2027届高三生物二轮复习课件专题10 PCR和电泳（2课时）

该高中生物学高考复习课件聚焦PCR技术专题，覆盖原理、过程、引物设计、数量计算及荧光定量PCR等核心考点，对接高考评价体系，分析引物选择、非特异条带控制等高频考点权重，归纳选择、填空、实验分析等常考题型，体现备考针对性与实用性。 课件亮点在于“真题训练+考点突破+素养提升”策略，如结合2021湖北卷非特异条带问题，用科学思维分析复性温度调控技巧，通过引物设计原则（长度18-30nt、GC含量40%-60%）培养严谨求实态度，设“易错点警示”（引物互补失效）和“实验操作指南”（电泳鉴定步骤），帮助学生掌握答题技巧，教师可据此精准教学，助力高考冲刺。

专题10：PCR 技术 授课： 恶性入室抢劫案，现场无目击者，无留下指纹。 关键证据： 受害人的指甲缝里的人体皮肤组织细胞。 挑战： 所含的DNA量极少，根本无法进行常规分析。 破案利器————聚合酶链式反应 （PCR技术） 在体外模拟DNA复制，对特定片段进行指数级扩增。 数小时内，可将目标DNA片段扩增数亿倍。 · PCR = 基因的“分子复印机” 一 PCR的概念 全称： 原理： 操作环境： 目的： 优点： 聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction） DNA半保留复制 体外（PCR扩增仪/PCR仪） 对目的基因的核苷酸序列进行大量复制 可以在短时间内大量扩增目的基因 PCR由穆里斯等人于1985年发明，1993年获得诺贝尔化学奖 PCR扩增仪 大量基因 模拟细胞内DNA的复制过程， 在体外快速扩增特定的DNA片段。 PCR 某基因 要完成体外PCR扩增，需要完成哪些准备工作？ 模板： 原料： 酶： 缓冲液： 引物： DNA分子（目的基因） dNTP/4种脱氧核苷酸 耐高温的DNA聚合酶 含有Mg2+（激活DNA聚合酶） dNTP：提供原料和能量 2种 当温度超过______以上时， 断裂，双链DNA解聚为两条 。 (1)变性： 氢键 单链DNA 变性 90℃ 待扩增的DNA片段 3’ 3’ 5’ 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 不需要解旋酶 思考1：变性的温度为何是90℃以上的一个温度范围，而不是95℃？ 因为变性的温度与氢键的数量有关。当氢键数量越多时，所需温度就越高；反之，当氢键数量越少时，所需温度也就越低。 变性 复性 延伸 二 PCR的过程 3’ 5’ 3’ 5’ 引物1 5’ 3’ 引物2 5’ 3’ 思考2：引物是什么？有什么作用？ 引物结合在模板链的什么位置？ ①引物是一小段DNA序列序列，可以使Taq酶从引物3′端加脱氧核苷酸序列 ②引物结合在DNA模板链 3'端位置，引导子链从 5'端→3'端方向复制。 当温度下降到 左右时， 种引物通过 与两条单链DNA结合。 (2)复性： 碱基互补配对 50℃ 两 变性 复性 延伸 二 PCR的过程 当温度上升到______左右时，溶液中的4种_____________在耐高温的______________ __________的作用下，根据_____________原则合成新的DNA链。 脱氧核苷酸 DNA聚合酶 72℃ (3)延伸： (Taq酶) 3’ 5’ 3’ 5’ 引物1 5’ 3’ 引物2 5’ 3’ Taq酶 3’ Taq酶 3’ 碱基互补配对 变性 复性 延伸 二 PCR的过程 DNA解链为单链 高温(95℃)变性 低温(50℃)复性 中温(72℃)延伸 引物结合到互补DNA链 Taq酶从引物起始进行子链的合成 PCR过程可以在PCR扩增(PCR仪)中自动完成。 二 PCR的过程 2、PCR扩增过程中 需要源源不断的加入。 1、一个循环得到的产物又可以作为下一个循环的 。 模板 引物、原料 体内复制 PCR技术 解旋 在解旋酶作用下部分解开 加热到94oC,双链全部解开，不需解旋酶 引物 一小段RNA 一般用DNA片段 DNA聚合酶 细胞自身的DNA聚合酶 （不耐高温） Taq酶 复制特点 半保留复制，边解旋边复制，多起点复制。 