精品解析：天津宝坻一中2025-2026学年度第二学期期中检测高二生物

宝坻一中2025—2026学年度第二学期期中检测高二生物 第Ⅰ卷（共54分） 一、选择题（本题共18小题，每题3分，共54分） 1. 制作传统泡菜主要是利用天然乳酸菌进行发酵的。关于泡菜的制作，相关叙述正确的是（ ） A. 制作泡菜的过程中，应先通气使菌种繁殖，后进行密封发酵 B. 制作泡菜的盐水需要煮沸后立即倒入装有食材的泡菜坛中 C. 制作泡菜的菜坛内会长出一层白膜，是乳酸菌繁殖的结果 D. 腌制时间过短或食盐用量不足，会导致亚硝酸盐含量升高 2. 啤酒是人类最古老的酒精饮料之一，工业化生产啤酒的流程如图所示。下列叙述错误的是（ ） A. 酿制啤酒时，酵母菌发酵利用的直接底物是淀粉 B. 步骤④利用的酵母菌菌种可通过诱变育种获得 C. 步骤⑤中可采用巴氏消毒法以保证啤酒的品质 D. 发酵的温度和时间会影响啤酒的口感和风味 3. 下列关于实验室培养和纯化酵母菌过程中的部分操作叙述，错误的是（　　） A. 对培养皿进行编号或对菌种进行标注时，应使用记号笔在皿底标记 B. 倒平板时，应将打开的培养皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上 C. 纯化培养时，应将接种后的平板倒置放入适宜温度的培养箱内培养 D. 使用后的培养基在丢弃前需进行灭菌处理，以免污染环境 4. 微塑料是直径小于5毫米的塑料碎片或颗粒，其来源广泛、危害深远。科研人员从长期掩埋塑料垃圾的土壤中分离出了甲、乙两种微塑料降解菌，并利用这两种微塑料降解菌进行了相关实验，实验记录及结果如图所示。下列叙述正确的是（ ） 注：三个实验组的总菌量相同，混合菌组按照1∶1混合；残留率=剩余量/添加量×100%。 A. 可使用添加微塑料的牛肉膏蛋白胨培养基从土壤中分离出微塑料降解菌 B. 该实验结果显示，甲、乙两种微塑料降解菌在降解微塑料方面有协同作用 C. 该实验证明了两种微塑料降解菌有降解微塑料的功能，且对生态环境无害 D. 实验结束后，采用稀释涂布平板法能最快速度统计出培养液中的微生物数量 5. 某同学想从泡菜汁中筛选耐高盐乳酸菌，进行了如下实验：取泡菜汁样品，划线接种于一定NaCl浓度梯度的培养基，经培养得到了单菌落。下列叙述正确的是（ ） A. 培养基pH需偏碱性 B. 泡菜汁需多次稀释后才能划线接种 C. 需在无氧条件下培养 D. 分离得到的微生物均为乳酸菌 6. 解脂菌能利用分泌的脂肪酶将脂肪分解成甘油和脂肪酸并吸收利用。脂肪酸会使醇溶青琼脂平板变为深蓝色。将不能直接吸收脂肪的甲，乙两种菌分别等量接种在醇溶青琼脂平板上培养。甲菌菌落周围呈现深蓝色，乙菌菌落周围不变色，下列说法错误的是（ ） A. 甲菌属于解脂菌 B. 实验中所用培养基以脂肪为唯一碳源 C. 可将两种菌分别接种在同一平板的不同区域进行对比 D. 该平板可用来比较解脂菌分泌脂肪酶的能力 7. 下列关于植物细胞工程应用的叙述，错误的是（ ） A. 微型繁殖为无性繁殖，能保持植物原有的遗传特性 B. 选取茎尖细胞培育脱毒苗的过程体现了植物细胞的全能性 C. 对愈伤组织进行诱变处理，从分化的植株中可筛选出突变品种 D. 同一植株的不同细胞经植物组织培养获得的新个体一定是同一物种 8. 中药材怀菊含有多种活性物质，具有清热、明目等功效。植物组织培养技术可用于怀菊的脱毒和快速繁殖。下列叙述正确的是（ ） A. 利用怀菊任何部位的细胞进行植物细胞培养均可获得次生代谢物 B. 怀菊快速繁殖过程中产生的体细胞突变可通过无性生殖遗传 C. 利用怀菊的茎段作为外植体，应对外植体进行灭菌处理以防止培养基及愈伤组织污染 D. 生芽培养基中细胞分裂素与生长素的比值比生根培养基中的小 9. 已知某动物细胞培养过程中会发生细胞贴壁现象。下列相关叙述正确的是（ ） A. 对贴壁细胞进行收集时，可直接采用离心法 B. 悬浮培养的细胞会因细胞密度大等因素使细胞分裂受阻 C. 动物细胞培养液中加入抗生素以保证培养细胞所需的无毒环境 D. 只有原代培养到传代培养过程需要用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理 10. 为制备抗犬冠状病毒（CCV，RNA病毒）特异性单克隆抗体，以灭活的CCV为抗原免疫小鼠4次，将提取的小鼠B淋巴细胞与骨髓瘤细胞用聚乙二醇诱导细胞融合，通过两次筛选获得抗体阳性的杂交瘤细胞，经克隆化培养，获得稳定分泌抗CCV单克隆抗体的杂交瘤细胞。下列叙述正确的是（ ） A. 免疫小鼠4次的目的是增加小鼠体内的单克隆抗体的量 B. 实验中使用的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞在单独培养时均会出现接触抑制现象 C. 诱导后需进行两次筛选，第一次筛选的目的是筛选出既能无限增殖又能产生所需抗体的杂交瘤细胞 D. 利用CCV对杂交瘤细胞进行抗体检测可获得分泌特定抗体的杂交瘤细胞 11. 某研究团队利用基因编辑技术，对小鼠卵母细胞的7个甲基化印记控制区域进行DNA甲基化重写，并将一个极体注入修饰后的次级卵母细胞中，成功创造了孤雌生殖的小鼠，操作过程见下图。下列叙述错误的是（ ） A. 上述甲基化重写没有改变卵母细胞的遗传信息 B. 移植后的囊胚进一步扩大，会导致透明带破裂，胚胎从其中伸展出来 C. 甲基化重写可能有利于次级卵母细胞完成减数分裂Ⅱ并与极体融合 D. 子代小鼠一定为雌性，基因型一定与提供卵母细胞的雌鼠相同 12. 传统的基于慢病毒感染、胚胎基因编辑构建非人灵长类脑疾病动物模型常出现操作困难、编辑基因脱靶等问题。若要对非人灵长类动物的体细胞进行基因编辑并获得阳性克隆的细胞，利用体细胞核移植技术构建动物疾病模型更具有优势。下列说法错误的是（ ） A. 将经基因编辑的单个体细胞注入去核的MII期卵母细胞中 B. 用电刺激、Ca2+载体等方法激活重构胚，促进其分裂、发育 C. 进行胚胎移植前，要对供体和受体进行免疫检查，以防发生免疫排斥 D. 重构胚必须移植到同种、生理状态相同的雌性子宫中才能发育成个体 13. 天然胰岛素易形成二聚体或六聚体，皮下注射胰岛素后往往要经历一个逐渐解离为单体的过程，这在一定程度上延缓了疗效。科研人员发现，将胰岛素B28位的脯氨酸替换为天冬氨酸或与B29位的赖氨酸交换位置，可有效抑制胰岛素的聚合，由此研发出的速效胰岛素类似物产品已经在临床上广泛应用。下列叙述正确的是（　　） A. 该工程属于蛋白质工程，其生产的蛋白质是自然界已有的蛋白质 B. 胰岛素改造的基本思路与天然蛋白质的合成过程相同 C. 