四川成都七中万达学校等校2025-2026学年下学期高2024级半期考试生物试卷

**基本信息** 成都七中万达学校高2024级半期生物试卷，以微生物发酵、基因工程等核心知识为载体，通过泡菜制作、CRISPR-Cas9技术等真实科研情境，考查学生科学思维与探究实践能力，适配期中阶段性检测需求。 **题型特征** |题型|题量/分值|知识覆盖|命题特色| |----|-----------|----------|----------| |单选题|30/45|微生物培养（题1-5）、细胞工程（题11-15）、基因工程（题20-30）|结合实验操作（如平板划线题4），考查操作规范与原理分析| |非选择题|4/55|综合实验（纤维素分解菌筛选题31）、基因工程应用（抗寒基因转移题34）|设计完整科研流程（如题34从引物设计到转化检测），体现科学探究与态度责任|

成都七中万达学校 2025-2026 学年下期高 2024 级半期考试 生物答案 一、单选题：本题共 30 小题，每小题 1.5 分，共 45 分。 题号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 答案 C B C B C B C D C B 题号 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 答案 C A B C B A D C B D 题号 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 答案 D D D C B B C B A D 二、非选择题：本题共 4 小题，共 55 分。 31 ．（13 分） (1) 获得纯净的微生物培养物 干热灭菌 消毒 纤维素 (2) 稀释涂布平板法 当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落（2 分） 偏大 显微镜计数法将死菌也计数在内 (3) 甲 甲菌落产生的透明圈大，乙菌落产生透明圈较小 1.2×108（2 分） 32 ．（12 分，每空 2 分） (1) 细胞膜的流动性和植物细胞的全能性 (2) 纤维素酶和果胶酶 PEG 诱导融合（高 Ca2＋-高 pH 诱导融合） 异源融合的原生质体可互补缺陷从而存活 (3) 培养基中植物激素的种类和比例不同 次生 33 ．（12 分） (1) 核糖体 胞吐 (2) 免疫前小鼠 细胞融合 克隆化培养和抗体检测（2 分） 小鼠腹腔 (3) 不同 棕色的深浅与样品中 PTH 含量呈正相关（2 分） (4) PTH 的 1~6 氨基酸组成的多肽（2 分） 34 ．（18 分，每空 2 分） (1) ①④ （都答对给分） 5′ Mun Ⅰ (2) EcoR Ⅰ和 Sph Ⅰ （答出其中一个给 1 分，有错误不给分） DNA 连接（酶） (3) Ca2+ 氨苄青霉素 BD （答出其中一个给 1 分，有错误不给分） (4) 寒冷 学科网（北京）股份有限公司 $ 成都七中万达学校 2025-2026 学年下期高 2024 级半期考试 生物试卷 满分：100 分 时间：75 分钟 一、单选题：本题共 30 小题，每小题 1.5 分，共 45 分。在每小题给出的四个选项中，只有一项是符合题目要求的。 1 ．在制作发酵食品的学生实践中，控制发酵条件至关重要。下列相关叙述正确的是 A ．泡菜发酵后期，尽管乳酸菌占优势，但仍有产气菌繁殖，需开盖放气 B ．果酒与果醋发酵时温度宜控制在 18-25℃ , 泡菜发酵时温度宜控制在 30-35℃ C ．制作果酒的葡萄汁不宜超过发酵瓶体积的 2/3 ，制作泡菜的盐水要淹没全部菜料 D ．