半保留复制，完全解旋后复制，从模板链的一端开始复制。 复制的方向 子链的5’端向 3’端延伸 子链的5’端向 3’端延伸 总结：PCR技术和DNA复制的比较 1.（P327T1）土壤盐渍化影响水稻生长发育。将水稻耐盐碱基因OsMYB56导入不耐盐碱水稻品种吉粳88中，培育耐盐碱水稻新品种，过程①PCR扩增OsMYB56需要添加引物，应选用的引物组合为 A.5′－CTTGGATGAT－3′和5′－TCTGTTGAAT－3′ B.5′－CTTGGATGAT－3′和5′－TAAGTTGTCT－3′ C.5′－ATTCAACAGA－3′和5′－ATCATCCAAG－3′ D.5′－ATTCAACAGA－3′和5′－GAACCTACTA－3′ √ 2（P327T2）.(2021·湖北，16)某实验利用PCR技术获取目的基因，实验结果显示除目的基因条带(引物与模板完全配对)外，还有2条非特异条带(引物和模板不完全配对)。为了减少反应非特异条带的产生，以下措施中有效的是 A.增加模板DNA的量 B.延长热变性的时间 C.延长延伸的时间 D.提高复性的温度 √ 3.以下两组引物设计的均不合理的原因是___________________________ _______________________________________________________________。 引物Ⅰ和引物Ⅱ局部发生碱基互补配对而失效，引物Ⅰ′自身折叠后会出现局部碱基互补配对而失效 碱基要随机分布，且引物自身和引物之间不能有连续4个碱基的互补。否则引物自身会折叠成发夹结构或二聚体，从而影响引物与模板的复性结合。 1、发夹结构（Hairpin） 自身互补 2、二聚体（Dimer） 两个引物间互补 发夹结构 二聚体 引物自身及引物之间不应存在互补序列 5’ 引物A 引物B 3’ 3’ 5’ 引物A 引物B 5’ 5’ 第1次 第2次 第3次 引物A 引物B 5’ 5’ 引物A 引物B 3’ 3’ 引物A 引物B 引物A 引物B 引物A 引物A 引物B 引物B 问题：若想在DNA两侧添加限制酶识别序列，可利用PCR技术对DNA进行扩增时，在引物A、B的 端分别添加限制酶识别序列。 5’ 总结1：引物设计的原则 1.引物长度一般为18--30个脱氧核苷酸 2.GC含量保持在40%-60%之间(GC过多会导致非特异性结合变多) 3.两种引物不互补 4.引物的5’端修饰，3’不能修饰 引物过长：会形成发夹结构，复性温度较高，对耐高温的DNA聚合酶活性有影响。 引物过短：可能导致非特异性扩增。 拓展　引物与复性温度 (1)复性温度：复性温度高，扩增特异性强；复性温度低，扩增效率高。 (2)引物： ①引物长度越长，复性温度越高；引物越短，复性温度越低 ②引物GC含量越高，容易出现非特异性结合，需要适当提高复性温度。 （GC越多，复性温度越高，GC越少，复性温度越小） S z L w h 引物的设计： 5` 5` 3` 3` 目的基因 5` 3` ① ② ③ ④ 扩增目的基因用： . 扩增目的基因两侧的序列用： . ②③ ①④ 检测目的基因是否正向插入载体用： . ⑤ ⑥ ⑦ ⑧ ③⑥ ②⑦ 包含目的基因和左侧或者右侧的序列 2.油菜的绿叶对黄化叶为显性。与绿叶基因相比，黄化叶基因有一个碱基对发生了改变，从而出现一个限制酶B的酶切位点。为鉴定某绿叶油菜的基因型，提取其DNA进行了PCR和电泳。下列叙述正确的是 A.需设计能与目的基因结合的双链DNA作为PCR引物 B.应在PCR扩增体系中添加Mg2＋，以激活DNA聚合酶 C.可适当降低复性的温度，以减少PCR中非特异性条带的产生 D.用限制酶B作用后进行电泳，若有2条电泳条带可判断为杂合子 √ 第二轮循环的产物 第三轮的产物 第一轮循环的产物 复制次数 1 2 3 n DNA分子数 含引物的DNA分子数 含引物1的DNA分子数 同时含引物1和2的DNA分子数 消耗引物数量 2n 2n 2n-1 2n-2 2n+1-2 2 4 8 2 4 8 1 3 7 0 2 6 2 6 14 三 PCR中的数量关系 问题：利用PCR技术扩增目的基因，在第几轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的DNA片段(即出现完整的目的基因)？ 