替换氨基酸时需要用特定的蛋白酶将特定部位的肽键水解 D. 胰岛素类似物蛋白想要达到预设的疗效，还需检测其高级结构是否正确 14. 如图表示人工合成目的基因及PCR扩增仪扩增DNA的过程。下列叙述正确的是（ ） A. 电泳时，DNA迁移速率与DNA分子的大小、构象有关而与凝胶的浓度无关 B. 过程①、过程②和过程⑤所用的原料不同 C. 凝胶有一个加样孔加入指示分子大小的标准参照物；同一个凝胶中，DNA分子越大，迁移的速率越快 D. 电泳鉴定PCR产物时加样缓冲液中的指示剂可提示终止时刻 15. 某科研小组采用PCR技术构建了红色荧光蛋白基因（dsred2）和α-淀粉酶基因（amy）的dsred2-amy融合基因，其过程如图所示，其中引物②和引物③中部分序列（深色区域）可互补配对。下列说法不正确的是（ ） A. 利用PCR技术扩增基因时不需要解旋酶来打开DNA双链 B. 不能在同一反应体系中进行dsred2基因和amy基因的扩增 C. 图中两条杂交链的获得需要经过2次扩增循环 D. 杂交链延伸得到dsred2-amy融合基因的过程需要加引物 16. 基因工程中，使用单个限制酶酶切构建的表达载体易出现连接方向错误和重复插入目的基因片段等现象，可通过酶切及筛选标记鉴定出符合预期的重组载体。研究小组选用的载体P和目的基因CDS片段特征如图，将CDS片段插入载体P的SacⅡ位点后对重组载体进行扩增、筛选和检测。下列叙述错误的是（　　） 注：LacZ基因表达产物为β-半乳糖苷酶，X-gal会被β-半乳糖苷酶分解，产生蓝色产物。 A. 含重组载体的宿主细胞在含X-gal的培养基上，菌落颜色为白色 B. 重组载体被PstⅠ充分酶切后电泳可能会获得长度为9.4kbDNA片段 C. 用EcoRⅠ与PstⅠ充分酶切重组载体，可判断CDS片段的连接方向 D. 用EcoRⅠ与SacⅡ充分酶切重组载体，可得到2个长度的DNA片段 17. 关于“DNA片段的扩增及电泳鉴定”（实验Ⅰ）和“DNA的粗提取与鉴定”（实验Ⅱ）的实验操作，下列相关叙述正确的是（ ） A. 实验Ⅰ中，PCR实验所需的移液器、枪头、蒸馏水等必须进行高压灭菌处理 B. 实验Ⅰ中，将扩增得到的PCR产物进行凝胶电泳，应先加样后接通电源 C. 实验Ⅱ中，将洋葱研磨液离心后保留沉淀物并加入冷酒精静置后，可收集到DNA D. 实验Ⅱ中，将白色丝状物直接加入二苯胺试剂中并进行沸水浴，用于鉴定DNA 18. 某科研团队通过转基因获得了一种大肠杆菌（工程菌），可作为监测残留在生物组织或环境中的四环素水平的“报警器”，其监测原理如下图所示，天然大肠杆菌不含有图中所示基因。（GFP基因是绿色荧光蛋白基因）。下列有关说法正确的是（ ） A. 启动子1、2是DNA聚合酶识别和结合的位点，启动基因的转录过程 B. 转基因工程菌中TetR基因的表达是GFP基因表达的前提条件 C. 转基因工程菌中的GFP基因表达产物还需要内质网等细胞器的加工 D. 当环境中存在四环素时，大肠杆菌可在一定条件下发出绿色荧光 第Ⅱ卷（共46分） 二、非选择题（共46分） 19. 醋酸菌是一类生活在富含有机质土壤表层的细菌。筛选、鉴别醋酸菌的培养基常用米曲汁乙醇培养基（米曲汁中富含蛋白质），该培养基的配方如下表。已知当微生物产生的物质能够与培养基中特定成分（如米曲汁乙醇培养基中的碳酸钙）发生反应时，会使得原本不透明的培养基区域变得透明；醋酸会与碳酸钙反应生成醋酸钙和碳酸；大多数细菌在体积分数大于5%的乙醇中会被杀死。回答下列问题： 组分 体积分数为8%的乙醇 碳酸钙 琼脂 米曲汁 含量 40mL 15g 10g 定容至1000mL （1）从物理性质看，米曲汁乙醇培养基为__________培养基，该培养基中能为醋酸菌提供碳源的物质是________，土壤中微生物数量繁多，种类庞杂，该培养基能筛选出醋酸菌的原因是_________。 （2）某实验小组将富集液进行梯度稀释，分别取104、105和106倍数的稀释液0.1mL涂布于培养基上，每个稀释倍数涂布三个平板，结果各平板的菌落数分别为（39、42、37），（276、291、283），（6、11、9）。三组中适合用于计数的两组为________倍数的稀释液；该方法统计的菌落数量比实际活菌数目________（填“多”或“少”）。为增加实验的信度，应再增设空白对照组，对照组的设计是__________。 （3）根据米曲汁乙醇培养基平板上菌落周围的透明圈可初步判断该菌落为醋酸菌，原因是_____________________。为进一步鉴别醋酸菌，可挑选菌落丰厚、边缘整齐、透明圈大的菌落，接种到________（液体、固体）米曲汁乙醇培养基中培养并进行产醋酸实验。 （4）为了进一步挑选出耐酸的醋酸菌，需将（3）中获得的菌种接种于含_____________的培养基进行筛选。当氧气充足、缺乏糖源时，醋酸菌能将____________，再将其转变为醋酸。 20. 紧密连接蛋白（CLDN6）是一种跨膜蛋白，在乳腺癌、肝癌等多种癌症中特异性高表达，能促进肿瘤发生、生长和迁移等，美登素（DM1）是一种化疗药物，副作用较大。为实现DM1对肿瘤细胞的靶向作用，研究人员以CLDN6为靶点制备相应单克隆抗体并构建抗体—药物偶联物（CLDN6抗体-DM1），部分过程及作用机制如图所示。回答下列问题： （1）CLDN6蛋白是一种跨膜蛋白，包括胞外区、跨膜区和胞内区，制备免疫小鼠所用的抗原时，应提取________区基因序列用于设计抗原。过程①得到的融合体系中含有未融合的细胞、杂交瘤细胞和其他类型的融合细胞，体系中出现多种类型细胞的原因是_____________。 （2）过程③需要进行的操作是___________。过程②筛选出的杂交瘤细胞还需要进行过程③处理的目的是_________。 （3）过程④是将获得的a和b通过接头结合在一起，从而获得治疗乳腺癌的抗体—药物偶联物，这里的a和b分别是____________、___________，其中a的作用是_______________。 （4）与直接注射DM1相比，CLDN6抗体-DM1在临床应用上具有的优势是____________（写出2点）。 21. “定风草”也叫天麻，是著名的中药材。下图为从天麻块茎中提取主要药效成分天麻苷的流程图。回答下列问题： （1）无菌技术是该工艺成功的关键之一。获取天麻的块茎后，需对其进行________处理，使用的试剂包括__________、___________。与上述无菌技术相比，另一种无菌技术的特点是__________。 （2）经过程①诱导形成愈伤组织的过程称为__________，过程①需要的植物激素主要有_____________。③过程所用技术的原理是______________。 （3）过程②可使用____________酶处理愈伤组织将其分散成单个细胞，将细胞置于液体培养基中悬浮振荡培养的目的是___________。 （4）从天麻中提取的天麻苷不是天麻植株生长和生存所必需的，其属于________（初生\次生）代谢物。该工艺生产天麻苷的优势是_____________。（答出2点） 22. 人绒毛膜促性腺激素（hCGβ）是胎盘滋养层细胞分泌的一种糖蛋白，近年研究发现，结肠癌等多种恶性肿瘤细胞的hCGβ基因也有表达，hCGβ与肿瘤的发生、发展及转移有一定关系。研发抗hCGβ疫苗已成为近年来肿瘤生物治疗新的热点，下图为其制备的基本方案。回答下列问题： 注：甲序列指导合成的信号肽能引导后续合成的肽链进入内质网腔；AOX1为甲醇氧化酶基因的启动子，只能在以甲醇为唯一碳源的培养基中正常表达；各种限制酶对应的线条所指为其识别序列。 （1）为获取较多的目的基因，一般要经历三十多次循环，每次循环可以分为________、________、________三步，循环5次共需要________个引物。 （2）导入重组质粒前，需用________处理大肠杆菌细胞，目的是______________。 （3）为防止目的基因与质粒的自身环化并保证连接的方向性，可用限制酶________和________切割质粒。 （4）为方便hCGβ基因与质粒连接，应在引物的________端添加限制酶的识别序列。已知目的基因①处的碱基序列为5′CCTTTCCAGCTCA—，则设计该端对应引物的序列是5′_________3′（写出前12个碱基序列）。 （5）图示hCGβ基因需要与甲序列一起构建形成融合基因，其目的是____________________。从生产控制的角度分析，选用AOX1作为hCGβ基因启动子的优点是__________。 第1页/共1页 学科网（北京）股份有限公司 $ 宝坻一中2025—2026学年度第二学期期中检测高二生物 第Ⅰ卷（共54分） 一、选择题（本题共18小题，每题3分，共54分） 1. 制作传统泡菜主要是利用天然乳酸菌进行发酵的。关于泡菜的制作，相关叙述正确的是（ ） A. 制作泡菜的过程中，应先通气使菌种繁殖，后进行密封发酵 B. 制作泡菜的盐水需要煮沸后立即倒入装有食材的泡菜坛中 C. 制作泡菜的菜坛内会长出一层白膜，是乳酸菌繁殖的结果 D. 腌制时间过短或食盐用量不足，会导致亚硝酸盐含量升高 【答案】D 【解析】 【详解】A、乳酸菌为严格厌氧型微生物，制作泡菜的全过程都需要密封创造无氧环境，若先通气会抑制乳酸菌代谢甚至导致其死亡，无法完成发酵，A错误； B、盐水煮沸的目的是杀灭杂菌、去除溶解氧，煮沸后需冷却至室温再倒入泡菜坛，若立即倒入，高温会杀死食材表面的天然乳酸菌，导致发酵失败，B错误； C、泡菜坛内的白膜是液面有氧环境下产膜酵母菌大量繁殖形成的，乳酸菌为厌氧菌，无法在液面有氧区域大量繁殖形成白膜，C错误； D、腌制时间过短、食盐用量不足、发酵温度过高时，杂菌会大量繁殖，促进亚硝酸盐的生成，导致亚硝酸盐含量升高，D正确。 故选D。 2. 啤酒是人类最古老的酒精饮料之一，工业化生产啤酒的流程如图所示。下列叙述错误的是（ ） A. 酿制啤酒时，酵母菌发酵利用的直接底物是淀粉 B. 步骤④利用的酵母菌菌种可通过诱变育种获得 C. 步骤⑤中可采用巴氏消毒法以保证啤酒的品质 D. 发酵的温度和时间会影响啤酒的口感和风味 【答案】A 【解析】 【分析】啤酒是以大麦为主要原料经酵母菌发酵制成的，其中发酵过程分为主发酵和后发酵两个阶段。酵母菌的繁殖、大部分糖的分解和代谢物的生成都在主发酵阶段完成。主发酵结束后，发酵液还不适合饮用，要在低温、密闭的环境下储存一段时间进行后发酵，这样才能形成澄清、成熟的啤酒。发酵的温度和发酵的时间随啤酒品种和口味要求的不同而有所差异。 【详解】A、酿制啤酒时，淀粉经淀粉酶的作用分解为葡萄糖，酵母菌利用葡萄糖进行酒精发酵，A错误； B、发酵中所用的性状优良的菌种可从自然界筛选，也可通过其他途径如诱变育种、基因工程等获得，B正确； C、巴氏消毒法，温度不是很高，该操作的目的既能杀死啤酒中的微生物，又能保证啤酒中的营养成分不被破坏（流失），即步骤⑤中可采用巴氏消毒法以保证啤酒的品质，C正确； D、发酵时的温度和时间会影响酒精发酵产生的酒精的含量，因此会影响啤酒的口感和风味，D正确。 故选A。 3. 下列关于实验室培养和纯化酵母菌过程中的部分操作叙述，错误的是（　　） A. 对培养皿进行编号或对菌种进行标注时，应使用记号笔在皿底标记 B. 倒平板时，应将打开的培养皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上 C. 纯化培养时，应将接种后的平板倒置放入适宜温度的培养箱内培养 D. 使用后的培养基在丢弃前需进行灭菌处理，以免污染环境 【答案】B 【解析】 【分析】培养基配制时的注意事项： ①全程要求无菌操作，无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还能有效地避免操作者自身被微生物感染。 ②培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，当感觉到锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板。操作时应使锥形瓶的瓶口通过火焰，以防止瓶口的微生物污染培养基。 ③平板冷凝后皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，若将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。 ④在倒平板的过程中，不能将培养基溅到皿盖与皿底之间的部位，因为空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。 【详解】A、由于是倒置培养，对培养皿进行编号或对菌种进行标注时，应使用记号笔在皿底标记，这样便于观察，A正确； B、倒平板时，不能将打开的培养皿盖放到一边，以免微生物污染，B错误； C、为使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染，微生物的纯化培养时，应将接种后的平板倒置放入适宜温度的培养箱内培养，C正确； D、为了避免污染环境，使用后的培养基在丢弃前需进行灭菌处理，D正确。 