述正确的是
A.倒平板后需间歇晃动,以保证表面平整
B.图中Ⅰ、Ⅱ区的细菌数量均太多,应从Ⅲ区挑
取单菌落
C.该实验结果因单菌落太多,不能达到菌种纯化
的目的
D.菌落周围的纤维素被降解后,可被刚果红染成红色
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温度降低后,培养基易凝固,因此倒平板后要及
时轻轻晃动,以保持均一性,A错误;由题图可
见,随着划线次数增多,细菌密度减小,Ⅲ区开
始出现单菌落,应从Ⅲ区挑取单菌落,B正确;
菌落是由单个微生物细胞或多个同种细胞繁殖到
一定程度后形成的,能得到单菌落即可以达到菌种纯化的目的,C错误;刚果红与纤维素形成红色复合物,菌落周围的纤维素被降解后红色消失,出现透明圈,D错误。
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4.(2025·湖北襄阳模拟)微生物培养过程中,要重视无菌操作,现代生物学实验中的许多方面也要进行无菌操作,防止杂菌污染,请分析下列操作,正确的是
A.煮沸消毒法中100 ℃煮沸5~6 min可以杀死全部微生物的细胞和芽孢、孢子
B.将接种环直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧,可以迅速彻底地灭菌
C.加入培养基中的指示剂和染料不需要灭菌
D.家庭制作葡萄酒时要将容器和葡萄进行灭菌
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煮沸消毒可以杀死微生物的营养细胞和部分芽孢,而灭菌能杀灭一切微生物,包括孢子和芽孢,A错误;指示剂和染料可能混有微生物,因此加入培养基中的指示剂和染料也需要灭菌,C错误;家庭制作葡萄酒时,要将容器进行灭菌或消毒,但是葡萄不能灭菌,因为发酵用的酵母菌来自葡萄表面,D错误。
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5.(2025·邢台模拟)如图表示培养和纯化X细菌的部分操作步骤,下列叙述错误的是
A.对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒处理
B.步骤①倒平板操作过程中,用拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙,防止周围环境中杂菌的污染
C.步骤③应多个方向划线,使接种物逐渐稀释,培养后出现单个菌落
D.步骤③划线结束后在培养皿皿盖上做好标注,培养皿需要倒置培养
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实验操作的空间、操作者的衣着和手,需要进行清洁和消毒,A正确;步骤①倒平板操作过程中,用左手的拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙,右手将锥形瓶中的培养基倒入培养皿,左手立即盖上培养皿的皿盖,防止周围环境中杂菌的污染,B正确;步骤③应多个方向划线,每次划三至五条平行线,注意不要将最后一区的划线与第一区相连,使接种物逐渐稀释,培养后出现单个菌落,C正确;步骤③划线结束后应在皿底上做好标注,D错误。
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6.(2023·江苏卷)下列关于细菌和酵母菌实验的叙述正确的是
A.通常酵母菌培养基比细菌培养基有更高的碳氮比
B.通常细菌的生长速度比酵母菌快,菌落比酵母菌菌落大
C.通常细菌培养基用高压蒸汽灭菌法灭菌,酵母菌培养基用过滤除菌法
除菌
D.血细胞计数板既可用于酵母菌的数量测定,也可用于细菌的数量测定
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微生物种类不同,所需营养物的碳氮比也不同,具有高碳氮比的生物需要高碳氮比的营养物,反之则低;酵母菌的碳氮比高于细菌,所以培养酵母菌的培养基需要更高的碳氮比,A正确。通常细菌的生长速度比酵母菌快,但形成的菌落不一定大于酵母菌菌落,这与细菌种类有关,B错误。微生物培养基通常都采用高压蒸汽灭菌法灭菌,C错误。血细胞计数板适用于酵母菌的计数,不适用于微小的细菌计数,D
错误。
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7.(2025·北京模拟)北京冬奥会食堂让各国运动健儿爱上中国味道,其餐余垃圾在垃圾集中点采用生化+雾化+膜过滤技术处理后,可以达到无二次污染的标准。为筛选对抗生素有抗性、高效降解淀粉的微生物,提高“生化”处理的效率,研究人员将餐余垃圾机械化处理后加入装有无菌水的锥形瓶中制备餐余垃圾浸出液,然后进行如图所示操作,下列说法不