5’ 3’ 5’ 5’ 第一次循环 第二次循环 3’ 5’ 第三次循环 3’ 3’ 思考 · 讨论 引物A 引物B 第1轮产物 第2轮产物 第3轮产物 模板链 画出PCR扩增3轮的产物，注意标出方向(虚线内的为目的基因) 总结2：引物的数量计算 (1)如图：一个DNA分子n次扩增，则： ①子代DNA分子中等长链的 DNA分子数为________个； ②子代DNA分子中不等长链 的DNA分子数为_____个； ③子代DNA分子中含模板链 DNA分子数为_____个； ④子代DNA分子中含引物A(或B)的DNA分子数为________个； ⑤复制过程中共需引物________个； 2n－2n 2n 2 2n－1 2n＋1－2 (2)已知引物1及引物2之间的序列为目的序列，若引物与DNA的结合位点如图所示，在第_____轮循环产物中开始出现两条单链等长的目的片段。 2 引物在中间，三轮得等长目的基因，引物一个在中间一个在末端，两轮得等长目的基因序列 A.②链从L到R的方向为3′→5′，①②链均可作为子链合成的模板 B.PCR 过程需要通过解旋酶断开氢键，且为边解旋边复制 C.以1个DNA为模板经3次循环需消耗8个引物③ D.物质③的5′端添加了某序列，至少需经2次循环才可获得该序列的双 链产物 3.如图表示 PCR 过程中某个阶段反应体系的情况，①②③④表示相关物质，L、R 表示方向。下列叙述正确的是 √ 问题：当DNA的某些序列已知，而需要扩增已知序列两端的未知序列时，如何解决？ ①用限制酶切割该DNA ②随后使用DNA连接酶将获得的酶切产物环化，这样就获得了已知序列两侧携带有未知序列的环状DNA分子。 ③以该已知序列为模板设计一对相反方向的特异性引物，该引物对已知序列反向，但对未知序列却是相向的，从而得以扩增出未知序列。 扩增未知序列 应用1：　利用PCR技术扩增未知基因序列 9.(2025·长沙模拟)水稻穗粒数可影响水稻产量。农杆菌Ti质粒的T－DNA可以转移并 随机插入野生型水稻基因组中(可在基因组单一位点插入也可以同时插入多个位点)，导致被插入的基因功能丧失，从而得到一系列水稻突变体。研究者从中筛选得到一株穗粒数异常突变体，为确定T－DNA插入植物细胞的染色体位置，可根据T－DNA序列，扩增其两侧未知序列比对，从而确定插入的染色体。 (1)图1所示序列使用限制酶酶切后，将所得DNA使用_________酶连成环状(如图2)，再设计引物进行PCR扩增，其中复性过程的作用是_________________ _____________________。 DNA连接 使引物通过碱基互 补配对结合到模板链上 (2)请根据图1的T－DNA的一条链的碱基序列，选出PCR中使用的引物序列是_____和_____(填序号)。 ① ③ T－DNA序列 引物序列 5′－AACTATGCGC ……CGTAGCCTAT－3′ ①5′－GCGCATAGTT－3′ ②5′－ATAGGCTACG－3′ ③5′－CGTAGCCTAT－3′ ④5′－AACTATGCGC－3′ (3)由图2中环状DNA至少经过______轮循环才能得到图示链状PCR产物 3 (4)经过与野生型水稻基因组序列比对，确定T－DNA插入2号染色体上的B基因中。研究发现，该突变体产量明显低于野生型，据此推测B基因可______(填“促进”或“抑制”)水稻穗粒的形成，从而控制高产性状。 促进 大一轮作业：重叠延申PCR应用预习 5.(2019·江苏，33节选)为鉴定筛选出的菌落中是否含有正确插入目的基因的重组质粒，拟设计引物进行PCR鉴定。图示 为甲、乙、丙3条引物在正确重组质粒中的相应 位置，PCR鉴定时应选择的一对引物是______。 某学生尝试用图中另外一对引物从某一菌落的 质粒中扩增出了400 bp片段，原因是_________ ________。 