黑龙江佳木斯市第八中学2025-2026学年高二下学期5月期中生物试题

**基本信息** 聚焦现代生物科技，整合发酵工程、细胞工程、基因工程核心知识，通过豆豉制作、转基因斑马鱼监测等真实情境，考查生命观念与探究实践能力。 **题型特征** |题型|题量/分值|知识覆盖|命题特色| |----|-----------|----------|----------| |单选题|20/40|微生物发酵、植物体细胞杂交、动物细胞培养等基础概念|直接考查核心术语，如酵母菌代谢类型、单克隆抗体制备原理| |多选题|5/15|胚胎干细胞诱导、转基因克隆猪培育等实验流程|结合流程图分析操作逻辑，如原生质体融合筛选方法| |非选择题|5/45|发酵工艺设计、原生质体融合、基因工程应用等综合知识|以“三亲试管婴儿”“雌激素污染监测”等科技前沿为情境，融合实验设计与结果分析，如探究原生质体密度对融合率的影响|

高二生物参考答案 题号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 答案 B C B B A B A A D B 题号 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 答案 A D D A A C C C D B 题号 21 22 23 24 25 答案 ABD CD BCD CD ABD 1．B 【详解】A、乳酸菌为厌氧型微生物，无氧呼吸产物为乳酸，多用于制作泡菜、酸奶，不能用于果酒制作，A错误； B、酵母菌为兼性厌氧型微生物，无氧条件下可将葡萄糖分解为酒精和二氧化碳，是果酒制作的主要微生物，B正确； C、醋酸菌为好氧型微生物，可将糖类或乙醇转化为醋酸，是果醋制作的主要微生物，不能用于果酒制作，C错误； D、毛霉为需氧型微生物，可产生蛋白酶、脂肪酶分解大分子有机物，是腐乳制作的主要微生物，不能用于果酒制作，D错误。 2．C 【详解】泡菜发酵初期，硝酸盐还原菌大量繁殖，将硝酸盐还原为亚硝酸盐，亚硝酸盐含量逐渐升高；随发酵进行，乳酸积累抑制硝酸盐还原菌的生长繁殖，同时已生成的亚硝酸盐被逐步分解，亚硝酸盐含量下降，整体呈现先升高后降低的趋势，ABD错误，C正确。 3．B 【详解】AB、选择培养基的核心作用是通过调整培养基成分，抑制不需要的杂菌生长，同时促进所需目的微生物的生长，进而筛选出目的菌株，A错误，B正确； CD、选择培养基可用于目的微生物的筛选、富集、计数等，CD错误。 4．B 【详解】A、菌种的选育是发酵工程的前提环节，只有获得性状优良的菌种才能开展后续发酵生产，不是中心环节，A错误； B、发酵罐内的发酵过程是微生物在适宜条件下代谢产生目标产物的核心阶段，该过程的发酵条件控制直接决定产物的产量和品质，是发酵工程的中心环节，B正确； C、培养基的配制是发酵前的准备环节，作用是为菌种生长、代谢提供所需的营养环境，不是中心环节，C错误； D、产品的分离提纯是发酵完成后的后续加工环节，作用是从发酵体系中纯化得到符合要求的终产品，不是中心环节，D错误。 5．A 【分析】发酵工程是指采用现代工程技术手段，利用微生物的某些特定功能，为人类生产有用的产品，或直接把微生物应用于工业生产过程的一种技术。发酵工程的内容包括菌种选育、培养基的配制、灭菌、种子扩大培养和接种、发酵过程和产品的分离提纯（生物分离工程）等方面。 【详解】A、酵母菌为兼性厌氧微生物，既能进行有氧呼吸，也能进行无氧呼吸，A正确； B、淀粉分解形成糖浆后需灭菌，B错误； C、发酵时产生CO2，会使发酵罐中pH下降，C错误； D、消毒后还需要进行过滤，D错误。 故选A。 6．B 【详解】A、快速繁殖优良品种是植物组织培养的应用，不属于植物体细胞杂交的优点，A不符合题意； B、传统有性杂交存在远缘杂交不亲和的局限，植物体细胞杂交可将不同物种的体细胞融合后培育为杂种植株，克服远缘杂交不亲和的障碍，这是其最大优点，B符合题意； C、生产无病毒植株是利用植物分生区几乎无病毒的特点，通过植物组织培养技术实现，与植物体细胞杂交无关，C不符合题意； D、制备人工种子是将植物组织培养得到的胚状体、不定芽等包裹人工种皮获得，属于植物组织培养的应用，D不符合题意。 7．A 【详解】A、植物细胞外层的细胞壁会阻碍细胞间的融合，因此植物体细胞杂交的第一步需要用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁，获得具有活力的原生质体，A正确； B、动物细胞融合属于动物细胞工程的技术范畴，不属于植物体细胞杂交的操作步骤，B错误； C、细胞核移植是将供体细胞核移入去核卵母细胞的技术，多用于动物克隆操作，不属于植物体细胞杂交的步骤，C错误； D、转基因技术属于基因工程范畴，是定向导入外源基因改造生物性状的技术，不属于植物体细胞杂交的操作步骤，D错误。 故选A。 8．A 【分析】细胞经分裂和分化后，仍然具有产生完整生物体或分化成其他各种细胞的潜能，即细胞具有全能性。 【详解】植物细胞细胞核含有本物种全套遗传信息，故植物细胞能体现出全能性，A正确，BCD错误。 故选A。 9．D 【分析】植物组织培养过程包括脱分化和再分化两个过程。植物组织培养需要一定的条件：①细胞离体和适宜的外界条件（如适宜温度、适时的光照、pH和无菌环境等）；②一定的营养（无机、有机成分）和植物激素（生长素和细胞分裂素）。 