葡萄果皮上有酵母菌和醋酸菌，制作好葡萄酒后可直接通入无菌空气制作葡萄醋 2 ．某科研小组分别用 3 种不同浓度的食盐制作泡菜，如图是活动小组记录的亚硝酸盐含量与发酵天数的关系图。下列叙述正确的是 A ．泡菜制作过程中亚硝酸盐的含量只与食盐溶液浓度有关 B ．前 4 天亚硝酸盐含量增多可能是其他细菌大量繁殖导致的 C ．根据曲线图可知三种食盐溶液浓度下取食泡菜的最佳时间相同 D ．亚硝酸盐是乳酸菌的代谢产物，后期含量降低是乳酸菌数量降低所致 3 ．为测定某种大肠杆菌对糖类的需求情况，某兴趣小组配制了如下培养基： 成分 NaCl KH2PO4 K2HPO4 （NH4）2SO4 MgSO4 . 7H2O 琼脂 质量（g） 1 0.5 0.5 2 0.2 20 同时配制质量分数为 10%的葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、乳糖溶液。实验操作流程如下：将大肠杆菌悬液与熔化并冷却至 50℃的固体培养基混匀，倒平板；通过无菌操作分别向平板中加入蘸有不同糖类的无菌滤纸片，待平板吸收干燥后倒置培养，观察大肠杆菌菌落的生长情况。下列叙述正确的是 A ．上表中的培养基属于固体培养基且不含碳源，说明大肠杆菌是自养型微生物 B ．倒平板时应将打开的培养皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上 C ．培养基中 KH2PO4 等的作用之一是作为缓冲剂保持 pH 稳定 D ．该实验已经形成了相互对照，不需要保留若干个不加入糖类，但加入等量无菌水的平板，待平板吸收干燥后倒置培养作为对照 4 ．为了调查某河流的水质情况，某研究小组利用两种不同方法对该河流水样中的细菌进行分离，结果分别如图甲、乙所示。下列叙述正确的是 第 1 页 共 12 页 学科网（北京）股份有限公司 A ．图甲对应平板划线法，连续划线操作未将聚集的菌种稀释 B ．图乙对应涂布平板法，若想要获得图乙所示结果，则一般要对水样进行稀释 C ．若采用图甲对应方法对细菌进行计数，则应选择菌落数为 30～300 的平板进行统计 D ．图乙中的一个菌落由一个活菌生长发育而来，统计结果用活菌数表示 5．微生物培养常常需要测定微生物的数量，常用的方法有活菌计数法和显微镜直接计数法。下列有关微生物计数的叙述，错误的是 A ．活菌计数法就是通过统计平板上的菌落数，推测样品中大约含有多少活菌 B ．血细胞计数板常用于相对较大的酵母菌细胞、霉菌孢子等的计数 C ．活菌计数法因为观察的是菌落，所以统计值往往比活菌的实际数目偏高 D ．在同一稀释度下，应至少对 3 个菌落数目在 30～300 的平板进行计数 6 ．为提高葡萄酒品质，科研人员利用如图所示技术流程，筛选出发酵速度快、具有较强酒精耐受力优良酿酒酵母，其能在 WL 培养基（含有指示剂溴甲酚绿）上形成奶油状略带绿色、球形的菌落。而酒精耐受力弱的酵母，因代谢改变 pH 值导致培养基颜色变化。下列相关说法正确的是 注：YPD 培养基和 WL 培养基是酵母菌培养常用培养基 A ．Ⅲ属于选择培养基，依据其上生长的菌落特征，可挑选出优良酵母菌种 B ．进行酒精耐受力检测时，需重新制备添加不同浓度酒精的 YPD 培养基 C ．颜色变化大的培养基中的酵母菌，即为有较强酒精耐受力优良酿酒酵母 D ．Ⅰ 、Ⅱ均为液体培养基，图中重复操作可提升酿酒酵母的酒精发酵能力 7 ．吃腐烂水果可能会出现头晕、恶心、呕吐或更严重的症状，这可能与微生物代谢产生的毒素有关。某研究小组致力于研究健康饮食，设计实验探究腐烂苹果不同区域微生物的种类和数量以及烂果毒性，实验基本步骤如图所示。请据此判断下列说法正确的是 A ．根据本实验探究目的，步骤二接种采用的工具是接种环 第 2 页 共 12 页 学科网（北京）股份有限公司 B ．