正确的是
A.餐余垃圾浸出液在接种前通常需要进行
高压蒸汽灭菌处理
B.可用稀释涂布平板法将餐余垃圾浸出液
接种在X培养基上
C.X培养基含有淀粉和抗生素,Y培养基是
不含琼脂的液体培养基
D.图中降解淀粉最高效的微生物是⑤,可根据菌落特征初步判断微生物类型
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餐余垃圾浸出液中含有要筛选出的
目的微生物,若在接种前进行高压
蒸汽灭菌处理,会将所有的微生物
都处理掉,包括目的微生物,A错
误。微生物培养常见的接种方法有
2种:平板划线法和稀释涂布平板法,
两种方法都能得到单个菌落,后者
还能用于统计微生物的数目,所以可用稀释涂布平板法接种,B正确。
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目的微生物对抗生素有抗性且能高
效降解淀粉,则X培养基应含有淀
粉和抗生素;Y培养基是液体培养
基,用来增加菌种的数量,不含凝
固剂琼脂,C正确。淀粉遇碘变蓝,
加入碘液后能分解淀粉的菌落周围
会出现清晰的透明圈,所以降解能
力越强,透明圈越大,图中降解淀粉最高效的是⑤,D正确。
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8.(2025·南京模拟)为了解病原微生物对四种抗生素的敏感程度,某研究小组进行了相关药敏实验,图1为部分实验器材。将含有相同浓度的抗生素Ⅰ~Ⅳ四个大小相同的纸片分别贴在长满测试菌的平板上,实验结果如图2。下列相关叙述正确的是
A.为获得长满测试菌的平
板,需要使用图1中器材
①②③
B.图2中Ⅱ形成的抑菌圈
较小,可能是病原微生物对药物较敏感
C.图2抑菌圈中的菌落可能是在抗生素Ⅳ作用下产生了突变株
D.不同抗生素在平板上的扩散速度不同会影响实验结果
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为获得长满测试菌的琼
脂平板,需要采用稀释
涂布平板法,该方法需
要使用图1中①酒精灯
(操作需要在酒精灯火焰旁进行,用酒精灯对涂布器进行灼烧灭菌)、④涂布器和③培养基,②为接种环(接种工具),是平板划线法接种时需要使用的接种工具,用平板划线法不能获得长满测试菌的平板,A错误;图2中Ⅱ处透明圈最小,说明此处微生物对该药物敏感度最低,B错误;突变株的出现不是在抗生素的作用下产生的,抗生素只能起选择作用,C错误。
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9.(2025·湖北宜荆模拟)营养缺陷型菌株是突变后某些酶被破坏,导致代谢过程中某些合成反应不能进行的菌株。如图是科研人员利用影印法(用无菌绒布轻盖在已长好菌落的原培养基上,然后不转动任何角度,“复印”至新的培养基上)初检某种氨基酸缺陷型菌株的过程。下列说法错误的是
A.①过程接种方法为稀释涂布平板法,接种后
的培养皿不能立即进行倒置培养
B.进行②过程的顺序是先将丝绒布“复印”至
完全培养基上,再“复印”至基本培养基上
C.氨基酸缺陷型菌株应从基本培养基上没有、
完全培养基上对应位置有的菌落中挑选
D.统计菌落种类和数量时要每隔一定时间观察
统计一次,直到各类菌落数目稳定为止
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进行②过程培养时,为了防止将完全培养基中特定营养成分带入基本培养基,应先将丝绒布“复印”至基本培养基上,再“复印”至完全培养基上,B错误。
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由于上述两种方法都是对空气中细菌总数进行测定,在琼脂平板上形成的菌落有多种,不一定都是单菌落,D错误。
10.(不定项)(2025·辽宁鞍山模拟)空气细菌总数测定主要有自然沉降法和撞击法。自然沉降法是让空气中的细菌自然降至琼脂平板表面,撞击法是将一定量空气以较高的流速喷射撞击到琼脂平板上,空气中的细菌即留滞在琼脂表面。关于自然沉降法和撞击法,下列分析错误的是
A.用于检测空气中细菌总数时都需对不同方位和高度的空气进行采样
B.撞击法对洁净空气中细菌总数的测定比自然沉降法更准确
C.两种方法均可使用无选择性的牛肉膏蛋白胨培养基
D.用两种方法取样后在琼脂平板上形成的菌落均为单菌落
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11.(不定项)(2024·辽宁大
连调研)研究者从温泉中筛
选出能高效产生耐高温淀
粉酶的嗜热细菌的过程如
图1所示。将得到的嗜热细