【详解】①植物组织培养过程需要无菌操作，所以需要消毒灭菌，①正确； ②脱分化形成愈伤组织的培养基需要一定浓度的植物激素，②正确； ③植物组织培养过程需要适宜的温度，③正确；     ④脱分化形成愈伤组织时，需要避光，否则会形成维管组织，④错误；     ⑤植物组织培养需要充足的养料，⑤正确。 故选D。 10．B 【详解】制备单克隆抗体时需要向实验动物注射肿瘤细胞表面的抗原，以刺激动物体内产生免疫的B淋巴细胞，为杂交瘤细胞的获取提供条件，ACD不符合题意，B符合题意。 故选B。 11．A 【详解】动物细胞培养过程：取动物胚胎或幼龄动物组织→剪碎组织→蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养液中（原代培养）→放入二氧化碳培养箱培养→贴满瓶壁的细胞用酶分散为单个细胞，制成细胞悬液→转入培养液（传代培养）→放入二氧化碳培养箱培养（95%空气和5%的CO2）。 【分析】A、动物细胞培养通常使用液体培养基（如合成培养基），固体培养基多用于微生物培养或植物细胞培养，A错误； B、胰蛋白酶能分解细胞间的蛋白质，使组织分散成单个细胞，B正确； C、动物细胞培养的适宜pH为7.2-7.4，接近中性，C正确； D、动物细胞培养需要O₂（用于细胞呼吸）和CO₂（维持培养液pH稳定），D正确； 故选A。 12．D 【分析】据图分析，A羊提供卵细胞的细胞质，B羊体细胞的细胞核，形成重构胚，移植到C羊的子宫内，形成的克隆羊性状与B羊相似。 【详解】克隆羊是利用了细胞核移植技术，其生殖方式为无性生殖； 该克隆羊继承了B羊的全部的细胞核基因和A羊的细胞质基因，因此其基因型为aa。 故选D。 13．D 【详解】A、试管牛培育的核心技术是体外受精和胚胎移植，其原理是有性生殖过程中基因的重组，A错误； B、受体母牛需与供体母牛同期发情处理，以保证胚胎移植后正常发育，B错误； C、精子采集后，需在体外进行获能处理，才能在体外完成受精过程，C错误； D、胚胎移植前，可取囊胚的滋养层细胞进行性别鉴定，滋养层细胞未来形成胎膜和胎盘，这样既不影响内细胞团发育又不会损伤胚胎，D正确。 故选D。 14．A 【详解】试管动物的培育过程是①卵母细胞的采集和培养、②精子的采集和获能、③受精、④胚胎的早期培养和③胚胎移植，BCD错误，A正确。 故选A。 15．A 【分析】受精过程为：顶体反应→穿越放射冠→穿越透明带（透明带反应）→卵细胞膜反应（卵黄膜封闭作用）→卵子完成减数第二次分裂并释放第二极体→雌雄原核的形成、核膜消失，雌、雄原核融合形成合子→第一次卵裂开始。 【详解】受精过程为：获能后的精子与卵子相遇并释放多种酶 →精子穿越卵细胞膜外的结构相继发生顶体反应→穿越放射冠→穿越透明带（透明带反应）→卵细胞膜反应（卵黄膜封闭作用）→卵子完成减数第二次分裂并释放第二极体→雌雄原核的形成、核膜消失，雌、雄原核融合形成合子→受精卵第一次分裂开始。故过程为③④②⑤⑥①,A正确，BCD错误。 故选A。 16．C 【分析】核移植技术指的是将动物的一个细胞的细胞核移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育成动物个体；用核移植的方法得到的动物称为克隆动物，原理是动物细胞核的全能性；动物细胞核移植可分为胚胎细胞核移植和体细胞核移植。 【详解】A、该技术能大幅度改善卵子质量、解决卵子老化的问题，但是没有解决精子不佳的问题，A错误； B、由于经过了受精作用，“三亲婴儿”的出生属于有性生殖，该婴儿的遗传物质来自提供细胞质的捐献者、提供细胞核的母亲和提供精子的父亲，B错误； C、高龄女性容易产生质量不佳的卵子，而重组的卵细胞成活力较强，该技术能极大地提高高龄患者的试管婴儿成功率，C正确； D、体外受精不需要灭活病毒诱导，D错误。 故选C。 17．C 【详解】①处为氢键，是解旋酶的作用部位；②处为磷酸二酯键，是限制性内切核酸酶的作用部位；③处为两个DNA片段的缺口，是DNA连接酶的作用部位。综上所述，C正确。 故选C。 18．C 【分析】限制酶在识别序列中轴线两侧将DNA分子的两条单链切开时，形成的是黏性末端；限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，切开的DNA两条单链的平整的切口，形成平末端。 【详解】限制酶在识别序列中轴线两侧将DNA分子的两条单链切开时，形成的是黏性末端；限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，切开的DNA两条单链的平整的切口，形成平末端。分析题图可知，SpeI切割后形成黏性末端，EcoRV切割后形成平末端，C正确，ABD错误。 故选C。 19．D 【分析】PCR技术： 1、概念：PCR全称为聚合酶链式反应，是一项在生物体外复制特定DNA的核酸合成技术． 2、原理：DNA复制． 3、前提条件：要有一段已知目的基因的核苷酸序以便合成一对引物． 4、条件：模板DNA、四种脱氧核苷酸、一对引物、热稳定DNA聚合酶（Taq酶） 5、过程：①高温变性：DNA解旋过程（PCR扩增中双链DNA解开不需要解旋酶，高温条件下氢键可自动解开）；低温复性：引物结合到互补链DNA上；③中温延伸：合成子链． 