步骤三在适宜环境下培养 8 小时即可统计出不同菌液中全部微生物的种类和数量值 C ．若菌落的种类和数量均为①>②>③>④>⑤ , 则离腐烂部位越远的果肉中毒素含量越低 D ．若编号为⑤的部位微生物的数量极少，则切掉①~④后的苹果就可以放心食用 8 ．啤酒生产的工艺流程如图所示。下列叙述错误的是 A ．焙烤的目的是加热杀死种子胚但不使淀粉酶失活 B ．糖化阶段淀粉酶可催化淀粉分解 C ．主发酵结束后应将发酵液置于低温密闭环境中储存 D ．后发酵阶段完成大部分糖的分解和代谢物的生成 9 ．发酵工程在食品工业、医药工业和农牧业等许多领域得到了广泛的应用，形成了规模庞大的发酵工业。下列相关叙述错误的是 A ．从酵母菌的纯培养物中获取的单细胞蛋白可制成微生物饲料 B ．乳酸发酵前期产生的乳酸会抑制杂菌生长，积累过多也会抑制乳酸菌 C ．青霉菌是生产青霉素的常用菌种，常采用过滤、沉淀等方法获取青霉素 D ．谷氨酸棒状杆菌是生产谷氨酸的常用菌种，在弱碱性条件下发酵会积累谷氨酸 10．发酵工程是指采用现代工程技术手段，利用微生物某些特定功能，为人类生产有用的产品。常用好氧菌谷氨酸棒状杆菌利用图 1 的发酵罐来大量生产味精，发酵流程如图2 所示。下列叙述正确的是 A ．通过发酵工程可以从微生物细胞中提取单细胞蛋白 B ．为了保证发酵产品的产量和品质，图中发酵配料及发酵罐需经过严格的灭菌 C ．图中发酵过程需通入无菌空气，并通过搅拌使培养液与菌种充分接触后关闭通气口 D ．发酵中所使用的谷氨酸棒状杆菌菌种可从自然界筛选也可通过诱变育种、杂交育种获得 11．某农业科技公司为抢救濒危药用植物“红豆杉” ，启动了组织培养快速繁殖项目。在实验中，技术人员发现：当外植体取自树皮部位时，脱毒效果差；而取自茎尖分生组织时，可获得高纯度脱毒苗。同时，为研究生殖细胞全能性，团队还进行了花粉离体培养实验。下列关于该过程的叙述，错误的是 第 3 页 共 12 页 学科网（北京）股份有限公司 A ．外植体脱分化过程中，细胞逐渐失去原有形态和功能特异性，形成不定形的薄壁组织团块 B ．再分化阶段，若培养基中细胞分裂素与生长素比例较高，则有利于芽的形成，但会抑制根的发育 C ．单倍体植株幼苗经秋水仙素处理后恢复可育性，体现了植物生殖细胞的全能性 D ．选择茎尖分生组织作为外植体获得脱毒苗，是因为该区域的病毒极少，甚至无病毒 12．毛花猕猴桃为二倍体，果实大，维生素 C 含量高。软枣猕猴桃为四倍体，极耐寒，在-40℃下可安全越冬。农科所想利用下图技术流程培育兼具这两种猕猴桃优点的新品种。下列叙述正确的是 A ．人工诱导原生质体融合的方法有电融合法、离心法等 B ．新品种的体细胞含有 3 个染色体组，不可育 C ．植物体细胞杂交技术成功的标志是杂种细胞再生出细胞壁 D ．该技术属于有性杂交育种，能克服远缘杂交不亲和障碍 13 ．胡萝 卜（2n=18）具有清热解毒的功效，羊角芹（2n=12）有祛风止痛的功效。科研人员利用胡萝 卜、羊角芹进行育种，如图为部分育种流程。下列分析正确的是 A ．用秋水仙素处理植株①的种子或萌发的幼苗可使其染色体数目加倍 B ．获得植株③的过程中利用了愈伤组织的细胞具有分裂旺盛的特点 C ．获得植株④时需用生长素与细胞分裂素比值低的培养基诱导生芽、根 D ．植株⑤的生殖细胞中含有 15 条染色体，共 1 个染色体组 14 ．诱导多能干细胞（iPSCs）在生物医药领域有广阔的应用前景。研究人员利用多种小分子化合物协同诱导小鼠胎儿成纤维细胞，成功获得 iPSCs 。相关叙述错误的是 A ．利用胰蛋白酶处理小鼠胎儿某些组织可获得分散的成纤维细胞 B ．小分子化合物改变了小鼠胎儿成纤维细胞的基因表达 C ．