专题01 发酵工程（4大考点）（期末真题汇编）高二生物下学期人教版

**基本信息** 聚焦发酵工程四大核心考点，精选多地区高二期末真题，融合传统发酵工艺（果酒、腐乳等）与现代生物技术（微生物筛选、工业发酵），突出实验操作与实际应用能力考查。 **题型特征** |题型|题量/分值|知识覆盖|命题特色| |----|-----------|----------|----------| |选择题|25题|传统发酵技术、微生物培养、发酵工程应用|结合地域特色（如广东荔枝、贵州刺梨）设计情境，考查代谢类型、操作原理等| |非选择题|9题|微生物计数、发酵条件优化、菌株筛选|以实验流程（如筛选降解菌、测定固氮能力）为主线，综合考查实验设计与结果分析|

专题01 发酵工程 4大高频考点概览 考点01 传统发酵技术的应用 考点02微生物的基本培养技术 考点03 微生物的选择培养与计数 考点04 发酵工程及其应用 地 城 考点01 传统发酵技术的应用 题号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 答案 C C C D A A D C D D 题号 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 答案 B B D C C A C B C C 题号 21 22 23 24 25 26 答案 BC ABC ACD BD BC BC 27．(1) 菌种流失 异养、兼性厌氧 (2) 醋酸菌 无核膜包被的细胞核 C2H5OH+O2CH3COOH+H2O+能量 30~35 (3) 乙 在排出气体的同时可以防止杂菌污染 (4)放出发酵产生的CO2 28．(1) 碳源 氮源 豆腐不容易成形 (2)不需要 (3) 加盐腌制 酒精浓度过高则腐乳的成熟时间会延长，酒精浓度过低，不足以抑制 微生物的生长，可能导致豆腐腐败 (4) 红曲 青方 29．(1) 氧气、糖源充足 缺少糖源、氧气充足 (2) 18～30℃ 无氧 放能 通入无菌空气，适当提高发酵温度 有以核膜为界限的细胞核 (3) 无显著差异 沪酿1.01发酵产酸速度最快；二次发酵速度比一次发酵速度快 30．(1)增加发酵菌的数量 (2)调节泡菜的风味，防腐杀菌 (3) 腌制的时间 温度 (4) 竞争 蔗糖(或蔗糖和葡萄糖) 醋酸菌为好氧细菌，6天后发酵装置中氧气耗尽 酵母菌耐酸性弱，不能适应发酵液的pH 31．(1) 让酵母菌进行有氧呼吸，快速繁殖 关闭 二氧化碳或CO2 (2)无氧、呈酸性、含酒精 (3) 20 糖浓度过高导致培养基的渗透压过高，使酵母菌因失水而数量减少 (4) 酸性重铬酸钾 溶液变为灰绿色 32．(1) 酵母菌 有氧 (2) 稀释涂布平板 透明圈直径与菌落直径比值大 (3)评估菌株J1的醋酸发酵效果 (4)初始乙醇含量增加时，菌株J1可利用的底物增加，总酸含量增加；当初始乙醇含量较高时，会抑制菌株J1的生长和代谢，总酸含量降低。 33．(1) 除去杂菌 酵母菌 (2)先通气促进酵母菌增殖，后无氧条件酵母菌进行酒精发酵 (3) 升高温度、增加氧气含量 一是增大醋酸菌与发酵原料的接触；二是增加发酵罐内的氧气含量 (4) 基因工程和诱变育种 在一定范围内，初始乙醇含量增大有利于发酵，醋酸量增加；总酸量过高，又抑制了醋酸菌的生长和增殖，醋酸发酵减弱，总酸含量降低 地 城 考点02 微生物的基本培养技术 题号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 答案 C C C B A B C B C D 题号 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 答案 D B D A C A C D C D 题号 21 22 23 24 25 26 答案 D ACD BCD ACD ABC ABC 27．(1) 灭菌 湿热灭菌法（或：高压蒸汽灭菌法）、干热灭菌法、灼烧灭菌法 (2)含有碳源、无机盐等营养物质，不含氮源 (3) [1]稀释涂布平板法 1.34×109 (4) 每盆土壤浇 50mL无氮植物营养液 尿素处理和自生固氮菌CM12处理均能使土壤微生物有机 氮含量增加，且CM12处理增加的比例更大 28．(1) 葡萄糖 制糖废液 氮源、无机盐 (2)缺少淀粉酶 (3)设计一系列不同浓度的制糖废液分别培养菌株C，测定不同浓度制糖废液中S产量，S产量最大的碳源浓度为最适碳源浓度 (4)减少污染、节省原料、降低生产成本 29．(1) 无 碳源、氮源、无机盐、水 巴氏消毒 (2) BL和ST无氧呼吸产生乳酸，导致pH下降 协同/相互促进/互补 ST能够快速产酸而迅速降低pH值，为BL创造适宜的生长环境，BL可能为ST提供生长因子或抑制有害菌 (3) 发酵产品中还存在有活性的乳酸菌继续进行发酵 酸奶应在低温下保存并在保质期内食用 地 城 考点03 微生物的选择培养与计数 题号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 答案 C D C D A B D D C B 题号 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 答案 B D D C B D B A C C 题号 21 22 23 24 25 26 27 答案 AB ABD AC AD BCD BC ACD 28．(1) 维生素 高压蒸汽灭菌 (2) 平板划线法 将聚集的菌体逐步稀释，分散到培养基表面，以便获得单个菌落 形状、大小、颜色、隆起程度 筛选出对胃酸有较强耐受力的乳酸菌株 (3) 含等量无菌水的牛津杯 JYF2和JYF3对大肠杆菌、沙门氏菌、铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌均有抑菌作用，且JYF2的抑菌效果更好 29．(1) 调味，杀菌和防腐 创造无氧环境 (2)乳酸菌能产酸，低温也可抑制其他微生物的繁殖 (3)支持A的观点，乳酸菌代谢过程中不产生气体 (4) 除氧（或杀菌） 增加乳酸菌数量（相当于接种乳酸菌） (5) 让菌种均匀分布于悬液中 稀释涂布平板法 胰蛋白胨、牛肉膏 溶钙圈（黄色） (6) 100uL无菌水 清酒乳杆菌的代谢产物对丁香假单胞菌的抑制效果最好 30．(1) 3.8×106 少 当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落 (2) 溶磷圈直径与菌落直径比值较大 菌落的特征 (3)接种等量土壤悬浮液的牛肉膏蛋白胨培养基 (4) 增加培养液中的溶氧量；使菌株与营养物质充分接触 M-3-01 31．(1)在富含有机质的土壤表层，有更多的固氮菌生长（或固氮菌一般为需氧型，生活在土壤表层） (2) Ashby 该培养基不含氮源，具有选择作用，自生固氮菌可以利用空气中的氮气作为氮源；LB培养基中的蛋白胨可以提供氮源，不具有选择作用 (3)1.26×107 (4) 每盆土壤浇50mL无氮植物营养液 120 32．(1) 氮源、无机盐 琼脂 (2) 高压蒸汽灭菌（或湿热灭菌） 稀释涂布平板法 45 (3) 形状、大小、颜色等 3.5×106 (4) A菌落（或真菌X菌落）的直径 小 感染了真菌X的苹果树 33．(1) 发酵罐内发酵 前 酸 稀释涂布平板 (2) 纤维素 透明圈 (3) 维生素B1 3与5的交界处 34．(1) 湿热灭菌（高压蒸汽灭菌） 选择 (2)增大培养基中的溶解氧、有利于营养物质的充分利用 (3)防止培养基中的水分过快挥发 (4) 不一定 相同 浑浊程度 草甘膦剩余量（浓度） 35．(1)氮源 (2) 稀释涂布平板法 1.68×107 小 当两个或多个细胞连在一起时，在平板上观察到的是一个菌落 (3)三种固氮菌的固氮能力随pH的增加，先增强后减弱；在相同pH下，JB - 2的固氮能力最强 36．(1)选取若干个同样品牌的同种冰激凌进行检测 (2)10倍 (3)防止皿盖上的水珠滴落在培养基上，避免杂菌污染 (4) 检测培养基是否被污染 涂布大肠杆菌 (5)3.8×103个 37．(1) 稀释涂布平板法 固体 聚乙烯 (2) 不能 需要测量菌落直径，计算降解圈直径与菌落直径的比值来判断菌株的降解能力 (3)这两种菌株处理塑料薄膜后，塑料的极性增强，亲水性提高，使水接触角减小，亲水性提高” 38．(1) 辛基酚 高压蒸汽灭菌 (2) 提高培养液的溶解氧含量 菌体与培养液充分接触 (3)3.8×106 (4) 少 当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落 39．(1)OFL（氧氟沙星） (2)抗生素会抑制大部分细菌的生长繁殖，去除抗生素所需时间太长 (3)BC (4) 菌落数目稳定 6 多 两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落 不一定 地 城 考点04 发酵工程及其应用 题号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 答案 A A B C B B B C D C 题号 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 答案 A C C B B B B BD ACD CD 题号 21 22 23 24 25 答案 ABD CD BCD ABD ACD 26．(1) 杀死种子胚但不使淀粉酶失活 低温、密闭 (2)1.2×109 (3) 左 5/五 3' 酪蛋白为唯一氮源（或含酪蛋白） 无透明圈（或透明圈较小） 27．(1) 无菌水 涂布器 灼烧灭菌 少 两个或多个细胞连在一起只形成了一个菌落 高压蒸汽灭菌 (2)菌落的形状、隆起程度和颜色等 (3) 250 S3 28．(1) 唯一碳源 该培养基允许能降解聚乙烯的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长 (2) 培养基 ①干热灭菌法会使培养基中的水分蒸发 ②干热灭菌温度过高导致培养基营养成分被破坏 (3) （发酵罐内）发酵 纯化 29．(1)增大微生物与糯米饭的接触面积，有利于微生物的生长和发酵。 (2)通入氧气和适当升高温度 (3)诱变育种、基因工程育种 (4) 发酵罐内发酵 微生物数量、产物浓度。 30．(1)酵母菌无氧呼吸产生酒精 (2) 赤霉素 蒸煮 主发酵 主发酵 ①②③ 扩大培养 (3) 1、2 使菌种和培养液充分混合 (4) 无 1.22×109 31．(1) 湿热或高压蒸汽 平板划线法 ①③④⑤ (2)碳源、氮源和维生素 (3) 基因工程 增加培养液中的溶解氧，使菌种与培养液充分接触 (4) 保证微生物对营养物质的需求，排出部分代谢产物，使微生物保持较长时间的快速生长 提取、分离和纯化 32．(1) 无菌水 平板划线法或稀释涂布平板法 无氧 (2) 金黄色葡萄球菌和大肠杆菌 A处加入无菌发酵液，B、C、D处加入等量含不同种类待测菌的发酵液，其中一种是含TS的发酵液 更换新的灭菌枪头 A处无抑菌圈，B、C、D处加入TS发酵液的位置抑菌圈最大 (3) 发酵罐内发酵 代谢产物浓度 保证微生物能持续利用营养物质，维持稳定的生长环境 33．(1) 碳源和氮源 接种 调味、抑制杂菌生长（或 “调节渗透压” 等合理答案 ） (2) 细菌无成形细胞核（或 “米曲霉有成形细胞核，细菌没有” ） 种间竞争 (3) 活霉菌 酶 活细菌总数降低、氨基酸态氮含量增加 34．(1)兼性厌氧 (2) 更适应荔枝果汁的营养环境（或“产酒效率高”、“风味物质合成能力强”） 提供酵母菌发酵所需碳源，提高酒精产量（或提高酒精的浓度和甜度） (3) 主发酵 醋酸菌 (4)①定期检测发酵液的酒精度和pH，及时调整发酵条件；②对酵母菌进行诱变育种，筛选高产菌株；③控制陈酿时间和温度，促进风味物质形成 试卷第1页，共3页 3 / 3 学科网（北京）股份有限公司 学科网（北京）股份有限公司 学科网（北京）股份有限公司 $ 专题01 发酵工程 4大高频考点概览 考点01 传统发酵技术的应用 考点02微生物的基本培养技术 考点03 微生物的选择培养与计数 考点04 发酵工程及其应用 1．(24-25高二下·河南天一大联考·期末)某同学利用新鲜葡萄进行果酒、果醋的制作，在制作过程中记录了不同阶段的相关操作及现象。下表是不同操作阶段的操作内容及现象，下列有关叙述错误的是（　　）地 城 考点01 传统发酵技术的应用 操作阶段 操作内容 现象 果酒制作初期 将葡萄汁装入发酵瓶，留有约1/3的空间，封闭瓶口 瓶中有少量气泡产生 果酒制作中期 持续封闭瓶口 瓶中产生大量气泡 果酒制作后期 继续封闭瓶口 气泡产生速度减慢至几乎无气泡 果醋制作阶段 打开瓶口，发酵瓶通入无菌空气，升高温度 发酵液逐渐变酸，有明显醋香味 A．果酒制作初期瓶中有少量气泡产生，主要与酵母菌的有氧呼吸有关 B．果酒制作中期瓶中产生的大量气泡主要与酵母菌的无氧呼吸有关 C．果酒制作后期瓶中几乎无气泡产生，是因为代谢废物积累导致酵母菌全部死亡 D．果醋制作阶段发酵液变酸且有明显醋香味，是醋酸菌将酒精转化为乙酸的结果 2．(24-25高二下·吉林长春长春汽车经济技术开发区第三中学·期末)广东有丰富的水果资源用于制作果酒果醋，以下有关利用岭南佳果荔枝制作果酒果醋的叙述正确的是（    ） A．酵母菌无氧呼吸产生酒精是导致后期发酵液pH下降的主因 B．制作果酒时，果酒变酸的原因是密封不严导致乳酸菌大量繁殖 C．制作果醋时，醋酸菌可在氧气充足时将酒精转化为醋酸 D．主发酵阶段完成酵母菌繁殖，后发酵阶段完成糖的分解和代谢 3．(24-25高二下·陕西渭南临渭区·期末)中国的许多传统美食制作过程蕴含了传统发酵技术。下列叙述正确的是（    ） A．腐乳制作过程中，是以毛霉为单一菌种的固体发酵及半固体发酵为主 B．米酒制作过程中，将容器密封可促进酵母菌增殖 C．酵母菌、毛霉分别是果酒、腐乳制作过程中起主要作用的微生物 D．果醋制作过程中，所需的发酵温度低于果酒制作时的温度 4．(24-25高二下·福建泉州鲤城区福建泉州第七中学·期末)传统发酵技术是人们在日常生活过程中对微生物的应用。下列相关叙述正确的是（    ） A．传统发酵是利用不同原核生物产生不同代谢物的原理，以固体发酵及半固体发酵为主，生产人们需要的产物 B．腐乳的鲜味来源于根霉等微生物分泌的蛋白酶对豆腐中蛋白质分解为的大分子肽和氨基酸 C．欲将果酒制备成果醋，制备时的温度无需改变但需通入充足的氧气，制作过程中果醋pH逐渐降低，果酒制作过程中pH情况相反 D．酸奶、泡菜发酵所需的菌种都是乳酸菌，酸奶发酵时，溶液pH值逐渐降低，泡菜装坛时不能装满容器，防止发酵液等溢出，防止杂菌污染 5．(24-25高二下·湖南娄底部分普通高中·期末)下列关于乳酸菌的说法正确的是（　　） A．乳酸菌的遗传物质是DNA B．乳酸菌无氧呼吸产生乳酸和二氧化碳 C．乳酸菌与醋酸菌的代谢类型相同 D．在泡菜制作过程中，起主要作用的是醋酸菌 6．(24-25高二下·吉林长春外五县·期末)我国利用不同微生物发酵制作食品的历史悠久。下列关于微生物发酵的叙述，正确的是（　　） A．馒头中气孔是酵母菌产生的CO2受热膨胀形成的 B．果酒、果醋和腐乳制作中，利用的都是真核生物 C．果酒、果醋发酵过程中pH均为先升高后明显下降 D．利用乳酸菌制作酸奶时，先通气培养，后密封发酵 7．(24-25高二下·贵州安顺·期末)安顺金刺梨富含SOD、叶酸、维生素C和必需氨基酸。为更好地利用它，某兴趣小组通过传统发酵工艺将其制成刺梨酒和刺梨醋，制作流程如图所示。下列叙述正确的是（　　）    A．过程③刺梨汁要装满发酵瓶，以营造无氧环境利于发酵 B．发酵过程中所有材料、器具需要严格灭菌，以免杂菌污染 C．过程③发酵温度高于过程④，时间短于过程④ D．过程③和过程④所利用的主要微生物代谢类型不同 8．(24-25高二下·甘肃武威·期末)腐乳、泡菜等发酵食品具有开胃解腻、助消化的作用。下列说法正确的是（　　） A．腐乳制作过程中起主要作用的是曲霉 B．制作腐乳和制作泡菜的主要微生物代谢类型相同 C．泡菜制作时，添加“陈泡菜水”属于传统的发酵技术 D．泡菜发酵过程中，乳酸菌可分解蛋白质和果胶，使泡菜变软 9．(24-25高二下·贵州六盘水·期末)醪糟又叫酒酿，口味清甜，酿制工艺简单。醪糟的制作过程是将糯米浸泡一夜后煮熟，冷却至30℃，拌上“酒曲”置于洁净的器皿中，在米团中间挖一个洞，密封发酵3天左右。发酵过程中先产水，后产酒。下列叙述正确的是（    ） A．为节约时间，将糯米煮熟后应直接加入“酒曲”并拌匀 B．将发酵温度从30℃提高到50℃后可明显缩短发酵时长 C．发酵过程中先产水的原因是酵母菌无氧呼吸产生了水 D．醪糟口味清甜的主要原因是糯米中淀粉可被酶水解为麦芽糖、葡萄糖 10．(24-25高二下·甘肃白银部分学校·期末)风味独特、营养价值高的低度百香果玫瑰茄复合果酒的酿造工艺流程：新鲜百香果→挑选、清洗→切块、打浆→酶解→混合（加玫瑰茄水提物）→调整糖度→巴氏杀菌→固定化酵母接种→酒精发酵→澄清→过滤→杀菌→百香果玫瑰茄复合果酒。下列叙述错误的是（　　） A．相比于传统发酵，现代工业发酵技术的灭菌更为严格 B．接种的酵母菌在有氧呼吸时可大量繁殖 C．酿酒过程中，发酵液冒出的“气泡”可能是酵母菌的无氧呼吸造成的 D．百香果玫瑰茄复合果酒的制作过程中，培养液的pH升高 11．(24-25高二下·吉林长春朝阳区长春外国语学校·期末)“葡萄美酿令人痴，一醉方休谁晓知。何日与君同畅饮，凝眸了却苦相思。”表达了诗人对葡萄美酒的喜爱以及对与友人共饮的美好期待。下列有关葡萄酒制作的叙述，正确的是（    ） A．酵母菌的繁殖和代谢物的生成分别在主发酵和后发酵阶段完成 B．发酵时加入适量的葡萄糖可能会提高葡萄酒的酒精浓度 C．变酸葡萄酒表面产生的菌膜与产膜酵母的大量繁殖有关 D．酒精发酵过程中维持30-35℃有利于酵母菌的无氧呼吸 12．(24-25高二下·陕西西安西咸新区·期末)在用传统发酵技术制作发酵食品的过程中，控制发酵条件至关重要。下列相关叙述正确的是（　　） A．酒精发酵过程中密封发酵罐有利于酵母菌大量繁殖 B．由酒精发酵转为醋酸发酵时，要及时通气并适当提高发酵温度 C．泡菜制作时，用盐水淹没全部菜料并盖好坛盖，主要是为了防止杂菌污染 D．发酵前需要对发酵的原料及发酵容器进行严格灭菌，防止杂菌污染 13．(24-25高二下·安徽合肥第一中学·期末)中国传统白酒多以泥窖为发酵基础，素有“千年老窖万年糟”“以窖养糟，以糟养泥”之说。多年反复利用的老窖池内壁窖泥中含有大量与酿酒相关的微生物。下列叙述正确的是（    ） A．传统白酒的酿造防止杂菌污染以及对产品质量的控制，应做好菌种的纯化 B．窖池内各种微生物形成了相对稳定的体系，不利于酿酒酵母的生长，应适当消毒灭菌处理 C．从窖泥中分离的酿酒酵母扩大培养时，需在CO2或N2环境中进行 D．从谷物原料发酵形成的酒糟中，可分离出产淀粉酶的微生物 14．(24-25高二下·辽宁县域重点高中·期末)米酒和米醋都是我国传统饮食文化的重要组成部分，可通过传统发酵技术制作米酒和米醋。下列说法正确的是（　　） A．制作米酒和米醋时利用的都是单一菌种 B．米醋必须要在米酒发酵的基础上进行制作 C．制作米醋时发酵温度比制作米酒时要高 D．用米酒制作米醋时，需要在米酒中接种醋酸菌 15．(24-25高二下·福建福州福清·期末)蓝莓果实中含有丰富的营养成分。如图是以鲜蓝莓为原料发酵制作蓝莓酒和蓝莓醋的过程简图。下列叙述错误的是（　　） A．过程⑤中蓝莓酒可作为醋酸菌的能源和碳源 B．参与果酒和果醋发酵的微生物都是异养型生物 C．过程③，糖在醋酸菌的作用下先转化为乙醇再发酵为乙酸 D．在过程④时，榨出的蓝莓汁不需要经过灭菌就能密闭发酵 16．(24-25高二下·山西运城·期末)自古以来，传统发酵的食品一直都是人们舌尖上的美食，人们利用不同的微生物具有产生不同代谢物的能力，生产出人们所需要的多种食品。下列关于传统发酵技术的应用，正确的有几项（　　） ①制作果酒时，需要将温度控制在18—30℃，并且定时将瓶盖拧松 ②制作果醋时，可以往果酒中加入醋酸菌，醋酸菌能将乙醇转化为乙酸和CO₂ ③制作腐乳时，豆腐中的蛋白质被分解成小分子的肽和氨基酸，因此易于保存 ④制作泡菜时，蔬菜若不新鲜或食盐含量过高均容易使亚硝酸盐含量升高 ⑤制作酸奶时，在牛奶中加入一定量抗生素再利用乳酸菌发酵可以防止杂菌污染 A．一项 B．两项 C．三项 D．四项 17．(24-25高二下·湖北襄阳·期末)制醋、制酒、制作泡菜和腐乳都是我国传统发酵技术。下列叙述正确的是（　　） A．家庭制果酒时，发酵前需对原料和发酵用具等进行消毒或灭菌 B．当缺少O2和糖源时，醋酸菌能将乙醇转化为乙醛进而转化为醋酸 C．制作腐乳时，主要是利用毛霉将豆腐中的蛋白质分解成小分子肽和氨基酸 D．制作泡菜时，向坛盖边沿的水槽中注满水主要目的是创造无菌环境 18．(24-25高二下·辽宁抚顺六校协作体·期末)中国的许多传统美食制作过程蕴含了生物发酵技术。下列叙述错误的是（    ） A．乳腐制作过程中，毛霉分泌的蛋白酶能分解蛋白质 B．在葡萄酒酿制的整个过程中需要先密封后通气 C．泡菜制作过程中，乳酸菌将葡萄糖分解生成乳酸 D．家庭制作果酒、果醋和腐乳通常都不是单一菌种发酵 19．(24-25高二下·湖北黄冈·期末)黄冈传统小曲白酒以本地稻米为原料，利用小曲中的根霉、酵母菌进行糖化和发酵。其酿造流程主要为“蒸煮→撒曲糖化→装坛发酵”。下列叙述错误的是（    ） A．装坛后密封的目的是创造无氧环境进行酒精发酵 B．可用酸性重铬酸钾溶液检测发酵产物中有无酒精 C．营养成分、氧气含量等非密度制约因素影响酵母菌的种群数量变化 D．撒曲糖化阶段，根霉分泌的淀粉酶和麦芽糖酶将淀粉水解为葡萄糖 20．(24-25高二下·四川南充·期末)传统发酵食品的制作需要各种各样的微生物。下列叙述正确的是（    ） A．制作酱油和腐乳主要利用了黑曲霉产生的蛋白酶 B．醋酸菌在无氧条件下产生乙酸可用于制作果醋 C．乳酸菌在无氧条件下产生乳酸可用于制作泡菜 D．制作馒头主要利用酵母菌在有氧条件下产生CO2 21．(24-25高二下·湖南长沙宁乡·期末)桑葚是黄河故道沿线的特色水果之一，可以用来制作桑葚酒和桑葚醋，制作流程如图所示。下列说法正确的是（　　） A．发酵过程中，甲罐发酵液pH逐渐上升，可通过测量pH变化及时了解发酵情况 B．若发酵过程中甲罐中的发酵液表面出现气泡，无法说明发酵液已被杂菌污染 C．乙罐中醋酸菌与氧气、桑葚酒充分接触有利于提高发酵效率 D．若甲罐中的桑葚酒全部加入乙罐制成桑葚醋，则乙罐需要定期排出CO2 22．(24-25高二下·山东威海·期末)下列关于传统发酵技术及其应用的说法错误的是（    ） A．制作泡菜时亚硝酸盐的含量随着发酵时间的延长而不断升高 B．制作果酒时需将新鲜水果用清水冲洗后灭菌 C．发酵坛密封不严使酒变酸是因为乳酸含量增加 D．制作腐乳利用了毛霉等产生的蛋白酶 23．(24-25高二下·江西新余·期末)发酵能让食物改头换面，拥有全新的模样和味道。利用不同微生物的发酵作用制作食品历史悠久，遍布民间，称为传统发酵技术。利用传统发酵技术制作的果酒、果醋、腐乳、泡菜极大地丰富了人们的饮食。下列关于传统发酵技术的叙述正确的是（    ） A．传统发酵无需严格灭菌，参与果酒和泡菜发酵的酶都在细胞内发挥作用 B．从代谢类型分析，参与果酒和腐乳发酵的主要微生物都是异养需氧型 C．泡菜需在无氧条件下制得，制作过程中不需要定期排气 D．腐乳鲜美的味道主要依赖于毛霉分解蛋白质产生的小分子肽和氨基酸 24．(24-25高二下·吉林部分学校·期末)如图是果酒和果醋制作的实验流程及相应的发酵装置。下列相关叙述错误的是（　　） A．制作葡萄酒时应先冲洗干净葡萄后再去除枝梗 B．制作果酒时，关闭充气口，酒精发酵后期CO2产生量逐渐增多 C．利用果酒进行果醋发酵时，应打开充气口，通入无菌空气，并适当提高温度 D．果酒、果醋制作过程中培养液的pH 均升高 25．(24-25高二下·山东济南·期末)某酒厂以高粱为主料，辅以小麦、麸皮（干麦粒外层的表皮），再加入大曲、麸曲及生香酵母进行发酵。大曲和麸曲中所含的微生物主要有好氧型微生物霉菌、兼性厌氧型微生物酵母菌，还有乳酸菌、醋酸菌等。酿造工艺流程如下图所示。下列叙述错误的是（    ） A．蒸煮后摊晾，降低原料温度后才可撒曲，以免杀死菌种 B．若酒的表层长出白膜，可能是酒坛密封不严导致乳酸菌大量繁殖所致 C．撒曲糖化是指利用酵母菌分泌的淀粉酶催化淀粉分解为葡萄糖，葡萄糖为发酵的底物 D．微生物中的蛋白酶可将原料中的蛋白质分解为小分子多肽和氨基酸，增加酒的风味 26．(24-25高二下·山东滨州·期末)科研人员利用现代科技，设计了能实时监测坛内传统泡菜发酵过程中关键参数的智能泡菜坛。下列说法正确的是（    ）    A．需设计排气阀，以定期排放乳酸菌发酵产生的CO2 B．需设计能智能监测温度、pH、亚硝酸盐含量的功能元件 C．菜坛内加入盐水浓度过高会因发酵菌失水过多而影响发酵效果 D．该泡菜坛制作传统泡菜过程中只有乳酸菌一种发酵菌 27．(24-25高二下·甘肃武威·期末)蓝莓酸甜宜人、细腻多汁，被誉作“水果皇后”，由蓝莓酿制的蓝莓酒和蓝莓醋被称为“液体黄金”和“口服化妆品”等。如图是以鲜蓝莓为原料天然发酵制作蓝莓酒和蓝莓醋的过程简图，回答下列问题： (1)清洗蓝莓时应注意不能反复冲洗，以防止______。蓝莓酒所需微生物的代谢类型是______（从同化作用和异化作用两个方面考虑）型。 (2)蓝莓醋可以在蓝莓酒的基础上进行发酵，此过程主要发挥作用的微生物是________，其与酵母菌在结构上的主要差异是______，它进行醋酸发酵过程的化学反应式为______，此过程的适宜温度为_______℃。 (3)兴趣小组三位同学设计的酿蓝莓酒的装置如下图所示，其中最合理的是______瓶。发酵过程中右侧排气管连接长而弯曲胶管的目的是________ 注：各发酵瓶的左侧管为充气管，右侧管为排气管 (4)某同学尝试用罐头瓶制作蓝莓酒，在培养过程中，每隔12h左右将瓶盖拧松一次，此后再拧紧，这样做的目的，一是________，二是避免O2进入和杂菌污染。 28．(24-25高二下·四川眉山东坡区冠城实验学校·期末)中央电视台热播的美食纪录片《舌尖上的中国》受到广大观众的热捧，其中介绍的腐乳是我国独特的传统发酵食品，几百年来深受老百姓的喜爱。腐乳是用豆腐发酵制成，民间老法生产腐乳为自然发酵，现代腐乳生产多采用优良的毛霉菌种进行发酵。现代化生产流程如图。请回答下列问题：    (1)豆腐为毛霉的生长提供了水、无机盐、__________和__________四大类基本营养物质。含水量过高的豆腐不适宜制作腐乳，原因是__________。 (2)民间制作腐乳时___________(填“需要”或“不需要”)灭菌。 (3)当豆腐上长出毛霉后，对豆腐要进行__________。腐乳制作的后期要加入酒和多种香辛料配制的卤汤，其中酒的含量一般控制在12%左右，原因是___________。 (4)腐乳因加入的辅料不同而产生不同的风味，如红方因加入了___________而味厚醇香；______因不加辅料，用豆腐本身渗出的水加盐腌制而成，因而绵软油滑，异臭奇香。 29．(24-25高二下·江苏泰州·期末)果醋富含多种有机酸、维生素等物质，具有较好的抗氧化等功效。研究者以柑橘为原料，选用沪酿101醋酸菌、AS1.41醋酸菌和许氏醋酸菌三种醋酸菌，通过一次发酵法和二次发酵法酿造出六种柑橘果醋，以此探究醋酸菌种类和发酵方式对柑橘果醋总酸含量的影响。两种发酵方式流程如下。请回答下列问题： 一次发酵：柑橘→去皮榨汁→过滤→杀菌→醋酸发酵→杀菌→陈酿→柑橘果醋 二次发酵：柑橘→去皮榨汁→过滤→调糖→酒精发酵→醋酸发酵→杀菌→陈酿→柑橘果醋 (1)一次发酵中醋酸菌在________条件下可通过复杂化学反应将糖分解成乙酸；二次发酵中醋酸菌在________条件下可直接将乙醇转化为乙醛，再将乙醛氧化为乙酸。 (2)酒精发酵的适宜温度一般为________℃，该阶段酵母菌进行________呼吸，属于________反应（选填“放能”或“吸能”）。制好果酒后进行醋酸发酵，除需要加入醋酸菌外还需要________。在结构上，酵母菌不同于醋酸菌的主要区别是________。 (3)研究者以柑橘为材料进行实验，分组如下表，结果如下图。 醋酸菌名称 发酵方式 样品编号 沪酿1.01 一次发酵 沪1 二次发酵 沪2 AS1.41 一次发酵 AS1 二次发酵 AS2 许氏醋酸菌 一次发 酵许氏1 二次发酵 许氏2 由图可知，三个品种的最终总酸含量________，醋酸菌种类和发酵方式对发酵产酸的影响分别表现为________。 30．(24-25高二下·内蒙古乌兰察布集宁一中·期末)泡菜是利用一定浓度盐水泡制蔬菜，经发酵制成的食品。其民间制作工艺如图。分析回答下列问题。 (1)制作泡菜的盐水中有时要加入一定量的“陈泡菜液”，目的是__________。 (2)泡菜制作过程中往往要向泡菜水中加入花椒等香辛料，目的是___________。 (3)泡菜制作过程中要严格控制亚硝酸盐含量，影响其含量的主要因素有食盐用量、_________和_________。 (4)图甲和图乙分别是泡菜发酵过程中优势菌数和主要代谢底物浓度变化曲线。 ①由图甲可以看出，泡菜发酵初期各菌种的种间关系主要是_______，由图乙可以看出，发酵过程中微生物主要消耗的营养物质是_______________。 ②结合细胞代谢类型及图甲曲线，推测发酵6天后醋酸菌和酵母菌迅速消失的主要原因分别是_____和__________。 31．(24-25高二下·陕西咸阳·期末)青梅果肉营养丰富，成熟的青梅果实易腐烂，不易运输保存，对其进行青梅果酒酿造，既提高了青梅资源利用率，又可提高产品附加值。图1为制作青梅果酒的实验装置图；由于青梅果肉含糖量低，往往在装青梅果浆中加入白砂糖后再进行酿制；图2为在青梅果浆中添加白砂糖对酒精度和果酒感官评分的影响(感官评分越高，果酒的品质越高)。请回答下列问题： (1)在装青梅果浆时，通常留有1/3的空间，这是为了___________。青梅果酒发酵过程中，图1装置中的充气口应处于___________状态，待发酵液内不断有气泡产生后，需每隔12小时拧松排气口，放出___________。 (2)发酵液一般不会出现杂菌污染，这是因为___________(至少答出2点)等条件抑制了杂菌的生长。 (3)从图2可看出，青梅果酒酿制时果浆中初始糖浓度为___________%时效果最佳，在此浓度之后，果酒酒精度随初始糖浓度的增加而下降，原因是___________。 (4)在品鉴发酵是否完成时，可取少量发酵液，除了用闻成品酒等感官判断方法外，还可用___________溶液检测有无酒精的产生，若有酒精产生，现象是___________。 32．(24-25高二下·北京石景山区·期末)醋酸菌是果醋发酵过程中产生醋酸及其风味衍生物的重要微生物，筛选优良的醋酸菌对提高青梅果醋品质十分重要。 (1)酿制青梅果醋时，第一步是糖化作用，即将青梅中的淀粉分解；第二步是酒精发酵，即利用_______（填微生物名称）将糖转化成乙醇；第三步是醋酸发酵，即利用醋酸菌在_______条件下，将乙醇转化成醋酸，酿得青梅果醋。 (2)菌株筛选过程中涉及的几种培养基见下表。菌株筛选的流程如下：研究者取腐烂一周左右的青梅若干，加入装有培养基a的摇瓶中培养一段时间，利用_______法接种于培养基b上，选取_______且生长良好的单菌落。将初筛的醋酸菌接种于培养基c中，最终选择乙醇转化率、发酵液总酸含量均最高的菌株J作为后续的实验菌株。 培养基 培养基主要成分 a 葡萄糖、酵母粉、3%乙醇 b 葡萄糖、酵母粉、无水碳酸钙、琼脂、3%乙醇 c 葡萄糖、酵母粉、6%乙醇 注：醋酸能与碳酸钙反应生成可溶于水的醋酸钙 (3)研究者对菌株J进行诱变处理，选取突变菌株J1，与两种原有的菌株A、H分别接种于青梅果酒中进行发酵，结果如图1。该实验的目的是_______。 (4)研究人员对菌株J1的发酵条件进行深入研究，部分结果见图2。由图2结果可知，随着初始乙醇含量的增加，总酸含量先增加、后下降。请分析造成这种现象的原因。__________________。 33．(24-25高二下·海南海口·期末)我国古代有“杜康造酒，其子造醋”的传说：酒圣杜康发明了酒，他的儿子黑塔将酿酒剩下的酒糟存放缸中浸泡二十一日后，形成了香气扑鼻的醋。其工艺流程如下：①蒸料→②拌曲→③酒精发酵→④醋酸发酵→⑤熏醅→⑥淋醋→⑦陈酿 (1)①中蒸料的作用除了使淀粉糊化和挥发掉杂味外，还有_______________，②中拌曲时加入的菌种主要是__________________。 (2)在酒精发酵阶段需添加酵母菌，在操作过程中，发酵罐先通气，后密闭。这样操作的目的是____________________________________。 (3)③发酵产生酒精后，若利用酿酒缸继续进行醋酸发酵，需要改变的发酵条件有____。在④发酵过程中需要搅拌翻动发酵物，其目的是____________________。 (4)陈醋酿制打破例如家庭小作坊生产模式实现了工厂化大规模发酵，性状优良的菌种除了从自然界中筛选外，还有的获取途径是____________________。某兴趣小组同学以酒精作为底物进行醋酸发酵，为了探究初始乙醇含量对于发酵产生的总酸含量的影响，进行了多组实验，结果如下图所示： 随着初始乙醇含量的增大，总酸含量先增加后下降，请分析原因：________________________。 1．(24-25高二下·福建泉州鲤城区福建泉州第七中学·期末)某野生型细菌能通过图1途径合成色氨酸，从而在不含色氨酸的培养基上正常生长繁殖，而其突变株则不能。将突变株TrpB-、TrpC-、TrpE-（每种突变株仅图1中的某一步受阻）分别划线接种在图2培养基的I、Ⅱ、Ⅲ区域，培养短时间内三个区域均有少量细菌生长增殖，继续培养后发现I区域的两端和Ⅱ区域的一端的菌株继续生长增殖，而Ⅲ区域菌株不再生长。下列叙述正确的是（    ）地 城 考点02 微生物的基本培养技术    A．该培养基中含有少量色氨酸，酸碱度为弱酸性或中性 B．只有2种突变菌株能将积累的中间产物分泌到细胞外 C．TrpC-菌株继续生长增殖的一端为靠近Ⅲ区域的一端 D．TrpE-菌株不再生长是由于无法合成吲哚 2．(24-25高二下·陕西西安南开高级中学·期末)灭菌、消毒、无菌操作是生物学实验中常见的操作。下列叙述错误的是（    ） A．牛奶适用于巴氏消毒法 B．在酒精灯的火焰附近进行划线接种 C．可用干热灭菌法对培养基灭菌 D．湿热灭菌可用于培养瓶灭菌 3．(24-25高二下·陕西渭南临渭区·期末)微生物培养和无菌操作是发酵工程的基础。以下说法错误的是（    ） A．消毒和灭菌的主要目的是防止杂菌污染以获取纯净微生物培养物 B．煮沸消毒只能杀死物体表面或内部的一部分微生物 C．配制培养基时，灭菌之后还需要加入物质调节pH D．固体培养基可用于分离、纯化菌种，液体培养基可用于菌种的扩大培养 4．(24-25高二下·湖北武汉武昌区·期末)微生物平板划线和培养的具体操作如图所示，下列操作错误的是（　　） ①灼烧接种环 ②冷却接种环，拔出试管棉塞 ③试管口通过火焰 ④接种环蘸取菌液 ⑤试管口通过火焰并塞上棉塞 ⑥接种环划线操作 ⑦接种环划线方法 ⑧平板正置培养 A．①②⑤⑧ B．②⑥⑦⑧ C．③④⑤⑥ D．③④⑦⑧ 5．(24-25高二下·山东东营·期末)肉桂链霉菌是生产莫能菌素的重要细菌，莫能菌素具有显著的抗球虫和抗肿瘤活性。在实验室对该菌进行纯培养的过程中，下列说法错误的是（　　） A．配制培养肉桂链霉菌的培养基要将pH调至酸性 B．培养基经高压蒸汽灭菌后冷却至50℃开始倒平板 C．超净工作台喷洒适量苯酚可增强紫外线消毒效果 D．平板划线获得肉桂链霉菌单菌落的过程就是纯培养 6．(24-25高二下·贵州安顺·期末)枯草芽孢杆菌是一种常见的益生菌，广泛分布在土壤及腐败的有机物中。为获取该菌种并计数，以下操作正确的是（　　） A．接种时，可用平板划线法将高浓度菌液直接接种在平板培养基上 B．若采用稀释涂布平板法统计细菌数目，实验结果一般比实际值偏低 C．若空白对照组的平板上出现菌落，则计数时，应与实验组一起计算平均数 D．可采集含腐败有机物较多的土壤，稀释后涂布于选择培养基中进行扩大培养 7．(24-25高二下·江苏东台·期末)高压蒸汽灭菌法是一种常用的湿热灭菌法。下列不能用高压蒸汽灭菌法灭菌的是（　　） A．微量离心管 B．培养皿 C．微量移液器 D．培养基 8．(24-25高二下·海南直辖县级行政单位定安县部分学校·期末)某研究团队在实验室培养从雨林土壤中分离的微生物。请根据微生物培养的基本原理，判断以下叙述正确的是（　　） A．牛肉膏和蛋白胨来源于微生物 B．固体培养基中加入少量水也不能制成液体培养基 C．培养细菌时，一般需要将培养基调至酸性 D．培养基中的营养物质浓度越高，对微生物的生长越有利 9．(24-25高二下·辽宁县域重点高中·期末)获得纯净的微生物培养物的关键是防止杂菌污染。无菌技术应围绕着如何避免杂菌的污染展开。下列说法正确的是（　　） A．接种环是金属用具，应使用干热灭菌法进行灭菌 B．涂布器灼烧前放在酒精中是为了先进行消毒 C．牛奶消毒的时间与控制的消毒温度有关 D．接种划线时要将取下的培养皿盖置于酒精灯旁 10．(24-25高二下·天津西青区·期末)为从高粘度原油（主要是含碳有机物）中筛选得到高效降解石油污染物的细菌，研究者以原油污染污泥为研究对象进行如图所示实验。下列叙述正确的是（　　） A．培养基①的作用是增加目的菌株的种类 B．图示表明，油泥混合液被稀释了106倍 C．只有培养基②要以原油为唯一碳源 D．培养基③采用的接种方法不能用于统计活菌的数量 11．(24-25高二下·福建三明·期末)在微生物的培养过程中，离不开培养基的配制和灭菌技术。下列叙述正确的是（    ） A．生物消毒法是指利用生物或其代谢物除去环境中的所有微生物的方法 B．不同微生物生长所需的pH不同，配制完成的培养基在灭菌后按需要调节相应的pH C．为防止杂菌污染，灭菌后的培养基应立即倒入培养皿中并盖上皿盖，待冷却后倒置 D．使用高压蒸汽灭菌锅对培养基灭菌时，需在100kPa、121℃条件下维持15～30min 12．(24-25高二下·新疆喀什英吉沙县·期末)平板划线法是接种和分离微生物最常用的一种方法，据图分析下列操作正确的是（    ） A．在该操作过程中需要在酒精灯火焰上灼烧涂布器5次 B．每一次划线都应该从上一次划线的末端开始划线 C．在第二次划线时，需要在酒精灯火焰附近再蘸取一环菌液 D．倒置培养后，可选择菌落数在30-300之间的平板进行计数 13．(24-25高二下·陕西安康·期末)如图所示，研究人员从深海热泉沉积物中成功分离出耐高温（80℃）的聚酯类塑料PET（C10H8O4）分解菌。下列叙述正确的是（    ） A．图中培养基A中不含PET，培养的目的是增加分解菌的数量 B．可用干热灭菌法对培养基、试管、平板和锥形瓶等进行灭菌 C．步骤①转接次数越多，筛选出的菌株对PET分解效率就越高 D．步骤⑤应挑选菌落直径大发荧光强的菌落接种于培养基C中 14．(24-25高二下·福建福州福建师大附中·期末)采集果园土壤进行微生物分离或计数。下列叙述正确的是（    ） A．完成平板划线后，培养时需增加一个未接种的平板作为对照 B．稀释涂布平板法和平板划线法都能用于尿素分解菌的分离和计数 C．土壤中分离得到的醋酸菌能在无氧条件下将葡萄糖转化成乙酸 D．用于筛选尿素分解菌的培养基含有蛋白胨、尿素和无机盐等营养物质 15．(24-25高二下·河南南阳·期末)工业废水中含有多种有机污染物，如苯酚等。欲分离和纯化高效降解苯酚的细菌，下列相关操作正确的是（　　） A．利用以苯酚为唯一氮源的平板能分离出苯酚降解菌 B．配制培养基时，先将pH调至酸性，再灭菌 C．选择培养基分离得到的单菌落不一定能降解苯酚 D．稀释涂布平板时，可用涂布器蘸取菌液均匀涂布在固体平板表面 16．(24-25高二下·新疆乌鲁木齐天山区新疆实验中学·期末)下表是某同学配制的一种培养基的配方，下列叙述错误的是（　　） 成分 葡萄糖 Na2HPO4 KH2PO4 尿素 MgSO4·7H2O 琼脂 含量/g 10.0 2.1 1.4 1.0 0.2 15.0 将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1 000 mL A．该培养基属于鉴别培养基 B．该培养基以尿素为唯一氮源 C．该培养基无法用于病毒的培养 D．培养细菌时一般需将pH调至中性或弱碱性 17．(24-25高二下·新疆乌鲁木齐天山区新疆实验中学·期末)微生物培养过程中，要重视无菌操作防止杂菌污染，下列操作中正确的是（　　） A．玻璃器皿和金属用具一般采用高压蒸汽灭菌 B．对操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和灭菌 C．将接种环直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧，可以迅速彻底地灭菌 D．煮沸消毒法中100℃煮沸5～6 min可以杀死全部微生物的细胞、芽孢和孢子 18．(24-25高二下·湖北武汉部分高中联考·期末)一皿一世界，让微生物“勾勒”诗和远方。自然界中有很多奇妙的微生物，红色的红球菌，黄色的黄杆菌，橙色的橙色单胞菌，白色的芽孢杆菌，根据它们自身不同的颜色，可让菌种长成一幅漂亮的画(如图)。