菌悬液转接到特定固体培养基上培养,得到若干菌落后用碘液作显色处理,结果如图2所示。下列说法正确的是
A.过程①②一般都取1 mL菌液转移
B.试管甲、乙都通过无菌水稀释
C.图2中周围不显蓝色的菌落含有所需菌种
D.过程①②属于稀释涂布平板法,能对分离得到的微生物进行计数
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过程①为稀释过程,一
般都取1 mL菌液转移,
过程②为涂布平板过程,
一般取0.1 mL菌液进行
涂布,A错误;为避免
杂菌污染,试管甲、乙都通过无菌水稀释,B正确;图2中周围不显蓝色的菌落产生的淀粉酶可以在高温下分解淀粉,所以周围不显蓝色的菌落含有所需菌种,C正确;据图可知,过程①②属于稀释涂布平板法,稀释涂布平板法能对分离得到的微生物进行计数,D正确。
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12.(不定项)(2024·山东枣庄调研)如图所示,自来水
经滤膜过滤后,转移到牛肉膏蛋白胨培养基上,适宜
条件下培养48 h,染色后统计变色菌落数目为165。下
列说法正确的是
A.若培养基含伊红—亚甲蓝,大肠杆菌菌落呈蓝绿色
B.自来水中大肠杆菌浓度是33 个·L-1,比真实值小
C.为了提高准确度,需设重复实验,但不用空白对照
D.若培养基菌落数目大于300,可适当减少自来水量
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若培养基含伊红—亚甲蓝,大肠杆菌菌落呈深紫色,
有金属光泽,A错误;自来水中大肠杆菌浓度是165
÷5=33 个·L-1,由于两个或多个大肠杆菌可能长
成一个菌落,因此比真实值小,B正确;为了提高
准确度,需设重复实验,同时需要设置空白对照,
C错误;若培养基菌落数目大于300,说明细菌数目较多,可适当减少自来水量,D正确。
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13.(10分)(2025·巴蜀中学模拟)我国卫生部门规定饮用水标准是1 mL自来水中细菌总数不超过100个(37 ℃培养24 h),1 000 mL自来水中大肠杆菌菌落数不能超过3个(37 ℃培养48 h)。水中大肠杆菌的含量常采用伊红-亚甲蓝琼脂培养基进行检测,生长在此培养基上的大肠杆菌菌落呈深紫色且带有金属光泽。某校生物兴趣小组开展校园桶装纯净水微生物含量检测活动,回答下列问题。
(1)检测饮用水中的细菌,需要配制牛肉膏蛋白胨琼脂培养基,牛肉膏和蛋白胨可以为细菌生长提供____________________________(至少写出两点)等营养物质。从物理状态角度分析,此培养基属于______培养基。
碳源、氮源、磷酸盐、维生素
固体
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该实验中用到的培养基中加入了牛肉膏、蛋白胨,其中蛋白胨来源于动物原料,含有糖、维生素和有机氮等营养物质,故蛋白胨可以为微生物的生长提供碳源、氮源和维生素等营养物质;该培养基含有琼脂,故属于固体培养基。
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(2)某同学分别向3个培养基中各加入1 mL,未经稀释的待测水样,涂布均匀后置于37 ℃的恒温培养箱中培养24 h,结果如图1所示。检测时使用的接种量为1 mL而不是0.1 mL,其理由是______________________________
________________________________。
微生物计数时,应统计30~300之间的菌落,由于0.1 mL水样中细菌数目较少,经培养后平板菌落数可能达不到30个,故检测时使用的接种量为1 mL而不是0.1 mL。
0.1 mL水样中细菌数目较少,经
培养后平板菌落数可能达不到30个
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(3)下图2为用滤膜法测定饮用水中大肠杆菌数目的流程示意图,请完成下表。
实验步骤的目的 简要操作过程
①______________ 将滤膜放入装有蒸馏水的烧杯中,加热煮沸15 min,共煮沸三次
过滤细菌 装置安装好后,向漏斗内加入1 000 mL水样,加盖抽滤
冲洗漏斗壁 再向漏斗内加等量②__________继续抽滤
③______________ 用无菌镊子取滤膜,将其紧贴在伊红-亚甲蓝琼脂平板上,然后将平板
④_______,37 ℃培养48小时
统计大肠杆菌菌落数 选取⑤__________________________的菌落进行计数,统计结果为2个