【详解】A、用PCR技术扩增目的基因，应以含有目的基因的DNA片段作为模板，A正确； B、PCR技术的前提条件是目的基因的一段核苷酸序列已知，以便合成一对引物，B正确； C、DNA复制需要有足够的脱氧核苷酸作为原料，C正确； D、PCR技术需要耐高温的DNA聚合酶，不需要加入DNA连接酶，D错误。 故选D。 20．B 【详解】RCR技术是一种体外扩增DNA的方法，其所需条件包括模板DNA、引物、脱氧核苷酸（dNTP）、耐高温的DNA聚合酶（如Taq酶）以及适宜的缓冲体系和温度循环，A、C、D错误。 故选B。 21．ABD 【分析】单克隆抗体的制备是用已免疫的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，筛选出能产生特定抗体的骨髓瘤细胞，骨髓瘤细胞有亲本细胞的遗传物质，因此既能无限增殖又能产生特异性抗体。 【详解】A、胰蛋白酶能水解蛋白质，用胰蛋白酶处理内细胞团获得单个的胚胎干细胞，A正确； B、过程②运用了动物细胞培养技术，所依据的生物学原理是细胞增殖，B正确； C、细胞之间的融合是随机的，过程⑤获得的丙细胞的数量不会等于甲细胞或乙细胞的数量，C错误； D、丙细胞为杂交瘤细胞，既能无限增殖又能产生抗H1N1病毒的抗体，D正确。 故选ABD。 22．CD 【分析】分析题图：该荧光克隆猪的培育涉及了多项生物工程技术。首先导入目的基因的猪胎儿成纤维细胞要经过动物细胞培养筛选出转基因体细胞，然后该细胞的细胞核与去核卵细胞进行细胞核移植获得重组细胞，重组细胞经过早期胚胎培养到桑葚胚或囊胚期，最后经过胚胎移植技术将早期胚胎移植到代孕母猪子宫内，最后生成荧光克隆猪。该过程中利用基因工程、动物细胞培养、细胞核移植、早期胚胎培养和胚胎移植等技术。 【详解】A、①过程属于细胞工程的范畴，②过程属于基因工程，A错误； B、⑤过程为胚胎移植技术，受体子宫一般不会对外来的胚胎产生免疫排斥反应，故不需要进行免疫排斥检查，B错误； C、④过程重组细胞经过早期胚胎培养到桑葚胚或囊胚期移植，C正确； D、⑤过程为胚胎移植技术，其优点是可充分发挥雌雄优良个体的繁殖潜力，D正确。 故选CD。 23．BCD 【分析】分析图示可知，①过程为原生质体的制备过程，需要纤维素酶和果胶酶，②过程为原生质体的融合过程，需要诱导剂诱导融合，③过程为植物组织培养的过程。 【详解】A、植物细胞壁的主要成分是纤维素和果胶，所以过程①需使用纤维素酶和果胶酶处理，A错误； B、②过程为细胞融合过程，该过程依赖膜的流动性，B正确； C、过程③以杂种细胞为外植体，需应用植物组培技术将杂种细胞培养形成个体，C正确； D、三倍体植株含有三个染色体组，减数分裂时联会紊乱，可产生无籽柑橘，D正确。 故选BCD。 24．CD 【分析】PCR 反应需要在一定的缓冲溶液中才能进行，需提供DNA模板，分别与两条模板链结合的2种引物，4种脱氧核苷酸和耐高温的DNA聚合酶；同时通过控制温度使 DNA复制在体外反复进行。扩增的过程是：目的基因DNA 受热变性后解为单链，引物与单链相应互补序列结合；然后以单链 DNA 为模板，在 DNA 聚合酶作用下进行延伸，即将4种脱氧核苷酸加到引物的3'端，如此重复循环多次。 【详解】A、PCR是体外模拟DNA复制过程，需要DNA模板、4种脱氧核糖核苷酸、耐高温的DNA聚合酶和引物。PCR过程不需要添加解旋酶，依靠加热即可使模板DNA的两条链解旋，A错误； B、使用BamH I时会导致终止子序列和两个抗生素抗性基因可能都被切割掉，导致重组质粒的应有功能缺失，B错误； C、E.coli DNA连接酶或T4 DNA连接酶都可对如图所示的黏性末端进行连接，C正确； D、在用抗生素筛选的过程中，菌落3和菌落5因为没有氯霉素抗性基因而无法存活。但菌落3和菌落5携带了Ipp20基因，故可用其生产Hp疫苗，D正确。 故选CD。 25．ABD 【分析】由图可知，由于DNA聚合酶只能从5′→3′延伸子链，图中的磷酸基团为5'端，羟基为3′端，由于引物要延伸子链，子链和模板链反向平行，因此根据引物的延伸方向可知图中与引物结合的部位是2、3。 【详解】A、若从该DNA片段中直接获取蛛丝蛋白基因，DNA每条链上会破坏2个磷酸二酯键，共会破坏4个磷酸二酯键，A正确； B、由于DNA聚合酶只能从5′→3′延伸子链，图中的磷酸基团为5'端，羟基为3′端，由于引物要延伸子链，子链和模板链反向平行，因此根据引物的延伸方向可知图中与引物结合的部位是2、3，B正确； C、大肠杆菌是原核生物，无内质网和高尔基体，C错误； D、 如图所示，设X基因为目的基因。经过第一轮复制以亲代DNA的两条链做模板，可以得到①和②两种DNA；经过第二轮复制可以得到①和③、②和④；经过第三轮复制可以得到①和③、③和⑤、②和④、④和⑤；第四轮复制得到16个DNA分子，即①和③、2个③和2个⑤、②和④、2个④和2个⑤、第二轮的2个⑤得到4个⑤（统计为①、②、3个③、3个④、8个⑤）；第五轮复制得到32个DNA分子，即①和③、②和④、3个③和3个⑤、3个④和3个⑤、第四轮的8个⑤得16个⑤（统计为①、②、4个③、4个④、22个⑤，即还未获得32个目的基因），第六轮复制得64个DNA分子，即①和③、②和④、4个③和4个⑤、4个④和4个⑤、第五轮的22个⑤得44个⑤（统计为①、②、5个③、5个④、52个⑤，即此时获得32以上符合条件的目的基因），综上所述，需要至少6次循环可获得32个符合要求的目的基因，D正确。 