下列叙述错误的是 （    ） A．微生物作画的原理其实就是菌种的培养 B．作画用的培养基及接种工具均可采用湿热灭菌 C．在培养细菌时一般需要将培养基调至中性或弱碱性 D．作画的培养基必须用选择培养基，否则无法显现颜色 19．(24-25高二下·河北保定·期末)为了解决小麦秸秆的回收处理问题，研究人员分离、纯化分解秸秆中纤维素的微生物，实验流程如图甲所示。图乙是培养出的单菌落示意图。下列叙述正确的是（    ） A．图甲中选择培养要用以葡萄糖作为唯一碳源的选择培养基 B．制备的培养基一般要进行高压蒸汽灭菌，接种工具须经消毒处理 C．据图乙推测，分解纤维素能力最强的是菌落b D．若要统计每克样品中的细菌数，则应选择平板划线法 20．(24-25高二下·河南许昌·期末)在器械灭菌时，通常会在高压蒸汽灭菌锅中放置生物指示剂来检测灭菌效果，自含型生物指示剂如图所示。为检验生物指示剂是否出现阳性变化，需用工具在塑料瓶外挤破安瓿瓶，使含芽孢的菌片浸没在培养液内，培养后观察颜色变化(例如变黄表示阳性)。最终根据灭菌与未灭菌的生物指示剂的阳性变化情况，判断器械灭菌效果。下列叙述错误的是（    ）    A．安瓿瓶中培养液含有营养物质，其作用之一是使芽孢复苏 B．菌片中芽孢的耐热性大于医疗器械上的可能污染菌 C．培养液中可能含有pH指示剂，微生物代谢导致pH变化而出现颜色变化 D．若灭菌和未灭菌的生物指示剂均不出现阳性变化，则说明灭菌效果良好 21．(24-25高二下·陕西渭南韩城·期末)获得纯净的微生物培养物的关键是防止杂菌污染，无菌技术主要包括消毒和灭菌。下列相关叙述正确的是（    ） A．巴氏消毒法能彻底杀死牛奶中所有微生物，包括芽孢和孢子 B．对实验者的衣着和手都要进行灭菌处理 C．用后的培养基应立即丢弃，以免污染实验室其他微生物 D．灭菌方法有湿热灭菌、干热灭菌和灼烧灭菌 22．(24-25高二下·河北承德·期末)下列关于获得酵母菌单菌落的叙述，错误的是（　　） A．蛋白胨可为酵母菌的生长提供碳源、氮源和丰富的磷酸盐 B．接种室在使用前可以用紫外线照射30min，以进行消毒 C．涂布器从酒精中取出后可直接用于涂布，涂布后需灼烧灭菌 D．通过酵母菌的纯培养获得的酵母菌代谢产物叫作纯培养物 23．(24-25高二下·湖南长沙天心区长沙长郡中学·期末)瘤胃纤毛虫是一种能分泌纤维素酶的原生动物，生活在牛羊等反刍动物的瘤胃中。研究人员将纯化的瘤胃纤毛虫接种到含5mL改良培养液（由K2HPO4、KH2PO4、MgSO4、NaCl等组成）的试管中，每天投喂100μL底物悬液（由淀粉和草粉组成），每3～4天换液一次，投喂和换液结束后均需充入某种气体再盖上盖子继续培养。每天进行计数，结果如图所示。相关叙述正确的是（    ） A．可用干热灭菌法对改良培养液进行灭菌处理 B．K2HPO4和KH2PO4共同作用能维持培养液的pH C．投喂和换液结束后充入的可能是CO2，其目的是提供无氧环境 D．将等量瘤胃纤毛虫接种到含10mL改良培养液的试管中，其环境容纳量将上移 24．(24-25高二下·山东枣庄第三中学·期末)营养缺陷型菌株是指缺乏合成某些营养物质（如氨基酸、维生素）的能力，必须在基本培养基中补充特殊营养物质才能正常生长的一类菌株，可自然产生或人工诱导获得。用一定方法诱变大肠杆菌并将其接种到甲培养皿上，一段时间后将菌落影印接种（不改变菌落在培养基中相应位置）到乙、丙两培养皿中，进一步培养一段时间可筛选出营养缺陷型菌株，结果如图所示。下列说法错误的是（　　） A．将大肠杆菌接种到甲培养皿的方法为平板划线法 B．甲、丙两培养皿中培养基均添加了特殊营养物质 C．乙培养皿中能生长的为所需的营养缺陷型菌株 D．甲中部分大肠杆菌发生了基因突变或染色体变异 25．(24-25高二下·辽宁重点高中联合体·期末)香蕉枯萎病是由土壤中的尖孢镰刀菌感染香蕉植株所导致，菌株S可抑制尖孢镰刀菌。某研究小组将菌株S施于香蕉种植园的土壤中，并从中筛选出与菌株S协同作用的菌株P。为验证菌株P与菌株S对尖孢镰刀菌的抑制具有协同作用，进行了以下操作。下列叙述正确的是（　　） 培养基 预先涂布菌株 点接菌液 实验组1 实验组2 实验组3 固体培养基 菌株X 菌株S 菌株P ？ A．菌株X是尖孢镰刀菌 B．实验组3“？”为菌株S+菌株P C．该实验的因变量为溶菌圈的大小 D．能够说明菌株P对菌株S的作用的组别为实验组2和3 26．(24-25高二下·江苏徐州邳州·期末)有些细菌具有溶菌特性，能够破坏其他细菌的结构使细胞内容物释出。研究人员试图从某湖泊水样中分离出有溶菌特性的细菌。先将含有一定浓度α菌的少量培养基倾倒在固体培养平板上，凝固形成薄层。一段时间后，将1mL湖泊水样加入9mL无菌水中，摇匀后再依次等比稀释3次，取0.1mL稀释后的湖泊水样涂布于薄层上，稳定后获得56个菌落，其中15个菌落周围出现溶菌圈。下列相关叙述正确的有（    ） A．分离计数溶菌细菌的培养基应含有水、碳源、氮源、无机盐和琼脂 B．应使用灼烧灭菌冷却后的涂布器将湖泊水样均匀地涂布到薄层上 C．待接种的水样被充分吸收后，将平板倒置于恒温培养箱中培养 D．1mL的湖泊水样中约有1.5×105个具溶菌特性的细菌 27．(24-25高二下·江西萍乡·期末)自生固氮菌是土壤中能独立固定空气中N2的细菌，将玉米种子用自生固氮菌拌科后播种，可显著提高产量并降低化肥的使用量。科研人员进行了土壤中自生固氮菌的分离和固氮能力测定的研究，回答下列相关问题。 (1)在实验室培养自生固氮菌时，需要将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行_________处理。常用的方法有_________（答2点）。 (2)从营养物质的角度分析，培养自生固氮菌的培养基应具备的特点是_________。 (3)将5g土壤溶于45mL无菌水，再稀释105倍，按图[    ]_________（填数字及名称）接种方式将0.1mL样品接种到3个培养基上，统计菌落数目为134、131、137，据此可得出每克土壤中的自生固氮菌活菌数约为_________个。 (4)将纯化的固氮菌置于完全培养液中扩大培养48小时，经离心后收集下层细胞并转移至特定培养基中进行固氮能力的测定，筛选出固氮能力最强的菌种CM12.为进一步鉴定其固氮能力，科研人员选用发芽一致的玉米种子进行3组盆栽实验，30天后测定土壤微生物有机氮含量，结果如下图所示。 [注]CK：对照处理组；N：尿素处理组（每盆土壤浇50mL有机全营养液，成分为在1000mL无氮植物营养液中加入0.12g尿素）；CM12：自生固氮菌CM12处理组（每盆土壤浇50mL接种自生固氮菌的无氮植物营养液）。 ①对照组（CK）的处理为______。 ②图中实验结果可表述为_________。 28．(24-25高二下·新疆乌鲁木齐天山区新疆实验中学·期末)化合物S被广泛应用于医药、食品和化工工业。用菌株C可生产S，S的产量与菌株C培养所利用的碳源关系密切。为此，某小组通过实验比较不同碳源对菌体生长和S产量的影响，结果见表。 碳源 细胞干重/（g/L） S产量/（g/L） 葡萄糖 3.12 0.15 淀粉 0.41 0.00 制糖废液 2.30 0.18 回答下列问题。 (1)由实验结果可知，菌株C生长的最适碳源是________；用菌株C生产S的最适碳源是________。菌株C的生长除需要碳源外，还需要________（答出2点即可）等营养物质。 (2)由实验结果可知，碳源为淀粉时菌株C不能生长，其原因是________。 (3)若以制糖废液作为碳源，为进一步确定生产S的最适碳源浓度，某同学进行了相关实验。请简要写出实验思路和预期结果：________。 (4)利用制糖废液生产S可以将废弃物重新利用，其意义是________（答出1点即可）。 29．(24-25高二下·广东佛山·期末)益生菌发酵乳制品不仅营养丰富，还含有对人体健康有益的益生菌。为评估唾液链球菌（ST）与动物双歧杆菌（BL）复合发酵对发酵乳品质的影响，研究人员采用这两种益生菌菌株对牛乳进行复合发酵，在发酵终点分别测定单菌发酵组和复合菌株发酵组的pH和活菌数，结果如图a和图b所示。 回答下列问题： (1)ST与BL_______（“有”或“无”）以核膜为界限的细胞核。牛乳作为培养基的主要成分，可以为这两种发酵菌提供_________等营养物质。为保证牛乳中的营养成分不被破坏，可以采用_______法除去该培养基的杂菌。 (2)活菌数变化和pH是评价发酵乳制品质量的关键指标。三组实验在发酵终点pH都降低的细胞学原理是_______。由图b可知，与单菌发酵相比，复合发酵时两种菌株的生长存在_______作用，结合图a分析这种作用的具体机制可能是_______。 (3)研究表明，发酵产品的pH在一段时间后仍会出现一定程度的下降，出现这种变化的原因是_________，这对于发酵乳的保存和食用的启示是________。 1．(24-25高二下·海南直辖县级行政单位定安县部分学校·期末)尿素含氮量高，经过土壤中能合成脲酶的微生物分解后，才能被作物吸收利用。某科研小组欲从土壤中分离出分解尿素的细菌并计数。下列叙述正确的是（　　）地 城 考点03 微生物的选择培养与计数 A．利用平板划线法或稀释涂布平板法可对分解尿素的细菌进行接种、纯化、分离和计数 B．培养过程中，需要考虑营养条件，不考虑pH、温度和渗透压等条件 C．以尿素为唯一氮源且含酚红的培养基中加入尿素和酚红的目的是不相同的 D．在以尿素为唯一氮源的培养基上长出的菌落均为分解尿素的细菌 2．(24-25高二下·江苏徐州邳州·期末)为检测某品牌冰淇淋中大肠杆菌的数量是否超标，在伊红－亚甲蓝琼脂培养基上（伊红－亚甲蓝使大肠杆菌呈深紫色）涂布适量的冰淇淋原液设为甲组，不涂布冰淇淋原液的培养基设为乙组，经过37℃、48h培养，观察两组培养基上菌落生长情况。下列相关叙述错误的是（    ） A．伊红－亚甲蓝琼脂培养基属于鉴别培养基 B．以菌落数计算样品中的大肠杆菌数量，结果往往比实际值偏小 C．该实验涂布前未对冰淇淋原液进行稀释不一定会导致实验结果出现较大误差 D．若乙组培养基上长有深紫色菌落，计算时用甲组的深紫色菌落数减去乙组的深紫色菌落数 3．(24-25高二下·山东聊城·期末)某生物兴趣小组完成了“某果园土壤中分解尿素的细菌的分离和计数”的实验，具体操作流程如图所示。下列说法正确的是（    ） A．平板培养基的配制顺序为：称量→溶解→定容→灭菌→调pH→倒平板 B．过程④中涂布用的菌液浓度需要控制在30～300个/mL范围内 C．由图示菌落计数结果可知10克土样中的菌株数约为1.6×107个 D．④⑤使用的接种工具不同，两种接种方法均可用于微生物的分离、纯化与计数 4．(24-25高二下·安徽合肥庐江县·期末)塑化剂（DEHP，化学式为C24H38O4）被很多国家认定为毒性化学物质，其生物毒性机理：具有抗雄性激素、雌性激素活性，进而影响生物体的生殖功能。如图为某实验小组从土壤中筛选可降解DEHP细菌的过程。下列叙述错误的是（　　） A．覆盖过塑料薄膜的土壤样品中，DEHP降解菌的数量可能高于普通土壤 B．初选获得候选菌的过程，利用了DEHP作为唯一碳源的选择培养基 C．振荡培养的目的是为细菌提供充足氧气，同时促进细菌与DEHP充分接触 D．固体培养基上接种后，可通过观察菌落特征直接鉴定是否为目的菌株 5．(24-25高二下·广东广州八区·期末)生物学实验中合理选择材料和研究方法是顺利完成实验的前提条件。下列叙述正确的是（　　） A．稀释涂布平板法既可用于分离纯化菌株，又可用于菌种计数 B．向泡菜坛盖边沿的水槽中注满水，有助于坛内无菌环境的形成 C．将配制好的酵母菌培养基煮沸并冷却后，在酒精灯火焰旁倒平板 D．将接种环烧红，迅速蘸取酵母菌液在培养基上划线，培养后可获得单菌落 6．(24-25高二下·甘肃白银部分学校·期末)利用石油降解菌降解石油可作为修复被石油污染的土壤或水源的一项重要措施，筛选石油降解菌的过程如图所示。下列叙述错误的是（　　）    A．图中的土壤样本可能被石油污染 B．④接种方法为平板划线法，接种过程需要使用接种环 C．⑤最好用固体培养基培养④中的石油降解菌，检测该菌对石油的降解能力 D．稀释涂布平板法不仅可以分离、纯化石油分解菌，还可以对目的菌进行计数 7．(24-25高二下·四川眉山仁寿县·期末)某研究小组从土壤中筛选出淀粉分解菌。当淀粉被细菌分解后，平板经碘液处理会出现以这些菌为中心的透明圈。下列叙述错误的是（    ） A．在筛选淀粉分解菌的选择培养基中，应以淀粉作为唯一碳源 B．为得到淀粉分解菌的纯培养物，可用平板划线法进行接种 C．淀粉分解菌分解淀粉的能力与透明圈的大小呈正相关 D．平板划线法可用于纯化菌种，该方法也可用于细菌计数 8．(24-25高二下·广西梧州新课程教研联盟·期末)尿素是农业生产上重要的氮肥，土壤中的细菌可将尿素分解成NH3后再转化为无机盐离子供植物利用。酚红指示剂遇到碱性物质会变红，可利用酚红指示剂对尿素分解菌进行鉴定。下列相关叙述正确的是（    ） A．应在偏碱性且潮湿的土壤表层进行取样，该环境下细菌数量较多 B．筛选分解尿素的细菌时，应以尿素作为培养基中唯一的营养物质 C．脲酶将尿素分解成氨使培养基的pH降低，加入酚红指示剂后变红 D．应在菌落数目处于相对稳定状态时观察菌落形态和统计菌落数目 9．(24-25高二下·福建福州福清·期末)吃腐烂水果可能会出现头晕、恶心、呕吐或更严重的症状，这可能与微生物代谢产生的毒素有关。某研究小组设计实验探究腐烂苹果不同区域微生物的种类和数量以及烂果毒性，实验基本步骤如图所示。请据此判断下列说法正确的是（　　） A．根据本实验探究目的，步骤二接种采用的工具是接种环 B．若⑤的部位微生物的数量极少，则切掉①-④后的苹果就可以放心食用 C．离腐烂部位越远的果肉研磨液，获得适宜计数的平板需要稀释的倍数越低 D．培养基的pH应该调整到7左右，以便分离细菌、真菌等多种微生物 10．(24-25高二下·天津四校联考·期末)下列有关“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”实验的叙述，错误的是（　　） A．选择培养基中需添加尿素作为唯一氮源 B．配制培养基时，需先进行高压蒸汽灭菌，再调节pH至中性或弱碱性 C．平均每克土壤中分解尿素的细菌数约为2.2×108个 D．实验需设置未接种的培养基作对照，以验证培养基的灭菌效果 11．(24-25高二下·广西百色·期末)乳糖不耐受人群体内缺乏乳糖酶，不能完全消化母乳或牛乳中的乳糖，从而引起腹痛、腹胀、腹泻等肠胃不适。为了去除牛乳中的乳糖，某科研团队从奶酪中分离纯化出了高产乳糖酶的酵母菌，过程如图所示。其中X-gal是一种无色物质，能被乳糖酶分解为半乳糖和蓝色的溴靛蓝，使菌落呈蓝色。下列说法错误的是（    ） A．培养基甲只适合高产乳糖酶的酵母菌生长，属于选择培养基 B．用平板划线法接种可分离纯化得到该种酵母菌，并进行计数 C．含X-gal的培养基上的蓝色菌落，即为高产乳糖酶的酵母菌 D．蓝色菌落的直径越大，说明其乳糖酶产量越大或酶活性越高 12．(24-25高二下·广西玉林·期末)活性黑5是一种低毒性、难褪色的含氮染料。科研人员从样品中分离出能分解活性黑5的假单胞杆菌，并通过浓度梯度驯化法获得具有强分解活性黑5能力的假单胞杆菌，具体流程如下图。下列说法错误的是（　　） A．用染料废水堆积池的污泥作为样品更容易筛选出能分解活性黑5的假单胞杆菌 B．培养基I和Ⅱ都是以活性黑5为唯一氮源的选择培养基 C．不断升高培养液中活性黑5的浓度，有利于获得具有强分解活性黑5能力的假单胞杆菌 D．若想分离出具有强分解活性黑5能力的假单胞杆菌，只能用稀释涂布平板法进行接种 13．(24-25高二下·内蒙古赤峰·期末)科研人员培养一种能分解石油的细菌，以解决石油污染问题。下列叙述错误的是（　　） A．可以利用石油作为唯一碳源制备选择培养基 B．可以利用平板划线法分离纯化需要的菌种 C．选择培养基上生长的菌不一定都能分解石油 D．必须在点燃的酒精灯火焰附近配制培养基 14．(24-25高二·河南鹤壁·调研)侧孢短芽孢杆菌能降解制革厂废水中的单宁、苯酚和甲苯等含碳有机物，常见于富含有机质的土壤中。为获得能高效分解单宁、苯酚和甲苯的侧孢短芽孢杆菌，某小组同学进行了相关实验，过程如图所示，①②③培养基中分别加入了单宁、苯酚、甲苯，下列有关叙述正确的是（    ） A．培养基①②③中应添加抗生素以抑制其他细菌生长，方便筛选目标菌 B．图中④的接种方法是平板划线法或稀释涂布平板法，后者可对细菌计数 C．④中同时添加单宁、苯酚和甲苯作为碳源，属于选择培养基，可筛选目标菌 D．应从④中选择菌落直径大的单菌落接种到固体培养基⑤上进行扩大培养 15．(24-25高二下·山西晋中东三县·期末)天然色素来源于植物、动物及微生物，通过适当方法可从生物体细胞内提取色素。科研人员利用高氏 1 号培养基从土壤中筛选获得了一株产蓝色素的微生物，并对其进行鉴定，高氏 1 号培养基的 pH 为 7.5，主要成分包括可溶性淀粉、NaCl、KNO3、K2HPO4、MgSO4、FeSO4及 2％琼脂。下列叙述错误的是（　　） A．与植物、动物相比，利用微生物提取天然色素具有不受季节、气候的限制及培养技术简单等优势 B．接种前为确定该固体培养基是否被污染必须接种无菌水来培养检测 C．利用该培养基不宜通过逐渐升高温度的方法鉴定菌株的耐热性 D．纯化培养时，培养皿应倒置放在恒温培养箱内静置培养 16．(24-25高二下·河北沧州泊头文宇中学·期末)关于微生物的培养与计数，下列叙述正确的是（　　） A．不含碳源或氮源的培养基不能用于微生物的培养 B．在无氧环境下培养、筛选出的一定是厌氧微生物 C．进行微生物的计数时，所用培养基中含有琼脂 D．菌液的稀释倍数会影响活菌计数结果的准确程度 17．(24-25高二下·浙江宁波·期末)丙草胺（C17H26ClNO2）是一种广泛应用的除草剂，能抑制土壤细菌、放线菌和真菌的生长。为筛选修复污染土壤的微生物，某研究小组从某地土壤中分离出能有效降解丙草胺的细菌菌株，并对其计数，操作过程如图所示。下列叙述正确的是（　　） A．涂布前要检测培养基是否被污染可接种自来水后培养 B．涂布培养的结果表明每克土壤中的菌株数约为1.7×109个 C．该方法的计数结果往往比显微镜直接计数法偏大 D．在选择培养基中添加少量有机碳源以加速丙草胺降解菌的分离 18．(24-25高二下·广东佛山·期末)刚果红是一种染料，它可与像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物，但不与水解后的纤维二糖、葡萄糖等发生这种反应。图为土壤中几种纤维素分解菌在刚果红培养基上形成的透明圈，其中a、b、c、d表示四种菌落。下列叙述错误的是（　　） A．取样时用到的纸袋、铁铲和采集的土壤等都需进行灭菌处理 B．纤维素分解菌产生的纤维素酶可以分泌到细胞外发挥作用 C．图中的接种方法为稀释涂布平板法，一个菌落一般来源于一个活菌 D．纤维素分解能力与透明圈和菌落的直径比值正相关，因此d最高效 19．(24-25高二下·广西崇左部分学校·期末)在小麦丰收的季节，人们经常焚烧秸秆致使火焰四起，烟雾弥漫，这不但会导致严重的雾霾，还会造成资源浪费。为了解决这个问题，研究人员努力寻找分解秸秆中纤维素的微生物，实验流程如图甲所示。图乙是培养出的单菌落示意图。下列叙述正确的是（    ） A．图甲中选择培养要用以葡萄糖作为唯一碳源的选择培养基 B．制备的培养基一般要进行高压蒸汽灭菌，接种工具须经消毒处理 C．据图乙推测，分解纤维素能力最强的是菌落b D．若要统计每克样品中的细菌数，则应选择平板划线法 20．(24-25高二下·湖南岳阳·期末)双层平板法是对噬菌体进行计数的常用方法。具体做法，在无菌培养皿中倒入琼脂含量为2%的培养基凝固成底层平板后，将琼脂含量为1%的培养基熔化并冷却至45-48℃，然后加入敏感指示菌和待测噬菌体稀释悬液的混合液，充分混匀后立即倒入底层平板上形成双层平板。培养一段时间后，在双层培养基的上层会出现透亮的无菌圆形空斑——噬菌斑，下列有关说法不正确的是（　　） A．底层培养基可以弥补培养皿底部或超净工作台不平，利于后续实验观察 B．上层培养基中琼脂浓度较低，因此形成的噬菌斑较大，更有利于计数 C．将培养基冷却到45-48℃最主要原因是防止下层固体培养基被液态化 D．底层平板凹凸不平，原因可能是温度过低导致部分培养基已经凝固 21．(24-25高二下·内蒙古乌兰察布集宁一中·期末)纤维素分解菌能产生纤维素酶，纤维素在纤维素酶的作用下分解成葡萄糖。其他微生物不能产生纤维素酶，不能利用纤维素。某生物兴趣小组欲从土壤中分离纤维素分解菌，大致步骤如下：土壤取样→用液体培养基选择培养→梯度稀释→涂布培养→鉴定。使用液体选择培养基培养纤维素分解菌的原因是（    ） A．可获得大量纤维素分解菌 B．便于稀释涂布平板 C．纤维素分解菌只能在液体培养基中生长 D．用液体培养基可鉴别纤维素分解菌 22．(24-25高二下·江西九师联盟·期末)新型杀虫剂噻嗪酮类属于昆虫蜕皮抑制剂。通过抑制壳多糖合成和干扰新陈代谢，使害虫不能正常蜕皮和变态而逐渐死亡，具有高活性、高选择性、长残效期的特点，在杀死昆虫的同时也能造成环境污染，生物防治是重要的改善方法之一。如图为筛选高效分解噻嗪酮（MM - 1）菌株的过程。下列叙述正确的是（    ） A．研究人员可从常年生产噻嗪酮的工厂排污口附近采集土样 B．过程 a 为扩大培养，目的是增加分解噻嗪酮菌株的数量 C．用接种环将 0.2 mL 稀释液均匀涂布在培养基表面 D．LB 培养基中应含有琼脂，根据菌落特性筛选相关菌种 23．(24-25高二下·江苏无锡·期末)下图为一种分离厌氧纤维素降解菌的流程图。相关叙述正确的是（    ） A．纤维素化磁性纳米颗粒外层的成分是纤维素 B．候选菌扩大培养时，需进行摇床培养以增加溶解氧 C．过程③中纤维素对细菌有高亲和力，有利于纤维素化磁性纳米颗粒粘附细菌 D．该过程中纤维素降解菌合成的纤维素酶需经高尔基体加工后分泌到细胞外发挥作用 24．(24-25高二下·江西赣州·期末)自生固氮菌是土壤中能独立固定空气中N₂的细菌，将玉米种子用自生固氮菌拌种后播种，可显著提高产量并降低化肥的使用量。科研人员进行了土壤中自生固氮菌的分离和固氮能力测定的研究，部分实验流程如图。下列叙述正确的是（　　）    A．配制培养基时需严格确保不含氮源，以筛选出仅依赖空气中N₂生长的自生固氮菌 B．采用平板划线法对菌落计数，应选择菌落数在30~300之间的3个平板进行计数，求出平均值 C．若在④的平板上统计的菌落平均数量为126个，则每克土壤中含有的固氮菌为1.26×106个 D．拌种可减少化肥的使用量，原因是自生固氮菌能够将空气中的N2转化为植物可利用的氮肥 25．(24-25高二下·江西金太阳·期末)实验人员常用滤膜法测定大肠杆菌的数目以确定水样是否符合饮用水卫生标准。相关实验流程如图所示，其中指示剂伊红—亚甲蓝可使大肠杆菌菌落呈现紫黑色，无菌操作下将10mL待测水样加入90mL无菌水中，稀释后的菌液通过滤膜法测得的EMB培养基上的菌落数均值为124，紫黑色菌落数均值为37。已知我国《生活饮用水卫生标准》规定，每升水样中大肠杆菌数量不得高于3个。下列叙述错误的是（    ） A．与过滤有关的操作都要在酒精灯火焰旁进行 B．EMB培养基属于选择培养基 C．滤膜紧贴在培养基上，属于微生物培养中的培养步骤 D．根据实验数据推测，该水样符合饮用水卫生标准 26．(24-25高二下·陕西汉中·期末)某生物兴趣小组用下图所示的方法对酵母菌进行计数，计算得到每毫升酵母菌培养液中酵母菌的数量为3.5×108个。下列叙述错误的是（　　） A．该实验过程中需要用到涂布器 B．用该方法计数的结果通常比实际结果小 C．图中甲应该加入5mL无菌水 D．图中培养基常用湿热灭菌法灭菌 27．(24-25高二下·山东淄博·期末)火龙果在常温下极易腐败变质,产生醋味。可从火龙果上筛选优质醋酸菌种，用于火龙果深加工,筛选过程如图。下列说法正确的是（    ） A．“富集培养基” 为液体培养基, 培养时需振荡培养 B．可用紫外线照射对 “初筛” 培养基进行灭菌 C．初筛时产生了透明圈的菌落为 “符合要求” 的单菌落 D．缺少糖源时, 醋酸菌可将乙醇转化为醋酸 28．(24-25高二下·宁夏固原·期末)早在先秦的《诗经》中，就有“中田有庐，疆场有瓜，是剥是范，献制之皇祖”的记载，其中的“菹”即“菹菜”，就是大西北地区所特有的食物——浆水酸菜。浆水酸菜中存在大量乳酸菌，人体摄入适量乳酸菌可促进有益微生物生长，抑制有害微生物生长，维持肠道菌群平衡，减少肠道疾病发生。但乳酸菌要发挥保健作用，需有足够数量的活性菌经过胃到达小肠，因此乳酸菌需具备较强的胃酸耐受能力。为此，某实验小组从老浆水中筛选出对胃酸有较强耐受力的乳酸菌株，并进行抑菌培养，流程如图所示。请回答下列问题： (1)为了满足乳酸菌生长繁殖的需求，培养基除提供碳源、氮源、水、无机盐外，还需要添加______。接种前，固体培养基需要通过______法进行灭菌。 (2)过程I中采用的接种方法是_____，需要将接种环在培养基表面连续划线，目的是_______。培养一段时间后可根据菌落的_____等特征（写出2点），来挑选目的菌株。富集培养过程中培养液的pH应控制在1.5左右，目的是______。 (3)该实验小组已筛选到了耐酸性较强的菌株JYF2和JYF3.现将JYF2和JYF3乳酸菌菌液分别置于牛津杯孔中（图2），若A、B分别表示含等量JYF2和JYF3乳酸菌菌液的牛津杯，则C表示_______。然后将A、B、C牛津杯分别放在4种培养基（表面分别涂布有大肠杆菌、沙门氏菌、铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌）上进行混合培养（图1-IV），抑菌测试结果如图3，由该实验结果可得到的结论为：______。 29．(24-25高二下·江苏镇江六校等校联考·期末)臭鳜鱼是利用新鲜鳜鱼为原料，配以食盐、花椒等辅料，由乳酸菌等多种微生物共同发酵制得的发酵鱼制品，主要的制作流程如下： a.取新鲜鳜鱼，用鱼鳞刷刷去鱼体表面鱼鳞，再经剖腹宰杀，去除内脏和鱼鳃，用自来水和10%盐水先后清洗一次。沥水待用。 b.将鱼平整码放于鳜鱼发酵专用装置内，一桶约码放30kg，每码一层，撒上若干粒干炒过的花椒（花椒总量为鱼重量的0.1%），码放结束后在上层鱼体上放置按压板。 c.向桶内加入提前配制好的腌制液，即8%（w/v）食盐溶液，以刚好浸没按压板为宜，按压板上放置扁圆状砝码（按压重量为鱼重量的40%），用以将鱼体全部浸压于腌制液液面以下。 d.合上发酵装置顶盖，以厌氧发酵方式，8℃发酵16d。 (1)臭鳜鱼制作过程中花椒的作用有_______，压板和圆状砝码将鱼体全部浸压于腌制液液面以下的目的是_______。 (2)乳酸菌生长的最适宜的温度范围在25~37℃之间，但发酵温度却控制为8℃，是因为在8℃条件下________。 (3)市场上购买的真空包装的臭鳜鱼，在没有漏气的状态下发生了“胀袋”现象，同学A怀疑是杂菌污染导致的，同学B怀疑是乳酸菌大量繁殖导致的，你支持谁的观点并说明理由________。 (4)臭鳜鱼制作时要用适宜浓度的盐水浸过鱼体。所用盐水需煮沸，其目的是_______（答出1点即可）。为了缩短制作时间，通常会在冷却后的盐水中加入少量陈腌制液，目的是_______。 (5)科研人员尝试从自然发酵的臭鳜鱼中分离优质的清酒乳杆菌，实验流程如图：    a.步骤②需充分振荡20min的目的是_______。 b.步骤③④分离纯化微生物的方法叫________。 c.步骤④⑤所用的MRS培养基的主要成分有胰蛋白胨、牛肉膏、番茄汁、葡萄糖、碳酸钙（乳酸能与碳酸钙反应出现溶钙圈）、溴甲酚绿（pH显色剂，酸性显示黄色、碱性显示蓝绿色）、琼脂，其中为微生物提供氮源的成分有_______。 ⑤过程重复划线培养时所挑取的菌落周围应出现________。 (6)科研人员采用以下实验流程检测分离出的一株清酒乳杆菌的代谢产物，对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、腐生葡萄球菌、丁香假单胞菌等4种病原菌的抑制效果： ①取10mL灭菌的琼脂倾注于A、B、C、D培养皿底层，待琼脂凝固后在其上均匀放置4个牛津杯。 ②将4种病原菌悬液分别与营养琼脂等比例混合，取20mL分别倾注于A、B、C、D培养皿内，待琼脂凝固后拔下牛津杯，留下的小孔分别标注为1、2、3、4号（如图）。 ③向1号孔中加入？作为对照，向2、3、4号孔中分别加入100μL含有清酒乳杆菌代谢产物的液体培养基，在适宜条件下静置培养24h，结果如下图：    步骤③中“？”加入的液体是_______，根据实验结果可以得出的结论是_______。 30．(24-25高二下·四川眉山仁寿县校联考·期末)磷是植物生长的重要元素，施入土壤中的磷，大多数会与Ca²⁺等阳离子结合形成难溶性磷酸盐。科研人员从贡柑果园土壤中筛选出可以将难溶性或不溶性磷转化成可溶性磷的高效解磷菌，主要流程如下图所示。回答下列问题： (1)步骤③在最后一次稀释后，在3个平板上分别滴入0.1mL稀释液，经适当培养后，得到的结果分别是39、38、37，据此计算每克土样中的活菌数为______个。运用这种方法统计的菌落数往往比活菌实际数目______（填“少”或“多”），原因是_______。 (2)步骤④中待菌落长好后，应以______为标准来挑选菌落，再进行下一步平板划线操作。通常情况下，对获得的纯菌种可以依据______（如形状、大小、颜色等）对细菌进行初步的鉴定和分类。 (3)实验中欲判断选择培养基是否起到了选择作用，需要设置______作为对照。 (4)为进一步测定初步筛选的三种菌株实际溶解磷的能力，研究人员将它们接种到特定的培养基中，并在37℃、200r·min-1摇床培养，定期取上清液，测定溶液中可溶性磷含量，得到如图的曲线。 实验中用摇床进行培养的优点是______（答2点）。本实验结果表明最优良的解磷菌株是______。 31．(24-25高二下·安徽合肥第七中学·期末)自生固氮菌是土壤中能独立固定空气中N2的细菌，将玉米种子用自生固氮菌拌种后播种，可显著提高产量并降低化肥的使用量。科研人员进行了土壤中自生固氮菌的分离和固氮能力测定的研究，部分实验流程如下图。回答下列问题： (1)步骤①土样应取自表层土壤的原因是______。 (2)下表为两种培养基的配方，步骤④应选其中的______培养基，原因是______。 培养基类型 培养基组分 Ashby培养基 甘露醇（C6H14O6）、KH2PO4、MgSO4·7H2O、NaCl、K2SO4、CaCO3、蒸馏水、琼脂 LB培养基 蛋白胨、酵母提取物、NaCl、蒸馏水、琼脂 (3)若在④的平板上统计的菌落平均数量为126个，则每克土壤中含有的固氮菌为______个。 (4)将纯化的固氮菌置于完全培养液中扩大培养48小时，经离心后收集下层细胞并转移至特定培养基中进行固氮能力的测定，筛选出固氮能力最强的菌种CM12，为进一步鉴定其固氮能力，科研人员选用发芽一致的玉米种子进行3组盆栽实验，30天后测定土壤微生物有机氮含量，结果如下。 注：CK：对照处理组；N：尿素处理组（每盆土壤浇50mL有氮全营养液：成分为在1000mL无氮植物营养液中加入0.12g尿素）：CM12：自生固氮菌CM12处理组（每盆土壤浇50mL接种自身固氮菌的无氮植物营养液）。 ①对照组（CK）的处理为______。 ②实验结果表明：施用尿素处理和接种固氮菌CM12处理均能显著增加土壤微生物有机氮含量。与CK组相比，CM12处理组土壤微生物有机氮含量增加了约______%。 32．(24-25高二下·辽宁丹东·期末)苹果富含矿物质和维生素，真菌X可引起苹果树腐烂病，对苹果树威胁很大，目前该病仍以化学防治为主。研究人员欲从土壤中分离筛选出能抑制真菌X的芽孢杆菌进行生物防治。分离筛选芽孢杆菌的实验流程如图所示，分析回答以下问题： (1)制备如图一所示的培养基除含有必需的水、碳源、_______等营养物质外，还需要加入_______。 (2)对培养基进行灭菌的方法是_______。图一中所示分离筛选细菌的方法是_______。所取5g土壤中加入_______mL无菌水，可得到稀释10倍的土壤悬液。 (3)经过梯度稀释和接种后，可根据培养基上菌落的_______（答出两点）等特征鉴别出芽孢杆菌，并进一步分离纯化。若103稀释倍数下的三个平板中，符合芽孢杆菌特征的菌落数分别为65个、79个、66个，则5克土壤中含芽孢杆菌数目为_______个。 (4)通过菌落特征鉴别、分离得到的芽孢杆菌抑菌效果并不相同，若要筛选出抑菌效果好的目的菌株，可将来源于不同菌落的芽孢杆菌分别接种在多个实验组平板上，并在实验组和对照组的中心A处接种等量真菌X，如图二所示。一段时间后可通过测量每个实验组与对照组间的_______之比来判断目的菌株的抑菌效果，比值越_______说明抑菌效果越好。若要进一步验证筛选出的芽孢杆菌的抑菌效果，还可将其接种于________。 33．(24-25高二下·四川眉山仁寿县·期末)分发酵工程在医药上的应用非常广泛，其中青霉素的发现和产业化生产进一步推动了发酵工程在医药领域的应用和发展。产黄青霉菌是一种广泛存在于自然界中的霉菌，是生产青霉素的重要工业菌种。工业上生产青霉素的发酵工程流程如图1所示。回答相关问题： (1)整个发酵过程的中心环节是________。在制备该培养基时，除了添加必要的营养成分外，还需要将pH在灭菌________（填“前”或“后”）调至________性。对产黄青霉菌进行分离纯化并计数采用了________法。 (2)欲从土壤中分离出能产生纤维素酶的纤维素分解菌，可用加入________作为唯一碳源制成的选择培养基进行分离。若将样品接种到分离纤维素分解菌的培养基上，在该培养基中需要加入的特殊染料刚果红，通过观察是否产生________来筛选纤维素分解菌。 (3)研究发现，某些青霉菌属于维生素营养缺陷型菌株，失去合成某种维生素的能力，只有在基本培养基中补充所缺乏的维生素后才能生长。某研究小组筛选出某种维生素营养缺陷型菌株，为了进一步确定该菌株的具体类型，他们把15种维生素按照不同组合分为5个小组，用5个滤纸片分别蘸取不同小组的维生素，然后覆于接种后的琼脂平板上培养一段时间。结果如表： 组别 维生素组合 1 维生素A 维生素B1 维生素B2 维生素B6 维生素B12 2 维生素C 维生素B1 维生素D2 维生素E 烟酰胺 3 叶酸 维生素B2 维生素D2 胆碱 泛酸钙 4 对氨基苯甲酸 维生素B6 维生素E 胆碱 肌醇 5 生物素 维生素B12 烟酰胺 泛酸钙 肌醇 实验结果显示1组和2组滤纸片周围产生生长圈（图2），则该营养缺陷型大肠杆菌不能合成的维生素是________。若该菌株为叶酸和生物素的双营养缺陷型大肠杆菌，则其在培养基上形成菌落的位置是________。 34．(24-25高二下·四川达州普通高中·期末)曾经被广泛使用的除草剂草甘膦是一种有机磷农药，但是草甘膦残留对环境和人类健康都存在很大的危害。某科研小组从生产草甘膦的工厂附近采集土壤样品，并从中成功分离出了能高效降解草甘膦的巨大芽孢杆菌，其主要流程如图所示。请据图回答下列问题： (1)配制好的培养基通常可以使用_____法灭菌。从功能上看，步骤③的培养基属于________培养基。 (2)步骤③⑤都采用摇床进行震荡培养，震荡对微生物培养的作用是______。 (3)步骤④培养时，需要将固体平板倒置，其原因是一方面防止皿盖上的水珠落回培养基造成污染，另一方面是_______。 (4)步骤④的固体平板长出来的菌落______（填“一定”或“不一定”）是草甘膦降解菌。分别挑取步骤④的固体平板上的菌落，接种于步骤⑤的液体培养基中。A、B、C三个锥形瓶中的初始草甘膦浓度______（填“相同”或“不相同”）。培养相同时间后，可以通过肉眼观察步骤⑤的液体培养基的______初步判断菌体密度大小；最后利用HPLC检测______以判断相应菌株降解草甘膦能力的大小。 35．(24-25高二下·黑龙江牡丹江第二高级中学·期末)盐碱地中含有丰富的耐盐碱自生固氮菌。固氮菌能固定氮气，提高土壤的氮含量，为植物生长提供充足的氮元素。研究人员采用改良的培养基，分别从氯碱土、盐碱土和草滩土中分离筛选出具有一定耐盐碱能力的自生固氮细菌，并研究了酸碱度对其生长情况的影响。回答下列问题： (1)取土样分离自生固氮菌时，所用培养基应该为不含_______的选择培养基。 (2)步骤③所用的接种方法是_______。若在接种后的平板上统计的菌落数平均为168个，则每克土壤中含有的固氮菌数目约为_________个，该结果比实际结果_______（填“大”或“小”），原因是：________。 (3)对不同土壤样品重复分离过程，得到 HY - 4、MZ - 1、JB - 2 三个纯化的自生固氮菌品种，利用这三个品种研究 pH 对其生长情况的影响，得到如下表所示结果。 pH 品种 OD值 pH=6.5 pH=7.5 pH=8.5 pH=9.5 pH=10.5 pH=11.5 HY - 4 0.242 0.419 0.687 0.570 0.463 0.304 MZ - 1 0.272 0.424 0.719 0.585 0.470 0.347 JB - 2 0.283 0.432 0.739 0.597 0.495 0.433 注：OD 值表示吸光度。OD 值越大，表明菌株固氮能力越强。 根据以上结果，可以得出的结论是：________。 36．(24-25高二下·贵州黔西南州·期末)某个高温日，某校三位高中学生相约去吃冰激凌，之后两人都出现腹泻现象，于是他们怀疑冰激凌中的大肠杆菌含量超标。老师建议他们利用学过的有关微生物培养的知识对此冰激凌进行检测。经过一番资料查阅，他们设计实验步骤，进行相关的实验： ①立即去卖冰激凌的小店再买一个同样品牌的同种冰激凌； ②配制伊红—亚甲基琼脂培养基（该培养基可用来鉴别大肠杆菌，生长在此培养基上的大肠杆菌菌落呈深紫色，并有金属光泽）、灭菌、倒平板； ③取10mL刚融化的冰激凌作为原液，然后按照一定倍数进行稀释； ④取上一步得到的冰激凌液0.1mL，用涂布平板法进行接种，涂布3个平板； ⑤在适宜温度下培养48h，统计所有的菌落数目及大肠杆菌菌落数目。 (1)根据实验的平行重复原则，实验步骤中存在1处不合理的地方，应该怎么做_______。 (2)我国卫生部门规定饮用水标准是1mL自来水中细菌总数不超过100个（37℃培养24h），1000mL自来水中大肠杆菌菌落数不能超过3个（37℃培养48h），则实验步骤③对冰激凌原液稀释的倍数为________（填“无需稀释”“10倍”或“102倍”……等） (3)伊红—亚甲基琼脂培养基倒平板时需等待培养基冷却后倒过来放置，原因是______。 (4)运用该方法鉴定和统计大肠杆菌菌落时，应设置两组对照组，一组为阴性对照组，具体做法是不进行涂布或者用无菌水涂布平板，目的是_________；另一组为阳性对照组，具体做法是______，目的是说明实验组培养基是否培养出了大肠杆菌。 (5)涂布了的3个平板上菌落数分别为39、38和37，据此可得出1mL冰激凌原液中的活菌数为______。 37．(24-25高二下·福建宁德·期末)农业生产中塑料残膜在自然状态下难以降解，土壤中多种微生物能够利用塑料中的高分子有机化合物（聚乙烯）作为碳源，在其表面形成独特的群落，称为“塑料际”。科研人员进行如下图的实验过程，分离出能高效降解塑料的微生物菌株。 回答下列问题： (1)图中①获得单菌落的方法是__________，按物理性质分类，培养基A属于__________培养基，其碳源是__________。 (2)经过初筛，“塑料际”中发现g-1、f-2两种高效降解菌，为进一步比较两种菌株的降解能力，科研人员做了如下实验： 单独接种并培养 g-1菌种 f-2菌种 降解圈（直径D/mm） 3.5 1.8 根据上述实验结果，__________（填“能”或“不能”）说明该实验中g-1的降解能力强于f-2，理由是__________。 (3)水接触角是评估塑料表面亲水性变化的重要指标，水接触角越小表明塑料亲水性越强。塑料的主要化学成分具有非极性特点，经菌株g-1和f-2处理塑料薄膜后，水接触角变小。推测水接触角变小的可能原因是__________。 38．(24-25高二下·吉林吉林永吉实验高级中学等校·期末)辛基酚是一种能对人和动物内分泌功能产生不良影响的小分子有机物。科研人员欲从城市污水处理厂的污泥中筛选出辛基酚高效降解菌，操作流程如图所示，①~④表示操作步骤。回答下列问题：    (1)实验时需称量污泥土样，置于以__________为唯一碳源的培养基中进行选择培养。常采用__________法对新配制的培养基进行灭菌。 (2)步骤②需要振荡培养，其目的是__________，同时使__________，以提高营养物质的利用率。 (3)经步骤③最后一次稀释之后，若在3个平板上分别接种0.1mL稀释液，经适当培养后，得到的结果是39、38、37，则每克土样中的活菌数为__________个。 (4)步骤④的培养皿中获得了菌落。运用稀释涂布平板法统计的结果往往比实际值__________（填“多”或“少”），原因是__________。 39．(24-25高二下·江西景德镇·期末)近年来，某市水环境中发现的不同程度的抗生素残留，不仅威胁水生生物的生存，还会损害微生物的生态平衡。