滤膜消毒
无菌水
培养大肠杆菌
倒置
呈深紫色且带有金属光泽
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①“滤膜法”测定饮用
水中大肠杆菌的数量时
首先应进行滤膜消毒,
以保持实验过程中的无
菌环境,主要是通过加
热煮沸的方法进行;
②冲洗漏斗壁,向漏斗内加等量无菌水继续抽滤;③培养大肠杆菌时可加入伊红-亚甲蓝作为指示剂,两者反应呈深紫色且带有金属光泽;④培养基培养时应将其倒置。⑤选取呈深紫色且带有金属光泽的菌落进行计数。
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(4)综合(2)(3)测定结果,你认为所测桶装纯净水的微生物含量_____(填“能”或“不能”)达到饮用水卫生标准,理由是_____________________
________________________________________________________________
(写出两点)。
能
1 mL水样中细菌总数约
为98个,没有超过100个;1 000 mL水样中大肠杆菌为2个,没有超过3个
分析题意可知,我国卫生部门规定饮用水标准是1 mL自来水中细菌总数不超过100个(37 ℃培养24 h),1 000 mL自来水中大肠杆菌菌落数不能超过3个(37 ℃培养48 h),故该同学认为所测桶装纯净水的微生物含量已达到了饮用水卫生标准,是因为:1 mL水样中细菌总数为(96+106+92)÷3=98个,没有超过100个;1 000 mL水样中大肠杆菌为2个,没有超过3个。
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14.(10分)(2025·福州模拟)对土壤中分解纤维素的微生物的研究与应用,使人们能够利用秸秆等废弃物生产酒精,用纤维素酶处理服装面料等。为了寻求高效降解纤维素的微生物,某科研团队进行了纤维素优势分解菌的筛选实验。主要步骤如下:
①制备培养基。
②纤维素分解菌的分离、纯化。取富集培养后的土样培养液,经适当稀释后,移取培养液各0.1 mL分别接种到能分别筛选出细菌、真菌和放线菌的固体培养基上进行分离、纯化培养。
③纤维素分解菌的初筛。将已经纯化的菌株接种到同一个以纤维素为唯一碳源的固体培养基上,使用刚果红染色法,根据培养基平板上透明圈直径(H)与菌落直径(h)比值的大小,初步筛选出纤维素优势分解菌。
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回答下列问题。
(1)实验室培养微生物时,获得纯净培养物的关键是_______________。
防止杂菌的污染
验室培养微生物时,获得纯净培养物的关键是防止杂菌的污染。
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(2)微生物的接种方法很多,最常用的是平板划线法和_______________。步骤甲和步骤乙是平板划线操作中的两个步骤,步骤甲的操作是将接种环放在火焰上灼烧,直到接种环的金属丝烧红;步骤乙的操作是将已冷却的接种环伸入菌液中,蘸取一环菌液。从步骤甲至步骤乙的操作过程中,还需进行的操作步骤是______________________________________________
_____________________。
稀释涂布平板法
在火焰旁冷却接种环,并拔出装有菌液的试管的棉
塞,将试管口通过火焰
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微生物的接种方法很多,最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法。步骤甲和步骤乙是平板划线操作中的两个步骤,步骤甲:将接种环放在火焰上灼烧,直到接种环的金属丝烧红;然后在火焰旁冷却接种环,并拔出装有菌液的试管的棉塞,将试管口通过火焰;然后是步骤乙:将已冷却的接种环伸入菌液中,蘸取一环菌液。
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(3)微生物吸收无机盐的作用是______________________________________
______________________________(答出两点即可)。
维持微生物的生命活动;维持细胞的酸碱
平衡(调节渗透压;组成化合物)
微生物吸收无机盐的作用是维持微生物的生命活动;维持细胞的酸碱平衡等。