乙、丙 目的基因 反向连接 应用2：　利用PCR技术鉴定目的基因的连接方式 重叠延伸PCR技术是指在PCR技术的基础上，采用具有互补末端的引物，使PCR产物形成了重叠链，通过重叠链的延伸，将不同来源的片段重叠拼接起来的一项新技术。该技术在基因的定点突变、长片段基因的合成、基因敲除以及目的基因的扩增等方面有着独特的应用。 应用3：　利用PCR技术定点突变及构建融合基因 1.如何诱导干扰素基因的中间位点突变？ ---②重叠延伸PCR 【例】重叠延伸PCR 需要用到引物进行4次 PCR， 其操作步骤如图。图中所示的4次PCR如何选择引物？请填写以下表格（若选用该引物划“√”，若不选用该引物则划“×”）。 引物A 引物B 引物C 引物D PCR1 PCR2 PCR3 PCR4 √ √ √ √ √ √ × × × × × × × × × × a b c d 6.水蛭素是一种蛋白质，可用于预防和治疗血栓。某科研团队运用重叠延伸PCR技术在水蛭素基因中的特定位点引入特定突变，使水蛭素第47位的天冬酰胺(密码子为AAC、AAU)替换为赖氨酸(密码子为AAA、AAG)，从而提高水蛭素的抗凝血活性。原理如图。 注：图中的引物2和3的突起处代表与模板链不能互补的突变位点。 (1)由以上事例可知，要对蛋白质的结构进行改造，需要通过______ __________________来完成。 (2)若拟突变位点的碱基对为A－T，则需要让其突变为______________才能达到目的。引物2的突变位点(突起处)应设计为________(假设引物为单链DNA)。 因(或基因定点突变) 改造基 T－A或C－G A或G (3)在第一阶段获得2种具有重叠片段DNA的过程中，引物1、引物2组成的反应系统和引物3、引物4组成的反应系统中均进行一次复制，共产生____种DNA分子。该阶段必须将引物1、2和引物3、4置于不同反应系统中，这是因为__________________________ ________________________________。 3 引物2和3中存在互补配对片段，置于同一反应系统时会结合而失去作用 (4)利用重叠延伸PCR技术还可以将两个不同来源的DNA片段拼接起来。有人想利用该技术把基因M和N拼接在一起，设计基因M的引物M1、M2，基因N的引物N1、N2。在设计这4种引物时，特别要注意的问题是______ ___________________________________________________________。 M2中的一种引物与N1、N2中的一种引物必须具有互补配对的片段 M1、 重组PCR技术是一项新的PCR技术，可将原来两个不相关的DNA连接起来，组成一个新的分子。实验小组从猪源大肠杆菌中扩增得到LTB基因和ST1基因片段，用重组PCR技术构建了LTB-ST1融合基因。融合基因的制备过程如图所示。回答下列问题： (1)设计引物时，引物P1与引物P2的碱基序列        互补；引物P2与引物P3的碱基序列应 ，目的是        。 (2)为了使杂交链顺利延伸子链，至少需要经过2次循环才能得到用于杂交的目的链L、S，则第2次循环的目的是          。 (3)杂交链延伸生成LTB-ST1融合基因的过程中，        （填“需要”或“不需要”）加入引物。在图中标出杂交链两条母链的3′端和5′端。 部分互补 不能 使LTB基因与 STI基因的单链融合在一起 为杂交链延伸子链起始部位提供 3’端 不需要 3’ 3’ 5’ 5’ 2.如何通过PCR技术，构建融合基因？ 大引物PCR需要用到三条引物进行两轮PCR，这三条引物分别是突变上游引物、常规上游引物和常规下游引物。该技术的流程如图所示。 第一轮PCR利用突变上游引物和常规下游引物进行扩增，得到不完整的含有突变位点的DNA片段； 第二轮PCR利用第一轮扩增产物中的一条DNA链作为下游大引物，它与常规上游引物一起扩增得到完整的含有突变位点的DNA片段 应用4：大引物PCR 考点一 例．IKK激酶山IKKα、IKKβ和IKKγ三种亚基组成，该酶参与动物体内免疫细胞的分化。