故选ABD。 26．(1) 氮源 先调节pH，后灭菌 (2) 异养兼性厌氧 关闭 (3) 升高 保持通氧状态或打开软管夹和充氧泵 (4) 热杀死种子胚，但不使淀粉酶失活 主发酵 (5)纯培养物 【详解】（1） 蛋白胨是有机氮源，可为细菌提供氮源和维生素；配制培养基时，需要先调pH再灭菌，避免灭菌后调pH引入杂菌污染。 （2）酵母菌同化类型为异养，异化类型兼性厌氧，因此代谢类型为异养兼性厌氧型；发酵罐留1/3空间，一是为酵母菌初期有氧呼吸提供氧气，满足其大量繁殖；二是容纳发酵产生的二氧化碳，防止发酵液溢出；果酒发酵需要无氧环境，因此软管夹需要关闭，仅定期排气。 （3）果醋发酵的醋酸菌适宜温度高于果酒发酵的适宜温度，因此由果酒发酵转为果醋发酵时需要升高温度，此外醋酸菌是好氧菌，因此需要保持通氧状态或打开软管夹和充氧泵；糖源不足时醋酸菌将乙醇转化为醋酸，反应式为C2H5OH+O2CH3COOH+H2O+能量。 （4）啤酒工业化生产中，焙烤发芽大麦的目的是杀死种子的胚、终止发芽，避免胚消耗种子储存的淀粉，同时不使淀粉酶失活；酵母菌繁殖、酒精生成主要发生在主发酵阶段。 （5）由单一个体繁殖获得的纯微生物群体，称为纯培养物（纯种），是工业大规模发酵获得稳定产品的基础。 27．(1) 纤维素酶和果胶酶 等渗（或高渗） (2) 聚乙二醇（PEG） 三白草和鱼腥草原生质体分别被标记红、绿荧光，同时带有两种荧光的原生质体才是两种植物的杂种原生质体（可排除自身融合的原生质体） (3) 1×106 密度过高，原生质体的相互黏连、聚集作用过强，PEG的诱导作用受到影响 (4)A、B两组的胸腺重量相同且都大于C组 【详解】（1）植物细胞壁主要由纤维素和果胶组成，所以过程①中，需用纤维素酶和果胶酶去除植物细胞壁以获取原生质体。由于原生质体没有细胞壁的保护，在低渗溶液中会吸水涨破，因此该过程需在等渗（或高渗）溶液中进行。 （2）过程②诱导原生质体融合常用的化学诱导剂是聚乙二醇（PEG）。因为三白草原生质体被标记了红色荧光色素，鱼腥草原生质体被标记了绿色荧光色素，只有同时带有红、绿两种荧光的原生质体才是三白草和鱼腥草融合形成的杂种原生质体，所以在荧光显微镜下筛选杂种原生质体时，应选择同时带有红、绿两种荧光的原生质体。 （3）由图2可知，当原生质体密度为1×106个/mL时，双核异核融合体的比例最高，所以促进双核异核融合体形成的最适原生质体密度为1×106个/mL。高于此密度时，原生质体之间距离过近，相互黏连、聚集作用过强，会抑制PEG的诱导效果，从而不利于形成双核异核融合体。 （4）该实验的目的是判断融合体对动物免疫力的影响，C组作为空白对照组，给予等量的蒸馏水处理，A组是三白草和鱼腥草杂种愈伤组织的蒸馏水提取物处理组，B组是三白草和鱼腥草直接混合后的蒸馏水提取物处理组。若利用原生质体融合技术将复方的配伍提前并实现有效成分的工厂化生产是可行的，那么融合体（A组）的效果应与天然复方（B组）相当，即A、B两组的胸腺重量相近且都大于C组。 28．(1) 不改变 减数第二次分裂中期 (2)雌、雄原核 (3) 有丝分裂 桑葚胚或囊胚 受体不会对外来胚胎发生免疫排斥反应 (4) 胚胎分割 将内细胞团进行均等分割 【分析】表观遗传是指细胞内基因序列没有改变，但发生DNA甲基化、组蛋白修饰等，使基因的表达发生可遗传变化的现象。 【详解】（1）基因甲基化属于表观遗传，只调控基因表达，不会改变基因碱基序列，自然状态下，卵细胞需发育到减数第二次分裂中期才成熟，具备与精子受精能力。 （2）受精时，卵细胞完成减数第二次分裂排出第二极体，能观察到两个极体，且精子、卵细胞的细胞核会形成雄原核和雌原核，所以观察到两个极体或雌、雄原核可作为受精标志。 （3）早期胚胎发育时细胞通过有丝分裂增加数量，②是胚胎移植过程，通常胚胎发育到桑葚胚或囊胚期阶段适合进行胚胎移植。受体子宫对移入胚胎基本不发生免疫排斥，所以无需免疫抑制剂。 （4）胚胎分割能让一个胚胎变成多个，提高利用率。囊胚期内细胞团将发育成胎儿组织，分割时必须将其均等分割，否则影响胚胎发育。 29．(1)P2A序列产生的2A肽能将融合蛋白切割成独立的两种蛋白，有助于序列两侧的基因表达成独立的蛋白质 (2) EcoR Ⅰ、Hind Ⅲ B (3) 氨苄青霉素 显微注射 (4)转基因斑马鱼在雌激素浓度较高（100ng/L和10ng/L）时有急性响应/响应最快，在较低浓度时也具有反应性，但需较长时间。（响应具有浓度依赖性：雌激素浓度越高，斑马鱼胚胎出现荧光的响应时间越短，对雌激素的响应越灵敏） (5)实验设计：将上述转基因斑马鱼分为两组，A组：不作处理，B组敲除E蛋白基因，两组添加等量雌激素，培养观察荧光素酶表达情况。预期结果：A组有荧光，B组无荧光 【详解】（1）由图2可知，P2A基因表达的2A肽会将蛋白1与蛋白2剪开，有助于序列两侧的基因表达成独立的蛋白质。 （2）为降低“空载”概率，需要选用双酶切法，根据图1信息可知基因载体存在2个BamH Ⅰ酶切位点，不能使用，BsrG Ⅰ会把P2A序列切掉，因此也不能使用。