故选B。 4. 微塑料是直径小于5毫米的塑料碎片或颗粒，其来源广泛、危害深远。科研人员从长期掩埋塑料垃圾的土壤中分离出了甲、乙两种微塑料降解菌，并利用这两种微塑料降解菌进行了相关实验，实验记录及结果如图所示。下列叙述正确的是（ ） 注：三个实验组的总菌量相同，混合菌组按照1∶1混合；残留率=剩余量/添加量×100%。 A. 可使用添加微塑料的牛肉膏蛋白胨培养基从土壤中分离出微塑料降解菌 B. 该实验结果显示，甲、乙两种微塑料降解菌在降解微塑料方面有协同作用 C. 该实验证明了两种微塑料降解菌有降解微塑料的功能，且对生态环境无害 D. 实验结束后，采用稀释涂布平板法能最快速度统计出培养液中的微生物数量 【答案】B 【解析】 【详解】A、从土壤中分离出微塑料降解菌，所用培养基应该是以微塑料为唯一碳源，A错误； B、据图可知，混合菌种对微塑料的降解能力高于单一菌种，即甲、乙两种微塑料降解菌在降解微塑料方面有协同作用，B正确； C、该实验证明了两种微塑料降解菌有降解微塑料的功能，但不能证明其对生态环境无害，C错误； D、实验结束后，采用稀释涂布平板法并不能以最快速度统计培养液中的微生物数量，因为要等待菌落数目稳定时才能计数，采用血细胞计数板或细菌计数板，统计结果更快，D错误。 5. 某同学想从泡菜汁中筛选耐高盐乳酸菌，进行了如下实验：取泡菜汁样品，划线接种于一定NaCl浓度梯度的培养基，经培养得到了单菌落。下列叙述正确的是（ ） A. 培养基pH需偏碱性 B. 泡菜汁需多次稀释后才能划线接种 C. 需在无氧条件下培养 D. 分离得到的微生物均为乳酸菌 【答案】C 【解析】 【分析】泡菜是利用附生在蔬菜表面的植物乳杆菌、短乳杆菌和明串珠菌等发酵制成的。这些微生物一般为厌氧、兼性厌氧或微好氧菌。它们的发酵产物不仅有乳酸，还会有醇、酯等，因而使泡菜具有特殊的风味。 【详解】A、因为乳酸菌经过无氧呼吸产生乳酸，故其生活的环境是酸性，培养基pH需偏酸性，A错误； B、平板划线接种时不需要稀释，B错误； C、乳酸菌是厌氧型微生物，所以需在无氧条件下培养，C正确； D、参与泡菜发酵的微生物有乳杆菌、短乳杆菌和明串珠菌等，所以分离得到的微生物除了乳酸菌，还会有其他耐高盐的微生物，D错误。 故选C。 6. 解脂菌能利用分泌的脂肪酶将脂肪分解成甘油和脂肪酸并吸收利用。脂肪酸会使醇溶青琼脂平板变为深蓝色。将不能直接吸收脂肪的甲，乙两种菌分别等量接种在醇溶青琼脂平板上培养。甲菌菌落周围呈现深蓝色，乙菌菌落周围不变色，下列说法错误的是（ ） A. 甲菌属于解脂菌 B. 实验中所用培养基以脂肪为唯一碳源 C. 可将两种菌分别接种在同一平板的不同区域进行对比 D. 该平板可用来比较解脂菌分泌脂肪酶的能力 【答案】B 【解析】 【分析】选择培养基：根据某种微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性而设计的培养基使混合菌样中的劣势菌变成优势菌，从而提高该菌的筛选率。 鉴别培养基：依据微生物产生的某种代谢产物与培养基中特定试剂或化学药品反应，产生明显的特征变化而设计。 【详解】A、根据题干信息“甲菌菌落周围呈现深蓝色”，说明甲可以分泌脂肪酶将脂肪分解成甘油和脂肪酸，脂肪酸会使醇溶青琼脂平板变为深蓝色，因此甲菌属于解脂菌，A正确； B、乙菌落周围没有出现深蓝色，说明乙菌落不能产生脂肪酶，不能利用脂肪为其供能，但乙菌落也可以在培养基上生存，说明该培养基不是以脂肪为唯一碳源，B错误； C、可将两种菌分别接种在同一平板的不同区域进行对比，更加直观，C正确； D、可以利用该平板来比较解脂菌分泌脂肪酶的能力，观察指标可以是菌落周围深蓝色圈的大小，D正确。 故选B。 7. 下列关于植物细胞工程应用的叙述，错误的是（ ） A. 微型繁殖为无性繁殖，能保持植物原有的遗传特性 B. 选取茎尖细胞培育脱毒苗的过程体现了植物细胞的全能性 C. 对愈伤组织进行诱变处理，从分化的植株中可筛选出突变品种 D. 同一植株的不同细胞经植物组织培养获得的新个体一定是同一物种 【答案】D 【解析】 【分析】植物细胞工程技术的应用：植物繁殖的新途径（微型繁殖、作物脱毒、人工种子）、作物新品种的培育（单倍体育种、突变体的利用）、细胞产物的工厂化生产。 【详解】A、植物微型繁殖为无性繁殖，能保持植物原有的遗传特性，进而保持亲本的优良性状，A正确； B、培育脱毒苗时，利用不含病毒的分生区细胞（如茎尖细胞）进行组织培养得到完整植株，体现了植物细胞的全能性，B正确； C、愈伤组织细胞一直处于不断增殖的状态，容易受到培养条件和诱变因素的影响而产生突变，因此对愈伤组织进行诱变处理，从分化的植株中可筛选出突变品种，C正确； D、组织培养的对象既可以是体细胞也可以是生殖细胞，同一植株的花粉细胞与体细胞经植物组织培养得到的新个体存在生殖隔离，是不同物种，D错误。 故选D。 8. 中药材怀菊含有多种活性物质，具有清热、明目等功效。植物组织培养技术可用于怀菊的脱毒和快速繁殖。下列叙述正确的是（ ） A. 利用怀菊任何部位的细胞进行植物细胞培养均可获得次生代谢物 B. 怀菊快速繁殖过程中产生的体细胞突变可通过无性生殖遗传 C. 利用怀菊的茎段作为外植体，应对外植体进行灭菌处理以防止培养基及愈伤组织污染 D. 生芽培养基中细胞分裂素与生长素的比值比生根培养基中的小 【答案】B 【解析】 【分析】植物组织培养是指将离体的植物器官、组织或细胞等，培养在人工配制的培养基上，给予适宜的培养条件，诱导其形成完整植株的技术。 【详解】A、次生代谢物是由植物特定部位产生，通常不是植物基本生命活动所必需的物质，A错误； B、怀菊快速繁殖是通过植物组织培养技术实现的，这一过程中产生的体细胞突变同样可以通过植物组织培养（无性生殖）遗传，B正确； C、外植体要保持细胞活性，不能灭菌处理，C错误； D、生芽培养基中细胞分裂素与生长素的比值较高，而生根培养基中该比值较小，D错误。 故选B。 9. 已知某动物细胞培养过程中会发生细胞贴壁现象。下列相关叙述正确的是（ ） A. 对贴壁细胞进行收集时，可直接采用离心法 B. 悬浮培养的细胞会因细胞密度大等因素使细胞分裂受阻 C. 动物细胞培养液中加入抗生素以保证培养细胞所需的无毒环境 D. 