小鼠胎儿成纤维细胞形成 iPSCs 的过程属于细胞分化 D ．培养小鼠胎儿成纤维细胞和 iPSCs 时需提供一定浓度的 CO2 15 ．多种肿瘤细胞表面的CD47 含量比正常细胞高 1.6～5倍，导致巨噬细胞对肿瘤细胞的清除效果减弱。为解除 CD47 对巨噬细胞的抑制作用，研究人员按如下流程制备了抗 CD47的单克隆抗体。相关叙述正确的是 A ．过程①可一次性注射较大剂量的 CD47 ，以提高小鼠的免疫效果 第 4 页 共 12 页 学科网（北京）股份有限公司 B ．灭活病毒表面的糖蛋白和一些酶能与细胞膜上的糖蛋白发生作用，诱导细胞融合 C ．过程②和过程③筛选出的杂交瘤细胞，染色体数目和产生的抗体一定相同 D ．将单克隆抗体加入巨噬细胞的培养液中，能解除 CD47 对巨噬细胞的抑制作用 16 ．下图表示一种治疗乳腺癌的抗体—药物偶联物（ADC）的作用机制。下列叙述错误的是 A ．ADC 中的药物可与癌细胞表面的特定抗原特异性结合 B ．ADC 可被溶酶体降解并释放出药物达到选择性杀伤 C ．ADC 可能引起癌细胞中某些基因的表达增强，导致细胞凋亡 D ．ADC 在临床上具有靶点清楚、毒副作用小等优点 17．我国科学家经过多年的反复试验，攻克了导致体细胞克隆猴失败的障碍，开发出如图所示的培育流程。该技术中研究人员可以在 10s 之内对卵母细胞进行去核，在 15s 之内将体细胞注入去核的卵母细胞。下列说法错误的是 注：Kdm4d 是组蛋白去甲基化酶， TSA 是组蛋白脱乙酰酶抑制剂 A ．灭活的仙台病毒所起的作用是诱导体细胞和去核卵母细胞融合 B ．Kdm4d 的 mRNA 和TSA 可改变组蛋白的表观遗传修饰，调控基因表达 C ．对卵母细胞进行快速的去核和注入体细胞操作可以大大减少对卵母细胞的伤害 D ．该过程涉及动物细胞核移植等生物工程技术，同时说明了动物体细胞具有全能性 18 ．“三亲试管婴儿” 的培育过程可选用如下技术路线。下列叙述正确的是 A ．卵母细胞捐献者携带的红绿色盲基因能够遗传给“三亲婴儿” 第 5 页 共 12 页 学科网（北京）股份有限公司 B ．“三亲婴儿” 的遗传物质来自提供细胞核的母亲和提供精子的父亲 C ．该技术可避免母亲的线粒体遗传病基因传递给后代 D ．通常用灭活的病毒诱导精子和卵母细胞融合实现体外受精 19 ．多种方法获得的早期胚胎，均需移植给受体才能获得后代。下图列举了几项技术成果，下列叙述正确的是 A ．受体须是健康的、同品种的、生理状况相同的雌性动物 B ．①②技术中均可用 Ca2+载体处理，但作用对象不同 C ．①③技术中需取内细胞团进行性别鉴定，方可获得相应的奶牛或山羊 D ．③可通过①②技术实现大量生产具有相同遗传背景的动物，①②可通过③技术实现性状改良 20．利用基因工程赋予生物以新的遗传特性，或创造出更符合人类需要的生物产品时，需要使用多种工具酶，有 4 种限制性核酸内切酶的切割位点如图所示。下列相关叙述错误的是 A ．限制酶主要是从原核生物中分离纯化出来的，能识别特定核苷酸序列 B ．用限制酶 SmaI 和EcoRV 切割后产生的均为平末端 C ．DNA 连接酶催化目的基因片段与质粒载体片段之间形成的化学键是磷酸二酯键 D ．含有 1 个 EcoRI 识别位点的环状 DNA ，被 EcoRI 切割后可形成 2 个 DNA 片段 21 ．CRISPR-Cas9 系统中，Cas9 蛋白与 sgRNA 形成的复合物能特异性切割 DNA ．为探究该复合物中各组分的作用，研究人员进行了如表所示的实验。