所以使vtg基因与Luc基因载体形成重组载体，选用限制酶EcoR Ⅰ与Hind Ⅲ。依据图3推测引物1是以3’-TTGATA-5’为模板的，并与其互补，所以引物1碱基序列中应该含有5’ -AACTAT-3 ’，以及EcoR Ⅰ的识别序列（5’ -GAATTC-3 ’），故引物1包含的碱基序列为5’ -GAATTCAACTAT-3 ’，B符合题意。 （3）vtg-Luc基因重组载体中含Ampr抗性基因与Luc荧光素酶基因，所以将“vtg-Luc基因重组载体”导入大肠杆菌中进行扩增，为便于筛选，应将大肠杆菌接种在含氨苄青霉素的培养基中。该基因表达载体还需通过显微注射的方法导入斑马鱼受精卵细胞。 （4）分析表格数据可知，随着雌激素浓度的升高，胚胎最早出现荧光的时间逐渐缩短。这表明转基因斑马鱼在雌激素浓度较高（100ng/L和10ng/L）时有急性响应/响应最快，在较低浓度时也具有反应性，但需较长时间。（响应具有浓度依赖性：雌激素浓度越高，斑马鱼胚胎出现荧光的响应时间越短，对雌激素的响应越灵敏）。 （5）要验证雌激素可能通过E蛋白激活vtg基因的表达，可设计如下实验：实验设计：将上述转基因斑马鱼分为两组，A组：不作处理，B组敲除E蛋白基因，两组添加等量雌激素，培养观察荧光素酶表达情况。预期结果：A组有荧光，B组无荧光。 30．(1)染色体的DNA (2) 5'-AAGCTTTC-3' 潮霉素 确保只有1个SCLI4基因整合至细胞染色体DNA (3)突变体T中SCL14基因表达量无明显差异 (4)比较两种转录组的差异性/寻找Cd胁迫下受到SCL14蛋白特异性调控的基因 【详解】（1）农杆菌转化法中，Ti 质粒的 T-DNA 片段可以随机整合到植物细胞的染色体DNA（核基因） 中，从而稳定遗传给后代。 （2）①为保证基因定向连接，Ti质粒启动子后酶切位点顺序为BamH Ⅰ→Hind Ⅲ，选择BamH Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切载体，而SCL14的下游（转录终止端）本身自带BamH Ⅰ位点，仅需在上游引物5'端加入Hind Ⅲ的识别序列（5′−AAGCTT−3′，共6个碱基），SCL14基因开头序列为TCGCAACGTG，后续两个碱基为TC，因此上游引物5'端前8个碱基为5'-AAGCTTTC-3'。 ②潮霉素抗性基因位于T-DNA区域，随T-DNA整合到植物基因组中，卡那霉素抗性基因位于T-DNA外，因此用含潮霉素的培养基筛选成功转入重组T-DNA的植株。 ③3:1是一对等位基因的性状分离比，说明目的基因仅插入一个染色体位点，为单拷贝，后续自交筛选纯合株系更简便；若为15:1说明目的基因插入两个非同源染色体，后续筛选纯合难度大，故优先选择分离比为3:1而非15:1或其他比例的植株的目的是确保只有1个SCLI4基因整合至细胞染色体DNA。 （3）若SCL14与 TGA3 蛋白独立调控拟南芥对 Cd 的耐受性，则突变体 S（SCL14 缺失）中 TGA3 表达量无明显差异；同时，突变体 T（TGA3 缺失）中 SCL14的表达量也无明显差异，说明两者的表达互不影响，功能上独立调控。 （4）提取总mRNA测序属于转录组分析，目的是比较两种转录组的差异性，寻找Cd胁迫下受到SCL14蛋白特异性调控的基因，明确其调控耐镉性的机制。 答案第1页，共2页 答案第1页，共2页 学科网（北京）股份有限公司 $2025一2026学年度第二学期生物考试 高二生物答题卡（满分：100分） 班 级： 条形粘贴处 姓 名： 注1.答题前，考生务必首先认真核准条形码上的姓名、考号，然后使用0.5毫米墨水签字笔将考生学校、班级、姓名、考号填写在相应位置 2.答第I卷时，必须使用2B铅笔填涂。修改时，要使用橡皮擦干净。正确填涂样例：■ 意 3.答第Ⅱ卷时，必须使用0.5毫米黑色墨水签字笔书写清楚。要求字体工整、笔迹清晰。严格按题号所指的答题区域作答，超出答题区域 书写的答案无效：在试卷、草稿纸上答题无效。 4.保持答题卡清洁、完整。严禁在答题卡上作任何标记，严禁使用涂改液、胶带和修正液 项5.未按上述要求填写、答题，影响评分质量，后果自负 、 单择题（每题2分，40分) 1[A[B][C][D] 6 [A][B][C][D] 11[A][BI[C][D] 16[A][B][C[D] 2 [A][B][C][D] 7[A[B[C][D] 12 [A][B][c][D] 17 [A][B][C][D] 3[A][B][C][D] 8[A][B][C][D] 13[A][B][C][D] 18[A][B][C[DI 4 [A][B][C][D] 9 [A][B][C][D] 14[A][BI[C][D] 19[A][B][C][D] 5 [A][B][C][D] 10[A[BI[C][D] 15[A][B][C][D] 20[A][B][C][D] 二、多选题（每题3分，选错0分，选不全1分，共15分） 21[A][B][C][D] 22[A][B][C][D] 23[A[B][CI[D] 24[A][B][C][D] 25[A[B][C][D] 非选择题（共45分） 26、(12分)(1) (2) (3) (3分) 27、(7分) (1) (2) (3) (4) 28、 (8分) (1) (2) (3) 29、(9分) (1) (2) (3) (4) (5) (3分) 30、(9分) (1) (2)① ② ③ (2分) (3) 2025-2026学年度第二学期生物考试 高二生物试题 分值：100分 考试时间：75分钟 一、单选题（每小题2分，共40分） 1．