抢分06 生物技术与工程（5大猜押预测）（浙江专用）2026年高考生物终极冲刺讲练测

**基本信息** 聚焦生物技术与工程五大模块，以考情预测为导向，通过方法表格系统梳理操作步骤与核心技巧，构建从原理到应用的知识逻辑链。 **专项设计** |模块|题量/典例|方法提炼|知识逻辑| |----|-----------|----------|----------| |发酵工程|4题+对比表|微生物分类/代谢类型/发酵条件对比|菌种特性→发酵流程→产物检测的因果链| |植物组织培养|3题|原生质体制备/脱分化/杂种植株培育步骤|细胞全能性→操作流程→次生代谢产物应用| |动物细胞培养|3题|单克隆抗体制备/细胞融合/筛选方法|细胞培养技术→抗体特异性→临床应用| |基因工程|3题+2表格|基因工程四步骤/PCR引物设计要点|工具酶→操作流程→检测鉴定的递进关系| |安全与伦理|3题|生物技术安全评估/伦理规范判断|技术应用→风险评估→社会责任的辩证关系|

抢分06 生物技术与工程 押题1： 题号 1 2 3 4 答案 D D C B 押题2： 题号 1 2 3 答案 D D C 押题3： 题号 1 2 3 答案 C A B 押题4：1．(1) 逆转录 cDNA (2) 丁 限制酶 DNA连接酶 (3)Ca2+ (4) B 琼脂糖凝胶电泳（电泳） 高浓度赖氨酸 (5) 液体 大量合成赖氨酸但生长并未受到明显抑制 2．(1) 5' Kpn I、Xba I 231-2 (2) CaCl2（Ca2+） ③④⑤①②或③④⑤（④）①②（①） (3) （只有）卡那霉素抗性基因位于T-DNA上，可整合到植物染色体DNA上，（羧苄青霉素抗性基因在T-DNA外，不进入玉米细胞） 生长素和细胞分裂素 (4) 1、2 3 (5) 256 降低 3．(1) 乳酸 接种乳酸菌/提供菌种 (2) 中心法则 化学合成/人工合成 GAATTCTACT 雌性 稀释 细胞克隆/克隆化/克隆 去核 激活/电刺激/电激活/Ca²⁺载体、乙醇、蛋白酶合成抑制剂 同期发情 PCR/DNA分子杂交/DNA 测序 不需要体外酶解，成本更低；生产过程更简单、效率更高；避免外源添加，更安全稳定；奶牛可长期持续地产出低乳糖奶 押题5： 题号 1 2 3 答案 C A C 通关特训： 题号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 答案 B C B D B A A B A B 题号 11 12 13 答案 B B B 14．(1) 核苷酸序列 RNA聚合酶识别和结合的位点，驱动基因转录出mRNA (2) 携带目的基因进入植物细胞并整合到植物细胞染色体DNA上 受体细胞 转化效率 对植物细胞产生毒害（或抑制植物细胞生长、导致植物组织死亡） (3) ⑤④②①③ 分裂 A (4) 叶片（或植株）发出绿色荧光 果实中高异黄酮含量显著高于普通番茄 15．(1) 基因突变 矮秆 叶绿素 (2)基因A和基因r位于一条染色体上，基因a和基因R位于另一条染色体上；由于基因型AArr的个体在幼苗期致死，将始终不能获得稳定遗传的矮秆植株 (3) 防止外来花粉干扰，保证自花授粉 无黄化致死且全为矮秆水稻 (4) DNA连接 P2和P3 迟缓 1 / 2 学科网（北京）股份有限公司 $ 抢分06 生物技术与工程 题型 考情分析 考向预测 发酵工程 2025浙江选考：醋生产的基本工艺流程；2026浙江选考：现代发酵工程；微生物培养 重点考查果酒、果醋以及泡菜的制作过程 植物组织培养 2025浙江选考：植物细胞培养和原生质体培养； 重点考查原生质体的制备以及组培的过程 动物细胞培养 2025浙江选考：排卵、受精以及观察受精卵发育；2026浙江选考：单克隆抗体技术 重点考查动物细胞培养的过程，以及单克隆抗体的制备 基因工程 2025浙江选考：PCR和电泳；2026浙江选考：基因工程的步骤 重点考查限制酶的选择，PCR相关知识，引物的设计以及应用 基因工程的安全与伦理问题 2025浙江选考：生物技术安全和伦理问题 重点考查生物技术的安全和伦理 押题1 发酵工程 1．（2026·浙江·二模）白酒生产时常用国标法检测样品中的沙门氏杆菌数目。当样品中积累了过多乙醇、乳酸及抗菌肽等抑菌物质时，会干扰检测。科研人员在此基础上优化检测方法，大大提升检出率，两种方法如下图所示。下列叙述正确的是（　　） 注：BPW主要成分为蛋白胨、磷酸盐缓冲盐、氯化钠、水等。 A．取样后直接用血细胞计数板在显微镜下计数活菌 B．可采用划线法或稀释涂布法将待测液接种至选择培养基 C．