下列分析错误的是 组别 处理方式 是否能切割 DNA ① 完整 Cas9-sgRNA 复合物+DNA 底物 是 ② Cas9-sgRNA 复合物经蛋白酶处理+DNA 底物 否 ③ Cas9-sgRNA 复合物经 RNA 酶处理+DNA 底物 否 ④ 从复合物中分离的 Cas9 蛋白+DNA 底物 否 ⑤ 从复合物中分离的 sgRNA+DNA 底物 否 A ．sgRNA 的碱基序列可能会与靶 DNA 某条链的部分碱基序列互补 B ．实验①和实验②对照，可说明 Cas9 蛋白是切割 DNA 所必需的 C ．与实验①相比，实验②③均采用了自变量控制中的“减法原理” D ．对比分析实验①~⑤可得出 CRISPR-Cas9 系统中各组分的具体作用 22 ．下图为“DNA 的粗提取和鉴定”实验中几个重要步骤的示意图，下列叙述错误的是 第 6 页 共 12 页 学科网（北京）股份有限公司 A ．实验的操作顺序是③②①④ , 图②中的纱布不能用滤纸代替 B ．图①的原理是 DNA 不溶于酒精，而某些蛋白质可溶于酒精 C ．图③中的鸡血细胞不可以用哺乳动物成熟的红细胞代替 D ．图④操作后加入二苯胺试剂充分振荡，可观察到颜色变蓝 23 ．研究表明，DNA 连接酶能够封闭 DNA 双螺旋骨架上的切口(图 a) ，却无法封闭缺口(图b) ，下列叙述正确的是 A ．DNA 连接酶封闭切口时，需要识别 DNA 片段特定的核苷酸序列 B ．DNA 连接酶的封闭是指催化核糖核苷酸之间磷酸二酯键的形成 C ．用限制酶产生磷酸二酯键切口时，还必须与解旋酶配合使用 D ．修复缺失的核苷酸缺口，可用DNA 聚合酶沿缺口 5 ' →3 ＇方向进行 24．目的基因的检测与鉴定是基因工程成功的关键，某科研团队将抗虫基因导入棉花细胞后，进行了一系列检测。下列检测方法与检测目的对应错误的是 A ．分子杂交技术——检测目的基因是否导入棉花细胞 B ．琼脂糖凝胶电泳——检测 PCR 扩增的目的基因片段大小是否正确 C ．抗原—抗体杂交技术——检测目的基因是否转录出 mRNA D ．抗虫接种实验——检测目的基因是否表达出抗虫蛋白质并发挥功能 25 ．基因工程中使用的载体按照来源和性质可以分为质粒载体、噬菌体载体、病毒载体等。下列有关叙述错误的是 A ．三种载体的来源不同，在大小、结构和复制方式上也有差别 B ．质粒载体均来源于原核细胞，天然质粒常需进行人工改造 C ．噬菌体载体具有严格的宿主选择性，常用细菌作为受体细胞 D ．将目的基因导入动物细胞时不宜选择质粒载体，可选择病毒载体 26 ．关于“DNA 片段的扩增及电泳鉴定”实验，下列说法错误的是 A ．根据 DNA 片段大小配制一定质量分数的琼脂糖溶液以便分离 DNA 分子 B ．待指示剂前沿迁移到达凝胶加样孔边缘时需停止电泳以防 DNA 跑出凝胶 C ．PCR 反应需在反应体系中添加一定量的无菌水，以补齐反应体系体积 D ．扩增得到的 PCR 产物与凝胶载样缓冲液混匀后需缓慢注入加样孔中 第 7 页 共 12 页 学科网（北京）股份有限公司 27 ．用氨苄青霉素抗性基因（AmpR）、四环素抗性基因（TetR）作为标记基因构建的质粒如图所示。用含有目的基因的DNA 片段和用不同限制酶酶切后的质粒，构建基因表达载体（重组质粒），并转化到受体菌中。下列叙述错误的是 A ．若用PvuI 酶切，在含 Tet（四环素）培养基中的菌落，不一定含有目的基因 B ．若用HindⅢ酶切， 目的基因转录的产物可能不同 C ．若用 SphI 酶切，可通过 DNA 凝胶电泳技术鉴定目的基因与质粒是否正确连接 D ．受体菌本身应不具有对这两种抗生素的抗性 28 ．某科研团队通过转基因获得了一种大肠杆菌（工程菌），可作为监测残留在生物组织或环境中的四环素水平的“报警器”，其监测原理如下图所示，天然大肠杆菌不含有图中所示基因。（GFP 基因是绿色荧光蛋白基因）。下列有关说法正确的是 A ．