猜押07 生物技术与工程（3大押题预测）（黑吉辽蒙专用） 2026年高考生物终极冲刺讲练测

猜押07 生物技术与工程 题型 考情分析 考向预测 发酵工程 2025 年黑吉辽蒙卷：微生物的分离与培养（选择培养基、涂布平板法） 2024年辽吉黑卷：泡菜制作、培养基选择、无菌操作 1.技术流程的细节与原理：可能聚焦于某项生物技术（如PCR、基因工程、细胞融合、胚胎工程）的关键步骤、操作目的、所用工具酶或试剂的作用原理。 2.技术应用与方案设计：可能设定一个生产或科研目标（如生产特定产物、培育新品种、疾病检测），要求选择或设计合适的技术路线，并说明依据。 3.技术安全与伦理考量：可能探讨生物技术（如基因编辑、克隆）在应用过程中可能带来的安全性、伦理及社会问题，体现社会责任。 细胞工程（植物+动物+胚胎） 2025 年黑吉辽蒙卷 ：植物组织培养、单克隆抗体制备 2024年辽吉黑卷：动物细胞培养、核移植 基因工程 2025 年黑吉辽蒙卷 ：限制酶选择、PCR、载体条件、导入方法 2024年辽吉黑卷：表达载体构建、分子检测、转基因应用 押题1 发酵工程 1．（2026·海南海口·二模）废弃的塑料因难以降解，造成“白色污染”；聚羟基脂肪酸酯（PHA）具有类似塑料的理化特性，丢弃后易被土壤微生物降解，可代替部分塑料应用于生产生活。研究人员在某咸水湖中发现了一种能合成PHA的嗜盐细菌，分离该细菌的基本流程如图所示。请回答下列问题： (1)培养和分离产PHA嗜盐细菌的培养基的配方如下：牛肉膏5g、蛋白胨10g、NaCl 50g、水定容至1000mL。其中，蛋白胨能为嗜盐细菌的生长提供____和维生素等营养物质，NaCl可提供________。实验中需要对培养基进行严格灭菌，对培养基灭菌的常用工具是________。从咸水湖取回的样品中产PHA嗜盐细菌的浓度较高，需经过程①和②连续两次10倍稀释，每次稀释时均从前面的容器中取1mL样液，加入__________。 (2)与Ⅰ号培养基相比，Ⅱ号培养基和Ⅲ号培养基中通常需加入_____。过程③的接种方法是_________________；若过程④进行了5次划线，则需要对接种环灼烧____次。 (3)在一定的培养条件下，根据菌落的__________（答出两点）等特征，可初步判断其是否为产PHA嗜盐细菌。现已初步判断培养皿d中均为嗜盐细菌菌落，欲从培养皿d中进行取样，筛选出产PHA能力强的嗜盐细菌，请简要写出操作过程：______________________________。 【答案】(1) 碳源、氮源 无机盐 高压蒸汽灭菌锅 9mL无菌水 (2) 琼脂 稀释涂布平板法 6 (3) 形状、大小、颜色 从培养Ⅲd中最后一次划线的末端附近挑取多个菌落，分别接种到等量的相同液体培养基中，在相同且适宜的条件下培养一段时间，测定并比较各组培养基中的PHA含量 【分析】选择培养基：在培养基中加入（缺少）某种化学物质,以抑制不需要的微生物的生长,促进所需要的微生物的生长。用以菌种的分离。 【详解】（1）微生物的生长需要水、碳源、氮源和无机盐等营养物质。培养基中的蛋白胨能为微生物的生长提供碳源、氮源和维生素等营养物质，NaCl可提供无机盐。对培养基灭菌常采用湿热灭菌法，常用工具是高压蒸汽灭菌锅。对样品溶液进行过程①和②连续两次10倍稀释，每次稀释均从前面的容器中取1mL样液，加入9mL无菌水。 （2）Ⅰ号培养基是液体培养基，Ⅱ号培养基和Ⅲ号培养基均是固体培养基，通常需加入琼脂，利于微生物形成菌落。过程③的接种方法是稀释涂布平板法；过程④的接种方法是平板划线法，划线前后都要灼烧接种环，若过程④划线了5次，则共需要对接种环灼烧6次。 （3）在相同的培养条件下，同种微生物表现出稳定的菌落特征，常见的菌落特征有形状、大小、颜色等。从培养皿d中进行取样，筛选出产PHA能力强的嗜盐细菌的方法如下：从培养皿d中最后一次划线的末端附近挑取多个菌落，分别接种到等量的相同液体培养基中，在相同且适宜的条件下培养一段时间，测定并比较各组培养基中的PHA含量，PHA含量最高的培养基所对应的菌落即为产PHA能力强的嗜盐细菌。 1.无菌技术 消毒 杀死部分微生物（非芽孢） 煮沸、巴氏消毒、酒精擦拭 灭菌 杀死所有微生物（包括芽孢） 高压蒸汽灭菌（培养基）、干热灭菌（玻璃器皿）、灼烧（接种环） 无菌操作 防止杂菌污染 超净工作台、火焰旁操作、器皿灭菌 培养基灭菌 常用高压蒸汽灭菌法（121℃，15-30min） 含水分培养基不能用干热灭菌 无菌检测 将冲洗液涂布于平板，观察有无菌落 检验样品是否无菌 2. 微生物的纯化 平板划线法 用接种环在固体培养基表面划线 获得单菌落，用于纯化 稀释涂布平板法 将菌液梯度稀释后涂布于平板 可用于计数（菌落数30~300为有效） 单菌落 由一个微生物细胞繁殖形成的菌落 代表纯种 接种环/涂布器灭菌 接种环：灼烧灭菌；涂布器：酒精浸泡后灼烧 防止杂菌污染 倒置培养 培养皿倒置放入恒温箱 防止冷凝水滴落冲散菌落 3.微生物计数 稀释涂布平板计数 菌落数×稀释倍数÷涂布体积 结果偏小（因多个细胞连成一个菌落） 显微镜直接计数 使用血细胞计数板 结果偏大（含死菌） 计数原则 同一稀释度至少涂布3个平板，取平均值 选择菌落数30~300的平板 押题2 细胞工程（植物+动物+胚胎） 2．（2026·辽宁·模拟预测）人参果（2n=24）因低糖、低脂、高蛋白深受人们喜爱，但人参果种植过程中容易遭受病毒侵害，产量低。苦参（2n=18）产生的苦参碱、氧化苦参碱能干扰病毒RNA合成，对烟草花叶病毒（TMV）等多种病毒有效。科研人员利用人参果和苦参进行植物体细胞杂交，培育抗病毒的人参果—苦参杂种植株。请回答下列问题： (1)将人参果细胞和苦参细胞融合之前，需要制备原生质体，该操作中，____标志着两种细胞融合成功。若只考虑两两融合，融合后共能得到____种原生质体。 (2)与植物细胞融合不同，动物细胞融合特有的方法是_____，细胞融合的原理是______。 (3)得到杂种细胞后继续培养，常用____________（填植物激素名称）诱导愈伤组织形成和分化，获得完整杂种植株。为确定该杂种植株是否符合育种要求，还需进行________检测。 (4)与紫草宁一样，苦参碱是一种_____（填“初生”或“次生”）代谢物，为获得大量的苦参碱可利用______技术，该技术的优点为___________________（答出1点）。 【答案】(1) 杂种原生质体再生出细胞壁 3 (2) 灭活病毒诱导法 细胞膜具有流动性 (3) 细胞分裂素、生长素 抗病毒性 (4) 次生 植物细胞培养 不占用耕地，几乎不受季节、天气等的限制 【分析】1、植物组织培养就是在无菌和人工控制的条件下，将离体的植物器官、组织、细胞，培养在人工配制的培养基上，给予适宜的培养条件，诱导其产生愈伤组织、丛芽，最终形成完整的植株。2、植物体细胞杂交的核心是打破生殖隔离，将不同种植物的体细胞融合，培育杂种植株，过程可概括为 “去壁→融合→再生→培养”4 个关键步骤。 【详解】（1）两种细胞融合成功的标志是融合的原生质体再生出新的细胞壁。若只考虑两两融合，融合后共能得到苦参与苦参融合、苦参与人参果融合、人参果与人参果融合3种类型的融合细胞。 （2）与植物细胞融合相比，动物细胞融合特有的方法是灭活病毒诱导法，细胞融合的原理是细胞膜具有流动性。 （3）融合细胞在培养基中培养，培养基中需要加入（一定浓度的）植物激素，通常是生长素和细胞分裂素，促进形成愈伤组织和再分化形成杂种植株。该技术的目的是培养抗病毒的人参果—苦参植株，为确定杂种植株是否符合育种要求，还需进行个体生物学水平的检测，需要对其进行抗病毒抗性检测。 （4）紫草宁是紫草的次生代谢物，次生代谢物不是植物生命活动所必需的物质。苦参碱与紫草宁一样，是次生代谢物。植物细胞培养是在离体条件下对单个植物细胞或细胞团进行培养，使其增殖的技术，它不占用耕地，几乎不受季节、天气等的限制，因此对于社会、经济、环境保护具有重要意义。 1.植物细胞工程 外植体选择 幼嫩茎段、叶片、芽原基等 分裂能力强，分化程度低 培养基成分 MS培养基 + 蔗糖 + 琼脂 + 植物激素（生长素、细胞分裂素） 生长素/细胞分裂素比例影响分化方向 激素比例调控 比例高→生根，比例低→生芽，适中→愈伤组织 如6-BA（细胞分裂素）与NAA（生长素）配比 愈伤组织 未分化的薄壁细胞团 可用于悬浮培养、诱变、再生植株 细胞悬浮培养 愈伤组织打散成单个细胞或小细胞团，液体培养 用于生产次生代谢产物（如紫杉醇、迷迭香酸） 植物体细胞杂交 原生质体融合 → 杂种细胞 → 杂种植株 克服远缘杂交不亲和，如“番茄—马铃薯” 植物细胞产物工厂化生产 大规模培养细胞，提取次生代谢产物（紫杉醇、香树脂醇等） 不依赖完整植株，周期短 脱毒苗培育 茎尖分生组织培养 茎尖几乎不含病毒，可获脱毒苗 人工种子 胚状体 + 人工种皮 可大规模繁殖，保持优良性状 2.动物细胞工程 培养基特点 合成培养基 + 血清（如胎牛血清） 血清提供生长因子、激素等 培养条件 37℃、5% CO₂（维持pH）、无菌、适宜渗透压 CO₂与碳酸氢钠构成缓冲系统 贴壁生长与接触抑制 贴壁细胞分裂至表面相互接触时停止分裂 需用胰蛋白酶分散后传代 传代培养 细胞密度过大时，分瓶继续培养 原代培养指从机体取出后首次培养 细胞系与细胞株 细胞系：可无限传代（遗传物质改变）；细胞株：遗传物质未变 原代培养→有限细胞系→无限细胞系 动物细胞融合 聚乙二醇（PEG）、灭活病毒、电融合 原理：细胞膜流动性 押题3 基因工程 3．（2026·辽宁·模拟预测）研究人员利用农杆菌转化法将大豆耐盐碱基因GsERF6导入水稻，构建重组表达载体（图甲），并对转化后的细胞进行目的基因检测（图乙）。回答下列问题： (1)利用农杆菌转化法时，将目的基因插入Ti质粒的_____上；需将含GsERF6基因的重组Ti质粒导入农杆菌，再让农杆菌侵染水稻细胞，最终使GsERF6基因进入水稻细胞并整合到水稻细胞的_____上。 (2)构建图甲所示的重组表达载体需要的酶是______，该表达载体中的强启动子的作用是________。新霉素抗性基因属于_____，其作用是________。 (3)对转化细菌进行目的基因检测时，常采用PCR技术，该技术需要_______（填一种酶）。结合图乙结果分析，转基因水稻DNA（泳道1）中_____（填“含有”或“不含有”）GsERF6基因，判断的依据是_______。 【答案】(1) T-DNA 染色体DNA (2) 限制性内切核酸酶（或限制酶）和DNA连接酶 驱动GsERF6基因转录 标记基因 便于重组DNA的筛选 (3) 耐高温的DNA聚合酶 含有 泳道1与阳性对照（+）出现了相同大小的条带 【详解】（1）农杆菌转化法是将目的基因插入Ti质粒上的T-DNA上，然后转移至受体细胞，并整合到受体细胞的染色体DNA上，保证目的基因能稳定遗传和表达。 （2）构建目的基因的表达载体需要的酶是限制性内切核酸酶（限制酶）和DNA连接酶。该表达载体中的目的基因是GsERF6基因，强启动子的作用就是驱动GsERF6基因的转录。图甲中的新霉素抗性基因属于标记基因，其作用是通过在含新霉素的培养基中培养细胞，筛选出成功导入重组质粒的水稻细胞，不含重组质粒的细胞因无新霉素抗性基因，无法在该培养基中存活。 （3）PCR的原理是DNA复制，所以PCR技术需要耐高温的DNA聚合酶。图乙中，转基因水稻DNA（泳道1）的条带与阳性对照（含GsERF6基因）的条带大小一致，说明转基因水稻DNA中含有GsERF6基因。 1.基因工程的工具 限制酶（限制性内切核酸酶） 识别特定核苷酸序列，切割DNA磷酸二酯键 产生黏性末端或平末端；不切割自身DNA（甲基化保护） DNA连接酶 催化DNA片段之间形成磷酸二酯键 连接两个DNA片段（黏性末端或平末端） 载体（质粒、病毒等） 将目的基因导入受体细胞并使其稳定存在和表达 必备元件：复制原点、限制酶切位点、标记基因、启动子、终止子 标记基因 用于筛选含重组DNA的受体细胞 如抗生素抗性基因（Kanᴿ、HygBᴿ）、荧光蛋白基因 启动子 RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动基因转录 常用启动子：p35S（植物）、lac、T7等 终止子 转录终止的信号序列 位于目的基因下游 2目的基因的获取 从基因文库获取 基因组文库（含全部基因）或cDNA文库（含编码序列） cDNA文库不含内含子，适合原核表达 PCR扩增 体外快速扩增特定DNA片段 原理：DNA半保留复制；所需：模板、引物、dNTP、耐热DNA聚合酶（Taq酶）、缓冲液 人工合成 根据已知氨基酸序列或基因序列化学合成 可进行密码子优化（如将细菌基因改为植物偏好密码子） 3基因表达载体的构建 载体结构 启动子 + 目的基因 + 终止子 + 标记基因 + 复制原点 是基因工程的核心步骤 双酶切法 用两种限制酶切割载体和目的基因 防止载体自连，保证定向连接 同源重组法 利用同源臂将目的基因插入载体特定位置 如Gibson组装、In-Fusion 连接反应 用DNA连接酶连接载体和目的基因 构建重组质粒 4目的基因的检测与鉴定 DNA水平检测 PCR法（用特异性引物扩增目的基因片段） 模板为受体细胞基因组DNA 凝胶电泳验证 琼脂糖凝胶电泳，根据片段大小判断是否插入 需用限制酶切割重组质粒后电泳 转录水平检测 RT-PCR（逆转录PCR）检测mRNA 模板为提取的RNA，先逆转录成cDNA 翻译水平检测 抗原-抗体杂交（Western blot） 检测目的蛋白是否表达 个体水平鉴定 观察性状（如抗虫、抗病、荧光） 如转基因棉花抗虫实验 阴性对照 用无菌水代替模板DNA进行PCR 检验是否有外源DNA污染 一、单选题 1．（25-26高三下·四川成都·开学考试）酸笋是螺蛳粉的“灵魂”。在自然发酵过程中，酸笋中的乳酸菌作为主要微生物分解蛋白质产生硫化氢等物质，形成了螺蛳粉的特殊风味。酸笋的传统发酵工艺包括原材料处理、装坛、发酵等过程。下列相关叙述正确的是（    ） A．乳酸菌代谢类型为异养厌氧型，所以不会分布在空气中 B．原材料处理主要是对采摘后的竹笋进行剥壳、清洗和灭菌 C．随着发酵的进行，发酵液pH值逐渐升高后保持稳定 D．装坛时应保证竹笋被盐水全部浸没，才能保证发酵的正常进行 【答案】D 【详解】A、在自然界中，乳酸菌分布广泛，空气、土壤、植物体表、人和动物的肠道内都分布有乳酸菌，A错误； B、竹笋中含有发酵的天然菌种，故不能对采摘后的竹笋进行灭菌，否则会杀死发酵的天然菌种，B错误； C、乳酸逐渐积累导致发酵液pH值逐渐降低后保持稳定，C错误； D、盐水浸没可以创造无氧环境，利于乳酸菌生存和繁殖，同时减少杂菌污染，D正确。 故选D。 2．（2026·山东淄博·一模）下列关于生物学实验的说法正确的是 选项 实验名称 相关描述 A 探究植物细胞的吸水和失水 仅使用低倍镜观察，随着外界蔗糖溶液浓度的增加，细胞大小基本不变 B 探究酵母菌细胞呼吸的方式 有氧呼吸组应让空气持续依次通过3个锥形瓶 C DNA的粗提取与鉴定 可进行两次离心，第一次离心取沉淀物，第二次离心取上清液 D DNA片段的扩增及电泳鉴定 电泳缓冲液中需加入指示剂以便观察电泳进程 A．A B．B C．C D．D 【答案】A 【详解】A、探究植物细胞的吸水和失水实验仅用低倍镜即可清晰观察到质壁分离及复原现象；植物细胞的细胞壁伸缩性极弱，即使细胞失水发生质壁分离，细胞壁围成的细胞整体大小基本不变，A正确； B、探究酵母菌有氧呼吸方式时，为彻底排除空气中CO2的干扰，空气需依次通过NaOH溶液、澄清石灰水、酵母菌培养液、澄清石灰水，共4个锥形瓶，B错误； C、DNA粗提取与鉴定实验中，第一次离心为破碎细胞后离心，DNA溶解于上清液中，应取上清液；第二次为加入冷酒精析出DNA后离心，DNA聚集在沉淀物中，应取沉淀物，C错误； D、DNA电泳鉴定时，指示剂是添加在待扩增样品的上样缓冲液中，用于指示电泳进程，并非加入电泳缓冲液，D错误。 3．（2026·辽宁抚顺·模拟预测）槲皮素是一种天然存在的黄酮醇类化合物，广泛存在于多种植物的茎皮、花、叶、芽、种子、果实中，也是自然界中最强的抗氧化剂之一，科研人员为了快速检测出槲皮素，制备出了抗槲皮素的单克隆抗体，制备流程如图所示。下列叙述错误的是（　　） A．给小鼠直接注射槲皮素，无法引起小鼠的特异性免疫 B．②过程采用的诱导融合方法中有的不适合植物原生质体的融合 C．体外培养③过程得到的细胞丙，会出现接触抑制现象 D．④过程需进行克隆化培养和抗体检测，可体外扩大培养细胞丁 【答案】C 【详解】A、槲皮素不属于抗原，所以制备抗槲皮素的单克隆抗体，需要先将槲皮素与牛血清白蛋白结合，才能给小鼠注射，A正确； B、②过程采用的诱导融合的方法中 ，灭活病毒诱导法不适合植物原生质体的融合，B正确； C、细胞丙能无限增殖 ，所以不会出现接触抑制现象，C错误； D、④过程需进行克隆化培养和抗体检测，可体外扩大培养细胞丁 ，也可以体内培养细胞丁，D正确。 4．（2026·山东日照·一模）研究人员利用细胞工程技术生产紫杉醇的大致流程如图所示。下列说法错误的是（    ） A．过程①脱分化得到的愈伤组织具有较高的分裂分化能力 B．过程②振荡培养有利于细胞充分接触培养液并增加其溶氧量 C．过程③中过滤的目的是除去细胞团获得较纯净的单细胞悬浮液 D．过程⑤主要是利用促进细胞生长的营养条件提高单细胞中紫杉醇含量 【答案】D 【详解】A、过程①是脱分化，外植体经脱分化形成愈伤组织。愈伤组织是高度液泡化、无特定形态的薄壁细胞团，分裂分化能力很强，可再分化形成胚状体或丛芽，A正确； B、过程②将愈伤组织制成细胞悬浮液，振荡培养的作用： 使细胞与培养液充分接触，保证营养供应； 增加培养液中的溶氧量，满足细胞呼吸需求，B正确； C、过程③通过无菌网筛过滤、离心，目的是除去较大的细胞团，获得分散度更高、较纯净的单细胞悬浮液，C正确； D、过程⑤是工厂化生产紫杉醇，主要是通过增加产紫杉醇细胞的数量来大量生产，而不是提高单细胞中紫杉醇含量，D错误。 故选D。 5．（2026·重庆·模拟预测）N6-甲基腺嘌呤（6mA）是发生在腺嘌呤第六位氮原子上的一种甲基化修饰。研究表明，6mA在植物寄生线虫基因组中广泛存在，并在调控线虫毒力方面发挥重要作用，同时在其体内也发现了相应的6mA去甲基化酶MiNMAD。为探究其应用价值，研究团队在烟草和番茄中分别构建并获得表达根结线虫去甲基化酶双链RNA（MiNMAD-dsRNA）的转基因植株，被线虫取食后能抑制线虫体内MiNMAD基因的翻译过程，结果如下表所示，下列相关叙述错误的是（　　） 植株类型 根结数量（相对值） 线虫侵染能力 效应因子基因表达水平 野生型对照 100% 100% 100% 转MiNMAD-dsRNA烟草 32% 28% 35% 转MiNMAD-dsRNA番茄 41% 36% 42% 注：效应因子是线虫分泌的毒力蛋白，与侵染能力呈正相关。 A．可以利用花粉管通道法把外源基因导入烟草细胞 B．MiNMAD能特异性识别并去除DNA上的6mA甲基化修饰，从而调控下游基因表达 C．宿主植物中表达的MiNMAD-dsRNA，不改变线虫细胞中MiNMAD基因的序列 D．线虫中6mA的修饰水平与效应因子基因的表达水平呈正相关 【答案】D 【详解】A、花粉管通道法是将外源基因导入植物细胞的常用方法，可用于将目的基因导入烟草细胞，A正确； B、MiNMAD是6mA去甲基化酶，酶具有专一性，可特异性识别并去除DNA上的6mA甲基化修饰，DNA甲基化属于表观遗传调控方式，可调控下游基因表达，B正确； C、MiNMAD-dsRNA的作用是抑制MiNMAD基因的翻译过程，属于翻译水平的调控，不会改变线虫细胞内MiNMAD基因的碱基序列，C正确； D、根据表格数据可知，野生型对照中，效应因子基因表达水平为100%，此时线虫体内MiNMAD基因正常表达，6mA修饰水平较低，转MiNMAD-dsRNA植株中，MiNMAD基因的翻译被抑制，6mA修饰水平升高，而效应因子基因表达水平降低（烟草35%、番茄42%），由此可知，线虫中6mA的修饰水平与效应因子基因的表达水平呈负相关，D错误。 