临床上发现某重症联合免疫缺陷（SCID）患儿的IKKβ基因编码区第1183位碱基T突变为C。为研究该患儿发病机制，研究人员应用大引物PCR定点诱变技术获得突变基因，并培育出SCID模型小鼠。图1为定点诱变获得突变基因的过程。 (1)在定点诱变获取突变基因时，PCR1中使用的引物有 ，PCR2中使用的引物有 。PCR1和PCR2不能在同一个反应体系中进行，原因是 。 引物之间能结合，会干扰引物和模板链的结合，影响PCR过程 引物A、引物C 引物B、大引物b 应用5：荧光定量PCR 1.实时荧光定量RT－PCR技术检测病毒核酸 病毒感染的常规检测方法是通过实时荧光PCR鉴定。实时荧光PCR扩增目的基因，需额外添加荧光标记探针(一小段单链DNA，可与目的基因中部序列特异性结合)。当探针完整时，不产生荧光。在PCR过程中，与目的基因结合的探针被耐高温的DNA 聚合酶水解，R与Q分离后，R发出的荧光可被检测到(如图甲)，通过实时荧光PCR检测某冠状病毒感染时，检测到的荧光强度变化如图乙，荧光到达预先设定阈值的循环数(Ct值)越小，说明病毒核酸浓度越高。 5.猴痘是由猴痘病毒(一种RNA病毒)感染所致的一种病毒性人畜共患病，临床上表现为发热、皮疹、淋巴结肿大等。猴痘病毒感染的常规检测方法是通过实时荧光PCR鉴定。 (1)首先，从样本中提取病毒RNA，经________酶作用生成cDNA；然后以cDNA为模板进行实时荧光PCR扩增，测定样品中病毒核酸量。 逆转录 (2)通过实时荧光PCR扩增目的基因，需额外添加荧光标记探针(一小段单链DNA，可与目的基因中部序列特异性结合)。当探针完整时，不产生荧光。在PCR过程中，与目的基因结合的探针被Taq DNA聚合酶水解，R与Q分离后，R发出的荧光可被检测到(如图1)。 ①当样本中有目的基因时，引物和探针与目的基因复 性时，通过_____________原则而特异性结合。 碱基互补配对 ②在PCR循环的延伸阶段，Taq DNA聚合酶催化子链的合成并水解探针。检测到的荧光强度与反应体系中DNA分子数呈________(填“正相关”或“反相关”)关系。 正相关 (3)通过实时荧光PCR检测猴痘病毒感染时，检测到的荧光强度变化如图2所示。 ①与指数增长期相比，线性增长期目的基因数量的增长率下降，原因可能有___________ ________________________________________________。 Taq DNA 聚合酶活性下降、引物浓度下降、原料dNTP浓度下降 ②Ct值的含义：在PCR扩增过程中，每个反应管内的荧光信号达到设定的荧光阈值时所经历的扩增循环数。因此，当样本中初始模板越多时，Ct就_______。 越小 ③某新猴痘病毒核酸检测说明书标明，Ct≤ 37判定为阳性，Ct>40或无Ct值判定为阴性。图2所示猴痘病毒核酸检测结果应判定为________。 阳性 (4)(多选)阴性结果也不能排除猴痘病毒感染，可能产生假阴性的因素有____。 a.取样太早，样本中病毒量少，达不到实时荧光PCR检测阈值 b.样本被污染，RNA酶将病毒RNA降解 c.病毒发生变异 abc （1）电泳：DNA分子具有_______________，在一定的 ________下，这些基团可以带上正电荷或负 电荷，在电场的作用下，这些带电分子会向着与它所带电荷________的电极移动，这个过程就是电泳。 可解离的基团 pH 相反 利用琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR产物 1 实验原理 一般使用的电泳缓冲液pH=8，DNA分子带 ，在电场中DNA便向 泳动。 负电荷 正极 磷酸电离形成的磷酸基团带负电 样品点样孔应靠近 极。 负 问题1：PCR的产物是什么？ 问题2：如何鉴定PCR的产物？ DNA片段 琼脂糖凝胶电泳 （2）鉴定方法：PCR的产物一般通过 来鉴定。 琼脂糖来源于红藻的多糖，其主要成分为多聚半乳糖，琼脂糖在水中一般加热到90℃以上溶解，温度下降到35-40℃时形成良好的半固体状的凝胶。 