氧氟沙星（OFL）（C18H2OFN3O4）是一种人工合成的广谱抗菌药物，但遇到高温就会失效。某实验小组成功地从废水环境样品中分离得到能降解0FL的菌株A，筛选分离的操作过程如图所示。回答下列问题： (1)筛选能够降解OFL的菌株时富集培养基中需要加入______作为唯一碳源成氮源。 (2)利用水体中原有的细菌可去除废水中的抗生素，但这种方法的不足之处是______，因此需要筛选出降解抗生素的菌株。 (3)下列关于该实验过程中相关操作的叙述错误的是______（多选）。 A．用移液管稀释菌液时，吹吸三次的目的是使菌液与水充分混匀 B．Ⅲ过程中通过连续划线将聚集的菌种逐步稀释获得单个菌落 C．富集培养基全部配置好后装至锥形瓶进行高压蒸汽灭菌 D．微生物接种后，应在培养皿皿底做标记后倒放培养 (4)在过程Ⅲ中，可以每隔24h统计一次菌落的数目，选______时的记录作为结果，三个培养基中长出的菌落数量分别是145、168、154，故推测A中细菌的数量为1.54×109个/mL，则过程Ⅱ中的总稀释次数为______次。实际活菌数比统计结果______（“多”或“少”），原因是______。实验最终筛选出的菌株_______（“一定”或“不一定”）属于同一物种。 1．(24-25高二下·甘肃定西临洮县·期末)与传统发酵相比，下列不属于现代工业发酵的特点的是（　　）地 城 考点04 发酵工程及其应用 A．通常为混合菌种发酵 B．需要进行严格灭菌 C．发酵规模一般较大 D．受自然环境变化的干扰较小 2．(24-25高二下·河南周口商水县·期末)大豆发酵制成的豆瓣酱味道醇厚，凭借独特的风味赢得了消费者的青睐，其主要制作流程如下图所示，下列说法错误的是（　　）    A．过程①将大豆浸泡蒸熟后，可立即进行接种和保温发酵 B．前期米曲霉发酵过程中可适时通氧，但不需要再添加碳源 C．发酵时加入辣椒、盐水等辅料不仅可以调味，还能抑制杂菌生长 D．乳酸菌、酵母菌在后期发酵过程中进行无氧呼吸，其产物可增加风味 3．(24-25高二下·吉林长春外五县·期末)下列关于发酵工程的叙述正确的是（　　） A．发酵过程中，为了避免污染，不能再向发酵罐中添加营养物质 B．等待发酵结束后，可采用过滤、沉淀等方法将菌体分离和干燥 C．单细胞蛋白是从微生物细胞中提取的蛋白质，常用作微生物饲料 D．筛选出高产柠檬酸的黑曲霉菌种后直接接种到发酵罐中进行发酵生产 4．(24-25高二下·内蒙古赤峰·期末)我国许多传统美食的制作过程融合了生物发酵技术。下列叙述错误的是（　　） A．制作腐乳时加入酒可以提味、抑制杂菌生长 B．传统发酵以混合菌种的固体或半固体发酵为主 C．制作酸奶时，低温条件可以促进乳酸杆菌生长 D．制作泡菜时，加入“陈泡菜水”可缩短发酵时间 5．(24-25高二下·广东江门·期末)柿子具有较高的营养价值和药用价值。采用液体发酵法可酿制出醋香浓郁、酸味纯正的柿子醋，提高了柿子的经济价值。柿子醋的酿造工艺流程如图所示。下列关于柿子醋酿造过程的叙述，错误的是（    ） A．酒精发酵前可对柿子汁进行杀菌，以利于酒精发酵 B．酒精发酵和醋酸发酵的步骤都需在无氧条件下进行 C．若柿子酒的酒精度过高，应稀释后再用于醋酸发酵 D．使用人工培养的单一菌种可提升柿子醋质量的稳定性 6．(24-25高二下·山东东营·期末)根霉菌是豆豉发酵的关键菌种，可将大豆蛋白分解成生物活性肽。豆豉的制备过程包括蒸煮、接种、发酵等步骤。下列说法错误的是（　　） A．根霉菌产生的蛋白酶和肽酶促进了生物活性肽的产生 B．发酵工程制作豆豉，菌种来自于空气中的霉菌孢子 C．蒸煮的目的是杀死杂菌，同时使蛋白质变性易于被根霉菌利用 D．发酵阶段根霉菌大量增殖，其它菌种的繁殖速度会影响豆豉风味 7．(24-25高二下·辽宁葫芦岛·期末)下列关于发酵工程及其应用的叙述，错误的是（　　） A．性状优良的菌种也可通过诱变育种或基因工程育种获得 B．通过发酵工程可以从微生物细胞中提取单细胞蛋白 C．可采用过滤、沉淀等方法将微生物菌体与发酵液分离 D．啤酒发酵过程中代谢物的生成主要在主发酵阶段完成 8．(24-25高二下·甘肃武威·期末)下列有关微生物的培养和计数，叙述错误的是（　　） A．培养微生物前需在培养皿皿底或侧面做好标记 B．培养结束后可根据菌落的形状、大小、颜色等特征初步确定微生物的种类 C．某稀释度下对3个平板重复计数，测得的菌落数分别为18、234、276，求出平均值为176 D．显微镜直接计数和活菌计数法分别测定同一样品的细菌数量，前者大于后者 9．(24-25高二下·贵州六盘水·期末)中国科学家构建了一株嗜盐单胞菌H，其酸碱耐受能力强，以糖蜜或餐厨垃圾等为原料在实验室发酵生产PHA。PHA是嗜盐单胞菌H的代谢产物，是一种重要的可降解材料，其生产工艺流程如下图所示。下列相关叙述错误的是（    ） A．发酵装置中搅拌器的主要作用是使空气和发酵液充分混合，提高原料利用率 B．依据H菌的特性可建立抗杂菌污染的开放式发酵系统，还可实现废弃物的资源化 C．发酵过程中要及时添加必需的营养组分，严格控制温度等发酵条件 D．发酵结束后，对发酵液采取适当的过滤、沉淀等方法直接获得产品PHA 10．(24-25高二下·河南许昌·期末)油炸臭豆腐是我国一些地方的风味小吃，制作时需要将豆腐浸入含有乳酸菌、芽孢杆菌等微生物的卤汁中发酵。下列有关叙述正确的是（    ） A．卤汁中营养物质有限，乳酸菌和芽孢杆菌主要因争夺生存空间而存在竞争关系 B．乳酸菌发酵过程中会产生大量CO2气体，这是卤汁中产生气泡的主要原因 C．卤汁中不同微生物的代谢活动产生了多种不同的代谢产物，这是赋予臭豆腐特殊风味的关键 D．提高卤汁的盐浓度，有利于所有微生物的发酵活动，从而加速制作过程 11．(24-25高二下·河南许昌·期末)固态发酵法是我国酿造白酒的传统方法之一，是一种利用多种天然微生物接种、固态糖化发酵同时进行、固态甑桶蒸馏的酿酒法。以高粱、小麦、大米、玉米等为原料，在蒸煮、糖化、发酵、蒸馏等主要酿造过程中采用固态基质形态生产白酒。下列有关叙述正确的是（    ） A．参与发酵过程的多种微生物之间可能存在着竞争关系 B．固态发酵法的糖化过程中主要利用了微生物产生的蛋白酶 C．生产白酒的发酵过程一般要采取密封措施以防止杂菌的污染 D．参与发酵的菌种越单一，最终生产出来的白酒品质就会越高 12．(24-25高二下·安徽黄山·期末)谷氨酸棒状杆菌生长的最适 pH为7.0，通过以下代谢途径发酵生产L-谷氨酰胺。下列叙述错误的是（　　） A．发酵生产得到的L-谷氨酰胺是制味精的直接原料 B．发酵初期控制pH为7.0，后调为5.6，有利于提高L-谷氨酰胺产量 C．提高谷氨酸脱氢酶和谷氨酰胺合成酶的活性有利于提高L-谷氨酰胺产量 D．此发酵过程中需持续通入无菌空气并搅拌，以保证充足的氧气 13．(24-25高二下·江苏徐州邳州·期末)以淀粉或纤维素的水解液为原料，通过发酵获得了大量的微生物菌体，即单细胞蛋白。用酵母菌生产的单细胞蛋白可以作为食品添加剂。下列相关叙述正确的是（    ） A．纤维素水解液为微生物提供氮源 B．单细胞蛋白不含糖类、脂质和维生素 C．用酵母菌生产单细胞蛋白通常是在有氧条件下进行 D．可用蒸馏、萃取的方法分离提纯单细胞蛋白 14．(24-25高二下·辽宁丹东·期末)制醋、制酒是我国传统发酵技术。以下关于传统发酵技术与发酵工程的叙述正确的是（    ） A．在葡萄酒酿制的整个过程中需要严格保证无氧环境 B．乙醇既是果酒发酵的产物，也是果醋发酵的底物，又可以抑制杂菌繁殖 C．通过酵母菌发酵获得大量菌体，从中提取单细胞蛋白可作为动物饲料或食品添加剂 D．啤酒生产的后发酵阶段是在密闭和酵母菌生长的最适温度下获得澄清、成熟的啤酒 15．(24-25高二下·贵州遵义区县一中·期末)酸鲊肉是一道极具地方特色的传统发酵美食，以猪（鱼）肉为主料，通过米粉和微生物（以乳酸菌、酵母菌为主）装坛密封发酵形成独特酸香，口感软糯不腻。下列有关叙述正确的是（　　） A．发酵中酵母菌和乳酸菌呼吸会产生气体，密封发酵时应装至八成满 B．在发酵装坛之前添加一定量的食盐，可以起到调节口味和抑菌的作用 C．发酵到一定程度时，微生物产生的次生代谢物会促进微生物的生长 D．传统发酵一般是以天然的混合菌种进行固体发酵和液体发酵形式为主 16．(24-25高二下·四川眉山仁寿县·期末)下列关于发酵工程的说法，正确的是（    ） A．培养基和发酵设备都必须灭菌，因为发酵工程中所用的菌种均是单一菌种 B．选育菌种是发酵工程的前提条件，该环节很大程度上决定了生产发酵产品的成败 C．通过发酵工程可以从微生物细胞中提取单细胞蛋白 D．啤酒生产过程中，主发酵结束后即可过滤、调节、分装进行出售 17．(24-25高二下·福建福州福清·期末)L-谷氨酰胺应用广泛，可用于治疗多种疾病，也可以作为营养增补剂、调味增香剂。谷氨酸棒状杆菌生长的最适pH为7.0，通过以下代谢途径发酵生产L-谷氨酰胺。下列叙述不正确的是（　　） A．发酵结束后，可通过提取、分离和纯化措施来获得L-谷氨酰胺 B．敲除谷氨酸脱氢酶和谷氨酸合成酶基因有利于提高L-谷氨酰胺产量 C．发酵初期pH为7.0，后期调pH为5.6，有利于提高L-谷氨酰胺产量 D．取发酵样品接种，观察菌落特征，可判断发酵过程中是否发生杂菌污染 18．(24-25高二下·吉林松原宁江区吉林油田高级中学·期末)下图为啤酒生产的简要流程，有关叙述合理的有（　　）    A．制麦时需浸泡大麦，可提高种子中结合水与自由水的比例 B．过程②破碎有利于淀粉与α-淀粉酶充分接触，缩短糖化时间 C．过程③要始终保持厌氧环境，以便完成酒精的生成 D．打开包装后放置的啤酒变酸且产生表面菌膜，一般可从中分离得到醋酸菌 19．(24-25高二下·吉林吉林永吉实验高级中学等校·期末)如图所示为利用微生物分解纤维素以生产燃料乙醇的基本工艺流程。下列叙述正确的是（　　） A．环节①中培养的产酶微生物能产生纤维素酶 B．NaOH预处理是为了使②获得的酶液活性降低 C．环节④中接种微生物X的常见菌种是酵母菌 D．该工艺可能会解决资源短缺及环境污染的问题 20．(24-25高二下·河北沧州泊头文宇中学·期末)如图为利用发酵工程生产生物产品的流程图，有关叙述错误的是（　　） A．图中①②可分别表示基因工程育种和诱变育种 B．配制的培养基在进行③之前需严格灭菌，以防杂菌污染 C．③为发酵工程的中心环节，该过程需及时补充氧气并搅拌 D．若④为单细胞蛋白，可采取适当提取、分离和纯化措施获得 21．(24-25高二下·河北邢台·期末)淡豆豉是由黑豆加工后发酵而成的，制作流程如图所示。淡豆豉味淡无盐，入药效果佳，而食用豆豉中一般会加入多种调味品，方能吃起来更入味。下列相关说法正确的是（    ） A．食用豆豉中加入的盐、白酒和香辛料等调味品有杀菌的功效 B．交替蒸煮既能杀菌，也能使黑豆中的蛋白质更易被酶水解 C．淡豆豉发酵成功后，可以从发酵菌种细胞中提取单细胞蛋白 D．黑豆中的蛋白质会在霉菌作用下分解成多肽及氨基酸 22．(24-25高二下·江苏苏州·调研)随着哈尔滨旅游的火热，东北传统美食——大酱也走进了大家的视野。大酱以大豆为原料，主要利用米曲霉、酵母菌和乳酸菌等微生物发酵而来。图示传统大酱的制作工艺流程。下列相关叙述错误的有（    ） A．大酱富含小分子的肽和氨基酸，味道鲜美，易消化吸收，便于保存 B．煮熟利于后续发酵过程中酶发挥作用，同时也具有一定的杀菌作用 C．米曲霉、酵母菌和乳酸菌等微生物的胞内酶是大酱制作成功的关键 D．发酵过程中要随时检测微生物数量、产物浓度等以了解发酵的进程 23．(24-25高二下·江西上饶·期末)在微生物研究室内，科研人员为衡量一款新型免洗洗手凝胶的清洗效果，进行了凝胶洗手前后手部细菌含量检测，如图所示为凝胶洗手前的检测流程。以下关于该实验过程及相关知识的说法，不正确的是（　　） A．可依据菌落的形状、大小等特征初步判断菌种的类型 B．实验中可通过延长培养时间增加菌落数目来提高实验准确性 C．该实验过程中不需要设置空白对照平板，只需要洗手前后相互对照 D．制成10ml菌悬液，可能用到生理盐水等稀释液，目的是维持微生物细胞的正常形态 24．(24-25高二下·河北石家庄·期末)PHA是一种由微生物合成的天然可降解高分子材料。我国科学家构建了一株耐盐碱能力强的重组大肠杆菌，并利用其发酵生产PHA（甘蔗降解后的废弃液）为原料培养菌株H以合成PHA来替代传统塑料。相关叙述错误的是（　　） A．嗜盐单胞菌只能从自然界中筛选或通过基因工程育种获得 B．选育出菌种后，直接接种到发酵罐内进行发酵有利于快速获取发酵产物 C．发酵罐内发酵是发酵工程的中心环节，可适当提高盐浓度以防止杂菌污染 D．发酵结束后可采取提取、分离和纯化措施以获得PHA或单细胞蛋白 25．(24-25高二下·江苏镇江京口区江苏镇江第一中学·期末)生物技术与工程涉及许多探究与实践活动。下列相关叙述错误的是（    ） A．制作泡菜时，泡菜坛内长出的一层白膜是大量乳酸菌聚集在发酵液表面形成的 B．进行酵母菌纯培养时，若未接种的培养基表面有菌落生长，可能是培养基被污染 C．啤酒制作过程中，主发酵阶段酵母菌的大量繁殖，后发酵完成糖的分解和代谢 D．利用酵母菌发酵产生的单细胞蛋白属于分泌蛋白，可制成微生物饲料 26．(24-25高二下·湖北黄冈中学·期末)啤酒生产需经过发芽、焙烤、糖化、发酵等主要环节。糖化主要是将麦芽中的淀粉等有机物水解的过程。主要工艺流程如图所示，请回答下列问题： (1)焙烤的主要目的是________________。主发酵结束后，发酵液还不适合饮用，要在______的环境下储存一段时间进行后发酵。 (2)啤酒发酵时具有活力的酵母需达到一定数量，故在菌种活化的过程中，需定时取样，检测酵母的生长状况。某样品经2次10倍稀释，再加入等体积的台盼蓝溶液染色后，在25×16型（每个大方格有25个中方格，每个中方格有16个小方格，大方格体积为0.1mm3）血细胞计数板上计数，5个中方格共有200个酵母细胞，其中呈蓝色的酵母细胞数为80个。则该样品中活酵母细胞的密度为______个/mL。 (3)改变蛋白酶基因碱基序列，可减少发酵液中蛋白质的水解，有助于增强啤酒泡沫的稳定性，从而改善啤酒的品质。以下是某科研小组的实验： ①已知编码酵母菌蛋白酶A的PEP4基因转录的非模板链序列如下： 编码该酶的mRNA的起始密码子对应PEP4基因的碱基序列位于图中__（填“左”或“右”）端。 ②Cas9蛋白可在人工合成的RNA序列（sgRNA）引导下，在选定位点切断相应的DNA链（如图），在DNA自我连接的修复过程中产生突变。DNA序列中含NGG（N为任意碱基）的位点具有较高的编辑效率。 上述PEP4序列虚线框中共有________处可作为Cas9的优选剪切位点。Cas9的剪切位点在其NGG识别位点的_______（填“5”或“3”）侧。 ③野生型酵母可以水解酪蛋白，从而在菌落周围形成透明圈。将Cas9蛋白gRNA等处理的酵母菌接种在_______的固体培养基以初步筛选PEP4基因突变体，经培养后________的菌落符合生产要求。 27．(24-25高二下·湖南娄底部分普通高中·期末)科研人员从变质豆浆中分离出腐败菌，并研究乳酸链球菌素对腐败菌的抑制效果，以为豆浆保质提供依据。请结合研究过程回答下列问题： (1)将2种市售豆浆A、B和自制豆浆在无菌操作台上分别装入已灭菌的250mL三角瓶中，密封、37℃条件下，放置7d后，豆浆变质。取变质的豆浆在无菌条件下接种到细菌培养基上，一段时间后，统计各培养基上菌落种类和数量，结果如表： 细菌序列 菌落特征 菌落直径/mm 菌落数/个 豆浆A 豆浆B 自制豆浆 S1 表面有白色绒毛，圆形边缘不规则 5 5 3 7 S2 白色，表面无绒毛，有白色液滴 1-2 18 11 24 S3 白色，表面无绒毛，如同黄色液斑 20-30 11 7 15 从3个样品中各取1mL变质豆浆，用_______进行适度稀释后，取0.1mL样品液滴加到细菌培养基表面，用_________（此工具常使用前采用_______法进行灭菌）使之分布均匀。表中统计的菌落数比往往比活菌的实际数目_________，这是因为__________。细菌培养基通常利用_______法进行灭菌； (2)区分菌落种类的依据是__________。统计菌落时要每隔24h观察统计一次，直到各类菌落数目稳定，以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的种类和数目。 (3)以自制的新鲜豆浆为材料，经相应处理后，在37℃下放置35d后，统计豆浆中腐败菌数量，结果如图。 乳酸链球菌素是一种多肽。 为有效防止豆浆腐败，在生产中乳酸链球菌素的添加量应控制在_________mg·kg-1左右；结果表明，最不能耐受乳酸链球菌素的细菌是_______（填序号）。 28．(24-25高二下·山西运城·期末)生活中常用的塑料袋，其主要成分是聚乙烯，不溶于水，被腐蚀会形成微塑料。为了减少微塑料的产生，科学家从啮噬米袋的蜡虫肠道内分离出能降解聚乙烯的芽孢杆菌YP1。回答下列问题。 (1)将蜡虫肠道液进行培养时，要用以聚乙烯作为______的培养基，原因是______。 (2)实验中所用到的培养皿、试管和培养基均需要进行灭菌处理。其中不能使用干热灭菌法灭菌的是______，原因是______(答出两点即可)。 (3)除降解塑料的微生物菌株的分离提纯应用外，开发新的塑料替代品也是解决“白色污染”的重要途径。羟基脂肪酸酯(PHA)是一种重要的可降解材料，它具有类似于合成塑料的理化特性。中国科学家构建了一株嗜盐单胞菌H，以糖蜜或餐厨垃圾为原料在实际发酵工程中生产了PHA。发酵工程的中心环节是______，发酵结束之后，采取适当的提取、分离和______措施获得PHA。 29．(24-25高二下·甘肃平凉第一中学·期末)在闽东地区，利用红釉（酒曲）酿酒，进而酿制籼醋，是传统的发酵技术。工厂化的啤酒生产，要依赖现代发酵工程。下图是传统制醋和啤酒工厂化生产的工艺流程图。酒曲含有霉菌、酵母菌、乳酸菌；醋醅含有醋酸菌；糖化即淀粉水解过程。请回答下列问题： (1)制醋过程中，加入酒曲后要拌曲，即使用一定器具搅拌糯米饭和酒曲的混合物，其目的是___________。 (2)酒精发酵结束后加入醋醅，进行醋酸发酵，需要改变的环境条件是___________。 (3)啤酒生产过程中，菌种的选育非常关键。性状优良的菌种，除了可以从自然界中筛选出来，还可以通过___________获得。 (4)传统酒曲的制作过程中，受原料、微生物等因素的影响，酒曲稳定性较差。在现代工业生产中，常用发酵工程来生产果酒果醋，发酵工程的中心环节是___________，在发酵过程中，需随时检测培养液中的___________等，以了解发酵进程。 30．(24-25高二下·江苏东台·期末)啤酒工业化生产要通过发酵工程来实现，请回答下列问题： (1)啤酒是以大麦为主要原料经酵母菌发酵制成的，啤酒的工业化生产的原理是______。 (2)啤酒工业化生产过程如图1所示，若用_______溶液处理大麦种子，无需发芽就可以产生α-淀粉酶，图中会使α-淀粉酶失活的过程是______。发酵过程中酵母菌的繁殖、酒精的大量生成分别发生在______、______阶段。用于接种的酵母菌可来自______（填序号：①自然界中筛选而来②诱变育种获得③基因工程育种获得），经过______后再加入发酵罐中。    (3)图2所示发酵罐，冷却水进入口和排出口分别是______（填图中序号）。3为搅拌叶轮，在啤酒发酵过程中的作用是______。    (4)啤酒发酵时具有活力的酵母需达到一定的数量，故在菌种活化的过程中，需定时取样，检测酵母的生长状况。若某次样品经2次10倍稀释后，经台盼蓝染色（体积不计），在25×16型血细胞计数板（规格为1mm×1mm×0.1mm）上计数______色细胞，5个中格中的细胞数为244个，该样品中活酵母细胞的密度为______个/mL。 31．(24-25高二下·四川广安·期末)柠檬酸作为食品添加剂，具有调节酸味、抗氧化护色、防腐抑菌等作用。工业上主要是通过黑曲霉发酵生产。黑曲霉是一种丝状真菌，食品工业以红薯粉为原料经黑曲霉发酵获得柠檬酸，如图为生产柠檬酸的简要流程图，回答下列问题： (1)为了获得黑曲霉菌种的纯培养物，在配制培养基时，要将各种成分熔化装瓶后进行________灭菌。图甲中将黑曲霉菌种接种到培养基A的方式为________，其具体的操作过程如图乙所示，其中操作正确的是________（填序号）。 (2)已知配制的培养基C中成分有蛋白胨、葡萄糖、氯化钠、磷酸二氢钾、水等，其中蛋白胨可提供________（至少答出两点）。 (3)从自然界中筛选分离出来的黑曲菌种用于生产柠檬酸产量较低，要获得高产柠檬酸的优良菌种，可以采用诱变育种或________育种。在发酵装置中搅拌器的作用是________（答出两点）。 (4)在工业上生产柠檬酸过程中，通常以一定的速度不断添加新的培养基，同时又以同样的速度放出旧的培养基，可大大提高生产效率。从微生物培养的角度分析，其目的在于________。在培养基C中完成发酵后还要采取________措施来获取柠檬酸产品。 32．(24-25高二下·福建泉州鲤城区福建泉州第七中学·期末)藏猪在恶劣环境中形成了优良特性，该特性与其肠道中特殊的微生物菌群有关。研究人员以藏猪盲肠内容物作为菌种来源，分离得到若干单菌落，再采用牛津杯法从上述菌种中筛选出一株抵抗金黄色葡萄球菌和大肠杆菌活性最强的细菌。经鉴定，该菌株为枯草芽孢杆菌，并命名为TS。 (1)从藏猪盲肠内容物分离得到单菌落的过程，可采用______溶解盲肠内容物制成菌液，进而采用______法将菌液接种于固体培养基表面。该实验需在______（填“有氧”“无氧”或“有氧无氧均可”）环境下操作才能获得单菌落。 (2)牛津杯法是实验室常用的抑菌实验之一，先将牛津杯（圆形小管）竖直立在已经凝固的不含营养物质的琼脂凝胶平板（下层板）上，再向牛津杯周围倒入混有______作为指示菌的培养基（上层板），待培养基完全凝固后用镊子将牛津杯取出，用移液器向牛津杯制造的小孔中分别加入待测菌发酵液和对照液，如图是利用牛津杯法筛选出TS时的操作处理，孔A、B、C、D中应加入的物质______，每次用移液器吸取不同试剂前，需要_________。培养一段时间后，测量小孔周围抑菌圈的大小，可反映出待测菌抑菌活性的大小。预期实验结果为：_________。 (3)可利用发酵工程大规模生产TS产生的抑菌活性物质，_____是发酵工程的中心环节。在该过程中，要随时检测培养液中的微生物数量、______等，以了解发酵进程。并且往往以一定的速度不断添加新的原料，同时又以同样的速度放出旧的原料，目的是_____。 33．(24-25高二下·河北衡水桃城区衡水第二中学·期末)甜瓣子是豆瓣酱的重要成分之一。用蚕豆瓣和米曲霉制成豆瓣曲，再向曲中加入一定量的盐水制成酱醅，经发酵即可获得甜瓣子。某研究团队对发酵阶段传统工艺（盐度15%，温度37℃，发酵30天）进行改良，提升了甜瓣子风味。两种工艺的结果比较如图所示。回答下列问题：      (1)蚕豆瓣能为米曲霉的生长提供_____（填“碳源”“氮源”或“碳源和氮源”），将蚕豆瓣和米曲霉混合，相当于微生物培养中的_____。盐水的作用有_____（答出2点）。 (2)发酵过程中滋生的细菌往往会破坏甜瓣子的风味。细菌和米曲霉在细胞结构上最主要的区别是_____，该过程中米曲霉和细菌之间因争夺营养物质、空间等而具有_____的种间关系。 (3)新工艺建立了分段发酵模式，即前期盐度6%、温度12℃，中期盐度6%、温度37℃，后期盐度15%、温度37℃。前期较低温度可保持较高的_____总数，中后期温度升高则增强了_____的活性从而增加了氨基酸态氮的含量。据图分析，工艺改良后，甜瓣子风味得以提升与最终的_____有关。 34．(24-25高二下·广东东莞·期末)东莞作为“中国荔枝之乡”，拥有悠久的荔枝种植历史。某生物科技公司利用当地盛产的糯米糍荔枝，开发出具有岭南特色的荔枝果酒。以下为该公司荔枝果酒发酵生产的简化工艺流程。 荔枝鲜果→清洗去核→打浆榨汁→果汁调配（加蔗糖+果胶酶）→灭菌→接种酵母→主发酵→固液分离→后发酵→陈酿→过滤装瓶 请回答下列问题： (1)从呼吸作用类型看，酵母菌属于__________型微生物。 (2)相较于普通酿酒酵母，从东莞本地荔枝果皮中筛选的野生菌株具有__________的优势。果汁调配时添加蔗糖的主要目的是__________。 (3)大部分糖的分解和代谢产物的生成在__________（填流程环节）完成。生产中发现发酵液表面出现白色膜状物，排查发现装置有漏气现象，发酵液pH值下降，推测可能被__________（填“乳酸菌”或“醋酸菌”）污染。 (4)为提高荔枝果酒的产量和品质，可采取的措施有__________（答出2点即可）。 试卷第1页，共3页 3 / 3 学科网（北京）股份有限公司 学科网（北京）股份有限公司 学科网（北京）股份有限公司 $ 专题01 发酵工程 4大高频考点概览 考点01 传统发酵技术的应用 考点02微生物的基本培养技术 考点03 微生物的选择培养与计数 考点04 发酵工程及其应用 地 城 考点01 传统发酵技术的应用 1．(24-25高二下·河南天一大联考·期末)某同学利用新鲜葡萄进行果酒、果醋的制作，在制作过程中记录了不同阶段的相关操作及现象。下表是不同操作阶段的操作内容及现象，下列有关叙述错误的是（　　） 操作阶段 操作内容 现象 果酒制作初期 将葡萄汁装入发酵瓶，留有约1/3的空间，封闭瓶口 瓶中有少量气泡产生 果酒制作中期 持续封闭瓶口 瓶中产生大量气泡 果酒制作后期 继续封闭瓶口 气泡产生速度减慢至几乎无气泡 果醋制作阶段 打开瓶口，发酵瓶通入无菌空气，升高温度 发酵液逐渐变酸，有明显醋香味 A．果酒制作初期瓶中有少量气泡产生，主要与酵母菌的有氧呼吸有关 B．果酒制作中期瓶中产生的大量气泡主要与酵母菌的无氧呼吸有关 C．果酒制作后期瓶中几乎无气泡产生，是因为代谢废物积累导致酵母菌全部死亡 D．果醋制作阶段发酵液变酸且有明显醋香味，是醋酸菌将酒精转化为乙酸的结果 【答案】C 【详解】A、果酒制作初期，发酵瓶中留有1/3空间，氧气较充足，酵母菌主要进行有氧呼吸以快速增殖，同时产生CO₂形成少量气泡，A正确； B、果酒制作中期，氧气逐渐耗尽，酵母菌转为无氧呼吸为主，无氧呼吸产生大量CO₂，导致气泡大量产生，B正确； C、果酒制作后期瓶中几乎无气泡产生，是因为发酵液中的葡萄糖等营养物质被消耗得差不多了，而不是代谢废物积累导致酵母菌全部死亡，C错误； D、果醋制作阶段，醋酸菌在氧气充足、温度适宜时，将乙醇氧化为乙酸，导致发酵液变酸并散发醋香味，D正确； 故选C。 2．(24-25高二下·吉林长春长春汽车经济技术开发区第三中学·期末)广东有丰富的水果资源用于制作果酒果醋，以下有关利用岭南佳果荔枝制作果酒果醋的叙述正确的是（    ） A．酵母菌无氧呼吸产生酒精是导致后期发酵液pH下降的主因 B．制作果酒时，果酒变酸的原因是密封不严导致乳酸菌大量繁殖 C．制作果醋时，醋酸菌可在氧气充足时将酒精转化为醋酸 D．主发酵阶段完成酵母菌繁殖，后发酵阶段完成糖的分解和代谢 【答案】C 【分析】果酒的制作，选用的菌种为兼性厌氧型的酵母菌，酵母菌无氧呼吸产生的二氧化碳溶解在水中生成碳酸，会导致发酵液pH下降。果醋的制作原理：醋酸菌是好氧菌，当氧气、糖源都充足时能将糖分解成醋酸；当缺少糖源时则将乙醇转化为乙醛，再将乙醛变为醋酸。 【详解】A、酵母菌无氧呼吸产生酒精的同时会生成CO₂，CO₂溶于水形成碳酸导致pH下降，而非酒精直接引起，A错误； B、果酒变酸是因醋酸菌在有氧条件下将乙醇转化为乙酸，而非乳酸菌（乳酸菌进行无氧呼吸产乳酸），B错误； C、醋酸菌为需氧型细菌，在氧气充足且糖源不足时，可将乙醇转化为乙酸，C正确； D、主发酵阶段酵母菌既大量繁殖，也通过无氧呼吸分解糖产生酒精；后发酵阶段主要进行剩余糖的缓慢分解，D错误。 故选C。 3．(24-25高二下·陕西渭南临渭区·期末)中国的许多传统美食制作过程蕴含了传统发酵技术。下列叙述正确的是（    ） A．腐乳制作过程中，是以毛霉为单一菌种的固体发酵及半固体发酵为主 B．米酒制作过程中，将容器密封可促进酵母菌增殖 C．酵母菌、毛霉分别是果酒、腐乳制作过程中起主要作用的微生物 D．果醋制作过程中，所需的发酵温度低于果酒制作时的温度 【答案】C 【分析】醋酸菌是好氧性细菌，当缺少糖源时和有氧条件下，可将乙醇（酒精）氧化成醋酸；当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸；醋酸菌生长的最佳温度是在30℃～35℃。 【详解】A、腐乳制作过程中，毛霉是主要菌种，但还有其他微生物参与（如酵母菌、曲霉），并非单一菌种，且为固体发酵，无半固体发酵，A错误； B、米酒制作初期需有氧环境促进酵母菌增殖，密封后转为无氧产酒精，密封会抑制酵母菌增殖，B错误； C、酵母菌在无氧条件下发酵产生酒精（果酒），毛霉分泌蛋白酶分解豆腐中的蛋白质（腐乳），C正确； D、果醋制作需醋酸菌，其最适温度为30～35℃，高于酵母菌发酵的18～25℃，D错误。 故选C。 4．(24-25高二下·福建泉州鲤城区福建泉州第七中学·期末)传统发酵技术是人们在日常生活过程中对微生物的应用。下列相关叙述正确的是（    ） A．传统发酵是利用不同原核生物产生不同代谢物的原理，以固体发酵及半固体发酵为主，生产人们需要的产物 B．腐乳的鲜味来源于根霉等微生物分泌的蛋白酶对豆腐中蛋白质分解为的大分子肽和氨基酸 C．欲将果酒制备成果醋，制备时的温度无需改变但需通入充足的氧气，制作过程中果醋pH逐渐降低，果酒制作过程中pH情况相反 D．酸奶、泡菜发酵所需的菌种都是乳酸菌，酸奶发酵时，溶液pH值逐渐降低，泡菜装坛时不能装满容器，防止发酵液等溢出，防止杂菌污染 【答案】D 【详解】A、传统发酵中使用的微生物包括原核生物（如乳酸菌）和真核生物（如酵母菌），并非均为原核生物，A错误； B、腐乳的鲜味来源于毛霉等微生物分泌的蛋白酶将蛋白质分解为小分子肽和氨基酸，B错误； C、果酒制备果醋时，需将温度从18-25℃（酵母菌最适温度）调整为30-35℃（醋酸菌最适温度），且果酒和果醋制作过程中均因产生酸性物质导致pH逐渐降低，C错误； D、酸奶和泡菜均依赖乳酸菌的无氧发酵，发酵过程中乳酸积累使pH下降；泡菜装坛时需留一定空间，防止发酵初期产气导致液体溢出，避免杂菌污染，D正确。 故选D。 5．(24-25高二下·湖南娄底部分普通高中·期末)下列关于乳酸菌的说法正确的是（　　） A．乳酸菌的遗传物质是DNA B．乳酸菌无氧呼吸产生乳酸和二氧化碳 C．乳酸菌与醋酸菌的代谢类型相同 D．在泡菜制作过程中，起主要作用的是醋酸菌 【答案】A 【详解】A、乳酸菌属于原核生物，其遗传物质是DNA。所有细胞生物的遗传物质均为DNA，A正确； B、乳酸菌无氧呼吸的产物仅为乳酸，不产生二氧化碳，B错误； C、乳酸菌为异养厌氧型，醋酸菌为异养好氧型，两者代谢类型不同，C错误； D、泡菜制作依赖乳酸菌的乳酸发酵，而醋酸菌需在有氧条件下代谢，是酿醋所需的菌种，D错误。 故选A。 6．(24-25高二下·吉林长春外五县·期末)我国利用不同微生物发酵制作食品的历史悠久。下列关于微生物发酵的叙述，正确的是（　　） A．馒头中气孔是酵母菌产生的CO2受热膨胀形成的 B．果酒、果醋和腐乳制作中，利用的都是真核生物 C．果酒、果醋发酵过程中pH均为先升高后明显下降 D．利用乳酸菌制作酸奶时，先通气培养，后密封发酵 【答案】A 【详解】A、酵母菌在面团中进行有氧呼吸和无氧呼吸均能产生CO2，蒸制过程中CO2受热膨胀形成馒头的气孔，A正确； B、果酒制作利用酵母菌（真核生物），果醋制作利用醋酸菌（原核生物），腐乳制作利用毛霉（真核生物），因此并非均为真核生物，B错误； C、果酒发酵初期酵母菌进行有氧呼吸产生CO2，溶于水生成碳酸，导致pH下降，无氧呼吸阶段继续产生CO2和酒精，pH进一步降低，果醋发酵中醋酸菌将乙醇转化为醋酸，pH持续下降，因此果酒和果醋的pH均未出现“先升高”，C错误； D、乳酸菌为严格厌氧菌，制作酸奶需全程密封，无需先通气培养，D错误。 故选A。 7．(24-25高二下·贵州安顺·期末)安顺金刺梨富含SOD、叶酸、维生素C和必需氨基酸。为更好地利用它，某兴趣小组通过传统发酵工艺将其制成刺梨酒和刺梨醋，制作流程如图所示。下列叙述正确的是（　　）    A．过程③刺梨汁要装满发酵瓶，以营造无氧环境利于发酵 B．发酵过程中所有材料、器具需要严格灭菌，以免杂菌污染 C．过程③发酵温度高于过程④，时间短于过程④ D．过程③和过程④所利用的主要微生物代谢类型不同 【答案】D 【详解】A、过程③酿酒的过程中会产生CO2，刺梨汁不能装满发酵瓶，A错误； B、发酵过程中所有材料都需要进行严格的消毒处理，以免杂菌污染，B错误； C、过程③酵母菌进行刺梨酒发酵的过程中温度应控制在18～30℃，过程④醋酸菌进行醋酸发酵将温度控制在30℃～35℃，过程③发酵温度低于过程④，C错误； D、过程③利用的酵母菌的代谢类型是兼性厌氧型，过程④利用的醋酸菌的代谢类型是异养需氧型，D正确。 故选D。 8．(24-25高二下·甘肃武威·期末)腐乳、泡菜等发酵食品具有开胃解腻、助消化的作用。下列说法正确的是（　　） A．腐乳制作过程中起主要作用的是曲霉 B．制作腐乳和制作泡菜的主要微生物代谢类型相同 C．泡菜制作时，添加“陈泡菜水”属于传统的发酵技术 D．泡菜发酵过程中，乳酸菌可分解蛋白质和果胶，使泡菜变软 【答案】C 【详解】A、腐乳制作的主要菌种是毛霉，其分泌的蛋白酶能将豆腐中的蛋白质分解为小分子物质；曲霉可能参与但并非主要作用，A错误； B、腐乳制作的主要微生物毛霉为需氧型，而泡菜制作的乳酸菌为厌氧型，两者代谢类型不同，B错误； C、“陈泡菜水”含有大量乳酸菌，直接接种可缩短发酵时间，属于传统发酵技术中利用天然菌种的方法，C正确； D、乳酸菌的代谢产物为乳酸，分解蛋白质的酶由毛霉等微生物分泌，D错误。 故选C。 9．(24-25高二下·贵州六盘水·期末)醪糟又叫酒酿，口味清甜，酿制工艺简单。醪糟的制作过程是将糯米浸泡一夜后煮熟，冷却至30℃，拌上“酒曲”置于洁净的器皿中，在米团中间挖一个洞，密封发酵3天左右。发酵过程中先产水，后产酒。下列叙述正确的是（    ） A．为节约时间，将糯米煮熟后应直接加入“酒曲”并拌匀 B．将发酵温度从30℃提高到50℃后可明显缩短发酵时长 C．发酵过程中先产水的原因是酵母菌无氧呼吸产生了水 D．醪糟口味清甜的主要原因是糯米中淀粉可被酶水解为麦芽糖、葡萄糖 【答案】D 【详解】A、若糯米未冷却直接加入酒曲，高温会杀死菌种，导致发酵失败，A错误； B、酿酒酵母的最适生长温度为28℃，50℃会使其酶失活，抑制甚至杀死菌种，无法缩短发酵时间，B错误； C、发酵初期残留的氧气使酵母菌进行有氧呼吸产生水，后期无氧呼吸产生酒精，产水并非无氧呼吸的结果，C错误； D、酒曲中的淀粉酶将糯米淀粉水解为麦芽糖、葡萄糖等还原糖，赋予醪糟清甜口感，D正确。 故选D。 10．(24-25高二下·甘肃白银部分学校·期末)风味独特、营养价值高的低度百香果玫瑰茄复合果酒的酿造工艺流程：新鲜百香果→挑选、清洗→切块、打浆→酶解→混合（加玫瑰茄水提物）→调整糖度→巴氏杀菌→固定化酵母接种→酒精发酵→澄清→过滤→杀菌→百香果玫瑰茄复合果酒。下列叙述错误的是（　　） A．相比于传统发酵，现代工业发酵技术的灭菌更为严格 B．接种的酵母菌在有氧呼吸时可大量繁殖 C．酿酒过程中，发酵液冒出的“气泡”可能是酵母菌的无氧呼吸造成的 D．百香果玫瑰茄复合果酒的制作过程中，培养液的pH升高 【答案】D 【详解】A、现代工业发酵通常采用严格灭菌技术（如巴氏杀菌）以避免杂菌污染，而传统发酵多依赖自然菌种，灭菌要求较低，A正确； B、酵母菌为兼性厌氧菌，有氧条件下进行有氧呼吸并大量繁殖，B正确； C、酒精发酵阶段为无氧环境，酵母菌无氧呼吸产生CO2形成气泡，C正确； D、酵母菌在酒精发酵中分解葡萄糖生成CO2和酒精，CO2与H2O反应生成碳酸，会导致培养液pH下降，D错误。 故选D。 11．(24-25高二下·吉林长春朝阳区长春外国语学校·期末)“葡萄美酿令人痴，一醉方休谁晓知。何日与君同畅饮，凝眸了却苦相思。”表达了诗人对葡萄美酒的喜爱以及对与友人共饮的美好期待。下列有关葡萄酒制作的叙述，正确的是（    ） A．酵母菌的繁殖和代谢物的生成分别在主发酵和后发酵阶段完成 B．发酵时加入适量的葡萄糖可能会提高葡萄酒的酒精浓度 C．变酸葡萄酒表面产生的菌膜与产膜酵母的大量繁殖有关 D．酒精发酵过程中维持30-35℃有利于酵母菌的无氧呼吸 【答案】B 【分析】果酒的制作离不开酵母菌，酵母菌是兼性厌氧微生物，在有氧条件下，酵母菌进行有氧呼吸，大量繁殖，把糖分解成二氧化碳和水；在无氧条件下，酵母菌能进行酒精发酵。故果酒的制作原理是酵母菌无氧呼吸产生酒精，酵母菌最适宜生长繁殖的温度范围是18～25℃；反应中是否有酒精的产生，可用酸性重铬酸钾来检验，该物质与酒精反应呈现灰绿色。 【详解】A、酵母菌的繁殖主要在初期有氧条件下进行，而代谢产物（酒精）的生成主要在无氧的主发酵阶段完成。主发酵阶段并非仅完成繁殖，后发酵阶段主要进行风味物质的形成，而非代谢产物的生成，A错误； B、葡萄糖是酵母菌无氧呼吸的底物，适量增加可提高酒精产量。若浓度过高会抑制酵母菌活性，但题干强调“适量”，B正确； C、变酸的葡萄酒是因醋酸菌（而非产膜酵母）在有氧条件下将乙醇氧化为乙酸，其表面菌膜由醋酸菌形成。产膜酵母并非导致酸败的原因，C错误； D、酵母菌无氧呼吸的适宜温度为18-25℃，30-35℃是醋酸菌的适宜温度。维持此温度会抑制酵母菌活性，不利于酒精发酵，D错误。 故选B。 12．(24-25高二下·陕西西安西咸新区·期末)在用传统发酵技术制作发酵食品的过程中，控制发酵条件至关重要。下列相关叙述正确的是（　　） A．酒精发酵过程中密封发酵罐有利于酵母菌大量繁殖 B．由酒精发酵转为醋酸发酵时，要及时通气并适当提高发酵温度 C．泡菜制作时，用盐水淹没全部菜料并盖好坛盖，主要是为了防止杂菌污染 D．发酵前需要对发酵的原料及发酵容器进行严格灭菌，防止杂菌污染 【答案】B 【详解】A、酒精发酵过程中，酵母菌在无氧条件下进行无氧呼吸产生酒精，而大量繁殖需要的是有氧条件，因此密封发酵罐不利于酵母菌大量繁殖，A错误； B、醋酸菌是好氧菌，且最适生长温度为30~35℃，而酒精发酵（酵母菌）的适宜温度为18~30℃。因此，由酒精发酵转为醋酸发酵时，需及时通气以满足醋酸菌的有氧呼吸需求，并适当提高温度至其最适范围，B正确； C、制作泡菜时，盐水淹没菜料的主要目的是创造无氧环境，促进乳酸菌的无氧呼吸，同时盐的高渗透压抑制杂菌生长，C错误； D、传统发酵技术依赖原料和容器中天然存在的菌种，若对原料和容器严格灭菌会杀死原有菌种，导致发酵失败，D错误。 故选B。 13．(24-25高二下·安徽合肥第一中学·期末)中国传统白酒多以泥窖为发酵基础，素有“千年老窖万年糟”“以窖养糟，以糟养泥”之说。多年反复利用的老窖池内壁窖泥中含有大量与酿酒相关的微生物。下列叙述正确的是（    ） A．传统白酒的酿造防止杂菌污染以及对产品质量的控制，应做好菌种的纯化 B．窖池内各种微生物形成了相对稳定的体系，不利于酿酒酵母的生长，应适当消毒灭菌处理 C．从窖泥中分离的酿酒酵母扩大培养时，需在CO2或N2环境中进行 D．从谷物原料发酵形成的酒糟中，可分离出产淀粉酶的微生物 【答案】D 【详解】A、传统白酒酿造依赖自然环境中的多种微生物共生，无需严格灭菌或纯化菌种，A错误； B、窖池内微生物的稳定体系是长期自然选择的结果，消毒灭菌会破坏菌群平衡，B错误； C、酿酒酵母扩大培养需在有氧条件下增殖，CO₂或N₂环境（无氧）会抑制其繁殖，C错误； D、谷物发酵初期需淀粉酶分解淀粉，产淀粉酶的微生物可能残留在酒糟中，可分离得到，D正确。 故选D。 14．(24-25高二下·辽宁县域重点高中·期末)米酒和米醋都是我国传统饮食文化的重要组成部分，可通过传统发酵技术制作米酒和米醋。下列说法正确的是（　　） A．制作米酒和米醋时利用的都是单一菌种 B．米醋必须要在米酒发酵的基础上进行制作 C．制作米醋时发酵温度比制作米酒时要高 D．用米酒制作米醋时，需要在米酒中接种醋酸菌 【答案】C 【详解】A、制作米酒时，初期需霉菌分解淀粉为葡萄糖，之后酵母菌进行酒精发酵，并非单一菌种；米醋制作以醋酸菌为主，但传统发酵可能含其他微生物，A错误； B、米醋制作不一定依赖米酒。若糖源充足，醋酸菌可直接将糖转化为醋酸，无需酒精阶段，B错误； C、酵母菌酒精发酵适宜温度为18-25℃，醋酸菌需30-35℃，故米醋发酵温度更高，C正确； D、传统发酵依赖环境中天然醋酸菌，无需额外接种，D错误。 故选C。 15．(24-25高二下·福建福州福清·期末)蓝莓果实中含有丰富的营养成分。如图是以鲜蓝莓为原料发酵制作蓝莓酒和蓝莓醋的过程简图。下列叙述错误的是（　　） A．过程⑤中蓝莓酒可作为醋酸菌的能源和碳源 B．参与果酒和果醋发酵的微生物都是异养型生物 C．过程③，糖在醋酸菌的作用下先转化为乙醇再发酵为乙酸 D．在过程④时，榨出的蓝莓汁不需要经过灭菌就能密闭发酵 【答案】C 【详解】A、在没有糖源的情况下，醋酸菌可以把酒精转化为乙醛，再将乙醛转化为醋酸，即酒精可作为醋酸菌的碳源和能源，A正确； B、参与果酒和果醋发酵的微生物分别为酵母菌、醋酸菌，都是异养型生物，B正确； C、过程③，醋酸菌在氧气、糖源充足条件下直接将糖分解为醋酸，C错误； D、过程④果酒制作的菌种来源于蓝莓皮上野生的酵母菌，所以蓝莓汁不需经过灭菌就能密闭发酵，D正确。 