6．（2026·黑龙江哈尔滨·一模）白菜（2n=20）具有鲜嫩的风味，甘蓝（2n=18）具备抗病、耐寒等优良性状。通过细胞工程可将二者性状结合培育出白菜-甘蓝植株，其制备流程如图所示。下列叙述正确的是（    ） A．①需用解离的方法去除细胞壁，②可选用PEG作为原生质体的促融剂 B．③需借助荧光显微镜观察，通过显微操作仪筛选并留取显示单色荧光的细胞 C．若杂种植株风味不如白菜，与亲本白菜回交可增强后代来自白菜的优良性状 D．白菜-甘蓝与亲本回交得到的子代植株是异源六倍体，可以通过有性生殖繁殖 【答案】C 【详解】A、过程①去除细胞壁需要用纤维素酶和果胶酶，解离（盐酸酒精处理）会杀死细胞，不能用于原生质体制备，②可选用PEG作为原生质体的促融剂，A错误； B、需要筛选的是白菜和甘蓝融合的杂种原生质体，白菜原生质体带绿色荧光、甘蓝带红色荧光，因此杂种细胞应同时显示两种荧光，需要留取双荧光细胞，B错误； C、若杂种植株风味（白菜优良性状）不足，与亲本白菜回交后，后代中白菜的基因占比会提高，可增强后代来自白菜的优良性状，C正确； D、白菜、甘蓝均为二倍体，体细胞杂交得到的白菜-甘蓝是异源四倍体；其与二倍体亲本回交后，子代是异源三倍体，异源三倍体减数分裂时染色体联会紊乱，无法通过有性生殖正常繁殖，D错误。 故选C。 7．（2026·云南·一模）近年来，我国酒精性肝病的发病率逐年上升，危害仅次于病毒性肝炎。研究发现，雪莲次生代谢物对急性酒精肝损伤具有较好的防治作用。人们运用细胞工程技术生产雪莲次生代谢物，下列叙述正确的是（    ） A．次生代谢物是雪莲生长所必需的物质，一般分布在特定组织或器官中 B．用射线处理雪莲幼苗诱发变异，即可获得次生代谢物高产的雪莲植株 C．切取雪莲茎尖在无菌条件下进行愈伤组织培养，可获取其次生代谢物 D．可用固体培养基离体培养雪莲细胞，提高单个细胞中次生代谢物的含量 【答案】C 【详解】A、初生代谢物是植物生长发育所必需的物质，次生代谢物并非雪莲生长必需的物质，一般分布在特定组织或器官中，A错误； B、射线处理诱发变异属于诱变育种，基因突变具有不定向性，处理后需要经过筛选才可能获得次生代谢物高产的雪莲植株，并非处理后即可直接得到，B错误； C、雪莲的次生代谢物可由愈伤组织细胞产生，切取雪莲茎尖在无菌条件下脱分化培养获得愈伤组织，可从中提取次生代谢物，C正确； D、大规模培养雪莲细胞获取次生代谢物通常使用液体培养基，该操作的目的是获得大量细胞进而提高次生代谢物的总产量，而非提高单个细胞中次生代谢物的含量，D错误。 8．（2026·广东广州·一模）表皮生长因子受体（EGFR）在肿瘤发生中起重要作用，其过表达常见于多种恶性肿瘤。研究人员利用杂交瘤技术制备抗EGFR单克隆抗体。下列叙述错误的是（　　） A．用被其他抗原污染的EGFR免疫小鼠后，所得的每个B细胞也只能产生一种抗体 B．经过多次克隆化培养和抗体检测，能获得足够数量的特定杂交瘤细胞 C．杂交瘤细胞在小鼠腹腔内能快速增殖，与腹腔内具有充足的营养物质等适宜条件有关 D．细胞毒素与抗EGFR单克隆抗体偶联可使抗体更好地杀死肿瘤细胞 【答案】D 【详解】A、一个已免疫的B细胞（浆细胞）的基因只能编码产生一种特异性抗体，与免疫所用抗原是否被其他抗原污染无关，A正确； B、单克隆抗体制备过程中，第一次筛选获得杂交瘤细胞后，还需经过多次克隆化培养和特异性抗体检测，才能筛选出足够数量的能分泌抗EGFR抗体的特定杂交瘤细胞，B正确； C．小鼠腹腔内温度、pH适宜，且含有充足的营养物质，可为杂交瘤细胞增殖提供适宜的环境，因此杂交瘤细胞在小鼠腹腔内能快速增殖，C正确； D．抗EGFR单克隆抗体的作用是靶向识别肿瘤细胞表面的EGFR，本身不具备杀伤肿瘤细胞的能力，偶联的细胞毒素才是杀死肿瘤细胞的有效成分，D错误。 二、不定项选择题 9．（2026·山东青岛·一模）某单基因遗传病致病基因在人群中的基因频率约为1/200。为确定其遗传机制，研究人员调查了某家庭成员患病情况（图1），并通过两对引物（F1+R和F2+R）扩增相关基因，用限制酶完全酶切后利用琼脂糖凝胶电泳分离得到图2所示结果（假定扩增产物中最多有一个酶切位点）。下列说法错误的是（    ） A．该病可能由正常基因发生碱基对的替换导致 B．由图2可知酶切位点距离R引物约700bp C．Ⅲ-3为杂合子的概率为1/4 D．Ⅲ-1为患病男孩的概率为1/201 【答案】CD 【详解】A、由图2可知，正常基因（Ⅰ-1）经酶切后产生两种长度的DNA片段，患病基因（Ⅱ-3）酶切后产生一种长度的DNA片段，这表明该病可能由正常基因发生碱基对的替换导致，使酶切位点消失，A正确； B、从图2中Ⅰ-1个体在引物F1+R作用下产生700bp和300bp的条带，在引物F2+R作用下产生700bp和200bp的条带，由此可以推断出酶切位点距离R引物约700bp，B正确； C、根据图1可知该病为隐性遗传病，结合图2中Ⅰ-1和Ⅰ-2的电泳结果可知，Ⅰ-1不含致病基因，Ⅰ-2含致病基因，是携带者，所以能够判断出该病为伴X染色体隐性遗传病。Ⅱ-4的基因型为XAXa，Ⅱ-5的基因型为XAY，那么Ⅲ-3为杂合子（XAXa）的概率为1/2，C错误； D、已知致病基因在人群中的基因频率约为1/200，则Ⅱ-1是致病基因携带者（XAXa）的概率为2×1/200×199/200÷（1-1/200×1/200）=2/201，Ⅱ-2的基因型为XAY，所以Ⅲ-1为患病男孩（XaY）的概率为2/201×1/4=1/402，D错误。 10．（2026·辽宁锦州·二模）深海冷泉（高压、低温、黑暗环境）沉积物中存在一类特殊细菌，其代谢活动依赖特定压力条件。研究人员从某海域冷泉沉积物中分离出一株疑似纤维素降解菌，为探究其生长特性，设计实验，结果如下表。下列叙述正确的是（　　） 组别 压强 唯一碳源 菌落生长情况 菌液OD值（反映细菌浓度） ① 常压 纤维素 - 0.03（接近空白对照） ② 常压 果胶 - 0.02（接近空白对照） ③ 高压 纤维素 + 0.87 ④ 高压 果胶 + 0.32 （注：“+”表示有，“-”表示无；OD值反映细菌浓度） A．制备培养基时，应先调节pH再高压蒸汽灭菌 B．该细菌在常压下可利用纤维素或果胶作为碳源生长 C．可用稀释涂布平板法对该细菌进行分离，但无法计数 D．高压条件下，该细菌对纤维素的利用能力强于果胶 【答案】AD 【详解】A、制备培养基时，应先调节pH再高压蒸汽灭菌，这样可以避免调节pH过程造成的杂菌污染，A正确； B、根据表格结果，常压下无论唯一碳源是纤维素还是果胶，都无菌落生长，OD值接近空白对照，说明该细菌常压下无法生长，不能利用两种碳源，B错误； C、稀释涂布平板法既可以分离得到单菌落（分离细菌），也可以通过菌落数统计活菌数目，C错误； D、高压条件下，OD值反映细菌浓度，以纤维素为碳源时OD值（0.87）远高于果胶为碳源时的OD值（0.32），说明该菌利用纤维素时生长更好，对纤维素的利用能力强于果胶，D正确。 11．（2026·黑龙江双鸭山·一模）川西獐牙菜的代谢产物獐牙菜苦苷和龙胆苦苷具有治疗黄疸性肝炎的功能，如图是科研人员利用体细胞杂交等技术实现药效成分的工厂化生产示意图。下列相关叙述错误的是（　　） 注：杂种细胞中含有的染色体大部分为柴胡染色体 A．①过程可用盐酸和酒精配制的解离液替代纤维素酶和果胶酶 B．②过程融合产生的杂种细胞一定含有合成獐牙菜苦苷的基因 C．③过程的培养基中添加细胞分裂素与生长素的比值为1 D．④过程处理的主要目的是使原生质体发生基因突变 【答案】ABD 【详解】A、用解离液解离的目的是使植物细胞变得松散，①过程是去除细胞壁，不能用解离液替代纤维素酶和果胶酶，A错误； B、图中④过程紫外线照射的主要目的是使川西獐牙菜的染色体发生丢失，而染色体丢失是随机的，故②过程产生的杂种细胞中不一定含有獐牙菜苦苷基因，B错误 C、③过程培育的是愈伤组织，培养基中添加的细胞分裂素与生长素的比值为1，有利于愈伤组织的产生，C正确； D、④过程紫外线照射的主要目的是使川西獐牙菜的染色体发生丢失，D错误。 12．（2026·山东青岛·一模）土壤中的吸水链霉菌是一种放线菌，菌体呈丝状生长，其分泌的酯类物质——雷帕霉素被广泛用于器官移植后的免疫抑制治疗。科研人员利用吸水链霉菌发酵生产雷帕霉素的流程如下：吸水链霉菌的分离与鉴定、扩大化培养、接种、发酵罐发酵、获得产物。下列说法正确的是（    ） A．吸水链霉菌能产生雷帕霉素是因为其基因组中含有编码雷帕霉素的基因 B．鉴定吸水链霉菌时，除通过形态学鉴定外，还要借助生物化学的方法 C．扩大化培养吸水链霉菌时，可用紫外线照射对培养基进行灭菌 D．不能采用稀释涂布平板法监控吸水链霉菌发酵过程中活细胞数量的变化 【答案】BD 【详解】A、根据题意可知雷帕霉素属于酯类物质，而基因的表达产物是蛋白质，吸水链霉菌基因组中不会含有编码雷帕霉素的基因，而是含有与雷帕霉素合成有关的酶的基因，A错误； B、不同种类细菌的理化特性一般不同，鉴定细菌种类时，除根据菌落特征进行形态学鉴定外，还可以借助生物化学的方法进行鉴定，B正确； C、紫外线照射只能起到消毒的作用，不能对培养基进行灭菌，C错误； D、链霉菌是一种放线菌，菌体呈丝状生长，形成的菌落难以区分，因此稀释涂布平板法不宜用于监控链霉菌发酵过程中活细胞数量的变化，D正确。 故选BD。 13．（2026·河北廊坊·一模）黄曲霉毒素 B1(AFB1)是一种强致癌性毒素，金刚烷胺(AMD)是一种治疗流感的抗病毒药物，畜禽摄入含 AFB1和 AMD 的饲料，会间接危害人体健康。某团队制备同时含 AFB1 和AMD 两个不同抗原结合位点的双特异性单克隆抗体(流程如图所示)，用于检测饲料中的残余药物。下列叙述错误的是（    ） A．