琼脂糖凝胶具有网络结构（孔径），孔径大小与琼脂糖凝胶浓度有关，浓度越高，孔径越 ，能够通过的核酸分子越 。 1 实验原理 琼脂糖凝胶电泳 在凝胶中DNA分子的迁移速率与_____________、_________________和______等有关 凝胶的浓度 DNA分子的大小 构象 小 小 利用琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR产物 核酸染色剂 常用的核酸染色剂有EB（溴化乙锭）、GoldView等，EB能插入DNA分子中的碱基对之间，导致EB与DNA结合。嵌入核酸碱基间的EB能吸收300nm波长的紫外光，发出可见荧光。其荧光强度与DNA分子的含量成正比。 1 实验原理 【问题1】DNA本身没有颜色，怎么在结果中观察到？ 【问题2】如何监测电泳进程？ 样品密度小可能流入附近加样孔，造成交叉污染。缓冲液中含有甘油或蔗糖等成分增加样品密度，保证每个样品都容易沉入各自的加样孔中，防止飘散。 1 实验原理 ①利用指示剂如溴酚蓝，有颜色，使样品呈现颜色，便于加样。 ②分子量较小，指示样品迁移的速率及方向，移动到距凝胶前沿1-2cm时停止电泳。 【问题3】如何保证加样时DNA不会飘散到缓冲液中？ 【问题4】如何确定待测DNA分子的大小和含量？ DNA Marker是 的片段，在实验时和样本DNA同时进行凝胶电泳，通过对比两者的迁移速率，可以大致估计 。 样本DNA的大小 已知的DNA分子大小 制备凝胶 观察鉴定 进行电泳 电泳缓冲液配制琼脂糖溶液，一般配制质量体积比0.8%～1.2%的琼脂糖溶液。在沸水浴或微波炉内加热至琼脂糖熔化。稍冷却后，加入适量的核酸染料混匀。 将温热的琼脂糖溶液迅速倒入模具，并插入合适大小的梳子，以形成加样孔。 待凝胶溶液完全凝固，小心拔出梳子，取出凝胶放入电泳槽内。 ①熔化： ②倒模: ③凝固: 3 方法步骤 利用琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR产物 制备凝胶 观察鉴定 进行电泳 将电泳缓冲液加入电泳槽中，电泳缓冲液没过凝胶1mm为宜 扩增得到的PCR产物与凝胶载样缓冲液(内含指示剂)混合，再用微量移液器将混合液缓慢注入凝胶的加样孔内。留一个加样孔加入指示分子大小的标准参照物（marker）。 接通电源，根据电泳槽阳极至阴极之间的距离来设定电压，一般为1～5V/cm。待 前沿迁移接近凝胶边缘时，停止电泳 ①加液 ②加样 ③电泳 3 方法步骤 利用琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR产物 指示剂 制备凝胶 观察鉴定 进行电泳 取出凝胶置于 下观察和照相。 3 方法步骤 利用琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR产物 紫外灯 一条条带（目的基因片段） 1.PCR后进行电泳鉴定的结果应该是几条条带？ 2.如图所示，该片段大小约为 。 750bp 思考·讨论 0次 12次 12次 30次 30次 Marker 根据条带的 及 来评价扩增的结果 3.判断PCR成功扩增出DNA片段的依据是什么？ 分布 粗细程度 估计DNA的大小 估计DNA的数量 4.你进行电泳鉴定的结果是几条条带？如果不止一条条带，请分析产生这个结果的可能原因？ 未出现扩增条带可能的原因有： ①引物出现质量问题； ②变性时温度 ，变性时间 ，模板DNA链未打开。 ③Taq酶失活； ④Mg2+浓度过 。 出现非特异性扩增带可能的原因有： ①引物特异性不强或容易聚合成二聚体 ②复性时的温度过低，引物随机连接到非目的基因片段 ③DNA聚合酶的浓度过高，即使引物与模板的结合并不完全匹配，酶仍可能催化延伸反应，生成非特异性扩增产物。 ④Mg2+浓度过高 ⑤模板DNA出现污染 低 低 短 思考·讨论 EVCapture4.1.9软件录制 Lavf57.25.100 本视频由湖南一唯信息科技开发的EV录屏软件录制，www.ieway.cn $