只有原代培养到传代培养过程需要用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理 【答案】B 【解析】 【详解】A、贴壁细胞附着在培养瓶壁上，需先用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理使细胞脱离瓶壁制成细胞悬液后，才能通过离心法收集，无法直接离心收集，A错误； B、悬浮培养的细胞若密度过大，会出现营养物质匮乏、代谢废物大量积累的情况，进而抑制细胞分裂，B正确； C、动物细胞培养液中加入抗生素的作用是杀灭杂菌，避免杂菌污染，保证培养的无菌环境；无毒环境需要通过定期更换培养液、清除细胞代谢废物来实现，C错误； D、不仅原代培养转向传代培养时需要酶处理，每次传代培养前，贴壁生长的细胞长满瓶壁后，都需要用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理使细胞脱落才能分瓶培养，D错误。 10. 为制备抗犬冠状病毒（CCV，RNA病毒）特异性单克隆抗体，以灭活的CCV为抗原免疫小鼠4次，将提取的小鼠B淋巴细胞与骨髓瘤细胞用聚乙二醇诱导细胞融合，通过两次筛选获得抗体阳性的杂交瘤细胞，经克隆化培养，获得稳定分泌抗CCV单克隆抗体的杂交瘤细胞。下列叙述正确的是（ ） A. 免疫小鼠4次的目的是增加小鼠体内的单克隆抗体的量 B. 实验中使用的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞在单独培养时均会出现接触抑制现象 C. 诱导后需进行两次筛选，第一次筛选的目的是筛选出既能无限增殖又能产生所需抗体的杂交瘤细胞 D. 利用CCV对杂交瘤细胞进行抗体检测可获得分泌特定抗体的杂交瘤细胞 【答案】D 【解析】 【分析】单克隆抗体的制备：用特定的抗原对小鼠进行免疫，并从该小鼠的脾中得到能产生特定抗体的B淋巴细胞，将多种B淋巴细胞与骨髓瘤细胞诱导融合，利用特定的选择培养基进行筛选：在该培养基上，未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡，只有融合的杂交瘤细胞才能生长。对上述经选择培养的杂交瘤细胞进行克隆化培养和抗体检测，经多次筛选，就可获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞。将抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞在体外条件下大规模培养，或注射到小鼠腹腔内增殖。从细胞培养液或小鼠腹水中获取大量的单克隆抗体。 【详解】A、免疫小鼠4次的目的是通过多次免疫，让小鼠的体内能够得到更多的能产生特异性抗体的B淋巴细胞，A错误； B、骨髓瘤细胞在单独培养时不会出现接触抑制现象，B错误； C、诱导后需进行多次筛选，第一次筛选的目的是筛选出融合的杂交瘤细胞，并不能筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞，C错误； D、抗原能和抗体特异性结合，所以利用CCV对杂交瘤细胞进行抗体检测可获得分泌特定抗体的杂交瘤细胞，D正确。 故选D。 11. 某研究团队利用基因编辑技术，对小鼠卵母细胞的7个甲基化印记控制区域进行DNA甲基化重写，并将一个极体注入修饰后的次级卵母细胞中，成功创造了孤雌生殖的小鼠，操作过程见下图。下列叙述错误的是（ ） A. 上述甲基化重写没有改变卵母细胞的遗传信息 B. 移植后的囊胚进一步扩大，会导致透明带破裂，胚胎从其中伸展出来 C. 甲基化重写可能有利于次级卵母细胞完成减数分裂Ⅱ并与极体融合 D. 子代小鼠一定为雌性，基因型一定与提供卵母细胞的雌鼠相同 【答案】D 【解析】 【详解】A、上述甲基化重写没有改变DNA的序列，没有改变卵母细胞的遗传信息，A正确； B、移植后的囊胚进一步扩大，会导致透明带破裂，胚胎从其中伸展出来，这一过程叫作孵化，B正确； C、由图可推测，甲基化重写可能有利于次级卵母细胞完成减数分裂Ⅱ并与极体融合进行胚胎发育，C正确； D、“孤雌小鼠”是由两个生殖细胞（修饰后的次级卵母细胞和另一个卵子的极体）结合后发育形成，同时由于配子在形成过程中会经历减数分裂的基因重组，或发生基因突变，将导致两个生殖细胞结合后的“孤雌小鼠”其基因型不一定与提供卵母细胞的雌鼠相同，D错误。 12. 传统的基于慢病毒感染、胚胎基因编辑构建非人灵长类脑疾病动物模型常出现操作困难、编辑基因脱靶等问题。若要对非人灵长类动物的体细胞进行基因编辑并获得阳性克隆的细胞，利用体细胞核移植技术构建动物疾病模型更具有优势。下列说法错误的是（ ） A. 将经基因编辑的单个体细胞注入去核的MII期卵母细胞中 B. 用电刺激、Ca2+载体等方法激活重构胚，促进其分裂、发育 C. 进行胚胎移植前，要对供体和受体进行免疫检查，以防发生免疫排斥 D. 重构胚必须移植到同种、生理状态相同的雌性子宫中才能发育成个体 【答案】C 【解析】 【分析】体细胞核移植过程（以克隆高产奶牛为例）： 【详解】A、需要将经基因编辑的单个体细胞注入MⅡ期的卵母细胞中，使核移植动物模型的核遗传物质全部来自经基因编辑的单个体细胞，A正确； B、使用电刺激、Ca2+载体等方法可以激活重构胚, 使其完成细胞分裂和发育过程，B正确； C、受体不会对移植的胚胎产生免疫排斥反应，故而进行胚胎移植前，不需要对供体和受体进行免疫检查，C错误； D、重构胚必须采用胚胎移植技术移植到同种、生理状态相同的雌性个体才能继续发育，D正确。 故选C。 13. 天然胰岛素易形成二聚体或六聚体，皮下注射胰岛素后往往要经历一个逐渐解离为单体的过程，这在一定程度上延缓了疗效。科研人员发现，将胰岛素B28位的脯氨酸替换为天冬氨酸或与B29位的赖氨酸交换位置，可有效抑制胰岛素的聚合，由此研发出的速效胰岛素类似物产品已经在临床上广泛应用。下列叙述正确的是（　　） A. 该工程属于蛋白质工程，其生产的蛋白质是自然界已有的蛋白质 B. 胰岛素改造的基本思路与天然蛋白质的合成过程相同 C. 替换氨基酸时需要用特定的蛋白酶将特定部位的肽键水解 D. 胰岛素类似物蛋白想要达到预设的疗效，还需检测其高级结构是否正确 【答案】D 【解析】 【分析】蛋白质工程是通过修改基因或创造合成新基因来改变生物的遗传和表达性状，合成新的蛋白质，蛋白质工程从属于基因工程，蛋白质工程是第二代基因工程。 【详解】A、该工程通过对天然胰岛素的氨基酸序列进行改造，属于蛋白质工程，改造后生产的蛋白质是自然界不 存在的，A错误； B、天然蛋白质的合成过程是按照中心法则进行的，蛋白质工程的基本思路与中心法则相反，B 错误； C、蛋白质工程的实质是对基因进行改造，需要用限制酶和DNA连接酶等工具，不需要蛋白酶，C错误； D、物质的结构决定功能，蛋白质发挥功能必须依赖于正确的高级结构，D正确。 故选D。 14. 