故选C。 16．(24-25高二下·山西运城·期末)自古以来，传统发酵的食品一直都是人们舌尖上的美食，人们利用不同的微生物具有产生不同代谢物的能力，生产出人们所需要的多种食品。下列关于传统发酵技术的应用，正确的有几项（　　） ①制作果酒时，需要将温度控制在18—30℃，并且定时将瓶盖拧松 ②制作果醋时，可以往果酒中加入醋酸菌，醋酸菌能将乙醇转化为乙酸和CO₂ ③制作腐乳时，豆腐中的蛋白质被分解成小分子的肽和氨基酸，因此易于保存 ④制作泡菜时，蔬菜若不新鲜或食盐含量过高均容易使亚硝酸盐含量升高 ⑤制作酸奶时，在牛奶中加入一定量抗生素再利用乳酸菌发酵可以防止杂菌污染 A．一项 B．两项 C．三项 D．四项 【答案】A 【详解】①果酒制作中，酵母菌的最适温度为18-25℃，题目中18-30℃范围较宽但包含其活性范围，且需定时拧松瓶盖释放CO₂防止爆裂，①正确； ②醋酸菌将乙醇转化为乙酸的反应式为，不产生CO₂，②错误； ③腐乳的保存主要依赖高浓度盐和酒精抑制杂菌，而非蛋白质分解产物，③错误； ④蔬菜不新鲜会导致亚硝酸盐含量升高，但食盐过高会抑制菌群活动，反而不易积累亚硝酸盐，④错误； ⑤抗生素会杀死乳酸菌，导致发酵失败，⑤错误。 综上①正确，A正确，BCD错误。 故选A。 17．(24-25高二下·湖北襄阳·期末)制醋、制酒、制作泡菜和腐乳都是我国传统发酵技术。下列叙述正确的是（　　） A．家庭制果酒时，发酵前需对原料和发酵用具等进行消毒或灭菌 B．当缺少O2和糖源时，醋酸菌能将乙醇转化为乙醛进而转化为醋酸 C．制作腐乳时，主要是利用毛霉将豆腐中的蛋白质分解成小分子肽和氨基酸 D．制作泡菜时，向坛盖边沿的水槽中注满水主要目的是创造无菌环境 【答案】C 【详解】A、家庭制果酒时，不需要对原料进行消毒或灭菌，A错误； B、醋酸菌为需氧型细菌，当氧气充足但缺乏糖源时，才能将乙醇转化为乙醛再转化为醋酸，B错误； C、毛霉分泌的蛋白酶能将豆腐中的蛋白质分解为小分子肽和氨基酸，这是腐乳风味形成的关键，C正确； D、泡菜坛边沿注水的目的是隔绝空气，维持坛内无氧环境以利于乳酸菌发酵，并非创造完全无菌环境，D错误。 故选C。 18．(24-25高二下·辽宁抚顺六校协作体·期末)中国的许多传统美食制作过程蕴含了生物发酵技术。下列叙述错误的是（    ） A．乳腐制作过程中，毛霉分泌的蛋白酶能分解蛋白质 B．在葡萄酒酿制的整个过程中需要先密封后通气 C．泡菜制作过程中，乳酸菌将葡萄糖分解生成乳酸 D．家庭制作果酒、果醋和腐乳通常都不是单一菌种发酵 【答案】B 【分析】制作果酒的酵母菌的代谢类型是异养兼性厌氧型，制作酸奶的乳酸菌属于厌氧菌，只能在无氧条件下繁殖，制作果醋的醋酸菌的代谢类型是异养需养型；腐乳是用豆腐发酵制成，多种微生物参与发酵，其中起主要作用的是毛霉。毛霉是一种丝状真菌具发达的白色菌丝。毛霉等微生物产生的以蛋白酶为主各种酶能将豆腐中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸；脂肪酶可将脂肪水解为甘油和脂肪酸。 【详解】A、乳腐制作中，毛霉产生的蛋白酶分解豆腐中的蛋白质为小分子物质，A正确； B、葡萄酒酿制时，酵母菌先在有氧条件下增殖，后在无氧条件下发酵产酒精，整个过程需先不严格密封（允许少量氧气进入）后严格密封，而非“先密封后通气”，B错误； C、乳酸菌在无氧条件下将葡萄糖转化为乳酸，C正确； D、家庭制作条件有限，无法严格灭菌，果酒、果醋和腐乳的发酵常存在多种微生物共同作用，D正确。 故选B。 19．(24-25高二下·湖北黄冈·期末)黄冈传统小曲白酒以本地稻米为原料，利用小曲中的根霉、酵母菌进行糖化和发酵。其酿造流程主要为“蒸煮→撒曲糖化→装坛发酵”。下列叙述错误的是（    ） A．装坛后密封的目的是创造无氧环境进行酒精发酵 B．可用酸性重铬酸钾溶液检测发酵产物中有无酒精 C．营养成分、氧气含量等非密度制约因素影响酵母菌的种群数量变化 D．撒曲糖化阶段，根霉分泌的淀粉酶和麦芽糖酶将淀粉水解为葡萄糖 【答案】C 【详解】A、装坛后密封可隔绝空气，确保酵母菌在无氧条件下进行酒精发酵，A正确； B、酒精在酸性条件下与重铬酸钾反应呈灰绿色，该检测方法正确，B正确； C、密度制约因素指与种群密度相关的因素（如资源、空间等），氧气和营养属于此类，C错误； D、根霉分泌的淀粉酶将淀粉水解为麦芽糖，麦芽糖酶进一步分解麦芽糖为葡萄糖，D正确。 故选C。 20．(24-25高二下·四川南充·期末)传统发酵食品的制作需要各种各样的微生物。下列叙述正确的是（    ） A．制作酱油和腐乳主要利用了黑曲霉产生的蛋白酶 B．醋酸菌在无氧条件下产生乙酸可用于制作果醋 C．乳酸菌在无氧条件下产生乳酸可用于制作泡菜 D．制作馒头主要利用酵母菌在有氧条件下产生CO2 【答案】C 【分析】1、参与果酒制作的微生物是酵母菌，其新陈代谢类型为异养兼性厌氧型。2、参与果醋制作的微生物是醋酸菌，其新陈代谢类型是异养需氧型。果醋制作的原理：当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸。当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。3、参与腐乳制作的微生物主要是毛霉，其新陈代谢类型是异养需氧型。腐乳制作的原理：毛霉等微生物产生的蛋白酶能将豆腐中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸；脂肪酶可将脂肪分解成甘油和脂肪酸。4、泡菜的制作原理：泡菜的制作离不开乳酸菌。在无氧条件下，乳酸菌将葡萄糖分解成乳酸。 【详解】A、制作酱油主要利用米曲霉产生的酶，而腐乳制作主要依赖毛霉分泌的蛋白酶和脂肪酶，并非黑曲霉，A错误； B、醋酸菌属于好氧菌，其产乙酸的过程需在有氧条件下进行，无氧条件下无法代谢生成乙酸，B错误； C、乳酸菌为厌氧菌，在无氧条件下通过无氧呼吸将葡萄糖转化为乳酸，这正是泡菜制作的原理，C正确； D、制作馒头时，酵母菌初期在有氧条件下快速增殖，后期在无氧条件下通过无氧呼吸产生CO₂，使面团膨胀。题干中“有氧条件下”表述片面，D错误。 故选C。 21．(24-25高二下·湖南长沙宁乡·期末)桑葚是黄河故道沿线的特色水果之一，可以用来制作桑葚酒和桑葚醋，制作流程如图所示。下列说法正确的是（　　） A．发酵过程中，甲罐发酵液pH逐渐上升，可通过测量pH变化及时了解发酵情况 B．若发酵过程中甲罐中的发酵液表面出现气泡，无法说明发酵液已被杂菌污染 C．乙罐中醋酸菌与氧气、桑葚酒充分接触有利于提高发酵效率 D．若甲罐中的桑葚酒全部加入乙罐制成桑葚醋，则乙罐需要定期排出CO2 【答案】BC 【分析】在利用酵母菌发酵时最好是先通入足够的无菌空气在有氧环境下一段时间使其繁殖，再隔绝氧气进行发酵；酒精发酵的温度是在18～30℃，pH最好是弱酸性。醋酸菌为好氧型细菌，当缺少糖源时和有氧条件下，可将乙醇（酒精）氧化成醋酸；当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸；醋酸菌生长的温度是在30～35℃。 【详解】A、甲罐为酒精发酵，产生的CO2会使pH下降，A错误； B、甲罐为酒精发酵，产生的CO2会在发酵液表面出现气泡，无法说明发酵液已经被杂菌污染，B正确； C、醋酸菌为需氧菌，乙罐中的醋酸菌与氧气、桑葚酒充分接触有利于提高发酵效率，C正确； D、醋酸菌利用乙醇生产醋酸的过程中产物是醋酸和水，不产生二氧化碳，D错误。 故选BC。 22．(24-25高二下·山东威海·期末)下列关于传统发酵技术及其应用的说法错误的是（    ） A．制作泡菜时亚硝酸盐的含量随着发酵时间的延长而不断升高 B．制作果酒时需将新鲜水果用清水冲洗后灭菌 C．发酵坛密封不严使酒变酸是因为乳酸含量增加 D．制作腐乳利用了毛霉等产生的蛋白酶 【答案】ABC 【详解】A、制作泡菜时亚硝酸盐的含量随着发酵时间的延长而不断升高，随后下降，A错误； B、制作果酒时酵母菌来自水果表面的野生酵母菌，因此需将新鲜水果用清水冲洗即可，而不需要灭菌，B错误； C、发酵坛密封不严使酒变酸是因为醋酸菌活动导致醋酸含量增加，C错误； D、腐乳制作主要利用了毛霉产生的蛋白酶、脂肪酶等胞外酶，蛋白酶能将豆腐中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸，脂肪酶可将脂肪水解为甘油和脂肪酸，D正确。 故选ABC。 23．(24-25高二下·江西新余·期末)发酵能让食物改头换面，拥有全新的模样和味道。利用不同微生物的发酵作用制作食品历史悠久，遍布民间，称为传统发酵技术。利用传统发酵技术制作的果酒、果醋、腐乳、泡菜极大地丰富了人们的饮食。下列关于传统发酵技术的叙述正确的是（    ） A．传统发酵无需严格灭菌，参与果酒和泡菜发酵的酶都在细胞内发挥作用 B．从代谢类型分析，参与果酒和腐乳发酵的主要微生物都是异养需氧型 C．泡菜需在无氧条件下制得，制作过程中不需要定期排气 D．腐乳鲜美的味道主要依赖于毛霉分解蛋白质产生的小分子肽和氨基酸 【答案】ACD 【详解】A、传统发酵利用自然存在的微生物，无需严格灭菌。果酒发酵中酵母菌无氧呼吸产生酒精，相关酶在细胞内；泡菜发酵中乳酸菌无氧呼吸产生乳酸，酶也在细胞内发挥作用，A正确； B、果酒发酵的酵母菌是异养兼性厌氧型；腐乳发酵的毛霉是异养需氧型，B错误； C、泡菜利用乳酸菌无氧呼吸，制作时需无氧条件，无需定期排气，C正确； D、腐乳中毛霉等微生物产生蛋白酶，将蛋白质分解为小分子肽和氨基酸，赋予腐乳鲜美味道，D正确； 故选ACD。 24．(24-25高二下·吉林部分学校·期末)如图是果酒和果醋制作的实验流程及相应的发酵装置。下列相关叙述错误的是（　　） A．制作葡萄酒时应先冲洗干净葡萄后再去除枝梗 B．制作果酒时，关闭充气口，酒精发酵后期CO2产生量逐渐增多 C．利用果酒进行果醋发酵时，应打开充气口，通入无菌空气，并适当提高温度 D．果酒、果醋制作过程中培养液的pH 均升高 【答案】BD 【详解】A、先除去枝梗再清洗容易造成果肉被杂菌污染，故制作葡萄酒时应先冲洗干净葡萄后再去除枝梗果，A正确； B、制作果酒时，充气口可以在刚开始发酵时打开，通入空气，以便于酵母菌的大量繁殖，发酵后期关闭；果酒发酵中，酵母菌进行无氧呼吸而产生酒精和CO2，随着酒精发酵，无氧呼吸速度减慢，酒精发酵后期CO2产生量逐渐减少，B错误； C、果醋发酵的菌种是醋酸菌，醋酸菌是好氧菌，并且其发酵温度高于酒精发酵，利用果酒进行果醋发酵时，应打开排气口通入无菌空气，并适当提高温度，C正确； D、果酒制作过程中，酵母菌会产生CO2，使pH降低；果醋制作过程中，醋酸菌会产生醋酸，使pH降低，D错误。 故选BD。 25．(24-25高二下·山东济南·期末)某酒厂以高粱为主料，辅以小麦、麸皮（干麦粒外层的表皮），再加入大曲、麸曲及生香酵母进行发酵。大曲和麸曲中所含的微生物主要有好氧型微生物霉菌、兼性厌氧型微生物酵母菌，还有乳酸菌、醋酸菌等。酿造工艺流程如下图所示。下列叙述错误的是（    ） A．蒸煮后摊晾，降低原料温度后才可撒曲，以免杀死菌种 B．若酒的表层长出白膜，可能是酒坛密封不严导致乳酸菌大量繁殖所致 C．撒曲糖化是指利用酵母菌分泌的淀粉酶催化淀粉分解为葡萄糖，葡萄糖为发酵的底物 D．微生物中的蛋白酶可将原料中的蛋白质分解为小分子多肽和氨基酸，增加酒的风味 【答案】BC 【分析】果酒的制作离不开酵母菌，酵母菌是兼性厌氧微生物，在有氧条件下，酵母菌进行有氧呼吸，大量繁殖，把糖分解成二氧化碳和水；在无氧条件下，酵母菌能进行酒精发酵。 【详解】A、大曲和麸曲中所含的微生物需要适宜的温度才能存活，蒸煮后摊晾，降低原料温度后才可撒曲，以免高温会杀死菌种，A正确； B、若酒的表层出现白膜，可能原因是酒坛密封不严导致好氧杂菌如醋酸菌污染。而乳酸菌是厌氧菌，酒坛密封不严会有空气流入，乳酸菌不能大量繁殖，B错误； C、大曲中的根霉和毛霉可分泌淀粉酶和糖化酶，将淀粉水解为葡萄糖，为酵母菌发酵提供底物，酵母菌不能分泌淀粉酶，C错误； D、毛霉、曲霉等微生物产生的蛋白酶能将豆腐中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸，增加酒的风味，D正确。 故选BC。 26．(24-25高二下·山东滨州·期末)科研人员利用现代科技，设计了能实时监测坛内传统泡菜发酵过程中关键参数的智能泡菜坛。下列说法正确的是（    ）    A．需设计排气阀，以定期排放乳酸菌发酵产生的CO2 B．需设计能智能监测温度、pH、亚硝酸盐含量的功能元件 C．菜坛内加入盐水浓度过高会因发酵菌失水过多而影响发酵效果 D．该泡菜坛制作传统泡菜过程中只有乳酸菌一种发酵菌 【答案】BC 【分析】泡菜制作是应用了乳酸菌的发酵原理，提供的新鲜蔬菜是它的培养基，乳酸菌是厌氧微生物，在缺氧的环境条件下发酵可产生大量乳酸，能抑制其他厌氧菌的生存；在有氧情况下，自身受抑制，不能进行乳酸发酵，使需氧菌繁殖而变质。乳酸菌生长繁殖需要消耗有机物，发酵过程中会产生更多种类的有机物。 【详解】A、乳酸菌是厌氧菌，其只能进行无氧呼吸，且其无氧呼吸只能产生乳酸，不会产生CO2，A错误； B、亚硝酸盐在适宜的pH、温度和一定的微生物作用等特定条件下，会转变成致癌物亚硝胺，因此智能泡菜坛需含智能监测温度、pH、亚硝酸盐含量的功能元件，B正确； C、乳酸菌的生存需要适宜的渗透压等环境，加入盐水浓度过高会使乳酸菌失水死亡，从而导致发酵效果降低，C正确； D、泡菜发酵过程中，不仅只有乳酸菌一种微生物在发挥作用，整个过程中也有其他微生物的存在，如：泡菜发酵初期，由于有装坛时带入的残余空气，此时乳酸发酵并不活跃，主要是菜中带入的其他微生物在行发酵作用，如大肠杆菌、酵母菌等，D错误。 故选BC。 27．(24-25高二下·甘肃武威·期末)蓝莓酸甜宜人、细腻多汁，被誉作“水果皇后”，由蓝莓酿制的蓝莓酒和蓝莓醋被称为“液体黄金”和“口服化妆品”等。如图是以鲜蓝莓为原料天然发酵制作蓝莓酒和蓝莓醋的过程简图，回答下列问题： (1)清洗蓝莓时应注意不能反复冲洗，以防止______。蓝莓酒所需微生物的代谢类型是______（从同化作用和异化作用两个方面考虑）型。 (2)蓝莓醋可以在蓝莓酒的基础上进行发酵，此过程主要发挥作用的微生物是________，其与酵母菌在结构上的主要差异是______，它进行醋酸发酵过程的化学反应式为______，此过程的适宜温度为_______℃。 (3)兴趣小组三位同学设计的酿蓝莓酒的装置如下图所示，其中最合理的是______瓶。发酵过程中右侧排气管连接长而弯曲胶管的目的是________ 注：各发酵瓶的左侧管为充气管，右侧管为排气管 (4)某同学尝试用罐头瓶制作蓝莓酒，在培养过程中，每隔12h左右将瓶盖拧松一次，此后再拧紧，这样做的目的，一是________，二是避免O2进入和杂菌污染。 【答案】(1) 菌种流失 异养、兼性厌氧 (2) 醋酸菌 无核膜包被的细胞核 C2H5OH+O2CH3COOH+H2O+能量 30~35 (3) 乙 在排出气体的同时可以防止杂菌污染 (4)放出发酵产生的CO2 【分析】当氧气、糖源都充足时，醋酸菌能通过复杂的化学反应将糖分解成乙酸；当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇转化为乙醛，再将乙醛转化为乙酸。在酸性条件下，重铬酸钾溶液与酒精反应呈现灰绿色。 【详解】（1）蓝莓酒制作过程中利用的是附着在蓝莓皮上的野生酵母菌，为防止酵母菌流失，不能对蓝莓进行反复冲洗；酵母菌的代谢类型为异养、兼性厌氧型。 （2）醋酸菌以酒精为原料进行果醋发酵，蓝莓醋可以在蓝莓酒的基础上进行发酵，此过程主要发挥作用的微生物是醋酸菌。醋酸菌是原核生物，酵母菌是真核生物，醋酸菌与酵母菌在结构上的主要差异是醋酸菌没有核膜包被的细胞核。醋酸菌进行醋酸发酵过程的化学反应式为C2H5OH+O2CH3COOH+H2O+能量。多数醋酸菌的适宜生长温度为30~35℃。 （3）果酒发酵过程是无氧条件，且出气口不能没入发酵液，发酵液不能装太满，所以图中乙最合理。发酵过程中右侧排气管连接长而弯曲胶管的目的是在排出气体的同时，可以防止杂菌污染。 （4）酵母菌发酵时产生CO2，如果不及时放气，发酵瓶可能会爆炸，因此在培养过程中，每隔12h左右将瓶盖拧松一次，这样做的目的，一是放出发酵产生的CO2，二是避免O2进入和杂菌污染。 28．(24-25高二下·四川眉山东坡区冠城实验学校·期末)中央电视台热播的美食纪录片《舌尖上的中国》受到广大观众的热捧，其中介绍的腐乳是我国独特的传统发酵食品，几百年来深受老百姓的喜爱。腐乳是用豆腐发酵制成，民间老法生产腐乳为自然发酵，现代腐乳生产多采用优良的毛霉菌种进行发酵。现代化生产流程如图。请回答下列问题：    (1)豆腐为毛霉的生长提供了水、无机盐、__________和__________四大类基本营养物质。含水量过高的豆腐不适宜制作腐乳，原因是__________。 (2)民间制作腐乳时___________(填“需要”或“不需要”)灭菌。 (3)当豆腐上长出毛霉后，对豆腐要进行__________。腐乳制作的后期要加入酒和多种香辛料配制的卤汤，其中酒的含量一般控制在12%左右，原因是___________。 (4)腐乳因加入的辅料不同而产生不同的风味，如红方因加入了___________而味厚醇香；______因不加辅料，用豆腐本身渗出的水加盐腌制而成，因而绵软油滑，异臭奇香。 【答案】(1) 碳源 氮源 豆腐不容易成形 (2)不需要 (3) 加盐腌制 酒精浓度过高则腐乳的成熟时间会延长，酒精浓度过低，不足以抑制 微生物的生长，可能导致豆腐腐败 (4) 红曲 青方 【分析】腐乳的制作原理主要是利用微生物发酵。参与腐乳制作的微生物主要有毛霉、酵母菌、曲霉、青霉等，其中毛霉是最主要的菌种。毛霉是一种丝状真菌，生长迅速，具有发达的白色菌丝，包括直立菌丝和匍匐菌丝。毛霉能分泌蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶等多种酶类，这些酶类能够将豆腐中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸，将脂肪分解为甘油和脂肪酸，使淀粉糖化。通过发酵，豆腐中的营养成分被分解转化，形成了腐乳特有的风味和质地。 【详解】（1） 豆腐为毛霉的生长提供了水、无机盐、碳源和氮源四大类基本营养物质。含水量过高的豆腐因不容易成形，所以不适宜制作腐乳。 （2）民间制作腐乳时，淀粉块上生长的毛霉来自空气中的毛霉孢子，不需要灭菌。 （3）当豆腐上长出毛霉后，对豆腐要进行加盐腌制。腐乳制作的后期要加入酒和多种香辛料配制的卤汤，其中酒的含量一般控制在12%左右，原因是：酒精浓度过高则腐乳的成熟时间会延长，酒精浓度过低，不足以抑制微生物的生长，可能导致豆腐腐败。 （4）腐乳因加入的辅料不同而产生不同的风味，如红方因加入了红曲而味厚醇香；青方因不加辅料，用豆腐本身渗出的水加盐腌制而成，因而绵软油滑，异臭奇香。 29．(24-25高二下·江苏泰州·期末)果醋富含多种有机酸、维生素等物质，具有较好的抗氧化等功效。研究者以柑橘为原料，选用沪酿101醋酸菌、AS1.41醋酸菌和许氏醋酸菌三种醋酸菌，通过一次发酵法和二次发酵法酿造出六种柑橘果醋，以此探究醋酸菌种类和发酵方式对柑橘果醋总酸含量的影响。两种发酵方式流程如下。请回答下列问题： 一次发酵：柑橘→去皮榨汁→过滤→杀菌→醋酸发酵→杀菌→陈酿→柑橘果醋 二次发酵：柑橘→去皮榨汁→过滤→调糖→酒精发酵→醋酸发酵→杀菌→陈酿→柑橘果醋 (1)一次发酵中醋酸菌在________条件下可通过复杂化学反应将糖分解成乙酸；二次发酵中醋酸菌在________条件下可直接将乙醇转化为乙醛，再将乙醛氧化为乙酸。 (2)酒精发酵的适宜温度一般为________℃，该阶段酵母菌进行________呼吸，属于________反应（选填“放能”或“吸能”）。制好果酒后进行醋酸发酵，除需要加入醋酸菌外还需要________。在结构上，酵母菌不同于醋酸菌的主要区别是________。 (3)研究者以柑橘为材料进行实验，分组如下表，结果如下图。 醋酸菌名称 发酵方式 样品编号 沪酿1.01 一次发酵 沪1 二次发酵 沪2 AS1.41 一次发酵 AS1 二次发酵 AS2 许氏醋酸菌 一次发 酵许氏1 二次发酵 许氏2 由图可知，三个品种的最终总酸含量________，醋酸菌种类和发酵方式对发酵产酸的影响分别表现为________。 【答案】(1) 氧气、糖源充足 缺少糖源、氧气充足 (2) 18～30℃ 无氧 放能 通入无菌空气，适当提高发酵温度 有以核膜为界限的细胞核 (3) 无显著差异 沪酿1.01发酵产酸速度最快；二次发酵速度比一次发酵速度快 【分析】果醋的制作，使用的微生物是醋酸菌。醋酸菌是好氧细菌，当氧气、糖源都充足时能将糖分解成醋酸；当缺少糖源时则将乙醇转化为乙醛，再将乙醛变为醋酸。多数醋酸菌的最适生长温度为30～35℃，因此在果醋的制作过程中，需将培养温度控制在30～35℃范围内。 【详解】（1）醋酸菌是一种好氧菌，在氧气充足的条件下才能进行旺盛的生命活动。一次发酵中，醋酸菌在氧气、糖源充足条件下，通过复杂化学反应将糖分解成乙酸；二次发酵中，醋酸菌在缺少糖源、氧气充足条件下，可直接将乙醇转化为乙醛，再将乙醛氧化为乙酸。 （2）酵母菌是兼性厌氧微生物，在无氧条件下进行酒精发酵，酒精发酵时一般将温度控制在18～30℃，该阶段酵母菌进行无氧呼吸，将糖分解为酒精和CO2并释放少量的能量，属于放能反应。果醋的制作，需将发酵温度控制在30～35℃范围内，使用的微生物是醋酸菌，醋酸菌是一种好氧菌，属于原核生物。制好果酒后进行醋酸发酵，除需要加入醋酸菌外还需要通入无菌空气，适当提高发酵温度。在结构上，酵母菌是真核生物，不同于醋酸菌的主要区别是有以核膜为界限的细胞核。 （3）由图可知，三个品种的最终总酸含量无显著差异，醋酸菌种类和发酵方式对发酵产酸的影响分别表现为：沪酿1.01发酵产酸速度最快（答案合理即给分）；二次发酵速度比一次发酵速度快。 30．(24-25高二下·内蒙古乌兰察布集宁一中·期末)泡菜是利用一定浓度盐水泡制蔬菜，经发酵制成的食品。其民间制作工艺如图。分析回答下列问题。 (1)制作泡菜的盐水中有时要加入一定量的“陈泡菜液”，目的是__________。 (2)泡菜制作过程中往往要向泡菜水中加入花椒等香辛料，目的是___________。 (3)泡菜制作过程中要严格控制亚硝酸盐含量，影响其含量的主要因素有食盐用量、_________和_________。 (4)图甲和图乙分别是泡菜发酵过程中优势菌数和主要代谢底物浓度变化曲线。 ①由图甲可以看出，泡菜发酵初期各菌种的种间关系主要是_______，由图乙可以看出，发酵过程中微生物主要消耗的营养物质是_______________。 ②结合细胞代谢类型及图甲曲线，推测发酵6天后醋酸菌和酵母菌迅速消失的主要原因分别是_____和__________。 【答案】(1)增加发酵菌的数量 (2)调节泡菜的风味，防腐杀菌 (3) 腌制的时间 温度 (4) 竞争 蔗糖(或蔗糖和葡萄糖) 醋酸菌为好氧细菌，6天后发酵装置中氧气耗尽 酵母菌耐酸性弱，不能适应发酵液的pH 【分析】泡菜制作的核心是利用乳酸菌在无氧环境下发酵，通过控制食盐用量、温度、时间等条件，抑制杂菌生长和亚硝酸盐积累，同时借助香辛料调节风味，最终实现安全、美味的发酵食品生产。 【详解】（1）制作泡菜的盐水中有时要加入一定量的“陈泡菜液”，原因是“陈泡菜液”中含有数量较多的泡菜发酵菌(乳酸菌)，加入陈泡菜液的目的相当于是接种，增加发酵菌的数量。 （2）向泡菜水中加入花椒等香辛料的目的是调节泡菜的风味，同时具有防腐杀菌作用。 （3）泡菜制作过程中要严格控制亚硝酸盐含量，因为亚硝酸盐摄入过多会危害健康；而影响亚硝酸盐含量的主要因素有食盐用量、发酵温度和发酵时间，因此在泡菜制作过程中要控制这些条件。 （4）①分析图甲、图乙曲线可知，泡菜发酵过程中各菌种为争夺资源和生存空间而发生竞争，发酵过程中微生物主要消耗的营养物质是蔗糖，其次是葡萄糖； ②醋酸菌为好氧细菌，而泡菜发酵过程中氧气会耗尽，形成无氧环境，醋酸菌死亡；发酵过程中pH降低，对耐酸性强的乳酸菌影响较小，而对耐酸性弱的酵母菌影响较大，酵母菌死亡。 31．(24-25高二下·陕西咸阳·期末)青梅果肉营养丰富，成熟的青梅果实易腐烂，不易运输保存，对其进行青梅果酒酿造，既提高了青梅资源利用率，又可提高产品附加值。图1为制作青梅果酒的实验装置图；由于青梅果肉含糖量低，往往在装青梅果浆中加入白砂糖后再进行酿制；图2为在青梅果浆中添加白砂糖对酒精度和果酒感官评分的影响(感官评分越高，果酒的品质越高)。请回答下列问题： (1)在装青梅果浆时，通常留有1/3的空间，这是为了___________。青梅果酒发酵过程中，图1装置中的充气口应处于___________状态，待发酵液内不断有气泡产生后，需每隔12小时拧松排气口，放出___________。 (2)发酵液一般不会出现杂菌污染，这是因为___________(至少答出2点)等条件抑制了杂菌的生长。 (3)从图2可看出，青梅果酒酿制时果浆中初始糖浓度为___________%时效果最佳，在此浓度之后，果酒酒精度随初始糖浓度的增加而下降，原因是___________。 (4)在品鉴发酵是否完成时，可取少量发酵液，除了用闻成品酒等感官判断方法外，还可用___________溶液检测有无酒精的产生，若有酒精产生，现象是___________。 【答案】(1) 让酵母菌进行有氧呼吸，快速繁殖 关闭 二氧化碳或CO2 (2)无氧、呈酸性、含酒精 (3) 20 糖浓度过高导致培养基的渗透压过高，使酵母菌因失水而数量减少 (4) 酸性重铬酸钾 溶液变为灰绿色 【分析】果酒制作所需微生物是酵母菌，代谢类型为异养兼性厌氧型；果醋制作所需微生物是醋酸菌，代谢类型为异养需氧型；泡菜制作需要的微生物是乳酸菌，其代谢类型为异养厌氧型；腐乳制作需要的微生物是毛霉等，其代谢类型为异养需氧型。 【详解】（1）果酒发酵初期，酵母菌需要有氧呼吸大量繁殖，预留 1/3 空间可为酵母菌提供氧气，促进其增殖，同时防止发酵后期产生的气体（如 CO₂）过多导致液体溢出。青梅果酒酿造利用酵母菌的无氧呼吸，因此发酵过程中充气口应关闭，避免氧气进入抑制无氧呼吸。酵母菌无氧呼吸产生酒精和二氧化碳（CO₂），发酵时会产生大量 CO₂，需定期拧松排气口放出二氧化碳，防止装置内气压过高。 （2）发酵液能抑制杂菌生长的关键条件包括：无氧环境：酵母菌无氧呼吸主导，多数杂菌为需氧菌，无法在无氧条件下生存。酒精积累：发酵产生的酒精对杂菌有抑制或杀灭作用。酸性环境：酵母菌呼吸产生的 CO₂使发酵液 pH 降低，形成酸性环境，不利于多数杂菌生长。 （3）从图2曲线可看出，当初始糖浓度为20%时，酒精度及果酒感官评分均最高，效果最佳。糖类是主要的能源物质，在果汁中加入糖可为酵母菌的生长繁殖提供能源物质，另外，糖是发酵的原料，加入的糖可作为酒精发酵的原料，所以在初始糖度低于20%时果酒酒精度随初始糖度的增加而增加，但在此浓度之后，果酒酒精度随初始糖浓度的增加而下降，其原因可能是糖浓度过高导致培养基的渗透压过高，使酵母菌因失水而数量减少。 （4）酒精的检测常用酸性重铬酸钾溶液。原理是酒精可使橙色的酸性重铬酸钾溶液变为灰绿色。因此，若发酵液中存在酒精，加入该溶液后会观察到颜色由橙变灰绿。 32．(24-25高二下·北京石景山区·期末)醋酸菌是果醋发酵过程中产生醋酸及其风味衍生物的重要微生物，筛选优良的醋酸菌对提高青梅果醋品质十分重要。 (1)酿制青梅果醋时，第一步是糖化作用，即将青梅中的淀粉分解；第二步是酒精发酵，即利用_______（填微生物名称）将糖转化成乙醇；第三步是醋酸发酵，即利用醋酸菌在_______条件下，将乙醇转化成醋酸，酿得青梅果醋。 (2)菌株筛选过程中涉及的几种培养基见下表。菌株筛选的流程如下：研究者取腐烂一周左右的青梅若干，加入装有培养基a的摇瓶中培养一段时间，利用_______法接种于培养基b上，选取_______且生长良好的单菌落。将初筛的醋酸菌接种于培养基c中，最终选择乙醇转化率、发酵液总酸含量均最高的菌株J作为后续的实验菌株。 培养基 培养基主要成分 a 葡萄糖、酵母粉、3%乙醇 b 葡萄糖、酵母粉、无水碳酸钙、琼脂、3%乙醇 c 葡萄糖、酵母粉、6%乙醇 注：醋酸能与碳酸钙反应生成可溶于水的醋酸钙 (3)研究者对菌株J进行诱变处理，选取突变菌株J1，与两种原有的菌株A、H分别接种于青梅果酒中进行发酵，结果如图1。该实验的目的是_______。 (4)研究人员对菌株J1的发酵条件进行深入研究，部分结果见图2。由图2结果可知，随着初始乙醇含量的增加，总酸含量先增加、后下降。请分析造成这种现象的原因。__________________。 【答案】(1) 酵母菌 有氧 (2) 稀释涂布平板 透明圈直径与菌落直径比值大 (3)评估菌株J1的醋酸发酵效果 (4)初始乙醇含量增加时，菌株J1可利用的底物增加，总酸含量增加；当初始乙醇含量较高时，会抑制菌株J1的生长和代谢，总酸含量降低。 【分析】微生物常见的接种的方法①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落;②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。 【详解】（1）酒精发酵的发酵菌种是酵母菌，其在无氧条件下，将糖分转化为乙醇。醋酸发酵的发酵菌种是醋酸菌，其在有氧条件下，可将乙醇转化乙醛，在转化成醋酸。 （2）由题意，接种后要比较各菌落形成透明圈的大小，平板划线法能分离菌株，但由于前几次划线菌落连片，不适宜比较菌落大小，应选用用稀释涂布平板将菌种接种于培养基b上，醋酸能与碳酸钙反应生成可溶于水的醋酸钙，从而形成透明圈，透明圈直径与菌落直径比值大，说明其产生的醋酸多，在平板上选取透明圈直径与菌落直径比值大且生长良好的单菌落作为目的菌株。 （3）研究者对比突变菌株J1，与两种原有的菌株A、H接种后发酵效果，目的是评估菌株J1的醋酸发酵效果。 （4）初始乙醇含量增加时，菌株J1可利用的底物增殖，其进行醋酸发酵使总酸含量增加；当初始乙醇含量较高时，会抑制菌株J1的生长和代谢，导致总酸含量降低。 33．(24-25高二下·海南海口·期末)我国古代有“杜康造酒，其子造醋”的传说：酒圣杜康发明了酒，他的儿子黑塔将酿酒剩下的酒糟存放缸中浸泡二十一日后，形成了香气扑鼻的醋。其工艺流程如下：①蒸料→②拌曲→③酒精发酵→④醋酸发酵→⑤熏醅→⑥淋醋→⑦陈酿 (1)①中蒸料的作用除了使淀粉糊化和挥发掉杂味外，还有_______________，②中拌曲时加入的菌种主要是__________________。 (2)在酒精发酵阶段需添加酵母菌，在操作过程中，发酵罐先通气，后密闭。这样操作的目的是____________________________________。 (3)③发酵产生酒精后，若利用酿酒缸继续进行醋酸发酵，需要改变的发酵条件有____。在④发酵过程中需要搅拌翻动发酵物，其目的是____________________。 (4)陈醋酿制打破例如家庭小作坊生产模式实现了工厂化大规模发酵，性状优良的菌种除了从自然界中筛选外，还有的获取途径是____________________。某兴趣小组同学以酒精作为底物进行醋酸发酵，为了探究初始乙醇含量对于发酵产生的总酸含量的影响，进行了多组实验，结果如下图所示： 随着初始乙醇含量的增大，总酸含量先增加后下降，请分析原因：________________________。 【答案】(1) 除去杂菌 酵母菌 (2)先通气促进酵母菌增殖，后无氧条件酵母菌进行酒精发酵 (3) 升高温度、增加氧气含量 一是增大醋酸菌与发酵原料的接触；二是增加发酵罐内的氧气含量 (4) 基因工程和诱变育种 在一定范围内，初始乙醇含量增大有利于发酵，醋酸量增加；总酸量过高，又抑制了醋酸菌的生长和增殖，醋酸发酵减弱，总酸含量降低 【分析】1、参与果酒制作的微生物是酵母菌，其新陈代谢类型为异养兼性厌氧型。酵母菌在有氧条件下进行有氧呼吸产生大量的能量。 2、参与果醋制作的微生物是醋酸菌，其新陈代谢类型是异养需氧型。当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将糖直接分解成醋酸；当氧气充足、缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。 【详解】（1）①中蒸料的作用除了使淀粉糊化和挥发掉杂味外，还能起到除去杂菌的作用，因为高温可以杀死原料及设备中的杂菌，防止杂菌对发酵过程产生不良影响，②中拌料时加入的菌种主要是酵母菌，因为酵母菌在无氧条件下可以将葡萄糖发酵产生酒精，这是酿酒过程中的关键菌种。 （2）在酒精发酵时，先通气后密封，通气的目的是让酵母菌进行有氧呼吸，大量繁殖，增加酵母菌的数量，密封的目的是让酵母菌在无氧条件下进行酒精发酵，产生酒精。 （3）酒精发酵产生酒精后，要继续进行醋酸发酵，需要改变的发酵条件有升高温度（醋酸菌生长的适宜温度比酵母菌高）、通入氧气（醋酸菌是好氧菌）。在④醋酸发酵过程中需要按时翻动发酵物，其目的一是增大醋酸菌与发酵原料的接触；二是增加发酵罐内的氧气含量。 （4）性状优良的菌种除了从自然界中筛选外，还有的获取途径是诱变育种（通过物理、化学等因素诱导菌种发生基因突变，从而筛选出优良性状的菌种）、基因工程育种（将目的基因导入菌种中，定向改造菌种的遗传特性）等。随着初始乙醇含量的增大，醋酸含量先增加后下降，原因是在一定范围内，初始乙醇含量增大有利于发酵，促进醋酸的合成，醋酸量增加；总酸量过高，又抑制了醋酸菌的生长和增殖，醋酸发酵减弱，总酸含量降低。 地 城 考点02 微生物的基本培养技术 1．(24-25高二下·福建泉州鲤城区福建泉州第七中学·期末)某野生型细菌能通过图1途径合成色氨酸，从而在不含色氨酸的培养基上正常生长繁殖，而其突变株则不能。将突变株TrpB-、TrpC-、TrpE-（每种突变株仅图1中的某一步受阻）分别划线接种在图2培养基的I、Ⅱ、Ⅲ区域，培养短时间内三个区域均有少量细菌生长增殖，继续培养后发现I区域的两端和Ⅱ区域的一端的菌株继续生长增殖，而Ⅲ区域菌株不再生长。下列叙述正确的是（    ）    A．该培养基中含有少量色氨酸，酸碱度为弱酸性或中性 B．只有2种突变菌株能将积累的中间产物分泌到细胞外 C．TrpC-菌株继续生长增殖的一端为靠近Ⅲ区域的一端 D．TrpE-菌株不再生长是由于无法合成吲哚 【答案】C 【分析】培养基： （1）概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出的供其生长繁殖的营养基质。 （2）营养构成：各种培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求．例如，培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素，培养霉菌时需将培养基的pH调至酸性，培养细菌时需将pH调至中性或微碱性，培养厌氧微生物时则需要提供无氧的条件。 【详解】A、“培养短时间内三个区域均有少量细菌生长增殖”，推断培养基中存在少量色氨酸，培养细菌一般将pH调至中性或弱碱性，A错误； B、根据题干信息“继续培养后发现I区域的两端和Ⅱ区域的一端的菌株继续生长增殖”，说明培养基中3种突变菌株均能将积累的中间产物分泌到细胞外，使其他突变体得以生存，B错误； C、分析题干信息可知，突变株TrpB-，将分支酸转化为邻氨基苯甲酸受阻，但可将邻氨基苯甲酸转化为吲哚，并进一步转化为色氨酸；突变株TrpC-对应Ⅱ区域，将邻氨基苯甲酸转化为吲哚受阻，但可以将分支酸转化为邻氨基苯甲酸，也可以将吲哚转化为色氨酸；突变株TrpE-对应Ⅲ区域，将吲哚转化为色氨酸受阻，但可以将分支酸转化为邻氨基苯甲酸，并进一步转化为吲哚。Ⅰ区域的TrpB-划线上端与Ⅱ区域临近，可利用Ⅱ区域TrpC-合成的邻氨基苯甲酸进一步合成吲哚及色氨酸生长增殖；Ⅰ区域的TrpB-划线下端与Ⅲ区域临近，可利用Ⅲ区域TrpE-合成的吲哚进一步合成色氨酸生长增殖；Ⅱ区域的TrpC-划线上端自身不能合成吲哚，临近的Ⅰ区域TrpB-可利用Ⅱ区域合成的邻氨基苯甲酸合成吲哚并进一步合成色氨酸，无多余的吲哚反馈给Ⅱ区域上端，所以Ⅱ区域的TrpC-划线上端不生长；Ⅱ区域的TrpC-划线下端，可利用临近Ⅲ区域TrpE-合成的吲哚进一步合成色氨酸生长增殖；Ⅲ区域TrpE-由于不能将吲哚转化为色氨酸，所以Ⅲ区域两端不生长增殖，所以Ⅱ区域的TrpC-划线下端靠近Ⅲ区域，可利用临近Ⅲ区域TrpE-合成的吲哚进一步合成色氨酸生长增殖，C正确； D、根据C项分析，TrpE-菌株不再生长是由于缺乏催化吲哚合成色氨酸的酶，因此缺乏色氨酸，D错误。 故选C。 2．(24-25高二下·陕西西安南开高级中学·期末)灭菌、消毒、无菌操作是生物学实验中常见的操作。下列叙述错误的是（    ） A．牛奶适用于巴氏消毒法 B．在酒精灯的火焰附近进行划线接种 C．可用干热灭菌法对培养基灭菌 D．湿热灭菌可用于培养瓶灭菌 【答案】C 【详解】A、巴氏消毒法通过较低温度杀灭牛奶中的部分微生物，保留其营养，适用于牛奶消毒，A正确； B、酒精灯火焰附近为无菌区域，在此处划线接种可避免杂菌污染，B正确； C、培养基通常采用湿热灭菌（高压蒸汽灭菌），干热灭菌适用于耐高温且干燥的物品（如玻璃器皿），C错误； D、培养瓶（如玻璃材质）可耐受高温高压，湿热灭菌法适用于其灭菌，D正确。 故选C。 3．(24-25高二下·陕西渭南临渭区·期末)微生物培养和无菌操作是发酵工程的基础。以下说法错误的是（    ） A．消毒和灭菌的主要目的是防止杂菌污染以获取纯净微生物培养物 B．煮沸消毒只能杀死物体表面或内部的一部分微生物 C．配制培养基时，灭菌之后还需要加入物质调节pH D．固体培养基可用于分离、纯化菌种，液体培养基可用于菌种的扩大培养 【答案】C 【详解】A、消毒和灭菌均能减少或杀灭微生物，防止杂菌污染，确保培养物纯净，A正确； B、煮沸消毒属于物理消毒法，温度和时间有限，无法杀死所有微生物（如芽孢），B正确； C、培养基配制时，pH调节应在灭菌前完成，灭菌后调节会导致二次污染，C错误； D、固体培养基便于菌落形成以分离纯化菌种，液体培养基利于菌体与营养接触，适合扩大培养，D正确。 故选C。 4．(24-25高二下·湖北武汉武昌区·期末)微生物平板划线和培养的具体操作如图所示，下列操作错误的是（　　） ①灼烧接种环 ②冷却接种环，拔出试管棉塞 ③试管口通过火焰 ④接种环蘸取菌液 ⑤试管口通过火焰并塞上棉塞 ⑥接种环划线操作 ⑦接种环划线方法 ⑧平板正置培养 A．①②⑤⑧ B．②⑥⑦⑧ C．③④⑤⑥ D．③④⑦⑧ 【答案】B 【详解】①平板划线法中需对接种环进行灼烧灭菌，①正确； ②拔出棉塞后应握住棉塞上部，而不是完全握住棉塞，②错误； ③微生物平板划线和培养的过程中要保证始终没有杂菌的污染，试管口通过火焰进行灭菌，③正确； ④接种环蘸取菌液，在酒精灯旁操作，保持无菌环境，④正确； ⑤试管口通过火焰进行灭菌并塞上棉塞，⑤正确； ⑥划线时不能将培养皿的皿盖完全拿开，应只打开一条缝隙，⑥错误； ⑦划线时第5次的划线不能与第1次的划线相连，⑦错误； ⑧平板应倒置培养，⑧错误。 综上所述，①③④⑤正确，②⑥⑦⑧错误。 故选B。 5．(24-25高二下·山东东营·期末)肉桂链霉菌是生产莫能菌素的重要细菌，莫能菌素具有显著的抗球虫和抗肿瘤活性。在实验室对该菌进行纯培养的过程中，下列说法错误的是（　　） A．配制培养肉桂链霉菌的培养基要将pH调至酸性 B．培养基经高压蒸汽灭菌后冷却至50℃开始倒平板 C．超净工作台喷洒适量苯酚可增强紫外线消毒效果 D．平板划线获得肉桂链霉菌单菌落的过程就是纯培养 【答案】A 【详解】A、肉桂链霉菌属于放线菌，其培养基pH应调至中性或微碱性，A错误； B、培养基灭菌后需冷却至约50℃倒平板，避免高温破坏琼脂且便于操作，B正确； C、超净工作台主要通过紫外线灭菌，喷洒苯酚可增强紫外线消毒效果，C正确； D、平板划线法通过稀释菌种获得单菌落，符合纯培养的定义，D正确。 故选A。 6．(24-25高二下·贵州安顺·期末)枯草芽孢杆菌是一种常见的益生菌，广泛分布在土壤及腐败的有机物中。为获取该菌种并计数，以下操作正确的是（　　） A．接种时，可用平板划线法将高浓度菌液直接接种在平板培养基上 B．若采用稀释涂布平板法统计细菌数目，实验结果一般比实际值偏低 C．若空白对照组的平板上出现菌落，则计数时，应与实验组一起计算平均数 D．可采集含腐败有机物较多的土壤，稀释后涂布于选择培养基中进行扩大培养 【答案】B 【详解】A、平板划线法通过多次划线稀释菌液，最终得到单菌落，若直接接种高浓度菌液会导致菌落重叠，无法计数，A错误； B、稀释涂布平板法中，若多个细菌连在一起会形成单一菌落，导致统计结果低于实际活菌数，B正确； C、空白对照组若出现菌落，说明实验过程被污染，此时数据无效，需重新实验，而非计算平均数，C错误； D、扩大培养需用液体培养基，而选择培养基用于筛选特定菌种，直接涂布无法有效扩增菌种，D错误。 故选B。 7．(24-25高二下·江苏东台·期末)高压蒸汽灭菌法是一种常用的湿热灭菌法。下列不能用高压蒸汽灭菌法灭菌的是（　　） A．微量离心管 B．培养皿 C．微量移液器 D．