启动子 1 、2 是 DNA 聚合酶识别和结合的位点，启动基因的转录过程 B ．该转基因工程菌中的 GFP 基因表达产物不需要内质网等细胞器的加工 C ．培育“报警器” 需要构建的基因表达载体只有 GFP 基因表达载体 D ．当环境中存在四环素时，生物报警器的绿色荧光会熄灭 29 ．聚合酶链式反应（PCR）是一种在体外快速扩增特定 DNA 片段的技术。研究人员设计了 F1 、F2 、R1 、R2 四种引物用于扩增DNA 上的某基因，引物的位置如图所示。下列叙述正确的是 A ．PCR 所用的酶是一种耐高温的 DNA 聚合酶，其激活需要 Mg2+ B ．引物是一段与 DNA 母链互补的 RNA ，其序列决定扩增特异性 C ．当温度下降到 72℃左右时，两种引物通过碱基互补配对与两条单链 DNA 结合 D ．图示 PCR 第 2 次循环的产物中出现双链等长的 DNA 片段 30 ．为获得高产脂质的硅藻用于生产生物柴油，研究人员将苹果酸酶（ME）基因（长度约 第 8 页 共 12 页 学科网（北京）股份有限公司 800 bp）构建到含新霉素抗性基因的超表达载体上，导入硅藻细胞。为验证转化是否成功，以野生型基因组、转化后硅藻基因组以及重组质粒为模板，使用可特异性扩增完整 ME 基因的引物进行 PCR，对产物进行琼脂糖凝胶电泳，并测定条带亮度（相对值），结果如图所示，下列分析正确的是 A ．PCR 过程中，引物作用是使 Taq DNA 聚合酶从其 3'端开始连接核糖核苷酸 B ．为确保 ME 基因正确插入载体，需在引物 3'端加入不同的限制酶识别序列 C ．转化后硅藻基因组检测到明显条带，说明ME 基因已整合到其染色体 DNA 上 D ．为评价所获硅藻品系的生产潜力，还需检测其生长速率与胞内脂质含量 二、非选择题：本题共 4 小题，共 55 分。 31 ．（13 分）地球上的植物每年产生的纤维素超过 70 亿吨，其中40%～60%能被土壤中某些微生物分解利用。科研人员从森林土壤中筛选纤维素分解菌并计数，进行了如图所示操作。请回答下列有关问题： (1)防止杂菌污染， 是研究和应用微生物的前提，也是发酵工程的重要基础。在提取分离过程中，对吸管、培养皿通常采用 法进行灭菌，对操作的空间、操作者的衣着和手进行 。筛选时所用的培养基需添加 作为唯一碳源。 (2)图中的接种方法是 。用该计数方法得到的菌落数量比活菌的实际值小，原因是 ；若用显微镜计数法统计，结果比实际活菌数 （偏大/偏小），原因是 。 (3)可通过 （填“ 甲”或“ 乙”）菌落周围的透明圈判断其分解纤维素能力更强，判断依据是 。若将稀释倍数是 105 的菌液涂布平板，3 个平板平均菌落数分别为 111，120， 129 ，则每 1mL 菌液中活菌数为 个。 32 ．（12 分）紫花苜蓿是全世界栽培历史最悠久、利用最广泛的豆科牧草，但易造成家畜鼓胀病。百脉根富含单宁，单宁可与植物蛋白质结合，不引起家畜采食后鼓胀。为培育抗鼓胀病的苜蓿新品种，科研人员利用野生型清水紫花苜蓿和里奥百脉根为材料进行了实践研究。研究主要流程如图（注：IOA 可抑制植物细胞呼吸第一阶段，R-6G 可阻止线粒体的呼吸作用）。 第 9 页 共 12 页 学科网（北京）股份有限公司 (1)该研究应用的生物技术所依据的原理是 （写出两点）。 (2)获得原生质体最常用的方法是酶解法，先利用 去除植物的细胞壁。然后进行人工诱导使原生质体融合，人工诱导原生质体融合的化学方法为 （答一种即可）。经过过程① , 只有异源融合的原生质体能够存活的原因是：IOA 抑制百脉根原生质体及同源融合体的细胞呼吸第一阶段，R-6G 阻止苜蓿原生质体及同源融合体的线粒体呼吸作用，而 。 (3)过程③所用的培养基与②过程的主要区别是 。