制作果酒利用的主要微生物是（　　） A．乳酸菌 B．酵母菌 C．醋酸菌 D．毛霉 2．泡菜制作过程中，亚硝酸盐含量变化趋势是（　　） A．一直升高 B．一直降低 C．先升高后降低 D．先降低后升高 3．选择培养基的作用是（　　） A．培养所有微生物 B．抑制不需要的微生物，促进所需微生物生长 C．仅用于微生物计数 D．仅用于微生物纯化 4．发酵工程的中心环节是（　　） A．菌种的选育 B．发酵罐内的发酵过程 C．培养基的配制 D．产品的分离提纯 5．啤酒是以大麦为主要原料经酵母菌发酵制成的，下列叙述正确的是（　　） A．酵母菌为兼性厌氧微生物 B．淀粉分解形成糖浆后无需灭菌 C．发酵时发酵罐中pH恒定不变 D．发酵后直接消毒分装获得产品 6．植物体细胞杂交的最大优点是（　　） A．快速繁殖优良品种 B．克服远缘杂交不亲和的障碍 C．生产无病毒植株 D．制备人工种子 7．下列属于植物体细胞杂交技术步骤的是（　　） A．去除细胞壁获得原生质体 B．动物细胞融合 C．细胞核移植 D．转基因技术 8．植物细胞全能性体现的根本原因是（    ） A．细胞含本物种全套遗传信息 B．细胞具有细胞壁 C．激素诱导细胞分裂 D．脱离母体环境 9．在离体的植物器官、组织或细胞脱分化形成愈伤组织的过程中，需要的条件是（　　） ①消毒和灭菌  ②一定浓度的植物激素  ③适宜的温度 ④充足的光照　⑤充足的养料 A．①③④⑤ B．②③④⑤ C．①②③④ D．①②③⑤ 10．将抗癌药物与特异性识别肺癌细胞的单克隆抗体连接，单克隆抗体可精准携带药物靶向杀伤肺癌细胞，减少对正常细胞的损伤。利用小鼠生产该单克隆抗体，需给小鼠注射（    ） A．抗肺癌细胞的抗体 B．肺癌细胞的抗原 C．抗癌药物 D．正常肺部组织细胞 11．动物细胞培养需要在适宜条件下进行。下列关于动物细胞培养的叙述，错误的是（    ） A．动物细胞培养一般选用固体培养基 B．胰蛋白酶处理可以使细胞分散开 C．多数动物细胞适宜生存在pH为中性的环境 D．动物细胞培养所需的主要气体包括O2和CO2 12．下图是某克隆羊培育过程模式图，试分析获得该克隆羊的生殖方式、该克隆羊的基因型（　　） A．无性生殖、Aa B．有性生殖、AA C．有性生殖、aa D．无性生殖、aa 13．为增加产奶量高的奶牛数量，进行了“试管牛”培育，过程如图。下列叙述正确的是（　　） A．“试管牛”培育的原理是成体的体细胞具有全能性 B．需对良种母牛和良种公牛进行同期发情处理 C．精子采集后不能进行体外培养，应尽快用于体外受精 D．可取囊胚期的滋养层细胞进行性别鉴定 14．以下是制定并研究设计的“试管牛”工厂化生产技术流程,其中正确的顺序应是（    ） ①卵母细胞的采集和培养　②精子的采集和获能　③受精　④胚胎的早期培养和胚胎移植 A．①②③④ B．①②④③ C．①④②③ D．②①④③ 15．下列关于体内受精过程的排序，正确的是（    ） ①受精卵卵裂开始 ②雄原核的形成 ③获能后的精子与卵子相遇并释放多种酶 ④精子穿越卵细胞膜外的结构 ⑤释放第二极体，雌原核的形成 ⑥两个原核靠近，核膜消失 A．③④②⑤⑥① B．③②④⑤⑥① C．④⑤②③⑥① D．④⑤①②③⑥ 16．“三亲试管婴儿”的培育过程可选用如下技术路线。下列叙述正确的是（    ）    A．该技术能大幅度改善卵子质量、解决卵子老化和精子质量不佳等问题 B．“三亲婴儿”的出生属于有性生殖，该婴儿的遗传物质来自提供细胞核的母亲和提供精子的父亲 C．该技术能极大地提高高龄患者的试管婴儿成功率 D．通常用灭活的病毒诱导精子和卵母细胞融合实现体外受精 17．如图为DNA分子的某一片段，其中①②③分别表示某种酶的作用部位，则相应的酶依次是（　　） A．DNA连接酶、限制性内切核酸酶、解旋酶 B．限制性内切核酸酶、解旋酶、DNA连接酶 C．解旋酶、限制性内切核酸酶、DNA连接酶 D．限制性内切核酸酶、DNA连接酶、解旋酶 18．限制酶SpeI和EcoRV的识别序列和切割位点如图所示。据图分析，SpeI、EcoRV切割相应的DNA片段后所产生的DNA片段末端分别是（　　） A．平末端、黏性末端 B．黏性末端、黏性末端 C．黏性末端、平末端 D．平末端、平末端 19．利用PCR技术从某种生物的基因组DNA中获取目的基因。有关这一过程，下列说法错误的是（　　） A．以含有目的基因的DNA片段作为模板 B．目的基因的一段核苷酸序列已知，以便根据这一序列合成两种引物 C．有足够的脱氧核苷酸作为原料 D．加入足够数量的DNA连接酶进行指数式扩增 20．下列属于PCR技术所需条件的是（    ） ①单链的脱氧核苷酸序列引物②目的基因所在的DNA片段③脱氧核苷酸④核糖核苷酸⑤DNA连接酶⑥DNA聚合酶⑦DNA限制性内切酶 A． ①②③⑤ B．①②③⑥ C．①②③⑤⑦ D．①②④⑤⑦ 二、多选题（每小题3分，选错0分，选不全1分，共15分） 21．