1.2.2 微生物的选择培养和计数 学案 2025—2026学年高二下学期生物人教版选择性必修3

1.2.2 微生物的选择培养和计数 导学案 班级： 姓名： 【学习目标】 1.理解微生物选择培养和计数的原理 2.分析选择培养基的配方和微生物计数方法的原理 【学习重难点】 重点：稀释涂布平板法和显微镜直接计数法等微生物计数方法的操作及原理 难点：理解选择培养基中特定成分对微生物的选择作用机制 【知识梳理】 1. 选择培养基：在微生物学中，_允许特定种类_的微生物生长，同时_抑制或阻止其他种类_微生物生长的培养基。 2. 微生物的选择培养： (1)方法：_稀释涂布平板法__； (2)方法概述：由于土壤细菌的数量庞大，要想得到特定微生物的纯培养物，必须要对土壤进行_充分稀释_，然后再将菌液_涂布_到制备好的_选择培养基_上；两个基本操作：_梯度稀释_和_涂布平板_。 (3)操作流程 土壤取样--样品稀释--取样接种--培养观察--菌种鉴定 3.微生物的数量测定 间接计数法(稀释涂布平板法) 直接计数法(显微计数法) 原理 当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌 利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量 公式 每克样品中的菌落数＝×M；C：某稀释度下平板上生长的平均菌落数；V：涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)；M：稀释倍数 每毫升原液所含细菌数：每小格内平均细菌数×400×104×稀释倍数 缺点 当两个或多个菌体连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落 不能区分细胞死活 结果 比实际值偏小 比实际值偏大 【探究实践】：土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 (1)原理：分解尿素的细菌合成的脲酶 将尿素分解为氨 ，使培养基的碱性增强 。 (2)方法：在以尿素 为唯一氮源的培养基中加入酚红 指示剂，培养某种细菌，若指示剂变红 ，可初步鉴定该种细菌能够分解尿素。 4. 两种纯培养方法对比 比较项目 平板划线法 稀释涂布平板法 关键操作 接种环在固体培养基表面连续划线 ①一系列的梯度稀释 ②涂布平板操作 注意事项 每次划线前后 均需灼烧接种环 稀释度要足够高，为确保实验成功可以增加稀释度的范围 菌体获取 在具有显著的菌落特征的区域挑取菌体 从适宜稀释度的平板上的菌落中挑取菌体 适用范围 适用于好氧菌 适用于厌氧菌 和兼性厌氧菌 优点 可以根据菌落的特点获得某种微生物的单细胞菌落 既可以获得单细胞菌落，又能对微生物计数 缺点 不能对微生物计数 操作复杂，需要涂布多个平板 【习题巩固】 1.(2025·江苏常州质检)某些土壤细菌可将尿素[CO(NH2)2]分解为CO2和NH3供植物吸收和利用,但分解物CO2不能为该菌提供营养。下列关于配制分离这一菌种的选择培养基的成分符合要求的是(　　) A.仅尿素 B.尿素+葡萄糖 C.仅葡萄糖 D.牛肉膏+蛋白胨 2.(2025·江苏泰州调研)研究人员利用无机盐、琼脂和石油配制培养基,欲培养出石油降解菌,以修复被石油污染的土壤。下列相关叙述中,错误的是(　　) A.这种培养基是一种选择培养基 B.这种培养基的唯一碳源是石油 C.能在该培养基上生长的微生物可能是石油降解菌 D.石油降解菌在未被石油污染的土壤中含量较高 3.(2025·南京外国语学校质检)利用稀释涂布平板法纯化的大肠杆菌,经培养后发现培养基上出现了多种菌落,不可能的原因是(　　) A.培养基制备过程中被杂菌污染 B.接种过程中,无菌操作不符合要求 C.系列稀释时,无菌操作不符合要求 D.使用涂布器时涂布不均匀 4.(2025·江苏苏州月考)如图是纯化微生物时采用的两种接种方法接种后培养的效果图,下列相关叙述正确的是(　　) A.图甲三个平板中所用培养液的稀释倍数相同 B.图甲、乙均适合分离微生物,但乙不适合对微生物进行计数 C.图甲、图乙所用的接种工具分别是接种环和涂布器 D.图乙每次划线应从同一起点开始,以便使聚集的菌种逐步稀释获得单菌落 5.(2025·江苏泰州期末)研究小组利用稀释涂布平板法来估测大肠杆菌的数量,每一个浓度涂布四个平板。下列关于操作步骤的叙述,正确的是(　　) A.因为实验前后形成对照,因此本实验不必设置空白对照组 B.涂布前将蘸有少量酒精的涂布器引燃,待涂布器冷却后再涂布 C.为避免混淆,应在培养皿的皿盖上做标记,并将培养皿倒置培养 D.用此法估测的数值往往偏小,故应以菌落数最多平板计数为准 6．(2024·全国甲，37节选)合理使用消毒液有助于减少传染病的传播。某同学比较了3款消毒液A、B、C杀灭细菌的效果，结果如图所示。回答下列问题： (1)该同学采用显微镜直接计数法和菌落计数法分别测定同一样品的细菌数量，发现测得的细菌数量前者大于后者，其原因是___________________________________________________ ________________________________________________________________________。 (2)该同学从100 mL细菌原液中取1 mL加入无菌水中得到10 mL稀释菌液，再从稀释菌液中取200 μL涂布平板，菌落计数的结果为100，据此推算细菌原液中细菌浓度为________个/mL。 (3)菌落计数过程中，涂布器应先在酒精灯上灼烧，冷却后再涂布。灼烧的目的是______________________________________，冷却的目的是__________________________。 (4)据图可知杀菌效果最好的消毒液是______，判断依据是_______________________(答出两点即可)。 答案 1--5BDDBB 6.答案　(1)显微镜直接计数法将活菌和死菌一起计数，菌落计数法中存在多个活菌形成一个菌落的情况且只计数活菌　(2)5 000　(3)杀死涂布器上可能存在的微生物，防止微生物污染　防止温度过高杀死菌种　(4)A　A消毒液活细胞减少量最多，且杀菌时间较短，效率最高 解析：(1)显微镜直接计数法把死菌和活菌一起计数。菌落计数法只计活菌数，还可能存在多个活菌形成一个菌落的情况，故前者的数量大于后者。(2)从100 mL细菌原液中取1 mL加入无菌水中得到10 mL稀释菌液，即稀释了10倍，再从稀释菌液中取200 μL涂布平板，即0.2 mL，已知菌落计数的结果为100。则1 mL细菌原液中细菌浓度＝(菌落数÷菌液体积)×稀释倍数＝(100个÷0.2 mL)×10＝5 000(个/mL)。(3)菌落计数过程中，涂布器应先在酒精灯上灼烧，冷却后再涂布。灼烧的目的是杀死涂布器上可能存在的微生物，防止微生物污染，冷却的目的是防止温度过高杀死菌种。(4)A消毒液活细胞减少量最多，且杀菌时间较短，效率最高，因此A消毒液杀菌效果最好。 学科网（北京）股份有限公司 学科网（北京）股份有限公司 $