百脉根富含单宁，单宁不是百脉根生长和生存所必需的产物，属于 代谢物。 33 ．（12 分） 甲状旁腺激素（PTH）是一种含有 84 个氨基酸的多肽，是调节钙磷代谢的主要激素之一。临床上 PTH 被作为低钙血症等疾病的重要诊断指标。拟制备抗 PTH 单克隆抗体（单抗），并建立定量检测 PTH 的方法。 (1)PTH 在甲状旁腺细胞的 上合成，通过 作用分泌到细胞外。 (2)人工合成 PTH 肽链 1~25 氨基酸组成的多肽（A）和 39~84 氨基酸组成的多肽（B），分别用 A 、B 多次免疫小鼠。 ①取免疫后小鼠的血清，以 的血清为阴性对照，检测血清中抗 PTH 抗体的效价（效价越高表明免疫效果越好），以确保小鼠体内产生了能分泌抗 PTH 抗体的浆细胞。 ②取小鼠脾脏细胞与骨髓瘤细胞混合，加入聚乙二醇促进 ，并用特定的选择培养基进行筛选。对获得的杂交瘤细胞进行 ，经多次筛选获得 5 株能稳定分泌抗 PTH 单抗的细胞。 ③将 5 个杂交瘤细胞株分别注射到 ，一段时间后分离获得抗 PTH 单抗（用A 免疫后筛选出的 A1 ，用 B 免疫后筛选出的 B1 、B2 、B3 、B4）。 (3)经抗体配对检测后，筛选出 A1、B1 用于定量检测 PTH。将 B1 固定在固相载体上作为捕获抗体，用辣根过氧化物酶标记 A1 ，建立定量检测 PTH 的方法（如图）。 ①据图分析，捕获抗体和酶标抗体与待测样本中 PTH 的关系是捕获抗体和酶标抗体特异性结合于 PTH 的 （“相同”或“不同”）位点。 ②因为在一定范围内 ，所以可通过检测显色反应后棕色的深浅来测定 PTH 的含量。 (4)研究表明，人体内除全长 PTH 外，还存在 PTH 的 7~84 氨基酸肽段，它与全长 PTH 的生物学功能完全相反。为更准确地检测血清中全长 PTH 的含量，还应制备针对 的单抗作为酶标抗体，避免 PTH 的 7~84 氨基酸肽段的干扰。 第 10 页 共 12 页 学科网（北京）股份有限公司 34．（18 分）低温是限制农作物产量的重要胁迫因子。科学家将寒带植物中的抗寒基因 CBFs转移到拟南芥中构建拟南芥耐寒模型，用于植物低温胁迫机制的相关研究。回答下列问题： 抗寒基因 CBFs 结构图 （注：Ampr 代表氨苄青霉素抗性基因） 限制酶 识别序列 EcoRⅠ 5 ′G↓AATTC3′ BamHⅠ 5′G↓GATCC3′ SphⅠ 5 ′CGTAC↓G3′ Sau3A 5 ′ ↓GATC3′ XmaⅠ 5 ′C↓CCGGG3′ AscⅠ 5′G↓GCGCGCC3′ MunⅠ 5 ′C↓AATTG3′ (1)设计引物克隆目的基因。如图所示应选择引物 （填序号）对 CBFs 基因进行克隆，为了后续能将目的基因正确连接到载体上，应在 CBFs 基因上游引物的 端添加 （“EcoR Ⅰ”或“BamH Ⅰ”或“Mun Ⅰ”) 识别序列。 (2)根据图示 Ti 质粒的结构，应选用限制酶 切割 Ti 质粒，并通过 酶进行连接。 第 11 页 共 12 页 学科网（北京）股份有限公司 (3)用 处理农杆菌方能将重组质粒导入。在培养基中添加 来筛选成功导入 质粒的农杆菌。将拟南芥叶片浸泡在转基因农杆菌菌液中一段时间对其进行转化，然后提取叶片中的 DNA ，通过 PCR 对 CBFs 基因是否整合到拟南芥基因组中进行检测，结果如下图所示。该转基因叶片的基因组中可能已整合 CBFs 基因，PCR 结果中显示出小分子非目标条带，产生的原因可能是 （填字母）。 A ．变性温度太低 B ．复性温度太低 C ．复性温度太高 D ．引物特异性弱 (4)已获取成功转入 CBFs 基因的拟南芥植株，将其放置在 环境中检测拟南芥耐寒模型是否建立成功。 第 12 页 共 12 页 学科网（北京）股份有限公司 $