某研究团队利用小鼠胚胎干细胞诱导多种细胞，进而用于制备单克隆抗体，其流程图如下图所示。下列叙述正确的是（    ）   A．过程①中可用胰蛋白酶获得单个的胚胎干细胞 B．过程②的技术所依据的生物学原理是细胞增殖 C．过程⑤获得的丙细胞的数量等于甲细胞或乙细胞的数量 D．丙细胞既能无限增殖又能产生抗H1N1病毒的抗体 22．下图是利用生物工程技术培育转荧光蛋白基因克隆猪的过程。下列叙述正确的是（    ）    A．①②过程都属于基因工程的范畴 B．⑤过程需要对受体雌猪进行免疫排斥检查 C．④过程胚胎须发育到囊胚或桑葚胚阶段 D．⑤过程为胚胎移植技术，可充分发挥雌性优良个体的繁殖潜力 23．为培育具有市场竞争力的无籽柑橘，研究者设计如下流程。相关叙述正确的是（    ）    A．过程①需使用胰蛋白酶处理 B．实现过程②依赖膜的流动性 C．过程③需应用植物组培技术 D．三倍体植株可产生无籽柑橘 24．幽门螺旋杆菌（Hp）与胃炎、胃癌等多种疾病有关。利用基因工程技术可将Hp的Ipp20基因导入工程菌内以制备Hp疫苗。质粒结构及操作步骤如下图所示，培养基A中加入潮霉素，培养基B中加入氯霉素。下列相关叙述正确的是（　　）    A．除模板DNA外，反应物中需添加解旋酶、DNA聚合酶和2种引物 B．对Ipp20基因和质粒进行切割时，可使用限制酶XhoI和BamHI C．连接切割后的Ipp20基因和质粒时可使用E.coli DNA连接酶或T4 DNA连接酶 D．菌落3和菌落5含有目的基因和潮霉素抗性基因，可用于生产Hp疫苗 25．蜘蛛丝（丝蛋白）被称为“生物钢”，有着超强的抗张强度，下图为蛛丝蛋白基因对应的DNA片段结构示意图，其中1~4表示DNA上引物可能结合的位置，目前利用现代生物技术生产蜘蛛丝已取得成功。下列有关叙述正确的是（    ） A．若从该DNA片段中直接获取蛛丝蛋白基因，会破坏4个磷酸二酯键 B．若用PCR技术获取目的基因，则图中的2、3分别是2种引物结合的位置 C．若受体细胞为大肠杆菌，则蛛丝蛋白的加工需要细胞中内质网和高尔基体的参与 D．在PCR仪中根据选定的引物至少需经过6次循环才可获得32个符合要求的目的基 二．非选择题（共5小题，每空1分，共45分） 26．（12分）请分析回答下列问题： Ⅰ．豆豉是以黄豆或黑豆为原料，经各种微生物发酵形成的具有特殊色、香、味的发酵食品。某食品研发小组以黄豆为主要原料研制豆豉酱，工艺设计流程如下。回答下列问题： (1) 用于分离细菌的固体培养基包含水、葡萄糖、蛋白胨和琼脂等成分，其中蛋白胨主要为细菌提供_____和维生素等。培养基配制和灭菌时，灭菌与调节pH的先后顺序是_____。 Ⅱ．某研究小组用玻璃发酵罐、充氧泵、回旋式单向阀等组装一种果酒、果醋两用发酵装置，如下图所示。回答下列问题： (2) 用于生产果酒的酵母菌属于______（填代谢类型）菌。图发酵罐中并不装满发酵液，而是留出约1/3的空间。利用图中装置进行果酒发酵时，软管夹应______（填“打开”或“关闭”），每隔一段时间打开单向阀排气。 (3)由果酒发酵转为果醋发酵时，有些方面需要做出调整，例如，需要______（填“升高”或“降低”）发酵温度，还需要______。请写出该过程的反应式：______。（3分） (4)在啤酒的工业化生产过程中，需要对发芽的大麦进行焙烤，其目的是______。酵母菌的繁殖、酒精的生成发生在______阶段（填“主发酵”或“后发酵”）。 (5)传统发酵食品的制作过程中，由于杂菌情况不明和发酵过程的控制缺乏标准等，往往造成发酵食品的品质不一，工业上大规模生产时，通常会先通过微生物培养技术获得单一菌种，再将它们接种到物料中进行发酵。由单一个体繁殖所获得的微生物群体称为______。 27．（7分）中医治疗疾病多用复方，三白草和鱼腥草是同科不同属的两种常见药用植物，二者因疗效相近且具有叠加效应常被用作“药对”，在我国全年可采收两次。研究者欲利用原生质体融合技术将复方的配伍（两种或两种以上药物配合使用）提前到个体生长或生产过程，并实现有效成分的工厂化生产，具体操作如图1。 (1)过程①中，需用_______去除植物细胞壁以获取原生质体，该过程需在_______（填“低渗”、“等渗”或“高渗”）溶液中进行，防止原生质体吸水涨破。 (2)过程②中，常用_______（填化学诱导剂名称）诱导原生质体融合；并向三白草和鱼腥草细胞酶解液中分别加入红、绿荧光色素。在荧光显微镜下筛选杂种原生质体时，应选择同时带有红、绿两种荧光的原生质体，原因是_______。 (3)科研人员研究不同的原生质体密度对三白草和鱼腥草原生质体融合率的影响，结果如图2。 据图2可知，促进双核异核融合体形成的最适原生质体密度为_______个/mL，高于此密度不利于形成双核异核融合体的原因是_______。 (4)通常情况下，能增加免疫器官的重量表明该物质具有一定的增强免疫力的作用。为判断融合体对动物免疫力的影响，科研人员取同种小鼠30只，雌雄各半，随机均分为三组，实验处理如下表。 组别 A组 B组 C组 实验处理 三白草和鱼腥草杂种愈伤组织的蒸馏水提取物 三白草和鱼腥草直接混合后的蒸馏水提取物 等量的蒸馏水 每天一次等量灌胃，连续一周，检测各组小鼠的胸腺重量 若实验结果为_______，则支持利用原生质体融合技术将复方的配伍提前并实现有效成分的工厂化生产。 