培养基 【答案】C 【详解】A、微量离心管若为耐高温材质，可用高压蒸汽灭菌法灭菌，A不符合题意； B、培养皿通常为玻璃材质，可耐受高压蒸汽灭菌，B不符合题意； C、微量移液器含精密部件，高温高压会损坏其结构，必须用其他方式灭菌，C符合题意； D、培养基需灭菌后使用，高压蒸汽灭菌是常规方法，D不符合题意。 故选C。 8．(24-25高二下·海南直辖县级行政单位定安县部分学校·期末)某研究团队在实验室培养从雨林土壤中分离的微生物。请根据微生物培养的基本原理，判断以下叙述正确的是（　　） A．牛肉膏和蛋白胨来源于微生物 B．固体培养基中加入少量水也不能制成液体培养基 C．培养细菌时，一般需要将培养基调至酸性 D．培养基中的营养物质浓度越高，对微生物的生长越有利 【答案】B 【分析】培养基中一般含有的成分有：水、碳源、氮源、无机盐。 【详解】A、牛肉膏由牛肉加工得到，蛋白胨是蛋白质经酶解产生，来源于动植物而非微生物，A错误； B、固体培养基因含琼脂，加水无法溶解琼脂，无法转变为液体培养基，B正确； C、细菌适宜中性或弱碱性环境，酸性条件常用于培养真菌（如霉菌），C错误； D、营养浓度过高会导致微生物渗透失水，抑制生长，D错误。 故选B。 9．(24-25高二下·辽宁县域重点高中·期末)获得纯净的微生物培养物的关键是防止杂菌污染。无菌技术应围绕着如何避免杂菌的污染展开。下列说法正确的是（　　） A．接种环是金属用具，应使用干热灭菌法进行灭菌 B．涂布器灼烧前放在酒精中是为了先进行消毒 C．牛奶消毒的时间与控制的消毒温度有关 D．接种划线时要将取下的培养皿盖置于酒精灯旁 【答案】C 【详解】A、接种环的灭菌方法是灼烧灭菌，干热灭菌适用于耐高温且需保持干燥的物品（如玻璃器皿），但接种环需在酒精灯火焰上灼烧至红热以彻底灭菌，A错误； B、涂布器浸泡酒精的目的是利用酒精燃烧进行灼烧灭菌，而非单纯消毒，B错误； C、牛奶的巴氏消毒法通过控制温度（如70-75℃）和时间（如30分钟或15秒）杀灭微生物，时间与温度呈负相关，C正确； D、接种划线时培养皿盖不可完全取下，应仅开一条缝隙并在酒精灯火焰旁操作，以减少杂菌污染，D错误。 故选C。 10．(24-25高二下·天津西青区·期末)为从高粘度原油（主要是含碳有机物）中筛选得到高效降解石油污染物的细菌，研究者以原油污染污泥为研究对象进行如图所示实验。下列叙述正确的是（　　） A．培养基①的作用是增加目的菌株的种类 B．图示表明，油泥混合液被稀释了106倍 C．只有培养基②要以原油为唯一碳源 D．培养基③采用的接种方法不能用于统计活菌的数量 【答案】D 【详解】A、由图可知培养基①按物理状态划分属于液体培养基，可增加目的菌株的数量；按功能划分属于选择培养基，可富集目的菌株，A错误； B、图示表明培养基①的溶液被稀释了105倍，但由于缺乏初始数值，故油泥混合液的稀释倍数无法确定，B错误； C、培养基①②③均要以原油为唯一碳源，以筛选得到高效降解石油污染物的细菌，C错误； D、培养基③采用了平板划线法接种微生物，该方法无法用于活菌数量的统计，D正确。 故选D。 11．(24-25高二下·福建三明·期末)在微生物的培养过程中，离不开培养基的配制和灭菌技术。下列叙述正确的是（    ） A．生物消毒法是指利用生物或其代谢物除去环境中的所有微生物的方法 B．不同微生物生长所需的pH不同，配制完成的培养基在灭菌后按需要调节相应的pH C．为防止杂菌污染，灭菌后的培养基应立即倒入培养皿中并盖上皿盖，待冷却后倒置 D．使用高压蒸汽灭菌锅对培养基灭菌时，需在100kPa、121℃条件下维持15～30min 【答案】D 【详解】A、生物消毒法利用生物或其代谢产物抑制或杀灭部分微生物，灭菌才能彻底消灭所有微生物，A错误； B、培养基的pH应在灭菌前调节，灭菌后调节会破坏无菌状态，导致污染，B错误； C、灭菌后的培养基需冷却至约50℃（避免高温导致培养皿变形或烫死操作者）再倒入培养皿，而非立即倒入，C错误； D、高压蒸汽灭菌的标准条件为100kPa、121℃维持15～30分钟，D正确。 故选D。 12．(24-25高二下·新疆喀什英吉沙县·期末)平板划线法是接种和分离微生物最常用的一种方法，据图分析下列操作正确的是（    ） A．在该操作过程中需要在酒精灯火焰上灼烧涂布器5次 B．每一次划线都应该从上一次划线的末端开始划线 C．在第二次划线时，需要在酒精灯火焰附近再蘸取一环菌液 D．倒置培养后，可选择菌落数在30-300之间的平板进行计数 【答案】B 【详解】A、在平板划线法中，接种环在每次划线前和划线结束后都需要在酒精灯火焰上灼烧灭菌。图中共有5次划线，那么划线前灼烧1次，划线结束后灼烧1次，总共需要灼烧6次，但这里使用的是接种环而非涂布器，A错误； B、平板划线法中，每一次划线都应该从上一次划线的末端开始划线，这样可以使细菌的数目随着划线次数的增加而逐渐减少，最终得到由单个细菌繁殖而来的菌落，B正确； C、在平板划线法中，只有第一次划线时需要蘸取菌液，从第二次划线开始，是以上一次划线末端的细菌作为菌种来源，不需要再蘸取菌液，C错误； D、确定对照组无菌后，选择菌落在30-300之间的平板进行计数，这是稀释涂布平板法的计数要求，而图示平板划线法一般不用于计数，D错误。 故选B。 13．(24-25高二下·陕西安康·期末)如图所示，研究人员从深海热泉沉积物中成功分离出耐高温（80℃）的聚酯类塑料PET（C10H8O4）分解菌。下列叙述正确的是（    ） A．图中培养基A中不含PET，培养的目的是增加分解菌的数量 B．可用干热灭菌法对培养基、试管、平板和锥形瓶等进行灭菌 C．步骤①转接次数越多，筛选出的菌株对PET分解效率就越高 D．步骤⑤应挑选菌落直径大发荧光强的菌落接种于培养基C中 【答案】D 【详解】A、培养基A应含PET ，作为选择培养基筛选能分解PET的菌，A错误； B、平板常用干热灭菌或紫外线灭菌，培养基、试管、锥形瓶等用高压蒸汽灭菌，B错误; C、步骤①转接次数多，是富集分解菌数量，不是直接提高分解效率，分解效率与菌株本身特性有关，C错误； D、步骤⑤挑菌落直径大（分解PET多 ）、发荧光强（含相关酶多 ）的菌落，可筛选出高效分解菌，D正确。 故选D。 14．(24-25高二下·福建福州福建师大附中·期末)采集果园土壤进行微生物分离或计数。下列叙述正确的是（    ） A．完成平板划线后，培养时需增加一个未接种的平板作为对照 B．稀释涂布平板法和平板划线法都能用于尿素分解菌的分离和计数 C．土壤中分离得到的醋酸菌能在无氧条件下将葡萄糖转化成乙酸 D．用于筛选尿素分解菌的培养基含有蛋白胨、尿素和无机盐等营养物质 【答案】A 【详解】A、平板划线法培养时需设置未接种的平板作为空白对照，以验证培养基灭菌是否彻底，避免杂菌污染干扰实验结果，A正确； B、稀释涂布平板法可通过菌落数进行计数，而平板划线法仅用于分离纯化微生物，无法直接计数，B错误； C、醋酸菌属于好氧菌，其代谢过程需在有氧条件下进行，无氧时无法将葡萄糖转化为乙酸，C错误； D、筛选尿素分解菌的培养基应以尿素为唯一氮源，若含蛋白胨（含其他氮源），则无法有效筛选出目标菌种，D错误。 故选A。 15．(24-25高二下·河南南阳·期末)工业废水中含有多种有机污染物，如苯酚等。欲分离和纯化高效降解苯酚的细菌，下列相关操作正确的是（　　） A．利用以苯酚为唯一氮源的平板能分离出苯酚降解菌 B．配制培养基时，先将pH调至酸性，再灭菌 C．选择培养基分离得到的单菌落不一定能降解苯酚 D．稀释涂布平板时，可用涂布器蘸取菌液均匀涂布在固体平板表面 【答案】C 【详解】A、苯酚不含氮元素，不能作为氮源，A错误； B、培养基配制应先调pH再灭菌，但在培养细菌时，需要将pH调至中性或弱碱性，B错误； C、选择培养基虽能富集目标菌，但若存在其他碳源或操作污染，部分菌可能依赖其他途径生长，未必能降解苯酚，需进一步验证，C正确； D、稀释涂布平板时，应先用移液管滴加菌液至平板，再用无菌涂布器涂布，D错误。 故选C。 16．(24-25高二下·新疆乌鲁木齐天山区新疆实验中学·期末)下表是某同学配制的一种培养基的配方，下列叙述错误的是（　　） 成分 葡萄糖 Na2HPO4 KH2PO4 尿素 MgSO4·7H2O 琼脂 含量/g 10.0 2.1 1.4 1.0 0.2 15.0 将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1 000 mL A．该培养基属于鉴别培养基 B．该培养基以尿素为唯一氮源 C．该培养基无法用于病毒的培养 D．培养细菌时一般需将pH调至中性或弱碱性 【答案】A 【详解】A、鉴别培养基需加入特定指示剂以区分不同微生物，而该培养基成分中无酚红等指示剂，无法通过显色反应鉴别微生物，因此不属于鉴别培养基，A错误； B、培养基中尿素是唯一的氮源，其他成分不含氮元素，故该培养基以尿素为唯一氮源，B正确； C、病毒必须依赖活细胞才能增殖，该培养基不含活细胞，无法培养病毒，C正确； D、细菌培养时通常需将pH调至中性或弱碱性（如pH6.5~7.5），以符合其代谢需求，D正确。 故选A。 17．(24-25高二下·新疆乌鲁木齐天山区新疆实验中学·期末)微生物培养过程中，要重视无菌操作防止杂菌污染，下列操作中正确的是（　　） A．玻璃器皿和金属用具一般采用高压蒸汽灭菌 B．对操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和灭菌 C．将接种环直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧，可以迅速彻底地灭菌 D．煮沸消毒法中100℃煮沸5～6 min可以杀死全部微生物的细胞、芽孢和孢子 【答案】C 【详解】A、玻璃器皿和金属用具通常采用干热灭菌法，而高压蒸汽灭菌适用于耐高温高压且潮湿的物品（如培养基），A错误； B、为避免杂菌污染，对实验操作空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒，而非灭菌，B错误； C、接种环灼烧灭菌时，需在酒精灯火焰的外焰（充分燃烧层）充分灼烧至通红，可杀灭所有微生物（包括芽孢和孢子），C正确； D、煮沸消毒法（100℃ 5-6分钟）仅能杀死部分微生物的细胞和部分芽孢，无法彻底灭活所有微生物的芽孢和孢子，D错误。 故选C。 18．(24-25高二下·湖北武汉部分高中联考·期末)一皿一世界，让微生物“勾勒”诗和远方。自然界中有很多奇妙的微生物，红色的红球菌，黄色的黄杆菌，橙色的橙色单胞菌，白色的芽孢杆菌，根据它们自身不同的颜色，可让菌种长成一幅漂亮的画(如图)。下列叙述错误的是 （    ） A．微生物作画的原理其实就是菌种的培养 B．作画用的培养基及接种工具均可采用湿热灭菌 C．在培养细菌时一般需要将培养基调至中性或弱碱性 D．作画的培养基必须用选择培养基，否则无法显现颜色 【答案】D 【分析】培养基的概念及营养构成： （1）概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出的供其生长繁殖的营养基质。 （2）营养构成：各种培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。例如，培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素，培养霉菌时需将培养基的pH调至酸性，培养细菌时需将pH调至中性或微碱性，培养厌氧微生物时则需要提供无氧的条件。 【详解】A、微生物作画的原理是通过平板划线接种菌种，再进行菌种的培养获得，A正确； B、作画用的培养基及接种工具均可采用湿热灭菌，防止杂菌污染，B正确； C、在培养细菌时一般需要将培养基调至中性或弱碱性，培养真菌时一般需要将培养基调至酸性，C正确； D、作画的培养基一般不是选择培养基，而是完全培养基，D错误。 故选D。 19．(24-25高二下·河北保定·期末)为了解决小麦秸秆的回收处理问题，研究人员分离、纯化分解秸秆中纤维素的微生物，实验流程如图甲所示。图乙是培养出的单菌落示意图。下列叙述正确的是（    ） A．图甲中选择培养要用以葡萄糖作为唯一碳源的选择培养基 B．制备的培养基一般要进行高压蒸汽灭菌，接种工具须经消毒处理 C．据图乙推测，分解纤维素能力最强的是菌落b D．若要统计每克样品中的细菌数，则应选择平板划线法 【答案】C 【详解】A、实验目的是分离、纯化分解秸秆中纤维素的微生物，所以图甲中选择培养要用以纤维素作为唯一碳源的选择培养基，A错误； B、制备的培养基一般要进行高压蒸汽灭菌，接种工具须经过灭菌处理，B错误； C、在鉴别纤维素分解菌的培养基上，菌落小而透明圈越大，说明该菌分解纤维素的能力越强，由图乙可知，菌落 b最小，但周围的透明圈最大，所以 a - d 中分解纤维素能力最强的是菌落 b，C正确； D、若要统计每克样品中的细菌数，应选择稀释涂布平板法，平板划线法不能用于计数，D错误。 故选C。 20．(24-25高二下·河南许昌·期末)在器械灭菌时，通常会在高压蒸汽灭菌锅中放置生物指示剂来检测灭菌效果，自含型生物指示剂如图所示。为检验生物指示剂是否出现阳性变化，需用工具在塑料瓶外挤破安瓿瓶，使含芽孢的菌片浸没在培养液内，培养后观察颜色变化(例如变黄表示阳性)。最终根据灭菌与未灭菌的生物指示剂的阳性变化情况，判断器械灭菌效果。下列叙述错误的是（    ）    A．安瓿瓶中培养液含有营养物质，其作用之一是使芽孢复苏 B．菌片中芽孢的耐热性大于医疗器械上的可能污染菌 C．培养液中可能含有pH指示剂，微生物代谢导致pH变化而出现颜色变化 D．若灭菌和未灭菌的生物指示剂均不出现阳性变化，则说明灭菌效果良好 【答案】D 【详解】A、芽孢复苏需要营养物质，培养液含营养物质可使芽孢复苏，A正确； B、芽孢是细菌的休眠体，芽孢壁厚，含水量极低，代谢缓慢，抗逆性强，能经受高温紫外线、电离辐射以及多种化学物质灭杀，可以帮助细菌度过不良环境，因此菌片中芽孢的耐热性大于器械上的可能污染菌，B正确； C、微生物代谢改变培养液pH（微生物在培养液中生长代谢时，会进行呼吸作用等生理过程，产生如CO2等代谢产物，CO2溶解在培养液中会使培养液的pH发生变化），若有pH指示剂会显色，可据此判断，C正确； D、若灭菌与未灭菌的生物指示剂均不出现阳性变化，则说明灭菌前无有活性芽孢，也就无法说明灭菌效果，D错误。 故选D。 21．(24-25高二下·陕西渭南韩城·期末)获得纯净的微生物培养物的关键是防止杂菌污染，无菌技术主要包括消毒和灭菌。下列相关叙述正确的是（    ） A．巴氏消毒法能彻底杀死牛奶中所有微生物，包括芽孢和孢子 B．对实验者的衣着和手都要进行灭菌处理 C．用后的培养基应立即丢弃，以免污染实验室其他微生物 D．灭菌方法有湿热灭菌、干热灭菌和灼烧灭菌 【答案】D 【分析】1、消毒是指使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物(不包括芽孢和孢子)，灭菌则是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。 2、无菌技术的主要内容：①对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。②将用干微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌。③为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。 【详解】A、巴氏消毒法仅杀死部分微生物，不能消灭芽孢和孢子，属于消毒而非灭菌，A错误； B、对实验者的衣着和手应进行消毒处理，而不是灭菌，灭菌会对人体造成伤害，B错误； C、用后的培养基应先灭菌再丢弃，避免污染环境，直接丢弃存在风险，C错误； D、灭菌方法有湿热灭菌（如高压蒸汽灭菌）、干热灭菌和灼烧灭菌等，D 正确。 故选D。 22．(24-25高二下·河北承德·期末)下列关于获得酵母菌单菌落的叙述，错误的是（　　） A．蛋白胨可为酵母菌的生长提供碳源、氮源和丰富的磷酸盐 B．接种室在使用前可以用紫外线照射30min，以进行消毒 C．涂布器从酒精中取出后可直接用于涂布，涂布后需灼烧灭菌 D．通过酵母菌的纯培养获得的酵母菌代谢产物叫作纯培养物 【答案】ACD 【分析】1、在微生物培养过程中，由单一个体繁殖所获得的微生物群体称为纯培养物。平板划线法和稀释涂布平板法是常用的获取纯培养物的方法。 2、酵母菌是兼性厌氧微生物，在无氧条件下能进行酒精发酵。 【详解】A、蛋白胨可为酵母菌的生长提供碳源、氮源和维生素，但不能提供丰富的磷酸盐，A错误； B、接种室在使用前可以用紫外线照射30min，以进行消毒，B正确； C、在使用涂布器接种时，应将涂布器从酒精中取出，灼烧，待酒精燃尽，冷却后再涂布，不能直接用于涂布，C错误； D、纯培养物是由单一个体繁殖所获得的微生物群体，D错误。 故选ACD。 23．(24-25高二下·湖南长沙天心区长沙长郡中学·期末)瘤胃纤毛虫是一种能分泌纤维素酶的原生动物，生活在牛羊等反刍动物的瘤胃中。研究人员将纯化的瘤胃纤毛虫接种到含5mL改良培养液（由K2HPO4、KH2PO4、MgSO4、NaCl等组成）的试管中，每天投喂100μL底物悬液（由淀粉和草粉组成），每3～4天换液一次，投喂和换液结束后均需充入某种气体再盖上盖子继续培养。每天进行计数，结果如图所示。相关叙述正确的是（    ） A．可用干热灭菌法对改良培养液进行灭菌处理 B．K2HPO4和KH2PO4共同作用能维持培养液的pH C．投喂和换液结束后充入的可能是CO2，其目的是提供无氧环境 D．将等量瘤胃纤毛虫接种到含10mL改良培养液的试管中，其环境容纳量将上移 【答案】BCD 【分析】灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌。 【详解】A、一般用湿热灭菌法对培养液进行灭菌，A错误； B、K2HPO₄和KH2PO₄是缓冲物质，能维持培养液的pH，B正确； C、瘤胃纤毛虫生活在胃内，为无氧环境，投喂和换液结束后充入CO2，其目的是提供生存的无氧环境，C正确； D、将等量瘤胃纤毛虫接种到10mL改良培养液的试管中，与题干相比，增加了5mL改良培养液，其环境容纳量将提高，D正确。 故选BCD。 24．(24-25高二下·山东枣庄第三中学·期末)营养缺陷型菌株是指缺乏合成某些营养物质（如氨基酸、维生素）的能力，必须在基本培养基中补充特殊营养物质才能正常生长的一类菌株，可自然产生或人工诱导获得。用一定方法诱变大肠杆菌并将其接种到甲培养皿上，一段时间后将菌落影印接种（不改变菌落在培养基中相应位置）到乙、丙两培养皿中，进一步培养一段时间可筛选出营养缺陷型菌株，结果如图所示。下列说法错误的是（　　） A．将大肠杆菌接种到甲培养皿的方法为平板划线法 B．甲、丙两培养皿中培养基均添加了特殊营养物质 C．乙培养皿中能生长的为所需的营养缺陷型菌株 D．甲中部分大肠杆菌发生了基因突变或染色体变异 【答案】ACD 【详解】A、由菌落的分布情况可知，将大肠杆菌接种到甲培养皿的方法为稀释涂布平板法，A错误； B、根据甲丙两种培养基中菌落位置可知，甲中的菌种在丙培养基中均能生长，再结合乙培养基中菌落的生长情况，可推测甲培养基和丙培养基都添加了某种特殊物质，B正确； C、乙培养皿中不能生长的为所需的营养缺陷型菌株，C错误； D、甲中的部分大肠杆菌发生了基因突变，不可能发生染色体变异，因为大肠杆菌不含染色体，D错误。 故选ACD。 25．(24-25高二下·辽宁重点高中联合体·期末)香蕉枯萎病是由土壤中的尖孢镰刀菌感染香蕉植株所导致，菌株S可抑制尖孢镰刀菌。某研究小组将菌株S施于香蕉种植园的土壤中，并从中筛选出与菌株S协同作用的菌株P。为验证菌株P与菌株S对尖孢镰刀菌的抑制具有协同作用，进行了以下操作。下列叙述正确的是（　　） 培养基 预先涂布菌株 点接菌液 实验组1 实验组2 实验组3 固体培养基 菌株X 菌株S 菌株P ？ A．菌株X是尖孢镰刀菌 B．实验组3“？”为菌株S+菌株P C．该实验的因变量为溶菌圈的大小 D．能够说明菌株P对菌株S的作用的组别为实验组2和3 【答案】ABC 【详解】A 、该实验目的是验证菌株P与菌株S对尖孢镰刀菌的抑制具有协同作用，所以预先涂布的菌株X应该是尖孢镰刀菌，这样才能观察菌株S和P对它的抑制作用，A 正确 ； B 、为了验证协同作用，实验组3应该是菌株S+菌株P，与实验组1（菌株S）、实验组2（菌株P）形成对比，B 正确； C、该实验是验证两种菌株对尖孢镰刀菌的抑制作用，可通过观察溶菌圈的大小来判断抑制效果，所以因变量为溶菌圈的大小，C 正确 ； D 、要说明菌株P对菌株S的作用，需要设置有菌株S单独作用和菌株S与菌株P共同作用的组进行对比，有无菌株P为自变量，即实验组1和3，而不是实验组2和3，D 错误 。 故选ABC。 26．(24-25高二下·江苏徐州邳州·期末)有些细菌具有溶菌特性，能够破坏其他细菌的结构使细胞内容物释出。研究人员试图从某湖泊水样中分离出有溶菌特性的细菌。先将含有一定浓度α菌的少量培养基倾倒在固体培养平板上，凝固形成薄层。一段时间后，将1mL湖泊水样加入9mL无菌水中，摇匀后再依次等比稀释3次，取0.1mL稀释后的湖泊水样涂布于薄层上，稳定后获得56个菌落，其中15个菌落周围出现溶菌圈。下列相关叙述正确的有（    ） A．分离计数溶菌细菌的培养基应含有水、碳源、氮源、无机盐和琼脂 B．应使用灼烧灭菌冷却后的涂布器将湖泊水样均匀地涂布到薄层上 C．待接种的水样被充分吸收后，将平板倒置于恒温培养箱中培养 D．1mL的湖泊水样中约有1.5×105个具溶菌特性的细菌 【答案】ABC 【详解】A、分离计数溶菌细菌使用的是固体培养基，固体培养基的基本成分包括水、碳源、氮源、无机盐和琼脂（凝固剂，使培养基呈固体状态），A正确； B、涂布接种时，涂布器需经灼烧灭菌，冷却后再使用（避免高温杀死待接种的细菌），以保证水样均匀涂布在薄层上，B正确； C、接种后需待水样被培养基充分吸收，再将平板倒置培养，目的是：防止冷凝水滴落污染培养基；避免培养基水分过快蒸发，C正确； D、水样稀释104倍，涂布0.1mL稀释液后，溶菌菌落数为15个；1mL原水样中溶菌细菌数量应为：15÷0.1×104 = 1.5×106，D错误。 故选ABC。 27．(24-25高二下·江西萍乡·期末)自生固氮菌是土壤中能独立固定空气中N2的细菌，将玉米种子用自生固氮菌拌科后播种，可显著提高产量并降低化肥的使用量。科研人员进行了土壤中自生固氮菌的分离和固氮能力测定的研究，回答下列相关问题。 (1)在实验室培养自生固氮菌时，需要将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行_________处理。常用的方法有_________（答2点）。 (2)从营养物质的角度分析，培养自生固氮菌的培养基应具备的特点是_________。 (3)将5g土壤溶于45mL无菌水，再稀释105倍，按图[    ]_________（填数字及名称）接种方式将0.1mL样品接种到3个培养基上，统计菌落数目为134、131、137，据此可得出每克土壤中的自生固氮菌活菌数约为_________个。 (4)将纯化的固氮菌置于完全培养液中扩大培养48小时，经离心后收集下层细胞并转移至特定培养基中进行固氮能力的测定，筛选出固氮能力最强的菌种CM12.为进一步鉴定其固氮能力，科研人员选用发芽一致的玉米种子进行3组盆栽实验，30天后测定土壤微生物有机氮含量，结果如下图所示。 [注]CK：对照处理组；N：尿素处理组（每盆土壤浇50mL有机全营养液，成分为在1000mL无氮植物营养液中加入0.12g尿素）；CM12：自生固氮菌CM12处理组（每盆土壤浇50mL接种自生固氮菌的无氮植物营养液）。 ①对照组（CK）的处理为______。 ②图中实验结果可表述为_________。 【答案】(1) 灭菌 湿热灭菌法（或：高压蒸汽灭菌法）、干热灭菌法、灼烧灭菌法 (2)含有碳源、无机盐等营养物质，不含氮源 (3) [1]稀释涂布平板法 1.34×109 (4) 每盆土壤浇 50mL无氮植物营养液 尿素处理和自生固氮菌CM12处理均能使土壤微生物有机 氮含量增加，且CM12处理增加的比例更大 【分析】微生物常见的接种的方法： （1）平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养．在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。 （2）稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。 【详解】（1）在实验室培养自生固氮菌时，需要将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌处理，其目的是防止杂菌污染。常用的灭菌方法有湿热灭菌法、干热灭菌法、灼烧灭菌法，高压蒸汽灭菌法属于湿热灭菌法。 （2）通常情况下，培养基的成分中应该含有碳源、氮源、水分和无机盐等，而自生固氮菌能自行固氮，因此，培养自生固氮菌的培养基应具备的特点是含有碳源、无机盐等营养物质，不含氮源。 （3）将5g土壤溶于45mL无菌水，再稀释105倍，按图1所示的接种方式（稀释涂布平板法）将0.1mL样品接种到3个培养基上，该方法可以统计活菌的数目，同时也能分离菌种，统计菌落数目为134、131、137，据此可得出每克土壤中的自生固氮菌活菌数约（134+131+137）÷3÷0.1×106=1.34×109个。 （4）①本实验的目的是筛选出固氮能力最强的菌种CM12，为鉴定其固氮能力，科研人员选用发芽一致的玉米种子进行3组盆栽实验，30天后测定土壤微生物有机氮含量，根据等量原则和对照原则分析，图中对照组的处理为每盆土壤浇50mL有机全营养液； ②实验结果显示，尿素处理和自生固氮菌CM12处理均能使土壤微生物有机 氮含量增加，且CM12处理增加的比例更大，因而说明菌种CM12固氮能力较强。 28．(24-25高二下·新疆乌鲁木齐天山区新疆实验中学·期末)化合物S被广泛应用于医药、食品和化工工业。用菌株C可生产S，S的产量与菌株C培养所利用的碳源关系密切。为此，某小组通过实验比较不同碳源对菌体生长和S产量的影响，结果见表。 碳源 细胞干重/（g/L） S产量/（g/L） 葡萄糖 3.12 0.15 淀粉 0.41 0.00 制糖废液 2.30 0.18 回答下列问题。 (1)由实验结果可知，菌株C生长的最适碳源是________；用菌株C生产S的最适碳源是________。菌株C的生长除需要碳源外，还需要________（答出2点即可）等营养物质。 (2)由实验结果可知，碳源为淀粉时菌株C不能生长，其原因是________。 (3)若以制糖废液作为碳源，为进一步确定生产S的最适碳源浓度，某同学进行了相关实验。请简要写出实验思路和预期结果：________。 (4)利用制糖废液生产S可以将废弃物重新利用，其意义是________（答出1点即可）。 【答案】(1) 葡萄糖 制糖废液 氮源、无机盐 (2)缺少淀粉酶 (3)设计一系列不同浓度的制糖废液分别培养菌株C，测定不同浓度制糖废液中S产量，S产量最大的碳源浓度为最适碳源浓度 (4)减少污染、节省原料、降低生产成本 【分析】培养基的营养构成：各种培养基的具体配方不同，但一般都含有水、碳源、氮源和无机盐；不同培养基还要满足不同微生物对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。 【详解】（1）与以制糖废液为碳源相比，以葡萄糖为碳源时菌株C的细胞干重最大，说明最适于菌株C生长的碳源是葡萄糖；用菌株C生产S的产量高于以葡萄糖为碳源时的产量，说明最适于生产S的碳源是制糖废液， 菌株C的生长除需要碳源外，还需要氮源和无机盐。 （2）分析题图表格可以看出在以淀粉为碳源的培养基中，菌株C不能生长，原因可能是菌株C不能合成淀粉酶或菌株C不能分泌淀粉酶，因而不能利用淀粉。 （3）要测定生产S的最适制糖废液为碳源的浓度，实验自变量为制糖废液的浓度，可分别配制一系列不同浓度梯度的以制糖废液为唯一碳源的培养基，培养菌株C，其他条件相同且适宜，一段时间后，测定并比较不同浓度制糖废液中的S的产量，S产量最高时对应的制糖废液浓度，即为生产S的最适碳源浓度。 （4） 利用制糖废液生产S可以实验废物利用，既有利于减少污染、节省原料，又能降低生产成本。 29．(24-25高二下·广东佛山·期末)益生菌发酵乳制品不仅营养丰富，还含有对人体健康有益的益生菌。为评估唾液链球菌（ST）与动物双歧杆菌（BL）复合发酵对发酵乳品质的影响，研究人员采用这两种益生菌菌株对牛乳进行复合发酵，在发酵终点分别测定单菌发酵组和复合菌株发酵组的pH和活菌数，结果如图a和图b所示。 回答下列问题： (1)ST与BL_______（“有”或“无”）以核膜为界限的细胞核。牛乳作为培养基的主要成分，可以为这两种发酵菌提供_________等营养物质。为保证牛乳中的营养成分不被破坏，可以采用_______法除去该培养基的杂菌。 (2)活菌数变化和pH是评价发酵乳制品质量的关键指标。三组实验在发酵终点pH都降低的细胞学原理是_______。由图b可知，与单菌发酵相比，复合发酵时两种菌株的生长存在_______作用，结合图a分析这种作用的具体机制可能是_______。 (3)研究表明，发酵产品的pH在一段时间后仍会出现一定程度的下降，出现这种变化的原因是_________，这对于发酵乳的保存和食用的启示是________。 【答案】(1) 无 碳源、氮源、无机盐、水 巴氏消毒 (2) BL和ST无氧呼吸产生乳酸，导致pH下降 协同/相互促进/互补 ST能够快速产酸而迅速降低pH值，为BL创造适宜的生长环境，BL可能为ST提供生长因子或抑制有害菌 (3) 发酵产品中还存在有活性的乳酸菌继续进行发酵 酸奶应在低温下保存并在保质期内食用 【分析】1、原核细胞与真核细胞的主要区别是没有以核膜为界限的细胞核。由真核细胞构成的生物叫作真核生物，如植物、动物、真菌等。由原核细胞构成的生物叫作原核生物，如细菌(如蓝细菌，旧称蓝藻)、支原体、衣原体、立克次氏体等。 2、培养基的化学成分包括 水、无机盐、碳源、氮源 等。 【详解】（1）唾液链球菌（ST）为细菌，动物双歧杆菌（BL）也为细菌，二者均属于原核生物，无以核膜为界限的细胞核。牛乳富含碳源（如乳糖）、氮源（如酪蛋白）、水、无机盐和生长因子等，可为发酵菌提供必要的营养。为避免高温破坏牛乳中的营养成分，可采用巴氏消毒法（低温长时间或高温短时间处理）或过滤除菌法（物理去除杂菌）。 （2）三组实验在发酵终点pH都降低的细胞学原理是BL和ST无氧呼吸产生乳酸，导致pH下降。由图b可知，相较于单菌发酵组，复合发酵组内两种菌的数目均高于单菌发酵组，故复合发酵时两种菌株的生长存在协同（或相互促进或互补）作用，结合图a分析这种作用的具体机制可能是ST能够快速产酸而迅速降低pH值，为BL创造适宜的生长环境，BL可能为ST提供生长因子或抑制有害菌。 （3）发酵产品的pH在一段时间后仍会出现一定程度的下降，出现这种变化的原因是发酵产品中还存在有活性的乳酸菌继续进行发酵，这对于发酵乳的保存和食用的启示是酸奶应在低温下保存并在保质期内食用。 地 城 考点03 微生物的选择培养与计数 1．(24-25高二下·海南直辖县级行政单位定安县部分学校·期末)尿素含氮量高，经过土壤中能合成脲酶的微生物分解后，才能被作物吸收利用。某科研小组欲从土壤中分离出分解尿素的细菌并计数。下列叙述正确的是（　　） A．利用平板划线法或稀释涂布平板法可对分解尿素的细菌进行接种、纯化、分离和计数 B．培养过程中，需要考虑营养条件，不考虑pH、温度和渗透压等条件 C．以尿素为唯一氮源且含酚红的培养基中加入尿素和酚红的目的是不相同的 D．在以尿素为唯一氮源的培养基上长出的菌落均为分解尿素的细菌 【答案】C 【分析】可以以尿素为唯一氮源的培养基筛选尿素分解菌，该培养基为选择培养基。 【详解】A、平板划线法可用于菌种的分离，无法准确计数，计数需用稀释涂布平板法，A错误； B、微生物培养需适宜的营养条件、pH、温度和渗透压等环境因素，否则会影响菌体生长，B错误； C、尿素作为唯一氮源起选择作用，酚红用于指示尿素分解后pH变化（鉴定功能），二者目的不同，C正确； D、培养基以尿素为唯一氮源时，固氮菌可能利用空气中的N2生长，无需分解尿素，因此长出的菌落不全是分解尿素的细菌，D错误。 故选C。 2．(24-25高二下·江苏徐州邳州·期末)为检测某品牌冰淇淋中大肠杆菌的数量是否超标，在伊红－亚甲蓝琼脂培养基上（伊红－亚甲蓝使大肠杆菌呈深紫色）涂布适量的冰淇淋原液设为甲组，不涂布冰淇淋原液的培养基设为乙组，经过37℃、48h培养，观察两组培养基上菌落生长情况。下列相关叙述错误的是（    ） A．伊红－亚甲蓝琼脂培养基属于鉴别培养基 B．以菌落数计算样品中的大肠杆菌数量，结果往往比实际值偏小 C．该实验涂布前未对冰淇淋原液进行稀释不一定会导致实验结果出现较大误差 D．若乙组培养基上长有深紫色菌落，计算时用甲组的深紫色菌落数减去乙组的深紫色菌落数 【答案】D 【详解】A、伊红-亚甲蓝琼脂培养基能使大肠杆菌菌落呈现深紫色，属于鉴别培养基，A正确； B、当多个大肠杆菌连在一起时，仅形成一个菌落，因此根据菌落数计算的实际值会小于真实活菌数，B正确； C、若原液中大肠杆菌数量适中（如30-300个/平板），未稀释仍可准确计数，因此不一定会导致误差，C正确； D、乙组未接种却出现菌落，说明培养基灭菌不彻底或操作污染，此时实验数据不可靠，不能直接相减，D错误。 故选D。 3．(24-25高二下·山东聊城·期末)某生物兴趣小组完成了“某果园土壤中分解尿素的细菌的分离和计数”的实验，具体操作流程如图所示。下列说法正确的是（    ） A．平板培养基的配制顺序为：称量→溶解→定容→灭菌→调pH→倒平板 B．过程④中涂布用的菌液浓度需要控制在30～300个/mL范围内 C．由图示菌落计数结果可知10克土样中的菌株数约为1.6×107个 D．④⑤使用的接种工具不同，两种接种方法均可用于微生物的分离、纯化与计数 【答案】C 【详解】A、在平板培养基配制过程中，应先调pH再灭菌，A错误； B、过程④一般要求平板上的菌落数在30～300个，B错误； C、由题意可知，每克土壤中的菌株数为16÷0.1×104=1.6×106个，即10克土样中的菌株数约为1.6×107个，C正确； D、④是稀释涂布平板法，接种工具是涂布器，可用以微生物的分离、纯化与计数，⑤是平板划线法，接种工具是接种环，不能用以微生物的计数，D错误。 故选C。 4．(24-25高二下·安徽合肥庐江县·期末)塑化剂（DEHP，化学式为C24H38O4）被很多国家认定为毒性化学物质，其生物毒性机理：具有抗雄性激素、雌性激素活性，进而影响生物体的生殖功能。如图为某实验小组从土壤中筛选可降解DEHP细菌的过程。下列叙述错误的是（　　） A．覆盖过塑料薄膜的土壤样品中，DEHP降解菌的数量可能高于普通土壤 B．初选获得候选菌的过程，利用了DEHP作为唯一碳源的选择培养基 C．振荡培养的目的是为细菌提供充足氧气，同时促进细菌与DEHP充分接触 D．固体培养基上接种后，可通过观察菌落特征直接鉴定是否为目的菌株 【答案】D 【详解】A、根据题意可知，目的是从土壤中筛选可降解DEHP的细菌，由于覆盖过塑料薄膜的土壤中富含塑化剂，有利于降解DEHP的细菌生存，因此覆盖过塑料薄膜的土壤样品中，DEHP降解菌的数量可能高于普通土壤，A正确； B、以DEHP作为唯一碳源的选择培养基，可有利于降解DEHP的细菌生存，而不能利用DEHP的微生物会因为缺乏碳源而不能生存，因此可有利于降解DEHP的细菌的筛选，即初选获得候选菌的过程，利用了DEHP作为唯一碳源的选择培养基，B正确； C、振荡培养可增加培养液的溶氧量，有利于菌体与营养物质接触，因此振荡培养的目的是为细菌提供充足氧气，同时促进细菌与DEHP充分接触，C正确； D、不同菌体的菌落特征不同，但仅根据菌落特征还不能判断菌体对DEHP的降解能力，因此不能通过观察菌落特征直接鉴定是否为目的菌株，D错误。 故选D。 5．(24-25高二下·广东广州八区·期末)生物学实验中合理选择材料和研究方法是顺利完成实验的前提条件。下列叙述正确的是（　　） A．稀释涂布平板法既可用于分离纯化菌株，又可用于菌种计数 B．向泡菜坛盖边沿的水槽中注满水，有助于坛内无菌环境的形成 C．将配制好的酵母菌培养基煮沸并冷却后，在酒精灯火焰旁倒平板 D．将接种环烧红，迅速蘸取酵母菌液在培养基上划线，培养后可获得单菌落 【答案】A 【详解】A、稀释涂布平板法通过梯度稀释使菌液分散成单个细胞，培养后可形成单菌落，既能分离纯化菌株，又能通过统计菌落数计算活菌数，A正确； B、泡菜坛盖边沿的水槽注水是为了隔绝空气，创造无氧环境以利于乳酸菌发酵，但坛内并非无菌环境（如乳酸菌本身存在），B错误； C、培养基灭菌需用高压蒸汽灭菌法，煮沸无法彻底灭菌（如无法杀灭芽孢），直接倒平板会导致杂菌污染，C错误； D、接种环烧红后需冷却再蘸取菌液，否则高温会杀死酵母菌，无法形成单菌落，D错误。 故选A。 6．(24-25高二下·甘肃白银部分学校·期末)利用石油降解菌降解石油可作为修复被石油污染的土壤或水源的一项重要措施，筛选石油降解菌的过程如图所示。下列叙述错误的是（　　）    A．图中的土壤样本可能被石油污染 B．④接种方法为平板划线法，接种过程需要使用接种环 C．⑤最好用固体培养基培养④中的石油降解菌，检测该菌对石油的降解能力 D．稀释涂布平板法不仅可以分离、纯化石油分解菌，还可以对目的菌进行计数 【答案】B 【详解】A、因为要筛选石油降解菌，所以图中的土壤样本很可能被石油污染，这样才更有可能筛选出能降解石油的细菌，A正确； B、观察可知，④中菌落分布均匀，接种方法应为稀释涂布平板法，接种过程使用涂布器，而不是接种环（接种环用于平板划线法），B错误；    C、固体培养基有利于形成单菌落，便于鉴别和纯化菌种，所以⑤最好用固体培养基培养④中的石油降解菌，检测该菌对石油的降解能力，C正确；    D、稀释涂布平板法不仅可以通过形成单菌落来分离、纯化石油分解菌，还可以根据菌落数和稀释倍数对目的菌进行计数，D正确。 故选B。 7．(24-25高二下·四川眉山仁寿县·期末)某研究小组从土壤中筛选出淀粉分解菌。当淀粉被细菌分解后，平板经碘液处理会出现以这些菌为中心的透明圈。下列叙述错误的是（    ） A．在筛选淀粉分解菌的选择培养基中，应以淀粉作为唯一碳源 B．为得到淀粉分解菌的纯培养物，可用平板划线法进行接种 C．淀粉分解菌分解淀粉的能力与透明圈的大小呈正相关 D．平板划线法可用于纯化菌种，该方法也可用于细菌计数 【答案】D 【详解】A、选择培养基需以特定物质为唯一碳源，仅允许目标菌生长。淀粉作为唯一碳源时，只有能分解淀粉的菌才能存活，A正确； B、平板划线法通过多次划线稀释菌种，最终得到单菌落，是纯化菌种的常用方法，B正确； C、透明圈大小反映菌株分解淀粉的能力，透明圈越大，分解能力越强，C正确； D、平板划线法无法确定稀释倍数，菌落可能重叠，不能用于计数；细菌计数需用稀释涂布平板法，D错误。 故选D。 8．(24-25高二下·广西梧州新课程教研联盟·期末)尿素是农业生产上重要的氮肥，土壤中的细菌可将尿素分解成NH3后再转化为无机盐离子供植物利用。酚红指示剂遇到碱性物质会变红，可利用酚红指示剂对尿素分解菌进行鉴定。下列相关叙述正确的是（    ） A．应在偏碱性且潮湿的土壤表层进行取样，该环境下细菌数量较多 B．筛选分解尿素的细菌时，应以尿素作为培养基中唯一的营养物质 C．脲酶将尿素分解成氨使培养基的pH降低，加入酚红指示剂后变红 D．应在菌落数目处于相对稳定状态时观察菌落形态和统计菌落数目 【答案】D 【详解】A、尿素分解菌能分解尿素产生NH3，使环境呈碱性，但取样时无需刻意选择偏碱性环境，因菌种可能存在于普通土壤中，潮湿环境利于微生物生长，但表层土壤可能较干燥，A错误； B、筛选培养基需以尿素为唯一氮源，但还需提供碳源（如葡萄糖）、水、无机盐等其他营养物质，仅尿素无法满足微生物生长需求，B错误； C、脲酶催化尿素分解为NH3（碱性），导致培养基pH升高，酚红指示剂遇碱变红，而非pH降低，C错误； D、菌落数目稳定时（即培养后期）统计，可避免因菌落重叠或未完全生长导致计数误差，此时结果更准确，D正确。 故选D。 9．(24-25高二下·福建福州福清·期末)吃腐烂水果可能会出现头晕、恶心、呕吐或更严重的症状，这可能与微生物代谢产生的毒素有关。某研究小组设计实验探究腐烂苹果不同区域微生物的种类和数量以及烂果毒性，实验基本步骤如图所示。请据此判断下列说法正确的是（　　） A．根据本实验探究目的，步骤二接种采用的工具是接种环 B．若⑤的部位微生物的数量极少，则切掉①-④后的苹果就可以放心食用 C．离腐烂部位越远的果肉研磨液，获得适宜计数的平板需要稀释的倍数越低 D．培养基的pH应该调整到7左右，以便分离细菌、真菌等多种微生物 【答案】C 【详解】A、步骤二中，从稀释好的菌液中取样，通常使用移液枪或滴管，要对微生物进行计数，应采用稀释涂布平板法，接种工具是涂布器，A错误； B、⑤的部位微生物数量极少，但① ~④部位可能也受到了微生物的污染，存在产生毒素的风险，所以不能放心食用，B错误； C、一般情况下，离腐烂部位越远，微生物的种类和数量越少，因此，离腐烂部位越远的果肉研磨液，获得适宜计数的平板需要稀释的倍数越低，C正确； D、不同微生物对pH有不同的适应范围，为了分离多种微生物，通常不会将pH固定在7左右，D错误。 