A、B、C三个过程均使用了动物细胞培养技术和动物细胞融合技术 B．杂交瘤细胞①和②以及融合细胞③可能能在选择培养基中生存 C．克隆化培养及大规模培养得到的都是能分泌目标抗体的杂交瘤细胞 D．目标双特异性抗体可以同时结合AFB1 和 AMD，提高了检测效率 【答案】AC 【详解】A、A过程直接从小鼠脾脏中获取B淋巴细胞，而B、C过程均使用了动物细胞培养技术和动物细胞融合技术，A错误； B、杂交瘤细胞①和②以及融合细胞③应该能在选择培养基中生存，否则无法实现融合和筛选，B正确； C、克隆化培养的目的是获得足量生成所需抗体的杂交瘤细胞，大规模培养的目的是培养能分泌目标抗体的杂交瘤细胞，进而获得双特异性抗体，C错误； D、根据技术路线可知，目标双特异性抗体可以同时结合AFBI 和 AMD，因而提高了检测效率，D正确。 14．（2026·黑龙江哈尔滨·二模）食用腐烂水果后，人出现头晕、恶心、呕吐或更严重的症状，这可能与微生物代谢产生的毒素有关。某研究小组致力于研究健康饮食，设计实验探究腐烂苹果不同区域微生物的种类和数量，实验基本步骤如图所示。下列说法错误的是（　　） A．步骤二可以选用平板划线法或稀释涂布平板法进行接种 B．在适宜环境下培养12小时即可统计出不同菌液中全部微生物的种类和数量 C．若⑤所在部位几乎未检测出微生物，则切掉①～④后的苹果便可放心食用 D．若①～⑤菌落种类和数量依次减少，则离腐烂部位越远的果肉中毒素含量可能越少 【答案】ABC 【详解】A、该实验的目的是探究腐烂苹果不同区域微生物的种类和数量以及烂果毒性，要对微生物进行计数，应采用稀释涂布平板法，而平板划线法不能用于计数，A错误； B、不同微生物生长、繁殖速度不同，培养12小时不一定能让所有微生物都形成肉眼可见的菌落，也就不能统计出全部微生物的种类和数量，B错误； C、即使⑤所在部位微生物的数量极少，也不能排除该部位以及①～④部位可能存在少量微生物产生的毒素，所以不能放心食用，C错误； D、若①～⑤菌落种类和数量依次减少，⑤所在部位微生物的数量极少，说明离腐烂部位越远，微生物的种类和数量越少，所以离腐烂部位越远的果肉中毒素含量越低，D正确。 三、非选择题 15．（2026·黑龙江哈尔滨·二模）谷氨酸脱羧酶(GadB)可以催化L-谷氨酸反应合成-氨基丁酸，但野生型的大肠杆菌的内源性GadB的活力均较低。当SNO1基因和SNZ1基因同时表达时，能够形成融合蛋白，从而提高GadB活性，单独表达时不能形成相应的蛋白质。某研究小组通过以下实验步骤，尝试实现-氨基丁酸的高效生产。回答下列问题： 步骤1：利用原始质粒A构建重组质粒B和重组质粒C(图1) 注：限制酶识别序列及切割位点： NcoI     5'-A↓GATCT-3'               KpnI     5'-G↓GTACC-3' BamHI    5'-A↓CTAGT-3'            XbaI    5'-T↓CTAGA-3' (1)在获取GadB基因序列时，可以通过从序列数据库中查找，或利用___________辅助筛选。 (2)GadB基因的a链为转录的模板链，测得该链首端到末端的序列为5'-ACGTAGCGTTAT……CGCTATGCAAAT-3'。利用PCR扩增目的基因时，需设计GadB的引物。为了更好的构建重组质粒B，并确保GadB基因的正确连接，某同学设计了如下4种PCR引物，其中可选用的引物是___________。(填序号)。 A．5'-AGATCTATTTGCATAGCG-3'        B．5'-GCTACCATTTGCATAGCG-3' C．5'-GGTACCACGTAGCGTTAT-3'        D．5'-AGATCTACGTAGCGTTAT-3' 若本次PCR加入n个模板DNA，经过30轮循环，最终消耗的每种引物数量均为___________。 步骤2：利用双酶切法结合凝胶电泳初步鉴定重组质粒是否构建成功 (3)在电泳前需要将PCR产物与凝胶载样缓冲液相混合，凝胶载样缓冲液中应添加___________以便判断停止电泳的时间。若利用KpnI和BamHI切割重组质粒C后，琼脂糖凝胶电泳结果只显示出一条带，请分析原因___________。 步骤3：将重组质粒导入受体菌株。 步骤4：3个菌株发酵产-氨基丁酸能力的比较 实验中所用到的菌株如下：R1(原始菌株)，R2(某些特定基因过表达菌株)和R3(将重组质粒C导入R1的重组菌株) (4)从R3菌株中提取蛋白质，用抗___________抗体进行抗原—抗体杂交，若出现阳性反应，则初步证明成功构建-氨基丁酸高表达菌株。 (5)通过高效液相色谱法检测3个菌株发酵液中γ-氨基丁酸含量，数据显示某基因过量表达菌(R2)的发酵液中γ-氨基丁酸的含量仅为原始菌株R1的三分之一左右。请基于细胞代谢的调控过程，提出一种合理的假设：___________。 【答案】(1)序列比对工具(如BLAST ) (2) AC n(230-1) (3) 指示剂 由于BamHⅠ和 XbaⅠ切割产生相同粘性末端，连接时存在反向连接，使重组质粒只能被KpnⅠ切割得到一段DNA条带。 (4)SNO1和SNZ1表达的融合蛋白(融合蛋白) (5)R2菌株中过量表达的某些基因，其产物可能竞争性抑制了GadB的活性，或抑制了合成GABA代谢途径中上游关键酶的表达或活性，或激活了降解GABA的代谢途径 【分析】基因工程技术的基本步骤:(1)目的基因的获取：利用PCR技术扩增和人工合成。(2)基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。(3)将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。(4)目的基因的检测与鉴定。 【详解】（1）获取目的基因的方法中，若已知部分序列信息，可通过序列数据库（如 NCBI）查找，也可利用序列比对工具（如 BLAST） 辅助筛选。 （2）GadB基因的a链为转录的模板链，测得该链首端到末端的序列为5'-ACGTAGCGTTAT……CGCTATGCAAAT-3'。，则基因的编码链（正义链） 5'→3' 为：5'-ATTTGCATAGCG……ATAACGCTACGT-3'，PCR 引物设计规则： 上游引物（正向引物）：与模板链 3' 端互补，序列与编码链 5' 端一致（5'→3'）； 下游引物（反向引物）：与编码链 3' 端互补，序列与模板链 5' 端一致（5'→3'）； 同时需匹配限制酶切位点：重组质粒 B 的启动子后有NcoI（识别5'-AGATCT-3'）、KpnI（识别5'-GGTACC-3'）位点，为保证正确连接，引物需携带对应酶切位点，且方向正确。 对 4 个引物逐一分析： A．5'-AGATCTATTTGCATAGCG-3' ：TATTTGCATAGCG与基因3' 端互补，符合下游引物要求；C．5'-GGTACCACGTAGCGTTAT-3' ：ACGTAGCGTTAT与基因5' 端序列完全一致，符合上游引物要求。 因此可选用的引物为 AC。PCR 扩增的规律：  初始模板数为n，经过m轮循环后，总 DNA 分子数为n × 2m； 每个 DNA 分子含 2 条链，每条链的合成都需要 1 个引物，因此总引物数 = 总链数 - 初始模板链数（初始模板链无需引物）； 总链数 = n × 2m × 2 = n × 2(m+1)，初始模板链数 = 2n； 总引物数 = 2n × 2(m+1) - 2n = 2n(2m - 1)； 上游引物和下游引物消耗数量相等，因此每种引物数量 = n (2m - 1)。  代入m=30，得每种引物数量为：n(230−1)。 （3）凝胶载样缓冲液的作用： 增加样品密度，使样品沉入加样孔； 加入指示剂（如溴酚蓝），用于指示电泳进度，方便判断何时停止电泳（溴酚蓝迁移位置对应约 300bp 的 DNA 片段，可直观判断电泳时间）； 部分缓冲液还含 EDTA，螯合 Mg²⁺终止酶反应，但核心用于判断停止时间的是指示剂。限制酶BamHI识别5'-GGATCC-3'，切割后粘性末端为5'-GATC-3'；XbaI识别5'-TCTAGA-3'，切割后粘性末端为5'-CTAG-3'，二者粘性末端互补（GATC 与 CTAG 反向互补），可互相连接； 原始质粒 A 的酶切位点：KpnI、BamHI、XbaI；构建重组质粒 B 时，若目的基因通过BamHI/XbaI反向连接，会导致BamHI和XbaI位点被 “掩盖”（连接后序列不再被两种酶识别）； 双酶切时，仅KpnI能有效切割，因此仅产生一条 DNA 条带。 （4）要验证成功构建 γ- 氨基丁酸高表达菌株，需验证融合蛋白是否成功表达； 抗原 - 抗体杂交的原理是 “抗原 - 抗体特异性结合”，因此需用抗融合蛋白（SNO1-SNZ1 融合蛋白）的抗体进行杂交：若出现阳性条带，说明融合蛋白成功表达，菌株可提高 GadB 活性，为高表达菌株。 （5）R2 为特定基因过表达菌株，γ- 氨基丁酸含量仅为原始菌株 R1 的 1/3，说明过表达的基因抑制了 γ- 氨基丁酸的合成，或促进了其降解，结合细胞代谢调控，合理假设包括： 竞争性抑制 GadB 活性：过表达的蛋白与 GadB 的底物（L - 谷氨酸）结合，竞争性抑制 GadB 的催化活性，减少 γ- 氨基丁酸生成； 抑制合成途径关键酶：过表达的基因产物抑制了 GABA 合成途径中上游（如谷氨酸合成酶）或下游（如 GadB 本身）关键酶的表达 / 活性，阻断合成； 激活降解途径：过表达的基因产物激活了 γ- 氨基丁酸的降解代谢途径（如 GABA 转氨酶），加速 GABA 分解，导致积累量下降； 反馈抑制：过表达的蛋白通过代谢反馈，抑制了谷氨酸的合成，减少 GadB 的底物供应，降低 GABA 产量。 CGCTATGCAAAT 16．（2026·云南·一模）激活特异性杀伤癌细胞的T细胞需要两个信号：第一信号是特异性识别信号，即T细胞表面的TCR识别癌细胞表面的MHC分子复合物；第二信号是共刺激信号，即T细胞表面的共刺激分子（如CD3）接收的激活信号。