如图表示人工合成目的基因及PCR扩增仪扩增DNA的过程。下列叙述正确的是（ ） A. 电泳时，DNA迁移速率与DNA分子的大小、构象有关而与凝胶的浓度无关 B. 过程①、过程②和过程⑤所用的原料不同 C. 凝胶有一个加样孔加入指示分子大小的标准参照物；同一个凝胶中，DNA分子越大，迁移的速率越快 D. 电泳鉴定PCR产物时加样缓冲液中的指示剂可提示终止时刻 【答案】D 【解析】 【详解】A、电泳时，DNA 迁移速率不仅和 DNA 分子的大小、构象有关，还与凝胶的浓度有关（凝胶浓度越高，孔径越小，DNA 迁移越慢），A错误； B、过程①（逆转录）所用原料是脱氧核苷酸，过程②（DNA合成）所用原料也是脱氧核苷酸，过程⑤（PCR延伸）所用原料同样是脱氧核苷酸，三者所用原料相同，B错误； C、凝胶有一个加样孔加入指示分子大小的标准参照物，在同一个凝胶中，DNA分子越大，迁移的速率越慢，而不是越快，C错误； D、电泳鉴定PCR产物时，加样缓冲液中的指示剂（如溴酚蓝）会和DNA一起迁移，它的迁移速率与特定大小的DNA相近，可用来提示电泳的终止时刻，避免 DNA 跑出凝胶，D正确。 15. 某科研小组采用PCR技术构建了红色荧光蛋白基因（dsred2）和α-淀粉酶基因（amy）的dsred2-amy融合基因，其过程如图所示，其中引物②和引物③中部分序列（深色区域）可互补配对。下列说法不正确的是（ ） A. 利用PCR技术扩增基因时不需要解旋酶来打开DNA双链 B. 不能在同一反应体系中进行dsred2基因和amy基因的扩增 C. 图中两条杂交链的获得需要经过2次扩增循环 D. 杂交链延伸得到dsred2-amy融合基因的过程需要加引物 【答案】D 【解析】 【详解】A、利用PCR 技术扩增基因时，高温变性使DNA双链解旋，不需要解旋酶来打开 DNA 双链，A正确； B、引物②和引物③之间存在互补配对区域，②和③引物会相互结合从而影响PCR过程，因此不能在同一个反应体系中进行dsred2基因和amy基因的扩增，B正确； C、由于引物①和引物④是从模板连的起始段碱基互补配对，在两个反应体系中进行dsred2基因和amy基因的扩增，分别循环2次获取dsred2基因和amy基因链，C正确； D、两条杂交链的3'端存在互补配对部分，其延伸得到 dsred2-amy融合基因的过程中，不需要加入引物，D错误。 16. 基因工程中，使用单个限制酶酶切构建的表达载体易出现连接方向错误和重复插入目的基因片段等现象，可通过酶切及筛选标记鉴定出符合预期的重组载体。研究小组选用的载体P和目的基因CDS片段特征如图，将CDS片段插入载体P的SacⅡ位点后对重组载体进行扩增、筛选和检测。下列叙述错误的是（　　） 注：LacZ基因表达产物为β-半乳糖苷酶，X-gal会被β-半乳糖苷酶分解，产生蓝色产物。 A. 含重组载体的宿主细胞在含X-gal的培养基上，菌落颜色为白色 B. 重组载体被PstⅠ充分酶切后电泳可能会获得长度为9.4kbDNA片段 C. 用EcoRⅠ与PstⅠ充分酶切重组载体，可判断CDS片段的连接方向 D. 用EcoRⅠ与SacⅡ充分酶切重组载体，可得到2个长度的DNA片段 【答案】D 【解析】 【详解】A、目的基因插入LacZ基因的SacⅡ位点后，LacZ被插入而导致LacZ失活，进而无法表达出有活性的β−半乳糖苷酶，不能分解X−gal产生蓝色物质，因此含重组载体的菌落为白色，A正确； B、单个限制酶酶切可能出现重复插入目的基因的情况，若插入2个CDS，重组载体总长度为4.2+2.6×2=9.4kb；载体仅含1个PstⅠ位点，CDS无 𝑃𝑠𝑡 Ⅰ位点，因此酶切后得到1条长度为9.4kb的线性片段，存在这种可能性，B正确； C、PstⅠ位于载体上紧邻 SacⅡ，若CDS插入方向不同，EcoRⅠ距离PstⅠ的长度分别为 0.5 kb和 2.1 kb，双酶切后得到的片段长度不同，因此可以判断连接方向，C正确； D、插入1个CDS的重组载体，共含有2个SacⅡ位点（CDS两端）和1个EcoRⅠ位点（CDS内部），共3个酶切位点，环状DNA经3个切点酶切后，会得到3个不同长度的DNA片段（0.5 kb、2.1 kb、4.2 kb），插入多个CDS会得到更多长度的片段，不可能只得到2个长度的片段，D错误。 17. 关于“DNA片段的扩增及电泳鉴定”（实验Ⅰ）和“DNA的粗提取与鉴定”（实验Ⅱ）的实验操作，下列相关叙述正确的是（ ） A. 实验Ⅰ中，PCR实验所需的移液器、枪头、蒸馏水等必须进行高压灭菌处理 B. 实验Ⅰ中，将扩增得到的PCR产物进行凝胶电泳，应先加样后接通电源 C. 实验Ⅱ中，将洋葱研磨液离心后保留沉淀物并加入冷酒精静置后，可收集到DNA D. 实验Ⅱ中，将白色丝状物直接加入二苯胺试剂中并进行沸水浴，用于鉴定DNA 【答案】B 【解析】 【详解】A、PCR实验中仅枪头、蒸馏水需要高压灭菌以避免外源DNA污染，移液器（移液枪）多不耐高温高压，无需也不能进行高压灭菌处理，A错误； B、凝胶电泳操作时，需先将PCR产物加入凝胶点样孔后再接通电源，若先通电再加样会导致样品扩散、无法在凝胶中正常迁移，B正确； C、DNA粗提取实验中，洋葱研磨液离心后DNA溶解在上清液中，沉淀物为细胞残渣等杂质，应取上清液加入冷酒精静置析出DNA，C错误； D、二苯胺鉴定DNA时，需先将白色丝状物溶解在2mol/L的NaCl溶液中，再加入二苯胺试剂进行沸水浴，未溶解的DNA无法与二苯胺充分发生显色反应，D错误。 18. 某科研团队通过转基因获得了一种大肠杆菌（工程菌），可作为监测残留在生物组织或环境中的四环素水平的“报警器”，其监测原理如下图所示，天然大肠杆菌不含有图中所示基因。（GFP基因是绿色荧光蛋白基因）。下列有关说法正确的是（ ） A. 启动子1、2是DNA聚合酶识别和结合的位点，启动基因的转录过程 B. 转基因工程菌中TetR基因的表达是GFP基因表达的前提条件 C. 转基因工程菌中的GFP基因表达产物还需要内质网等细胞器的加工 D. 当环境中存在四环素时，大肠杆菌可在一定条件下发出绿色荧光 【答案】D 【解析】 【详解】A、启动子是RNA聚合酶识别和结合的位点，启动基因的转录过程，A错误； B、由图可知，TetR基因表达产生的TetR蛋白会抑制GFP基因的表达，所以TetR基因的表达不是GFP 基因表达的前提条件，B错误； C、大肠杆菌是原核生物，原核生物没有内质网等复杂的细胞器，C错误； D、从图中可以看出，当环境中存在四环素时，四环素与TetR蛋白结合，使得TetR蛋白对GFP基因的抑制作用被解除，从而GFP基因能够表达，大肠杆菌可在一定条件下发出绿色荧光，D正确。 