故选C。 10．(24-25高二下·天津四校联考·期末)下列有关“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”实验的叙述，错误的是（　　） A．选择培养基中需添加尿素作为唯一氮源 B．配制培养基时，需先进行高压蒸汽灭菌，再调节pH至中性或弱碱性 C．平均每克土壤中分解尿素的细菌数约为2.2×108个 D．实验需设置未接种的培养基作对照，以验证培养基的灭菌效果 【答案】B 【分析】培养基是人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质；根据物理性质分为固体培养基和液体培养基，培养基中一般含有水、碳源、氮源和无机盐。 【详解】A、培养基的营养成分应该包括碳源、氮源、水和无机盐等，实验目的是分离尿素分解菌，应该以尿素为唯一氮源，A正确； B、为了防止杂菌污染，应将培养基的pH调至中性或弱碱性后，再高压蒸汽灭菌，B错误； C、将10g土壤先稀释10倍，再进行梯度稀释10000倍，然后取0.1mL进行涂布平板，若步骤④平板上统计的菌落数平均为（212+230+218）÷3=220个，则每克土壤含分解尿素的细菌数约220÷0.1×10×10000=2.2×108个，C正确； D、验证培养基的灭菌效果，可培养未接种的培养基，观察表面是否有菌落产生，D正确。 故选B。 11．(24-25高二下·广西百色·期末)乳糖不耐受人群体内缺乏乳糖酶，不能完全消化母乳或牛乳中的乳糖，从而引起腹痛、腹胀、腹泻等肠胃不适。为了去除牛乳中的乳糖，某科研团队从奶酪中分离纯化出了高产乳糖酶的酵母菌，过程如图所示。其中X-gal是一种无色物质，能被乳糖酶分解为半乳糖和蓝色的溴靛蓝，使菌落呈蓝色。下列说法错误的是（    ） A．培养基甲只适合高产乳糖酶的酵母菌生长，属于选择培养基 B．用平板划线法接种可分离纯化得到该种酵母菌，并进行计数 C．含X-gal的培养基上的蓝色菌落，即为高产乳糖酶的酵母菌 D．蓝色菌落的直径越大，说明其乳糖酶产量越大或酶活性越高 【答案】B 【分析】1、分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体，这就是菌落。采用平板划线法和稀释涂布平板法能将单个微生物分散在固体培养基上，之后经培养得到的单菌落一般是由单个微生物繁殖形成的纯培养物； 2、微生物常见的接种的方法：（1）平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落；（2）稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落； 【详解】A、从奶酪中分离纯化高产乳糖酶的酵母菌，需要在培养基中加入能筛选出高产乳糖酶酵母菌的成分，培养基甲应是只适合高产乳糖酶的酵母菌生长的选择培养基，它可以抑制其他杂菌生长，有利于筛选出目标酵母菌，A正确； B、用稀释涂布平板法接种可使菌体在培养基上均匀分布，可分离得到的高产乳糖酶的酵母菌并进行计数，B错误； CD、Xgal是一种无色物质，能被乳糖酶分解为半乳糖和蓝色的溴靛蓝，使高产乳糖酶的酵母菌菌落呈蓝色，以菌落为中心，蓝色圈直径越大的菌落表明乳糖酶含量越大或者活性越高，CD正确。 故选B。 12．(24-25高二下·广西玉林·期末)活性黑5是一种低毒性、难褪色的含氮染料。科研人员从样品中分离出能分解活性黑5的假单胞杆菌，并通过浓度梯度驯化法获得具有强分解活性黑5能力的假单胞杆菌，具体流程如下图。下列说法错误的是（　　） A．用染料废水堆积池的污泥作为样品更容易筛选出能分解活性黑5的假单胞杆菌 B．培养基I和Ⅱ都是以活性黑5为唯一氮源的选择培养基 C．不断升高培养液中活性黑5的浓度，有利于获得具有强分解活性黑5能力的假单胞杆菌 D．若想分离出具有强分解活性黑5能力的假单胞杆菌，只能用稀释涂布平板法进行接种 【答案】D 【分析】1、在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称为选择培养基。 2、纯化微生物时常用的接种方法是平板划线法和稀释涂布平板法。平板划线法不易分离出单个菌落，不能计数；涂布平板法能使单菌落分离，便于计数。 【详解】A、用染料废水堆积池的污泥作为样品更容易筛选出能分解活性黑5的假单胞杆菌。因为染料废水堆积池的污泥中可能存在大量适应了染料环境且能够分解活性黑5的微生物，在这样的环境中筛选目标微生物的成功率更高，A正确； B、培养基I和Ⅱ都是以活性黑5为唯一氮源的选择培养基。选择培养基是指在培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物的生长，促进所需要的微生物的生长。本题中要筛选出能分解活性黑5的假单胞杆菌，以活性黑5为唯一氮源，只有能分解活性黑5获取氮源的微生物才能在该培养基上生长，从而达到筛选的目的，B正确； C、不断升高培养液中活性黑5的浓度，相当于对假单胞杆菌进行浓度梯度驯化。在这种选择压力下，能够适应高浓度活性黑5环境并具有较强分解能力的假单胞杆菌会被保留下来，经过多代筛选和驯化，有利于获得具有强分解活性黑5能力的假单胞杆菌，C正确； D、若想分离出具有强分解活性黑5能力的假单胞杆菌，常用的接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法。平板划线法是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面；稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。所以分离微生物不只能用稀释涂布平板法进行接种，D错误。 故选D。 13．(24-25高二下·内蒙古赤峰·期末)科研人员培养一种能分解石油的细菌，以解决石油污染问题。下列叙述错误的是（　　） A．可以利用石油作为唯一碳源制备选择培养基 B．可以利用平板划线法分离纯化需要的菌种 C．选择培养基上生长的菌不一定都能分解石油 D．必须在点燃的酒精灯火焰附近配制培养基 【答案】D 【详解】A、选择培养基需以石油为唯一碳源，只有能分解石油的细菌才能生长，其他微生物被抑制，A正确； B、平板划线法通过多次划线稀释菌种，最终得到单菌落以分离纯化目标菌种，B正确； C、若培养基中存在其他可利用的碳源（如分解石油的菌代谢产生的有机物），其他微生物可能利用这些物质生长，因此选择培养基上的菌不一定都能分解石油，C正确； D、配制培养基无需在酒精灯火焰附近，仅在灭菌后的接种或倒平板操作中需无菌环境（如火焰旁），D错误。 故选D。 14．(24-25高二·河南鹤壁·调研)侧孢短芽孢杆菌能降解制革厂废水中的单宁、苯酚和甲苯等含碳有机物，常见于富含有机质的土壤中。为获得能高效分解单宁、苯酚和甲苯的侧孢短芽孢杆菌，某小组同学进行了相关实验，过程如图所示，①②③培养基中分别加入了单宁、苯酚、甲苯，下列有关叙述正确的是（    ） A．培养基①②③中应添加抗生素以抑制其他细菌生长，方便筛选目标菌 B．图中④的接种方法是平板划线法或稀释涂布平板法，后者可对细菌计数 C．④中同时添加单宁、苯酚和甲苯作为碳源，属于选择培养基，可筛选目标菌 D．应从④中选择菌落直径大的单菌落接种到固体培养基⑤上进行扩大培养 【答案】C 【详解】A、培养基①②③中添加抗生素会抑制杂菌和目标菌的生长，无法筛选目标菌，A错误； B、据图可知，培养基④的接种方法是稀释涂布平板法，该方法可对微生物进行计数，B错误； C、④中同时添加单宁、苯酚和甲苯作为碳源，属于选择培养基，可用于筛选分解单宁、苯酚、甲苯能力强的目标菌，C正确； D、一般用液体培养基对筛选获得的目标菌进行扩大培养，以便获得更多的目标菌，D错误。 故选C。 15．(24-25高二下·山西晋中东三县·期末)天然色素来源于植物、动物及微生物，通过适当方法可从生物体细胞内提取色素。科研人员利用高氏 1 号培养基从土壤中筛选获得了一株产蓝色素的微生物，并对其进行鉴定，高氏 1 号培养基的 pH 为 7.5，主要成分包括可溶性淀粉、NaCl、KNO3、K2HPO4、MgSO4、FeSO4及 2％琼脂。下列叙述错误的是（　　） A．与植物、动物相比，利用微生物提取天然色素具有不受季节、气候的限制及培养技术简单等优势 B．接种前为确定该固体培养基是否被污染必须接种无菌水来培养检测 C．利用该培养基不宜通过逐渐升高温度的方法鉴定菌株的耐热性 D．纯化培养时，培养皿应倒置放在恒温培养箱内静置培养 【答案】B 【详解】A、微生物培养周期短、易控制，不受季节和气候限制，培养技术相对简单，A正确； B、检测固体培养基是否被污染的正确方法是不接种任何菌，直接培养观察有无菌落，而非接种无菌水，B错误； C、利用该培养基不宜通过逐渐升高温度的方法鉴定菌株的耐热性，而应设置不同的温度梯度鉴定，C正确； D、倒置培养皿可避免冷凝水污染培养基或冲散菌落，D正确。 故选B。 16．(24-25高二下·河北沧州泊头文宇中学·期末)关于微生物的培养与计数，下列叙述正确的是（　　） A．不含碳源或氮源的培养基不能用于微生物的培养 B．在无氧环境下培养、筛选出的一定是厌氧微生物 C．进行微生物的计数时，所用培养基中含有琼脂 D．菌液的稀释倍数会影响活菌计数结果的准确程度 【答案】D 【分析】培养基是人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质，分为固体培养基和液体培养基，培养基中一般含有水、碳源、氮源和无机盐，在提供上述几种主要营养物质的基础上，培养基还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物种和氧气的要求。 【详解】A、不含碳源或氮源的培养基可以用于培养自养型微生物或固氮微生物，例如自生固氮菌能在无氮培养基中生长，A错误； B、无氧环境下可能筛选出厌氧微生物或兼性厌氧微生物（如酵母菌在无氧时进行发酵），B错误； C、微生物计数方法包括稀释涂布平板法（需固体培养基含琼脂）和显微镜直接计数法（无需培养基），选项表述过于绝对，C错误； D、稀释涂布平板法中，稀释倍数过高会导致菌落数过少，过低会导致菌落重叠，均影响结果准确性，D正确。 故选D。 17．(24-25高二下·浙江宁波·期末)丙草胺（C17H26ClNO2）是一种广泛应用的除草剂，能抑制土壤细菌、放线菌和真菌的生长。为筛选修复污染土壤的微生物，某研究小组从某地土壤中分离出能有效降解丙草胺的细菌菌株，并对其计数，操作过程如图所示。下列叙述正确的是（　　） A．涂布前要检测培养基是否被污染可接种自来水后培养 B．涂布培养的结果表明每克土壤中的菌株数约为1.7×109个 C．该方法的计数结果往往比显微镜直接计数法偏大 D．在选择培养基中添加少量有机碳源以加速丙草胺降解菌的分离 【答案】B 【详解】A、若接种自来水，自来水中本身含有微生物，会干扰检测结果，A错误； B、图中共稀释6次，稀释倍数为106。然后，取0.1mL 涂布，3 个平板菌落数分别为 168、175、167，平均菌落数=(168+175+167)÷3=170 。最后，计算每克土壤中菌株数：170÷0.1×106=1.7×109，B正确； C、稀释涂布平板法计数时，当两个或多个细胞连在一起，会被统计为一个菌落，导致计数结果比显微镜直接计数的实际活菌数偏少，C错误； D、要筛选能降解丙草胺的细菌，应让丙草胺作为唯一碳源，这样只有能利用丙草胺的细菌才能生长，D错误。 故选B。 18．(24-25高二下·广东佛山·期末)刚果红是一种染料，它可与像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物，但不与水解后的纤维二糖、葡萄糖等发生这种反应。图为土壤中几种纤维素分解菌在刚果红培养基上形成的透明圈，其中a、b、c、d表示四种菌落。下列叙述错误的是（　　） A．取样时用到的纸袋、铁铲和采集的土壤等都需进行灭菌处理 B．纤维素分解菌产生的纤维素酶可以分泌到细胞外发挥作用 C．图中的接种方法为稀释涂布平板法，一个菌落一般来源于一个活菌 D．纤维素分解能力与透明圈和菌落的直径比值正相关，因此d最高效 【答案】A 【详解】A、采集土壤时，用于取样的纸袋、铁铲需灭菌处理， 但采集的土壤不能灭菌，否则会杀死土壤中的纤维素分解菌，A错误； B、纤维素分解菌产生的纤维素酶是胞外酶，可分泌到细胞外发挥作用，分解环境中的纤维素，B正确； C、图中菌落分布均匀，接种方法为稀释涂布平板法，在稀释度足够高时，一个菌落一般来源于一个活菌，C正确； D、透明圈的大小反映了纤维素分解菌产生纤维素酶的能力和相对数量，透明圈越大，说明纤维素分解菌产生纤维素酶的能力越强，因此菌落d中的菌株分解纤维素能力最强，其能力大小可用单菌落周围透明圈直径和单菌落直径的比值表示，D正确。 故选A。 19．(24-25高二下·广西崇左部分学校·期末)在小麦丰收的季节，人们经常焚烧秸秆致使火焰四起，烟雾弥漫，这不但会导致严重的雾霾，还会造成资源浪费。为了解决这个问题，研究人员努力寻找分解秸秆中纤维素的微生物，实验流程如图甲所示。图乙是培养出的单菌落示意图。下列叙述正确的是（    ） A．图甲中选择培养要用以葡萄糖作为唯一碳源的选择培养基 B．制备的培养基一般要进行高压蒸汽灭菌，接种工具须经消毒处理 C．据图乙推测，分解纤维素能力最强的是菌落b D．若要统计每克样品中的细菌数，则应选择平板划线法 【答案】C 【分析】纤维素分解菌可以产生纤维素酶，将纤维素分解为葡萄糖。刚果红染液与纤维素可形成红色复合物，纤维素分解菌在含有刚果红染液的培养基中形成的菌落会出现透明圈，可以用来鉴别纤维素分解菌。 【详解】A、要筛选分解秸秆中纤维素的微生物，选择培养应该用以纤维素作为唯一碳源的选择培养基，A错误； B、制备的培养基一般要进行高压蒸汽灭菌，以杀死培养基中的所有微生物（包括芽孢和孢子），接种工具须经灭菌处理，B错误； C、在鉴别纤维素分解菌的培养基上，纤维素被分解后会出现透明圈，透明圈越大，说明该菌落中的微生物分解纤维素的能力越强。观察图乙可知，菌落b的透明圈的直径与菌落直径的比值最大，即分解纤维素能力最强的是菌落b，C正确； D、若要统计每克样品中的细菌数，应选择稀释涂布平板法，平板划线法不能用于计数，由于平板划线法在划线过程中细菌的数目是逐渐减少的，无法准确统计细菌数，D错误。 故选C。 20．(24-25高二下·湖南岳阳·期末)双层平板法是对噬菌体进行计数的常用方法。具体做法，在无菌培养皿中倒入琼脂含量为2%的培养基凝固成底层平板后，将琼脂含量为1%的培养基熔化并冷却至45-48℃，然后加入敏感指示菌和待测噬菌体稀释悬液的混合液，充分混匀后立即倒入底层平板上形成双层平板。培养一段时间后，在双层培养基的上层会出现透亮的无菌圆形空斑——噬菌斑，下列有关说法不正确的是（　　） A．底层培养基可以弥补培养皿底部或超净工作台不平，利于后续实验观察 B．上层培养基中琼脂浓度较低，因此形成的噬菌斑较大，更有利于计数 C．将培养基冷却到45-48℃最主要原因是防止下层固体培养基被液态化 D．底层平板凹凸不平，原因可能是温度过低导致部分培养基已经凝固 【答案】C 【分析】1、双层平板法，先在培养皿中倒入底层固体培养基，凝固后再倒入含有宿主细菌和一定稀释度噬菌体的半固体培养基。培养一段时间后，计算噬菌斑的数量。 2、双层平板法的优点：①加了底层培养基后，可使原来底面不平的玻璃皿的缺陷得到了弥补；②所形成全部噬菌体斑都接近处于同一平面上，因此不仅每一噬菌斑的大小接近、边缘清晰，而且不致发生上下噬菌斑的重叠现象；③因上层培养基中琼脂较稀，故形成的噬菌斑较大，更有利于计数。 【详解】A、底层培养基琼脂含量高（2%），凝固后形成平整基础，弥补培养皿底部或操作台不平，便于上层均匀铺展和观察噬菌斑，A正确； B、上层培养基琼脂浓度较低（1%），质地较软，允许噬菌体扩散范围更大，形成较大的噬斑，便于计数，B正确； C、上层培养基冷却至45-48℃的主要目的是避免高温杀死敏感指示菌，而非防止下层培养基融化（下层琼脂含量高，凝固温度更低，不易被液态化），C错误； D、底层平板凹凸不平可能因倒入培养基时温度过低，导致部分提前凝固而无法均匀铺展，D正确。 故选C。 21．(24-25高二下·内蒙古乌兰察布集宁一中·期末)纤维素分解菌能产生纤维素酶，纤维素在纤维素酶的作用下分解成葡萄糖。其他微生物不能产生纤维素酶，不能利用纤维素。某生物兴趣小组欲从土壤中分离纤维素分解菌，大致步骤如下：土壤取样→用液体培养基选择培养→梯度稀释→涂布培养→鉴定。使用液体选择培养基培养纤维素分解菌的原因是（    ） A．可获得大量纤维素分解菌 B．便于稀释涂布平板 C．纤维素分解菌只能在液体培养基中生长 D．用液体培养基可鉴别纤维素分解菌 【答案】AB 【分析】1、筛选纤维素分解菌应以纤维素为唯一碳源的选择培养基。 2、刚果红可以与纤维素形成红色复合物，纤维素分解菌产生的纤维素酶可以水解纤维素而使菌落周围出现透明圈，所以可以用刚果红染液鉴别纤维素分解菌。 【详解】AB、使用液体选择培养基培养纤维素分解菌，一方面可以获得大量纤维素分解菌，另一方 面便于稀释涂布平板，AB正确； C、纤维素分解菌也可以在固体培养基上生长，C错误； D、鉴别纤维素分解菌使用的是固体培养基，D错误。 故选AB。 22．(24-25高二下·江西九师联盟·期末)新型杀虫剂噻嗪酮类属于昆虫蜕皮抑制剂。通过抑制壳多糖合成和干扰新陈代谢，使害虫不能正常蜕皮和变态而逐渐死亡，具有高活性、高选择性、长残效期的特点，在杀死昆虫的同时也能造成环境污染，生物防治是重要的改善方法之一。如图为筛选高效分解噻嗪酮（MM - 1）菌株的过程。下列叙述正确的是（    ） A．研究人员可从常年生产噻嗪酮的工厂排污口附近采集土样 B．过程 a 为扩大培养，目的是增加分解噻嗪酮菌株的数量 C．用接种环将 0.2 mL 稀释液均匀涂布在培养基表面 D．LB 培养基中应含有琼脂，根据菌落特性筛选相关菌种 【答案】ABD 【分析】1、培养基的分类：（1）按物理性质分，分为液体培养基和固体培养基，固体培养基中含有凝固剂，一般是琼脂；（2）按化学成分分，分为天然培养基和合成培养．两者的区别是天然培养基成分不确定，合成培养基成分的含量是确定的；（3）按用途分，分为选择培养基和鉴别培养基。 2、接种最常用的方法是平板划线法和稀释涂布平板法．接种的目的是使聚集在一起的微生物分散成单个细胞，并在培养基表面形成单个细菌繁殖而成的子细胞群体——菌落。 【详解】A、常年生产噻嗪酮的工厂排污口处目的菌种含量较高，可以从常年生产噻嗪酮的工厂排污口采集土样，A正确； B、过程a为扩大培养，可以增加分解噻嗪酮菌株的数量，B正确； C、菌液用涂布器进行涂布接种，不用接种环，C错误； D、LB培养基除了必要的营养成分外，还需要加入琼脂，可以根据菌落的形状、大小、颜色、隆起度等筛选目的菌种，D正确。 故选ABD。 23．(24-25高二下·江苏无锡·期末)下图为一种分离厌氧纤维素降解菌的流程图。相关叙述正确的是（    ） A．纤维素化磁性纳米颗粒外层的成分是纤维素 B．候选菌扩大培养时，需进行摇床培养以增加溶解氧 C．过程③中纤维素对细菌有高亲和力，有利于纤维素化磁性纳米颗粒粘附细菌 D．该过程中纤维素降解菌合成的纤维素酶需经高尔基体加工后分泌到细胞外发挥作用 【答案】AC 【分析】动物肠道中的纤维素降解菌多数为厌氧型细菌，对其进行扩大培养时，需要减少溶解氧。 【详解】A、观察可知，纤维素化磁性纳米颗粒是由磁性纳米颗粒和纤维素组成，其外层成分是纤维素，A正确； B、实验中分离得到的是厌氧纤维素降解菌，摇床增加溶解氧会抑制这些微生物的增殖，B错误； C、纤维素对细菌细胞壁有高效亲和的作用，因此过程③中纤维素对细菌有高亲和力，有利于纤维素化磁性纳米颗粒粘附细菌，C正确； D、纤维素降解菌为原核生物，没有高尔基体，D错误。 故选AC。 24．(24-25高二下·江西赣州·期末)自生固氮菌是土壤中能独立固定空气中N₂的细菌，将玉米种子用自生固氮菌拌种后播种，可显著提高产量并降低化肥的使用量。科研人员进行了土壤中自生固氮菌的分离和固氮能力测定的研究，部分实验流程如图。下列叙述正确的是（　　）    A．配制培养基时需严格确保不含氮源，以筛选出仅依赖空气中N₂生长的自生固氮菌 B．采用平板划线法对菌落计数，应选择菌落数在30~300之间的3个平板进行计数，求出平均值 C．若在④的平板上统计的菌落平均数量为126个，则每克土壤中含有的固氮菌为1.26×106个 D．拌种可减少化肥的使用量，原因是自生固氮菌能够将空气中的N2转化为植物可利用的氮肥 【答案】AD 【分析】1、释涂布平板计数法的原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。统计平板上的菌落数，就能推测样品中大约含有多少活菌。 2、计算公式：每克样品中的菌株数=（C÷V）×M（C代表某一稀释度下平板生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积，M代表稀释倍数）。 【详解】A、自生固氮菌能够独立固定空气中的N2作为氮源，为了筛选出仅依赖空气中N2生长的自生固氮菌，配制培养基时需严格确保不含氮源，A正确； B、采用稀释涂布平板法对菌落计数时，应选择菌落数在30 - 300之间的3个平板进行计数，求出平均值；而平板划线法不能用于菌落计数，B错误； C、从图中可知，稀释倍数为105，若在④的平板上统计的菌落平均数量为126个，接种量为0.1mL，则每克土壤中含有的固氮菌为126÷0.1×105=1.26×108个，C错误； D、自生固氮菌能够将空气中的N2转化为植物可利用的氮肥，所以拌种可减少化肥的使用量，D正确。 故选AD。 25．(24-25高二下·江西金太阳·期末)实验人员常用滤膜法测定大肠杆菌的数目以确定水样是否符合饮用水卫生标准。相关实验流程如图所示，其中指示剂伊红—亚甲蓝可使大肠杆菌菌落呈现紫黑色，无菌操作下将10mL待测水样加入90mL无菌水中，稀释后的菌液通过滤膜法测得的EMB培养基上的菌落数均值为124，紫黑色菌落数均值为37。已知我国《生活饮用水卫生标准》规定，每升水样中大肠杆菌数量不得高于3个。下列叙述错误的是（    ） A．与过滤有关的操作都要在酒精灯火焰旁进行 B．EMB培养基属于选择培养基 C．滤膜紧贴在培养基上，属于微生物培养中的培养步骤 D．根据实验数据推测，该水样符合饮用水卫生标准 【答案】BCD 【分析】选择培养基是指允许特定种类的微生物生长，同时阻止或抑制其他微生物生长。 【详解】A、与过滤有关的操作都要在酒精灯火焰旁进行，以防止杂菌污染，A正确； B、该培养基中大肠杆菌菌落会呈现紫黑色，由此可鉴别大肠杆菌，但平板上的菌落不一定都是大肠杆菌菌落，其他细菌也可能在上面生长，只是不会呈现紫黑色，即EMB培养基属于鉴别培养基，B错误； C、滤膜紧贴在培养基上，属于微生物培养中的接种步骤，C错误； D、10mL原水样加入90mL无菌水中后，总体积为100mL（稀释10倍）。紫黑色菌落（大肠杆菌）平均为37个，对应稀释后的体积为100mL，故原水样中大肠杆菌的浓度为（37个/100mL）×10（稀释倍数）×1000mL=3700个/L，远超过国家标准，故该水样不符合饮用水卫生标准，D错误。 故选BCD。 26．(24-25高二下·陕西汉中·期末)某生物兴趣小组用下图所示的方法对酵母菌进行计数，计算得到每毫升酵母菌培养液中酵母菌的数量为3.5×108个。下列叙述错误的是（　　） A．该实验过程中需要用到涂布器 B．用该方法计数的结果通常比实际结果小 C．图中甲应该加入5mL无菌水 D．图中培养基常用湿热灭菌法灭菌 【答案】BC 【分析】稀释涂布平板法是微生物计数和纯化的常用方法，其原理基于将微生物样品进行梯度稀释后，将少量稀释液涂布在固体培养基表面，通过培养形成单菌落，进而实现计数或分离纯化。 【详解】A、据图可知，在对酵母菌进行计数时，采用的是稀释涂布平板法计数，需要用到涂布器，A正确。   B、用血细胞计数板计数时，由于计数的是活细胞和死细胞，而实际我们可能只想知道活细胞数量，且计数时会将边界上的细胞也统计在内，所以计数结果通常比实际结果大，B错误。   C、从图中可知进行了6倍稀释，若要得到每毫升酵母菌培养液中酵母菌的数量为3.5×108个的结果，根据稀释倍数的计算，图中甲应该加入45mL无菌水，C错误； D、微生物培养中，培养基常用湿热灭菌法（高压蒸汽灭菌法）灭菌，D正确。    故选BC。 27．(24-25高二下·山东淄博·期末)火龙果在常温下极易腐败变质,产生醋味。可从火龙果上筛选优质醋酸菌种，用于火龙果深加工,筛选过程如图。下列说法正确的是（    ） A．“富集培养基” 为液体培养基, 培养时需振荡培养 B．可用紫外线照射对 “初筛” 培养基进行灭菌 C．初筛时产生了透明圈的菌落为 “符合要求” 的单菌落 D．缺少糖源时, 醋酸菌可将乙醇转化为醋酸 【答案】ACD 【分析】1、果酒的制作离不开酵母菌，酵母菌是兼性厌氧型生物，在有氧条件下，酵母菌进行有氧呼吸，大量繁殖，在无氧条件下，酵母菌进行酒精发酵。温度是酵母菌生长和发酵的重要条件，20℃左右，酒精发酵时，一般将温度控制在18~25℃，在葡萄酒自然发酵过程当中，其主要作用的是附着在葡萄皮上的野生酵母菌。 2、醋酸菌是一种好氧细菌，只有当氧气充足时，才能进行旺盛的生理活动。醋酸菌对氧气的含量特别敏感，当进行深层发酵时，即使只是短时间中断通入氧气，也会引起醋酸菌死亡。当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸；当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。醋酸菌的最适生长温度为30~35℃。 【详解】A、“富集培养基”为液体培养基，液体培养基能使营养物质与菌体充分接触，有利于微生物对营养物质的充分利用。振荡培养可以增加培养液中的溶氧量，同时使菌体与培养液充分接触，有利于微生物的生长和繁殖。醋酸菌是好氧菌，在富集培养时采用液体培养基并振荡培养，能为醋酸菌提供充足的氧气，促进其生长和繁殖，A正确； B、紫外线照射只能起到消毒的作用，不能对培养基进行灭菌。灭菌是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子；而消毒是指使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物（不包括芽孢和孢子）。对“初筛”培养基进行灭菌应采用高压蒸汽灭菌法等方法，B错误； C、产生透明圈可能是因为该菌落产生的酶分解了培养基中的某些成分，故初筛时产生了透明圈的菌落为 “符合要求” 的单菌落，C正确； D、当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸；当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸，所以缺少糖源时，醋酸菌可将乙醇转化为醋酸，D正确。 故选ACD。 28．(24-25高二下·宁夏固原·期末)早在先秦的《诗经》中，就有“中田有庐，疆场有瓜，是剥是范，献制之皇祖”的记载，其中的“菹”即“菹菜”，就是大西北地区所特有的食物——浆水酸菜。浆水酸菜中存在大量乳酸菌，人体摄入适量乳酸菌可促进有益微生物生长，抑制有害微生物生长，维持肠道菌群平衡，减少肠道疾病发生。但乳酸菌要发挥保健作用，需有足够数量的活性菌经过胃到达小肠，因此乳酸菌需具备较强的胃酸耐受能力。为此，某实验小组从老浆水中筛选出对胃酸有较强耐受力的乳酸菌株，并进行抑菌培养，流程如图所示。请回答下列问题： (1)为了满足乳酸菌生长繁殖的需求，培养基除提供碳源、氮源、水、无机盐外，还需要添加______。接种前，固体培养基需要通过______法进行灭菌。 (2)过程I中采用的接种方法是_____，需要将接种环在培养基表面连续划线，目的是_______。培养一段时间后可根据菌落的_____等特征（写出2点），来挑选目的菌株。富集培养过程中培养液的pH应控制在1.5左右，目的是______。 (3)该实验小组已筛选到了耐酸性较强的菌株JYF2和JYF3.现将JYF2和JYF3乳酸菌菌液分别置于牛津杯孔中（图2），若A、B分别表示含等量JYF2和JYF3乳酸菌菌液的牛津杯，则C表示_______。然后将A、B、C牛津杯分别放在4种培养基（表面分别涂布有大肠杆菌、沙门氏菌、铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌）上进行混合培养（图1-IV），抑菌测试结果如图3，由该实验结果可得到的结论为：______。 【答案】(1) 维生素 高压蒸汽灭菌 (2) 平板划线法 将聚集的菌体逐步稀释，分散到培养基表面，以便获得单个菌落 形状、大小、颜色、隆起程度 筛选出对胃酸有较强耐受力的乳酸菌株 (3) 含等量无菌水的牛津杯 JYF2和JYF3对大肠杆菌、沙门氏菌、铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌均有抑菌作用，且JYF2的抑菌效果更好 【分析】培养基： （1）概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出的供其生长繁殖的营养基质。 （2）营养构成：各种培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求．例如，培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素，培养霉菌时需将培养基的pH调至酸性，培养细菌时需将pH调至中性或微碱性，培养厌氧微生物时则需要提供无氧的条件。 【详解】（1）乳酸菌是厌氧菌，在培养时需要无氧环境，且培养基中需添加维生素，因为乳酸菌自身不能合成某些维生素，需要从培养基中获取。对固体培养基进行灭菌时，常用高压蒸汽灭菌法，这是因为高压蒸汽灭菌能在高温高压条件下杀灭培养基中的所有微生物，包括芽孢和孢子等耐高温的结构。    （2） 过程Ⅰ采用的接种方法是平板划线法，在平板划线时，将接种环在培养基表面连续划线，目的是将聚集的菌体逐步稀释，以便获得单个菌落。 培养一段时间后，可根据菌落的形状、大小、颜色、隆起程度等特征来挑选目的菌株，这些特征是区分不同菌落的重要依据。 富集培养过程中培养液的pH应控制在1.5左右，目的是模拟胃酸环境，筛选出对胃酸有较强耐受力的乳酸菌株. （3）在对照实验中，需要设置对照组来排除其他因素的干扰。本实验中A、B分别表示含等量JYF2和JYF3乳酸菌菌液的牛津杯，那么C应表示含等量无菌水的牛津杯，作为空白对照，这样可以对比出JYF2和JYF3乳酸菌菌液的抑菌效果。分析图3的实验结果，观察不同菌株（JYF2和JYF3）在不同致病菌（大肠杆菌、沙门氏菌、铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌）培养基上形成的抑菌圈直径，JYF2形成的抑菌圈直径大于JYF3，所以可得到结论：JYF2和JYF3对4种致病菌均有抑菌作用，且JYF2的抑菌效果更好。 29．(24-25高二下·江苏镇江六校等校联考·期末)臭鳜鱼是利用新鲜鳜鱼为原料，配以食盐、花椒等辅料，由乳酸菌等多种微生物共同发酵制得的发酵鱼制品，主要的制作流程如下： a.取新鲜鳜鱼，用鱼鳞刷刷去鱼体表面鱼鳞，再经剖腹宰杀，去除内脏和鱼鳃，用自来水和10%盐水先后清洗一次。沥水待用。 b.将鱼平整码放于鳜鱼发酵专用装置内，一桶约码放30kg，每码一层，撒上若干粒干炒过的花椒（花椒总量为鱼重量的0.1%），码放结束后在上层鱼体上放置按压板。 c.向桶内加入提前配制好的腌制液，即8%（w/v）食盐溶液，以刚好浸没按压板为宜，按压板上放置扁圆状砝码（按压重量为鱼重量的40%），用以将鱼体全部浸压于腌制液液面以下。 d.合上发酵装置顶盖，以厌氧发酵方式，8℃发酵16d。 (1)臭鳜鱼制作过程中花椒的作用有_______，压板和圆状砝码将鱼体全部浸压于腌制液液面以下的目的是_______。 (2)乳酸菌生长的最适宜的温度范围在25~37℃之间，但发酵温度却控制为8℃，是因为在8℃条件下________。 (3)市场上购买的真空包装的臭鳜鱼，在没有漏气的状态下发生了“胀袋”现象，同学A怀疑是杂菌污染导致的，同学B怀疑是乳酸菌大量繁殖导致的，你支持谁的观点并说明理由________。 (4)臭鳜鱼制作时要用适宜浓度的盐水浸过鱼体。所用盐水需煮沸，其目的是_______（答出1点即可）。为了缩短制作时间，通常会在冷却后的盐水中加入少量陈腌制液，目的是_______。 (5)科研人员尝试从自然发酵的臭鳜鱼中分离优质的清酒乳杆菌，实验流程如图：    a.步骤②需充分振荡20min的目的是_______。 b.步骤③④分离纯化微生物的方法叫________。 c.步骤④⑤所用的MRS培养基的主要成分有胰蛋白胨、牛肉膏、番茄汁、葡萄糖、碳酸钙（乳酸能与碳酸钙反应出现溶钙圈）、溴甲酚绿（pH显色剂，酸性显示黄色、碱性显示蓝绿色）、琼脂，其中为微生物提供氮源的成分有_______。 ⑤过程重复划线培养时所挑取的菌落周围应出现________。 (6)科研人员采用以下实验流程检测分离出的一株清酒乳杆菌的代谢产物，对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、腐生葡萄球菌、丁香假单胞菌等4种病原菌的抑制效果： ①取10mL灭菌的琼脂倾注于A、B、C、D培养皿底层，待琼脂凝固后在其上均匀放置4个牛津杯。 ②将4种病原菌悬液分别与营养琼脂等比例混合，取20mL分别倾注于A、B、C、D培养皿内，待琼脂凝固后拔下牛津杯，留下的小孔分别标注为1、2、3、4号（如图）。 ③向1号孔中加入？作为对照，向2、3、4号孔中分别加入100μL含有清酒乳杆菌代谢产物的液体培养基，在适宜条件下静置培养24h，结果如下图：    步骤③中“？”加入的液体是_______，根据实验结果可以得出的结论是_______。 【答案】(1) 调味，杀菌和防腐 创造无氧环境 (2)乳酸菌能产酸，低温也可抑制其他微生物的繁殖 (3)支持A的观点，乳酸菌代谢过程中不产生气体 (4) 除氧（或杀菌） 增加乳酸菌数量（相当于接种乳酸菌） (5) 让菌种均匀分布于悬液中 稀释涂布平板法 胰蛋白胨、牛肉膏 溶钙圈（黄色） (6) 100uL无菌水 清酒乳杆菌的代谢产物对丁香假单胞菌的抑制效果最好 【分析】培养基：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质，是进行微生物培养的物质基础。培养基的基本成分包括：碳源、氮源、水和无机盐。 【详解】（1）臭鳜鱼制作过程中，香辛料（花椒）和食盐的作用是都能调味，也能防腐杀菌。由于乳酸菌是厌氧微生物，腌制时将鱼整齐叠放并压实，有利于减少氧气，创造无氧环境，利于乳酸菌等的生长和繁殖。 （2）在8℃（低温）条件下乳酸菌既能产酸，也可抑制其它微生物的生长繁殖，所以发酵温度控制为8℃。 （3）乳酸菌是厌氧菌，其无氧呼吸的产物是乳酸，不会产生气体，所以不会导致 “胀袋”；而杂菌污染后，有些杂菌在无氧环境下可进行发酵产生气体（如酵母菌无氧呼吸产生CO2等），从而使真空包装的臭鳜鱼出现 “胀袋” 现象 ，因此支持A的观点。 （4）煮沸盐水可杀灭盐水中的杂菌，防止杂菌污染，也能去除盐水中的氧气，营造更适宜的厌氧环境。陈腌制液中含有大量发酵所需的乳酸菌等微生物，加入陈腌制液相当于接种乳酸菌，可增加发酵菌种的数量，从而加快发酵过程，缩短制作时间。 （5） a.步骤②需充分振荡20min的目的是让菌种均匀分布于悬液中，避免影响后续取菌液。b.由图可知，图中步骤③④分离纯化微生物的方法叫稀释涂布平板法。c.胰蛋白胨、牛肉膏含氮元素，能为微生物提供氮源。由于乳酸能够溶解碳酸钙，所以⑤过程重复划线培养时所挑取的菌落周围应出现溶钙圈（黄色）。 （6）根据题意，该实验的目的是检测分离出的一株清酒乳杆菌的代谢产物，对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、腐生葡萄球菌、丁香假单胞菌等4种病原菌的抑制效果。根据实验设计遵循的等量原则和对照性原则，步骤③中加入的液体应该是100μL无菌水作为对照组，向2、3、4号孔中分别加入100μL含有清酒乳杆菌代谢产物的液体培养基，在适宜条件下静置培养24h，由图可知，丁香假单胞菌组的抑制圈最大，说明清酒乳杆菌的代谢产物对丁香假单胞菌的抑制效果最好。 30．(24-25高二下·四川眉山仁寿县校联考·期末)磷是植物生长的重要元素，施入土壤中的磷，大多数会与Ca²⁺等阳离子结合形成难溶性磷酸盐。科研人员从贡柑果园土壤中筛选出可以将难溶性或不溶性磷转化成可溶性磷的高效解磷菌，主要流程如下图所示。回答下列问题： (1)步骤③在最后一次稀释后，在3个平板上分别滴入0.1mL稀释液，经适当培养后，得到的结果分别是39、38、37，据此计算每克土样中的活菌数为______个。运用这种方法统计的菌落数往往比活菌实际数目______（填“少”或“多”），原因是_______。 (2)步骤④中待菌落长好后，应以______为标准来挑选菌落，再进行下一步平板划线操作。通常情况下，对获得的纯菌种可以依据______（如形状、大小、颜色等）对细菌进行初步的鉴定和分类。 (3)实验中欲判断选择培养基是否起到了选择作用，需要设置______作为对照。 (4)为进一步测定初步筛选的三种菌株实际溶解磷的能力，研究人员将它们接种到特定的培养基中，并在37℃、200r·min-1摇床培养，定期取上清液，测定溶液中可溶性磷含量，得到如图的曲线。 实验中用摇床进行培养的优点是______（答2点）。本实验结果表明最优良的解磷菌株是______。 【答案】(1) 3.8×106 少 当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落 (2) 溶磷圈直径与菌落直径比值较大 菌落的特征 (3)接种等量土壤悬浮液的牛肉膏蛋白胨培养基 (4) 增加培养液中的溶氧量；使菌株与营养物质充分接触 M-3-01 【分析】微生物的营养物质主要有碳源、氮源、水和无机盐等。筛选目的微生物必须使用选择培养基。从土壤中分离微生物的一般步骤是：土壤取样、选择培养、梯度稀释、涂布培养和筛选菌株常用的接种方法主要有稀释涂布平板法和平板划线法。 【详解】（1） 步骤③进行了3次稀释，每次稀释了10倍，则共将土壤悬浮液稀释了1000倍。（39+38+37）÷3÷0.1×104=3.8×106个。由于两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，因此该数值与活菌的实际数目相比偏低。 （2）溶磷圈直径（D）与菌落直径（d）比值较大，说明细菌分解磷酸盐的能力较强，所以选择溶磷圈直径（D）与菌落直径（d）比值较大的菌落。不同的微生物具有特定的菌落特征，所以可通过观察菌落的形状、大小、颜色等特征对细菌进行初步的鉴定和分类。 （3）采用稀释涂布平板法可对高效解磷菌进行分离和计数，若要判断选择培养基是否起到了选择作用，需设置接种等量土壤悬浮液的牛肉膏蛋白胨培养基作对照，若该培养基上的微生物种类和数量多，则可证明选择培养基的选择作用。 （4） 摇床培养是实验室培养需氧微生物的常用方法，使用摇床培养，不仅可以增大培养液中溶氧量，促进微生物的有氧呼吸，而且能够增加菌体与培养液的接触，有利于物质交换，提高营养物质的利用率。根据实验曲线图，培养相同时间后，M-3-01的上清液中可溶性磷含量较高，可知M-3-01实际溶解磷能力最强。 31．(24-25高二下·安徽合肥第七中学·期末)自生固氮菌是土壤中能独立固定空气中N2的细菌，将玉米种子用自生固氮菌拌种后播种，可显著提高产量并降低化肥的使用量。科研人员进行了土壤中自生固氮菌的分离和固氮能力测定的研究，部分实验流程如下图。回答下列问题： (1)步骤①土样应取自表层土壤的原因是______。 (2)下表为两种培养基的配方，步骤④应选其中的______培养基，原因是______。 培养基类型 培养基组分 Ashby培养基 甘露醇（C6H14O6）、KH2PO4、MgSO4·7H2O、NaCl、K2SO4、CaCO3、蒸馏水、琼脂 LB培养基 蛋白胨、酵母提取物、NaCl、蒸馏水、琼脂 (3)若在④的平板上统计的菌落平均数量为126个，则每克土壤中含有的固氮菌为______个。 (4)将纯化的固氮菌置于完全培养液中扩大培养48小时，经离心后收集下层细胞并转移至特定培养基中进行固氮能力的测定，筛选出固氮能力最强的菌种CM12，为进一步鉴定其固氮能力，科研人员选用发芽一致的玉米种子进行3组盆栽实验，30天后测定土壤微生物有机氮含量，结果如下。 注：CK：对照处理组；N：尿素处理组（每盆土壤浇50mL有氮全营养液：成分为在1000mL无氮植物营养液中加入0.12g尿素）：CM12：自生固氮菌CM12处理组（每盆土壤浇50mL接种自身固氮菌的无氮植物营养液）。 ①对照组（CK）的处理为______。 ②实验结果表明：施用尿素处理和接种固氮菌CM12处理均能显著增加土壤微生物有机氮含量。与CK组相比，CM12处理组土壤微生物有机氮含量增加了约______%。 