28．（8分）近年来，我国科学家利用基因编辑技术改变了小鼠卵母细胞中基因的甲基化情况，获得了许多新性状的小鼠，下图表示利用该方法制备转基因鼠的基本流程。请分析回答： (1)利用基因编辑技术改变了小鼠卵细胞中基因的甲基化情况，________（填“改变”或“不改变”）基因的碱基序列，采集到的卵细胞需要培养到________期才具备与精子受精的能力。 (2)在实际胚胎工程操作中，常以观察到两个极体或________作为受精的标志。 (3)①过程中细胞增殖方式为________，通常胚胎发育至________阶段，可进行②过程。该过程一般不需要使用免疫抑制剂处理代孕母体，理由是________。 (4)为提高胚胎的利用率，尽快获得数量较多的子代，需要利用________技术对胚胎进行处理。若处理对象为囊胚，应注意________。 29．（9分）水体中的雌激素能使斑马鱼细胞卵黄蛋白原（vtg）基因被激活并表达，因此斑马鱼可用于监测环境雌激素污染程度。为了实现可视化监测，科学家将斑马鱼的vtg基因，与人工构建的含荧光素酶基因（无启动子）的载体（如图1）连接，形成vtg-Luc基因重组载体，成功培育了转基因斑马鱼。图1中Luc表示荧光素酶基因，其表达可以催化荧光素氧化产生荧光；Ampr为氨苄青霉素抗性基因；ori为复制起点；BamH Ⅰ、EcoR Ⅰ、Hind Ⅲ和BsrG Ⅰ为限制酶；→表示转录的方向。 (1)据图1可知Luc基因载体上有一段P2A序列，其表达产物2A肽功能如图2所示，据此分析P2A序列的作用是______。 (2)为使vtg基因与Luc基因载体形成重组载体并降低“空载”概率，选用限制酶_________对Luc基因载体进行双酶切。通过PCR技术获取vtg基因时，需设计合适的引物，以便vtg基因能够定向插入Luc基因载体的正确位置。vtg基因部分碱基序列如图3所示，结合图1、图3信息，推测引物1包含的碱基序列为_______。 A．5＇-GGATCCAACTAT-3＇   B．5＇-GAATTCAACTAT-3＇ C．5＇-GAATTCTTGATA-3＇   D．5＇-AAGCTTAACTAT-3＇ (3)将“vtg-Luc基因重组载体”导入大肠杆菌中进行扩增，应将大肠杆菌接种在含________的培养基中以便于筛选；该基因表达载体还需通过_________的方法导入斑马鱼受精卵细胞。 (4)为检测转基因斑马鱼是否能作为雌激素污染的可视化检测工具，科学家将转基因斑马鱼胚胎暴露于不同浓度的雌激素水样中，记录胚胎最早出现荧光的时间，结果如下表所示。请你结合雌激素的响应浓度，分析转基因斑马鱼能作为雌激素检测工具的原因：_________。 雌激素浓度（ng/L） 出现荧光时间（hpf） 0.1 131 1 100 10 79 100 74 注：hpf表示受精后小时 (5)科研人员在斑马鱼体内发现了一种E蛋白，推测雌激素可能通过其激活vtg基因的表达，请设计实验验证并写出支持该推测的实验结果______。（3分） 30．（9分）插入突变是基于农杆菌Ti质粒的遗传学技术，通过将农杆菌Ti质粒上的T-DNA片段随机插入受体生物，破坏基因结构或影响其表达，是研究植物基因功能的重要手段。土壤镉（Cd）污染严重危害植物的生长发育。研究人员通过构建Cd敏感的T-DNA插入突变体拟南芥（S）进行植物耐Cd分子机制的研究。回答下列问题： (1)构建拟南芥突变体S过程中，Ti质粒的T-DNA可随机整合至拟南芥的______________中，筛选后的细胞需经植物组织培养成为突变体植株。 (2)提取突变体S的DNA，测序可确定发生突变的基因为SCL14基因。研究人员欲构建突变体S的回补株系进一步验证： ①利用Ti质粒和SCL14基因（如图）构建基因表达载体时，需用PCR技术对SCL14基因进行扩增，为保证该基因能以正确方向连入T-DNA，根据图中信息写出SCL14基因上游引物的碱基序列______________（从5′端到3′端，只写出前8个碱基即可）。 ②将重组质粒成功导入农杆菌后配成细菌悬液，突变体S的花序直接浸入细菌悬液一段时间，继续培养植株获得T0种子。将T0种子平铺至含______________（填抗生素）固体培养基上培养，筛选后移栽至营养土生长，自交得T1种子。 ③将若干单株收获的T1种子平铺至含相同抗生素的培养基中，选择分离比为3（有抗性）:1（无抗性）的植株继续种植、自交以最后获得纯合株系。优先选择分离比为3:1而非15:1或其他比例的植株的目的是______________。（2分） (3)实验证明，SCL14基因的缺失是突变体S对Cd胁迫敏感的原因。另有研究表明TGA3基因缺失导致突变体T对Cd胁迫敏感。若正常和Cd胁迫条件下，突变体S中TGA3表达量无明显差异，且______________，则表明SCL14蛋白与TGA3蛋白可能独立调控拟南芥对Cd的耐受性。 (4)为进一步探究SCL14调控拟南芥耐Cd的分子机制，研究人员对Cd胁迫下WT和突变体S特定细胞的总mRNA进行提取和测序分析，目的是______________。（3分） ( 第 1 页 共 3 页 )高二生物试卷 学科网（北京）股份有限公司 $