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(4)步骤②③中,若将稀释后且富含多种类型微生物的土样培养液直接涂布于同一个以纤维素为唯一碳源的固体培养基上,可能导致错过优势纤维素分解菌的发现,原因是____________________________________________
_____________________________________________________________________________。
不同种类型的微生物之间产生种间竞争关系,生
物之间产生种间竞争关系,生长相互影响,不利于优势纤维素分解菌的发现(合理即可)
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(5)接种在培养基上初筛分离得到的4个菌株的观察结果如表。表中H/h的大小与纤维素酶的__________有关。据表分析,降解纤维素能力最强的菌株是___(填菌株编号)。
菌株编号 菌落直径h/cm 透明圈直径H/cm H/h
1 0.3 0.9 3.00
2 0.3 0.6 2.00
3 0.3 1.3 4.33
4 0.6 2.0 3.33
量与活性
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纤维素酶能将纤维素分解,从而产生透明圈,表格数据H与h比值的大小与纤维素酶的量和活性有关。表中H与h的比值最大的是3号菌株,其降解纤维素能力最强。
菌株编号 菌落直径h/cm 透明圈直径H/cm H/h
1 0.3 0.9 3.00
2 0.3 0.6 2.00
3 0.3 1.3 4.33
4 0.6 2.0 3.33
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15.(10分)牛奶是微生物的良好培养基,饮用前需要消毒,牛奶也可以被加工成酸奶。某生物兴趣小组探究某品牌酸奶中乳酸菌数量,实验操作如下图。回答下列问题。
(1)牛奶可以为微生物的生长提供_________________________(答出3点即可)等必需的营养物质,牛奶消毒常用的方法是_____________。制作酸奶的过程中,应该严格控制___________________(答出2点即可)等条件。
碳源、氮源、水、无机盐
巴氏消毒法
温度、pH、O2含量
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牛奶可以为微生物的生长提供碳源、氮源、水、无机盐等必需的营养物质,牛奶消毒常用的方法是巴氏消毒法,该法在达到消毒的目的下,又可以保证牛奶的营养成分不被破坏;制作酸奶的过程中,应该严格控制pH、O2含量、温度等条件。
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(2)上图中步骤①和②使用无菌水的原因是____________________________
_______,进行了步骤③之后,可以使用_________使细菌分布匀。
稀释酸奶样品,避免混入其他
微生物
涂布器
题图中步骤①和②使用无菌水的原因是稀释酸奶样品,避免混入其他微生物,进行了步骤③之后,可以使用涂布器使细菌分布均匀。
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(3)平板上长出的菌落有不同的形状、大小和颜色,可以初步判断除了乳酸菌之外,还有其他微生物,理由是__________________________________
____________________。为进一步判断其他微生物来自酸奶样品还是培养基,应如何设置对照组?__________________________________________
____________________________________________________。
在相同的培养条件下,同种微生物表
现出稳定的菌落特征
配制好的培养基灭菌后不接种,与实验组放在
相同条件下培养(或相同条件下放置灭菌后的空白培养基)
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平板上长出的菌落有不同的形状、大小和颜色,可以初步判断除了乳酸菌之外,还有其他微生物,理由是在相同的培养条件下,同种微生物表现出稳定的菌落特征。为进一步判断其他微生物来自酸奶样品还是培养基,应设置配制好的培养基灭菌后不接种为对照组,与实验组放在相同条件下培养(或相同条件下放置灭菌后的空白培养基)。
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微生物的培养技术及应用
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