【答案】(1)在富含有机质的土壤表层，有更多的固氮菌生长（或固氮菌一般为需氧型，生活在土壤表层） (2) Ashby 该培养基不含氮源，具有选择作用，自生固氮菌可以利用空气中的氮气作为氮源；LB培养基中的蛋白胨可以提供氮源，不具有选择作用 (3)1.26×107 (4) 每盆土壤浇50mL无氮植物营养液 120 【分析】培养基是人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质；分为固体培养基和液体培养基，培养基中一般含有水、碳源、氮源和无机盐，其中碳源和氮源常采用蛋白胨和牛肉膏，因为它们来源于动物原料，含有糖、维生素和有机氮等营养物质。在提供上述几种主要营养物质的基础上，培养基还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质和氧气的要求。 【详解】（1）土壤中含有丰富微生物，同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量最大、种类最多。在富含有机质的土壤表层，有更多的固氮菌生长，故步骤①土样取自当地表层土壤。 （2）表格为两种培养基的配方，步骤④应选其中的Ashby培养基，原因是该培养基不含氮源，具有选择作用，自生固氮菌可以利用空气中的氮气作为氮源，LB培养基中的蛋白胨可以提供氮源，不具有选择作用。 （3）若在④的平板上统计的菌落的平均数量为126个，则每克土壤中含有的固氮菌为126÷0.1×104=1.26×107个。 （4）①对照组的目的是排除无关变量对实验的影响，故对照组（CK）的处理为每盆土壤浇50mL无氮植物营养液。 ②由柱状图可知，空白对照组中土壤微生物有机氮含量为10，CM12处理组土壤微生物有机氮含量为22，故与对照组相比，CM12处理组土壤微生物有机氮含量增加值大概为（22-10）÷10×100%=120%。 32．(24-25高二下·辽宁丹东·期末)苹果富含矿物质和维生素，真菌X可引起苹果树腐烂病，对苹果树威胁很大，目前该病仍以化学防治为主。研究人员欲从土壤中分离筛选出能抑制真菌X的芽孢杆菌进行生物防治。分离筛选芽孢杆菌的实验流程如图所示，分析回答以下问题： (1)制备如图一所示的培养基除含有必需的水、碳源、_______等营养物质外，还需要加入_______。 (2)对培养基进行灭菌的方法是_______。图一中所示分离筛选细菌的方法是_______。所取5g土壤中加入_______mL无菌水，可得到稀释10倍的土壤悬液。 (3)经过梯度稀释和接种后，可根据培养基上菌落的_______（答出两点）等特征鉴别出芽孢杆菌，并进一步分离纯化。若103稀释倍数下的三个平板中，符合芽孢杆菌特征的菌落数分别为65个、79个、66个，则5克土壤中含芽孢杆菌数目为_______个。 (4)通过菌落特征鉴别、分离得到的芽孢杆菌抑菌效果并不相同，若要筛选出抑菌效果好的目的菌株，可将来源于不同菌落的芽孢杆菌分别接种在多个实验组平板上，并在实验组和对照组的中心A处接种等量真菌X，如图二所示。一段时间后可通过测量每个实验组与对照组间的_______之比来判断目的菌株的抑菌效果，比值越_______说明抑菌效果越好。若要进一步验证筛选出的芽孢杆菌的抑菌效果，还可将其接种于________。 【答案】(1) 氮源、无机盐 琼脂 (2) 高压蒸汽灭菌（或湿热灭菌） 稀释涂布平板法 45 (3) 形状、大小、颜色等 3.5×106 (4) A菌落（或真菌X菌落）的直径 小 感染了真菌X的苹果树 【分析】1、每克样品中的细菌数=(C÷V)×M， C 代表在一定稀释度下在平板上生长的菌落的平均数，V 代表用于涂布平板的稀释剂的体积(ML)，M表示稀释倍数。 2、菌落的特征包括：菌落的大小、形态、颜色、光泽度、透明度、质地、隆起状态、边缘特征等。不同种类的菌落的特征不一样，同种菌落在不同环境下培养的特征可能也不一样，所以菌落的特征要依据实际情况而定。 【详解】（1）培养基中基本成分有水、碳源、氮源和无机盐等，图一的培养基是固体培养基，还需要加入琼脂。 （2）常用高压蒸汽灭菌法对培养基进行灭菌处理，图一中采用稀释涂布平板法对芽孢杆菌进行分离筛选，5g土壤中加入45mL无菌水，可得到稀释10倍的土壤悬液。 （3）可以根据菌落的大小、形状等鉴别出芽孢杆菌。5克土壤中含芽孢杆菌数目为（65+79+66）÷3÷0.1×103×5=3.5×106个。 （4）实验组上接种的有不同的芽孢杆菌和真菌X，对照组只接种真菌X，芽孢杆菌的抑菌效果越好，真菌X菌落的直径越小，即一段时间后可通过测量每个实验组与对照组间的真菌X菌落的直径之比越小，说明抑菌效果越好。该研究的目的是从土壤中分离筛选出能抑制真菌X的芽孢杆菌进行生物防治，要进一步验证筛选出的芽孢杆菌的抑菌效果，还可将其接种于感染了真菌X的苹果树上，观察苹果树的生长情况。 33．(24-25高二下·四川眉山仁寿县·期末)分发酵工程在医药上的应用非常广泛，其中青霉素的发现和产业化生产进一步推动了发酵工程在医药领域的应用和发展。产黄青霉菌是一种广泛存在于自然界中的霉菌，是生产青霉素的重要工业菌种。工业上生产青霉素的发酵工程流程如图1所示。回答相关问题： (1)整个发酵过程的中心环节是________。在制备该培养基时，除了添加必要的营养成分外，还需要将pH在灭菌________（填“前”或“后”）调至________性。对产黄青霉菌进行分离纯化并计数采用了________法。 (2)欲从土壤中分离出能产生纤维素酶的纤维素分解菌，可用加入________作为唯一碳源制成的选择培养基进行分离。若将样品接种到分离纤维素分解菌的培养基上，在该培养基中需要加入的特殊染料刚果红，通过观察是否产生________来筛选纤维素分解菌。 (3)研究发现，某些青霉菌属于维生素营养缺陷型菌株，失去合成某种维生素的能力，只有在基本培养基中补充所缺乏的维生素后才能生长。某研究小组筛选出某种维生素营养缺陷型菌株，为了进一步确定该菌株的具体类型，他们把15种维生素按照不同组合分为5个小组，用5个滤纸片分别蘸取不同小组的维生素，然后覆于接种后的琼脂平板上培养一段时间。结果如表： 组别 维生素组合 1 维生素A 维生素B1 维生素B2 维生素B6 维生素B12 2 维生素C 维生素B1 维生素D2 维生素E 烟酰胺 3 叶酸 维生素B2 维生素D2 胆碱 泛酸钙 4 对氨基苯甲酸 维生素B6 维生素E 胆碱 肌醇 5 生物素 维生素B12 烟酰胺 泛酸钙 肌醇 实验结果显示1组和2组滤纸片周围产生生长圈（图2），则该营养缺陷型大肠杆菌不能合成的维生素是________。若该菌株为叶酸和生物素的双营养缺陷型大肠杆菌，则其在培养基上形成菌落的位置是________。 【答案】(1) 发酵罐内发酵 前 酸 稀释涂布平板 (2) 纤维素 透明圈 (3) 维生素B1 3与5的交界处 【分析】发酵工程一般包括菌种的选育、扩大培养、培养基的配制、灭菌、接种、发酵、产物的分离和提纯等方面。纯化微生物的方法有平板划线法和稀释涂布平板法。从土壤中分离出能产生纤维素酶的纤维素分解菌，应用纤维素作为唯一碳源制成选择培养基进行分离。 【详解】（1）整个发酵过程的中心环节是发酵罐内的发酵过程，即图中的发酵罐中发酵。在制备培养基时，应在灭菌前将pH调至酸性，因为产黄青霉菌适宜在酸性环境中生长。对微生物进行分离纯化并计数常采用稀释涂布平板法。 （2）欲从土壤中分离出能产生纤维素酶的纤维素分解菌，可用纤维素作为唯一碳源制成选择培养基进行分离，因为只有能分解利用纤维素的微生物才能在该培养基上生长。在分离纤维素分解菌的培养基中加入刚果红，刚果红能与纤维素形成红色复合物，当纤维素被纤维素酶分解后，刚果红 - 纤维素的复合物就无法形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，通过观察是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。 （3）营养缺陷型菌株是指野生型菌株经过人工诱变或自然突变失去合成某种营养的能力，只有在基本培养基中补充所缺乏的营养因子后才能生长。观察表格中 15 种维生素的分组情况，发现维生素B1只在 1 组和 2 组中存在，其他组均无。因为实验结果显示 1 组和 2 组滤纸片周围产生生长圈，这意味着只有在含有维生素B1的条件下该菌才能生长，所以可以推断出该营养缺陷型大肠杆菌不能合成的维生素是维生素B1。已知该菌株为叶酸和生物素的双营养缺陷型大肠杆菌，观察表格可知叶酸只在 3 组，生物素只在 5 组，所以只有在同时含有叶酸和生物素的区域，即 3 与 5 的交界处，该菌株才能生长并形成菌落。 34．(24-25高二下·四川达州普通高中·期末)曾经被广泛使用的除草剂草甘膦是一种有机磷农药，但是草甘膦残留对环境和人类健康都存在很大的危害。某科研小组从生产草甘膦的工厂附近采集土壤样品，并从中成功分离出了能高效降解草甘膦的巨大芽孢杆菌，其主要流程如图所示。请据图回答下列问题： (1)配制好的培养基通常可以使用_____法灭菌。从功能上看，步骤③的培养基属于________培养基。 (2)步骤③⑤都采用摇床进行震荡培养，震荡对微生物培养的作用是______。 (3)步骤④培养时，需要将固体平板倒置，其原因是一方面防止皿盖上的水珠落回培养基造成污染，另一方面是_______。 (4)步骤④的固体平板长出来的菌落______（填“一定”或“不一定”）是草甘膦降解菌。分别挑取步骤④的固体平板上的菌落，接种于步骤⑤的液体培养基中。A、B、C三个锥形瓶中的初始草甘膦浓度______（填“相同”或“不相同”）。培养相同时间后，可以通过肉眼观察步骤⑤的液体培养基的______初步判断菌体密度大小；最后利用HPLC检测______以判断相应菌株降解草甘膦能力的大小。 【答案】(1) 湿热灭菌（高压蒸汽灭菌） 选择 (2)增大培养基中的溶解氧、有利于营养物质的充分利用 (3)防止培养基中的水分过快挥发 (4) 不一定 相同 浑浊程度 草甘膦剩余量（浓度） 【分析】选择培养基只允许特定的微生物生长，所以甲图中的选择培养基应以乐果为唯一碳源，培养基冷凝后应将平板倒置，以防冷凝水落入培养基造成污染。平板划线法一般多用于菌种的纯化，对混合菌进行分离；稀释涂布平板法一般多用于筛选菌株，可以计数，可以观察菌落特征。乙图中 D/d越大说明菌株的分解能力越强。 【详解】（1）配制好的培养基通常可以使用湿热灭菌（高压蒸汽灭菌）法灭菌，高热蒸汽灭菌法是湿热灭菌法的一种。从功能上看，步骤③的培养基属于选择培养基，通过该培养基可以筛选出分解草甘膦的微生物。　 （2）步骤③⑤都采用摇床进行震荡培养，震荡对微生物培养的作用表现为一方面可以增大培养基中的溶解氧满足微生物对氧气的需求，另一方面通过振荡可以使微生物和营养物质充分混合，进而有利于营养物质的充分利用。 （3）步骤④培养时，需要将固体平板倒置，其原因是一方面防止皿盖上的水珠落回培养基造成污染，另一方面是防止培养基中的水分过快挥发。进而有利于微生物的生长。 （4）步骤④的固体平板长出来的菌落“不一定”是草甘膦降解菌，因为可能滋生自养微生物和利用草甘膦分解中间产物的微生物。分别挑取步骤④的固体平板上的菌落，接种于步骤⑤的液体培养基中。A、B、C三个锥形瓶中的初始草甘膦浓度相同，因为草甘膦的浓度属于无关变量，应该相同且适宜，此时的自变量为不同的微生物。培养相同时间后，可以通过肉眼观察步骤⑤的液体培养基的浑浊程度初步判断菌体密度大小，浑浊程度越大说明微生物越多；最后利用HPLC检测草甘膦剩余量（浓度）以判断相应菌株降解草甘膦能力的大小，进而筛选高效降解草甘膦的微生物。 35．(24-25高二下·黑龙江牡丹江第二高级中学·期末)盐碱地中含有丰富的耐盐碱自生固氮菌。固氮菌能固定氮气，提高土壤的氮含量，为植物生长提供充足的氮元素。研究人员采用改良的培养基，分别从氯碱土、盐碱土和草滩土中分离筛选出具有一定耐盐碱能力的自生固氮细菌，并研究了酸碱度对其生长情况的影响。回答下列问题： (1)取土样分离自生固氮菌时，所用培养基应该为不含_______的选择培养基。 (2)步骤③所用的接种方法是_______。若在接种后的平板上统计的菌落数平均为168个，则每克土壤中含有的固氮菌数目约为_________个，该结果比实际结果_______（填“大”或“小”），原因是：________。 (3)对不同土壤样品重复分离过程，得到 HY - 4、MZ - 1、JB - 2 三个纯化的自生固氮菌品种，利用这三个品种研究 pH 对其生长情况的影响，得到如下表所示结果。 pH 品种 OD值 pH=6.5 pH=7.5 pH=8.5 pH=9.5 pH=10.5 pH=11.5 HY - 4 0.242 0.419 0.687 0.570 0.463 0.304 MZ - 1 0.272 0.424 0.719 0.585 0.470 0.347 JB - 2 0.283 0.432 0.739 0.597 0.495 0.433 注：OD 值表示吸光度。OD 值越大，表明菌株固氮能力越强。 根据以上结果，可以得出的结论是：________。 【答案】(1)氮源 (2) 稀释涂布平板法 1.68×107 小 当两个或多个细胞连在一起时，在平板上观察到的是一个菌落 (3)三种固氮菌的固氮能力随pH的增加，先增强后减弱；在相同pH下，JB - 2的固氮能力最强 【分析】微生物常见的接种的方法：①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落；②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。 【详解】（1）由于分离的是自生固氮菌，是能够独立进行固氮的微生物，故所用培养基应该为不加氮源的选择培养基。 （2）根据平板中菌落的分布情况可知，步骤③所用的接种方法是稀释涂布平板法，若在接种后的平板上统计的菌落数平均为168个，稀释度为104倍，则每克土壤中含有的固氮菌数目约为(168÷0.1) ×104=1.68×107，当两个或多个细胞连在一起时，在平板上观察到的是一个菌落，故统计的结果比实际结果小。 （3） 根据表格的相关数据进行分析，对HY-4、MZ-1、JB-2三个纯化的自生固氮菌品种的固氮能力进行比较，发现三种固氮菌的固氮能力随pH的增加，先增强后减弱，但是在相同pH下，JB-2的固氮能力最强。 36．(24-25高二下·贵州黔西南州·期末)某个高温日，某校三位高中学生相约去吃冰激凌，之后两人都出现腹泻现象，于是他们怀疑冰激凌中的大肠杆菌含量超标。老师建议他们利用学过的有关微生物培养的知识对此冰激凌进行检测。经过一番资料查阅，他们设计实验步骤，进行相关的实验： ①立即去卖冰激凌的小店再买一个同样品牌的同种冰激凌； ②配制伊红—亚甲基琼脂培养基（该培养基可用来鉴别大肠杆菌，生长在此培养基上的大肠杆菌菌落呈深紫色，并有金属光泽）、灭菌、倒平板； ③取10mL刚融化的冰激凌作为原液，然后按照一定倍数进行稀释； ④取上一步得到的冰激凌液0.1mL，用涂布平板法进行接种，涂布3个平板； ⑤在适宜温度下培养48h，统计所有的菌落数目及大肠杆菌菌落数目。 (1)根据实验的平行重复原则，实验步骤中存在1处不合理的地方，应该怎么做_______。 (2)我国卫生部门规定饮用水标准是1mL自来水中细菌总数不超过100个（37℃培养24h），1000mL自来水中大肠杆菌菌落数不能超过3个（37℃培养48h），则实验步骤③对冰激凌原液稀释的倍数为________（填“无需稀释”“10倍”或“102倍”……等） (3)伊红—亚甲基琼脂培养基倒平板时需等待培养基冷却后倒过来放置，原因是______。 (4)运用该方法鉴定和统计大肠杆菌菌落时，应设置两组对照组，一组为阴性对照组，具体做法是不进行涂布或者用无菌水涂布平板，目的是_________；另一组为阳性对照组，具体做法是______，目的是说明实验组培养基是否培养出了大肠杆菌。 (5)涂布了的3个平板上菌落数分别为39、38和37，据此可得出1mL冰激凌原液中的活菌数为______。 【答案】(1)选取若干个同样品牌的同种冰激凌进行检测 (2)10倍 (3)防止皿盖上的水珠滴落在培养基上，避免杂菌污染 (4) 检测培养基是否被污染 涂布大肠杆菌 (5)3.8×103个 【分析】微生物的培养计数时使用稀释涂布平板法，统计公式为：C/V×M，其中C表示平均菌落数，V表示接种到平板上的菌液体积，M表示稀释倍数。 【详解】（1）步骤①只检测一个同样品牌的同种冰激凌不能说明问题，具有偶然性，检测样品少，不能确定是某个冰激凌的质量问题还是这个品牌冰激凌的质量问题，故应该选取若干个同样品牌的同种冰激凌进行检测。 （2）我国卫生部门规定饮用水标准是1mL自来水中细菌总数不超过100个（37℃培养24h），1000mL自来水中大肠杆菌菌落数不能超过3个；而本实验取10mL刚融化的冰激凌作为原液，并且每个平板中的菌落数应该为30~300个，故则实验步骤③对冰激凌原液稀释的倍数为10倍。 （3）平板冷凝后倒过来放置可以防止皿盖上的水珠滴落在培养基上，避免杂菌污染。 （4）微生物的接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法，其中只有稀释涂布平板法可用于计数，故结合题意可知，该过程中需要用稀释涂布平板法将菌种接种到培养基中；该方法统计菌落数目时应该设置两组对照组。一组为阴性对照组，具体做法是不进行涂布或者用无菌水涂布平板，目的是检测培养基是否被污染：若阴性对照组长出菌落，证明培养基被污染；另一组为阳性对照组，具体做法是涂布大肠杆菌，目的是说明实验组培养基是否培养出了大肠杆菌。 （5）微生物的培养计数时使用稀释涂布平板法，统计公式为：C/V×M，其中C表示平均菌落数，V表示接种到平板上的菌液体积，M表示稀释倍数，根据（2）可知稀释倍数为10倍，则涂布了的3个平板上菌落数分别为39、38和37，据此可得出1mL冰激凌原液中的活菌数为（39+38+37）÷3÷0.1×10=3.8×103个。 37．(24-25高二下·福建宁德·期末)农业生产中塑料残膜在自然状态下难以降解，土壤中多种微生物能够利用塑料中的高分子有机化合物（聚乙烯）作为碳源，在其表面形成独特的群落，称为“塑料际”。科研人员进行如下图的实验过程，分离出能高效降解塑料的微生物菌株。 回答下列问题： (1)图中①获得单菌落的方法是__________，按物理性质分类，培养基A属于__________培养基，其碳源是__________。 (2)经过初筛，“塑料际”中发现g-1、f-2两种高效降解菌，为进一步比较两种菌株的降解能力，科研人员做了如下实验： 单独接种并培养 g-1菌种 f-2菌种 降解圈（直径D/mm） 3.5 1.8 根据上述实验结果，__________（填“能”或“不能”）说明该实验中g-1的降解能力强于f-2，理由是__________。 (3)水接触角是评估塑料表面亲水性变化的重要指标，水接触角越小表明塑料亲水性越强。塑料的主要化学成分具有非极性特点，经菌株g-1和f-2处理塑料薄膜后，水接触角变小。推测水接触角变小的可能原因是__________。 【答案】(1) 稀释涂布平板法 固体 聚乙烯 (2) 不能 需要测量菌落直径，计算降解圈直径与菌落直径的比值来判断菌株的降解能力 (3)这两种菌株处理塑料薄膜后，塑料的极性增强，亲水性提高，使水接触角减小，亲水性提高” 【分析】1、菌落是指由单个微生物细胞或一堆同种细胞在适宜固体培养基表面或内部生长繁殖到一定程度，形成以母细胞为中心的一团肉眼可见的、有一定形态、构造等特征的子细胞集团。各种微生物在一定条件下形成的菌落特征，如大小、形状、边缘、表面、质地、颜色等，具有一定的稳定性，是衡量菌种纯度、辨认和鉴定菌种的重要依据。 2、选择培养基是指一类根据特定微生物的特殊营养要求或其对某理化因素抗性的原理而设计的培养基。具有只允许特定的微生物生长，而同时抑制或阻止其他微生物生长的功能。 【详解】（1）图中在培养基表面获得单菌落均匀分布，这是稀释涂布平板法的操作后的菌落特征。培养基 A 能形成单菌落，说明其为固体状态，按物理性质分类属于固体培养基。实验目的是分离能降解塑料（聚乙烯，高分子有机化合物）的微生物，因此培养基需以聚乙烯作为唯一碳源，只有能降解该物质的微生物才能生长。 （2）实验仅测定了降解圈直径（D），但降解能力还与菌落直径（d）相关（通常用 D/d 比值衡量，比值越大降解能力越强），因此不能说明该实验中g-1的降解能力强于f-2。 （3）塑料主要成分为非极性物质，亲水性差（水接触角大）。经菌株处理后，水接触角变小（亲水性增强），推测菌株分泌的酶降解了塑料中的非极性成分，产生了极性的降解产物（如含羟基、羧基等极性基团的小分子），这些产物附着在塑料表面，增加了亲水性。 38．(24-25高二下·吉林吉林永吉实验高级中学等校·期末)辛基酚是一种能对人和动物内分泌功能产生不良影响的小分子有机物。科研人员欲从城市污水处理厂的污泥中筛选出辛基酚高效降解菌，操作流程如图所示，①~④表示操作步骤。回答下列问题：    (1)实验时需称量污泥土样，置于以__________为唯一碳源的培养基中进行选择培养。常采用__________法对新配制的培养基进行灭菌。 (2)步骤②需要振荡培养，其目的是__________，同时使__________，以提高营养物质的利用率。 (3)经步骤③最后一次稀释之后，若在3个平板上分别接种0.1mL稀释液，经适当培养后，得到的结果是39、38、37，则每克土样中的活菌数为__________个。 (4)步骤④的培养皿中获得了菌落。运用稀释涂布平板法统计的结果往往比实际值__________（填“多”或“少”），原因是__________。 【答案】(1) 辛基酚 高压蒸汽灭菌 (2) 提高培养液的溶解氧含量 菌体与培养液充分接触 (3)3.8×106 (4) 少 当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落 【分析】稀释涂布平板法计数原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数为30~300的平板进行计数。 【详解】（1）科研人员欲从城市污水处理厂的污泥中筛选出辛基酚高效降解菌，实验时需称量污泥土样，应置于辛基酚为唯一碳源的培养基中进行选择培养，对新配制的培养基常采用高压蒸汽灭菌法灭菌，该方法可杀灭包括芽孢在内的所有微生物。 （2）步骤②振荡培养的目的是增加培养液中的溶氧量，满足细菌有氧呼吸的需求，同时使菌体与培养液充分接触，提高营养物质的利用率，促进细菌生长繁殖。 （3）把10g土样放在90ml无菌水中，稀释了10倍， 步骤③进行了3次稀释，每次稀释了10倍，则共将土壤悬浮液稀释了104倍，则每克土样中的活菌数为：（39+38+37）÷3÷0.1×104=3.8×106个。 （4）由于两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，因此运用稀释涂布平板法统计的结果往往比实际值少。 39．(24-25高二下·江西景德镇·期末)近年来，某市水环境中发现的不同程度的抗生素残留，不仅威胁水生生物的生存，还会损害微生物的生态平衡。氧氟沙星（OFL）（C18H2OFN3O4）是一种人工合成的广谱抗菌药物，但遇到高温就会失效。某实验小组成功地从废水环境样品中分离得到能降解0FL的菌株A，筛选分离的操作过程如图所示。回答下列问题： (1)筛选能够降解OFL的菌株时富集培养基中需要加入______作为唯一碳源成氮源。 (2)利用水体中原有的细菌可去除废水中的抗生素，但这种方法的不足之处是______，因此需要筛选出降解抗生素的菌株。 (3)下列关于该实验过程中相关操作的叙述错误的是______（多选）。 A．用移液管稀释菌液时，吹吸三次的目的是使菌液与水充分混匀 B．Ⅲ过程中通过连续划线将聚集的菌种逐步稀释获得单个菌落 C．富集培养基全部配置好后装至锥形瓶进行高压蒸汽灭菌 D．微生物接种后，应在培养皿皿底做标记后倒放培养 (4)在过程Ⅲ中，可以每隔24h统计一次菌落的数目，选______时的记录作为结果，三个培养基中长出的菌落数量分别是145、168、154，故推测A中细菌的数量为1.54×109个/mL，则过程Ⅱ中的总稀释次数为______次。实际活菌数比统计结果______（“多”或“少”），原因是______。实验最终筛选出的菌株_______（“一定”或“不一定”）属于同一物种。 【答案】(1)OFL（氧氟沙星） (2)抗生素会抑制大部分细菌的生长繁殖，去除抗生素所需时间太长 (3)BC (4) 菌落数目稳定 6 多 两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落 不一定 【分析】1、稀释涂布平板法：将待测样品制成均匀的系列稀释液，尽量使样品中的微生物细胞分散开，使成单个细胞存在，再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的培养基内。 2、平板划线法：把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞，用接种环在平板表面上作多次由点到线的划线稀释而获得较多独立分布的单个细胞，并让其成长为单菌落的方法。 【详解】（1）要筛选能够降解OFL的菌株，富集培养基中应加入OFL作为唯一碳源或氮源，这样只有能够利用OFL的菌株才能在该培养基上生长繁殖。 （2）利用水体中原有的细菌去除废水中抗生素，不足之处在于水体中原有的细菌对该抗生素的降解能力可能较弱，去除抗生素所需时间太长或者不能完全降解抗生素等。 （3）A、用移液管稀释菌液时，吹吸三次的目的是使菌液与水充分混匀，A正确； B、Ⅲ过程中是通过稀释涂布平板法将菌液均匀涂布在培养基上，不是连续划线，连续划线是平板划线法的操作，B错误； C、富集培养基应先在烧杯中配置好后，再装至锥形瓶进行高压蒸汽灭菌，C错误； D、微生物接种后，应在培养皿皿底做标记后倒放培养，防止冷凝水倒流污染培养基，D正确。 故选BC。 （4）在过程Ⅲ中，每隔24h统计一次菌落的数目，应选取菌落数目稳定时的记录作为结果，这样数据更准确。已知三个培养基中长出的菌落数量分别是145、168、154，平均值为(145 + 168+154)/3 = 155，推测A中细菌的数量为1.54×109个/mL，根据公式C/V×M（C是平均菌落数，V是涂布平板时所用的稀释液的体积，M是稀释倍数），这里C = 155，V=0.1mL，1.54×109=155/0.1×M，解得M = 106，过程Ⅱ中的总稀释次数为6次。当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，所以实际活菌数比统计结果多。实验最终筛选出的菌株不一定属于同一物种，只要能够降解OFL就可能被筛选出来。 地 城 考点04 发酵工程及其应用 1．(24-25高二下·甘肃定西临洮县·期末)与传统发酵相比，下列不属于现代工业发酵的特点的是（　　） A．通常为混合菌种发酵 B．需要进行严格灭菌 C．发酵规模一般较大 D．受自然环境变化的干扰较小 【答案】A 【详解】A. 传统发酵以混合菌种的固体发酵及半固体发酵为主，现代工业发酵中所用的菌种大多是单一菌种，A错误； B. 现代工业发酵所用的培养基和发酵设备都必须经过严格的灭菌，以防止杂菌污染，B正确； C. 现代工业发酵规模大，常使用大型发酵罐进行批量生产，以提高效率和产量，C正确； D. 现代工业发酵在受控环境（如恒温发酵罐）中进行，能调节温度、pH等参数，减少自然环境（如季节变化）的干扰，D正确。 故选A。 2．(24-25高二下·河南周口商水县·期末)大豆发酵制成的豆瓣酱味道醇厚，凭借独特的风味赢得了消费者的青睐，其主要制作流程如下图所示，下列说法错误的是（　　）    A．过程①将大豆浸泡蒸熟后，可立即进行接种和保温发酵 B．前期米曲霉发酵过程中可适时通氧，但不需要再添加碳源 C．发酵时加入辣椒、盐水等辅料不仅可以调味，还能抑制杂菌生长 D．乳酸菌、酵母菌在后期发酵过程中进行无氧呼吸，其产物可增加风味 【答案】A 【分析】发酵，是指人们利用微生物，在适宜的条件下，将原料通过微生物的代谢转化为人类所需要的产物的过程。直接利用原材料中天然存在的微生物，或利用前一次发酵保存下来的面团、卤汁等发酵物中的微生物进行发酵、制作食品的技术一般称为传统发酵技术。传统发酵以混合菌种的固体发酵及半固体发酵为主，通常是家庭式或作坊式的。 【详解】A、过程①中大豆浸泡蒸熟后，不能立即接种。因为高温会杀死接种的微生物（如米曲霉），需先冷却至适宜温度（如 30-37℃）再接种，A错误； B、米曲霉是 需氧型真菌，适时通气可促进其生长繁殖；大豆本身富含淀粉、蛋白质等营养物质（碳源充足），无需额外添加碳源，B正确； C、辣椒可调味，盐水能提高发酵环境的渗透压，抑制杂菌（如腐败细菌）生长，同时不影响目标微生物（如乳酸菌、酵母菌）的活性，C正确； D、后期发酵多为无氧环境，乳酸菌无氧呼吸产生乳酸，酵母菌无氧呼吸产生酒精和二氧化碳，这些产物能赋予豆瓣酱独特风味（如酸味、酒香），D正确。 故选A。 3．(24-25高二下·吉林长春外五县·期末)下列关于发酵工程的叙述正确的是（　　） A．发酵过程中，为了避免污染，不能再向发酵罐中添加营养物质 B．等待发酵结束后，可采用过滤、沉淀等方法将菌体分离和干燥 C．单细胞蛋白是从微生物细胞中提取的蛋白质，常用作微生物饲料 D．筛选出高产柠檬酸的黑曲霉菌种后直接接种到发酵罐中进行发酵生产 【答案】B 【分析】发酵工程是指采用现代工程技术手段，利用微生物的某些特定功能，为人类生产有用的产品，或直接把微生物应用于工业生产过程的一种技术。发酵工程的内容包括菌种选育、培养基的配制、灭菌、种子扩大培养和接种、发酵过程和产品的分离提纯（生物分离工程）等方面。 【详解】A、发酵过程中，若采用补料分批发酵，可在严格无菌条件下补充营养物质，并非完全不能添加，A错误； B、发酵结束后，菌体与代谢产物分离常采用过滤、沉淀等方法，干燥后获得产品，B正确； C、单细胞蛋白是微生物菌体本身，并非提取的蛋白质，C错误； D、筛选菌种后需先进行扩大培养，再接种至发酵罐以提高效率，直接接种不符合流程，D错误。 故选B。 4．(24-25高二下·内蒙古赤峰·期末)我国许多传统美食的制作过程融合了生物发酵技术。下列叙述错误的是（　　） A．制作腐乳时加入酒可以提味、抑制杂菌生长 B．传统发酵以混合菌种的固体或半固体发酵为主 C．制作酸奶时，低温条件可以促进乳酸杆菌生长 D．制作泡菜时，加入“陈泡菜水”可缩短发酵时间 【答案】C 【详解】A、制作腐乳时，酒精能抑制杂菌繁殖，同时赋予腐乳独特风味。毛霉等主要菌种对酒精有一定耐受性，A正确； B、传统发酵技术依赖天然混合菌种，如腐乳、泡菜的制作，多采用固体或半固体发酵环境，B正确； C、乳酸杆菌的最适生长温度约为30-37℃，低温会抑制其代谢活动。制作酸奶需在适宜温度下发酵，而非低温，C错误； D、“陈泡菜水”含大量乳酸菌，可增加菌种数量，加快泡菜发酵进程，D正确。 故选C。 5．(24-25高二下·广东江门·期末)柿子具有较高的营养价值和药用价值。采用液体发酵法可酿制出醋香浓郁、酸味纯正的柿子醋，提高了柿子的经济价值。柿子醋的酿造工艺流程如图所示。下列关于柿子醋酿造过程的叙述，错误的是（    ） A．酒精发酵前可对柿子汁进行杀菌，以利于酒精发酵 B．酒精发酵和醋酸发酵的步骤都需在无氧条件下进行 C．若柿子酒的酒精度过高，应稀释后再用于醋酸发酵 D．使用人工培养的单一菌种可提升柿子醋质量的稳定性 【答案】B 【详解】A、酒精发酵前可对柿子汁进行消毒，避免混入杂菌，以利于酒精发酵，A正确； B、酒精发酵是利用的酵母菌的无氧呼吸，需要的是无氧条件，醋酸菌是需氧菌，醋酸发酵在有氧条件下进行，B错误； C、醋酸菌是好氧细菌，当氧气、糖源充足时可以将糖分解成醋酸，当缺少糖源时可以将乙醇转化为乙醛，再由乙醛转化为醋酸，因此若柿子酒的酒精度过高，应稀释后再用于醋酸发酵，避免高浓度的酒精使醋酸菌脱水死亡，C正确； D、使用人工培养的单一菌种，能避免自然菌种中杂菌的干扰（杂菌可能导致发酵异常、风味不稳定），从而提升柿子醋质量的稳定性，D正确。 故选B。 6．(24-25高二下·山东东营·期末)根霉菌是豆豉发酵的关键菌种，可将大豆蛋白分解成生物活性肽。豆豉的制备过程包括蒸煮、接种、发酵等步骤。下列说法错误的是（　　） A．根霉菌产生的蛋白酶和肽酶促进了生物活性肽的产生 B．发酵工程制作豆豉，菌种来自于空气中的霉菌孢子 C．蒸煮的目的是杀死杂菌，同时使蛋白质变性易于被根霉菌利用 D．发酵阶段根霉菌大量增殖，其它菌种的繁殖速度会影响豆豉风味 【答案】B 【分析】豆豉的制作原理与腐乳的制作类似：起主要作用的是真菌中的毛霉，适宜温度为15℃～18℃；毛霉能够产生蛋白酶和脂肪酶，将蛋白质和脂肪分别水解成小分子的肽和氨基酸、甘油和脂肪酸。 【详解】A、根霉菌分泌的蛋白酶可将大豆蛋白分解为多肽，肽酶进一步将多肽分解为更小的生物活性肽，A正确； B、发酵工程通常采用人工接种纯培养的菌种以确保发酵效率，而非依赖空气中的霉菌孢子（灭菌后的环境已清除杂菌），B错误； C、蒸煮通过高温杀死杂菌，并使蛋白质空间结构破坏（变性），便于酶分解，C正确； D、根霉菌为主菌种，其他微生物的繁殖会改变代谢产物种类，从而影响豆豉风味，D正确。 故选B。 7．(24-25高二下·辽宁葫芦岛·期末)下列关于发酵工程及其应用的叙述，错误的是（　　） A．性状优良的菌种也可通过诱变育种或基因工程育种获得 B．通过发酵工程可以从微生物细胞中提取单细胞蛋白 C．可采用过滤、沉淀等方法将微生物菌体与发酵液分离 D．啤酒发酵过程中代谢物的生成主要在主发酵阶段完成 【答案】B 【详解】A、诱变育种和基因工程育种均为菌种改良的常用方法，可得到性状优良的菌种，A正确； B、单细胞蛋白是指微生物菌体本身，B错误； C、过滤、沉淀是分离菌体与发酵液的常用物理方法（如离心或过滤），C正确； D、啤酒主发酵阶段酵母菌大量繁殖并生成主要代谢产物（如酒精），后发酵阶段以澄清和风味形成为主，D正确。 故选B。 8．(24-25高二下·甘肃武威·期末)下列有关微生物的培养和计数，叙述错误的是（　　） A．培养微生物前需在培养皿皿底或侧面做好标记 B．培养结束后可根据菌落的形状、大小、颜色等特征初步确定微生物的种类 C．某稀释度下对3个平板重复计数，测得的菌落数分别为18、234、276，求出平均值为176 D．显微镜直接计数和活菌计数法分别测定同一样品的细菌数量，前者大于后者 【答案】C 【详解】A、培养微生物前需在培养皿皿底或侧面做好标记，标记应在灭菌前完成，避免灭菌后无法标识，A正确； B、菌落的形态特征（如形状、大小、颜色等）是区分不同微生物种类的依据之一，B正确； C、稀释平板计数法要求选择菌落数在30-300之间的平板进行统计。18的数值过小，可能因误差较大被舍弃，应取234和276的平均值（255），而非三者的平均值176，C错误； D、显微镜直接计数法会统计死菌和活菌总数，而活菌计数法仅统计活菌，因此前者结果通常更大，D正确。 故选C。 9．(24-25高二下·贵州六盘水·期末)中国科学家构建了一株嗜盐单胞菌H，其酸碱耐受能力强，以糖蜜或餐厨垃圾等为原料在实验室发酵生产PHA。PHA是嗜盐单胞菌H的代谢产物，是一种重要的可降解材料，其生产工艺流程如下图所示。下列相关叙述错误的是（    ） A．发酵装置中搅拌器的主要作用是使空气和发酵液充分混合，提高原料利用率 B．依据H菌的特性可建立抗杂菌污染的开放式发酵系统，还可实现废弃物的资源化 C．发酵过程中要及时添加必需的营养组分，严格控制温度等发酵条件 D．发酵结束后，对发酵液采取适当的过滤、沉淀等方法直接获得产品PHA 【答案】D 【详解】A、搅拌可以增大溶氧量，也可以使发酵菌种与营养物质充分接触，A正确； B、依据H菌的特性可建立抗杂菌污染的开放式发酵系统，以糖蜜或餐厨垃圾等为原料在实验室发酵生产PHA，可实现废弃物的资源化，B正确； C、在发酵过程中，需随时监测培养液中的微生物数量、产物浓度等，以了解发酵进程，还要及时添加必需的营养组分，严格控制温度、pH和溶解氧等条件，C正确； D、发酵结束之后，对于菌体可采取适当的过滤、沉淀措施来分离；而对于菌体的代谢物PHA，可根据产物的性质采取适当的提取、分离和纯化措施来获得产品，D错误。 故选D。 10．(24-25高二下·河南许昌·期末)油炸臭豆腐是我国一些地方的风味小吃，制作时需要将豆腐浸入含有乳酸菌、芽孢杆菌等微生物的卤汁中发酵。下列有关叙述正确的是（    ） A．卤汁中营养物质有限，乳酸菌和芽孢杆菌主要因争夺生存空间而存在竞争关系 B．乳酸菌发酵过程中会产生大量CO2气体，这是卤汁中产生气泡的主要原因 C．卤汁中不同微生物的代谢活动产生了多种不同的代谢产物，这是赋予臭豆腐特殊风味的关键 D．提高卤汁的盐浓度，有利于所有微生物的发酵活动，从而加速制作过程 【答案】C 【详解】A、乳酸菌和芽孢杆菌的代谢类型不同，但所需某些营养物质是相同的，竞争关系除了体现在争夺生存空间外，也体现在对有限营养物质的争夺，A错误； B、乳酸菌进行无氧呼吸（乳酸发酵），产物为乳酸，不产生CO2；卤汁中的气泡可能由其他微生物（如芽孢杆菌）的代谢活动产生，B错误； C、不同微生物代谢产生的多种产物（如乳酸、氨基酸、多肽等）共同作用，形成臭豆腐的特殊风味，C正确； D、高盐浓度会抑制多数微生物的生长（如杂菌），仅耐盐微生物（如乳酸菌）可存活，因此提高盐浓度会抑制部分微生物，而非促进所有微生物的发酵，D错误。 故选C。 11．(24-25高二下·河南许昌·期末)固态发酵法是我国酿造白酒的传统方法之一，是一种利用多种天然微生物接种、固态糖化发酵同时进行、固态甑桶蒸馏的酿酒法。以高粱、小麦、大米、玉米等为原料，在蒸煮、糖化、发酵、蒸馏等主要酿造过程中采用固态基质形态生产白酒。下列有关叙述正确的是（    ） A．参与发酵过程的多种微生物之间可能存在着竞争关系 B．固态发酵法的糖化过程中主要利用了微生物产生的蛋白酶 C．生产白酒的发酵过程一般要采取密封措施以防止杂菌的污染 D．参与发酵的菌种越单一，最终生产出来的白酒品质就会越高 【答案】A 【详解】A、固态发酵法利用多种天然微生物，它们在相同环境中会争夺营养和空间，存在竞争关系，A正确； B、糖化过程是将淀粉分解为葡萄糖，需淀粉酶而非蛋白酶，蛋白酶用于分解蛋白质，B错误； C、密封的主要目的是为酵母菌无氧发酵创造条件，酒精本身可抑制杂菌，而非单纯防止污染，C错误； D、多种微生物共同作用可产生丰富风味物质，单一菌种可能降低白酒品质，D错误。 故选A。 12．(24-25高二下·安徽黄山·期末)谷氨酸棒状杆菌生长的最适 pH为7.0，通过以下代谢途径发酵生产L-谷氨酰胺。下列叙述错误的是（　　） A．发酵生产得到的L-谷氨酰胺是制味精的直接原料 B．发酵初期控制pH为7.0，后调为5.6，有利于提高L-谷氨酰胺产量 C．提高谷氨酸脱氢酶和谷氨酰胺合成酶的活性有利于提高L-谷氨酰胺产量 D．此发酵过程中需持续通入无菌空气并搅拌，以保证充足的氧气 【答案】C 【分析】1、发酵是利用微生物，在适宜的条件下，将原料经过特定的代谢途径转化为人类所需要的产物的过程。发酵过程：菌种选育→菌种的扩大培养→培养基的配制→灭菌和接种→发酵条件的控制→分离和提纯。 2、发酵工程生产的产品主要包括微生物的代谢物、酶及菌体本身。 3、产品不同，分离提纯的方法一般不同。 （1）如果产品是菌体，可采用过滤，沉淀等方法将菌体从培养液中分离出来。 （2）如果产品是代谢产物，可用萃取、蒸馏、离子交换等方法进行提取。 4、发酵过程中要严格控制温度、pH、溶氧、通气量与转速等发酵条件。 5、发酵过程般来说都是在常温常压下进行，条件温和、反应安全，原料简单、污染小，反应专一性强，因而可以得到较为专一的产物。 【详解】A、从代谢途径看，L-谷氨酰胺是该发酵的产物，可作为制味精的直接原料，A正确； B、谷氨酸棒状杆菌生长的最适pH为7.0，谷氨酰胺合成酶最适pH为5.6，因此发酵初期控制pH为7.0，有利于增加谷氨酸棒状杆菌的数量，后调为5.6，有利于提高谷氨酰胺合成酶的活性，进而提高L-谷氨酰胺产量，B正确； C、由图可知，提高谷氨酸脱氢酶和谷氨酰胺合成酶的活性有利于提高L-谷氨酰胺产量，但谷氨酸合成酶会使L-谷氨酰胺再转化为L-谷氨酸，反而降低L-谷氨酰胺产量，C错误； D、谷氨酸棒状杆菌是好氧菌，此发酵过程需持续通入无菌空气并搅拌，以保证充足的氧气，满足菌体呼吸作用和代谢的需求，D正确。 故选C。 13．(24-25高二下·江苏徐州邳州·期末)以淀粉或纤维素的水解液为原料，通过发酵获得了大量的微生物菌体，即单细胞蛋白。用酵母菌生产的单细胞蛋白可以作为食品添加剂。下列相关叙述正确的是（    ） A．纤维素水解液为微生物提供氮源 B．单细胞蛋白不含糖类、脂质和维生素 C．用酵母菌生产单细胞蛋白通常是在有氧条件下进行 D．可用蒸馏、萃取的方法分离提纯单细胞蛋白 【答案】C 【分析】单细胞蛋白指以淀粉或纤维素的水解液、制糖工业的废液等为原料，通过发酵获得了大量的微生物菌体。 【详解】A、纤维素水解产物为葡萄糖，属于碳源，不含氮元素，无法作为氮源，A错误； B、单细胞蛋白为微生物菌体，含有细胞膜（含脂质）、细胞壁（可能含多糖）及代谢产物（如维生素），B错误； C、酵母菌在有氧条件下进行有氧呼吸，繁殖快，利于大量获取菌体，C正确； D、单细胞蛋白为菌体本身，可以通过过滤、沉淀等方法分离和干燥，D错误。 故选C。 14．(24-25高二下·辽宁丹东·期末)制醋、制酒是我国传统发酵技术。以下关于传统发酵技术与发酵工程的叙述正确的是（    ） A．