故选D。 第Ⅱ卷（共46分） 二、非选择题（共46分） 19. 醋酸菌是一类生活在富含有机质土壤表层的细菌。筛选、鉴别醋酸菌的培养基常用米曲汁乙醇培养基（米曲汁中富含蛋白质），该培养基的配方如下表。已知当微生物产生的物质能够与培养基中特定成分（如米曲汁乙醇培养基中的碳酸钙）发生反应时，会使得原本不透明的培养基区域变得透明；醋酸会与碳酸钙反应生成醋酸钙和碳酸；大多数细菌在体积分数大于5%的乙醇中会被杀死。回答下列问题： 组分 体积分数为8%的乙醇 碳酸钙 琼脂 米曲汁 含量 40mL 15g 10g 定容至1000mL （1）从物理性质看，米曲汁乙醇培养基为__________培养基，该培养基中能为醋酸菌提供碳源的物质是________，土壤中微生物数量繁多，种类庞杂，该培养基能筛选出醋酸菌的原因是_________。 （2）某实验小组将富集液进行梯度稀释，分别取104、105和106倍数的稀释液0.1mL涂布于培养基上，每个稀释倍数涂布三个平板，结果各平板的菌落数分别为（39、42、37），（276、291、283），（6、11、9）。三组中适合用于计数的两组为________倍数的稀释液；该方法统计的菌落数量比实际活菌数目________（填“多”或“少”）。为增加实验的信度，应再增设空白对照组，对照组的设计是__________。 （3）根据米曲汁乙醇培养基平板上菌落周围的透明圈可初步判断该菌落为醋酸菌，原因是_____________________。为进一步鉴别醋酸菌，可挑选菌落丰厚、边缘整齐、透明圈大的菌落，接种到________（液体、固体）米曲汁乙醇培养基中培养并进行产醋酸实验。 （4）为了进一步挑选出耐酸的醋酸菌，需将（3）中获得的菌种接种于含_____________的培养基进行筛选。当氧气充足、缺乏糖源时，醋酸菌能将____________，再将其转变为醋酸。 【答案】（1） ①. 固体 ②. (体积分数为8%的)乙醇（和米曲汁）  ③. 体积分数为8%的乙醇具有抑菌作用(大多数细菌在体积分数为8%的乙醇中会被杀死），而醋酸菌能利用乙醇（合理即可）  （2） ①. 104、105 ②. 少 ③. 取一空白培养基，接种0.1mL无菌水(或不接种），置于相同条件下培养相同时间（合 理即可） （3） ①. 醋酸菌发酵产生醋酸，醋酸与碳酸钙反应生成醋酸钙和碳酸，在菌落周围形成透明圈 ②. 液体 （4） ①. 高浓度醋酸(рH为酸性） ②. 乙醇转变为乙醛 【解析】 【小问1详解】 分析题意，该培养基含有琼脂，故属于固体培养基；该培养基中能为醋酸菌提供碳源的物质是乙醇和米曲汁（米曲汁含蛋白质，分解后可提供碳源）；由于体积分数为8%的乙醇具有抑菌作用(大多数细菌在体积分数为8%的乙醇中会被杀死），而醋酸菌能利用乙醇，故该培养基能筛选出醋酸菌。 【小问2详解】 稀释涂布平板法应选择菌落数在30-300之间的进行计数，故应选择10⁴和10⁵倍数的稀释液；由于多个连在一起的活菌可能形成单一菌落，故该方法统计的菌落数量比实际活菌数目少；为增加实验的信度，应再增设空白对照组，对照组的设计是取一空白培养基，接种0.1mL无菌水(或不接种），置于相同条件下培养相同时间，用于验证培养基是否灭菌彻底。 【小问3详解】 由于醋酸菌发酵产生醋酸，醋酸与碳酸钙反应生成醋酸钙和碳酸，在菌落周围形成透明圈，故根据米曲汁乙醇培养基平板上菌落周围的透明圈可初步判断该菌落为醋酸菌。进一步鉴别时，需要接种到液体米曲汁乙醇培养基中培养，因为液体培养基能让醋酸菌充分接触营养物质，更好地进行产醋酸实验，便于后续检测。 【小问4详解】 为了筛选耐酸的醋酸菌，需要将菌种接种到含高浓度醋酸（或酸性环境）的培养基中，只有耐酸的醋酸菌才能存活繁殖。果醋发酵时，当氧气充足、缺少糖源时，醋酸菌能将乙醇转变为乙醛，再将其转变为醋酸。 20. 紧密连接蛋白（CLDN6）是一种跨膜蛋白，在乳腺癌、肝癌等多种癌症中特异性高表达，能促进肿瘤发生、生长和迁移等，美登素（DM1）是一种化疗药物，副作用较大。为实现DM1对肿瘤细胞的靶向作用，研究人员以CLDN6为靶点制备相应单克隆抗体并构建抗体—药物偶联物（CLDN6抗体-DM1），部分过程及作用机制如图所示。回答下列问题： （1）CLDN6蛋白是一种跨膜蛋白，包括胞外区、跨膜区和胞内区，制备免疫小鼠所用的抗原时，应提取________区基因序列用于设计抗原。过程①得到的融合体系中含有未融合的细胞、杂交瘤细胞和其他类型的融合细胞，体系中出现多种类型细胞的原因是_____________。 （2）过程③需要进行的操作是___________。过程②筛选出的杂交瘤细胞还需要进行过程③处理的目的是_________。 （3）过程④是将获得的a和b通过接头结合在一起，从而获得治疗乳腺癌的抗体—药物偶联物，这里的a和b分别是____________、___________，其中a的作用是_______________。 （4）与直接注射DM1相比，CLDN6抗体-DM1在临床应用上具有的优势是____________（写出2点）。 【答案】（1） ①. 胞外 ②. 融合是随机的，且融合（成功）率达不到100%（合理即可） （2） ①. 克隆化培养和抗体检测   ②. 得到(筛选出）能分泌抗CLDN6蛋白(特异性抗体）的杂交瘤细胞 （3） ①. CLDN6(单克隆）抗体 ②. 美登素（DM1） ③. 能够特异性结合癌细胞表面的紧密连接蛋白（CLDN6），将DM1 带到肿瘤细胞（或靶向运输，合理即可） （4）CLDN6抗体-DM1的DM1仅杀伤肿瘤细胞，对正常细胞影响小；用药剂量较少且疗效高；毒副作用小      【解析】 【小问1详解】 分析题意，CLDN6蛋白是一个跨膜蛋白，包括胞外区、跨膜区和胞内区，其中抗原特性由胞外区决定，因此制备免疫小鼠所用的抗原时，应提取胞外区基因序列用于设计抗原；在细胞融合过程中，未融合的细胞、杂交瘤细胞和其他类型的融合细胞会同时存在，这是因为细胞融合是一个随机过程，无法保证所有细胞都能成功融合。 【小问2详解】 过程③需要进行的操作是克隆化培养和抗体检测，即通过单细胞培养技术，筛选出单一类型的杂交瘤细胞，能够经抗体检测后产生专一抗体；过程②筛选出的杂交瘤细胞还需要进行过程③处理的目的是得到(筛选出）能分泌抗CLDN6蛋白(特异性抗体）的杂交瘤细胞。 【小问3详解】 结合题意及题图可知，a是CLDN6抗体，b是DM1，其中CLDN6抗体的作用是通过特异性识别肿瘤细胞表面的CLDN6蛋白，将DM1精准递送到肿瘤细胞内部，DM1是化疗药物，用于杀伤肿瘤细胞。 