研究人员以CD3和BCMA（一种多发性骨髓瘤细胞表面特有的、高表达的蛋白质）为抗原，制备了CD3×BCMA双特异性抗体用于治疗多发性骨髓瘤。该研究项目的部分任务如下，回答下列问题。 任务一：杂交瘤细胞A-B的获取 (1)图甲表示制备鼠源双特异性抗体的过程。图中物质X是_______，杂交瘤细胞A的特点是_______。 (2)获得杂交瘤细胞B需要进行两步筛选：第一步筛选获得杂交瘤细胞，第二步经多次筛选获得足够数量的杂交瘤细胞B。需进行第二步筛选的原因是小鼠除了接触CD3外，还可能接触其他抗原，导致小鼠体内产生_______，经细胞融合后会获得多种杂交瘤细胞。诱导杂交瘤细胞A与杂交瘤细胞B融合的常用方法有_______融合法、电融合法和灭活病毒诱导法等。 任务二：CD3×BCMA双特异性抗体的制备及应用 (3)抗体由两条H链和两条L链组成。杂交瘤细胞A产生的特异性抗体由两条H1链和两条L1链组成（如图乙）；杂交瘤细胞B产生的特异性抗体由两条H2链和两条L2链组成。杂交瘤细胞A-B能合成H1、H2、L1、L2四种多肽链，其中任意2条H链与2条L链随机结合形成10种抗体，要筛选出图丙中的双特异性抗体，应使用的抗原是________，其原理是_______。 (4)图丙是双特异性抗体与癌细胞和T细胞结合的示意图。根据题目信息推测该双特异性抗体治疗多发性骨髓瘤的原理是：该双特异性抗体能与T细胞表面的CD3特异性结合，______。 任务三：鼠源双特异性抗体的改造 (5)抗体包括可变区和恒定区两个部分。可变区负责特异性识别并结合抗原；恒定区是被异种生物的免疫系统识别为“非己”的关键区。将上述获得的鼠源双特异性抗体注射到人体后，会引发免疫应答，进而将该鼠源抗体清除使其失去疗效。为解决此问题，下列思路合理的有______（填序号）。 A．从被相应抗原反复免疫过的小鼠体内提取B淋巴细胞，与人骨髓瘤细胞融合，筛选出相应的杂交瘤细胞来生产抗体 B．制备转入人源抗体基因的转基因小鼠，用相应抗原反复免疫该转基因小鼠，然后从其体内提取B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合，筛选出相应的杂交瘤细胞来生产抗体 C．从小鼠体内获取抗相应抗原的抗体可变区的基因片段，将该基因片段与人源抗体恒定区的基因片段连接并构建基因表达载体，最终获得抗相应抗原的人鼠嵌合抗体 【答案】(1) BCMA 既能迅速大量增殖，又能产生抗BCMA的抗体 (2) 多种B淋巴细胞 PEG（聚乙二醇） (3) BCMA和CD3 只有该双特异性抗体既能与BCMA特异性结合又能与CD3特异性结合 (4)还能与多发性骨髓瘤细胞表面的BCMA特异性结合，有利于T细胞表面的TCR识别癌细胞表面的MHC，进而激活T细胞杀伤癌细胞 (5)BC 【详解】（1）研究人员以CD3和BCMA（一种多发性骨髓瘤细胞表面特有的、高表达的蛋白质）为抗原，CD3注射在下面一只鼠中，因此注射在上面一只鼠中的X物质为BCMA；杂交瘤细胞A为B细胞与骨髓瘤细胞融合后筛选而成，既能迅速大量增殖，又能产生抗BCMA的抗体。 （2）除了接触CD3外，小鼠接触过多种抗原，因此能产生多种B淋巴细胞；诱导动物细胞融合的方法有PEG（聚乙二醇）融合法（化学方法）、电融合法（物理方法）和灭活病毒诱导法（生物方法）等。 （3）图丙中的抗体为双特异性抗体，既能结合BCMA也能结合CD3，因此应使用的抗原是BCMA和CD3。 （4）该双特异性抗体能与T细胞表面的CD3特异性结合，还能与多发性骨髓瘤细胞表面的BCMA特异性结合，有利于T细胞表面的TCR识别癌细胞表面的MHC，进而激活T细胞杀伤癌细胞，达到治疗多发性骨髓瘤的目的。 （5）A、不能使用人的骨髓瘤细胞进行实验，A错误； B、制备转入人源抗体基因的转基因小鼠，可以减弱人的免疫应答，避免抗体被清除，B正确； C、可变区负责特异性识别并结合抗原，恒定区是被异种生物的免疫系统识别为“非己”的关键区，将鼠的可变区基因片段与人源抗体恒定区的基因片段连接并构建基因表达载体，可减弱人的排斥反应，C正确。 17．（2026·新疆乌鲁木齐·二模）2025年我国某海域养殖的鲍鱼、海参爆发“白化病”，病原体为新型嗜盐古菌，其分泌的白化毒素A（WhnA）是致病的关键，该毒素合成酶基因whnA部分序列已测定。研究团队通过基因克隆、细胞工程及转基因技术防控，图1和图2为反向PCR的原理。请回答下列问题： (1)已知EDTA可抑制DNA酶的活性。提取嗜盐古菌基因组DNA并提纯DNA时，需在含有EDTA的缓冲液中剧烈振荡并加入蛋白酶K，推测EDTA和蛋白酶K的主要作用分别是______。图1中，用限制酶EcoRI切割基因whnA时，产生的黏性末端为5'-______-3'。 (2)据图2分析，以环化DNA为模板进行PCR扩增时，需确保引物A与引物B的3'端分别指向环化DNA的______（填“已知序列”或“未知序列”）方向。PCR中，引物的作用是______。 (3)制备抗白化毒素A的单克隆抗体时，脾脏B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合常用的诱导方法是______；融合后第二次筛选过程中，进行抗体检测所利用的原理是______。构建“抗病藻类生物滤器”时，若要定量评估基因whnA上游调控序列在不同盐度下的活性，可将该调控序列与绿色荧光蛋白（GFP）基因融合构建报告载体，通过检测______反映该调控序列的活性大小。 【答案】(1) EDTA可防止DNA降解，蛋白酶K可降解细胞内的蛋白质从而纯化DNA AATT (2) 未知序列 使DNA聚合酶能够从引物的3’端开始连接脱氧核苷酸 (3) 电融合法 抗原与抗体特异性结合 绿色荧光强度/GFP的表达量 【详解】（1）提取基因组DNA时，需防止DNA被细胞内的DNA酶降 解，EDTA可抑制DNA酶的活性，防止DNA降解；蛋白酶K能特异性降解细菌细胞内的蛋白质，便于进行DNA的纯化。由图2可知，限制酶EcoRI切割后产生的黏性末端为5-AATT-3'。 （2）由图2可知，以环化DNA为模板进行反向PCR扩增时，反向PCR的引物设计需与已知序列的特定方向结合，确保引物A与引物B的3端都指向环化DNA的未知序列方向，使DNA聚合酶沿环状模板合成包含未知序列的DNA片段。PCR中，引物的作用是使DNA聚合酶能够从引物的3’端开始连接脱氧核苷酸。 （3）动物细胞融合的物理诱导方法包括电融合法，其原理是通过物理手段使细胞膜的流动性增强，进而发生融合。融合后的细胞需经过两次筛选，第一次用选择性培养基淘汰未融合的细胞和同种融合细胞，第二次筛选是进行克隆化培养和抗体检测，抗体检测的原理是抗原与抗体特异性结合。基因whnA上游调控序列可驱动下游基因的转录，将其 与GFP基因融合后，调控序列的活性越强，GFP基因的转录和翻译水平越高，绿色荧光强度就越强，因此可通过检测绿色荧光强度（或GFP的表达量）来评估调控序列在不同盐度下的活性。 18．（2026·广东深圳·一模）某些细菌会释放酰基高丝氨酸内酯（AHL），AHL可自由进出细菌，其浓度达到一定阈值后会作用于细菌使其发生代谢变化（图1）。科学家试图利用细菌这一系统开发一种工程菌，来实现特定药物的合成和释放。 回答下列问题： (1)研究人员将构建的质粒①和质粒②导入大肠杆菌前，通常需先用________处理大肠杆菌细胞，使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态，导入后的菌体最适合用________法接种于选择培养基上，由此构建工程菌。 (2)据图1分析，当工程菌密度升高时，________积累达到阈值，才能与________蛋白结合形成复合物，该复合物与启动子结合，启动下游D基因的表达。 (3)为实现工程菌在肠道病灶部位裂解，研究人员利用基因E构建了质粒③（图2），其编码的蛋白E可诱导大肠杆菌裂解。在相同培养条件下，测定一段时间内含质粒①、③的工程菌和野生型大肠杆菌的种群密度变化（图3），在培养早期该曲线趋于一致，而在培养后期出现明显差异，在整个培养时间中出现这种现象的原因是________。 (4)综合上述研究，研究人员将质粒________导入大肠杆菌构建特定药物合成和释放的工程菌。结合图3分析，该工程菌的药物释放特征是________。 【答案】(1) Ca2+ 稀释涂布平板 (2) AHL LuxR (3)在低细胞密度时，AHL浓度较低，不足以激活LuxR，因此裂解基因E不表达，细胞生长不受影响；当细胞密度升高，AHL积累到阈值以上，激活LuxR，启动裂解基因E表达，导致细胞死亡 (4) ①②③ 呈现周期性循环合成和释放药物 【分析】本题图1展示基于群体感应的工程菌调控通路：AHL分子随菌群密度积累，与LuxR蛋白结合后激活PLuxI启动子，驱动下游药物基因D表达。图2为携带裂解基因E的质粒③，图3验证功能：早期AHL未达阈值，工程菌与野生型生长一致；后期AHL触发E表达，工程菌裂解、密度下降，实现密度依赖型药物释放。 【详解】（1）将外源质粒导入大肠杆菌前，需用Ca²⁺处理使其成为“感受态细胞”，即能吸收周围环境中DNA分子的生理状态，这是基因工程中转化实验的标准操作。导入后，为筛选成功转化的工程菌，通常使用稀释涂布平板法将菌液均匀涂布在含抗生素的选择培养基上，以便形成单菌落并筛选阳性克隆。 （2）根据图1和题干描述：AHL是细菌分泌的信号分子，可自由进出细胞，当菌群密度升高，AHL积累至阈值，与胞内受体蛋白LuxR结合形成复合物；该复合物结合启动子PLuxI ，启动下游基因（如D基因）表达。 （3）图3显示：“构建调控系统”的工程菌在后期种群密度低于“未构建调控系统”的菌株，且出现波动，原因在于：质粒③携带由PLuxI控制的E基因（编码裂解蛋白），只有当AHL浓度足够高（即菌群密度高）时，才会激活E基因表达，细菌自溶死亡，这是一种负反馈调节：菌群越多→越容易触发裂解→抑制过度增殖→维持动态平衡；野生型无此系统，故正常S型增长。 （4）质粒①提供LuxR/LuxI调控元件，质粒②携带药物D基因，质粒③携带裂解E基因，三者共同导入后可实现药物合成与密度依赖型释放；当工程菌密度达到阈值时，AHL积累触发D基因（药物）和E基因（裂解蛋白）表达，使细菌裂解并释放药物；低密度时药物不表达、细菌不裂解，实现药物的可控释放，该工程菌呈现周期性循环合成和释放药物。 / 学科网（北京）股份有限公司 $ 猜押07 生物技术与工程 押题预测： 押题1： (1) 碳源、氮源 无机盐 高压蒸汽灭菌锅 9mL无菌水 (2) 琼脂 稀释涂布平板法 6 (3) 形状、大小、颜色 从培养Ⅲd中最后一次划线的末端附近挑取多个菌落，分别接种到等量的相同液体培养基中，在相同且适宜的条件下培养一段时间，测定并比较各组培养基中的PHA含量 押题2： (1) 杂种原生质体再生出细胞壁 3 (2) 灭活病毒诱导法 细胞膜具有流动性 (3) 细胞分裂素、生长素 抗病毒性 (4) 次生 植物细胞培养 不占用耕地，几乎不受季节、天气等的限制 押题3： (1) T-DNA 染色体DNA (2) 限制性内切核酸酶（或限制酶）和DNA连接酶 驱动GsERF6基因转录 标记基因 便于重组DNA的筛选 (3) 耐高温的DNA聚合酶 含有 泳道1与阳性对照（+）出现了相同大小的条带 通关特训： 题号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 答案 D A C D D C C D CD AD 题号 11 12 13 14 答案 ABD BD AC ABC 15． (1)序列比对工具(如BLAST ) (2) AC n(230-1) (3) 指示剂 由于BamHⅠ和 XbaⅠ切割产生相同粘性末端，连接时存在反向连接，使重组质粒只能被KpnⅠ切割得到一段DNA条带。 (4)SNO1和SNZ1表达的融合蛋白(融合蛋白) (5)R2菌株中过量表达的某些基因，其产物可能竞争性抑制了GadB的活性，或抑制了合成GABA代谢途径中上游关键酶的表达或活性，或激活了降解GABA的代谢途径 16． (1) BCMA 既能迅速大量增殖，又能产生抗BCMA的抗体 (2) 多种B淋巴细胞 PEG（聚乙二醇） (3) BCMA和CD3 只有该双特异性抗体既能与BCMA特异性结合又能与CD3特异性结合 (4)还能与多发性骨髓瘤细胞表面的BCMA特异性结合，有利于T细胞表面的TCR识别癌细胞表面的MHC，进而激活T细胞杀伤癌细胞 (5)BC 17． (1) EDTA可防止DNA降解，蛋白酶K可降解细胞内的蛋白质从而纯化DNA AATT (2) 未知序列 使DNA聚合酶能够从引物的3’端开始连接脱氧核苷酸 (3) 电融合法 抗原与抗体特异性结合 绿色荧光强度/GFP的表达量 18． (1) Ca2+ 稀释涂布平板 (2) AHL LuxR (3)在低细胞密度时，AHL浓度较低，不足以激活LuxR，因此裂解基因E不表达，细胞生长不受影响；当细胞密度升高，AHL积累到阈值以上，激活LuxR，启动裂解基因E表达，导致细胞死亡 (4) ①②③ 呈现周期性循环合成和释放药物 / 学科网（北京）股份有限公司 $ 猜押07 生物技术与工程 题型 考情分析 考向预测 发酵工程 2025 年黑吉辽蒙卷：微生物的分离与培养（选择培养基、涂布平板法） 2024年辽吉黑卷：泡菜制作、培养基选择、无菌操作 1.技术流程的细节与原理：可能聚焦于某项生物技术（如PCR、基因工程、细胞融合、胚胎工程）的关键步骤、操作目的、所用工具酶或试剂的作用原理。 2.技术应用与方案设计：可能设定一个生产或科研目标（如生产特定产物、培育新品种、疾病检测），要求选择或设计合适的技术路线，并说明依据。 3.技术安全与伦理考量：可能探讨生物技术（如基因编辑、克隆）在应用过程中可能带来的安全性、伦理及社会问题，体现社会责任。 细胞工程（植物+动物+胚胎） 2025 年黑吉辽蒙卷 ：植物组织培养、单克隆抗体制备 2024年辽吉黑卷：动物细胞培养、核移植 基因工程 2025 年黑吉辽蒙卷 ：限制酶选择、PCR、载体条件、导入方法 2024年辽吉黑卷：表达载体构建、分子检测、转基因应用 押题1 发酵工程 1．（2026·海南海口·二模）废弃的塑料因难以降解，造成“白色污染”；聚羟基脂肪酸酯（PHA）具有类似塑料的理化特性，丢弃后易被土壤微生物降解，可代替部分塑料应用于生产生活。研究人员在某咸水湖中发现了一种能合成PHA的嗜盐细菌，分离该细菌的基本流程如图所示。请回答下列问题： (1)培养和分离产PHA嗜盐细菌的培养基的配方如下：牛肉膏5g、蛋白胨10g、NaCl 50g、水定容至1000mL。其中，蛋白胨能为嗜盐细菌的生长提供____和维生素等营养物质，NaCl可提供________。实验中需要对培养基进行严格灭菌，对培养基灭菌的常用工具是________。从咸水湖取回的样品中产PHA嗜盐细菌的浓度较高，需经过程①和②连续两次10倍稀释，每次稀释时均从前面的容器中取1mL样液，加入__________。 (2)与Ⅰ号培养基相比，Ⅱ号培养基和Ⅲ号培养基中通常需加入_____。过程③的接种方法是_________________；若过程④进行了5次划线，则需要对接种环灼烧____次。 (3)在一定的培养条件下，根据菌落的__________（答出两点）等特征，可初步判断其是否为产PHA嗜盐细菌。现已初步判断培养皿d中均为嗜盐细菌菌落，欲从培养皿d中进行取样，筛选出产PHA能力强的嗜盐细菌，请简要写出操作过程：______________________________。 1.无菌技术 消毒 杀死部分微生物（非芽孢） 煮沸、巴氏消毒、酒精擦拭 灭菌 杀死所有微生物（包括芽孢） 高压蒸汽灭菌（培养基）、干热灭菌（玻璃器皿）、灼烧（接种环） 无菌操作 防止杂菌污染 超净工作台、火焰旁操作、器皿灭菌 培养基灭菌 常用高压蒸汽灭菌法（121℃，15-30min） 含水分培养基不能用干热灭菌 无菌检测 将冲洗液涂布于平板，观察有无菌落 检验样品是否无菌 2. 微生物的纯化 平板划线法 用接种环在固体培养基表面划线 获得单菌落，用于纯化 稀释涂布平板法 将菌液梯度稀释后涂布于平板 可用于计数（菌落数30~300为有效） 单菌落 由一个微生物细胞繁殖形成的菌落 代表纯种 接种环/涂布器灭菌 接种环：灼烧灭菌；涂布器：酒精浸泡后灼烧 防止杂菌污染 倒置培养 培养皿倒置放入恒温箱 防止冷凝水滴落冲散菌落 3.微生物计数 稀释涂布平板计数 菌落数×稀释倍数÷涂布体积 结果偏小（因多个细胞连成一个菌落） 显微镜直接计数 使用血细胞计数板 结果偏大（含死菌） 计数原则 同一稀释度至少涂布3个平板，取平均值 选择菌落数30~300的平板 押题2 细胞工程（植物+动物+胚胎） 2．（2026·辽宁·模拟预测）人参果（2n=24）因低糖、低脂、高蛋白深受人们喜爱，但人参果种植过程中容易遭受病毒侵害，产量低。苦参（2n=18）产生的苦参碱、氧化苦参碱能干扰病毒RNA合成，对烟草花叶病毒（TMV）等多种病毒有效。科研人员利用人参果和苦参进行植物体细胞杂交，培育抗病毒的人参果—苦参杂种植株。请回答下列问题： (1)将人参果细胞和苦参细胞融合之前，需要制备原生质体，该操作中，____标志着两种细胞融合成功。若只考虑两两融合，融合后共能得到____种原生质体。 (2)与植物细胞融合不同，动物细胞融合特有的方法是_____，细胞融合的原理是______。 (3)得到杂种细胞后继续培养，常用____________（填植物激素名称）诱导愈伤组织形成和分化，获得完整杂种植株。为确定该杂种植株是否符合育种要求，还需进行________检测。 (4)与紫草宁一样，苦参碱是一种_____（填“初生”或“次生”）代谢物，为获得大量的苦参碱可利用______技术，该技术的优点为___________________（答出1点）。 1.植物细胞工程 外植体选择 幼嫩茎段、叶片、芽原基等 分裂能力强，分化程度低 培养基成分 MS培养基 + 蔗糖 + 琼脂 + 植物激素（生长素、细胞分裂素） 生长素/细胞分裂素比例影响分化方向 激素比例调控 比例高→生根，比例低→生芽，适中→愈伤组织 如6-BA（细胞分裂素）与NAA（生长素）配比 愈伤组织 未分化的薄壁细胞团 可用于悬浮培养、诱变、再生植株 细胞悬浮培养 愈伤组织打散成单个细胞或小细胞团，液体培养 用于生产次生代谢产物（如紫杉醇、迷迭香酸） 植物体细胞杂交 原生质体融合 → 杂种细胞 → 杂种植株 克服远缘杂交不亲和，如“番茄—马铃薯” 植物细胞产物工厂化生产 大规模培养细胞，提取次生代谢产物（紫杉醇、香树脂醇等） 不依赖完整植株，周期短 脱毒苗培育 茎尖分生组织培养 茎尖几乎不含病毒，可获脱毒苗 人工种子 胚状体 + 人工种皮 可大规模繁殖，保持优良性状 2.动物细胞工程 培养基特点 合成培养基 + 血清（如胎牛血清） 血清提供生长因子、激素等 培养条件 37℃、5% CO₂（维持pH）、无菌、适宜渗透压 CO₂与碳酸氢钠构成缓冲系统 贴壁生长与接触抑制 贴壁细胞分裂至表面相互接触时停止分裂 需用胰蛋白酶分散后传代 传代培养 细胞密度过大时，分瓶继续培养 原代培养指从机体取出后首次培养 细胞系与细胞株 细胞系：可无限传代（遗传物质改变）；细胞株：遗传物质未变 原代培养→有限细胞系→无限细胞系 动物细胞融合 聚乙二醇（PEG）、灭活病毒、电融合 原理：细胞膜流动性 押题3 基因工程 3．（2026·辽宁·模拟预测）研究人员利用农杆菌转化法将大豆耐盐碱基因GsERF6导入水稻，构建重组表达载体（图甲），并对转化后的细胞进行目的基因检测（图乙）。回答下列问题： (1)利用农杆菌转化法时，将目的基因插入Ti质粒的_____上；需将含GsERF6基因的重组Ti质粒导入农杆菌，再让农杆菌侵染水稻细胞，最终使GsERF6基因进入水稻细胞并整合到水稻细胞的_____上。 (2)构建图甲所示的重组表达载体需要的酶是______，该表达载体中的强启动子的作用是________。新霉素抗性基因属于_____，其作用是________。 (3)对转化细菌进行目的基因检测时，常采用PCR技术，该技术需要_______（填一种酶）。结合图乙结果分析，转基因水稻DNA（泳道1）中_____（填“含有”或“不含有”）GsERF6基因，判断的依据是_______。 1.基因工程的工具 限制酶（限制性内切核酸酶） 识别特定核苷酸序列，切割DNA磷酸二酯键 产生黏性末端或平末端；不切割自身DNA（甲基化保护） DNA连接酶 催化DNA片段之间形成磷酸二酯键 连接两个DNA片段（黏性末端或平末端） 载体（质粒、病毒等） 将目的基因导入受体细胞并使其稳定存在和表达 必备元件：复制原点、限制酶切位点、标记基因、启动子、终止子 标记基因 用于筛选含重组DNA的受体细胞 如抗生素抗性基因（Kanᴿ、HygBᴿ）、荧光蛋白基因 启动子 RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动基因转录 常用启动子：p35S（植物）、lac、T7等 终止子 转录终止的信号序列 位于目的基因下游 2目的基因的获取 从基因文库获取 基因组文库（含全部基因）或cDNA文库（含编码序列） cDNA文库不含内含子，适合原核表达 PCR扩增 体外快速扩增特定DNA片段 原理：DNA半保留复制；所需：模板、引物、dNTP、耐热DNA聚合酶（Taq酶）、缓冲液 人工合成 根据已知氨基酸序列或基因序列化学合成 可进行密码子优化（如将细菌基因改为植物偏好密码子） 3基因表达载体的构建 载体结构 启动子 + 目的基因 + 终止子 + 标记基因 + 复制原点 是基因工程的核心步骤 双酶切法 用两种限制酶切割载体和目的基因 防止载体自连，保证定向连接 同源重组法 利用同源臂将目的基因插入载体特定位置 如Gibson组装、In-Fusion 连接反应 用DNA连接酶连接载体和目的基因 构建重组质粒 4目的基因的检测与鉴定 DNA水平检测 PCR法（用特异性引物扩增目的基因片段） 模板为受体细胞基因组DNA 凝胶电泳验证 琼脂糖凝胶电泳，根据片段大小判断是否插入 需用限制酶切割重组质粒后电泳 转录水平检测 RT-PCR（逆转录PCR）检测mRNA 模板为提取的RNA，先逆转录成cDNA 翻译水平检测 抗原-抗体杂交（Western blot） 检测目的蛋白是否表达 个体水平鉴定 观察性状（如抗虫、抗病、荧光） 如转基因棉花抗虫实验 阴性对照 用无菌水代替模板DNA进行PCR 检验是否有外源DNA污染 一、单选题 1．（25-26高三下·四川成都·开学考试）酸笋是螺蛳粉的“灵魂”。在自然发酵过程中，酸笋中的乳酸菌作为主要微生物分解蛋白质产生硫化氢等物质，形成了螺蛳粉的特殊风味。酸笋的传统发酵工艺包括原材料处理、装坛、发酵等过程。下列相关叙述正确的是（    ） A．乳酸菌代谢类型为异养厌氧型，所以不会分布在空气中 B．原材料处理主要是对采摘后的竹笋进行剥壳、清洗和灭菌 C．随着发酵的进行，发酵液pH值逐渐升高后保持稳定 D．装坛时应保证竹笋被盐水全部浸没，才能保证发酵的正常进行 2．（2026·山东淄博·一模）下列关于生物学实验的说法正确的是 选项 实验名称 相关描述 A 探究植物细胞的吸水和失水 仅使用低倍镜观察，随着外界蔗糖溶液浓度的增加，细胞大小基本不变 B 探究酵母菌细胞呼吸的方式 有氧呼吸组应让空气持续依次通过3个锥形瓶 C DNA的粗提取与鉴定 可进行两次离心，第一次离心取沉淀物，第二次离心取上清液 D DNA片段的扩增及电泳鉴定 电泳缓冲液中需加入指示剂以便观察电泳进程 A．A B．B C．C D．D 3．（2026·辽宁抚顺·模拟预测）槲皮素是一种天然存在的黄酮醇类化合物，广泛存在于多种植物的茎皮、花、叶、芽、种子、果实中，也是自然界中最强的抗氧化剂之一，科研人员为了快速检测出槲皮素，制备出了抗槲皮素的单克隆抗体，制备流程如图所示。下列叙述错误的是（　　） A．给小鼠直接注射槲皮素，无法引起小鼠的特异性免疫 B．②过程采用的诱导融合方法中有的不适合植物原生质体的融合 C．体外培养③过程得到的细胞丙，会出现接触抑制现象 D．④过程需进行克隆化培养和抗体检测，可体外扩大培养细胞丁 4．（2026·山东日照·一模）研究人员利用细胞工程技术生产紫杉醇的大致流程如图所示。下列说法错误的是（    ） A．过程①脱分化得到的愈伤组织具有较高的分裂分化能力 B．过程②振荡培养有利于细胞充分接触培养液并增加其溶氧量 C．过程③中过滤的目的是除去细胞团获得较纯净的单细胞悬浮液 D．过程⑤主要是利用促进细胞生长的营养条件提高单细胞中紫杉醇含量 5．（2026·重庆·模拟预测）N6-甲基腺嘌呤（6mA）是发生在腺嘌呤第六位氮原子上的一种甲基化修饰。研究表明，6mA在植物寄生线虫基因组中广泛存在，并在调控线虫毒力方面发挥重要作用，同时在其体内也发现了相应的6mA去甲基化酶MiNMAD。为探究其应用价值，研究团队在烟草和番茄中分别构建并获得表达根结线虫去甲基化酶双链RNA（MiNMAD-dsRNA）的转基因植株，被线虫取食后能抑制线虫体内MiNMAD基因的翻译过程，结果如下表所示，下列相关叙述错误的是（　　） 植株类型 根结数量（相对值） 线虫侵染能力 效应因子基因表达水平 野生型对照 100% 100% 100% 转MiNMAD-dsRNA烟草 32% 28% 35% 转MiNMAD-dsRNA番茄 41% 36% 42% 注：效应因子是线虫分泌的毒力蛋白，与侵染能力呈正相关。 A．可以利用花粉管通道法把外源基因导入烟草细胞 B．MiNMAD能特异性识别并去除DNA上的6mA甲基化修饰，从而调控下游基因表达 C．宿主植物中表达的MiNMAD-dsRNA，不改变线虫细胞中MiNMAD基因的序列 D．线虫中6mA的修饰水平与效应因子基因的表达水平呈正相关 6．（2026·黑龙江哈尔滨·一模）白菜（2n=20）具有鲜嫩的风味，甘蓝（2n=18）具备抗病、耐寒等优良性状。通过细胞工程可将二者性状结合培育出白菜-甘蓝植株，其制备流程如图所示。下列叙述正确的是（    ） A．①需用解离的方法去除细胞壁，②可选用PEG作为原生质体的促融剂 B．③需借助荧光显微镜观察，通过显微操作仪筛选并留取显示单色荧光的细胞 C．若杂种植株风味不如白菜，与亲本白菜回交可增强后代来自白菜的优良性状 D．白菜-甘蓝与亲本回交得到的子代植株是异源六倍体，可以通过有性生殖繁殖 7．（2026·云南·一模）近年来，我国酒精性肝病的发病率逐年上升，危害仅次于病毒性肝炎。研究发现，雪莲次生代谢物对急性酒精肝损伤具有较好的防治作用。人们运用细胞工程技术生产雪莲次生代谢物，下列叙述正确的是（    ） A．次生代谢物是雪莲生长所必需的物质，一般分布在特定组织或器官中 B．用射线处理雪莲幼苗诱发变异，即可获得次生代谢物高产的雪莲植株 C．切取雪莲茎尖在无菌条件下进行愈伤组织培养，可获取其次生代谢物 D．可用固体培养基离体培养雪莲细胞，提高单个细胞中次生代谢物的含量 8．（2026·广东广州·一模）表皮生长因子受体（EGFR）在肿瘤发生中起重要作用，其过表达常见于多种恶性肿瘤。研究人员利用杂交瘤技术制备抗EGFR单克隆抗体。下列叙述错误的是（　　） A．用被其他抗原污染的EGFR免疫小鼠后，所得的每个B细胞也只能产生一种抗体 B．经过多次克隆化培养和抗体检测，能获得足够数量的特定杂交瘤细胞 C．杂交瘤细胞在小鼠腹腔内能快速增殖，与腹腔内具有充足的营养物质等适宜条件有关 D．细胞毒素与抗EGFR单克隆抗体偶联可使抗体更好地杀死肿瘤细胞 二、不定项选择题 9．（2026·山东青岛·一模）某单基因遗传病致病基因在人群中的基因频率约为1/200。为确定其遗传机制，研究人员调查了某家庭成员患病情况（图1），并通过两对引物（F1+R和F2+R）扩增相关基因，用限制酶完全酶切后利用琼脂糖凝胶电泳分离得到图2所示结果（假定扩增产物中最多有一个酶切位点）。下列说法错误的是（    ） A．该病可能由正常基因发生碱基对的替换导致 B．由图2可知酶切位点距离R引物约700bp C．Ⅲ-3为杂合子的概率为1/4 D．Ⅲ-1为患病男孩的概率为1/201 10．（2026·辽宁锦州·二模）深海冷泉（高压、低温、黑暗环境）沉积物中存在一类特殊细菌，其代谢活动依赖特定压力条件。研究人员从某海域冷泉沉积物中分离出一株疑似纤维素降解菌，为探究其生长特性，设计实验，结果如下表。下列叙述正确的是（　　） 组别 压强 唯一碳源 菌落生长情况 菌液OD值（反映细菌浓度） ① 常压 纤维素 - 0.03（接近空白对照） ② 常压 果胶 - 0.02（接近空白对照） ③ 高压 纤维素 + 0.87 ④ 高压 果胶 + 0.32 （注：“+”表示有，“-”表示无；OD值反映细菌浓度） A．制备培养基时，应先调节pH再高压蒸汽灭菌 B．该细菌在常压下可利用纤维素或果胶作为碳源生长 C．可用稀释涂布平板法对该细菌进行分离，但无法计数 D．高压条件下，该细菌对纤维素的利用能力强于果胶 11．（2026·黑龙江双鸭山·一模）川西獐牙菜的代谢产物獐牙菜苦苷和龙胆苦苷具有治疗黄疸性肝炎的功能，如图是科研人员利用体细胞杂交等技术实现药效成分的工厂化生产示意图。下列相关叙述错误的是（　　） 注：杂种细胞中含有的染色体大部分为柴胡染色体 A．①过程可用盐酸和酒精配制的解离液替代纤维素酶和果胶酶 B．②过程融合产生的杂种细胞一定含有合成獐牙菜苦苷的基因 C．③过程的培养基中添加细胞分裂素与生长素的比值为1 D．④过程处理的主要目的是使原生质体发生基因突变 12．（2026·山东青岛·一模）土壤中的吸水链霉菌是一种放线菌，菌体呈丝状生长，其分泌的酯类物质——雷帕霉素被广泛用于器官移植后的免疫抑制治疗。