在葡萄酒酿制的整个过程中需要严格保证无氧环境 B．乙醇既是果酒发酵的产物，也是果醋发酵的底物，又可以抑制杂菌繁殖 C．通过酵母菌发酵获得大量菌体，从中提取单细胞蛋白可作为动物饲料或食品添加剂 D．啤酒生产的后发酵阶段是在密闭和酵母菌生长的最适温度下获得澄清、成熟的啤酒 【答案】B 【详解】A、葡萄酒酿制初期，酵母菌需有氧呼吸大量繁殖，后期才是无氧呼吸产酒精，并非整个过程严格无氧，A错误； B、果酒发酵（酵母菌无氧呼吸）产生乙醇；果醋发酵中，乙醇可被醋酸菌利用转化为醋酸，且乙醇能抑制杂菌繁殖，B正确； C、单细胞蛋白是指酵母菌等微生物菌体本身，可直接作为动物饲料或食品添加剂，C错误； D、在啤酒生产的主发酵阶段需将温度保持在酵母菌的最适生长温度，后发酵阶段需将温度保持在低温，也就是发酵温度，D错误。 故选B。 15．(24-25高二下·贵州遵义区县一中·期末)酸鲊肉是一道极具地方特色的传统发酵美食，以猪（鱼）肉为主料，通过米粉和微生物（以乳酸菌、酵母菌为主）装坛密封发酵形成独特酸香，口感软糯不腻。下列有关叙述正确的是（　　） A．发酵中酵母菌和乳酸菌呼吸会产生气体，密封发酵时应装至八成满 B．在发酵装坛之前添加一定量的食盐，可以起到调节口味和抑菌的作用 C．发酵到一定程度时，微生物产生的次生代谢物会促进微生物的生长 D．传统发酵一般是以天然的混合菌种进行固体发酵和液体发酵形式为主 【答案】B 【详解】A、乳酸菌进行无氧呼吸产生乳酸，不产生气体；酵母菌进行无氧呼吸产生酒精和CO2。如果密封发酵时装至八成满，酵母菌产生的CO2可能会使坛内压力过大，A错误；    B、在发酵装坛之前添加一定量的食盐，一方面可以调节口味，另一方面食盐可以抑制杂菌的生长，B正确；   C、发酵到一定程度时，微生物产生的次生代谢物可能会抑制微生物的生长，而不是促进，C错误； D、传统发酵一般是以天然的混合菌种进行固体及半固体发酵为主，而不是固体发酵和液体发酵形式为主，D错误。    故选B。 16．(24-25高二下·四川眉山仁寿县·期末)下列关于发酵工程的说法，正确的是（    ） A．培养基和发酵设备都必须灭菌，因为发酵工程中所用的菌种均是单一菌种 B．选育菌种是发酵工程的前提条件，该环节很大程度上决定了生产发酵产品的成败 C．通过发酵工程可以从微生物细胞中提取单细胞蛋白 D．啤酒生产过程中，主发酵结束后即可过滤、调节、分装进行出售 【答案】B 【分析】发酵工程是指利用微生物的特定功能，通过现代工程技术，规模化生产对人类有用的产品。它涉及菌种的选育和培养、产物的分离和提纯等方面。具体包括：菌种的选育，扩大培养，培养基的配制、灭菌，接种，发酵，产品的分离、提纯等环节。 【详解】A、培虽然灭菌可防止杂菌污染，但并非所有情况都需严格灭菌。例如，啤酒生产中可能采用消毒而非灭菌，且灭菌的原因并非菌种单一，而是避免污染，A错误； B、选育优良菌种是发酵成功的关键，直接影响产物质量和产量，B正确； C、单细胞蛋白指微生物菌体本身，而非从细胞中提取的产物，C错误； D、啤酒主发酵后需进行后发酵（低温、密闭条件），以完成风味物质形成和澄清，不可直接分装出售，D错误。 故选B。 17．(24-25高二下·福建福州福清·期末)L-谷氨酰胺应用广泛，可用于治疗多种疾病，也可以作为营养增补剂、调味增香剂。谷氨酸棒状杆菌生长的最适pH为7.0，通过以下代谢途径发酵生产L-谷氨酰胺。下列叙述不正确的是（　　） A．发酵结束后，可通过提取、分离和纯化措施来获得L-谷氨酰胺 B．敲除谷氨酸脱氢酶和谷氨酸合成酶基因有利于提高L-谷氨酰胺产量 C．发酵初期pH为7.0，后期调pH为5.6，有利于提高L-谷氨酰胺产量 D．取发酵样品接种，观察菌落特征，可判断发酵过程中是否发生杂菌污染 【答案】B 【详解】A、L-谷氨酰胺是细胞代谢产物，对细胞代谢产物可通过提取、分离和纯化措施来获得产品，A正确； B、由图可知，敲除谷氨酸脱氢酶和谷氨酸合成酶基因后，α-酮戊二酸无法转化为L-谷氨酸，无法合成L-谷氨酰胺，L-谷氨酰胺产量会降低，B错误； C、谷氨酸棒状杆菌生长的最适pH为7.0，谷氨酰胺合成酶最适pH为5.6，因此发酵初期控制pH为7.0，有利于增加谷氨酸棒状杆菌的数量，后调为5.6，有利于提高谷氨酰胺合成酶的活性，进而提高L-谷氨酰胺产量，C正确； D、取发酵样品用稀释涂布平板法进行接种，通过观察菌落的形态、颜色等特征，可以判断发酵过程中是否存在杂菌污染，D正确。 故选B。 18．(24-25高二下·吉林松原宁江区吉林油田高级中学·期末)下图为啤酒生产的简要流程，有关叙述合理的有（　　）    A．制麦时需浸泡大麦，可提高种子中结合水与自由水的比例 B．过程②破碎有利于淀粉与α-淀粉酶充分接触，缩短糖化时间 C．过程③要始终保持厌氧环境，以便完成酒精的生成 D．打开包装后放置的啤酒变酸且产生表面菌膜，一般可从中分离得到醋酸菌 【答案】BD 【详解】A、制麦时需浸泡大麦，可提高种子中自由水与结合水的比例，促进细胞代谢，A错误； B、糖化的目的是将麦芽中的淀粉等有机物水解为小分子物质，过程②破碎有利于淀粉与α−淀粉酶的充分接触，缩短糖化过程所用的时间，B正确； C、酵母菌是兼性厌氧微生物，在整个发酵过程③中，要先通气使酵母菌大量繁殖，然后保持严格的无菌、厌氧环境，使其无氧呼吸进行发酵，C错误； D、打开包装后放置的啤酒变酸且产生表面菌膜，这是因为醋酸菌在有氧条件下将酒精转化为醋酸，所以一般可从中分离得到醋酸菌，D正确。 故选BD。 19．(24-25高二下·吉林吉林永吉实验高级中学等校·期末)如图所示为利用微生物分解纤维素以生产燃料乙醇的基本工艺流程。下列叙述正确的是（　　） A．环节①中培养的产酶微生物能产生纤维素酶 B．NaOH预处理是为了使②获得的酶液活性降低 C．环节④中接种微生物X的常见菌种是酵母菌 D．该工艺可能会解决资源短缺及环境污染的问题 【答案】ACD 【详解】A、环节①培养的产酶微生物可产生纤维素酶，用于分解纤维素， A 正确； B、NaOH 预处理的主要目的是去除木质素、破坏纤维素的紧密结构，从而提高后来酶解的效率，并非使酶液活性降低，B 错误； C、发酵产酒精常用的菌种为酵母菌， C 正确； D、利用废纸制备燃料乙醇既可缓解资源短缺，也有利于减少环境污染， D 正确。 故选ACD。 20．(24-25高二下·河北沧州泊头文宇中学·期末)如图为利用发酵工程生产生物产品的流程图，有关叙述错误的是（　　） A．图中①②可分别表示基因工程育种和诱变育种 B．配制的培养基在进行③之前需严格灭菌，以防杂菌污染 C．③为发酵工程的中心环节，该过程需及时补充氧气并搅拌 D．若④为单细胞蛋白，可采取适当提取、分离和纯化措施获得 【答案】CD 【详解】A、发酵工程所用菌种可以从自然界中筛选出来，也可以通过诱变育种或基因工程育种获得，A正确； B、配制的培养基严格灭菌后才能用于③（发酵罐内发酵），B正确； C、③为发酵罐内发酵，是发酵工程的中心环节，若发酵过程为无氧发酵，则该过程无须补充氧气，C错误； D、单细胞蛋白是通过发酵获得的微生物菌体，若④为单细胞蛋白，可采用过滤、沉淀等方法获得，D错误。 故选CD。 21．(24-25高二下·河北邢台·期末)淡豆豉是由黑豆加工后发酵而成的，制作流程如图所示。淡豆豉味淡无盐，入药效果佳，而食用豆豉中一般会加入多种调味品，方能吃起来更入味。下列相关说法正确的是（    ） A．食用豆豉中加入的盐、白酒和香辛料等调味品有杀菌的功效 B．交替蒸煮既能杀菌，也能使黑豆中的蛋白质更易被酶水解 C．淡豆豉发酵成功后，可以从发酵菌种细胞中提取单细胞蛋白 D．黑豆中的蛋白质会在霉菌作用下分解成多肽及氨基酸 【答案】ABD 【详解】A、盐能抑制微生物生长，白酒中的酒精、香辛料中的成分有杀菌作用 ，可防止食用豆豉腐败变质，A正确； B、交替蒸煮属于高温处理，一方面能杀灭黑豆上的杂菌；另一方面高温使黑豆中的蛋白质空间结构被破坏，变得松散，更易被酶水解，B正确； C、单细胞蛋白是指微生物菌体，淡豆豉发酵成功后，发酵菌种细胞本身就是单细胞蛋白，不是从细胞中提取，C错误； D、黑豆发酵制作淡豆豉利用的微生物可产生蛋白酶等，在蛋白酶作用下，黑豆中的蛋白质会分解成多肽及氨基酸，D正确。 故选ABD。 22．(24-25高二下·江苏苏州·调研)随着哈尔滨旅游的火热，东北传统美食——大酱也走进了大家的视野。大酱以大豆为原料，主要利用米曲霉、酵母菌和乳酸菌等微生物发酵而来。图示传统大酱的制作工艺流程。下列相关叙述错误的有（    ） A．大酱富含小分子的肽和氨基酸，味道鲜美，易消化吸收，便于保存 B．煮熟利于后续发酵过程中酶发挥作用，同时也具有一定的杀菌作用 C．米曲霉、酵母菌和乳酸菌等微生物的胞内酶是大酱制作成功的关键 D．发酵过程中要随时检测微生物数量、产物浓度等以了解发酵的进程 【答案】CD 【详解】A、米曲霉能够分泌蛋白酶和肽酶，蛋白酶和肽酶可将黄豆中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸，故大酱富含小分子的肽和氨基酸，味道鲜美，易消化吸收，便于保存，A正确； B、煮熟可使大豆细胞膜失去选择透过性，有利于细胞内的物质与后续发酵过程中酶结合从而完成发酵，同时高温也具有一定的杀菌作用，防止发酵过程中杂菌污染，B正确； C、大酱制作过程中利用的是米曲霉等微生物合成和分泌到细胞外的酶，并非是胞内酶，C错误； D、题意中是传统发酵生产大酱，而传统发酵无需随时检测微生物数量、产物浓度等以了解发酵的进程，D错误。 故选CD。 23．(24-25高二下·江西上饶·期末)在微生物研究室内，科研人员为衡量一款新型免洗洗手凝胶的清洗效果，进行了凝胶洗手前后手部细菌含量检测，如图所示为凝胶洗手前的检测流程。以下关于该实验过程及相关知识的说法，不正确的是（　　） A．可依据菌落的形状、大小等特征初步判断菌种的类型 B．实验中可通过延长培养时间增加菌落数目来提高实验准确性 C．该实验过程中不需要设置空白对照平板，只需要洗手前后相互对照 D．制成10ml菌悬液，可能用到生理盐水等稀释液，目的是维持微生物细胞的正常形态 【答案】BCD 【分析】微生物常见的接种方法（稀释涂布平板法可用于微生物的计数）： ①平板划线法是将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。 ②稀释涂布平板法是将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。 【详解】A、由于菌落肉眼可见，且菌落具有种的特异性，因此，可依据菌落的形状、大小等特征初步判断菌种的类型，A正确； B、实验中不能通过延长培养时间来提高实验准确性，反而会影响实验结果的准确性，统计菌落数目通常是在菌落数目稳定时进行统计，这样可以避免因为培养时间不足导致的菌落遗漏，B错误； C、除图中操作外，还需要设置一组未接种的空白培养基进行培养，验证培养基是否被杂菌污染，C错误； D、制成10ml菌悬液，可能用到无菌水等稀释液，目的是保证微生物只是来自手，D错误。 故选BCD。 24．(24-25高二下·河北石家庄·期末)PHA是一种由微生物合成的天然可降解高分子材料。我国科学家构建了一株耐盐碱能力强的重组大肠杆菌，并利用其发酵生产PHA（甘蔗降解后的废弃液）为原料培养菌株H以合成PHA来替代传统塑料。相关叙述错误的是（　　） A．嗜盐单胞菌只能从自然界中筛选或通过基因工程育种获得 B．选育出菌种后，直接接种到发酵罐内进行发酵有利于快速获取发酵产物 C．发酵罐内发酵是发酵工程的中心环节，可适当提高盐浓度以防止杂菌污染 D．发酵结束后可采取提取、分离和纯化措施以获得PHA或单细胞蛋白 【答案】ABD 【分析】发酵工程，是指采用现代工程技术手段，利用微生物的某些特定功能，为人类生产有用的产品，或直接把微生物应用于工业生产过程的一种新技术。发酵工程的内容包括菌种的选育、培养基的配制、灭菌、扩大培养和接种、发酵过程和产品的分离提纯等方面。 【详解】A、 嗜盐单胞菌的获得途径除了从自然界中筛选或通过基因工程育种外，还可以通过诱变育种等方法获得，A错误； B、选育出的菌种不能直接接种到发酵罐内进行发酵，需要先进行扩大培养，增加菌种数量，然后再接种到发酵罐，否则不利于快速获取发酵产物，B错误； C、发酵罐内发酵是发酵工程的中心环节，因为嗜盐单胞菌耐盐，适当提高盐浓度可以抑制不耐盐杂菌的生长，从而防止杂菌污染，C正确； D、单细胞蛋白是微生物菌体，采用过滤、沉淀等方法将菌体分离和干燥，D错误。 故选ABD。 25．(24-25高二下·江苏镇江京口区江苏镇江第一中学·期末)生物技术与工程涉及许多探究与实践活动。下列相关叙述错误的是（    ） A．制作泡菜时，泡菜坛内长出的一层白膜是大量乳酸菌聚集在发酵液表面形成的 B．进行酵母菌纯培养时，若未接种的培养基表面有菌落生长，可能是培养基被污染 C．啤酒制作过程中，主发酵阶段酵母菌的大量繁殖，后发酵完成糖的分解和代谢 D．利用酵母菌发酵产生的单细胞蛋白属于分泌蛋白，可制成微生物饲料 【答案】ACD 【分析】泡菜的制作原理：泡菜的制作离不开乳酸菌。在无氧条件下，乳酸菌将葡萄糖分解成乳酸。 【详解】A、制作泡菜时，乳酸菌是厌氧菌，主要分布在发酵液内部，而液面白膜由好氧的产膜酵母菌或霉菌形成，并非乳酸菌，错误； B、未接种的培养基表面出现菌落，说明灭菌不彻底或培养基被污染，符合无菌操作原则的例外情况，B正确； C、酵母菌的繁殖、大部分糖的分解和代谢物的生成都在主发酵阶段完成，C错误； D、单细胞蛋白指微生物菌体本身（如酵母菌细胞），而非分泌到细胞外的分泌蛋白，D错误。 故选ACD。 26．(24-25高二下·湖北黄冈中学·期末)啤酒生产需经过发芽、焙烤、糖化、发酵等主要环节。糖化主要是将麦芽中的淀粉等有机物水解的过程。主要工艺流程如图所示，请回答下列问题： (1)焙烤的主要目的是________________。主发酵结束后，发酵液还不适合饮用，要在______的环境下储存一段时间进行后发酵。 (2)啤酒发酵时具有活力的酵母需达到一定数量，故在菌种活化的过程中，需定时取样，检测酵母的生长状况。某样品经2次10倍稀释，再加入等体积的台盼蓝溶液染色后，在25×16型（每个大方格有25个中方格，每个中方格有16个小方格，大方格体积为0.1mm3）血细胞计数板上计数，5个中方格共有200个酵母细胞，其中呈蓝色的酵母细胞数为80个。则该样品中活酵母细胞的密度为______个/mL。 (3)改变蛋白酶基因碱基序列，可减少发酵液中蛋白质的水解，有助于增强啤酒泡沫的稳定性，从而改善啤酒的品质。以下是某科研小组的实验： ①已知编码酵母菌蛋白酶A的PEP4基因转录的非模板链序列如下： 编码该酶的mRNA的起始密码子对应PEP4基因的碱基序列位于图中__（填“左”或“右”）端。 ②Cas9蛋白可在人工合成的RNA序列（sgRNA）引导下，在选定位点切断相应的DNA链（如图），在DNA自我连接的修复过程中产生突变。DNA序列中含NGG（N为任意碱基）的位点具有较高的编辑效率。 上述PEP4序列虚线框中共有________处可作为Cas9的优选剪切位点。Cas9的剪切位点在其NGG识别位点的_______（填“5”或“3”）侧。 ③野生型酵母可以水解酪蛋白，从而在菌落周围形成透明圈。将Cas9蛋白gRNA等处理的酵母菌接种在_______的固体培养基以初步筛选PEP4基因突变体，经培养后________的菌落符合生产要求。 【答案】(1) 杀死种子胚但不使淀粉酶失活 低温、密闭 (2)1.2×109 (3) 左 5/五 3' 酪蛋白为唯一氮源（或含酪蛋白） 无透明圈（或透明圈较小） 【分析】1.啤酒的工业化生产过程中，焙烤的主要目的是加热杀死种子，防止种子细胞呼吸消耗过多的有机物；糖化过程的目的是使淀粉分解，形成糖浆，因此该过程中发挥作用的酶主要是淀粉酶。 2.DNA的两条脱氧核苷酸链方向相反，转录时RNA聚合酶从模板链的3’开始催化mRNA的合成。 【详解】（1）啤酒的工业化生产过程中，焙烤的主要目的是加热杀死种子胚，防止种子细胞呼吸消耗过多的有机物，但此过程中，不使淀粉酶失活。主发酵结束后，发酵液通常还不适合饮用，需要在低温、密闭的环境下储存一段时间进行后发酵，才能食用。 （2）根据题目信息可知， 样品经2次10倍稀释，再加入等体积的台盼蓝溶液染色后，在25×16型血细胞计数板上计数，其中由于细胞膜具有选择透过性，台盼蓝不能进入活细胞，因此5个中方格中的细胞数为200个，呈蓝色的酵母细胞数为80个，可得活细胞数目为120个，则该样品中活酵母细胞的密度为120÷5×25÷0.1×2×102×103=1.2×109个/mL。 （3）①根据题目信息可知，图中序列为PEP4基因转录的非模板序列，因此其模板序列左侧为3’端，转录过程中子链的合成方向为5’端到3’端，需要以模板链的3’端为起点，且mRNA上密码子的读取方向为5’到3’，综上所述可得，编码该酶的mRNA的起始密码子对应PEP4基因的碱基序列位于图中左端； ②根据题目信息可知，Cas9蛋白可在人工合成的RNA序列（sgRNA）引导下，在选定位点切断相应的DNA链，且DNA序列中含NGG的位点具有较高的编辑效率（N为任意碱基），观察PEP4序列虚线框中的碱基序列，其中GG有2处，CC有3处，而CC序列的互补序列为GG，由此可得上述PEP4序列中共有5处可作为Cas9的优选剪切位点；观察图中信息可得，Cas9的剪切位点在其NGG识别位点的3’侧； ③根据题目信息“野生型酵母可以水解酪蛋白，从而在菌落周围形成透明圈”，可将Cas9蛋白gRNA等处理的酵母菌接种在以酪蛋白为唯一氮源（或含酪蛋白）的固体培养基上；由于处理过的酵母菌细胞内水解酪蛋白相关的酶基因产生突变，导致酵母菌失去水解酪蛋白的能力（或水解酪蛋白的能力下降），因此接种培养后，无透明圈（或透明圈较小）的菌落符合生产要求。 27．(24-25高二下·湖南娄底部分普通高中·期末)科研人员从变质豆浆中分离出腐败菌，并研究乳酸链球菌素对腐败菌的抑制效果，以为豆浆保质提供依据。请结合研究过程回答下列问题： (1)将2种市售豆浆A、B和自制豆浆在无菌操作台上分别装入已灭菌的250mL三角瓶中，密封、37℃条件下，放置7d后，豆浆变质。取变质的豆浆在无菌条件下接种到细菌培养基上，一段时间后，统计各培养基上菌落种类和数量，结果如表： 细菌序列 菌落特征 菌落直径/mm 菌落数/个 豆浆A 豆浆B 自制豆浆 S1 表面有白色绒毛，圆形边缘不规则 5 5 3 7 S2 白色，表面无绒毛，有白色液滴 1-2 18 11 24 S3 白色，表面无绒毛，如同黄色液斑 20-30 11 7 15 从3个样品中各取1mL变质豆浆，用_______进行适度稀释后，取0.1mL样品液滴加到细菌培养基表面，用_________（此工具常使用前采用_______法进行灭菌）使之分布均匀。表中统计的菌落数比往往比活菌的实际数目_________，这是因为__________。细菌培养基通常利用_______法进行灭菌； (2)区分菌落种类的依据是__________。统计菌落时要每隔24h观察统计一次，直到各类菌落数目稳定，以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的种类和数目。 (3)以自制的新鲜豆浆为材料，经相应处理后，在37℃下放置35d后，统计豆浆中腐败菌数量，结果如图。 乳酸链球菌素是一种多肽。 为有效防止豆浆腐败，在生产中乳酸链球菌素的添加量应控制在_________mg·kg-1左右；结果表明，最不能耐受乳酸链球菌素的细菌是_______（填序号）。 【答案】(1) 无菌水 涂布器 灼烧灭菌 少 两个或多个细胞连在一起只形成了一个菌落 高压蒸汽灭菌 (2)菌落的形状、隆起程度和颜色等 (3) 250 S3 【详解】（1）稀释涂布平板法基本操作：用无菌水等比例稀释，取0.1 mL菌液，滴加到培养基表面，将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中，将涂布器放在火焰上灼烧，待酒精燃尽、 涂布器冷却后，再进行涂布，用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。 稀释涂布平板法用途：常用来统计样品中活菌的数目。当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。值得注意的是，统计的菌落数往往比活菌的实际数目少，这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。 常用的消毒和灭菌方法包括湿热灭菌、灼烧灭菌和干热灭菌。其中湿热灭菌是一种利用沸水、流通蒸汽或高压蒸汽进行灭菌的方法。其中高压蒸汽灭菌的效果最好，实验室常用的高压蒸汽灭菌锅对细菌培养基进行灭菌。灼烧灭菌是将微生物的接种工具，如涂布器、接种环、接种针或其他金属用具，直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧，可以迅速彻底地灭菌。 （2）区分菌落种类的依据是菌落的特征，包括菌落的形状、大小、颜色、表面特征（光滑或粗糙）、边缘特征（如整体或不规则）等。 （3）由图可知，乳酸链球菌素添加量在100-150 mg/kg范围内，三个组的细菌数量随着乳酸链球菌素添加量的增加而减少，并且S3组的细菌减少幅度最大。当乳酸链球菌素添加量至250 mg/kg时，三个组的细菌数量均将至最低值，且三个组的细菌数量不会随着乳酸链球菌素添加量的增加而改变，处于稳定状态。 28．(24-25高二下·山西运城·期末)生活中常用的塑料袋，其主要成分是聚乙烯，不溶于水，被腐蚀会形成微塑料。为了减少微塑料的产生，科学家从啮噬米袋的蜡虫肠道内分离出能降解聚乙烯的芽孢杆菌YP1。回答下列问题。 (1)将蜡虫肠道液进行培养时，要用以聚乙烯作为______的培养基，原因是______。 (2)实验中所用到的培养皿、试管和培养基均需要进行灭菌处理。其中不能使用干热灭菌法灭菌的是______，原因是______(答出两点即可)。 (3)除降解塑料的微生物菌株的分离提纯应用外，开发新的塑料替代品也是解决“白色污染”的重要途径。羟基脂肪酸酯(PHA)是一种重要的可降解材料，它具有类似于合成塑料的理化特性。中国科学家构建了一株嗜盐单胞菌H，以糖蜜或餐厨垃圾为原料在实际发酵工程中生产了PHA。发酵工程的中心环节是______，发酵结束之后，采取适当的提取、分离和______措施获得PHA。 【答案】(1) 唯一碳源 该培养基允许能降解聚乙烯的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长 (2) 培养基 ①干热灭菌法会使培养基中的水分蒸发 ②干热灭菌温度过高导致培养基营养成分被破坏 (3) （发酵罐内）发酵 纯化 【分析】1、培养基的制作过程是：计算、称量、溶化、调整pH、分装、灭菌．倒平板冷凝后，应将培养皿倒置。 2、选择培养基是指通过培养混合的微生物，仅得到或筛选出所需要的微生物，其他不需要的种类在这种培养基上是不能生存的。 【详解】（1） 从蜡虫肠道液中选择培养聚乙烯分解菌，培养基应以聚乙烯为唯一的碳源。在该培养基允许能降解聚乙烯的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长，进而起到选择作用。 （2）实验中所用到的培养皿、试管和培养基均需要进行灭菌处理。其中不能使用干热灭菌法灭菌的是培养基，这是因为，干热灭菌法一方面会使培养基中的水分蒸发，另一方面干热灭菌温度过高导致培养基营养成分被破坏。 （3）（发酵罐内）发酵是发酵工程的中心环节，发酵过程中要随时检测培养基中的温度、溶解氧、营养物质等的变，否则会影响产物的种类和含量，发酵结束之后，采取适当的提取、分离和纯化措施获得PHA，提纯方法的施用依赖PHA的理化性质。 29．(24-25高二下·甘肃平凉第一中学·期末)在闽东地区，利用红釉（酒曲）酿酒，进而酿制籼醋，是传统的发酵技术。工厂化的啤酒生产，要依赖现代发酵工程。下图是传统制醋和啤酒工厂化生产的工艺流程图。酒曲含有霉菌、酵母菌、乳酸菌；醋醅含有醋酸菌；糖化即淀粉水解过程。请回答下列问题： (1)制醋过程中，加入酒曲后要拌曲，即使用一定器具搅拌糯米饭和酒曲的混合物，其目的是___________。 (2)酒精发酵结束后加入醋醅，进行醋酸发酵，需要改变的环境条件是___________。 (3)啤酒生产过程中，菌种的选育非常关键。性状优良的菌种，除了可以从自然界中筛选出来，还可以通过___________获得。 (4)传统酒曲的制作过程中，受原料、微生物等因素的影响，酒曲稳定性较差。在现代工业生产中，常用发酵工程来生产果酒果醋，发酵工程的中心环节是___________，在发酵过程中，需随时检测培养液中的___________等，以了解发酵进程。 【答案】(1)增大微生物与糯米饭的接触面积，有利于微生物的生长和发酵。 (2)通入氧气和适当升高温度 (3)诱变育种、基因工程育种 (4) 发酵罐内发酵 微生物数量、产物浓度。 【分析】1、果酒的制作离不开酵母菌，酵母菌是兼性厌氧微生物，在有氧条件下，酵母菌进行有氧呼吸，大量繁殖，把糖分解成二氧化碳和水；在无氧条件下，酵母菌能进行酒精发酵。故果酒的制作原理是酵母菌无氧呼吸产生酒精，酵母菌最适宜生长繁殖的温度范围是18～30℃。 2、果醋制作中起到主要作用的微生物是醋酸菌，醋酸菌是一种好氧细菌，只有当氧气充足时，才能进行旺盛的生理活动，其代谢类型属于异养需氧型。当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解为醋酸；当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。醋酸菌的最适生长温度为30～35℃。 【详解】（1）制醋过程中，酒曲中含有霉菌、酵母菌、乳酸菌等微生物。拌曲（搅拌糯米饭和酒曲的混合物）能够增大微生物与糯米饭的接触面积，这样可以让微生物更充分地利用糯米饭中的营养物质，有利于微生物的生长和发酵过程的进行。 （2）酒精发酵是在无氧条件下由酵母菌完成的，而醋酸发酵是由醋酸菌进行的，醋酸菌是好氧细菌，需要在有氧条件下才能将酒精转化为醋酸。同时，醋酸菌生长和发酵的适宜温度比酵母菌酒精发酵时的温度高（醋酸菌适宜温度为 30 - 35℃，酵母菌酒精发酵适宜温度为 18 - 30℃）。所以酒精发酵结束后加入醋酯进行醋酸发酵，需要改变的环境条件是通入氧气和适当升高温度。 （3）在微生物育种中，性状优良的菌种，除了从自然界中筛选（如通过选择培养基等方法筛选特定功能的菌种）外，还可以通过诱变育种（利用物理因素如紫外线、X - 射线等，或化学因素如亚硝酸等处理菌种，使其发生基因突变，从中筛选优良性状的菌种）、基因工程育种（将目的基因导入受体菌种细胞中，定向改造菌种的遗传特性，获得优良性状的菌种）等人工方法获得。 （4）发酵工程的中心环节是发酵罐内发酵，在发酵过程中，为了了解发酵进程，需要随时检测培养液中的微生物数量（如通过显微镜直接计数法、稀释涂布平板法等测定活菌数量）、产物浓度（如测定果酒发酵中的酒精浓度、果醋发酵中的醋酸浓度等）等。 30．(24-25高二下·江苏东台·期末)啤酒工业化生产要通过发酵工程来实现，请回答下列问题： (1)啤酒是以大麦为主要原料经酵母菌发酵制成的，啤酒的工业化生产的原理是______。 (2)啤酒工业化生产过程如图1所示，若用_______溶液处理大麦种子，无需发芽就可以产生α-淀粉酶，图中会使α-淀粉酶失活的过程是______。发酵过程中酵母菌的繁殖、酒精的大量生成分别发生在______、______阶段。用于接种的酵母菌可来自______（填序号：①自然界中筛选而来②诱变育种获得③基因工程育种获得），经过______后再加入发酵罐中。    (3)图2所示发酵罐，冷却水进入口和排出口分别是______（填图中序号）。3为搅拌叶轮，在啤酒发酵过程中的作用是______。    (4)啤酒发酵时具有活力的酵母需达到一定的数量，故在菌种活化的过程中，需定时取样，检测酵母的生长状况。若某次样品经2次10倍稀释后，经台盼蓝染色（体积不计），在25×16型血细胞计数板（规格为1mm×1mm×0.1mm）上计数______色细胞，5个中格中的细胞数为244个，该样品中活酵母细胞的密度为______个/mL。 【答案】(1)酵母菌无氧呼吸产生酒精 (2) 赤霉素 蒸煮 主发酵 主发酵 ①②③ 扩大培养 (3) 1、2 使菌种和培养液充分混合 (4) 无 1.22×109 【分析】参与果酒制作的微生物是酵母菌，其新陈代谢类型为异养兼性厌氧型。果酒制作的原理：（1）在有氧条件下，酵母菌进行有氧呼吸大量繁殖；（2）在无氧条件下，酵母菌进行无氧呼吸产生酒精和二氧化碳。 【详解】（1）啤酒的工业化生产的原理是酵母菌无氧呼吸产生酒精。 （2）若用赤霉素溶液处理大麦种子，无需发芽就可以产生α-淀粉酶，蒸煮会使α-淀粉酶失活，发酵过程中酵母菌的繁殖、酒精的大量生成都发生在主发酵阶段。用于接种的酵母菌可来自①自然界中筛选而来②诱变育种获得③基因工程育种获得，经过扩大培养后再加入发酵罐中。 （3）图2所示发酵罐，冷却水进入口是1，排出口是2，3为搅拌叶轮，在啤酒发酵过程中的作用是使菌种和培养液充分混合。 （4）细胞膜具有选择透过性，台盼蓝不能进入活细胞，因此染色后用血细胞计数板计数时对应无色细胞进行计数。若某次样品经2次10倍稀释后，在25×16型血细胞计数板上计数，若5个中格细胞数为244个，则该样品中活酵母细胞的密度为244÷5×25÷0.1×102×103=1.22×109个细胞/mL。 31．(24-25高二下·四川广安·期末)柠檬酸作为食品添加剂，具有调节酸味、抗氧化护色、防腐抑菌等作用。工业上主要是通过黑曲霉发酵生产。黑曲霉是一种丝状真菌，食品工业以红薯粉为原料经黑曲霉发酵获得柠檬酸，如图为生产柠檬酸的简要流程图，回答下列问题： (1)为了获得黑曲霉菌种的纯培养物，在配制培养基时，要将各种成分熔化装瓶后进行________灭菌。图甲中将黑曲霉菌种接种到培养基A的方式为________，其具体的操作过程如图乙所示，其中操作正确的是________（填序号）。 (2)已知配制的培养基C中成分有蛋白胨、葡萄糖、氯化钠、磷酸二氢钾、水等，其中蛋白胨可提供________（至少答出两点）。 (3)从自然界中筛选分离出来的黑曲菌种用于生产柠檬酸产量较低，要获得高产柠檬酸的优良菌种，可以采用诱变育种或________育种。在发酵装置中搅拌器的作用是________（答出两点）。 (4)在工业上生产柠檬酸过程中，通常以一定的速度不断添加新的培养基，同时又以同样的速度放出旧的培养基，可大大提高生产效率。从微生物培养的角度分析，其目的在于________。在培养基C中完成发酵后还要采取________措施来获取柠檬酸产品。 【答案】(1) 湿热或高压蒸汽 平板划线法 ①③④⑤ (2)碳源、氮源和维生素 (3) 基因工程 增加培养液中的溶解氧，使菌种与培养液充分接触 (4) 保证微生物对营养物质的需求，排出部分代谢产物，使微生物保持较长时间的快速生长 提取、分离和纯化 【分析】发酵工程是指采用现代工程技术手段，利用微生物的某些特定功能，为人类生产有用的产品，或直接把微生物应用于工业生产过程的一种新技术。发酵工程的内容包括菌种的选育、培养基的配制、灭菌、扩大培养和接种、发酵过程和产品的分离提纯等方面。 【详解】（1）培养基灭菌常用高压蒸汽灭菌或湿热灭菌法。培养基A是固体平板，接种方式看操作，图里是平板划线法。 ①灼烧接种环，①正确； ②在平板划线法接种时，不需要完全握住瓶塞。通常采用无名指和小指夹住含菌试管或三角瓶的瓶塞 ，在接种过程中，将试管口或三角瓶口靠近酒精灯火焰旁，通过手指的力量可以轻松拔出和塞回瓶塞 。这样操作既方便灵活，又能保证在无菌环境下进行接种，防止杂菌污染。②错误； ③试管口过火焰，③正确； ④握住棉塞上部，用接种环取菌，④正确； ⑤试管口通过火焰进行消毒灭菌并塞棉塞，⑤正确； ⑥划线操作不能将培养皿盖打开放到一边，只需打开一条缝即可，⑥错误； ⑦划线法不能首尾相连，⑦错误； ⑧平板培养时应倒置，⑧错误。 所以正确的序号是①③④⑤。 （2）蛋白胨在培养基中提供碳源、氮源、维生素（生长因子），这三个是常见的。 （3）高产菌株的育种，除了诱变，还可以基因工程。发酵罐里的搅拌器作用是增加培养液中的溶解氧；使菌种与培养液充分接触。 （4）不断添加新的培养基，同时又以同样的速度放出旧的培养基，可大大提高生产效率，原因是保证微生物对营养物质的需求，排出部分代谢产物，使微生物保持较长时间的快速生长。发酵后获取柠檬酸，因为柠檬酸是代谢产物，在培养基C中完成发酵后还要采取提取、分离和纯化等措施。 32．(24-25高二下·福建泉州鲤城区福建泉州第七中学·期末)藏猪在恶劣环境中形成了优良特性，该特性与其肠道中特殊的微生物菌群有关。研究人员以藏猪盲肠内容物作为菌种来源，分离得到若干单菌落，再采用牛津杯法从上述菌种中筛选出一株抵抗金黄色葡萄球菌和大肠杆菌活性最强的细菌。经鉴定，该菌株为枯草芽孢杆菌，并命名为TS。 (1)从藏猪盲肠内容物分离得到单菌落的过程，可采用______溶解盲肠内容物制成菌液，进而采用______法将菌液接种于固体培养基表面。该实验需在______（填“有氧”“无氧”或“有氧无氧均可”）环境下操作才能获得单菌落。 (2)牛津杯法是实验室常用的抑菌实验之一，先将牛津杯（圆形小管）竖直立在已经凝固的不含营养物质的琼脂凝胶平板（下层板）上，再向牛津杯周围倒入混有______作为指示菌的培养基（上层板），待培养基完全凝固后用镊子将牛津杯取出，用移液器向牛津杯制造的小孔中分别加入待测菌发酵液和对照液，如图是利用牛津杯法筛选出TS时的操作处理，孔A、B、C、D中应加入的物质______，每次用移液器吸取不同试剂前，需要_________。培养一段时间后，测量小孔周围抑菌圈的大小，可反映出待测菌抑菌活性的大小。预期实验结果为：_________。 (3)可利用发酵工程大规模生产TS产生的抑菌活性物质，_____是发酵工程的中心环节。在该过程中，要随时检测培养液中的微生物数量、______等，以了解发酵进程。并且往往以一定的速度不断添加新的原料，同时又以同样的速度放出旧的原料，目的是_____。 【答案】(1) 无菌水 平板划线法或稀释涂布平板法 无氧 (2) 金黄色葡萄球菌和大肠杆菌 A处加入无菌发酵液，B、C、D处加入等量含不同种类待测菌的发酵液，其中一种是含TS的发酵液 更换新的灭菌枪头 A处无抑菌圈，B、C、D处加入TS发酵液的位置抑菌圈最大 (3) 发酵罐内发酵 代谢产物浓度 保证微生物能持续利用营养物质，维持稳定的生长环境 【分析】由题干信息可知：牛津杯法的过程是先将牛津杯（圆形小管）竖直立在已经凝固的不含营养物质的琼脂凝胶平板（下层板）上，再向牛津杯周围倒入混有指示菌的培养基（上层板），待培养基完全凝固后用镊子将牛津杯取出，用移液器向牛津杯制造的小孔中分别加入待测菌发酵液和对照液，培养一段时间后，测量小孔周围抑菌圈的大小，从而反映出待测菌抑菌活性的大小。 【详解】（1）微生物培养过程中，需要无菌环境，应使用无菌水溶解盲肠内容物制成菌液，进而采用平板划线法或稀释涂布平板法将菌液接种于固体培养基表面。结合题意可知，研究人员以藏猪盲肠内容物作为菌种来源，盲肠内是无氧环境，因此该实验在无氧环境下操作才能获得单菌落。 （2）该实验是为了筛选出一株抵抗金黄色葡萄球菌和大肠杆菌活性最强的细菌，所以上层板的培养基中应混有金黄色葡萄球菌和大肠杆菌作为指示菌。要利用牛津杯法筛选出TS，其简单原理是利用待测菌发酵液和对照液培养一段时间后，测量小孔周围抑菌圈的大小，从而判断待测菌抑菌活性的大小。根据图3中的示意图可知A处加入无菌发酵液，B、C、D处加入等量含不同种类待测菌的发酵液，其中一种是含TS的发酵液。为了防止杂菌污染，每次用移液器吸取不同试剂前，需要更换新的灭菌枪头。预期实验实验结果为A处无抑菌圈，B、C、D处加入TS发酵液的位置抑菌圈最大。 （3）发酵工程的中心环节是发酵罐内发酵，在该过程中，要随时检测培养液中的微生物数量、代谢产物浓度等，以了解发酵进程。以一定的速度不断添加新的原料，同时又以同样的速度放出旧的原料，目的是保证微生物能持续利用营养物质，维持稳定的生长环境。这样可以避免因营养物质耗尽而导致微生物生长受到抑制，从而提高发酵效率，使发酵过程能够持续、稳定进行。 33．(24-25高二下·河北衡水桃城区衡水第二中学·期末)甜瓣子是豆瓣酱的重要成分之一。用蚕豆瓣和米曲霉制成豆瓣曲，再向曲中加入一定量的盐水制成酱醅，经发酵即可获得甜瓣子。某研究团队对发酵阶段传统工艺（盐度15%，温度37℃，发酵30天）进行改良，提升了甜瓣子风味。两种工艺的结果比较如图所示。回答下列问题：      (1)蚕豆瓣能为米曲霉的生长提供_____（填“碳源”“氮源”或“碳源和氮源”），将蚕豆瓣和米曲霉混合，相当于微生物培养中的_____。盐水的作用有_____（答出2点）。 (2)发酵过程中滋生的细菌往往会破坏甜瓣子的风味。细菌和米曲霉在细胞结构上最主要的区别是_____，该过程中米曲霉和细菌之间因争夺营养物质、空间等而具有_____的种间关系。 (3)新工艺建立了分段发酵模式，即前期盐度6%、温度12℃，中期盐度6%、温度37℃，后期盐度15%、温度37℃。前期较低温度可保持较高的_____总数，中后期温度升高则增强了_____的活性从而增加了氨基酸态氮的含量。据图分析，工艺改良后，甜瓣子风味得以提升与最终的_____有关。 【答案】(1) 碳源和氮源 接种 调味、抑制杂菌生长（或 “调节渗透压” 等合理答案 ） (2) 细菌无成形细胞核（或 “米曲霉有成形细胞核，细菌没有” ） 种间竞争 (3) 活霉菌 酶 活细菌总数降低、氨基酸态氮含量增加 【分析】实验结果显示，新工艺发酵前、中期霉菌和细菌的活菌数均高于传统工艺，因而微生物生长旺盛，进而导致发酵结果表现为氨基酸态氮含量高，因而新工艺比传统工艺风味提升。 【详解】（1）蚕豆瓣富含有机物，能为米曲霉提供碳源和氮源，满足其生长需求。将蚕豆瓣和米曲霉混合，是把米曲霉接入到含有营养物质（蚕豆瓣）的环境中，这和微生物培养中的接种操作一致。盐水加入后，一方面能调节风味起到调味作用，另一方面高盐环境可抑制杂菌生长，避免杂菌污染影响发酵，也可调节发酵体系的渗透压。 （2）米曲霉是真菌，属于真核生物，有成形的细胞核；细菌是原核生物，无成形细胞核，这是二者在细胞结构上最主要的区别 。发酵过程中，米曲霉和细菌都需要营养物质、空间等资源，会相互争夺，这种因争夺资源产生的种间关系就是种间竞争。 （3）从图中可知，前期较低温度时活霉菌总数相对较高，所以前期较低温度可保持较高的活霉菌总数。中后期温度升高，米曲霉等微生物产生的酶活性增强，能更有效地分解有机物，使氨基酸态氮含量增加 。工艺改良后，活细菌总数降低可减少杂菌对风味的破坏，氨基酸态氮含量增加能提升风味，所以甜瓣子风味提升与最终的活细菌总数降低、氨基酸态氮含量增加有关。 34．(24-25高二下·广东东莞·期末)东莞作为“中国荔枝之乡”，拥有悠久的荔枝种植历史。某生物科技公司利用当地盛产的糯米糍荔枝，开发出具有岭南特色的荔枝果酒。以下为该公司荔枝果酒发酵生产的简化工艺流程。 荔枝鲜果→清洗去核→打浆榨汁→果汁调配（加蔗糖+果胶酶）→灭菌→接种酵母→主发酵→固液分离→后发酵→陈酿→过滤装瓶 请回答下列问题： (1)从呼吸作用类型看，酵母菌属于__________型微生物。 (2)相较于普通酿酒酵母，从东莞本地荔枝果皮中筛选的野生菌株具有__________的优势。果汁调配时添加蔗糖的主要目的是__________。 (3)大部分糖的分解和代谢产物的生成在__________（填流程环节）完成。生产中发现发酵液表面出现白色膜状物，排查发现装置有漏气现象，发酵液pH值下降，推测可能被__________（填“乳酸菌”或“醋酸菌”）污染。 (4)为提高荔枝果酒的产量和品质，可采取的措施有__________（答出2点即可）。 【答案】(1)兼性厌氧 (2) 更适应荔枝果汁的营养环境（或“产酒效率高”、“风味物质合成能力强”） 提供酵母菌发酵所需碳源，提高酒精产量（或提高酒精的浓度和甜度） (3) 主发酵 醋酸菌 (4)①定期检测发酵液的酒精度和pH，及时调整发酵条件；②对酵母菌进行诱变育种，筛选高产菌株；③控制陈酿时间和温度，促进风味物质形成 【分析】如果发酵产品是微生物细胞本身，可在发酵结束之后,采用过滤、沉淀等方法将菌体分离和干燥,即可得到产品。如果产品是代谢物，可根据产物的性质采取适当的提取、分离和纯化措施来获得产品。 【详解】（1）从呼吸作用类型看，酵母菌属于兼性厌氧型微生物。 （2）相较于普通酿酒酵母，从东莞本地荔枝果皮中筛选的野生菌株具有更适应荔枝果汁的营养环境的优势。果汁调配时添加蔗糖的主要目的是提供酵母菌发酵所需碳源，提高酒精产量（或提高酒精的浓度和甜度）。 （3）大部分糖的分解和代谢产物的生成在主发酵完成。生产中发现发酵液表面出现白色膜状物，排查发现装置有漏气现象，发酵液pH值下降，可能被醋酸菌污染，因为酵母菌可以进行有氧呼吸产生CO2，发酵液pH值下降。而乳酸菌进行无氧呼吸且不会产生气体，不可能是乳酸菌污染。 （4）为提高荔枝果酒的产量和品质，可采取的措施有①定期检测发酵液的酒精度和pH，及时调整发酵条件；②对酵母菌进行诱变育种，筛选高产菌株；③控制陈酿时间和温度，促进风味物质形成。 试卷第1页，共3页 3 / 3 学科网（北京）股份有限公司 学科网（北京）股份有限公司 学科网（北京）股份有限公司 $