【小问4详解】 与直接注射DM1相比，CLDN6抗体-DM1能够通过特异性识别肿瘤细胞，将药物精准递送到肿瘤细胞内，从而减少对正常细胞的毒副作用，提高治疗的安全性和有效性。 21. “定风草”也叫天麻，是著名的中药材。下图为从天麻块茎中提取主要药效成分天麻苷的流程图。回答下列问题： （1）无菌技术是该工艺成功的关键之一。获取天麻的块茎后，需对其进行________处理，使用的试剂包括__________、___________。与上述无菌技术相比，另一种无菌技术的特点是__________。 （2）经过程①诱导形成愈伤组织的过程称为__________，过程①需要的植物激素主要有_____________。③过程所用技术的原理是______________。 （3）过程②可使用____________酶处理愈伤组织将其分散成单个细胞，将细胞置于液体培养基中悬浮振荡培养的目的是___________。 （4）从天麻中提取的天麻苷不是天麻植株生长和生存所必需的，其属于________（初生\次生）代谢物。该工艺生产天麻苷的优势是_____________。（答出2点） 【答案】（1） ①. 消毒  ②. 酒精 ③. 次氯酸钠 ④. （使用强烈的理化方法）能杀死物体内外所有的微生物（包括芽孢和孢子）     （2） ①. 脱分化 ②. 生长素和细胞分裂素 ③. 细胞增殖 （3） ①. 纤维素酶和果胶酶 ②. 保证细胞培养的物质供应和气体需求 （4） ①. 次生 ②. 不占用耕地，几乎不受季节、天气等的限制，保护环境      【解析】 【小问1详解】 获取天麻的块茎后，需对其进行消毒处理，使用的试剂包括酒精、次氯酸钠和无菌水。与上述无菌技术（消毒）相比，另一种无菌技术（灭菌）的特点是使用强烈的理化方法能杀死物体内外所有的微生物（包括芽孢和孢子）。 【小问2详解】 过程①诱导形成愈伤组织的过程称为脱分化， 脱分化需要的主要植物激素生长素和细胞分裂素，过程③（细胞悬浮培养），本工艺不需要获得完整植株，只需要扩增细胞获得细胞产物，细胞培养扩增的原理是细胞增殖。 【小问3详解】 过程②表示将愈伤组织分散成单个细胞，可使用纤维素酶和果胶酶处理愈伤组织，将其置于液体培养基中悬浮振荡培养的目的是保证细胞培养的物质供应和气体需求。 【小问4详解】 从天麻中提取的天麻苷不是天麻植株生长和生存所必需的，其属于次生代谢物。该工艺生产天麻苷的优势是不占用耕地，几乎不受季节、天气等的限制，保护环境等。 22. 人绒毛膜促性腺激素（hCGβ）是胎盘滋养层细胞分泌的一种糖蛋白，近年研究发现，结肠癌等多种恶性肿瘤细胞的hCGβ基因也有表达，hCGβ与肿瘤的发生、发展及转移有一定关系。研发抗hCGβ疫苗已成为近年来肿瘤生物治疗新的热点，下图为其制备的基本方案。回答下列问题： 注：甲序列指导合成的信号肽能引导后续合成的肽链进入内质网腔；AOX1为甲醇氧化酶基因的启动子，只能在以甲醇为唯一碳源的培养基中正常表达；各种限制酶对应的线条所指为其识别序列。 （1）为获取较多的目的基因，一般要经历三十多次循环，每次循环可以分为________、________、________三步，循环5次共需要________个引物。 （2）导入重组质粒前，需用________处理大肠杆菌细胞，目的是______________。 （3）为防止目的基因与质粒的自身环化并保证连接的方向性，可用限制酶________和________切割质粒。 （4）为方便hCGβ基因与质粒连接，应在引物的________端添加限制酶的识别序列。已知目的基因①处的碱基序列为5′CCTTTCCAGCTCA—，则设计该端对应引物的序列是5′_________3′（写出前12个碱基序列）。 （5）图示hCGβ基因需要与甲序列一起构建形成融合基因，其目的是____________________。从生产控制的角度分析，选用AOX1作为hCGβ基因启动子的优点是__________。 【答案】（1） ①. 变性 ②. 复性 ③. 延伸 ④. 62 （2） ①. CaCl₂溶液 ②. 使大肠杆菌处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态（即感受态），便于重组质粒进入细胞。 （3） ①. XhoⅠ ②. Mum Ⅰ （4） ①. 5' ②. 5＇-CTCGAGCCTTTC-3＇ （5） ①. 有利于hCGβ进入内质网加工 ②. 可以通过控制培养液中甲醇作为唯一碳源，来控制hCGβ基因表达      【解析】 【小问1详解】 为获取较多的目的基因，一般要经历三十多次循环，每次循环可以分为变性、复性和延伸三步，循环5次共需要2×25-2=62个引物。 【小问2详解】 导入重组质粒前，需用CaCl₂溶液处理大肠杆菌细胞， 目的是使大肠杆菌处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态（即感受态），便于重组质粒进入细胞。 【小问3详解】 为防止目的基因与质粒的自身环化并保证连接的方向性，可在其两端添加限制酶识别序列，Sma Ⅰ会破坏目的基因，不能添加Sma Ⅰ识别序列；EcoR Ⅰ会破坏质粒上的氨苄青霉素抗性基因（标记基因），不能添加EcoR Ⅰ识别序列；Sal Ⅰ会破坏质粒上的组氨酸合成酶基因，不能添加Sal Ⅰ识别序列；Xma Ⅰ识别序列与SmaⅠ识别序列相同（但酶切位点不同），会破坏目的基因。因此，在hCGβ基因两端应添加XhoⅠ、Mum Ⅰ限制酶识别序列。 【小问4详解】 DNA 聚合酶只能从引物的3'端延伸DNA链，引物的5'端是游离端，可以添加额外序列（如酶切位点），不会影响延伸过程。根据转录方向和质粒AOX1启动子位置确定，在①处插入了Xho Ⅰ的识别序列CTCGAG，则①处的碱基序列为5＇-CTCGAGCCTTTCCAGCTCA-3＇，互补链中，碱基序列为3＇-GAGCTCGGAAAGGTCGAGT -5＇，对其设计引物序列为5＇-CTCGAGCCTTTCCAGCTCA-3＇，前12个碱基序列是5＇-CTCGAGCCTTTC-3＇。 【小问5详解】 甲序列指导合成的信号肽能引导后续合成的肽链进入内质网腔，因此hCGβ基因需要与甲序列一起构建形成融合基因，其目的是有利于hCGβ进入内质网中加工，并分泌到细胞外。AOX1为甲醇氧化酶基因的启动子，只能在以甲醇为唯一碳源的培养基中正常表达，因此选用AOX1作为hCGβ基因启动子，可以通过控制培养液中甲醇的有无，来控制hCGβ基因的表达hCGβ蛋白的合成。 第1页/共1页 学科网（北京）股份有限公司 $