科研人员利用吸水链霉菌发酵生产雷帕霉素的流程如下：吸水链霉菌的分离与鉴定、扩大化培养、接种、发酵罐发酵、获得产物。下列说法正确的是（    ） A．吸水链霉菌能产生雷帕霉素是因为其基因组中含有编码雷帕霉素的基因 B．鉴定吸水链霉菌时，除通过形态学鉴定外，还要借助生物化学的方法 C．扩大化培养吸水链霉菌时，可用紫外线照射对培养基进行灭菌 D．不能采用稀释涂布平板法监控吸水链霉菌发酵过程中活细胞数量的变化 13．（2026·河北廊坊·一模）黄曲霉毒素 B1(AFB1)是一种强致癌性毒素，金刚烷胺(AMD)是一种治疗流感的抗病毒药物，畜禽摄入含 AFB1和 AMD 的饲料，会间接危害人体健康。某团队制备同时含 AFB1 和AMD 两个不同抗原结合位点的双特异性单克隆抗体(流程如图所示)，用于检测饲料中的残余药物。下列叙述错误的是（    ） A．A、B、C三个过程均使用了动物细胞培养技术和动物细胞融合技术 B．杂交瘤细胞①和②以及融合细胞③可能能在选择培养基中生存 C．克隆化培养及大规模培养得到的都是能分泌目标抗体的杂交瘤细胞 D．目标双特异性抗体可以同时结合AFB1 和 AMD，提高了检测效率 14．（2026·黑龙江哈尔滨·二模）食用腐烂水果后，人出现头晕、恶心、呕吐或更严重的症状，这可能与微生物代谢产生的毒素有关。某研究小组致力于研究健康饮食，设计实验探究腐烂苹果不同区域微生物的种类和数量，实验基本步骤如图所示。下列说法错误的是（　　） A．步骤二可以选用平板划线法或稀释涂布平板法进行接种 B．在适宜环境下培养12小时即可统计出不同菌液中全部微生物的种类和数量 C．若⑤所在部位几乎未检测出微生物，则切掉①～④后的苹果便可放心食用 D．若①～⑤菌落种类和数量依次减少，则离腐烂部位越远的果肉中毒素含量可能越少 三、非选择题 15．（2026·黑龙江哈尔滨·二模）谷氨酸脱羧酶(GadB)可以催化L-谷氨酸反应合成-氨基丁酸，但野生型的大肠杆菌的内源性GadB的活力均较低。当SNO1基因和SNZ1基因同时表达时，能够形成融合蛋白，从而提高GadB活性，单独表达时不能形成相应的蛋白质。某研究小组通过以下实验步骤，尝试实现-氨基丁酸的高效生产。回答下列问题： 步骤1：利用原始质粒A构建重组质粒B和重组质粒C(图1) 注：限制酶识别序列及切割位点： NcoI     5'-A↓GATCT-3'               KpnI     5'-G↓GTACC-3' BamHI    5'-A↓CTAGT-3'            XbaI    5'-T↓CTAGA-3' (1)在获取GadB基因序列时，可以通过从序列数据库中查找，或利用___________辅助筛选。 (2)GadB基因的a链为转录的模板链，测得该链首端到末端的序列为5'-ACGTAGCGTTAT……CGCTATGCAAAT-3'。利用PCR扩增目的基因时，需设计GadB的引物。为了更好的构建重组质粒B，并确保GadB基因的正确连接，某同学设计了如下4种PCR引物，其中可选用的引物是___________。(填序号)。 A．5'-AGATCTATTTGCATAGCG-3'        B．5'-GCTACCATTTGCATAGCG-3' C．5'-GGTACCACGTAGCGTTAT-3'        D．5'-AGATCTACGTAGCGTTAT-3' 若本次PCR加入n个模板DNA，经过30轮循环，最终消耗的每种引物数量均为___________。 步骤2：利用双酶切法结合凝胶电泳初步鉴定重组质粒是否构建成功 (3)在电泳前需要将PCR产物与凝胶载样缓冲液相混合，凝胶载样缓冲液中应添加___________以便判断停止电泳的时间。若利用KpnI和BamHI切割重组质粒C后，琼脂糖凝胶电泳结果只显示出一条带，请分析原因___________。 步骤3：将重组质粒导入受体菌株。 步骤4：3个菌株发酵产-氨基丁酸能力的比较 实验中所用到的菌株如下：R1(原始菌株)，R2(某些特定基因过表达菌株)和R3(将重组质粒C导入R1的重组菌株) (4)从R3菌株中提取蛋白质，用抗___________抗体进行抗原—抗体杂交，若出现阳性反应，则初步证明成功构建-氨基丁酸高表达菌株。 (5)通过高效液相色谱法检测3个菌株发酵液中γ-氨基丁酸含量，数据显示某基因过量表达菌(R2)的发酵液中γ-氨基丁酸的含量仅为原始菌株R1的三分之一左右。请基于细胞代谢的调控过程，提出一种合理的假设：___________。 16．（2026·云南·一模）激活特异性杀伤癌细胞的T细胞需要两个信号：第一信号是特异性识别信号，即T细胞表面的TCR识别癌细胞表面的MHC分子复合物；第二信号是共刺激信号，即T细胞表面的共刺激分子（如CD3）接收的激活信号。研究人员以CD3和BCMA（一种多发性骨髓瘤细胞表面特有的、高表达的蛋白质）为抗原，制备了CD3×BCMA双特异性抗体用于治疗多发性骨髓瘤。该研究项目的部分任务如下，回答下列问题。 任务一：杂交瘤细胞A-B的获取 (1)图甲表示制备鼠源双特异性抗体的过程。图中物质X是_______，杂交瘤细胞A的特点是_______。 (2)获得杂交瘤细胞B需要进行两步筛选：第一步筛选获得杂交瘤细胞，第二步经多次筛选获得足够数量的杂交瘤细胞B。需进行第二步筛选的原因是小鼠除了接触CD3外，还可能接触其他抗原，导致小鼠体内产生_______，经细胞融合后会获得多种杂交瘤细胞。诱导杂交瘤细胞A与杂交瘤细胞B融合的常用方法有_______融合法、电融合法和灭活病毒诱导法等。 任务二：CD3×BCMA双特异性抗体的制备及应用 (3)抗体由两条H链和两条L链组成。杂交瘤细胞A产生的特异性抗体由两条H1链和两条L1链组成（如图乙）；杂交瘤细胞B产生的特异性抗体由两条H2链和两条L2链组成。杂交瘤细胞A-B能合成H1、H2、L1、L2四种多肽链，其中任意2条H链与2条L链随机结合形成10种抗体，要筛选出图丙中的双特异性抗体，应使用的抗原是________，其原理是_______。 (4)图丙是双特异性抗体与癌细胞和T细胞结合的示意图。根据题目信息推测该双特异性抗体治疗多发性骨髓瘤的原理是：该双特异性抗体能与T细胞表面的CD3特异性结合，______。 任务三：鼠源双特异性抗体的改造 (5)抗体包括可变区和恒定区两个部分。可变区负责特异性识别并结合抗原；恒定区是被异种生物的免疫系统识别为“非己”的关键区。将上述获得的鼠源双特异性抗体注射到人体后，会引发免疫应答，进而将该鼠源抗体清除使其失去疗效。为解决此问题，下列思路合理的有______（填序号）。 A．从被相应抗原反复免疫过的小鼠体内提取B淋巴细胞，与人骨髓瘤细胞融合，筛选出相应的杂交瘤细胞来生产抗体 B．制备转入人源抗体基因的转基因小鼠，用相应抗原反复免疫该转基因小鼠，然后从其体内提取B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合，筛选出相应的杂交瘤细胞来生产抗体 C．从小鼠体内获取抗相应抗原的抗体可变区的基因片段，将该基因片段与人源抗体恒定区的基因片段连接并构建基因表达载体，最终获得抗相应抗原的人鼠嵌合抗体 17．（2026·新疆乌鲁木齐·二模）2025年我国某海域养殖的鲍鱼、海参爆发“白化病”，病原体为新型嗜盐古菌，其分泌的白化毒素A（WhnA）是致病的关键，该毒素合成酶基因whnA部分序列已测定。研究团队通过基因克隆、细胞工程及转基因技术防控，图1和图2为反向PCR的原理。请回答下列问题： (1)已知EDTA可抑制DNA酶的活性。提取嗜盐古菌基因组DNA并提纯DNA时，需在含有EDTA的缓冲液中剧烈振荡并加入蛋白酶K，推测EDTA和蛋白酶K的主要作用分别是______。图1中，用限制酶EcoRI切割基因whnA时，产生的黏性末端为5'-______-3'。 (2)据图2分析，以环化DNA为模板进行PCR扩增时，需确保引物A与引物B的3'端分别指向环化DNA的______（填“已知序列”或“未知序列”）方向。PCR中，引物的作用是______。 (3)制备抗白化毒素A的单克隆抗体时，脾脏B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合常用的诱导方法是______；融合后第二次筛选过程中，进行抗体检测所利用的原理是______。构建“抗病藻类生物滤器”时，若要定量评估基因whnA上游调控序列在不同盐度下的活性，可将该调控序列与绿色荧光蛋白（GFP）基因融合构建报告载体，通过检测______反映该调控序列的活性大小。 18．（2026·广东深圳·一模）某些细菌会释放酰基高丝氨酸内酯（AHL），AHL可自由进出细菌，其浓度达到一定阈值后会作用于细菌使其发生代谢变化（图1）。科学家试图利用细菌这一系统开发一种工程菌，来实现特定药物的合成和释放。 回答下列问题： (1)研究人员将构建的质粒①和质粒②导入大肠杆菌前，通常需先用________处理大肠杆菌细胞，使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态，导入后的菌体最适合用________法接种于选择培养基上，由此构建工程菌。 (2)据图1分析，当工程菌密度升高时，________积累达到阈值，才能与________蛋白结合形成复合物，该复合物与启动子结合，启动下游D基因的表达。 (3)为实现工程菌在肠道病灶部位裂解，研究人员利用基因E构建了质粒③（图2），其编码的蛋白E可诱导大肠杆菌裂解。在相同培养条件下，测定一段时间内含质粒①、③的工程菌和野生型大肠杆菌的种群密度变化（图3），在培养早期该曲线趋于一致，而在培养后期出现明显差异，在整个培养时间中出现这种现象的原因是________。 (4)综合上述研究，研究人员将质粒________导入大肠杆菌构建特定药物合成和释放的工程菌。结合图3分析，该工程菌的药物释放特征是________。 / 学科网（北京）股份有限公司 $