优化法中增加BPW用量的主要目的是提供更多营养物质 D．BPW培养液中的蛋白胨可为沙门氏杆菌提供碳源、氮源 （2026·浙江杭州·二模）阅读下列材料，回答下列小题： 奶酒是游牧民族传统食品，以奶为原料经乳酸菌和酵母菌发酵，发酵时经马背颠簸，风味独特。科研人员用山羊奶、多菌种混合发酵，打造营养风味俱佳的羊奶酒。 2．下列关于奶酒形成的过程，叙述正确的是（    ） A．乳酸菌和酵母菌的代谢类型相同 B．马背颠簸为发酵过程提供充足氧气 C．乳酸菌发酵时产生ATP的场所为线粒体 D．酵母菌发酵产生酒精的场所为细胞质基质 3．下列关于羊奶酒的研究，叙述错误的是（    ） A．可在发酵前向山羊奶额外添加白砂糖以提高酒精产量 B．发酵时可搅拌发酵物以模拟奶酒在马背上的颠簸过程 C．发酵结束后可通过离心、沉淀提高羊奶酒的酒精浓度 D．不同种类和比例的乳酸菌和酵母菌会影响奶酒的风味 4．（2026·浙江嘉兴·二模）饮用水卫生标准规定总菌数小于100个/mL。下列检测方法合理的是（　　） A．将水样滴加到血细胞计数板上，在显微镜下计数 B．取一定量水样过滤，将滤膜贴在平板培养基上，培养后计数 C．用接种环蘸取一定量的水样，划线到平板培养基上，培养后计数 D．对水样梯度稀释，各取0.1mL稀释液涂布到平板培养基上，培养后计数 项目 酵母菌 醋酸菌 乳酸菌 生物学 分类 真核生物 原核生物 原核生物 代谢 类型 异养兼性 厌氧型 异养需氧型 异养厌氧型 发酵 条件 前期需氧， 后期不需氧 一直需氧 无氧 生长适 宜温度 18～30 ℃ 30～35 ℃ 室温 原理 酵母菌在无氧条件下将葡萄糖氧化成乙醇 氧气、糖源都充足时，醋酸菌将糖分解成乙酸；缺少糖源时，醋酸菌将乙醇转化为乙醛，再将乙醛变为乙酸 乳酸菌在无氧条件下将葡萄糖转化为乳酸 押题2 植物组织培养 1．（2026·浙江·二模）人参作为名贵中药材，素有“百草之王”的美誉，其主要活性成分为人参皂苷。药用参主要依赖人工栽培，不仅生长周期漫长，还易受病虫害侵扰。为解决这些问题，科研人员制定了研究方案，过程如图所示。下列叙述正确的是（　　） A．过程②可用相应的酶处理以除去细胞间隙中的蛋白质 B．高浓度的PEG对细胞有毒性，过程③后可向体系中加入无菌水进行稀释 C．杂种细胞经⑤⑥过程形成三倍体杂种植株体现了植物细胞全能性 D．为获得次生代谢产物人参皂苷，可对高产细胞进行液体悬浮培养 2．（2026·浙江·二模）斛生物碱是铁皮石斛的次生代谢产物，具有抗炎镇痛、神经保护、镇静调压的作用，但其在铁皮石斛中含量偏低。下图是利用植物细胞培养技术大量生产石斛生物碱的流程。下列叙述错误的是（    ） A．此项技术依据的原理是细胞增殖 B．过程①需对铁皮石斛幼茎进行消毒，以防止杂菌污染 C．过程②是脱分化过程，细胞发生基因的选择性表达 D．为了获得石斛生物碱，过程④要先把细胞放在清水中进行破碎处理 3．（2026·浙江·二模）植物甲抗旱、抗病性强，植物乙分蘖能力强、结实性好。科研人员通过植物体细胞杂交技术培育出兼有甲、乙优良性状的植物丙，过程如图所示。下列叙述错误的是（　　） A．过程①中酶处理的时间差异，原因可能是两种亲本的细胞壁结构有差异 B．过程②中可采用电刺激、离心、振荡和PEG等方法诱导原生质体融合 C．过程③融合的原生质体再生出新的细胞壁就形成了杂种细胞 D．过程④和⑤的培养基中均需要添加生长素类和细胞分裂素类物质 押题3 动物细胞培养 1．（2026·浙江·二模）抗原表位是位于抗原表面决定抗原特异性的特殊化学基团，一种抗原表位只能与T细胞或B细胞表面一种受体结合，刺激机体产生一种抗体。如图为利用具有三种抗原表位的抗原制备单抗的过程，下列说法正确的是（　　） A．用胰蛋白酶或胃蛋白酶处理脾脏获得B细胞悬液 B．培养杂交瘤细胞需定期更换培养液以保证无菌环境 C．经选择培养基筛选所得的杂交瘤细胞群至少产生3种抗体 D．该抗原制备的单克隆抗体的特异性与传统方式制备的一样高 2．（2026·浙江绍兴·二模）肿瘤细胞的表面通常存在过量的受体EGFR，而CD3则是T细胞表面的标志性抗原。根据图示流程可制备双特异性单克隆抗体。细胞甲只有一条DNA合成途径（X途径），细胞乙和细胞丙有两条DNA合成途径（X、Y途径）。下列叙述正确的是（    ） A．双特异性抗体能够同时结合肿瘤细胞和T细胞 B．过程①和③从骨髓中获取的细胞需用胰蛋白酶分散成单细胞 C．过程②和④中使用能阻止X途径的选择培养基就能筛选出目标细胞 D．体外培养双杂交瘤细胞时需使用CO2培养箱以刺激细胞呼吸 3．（2025·浙江杭州·一模）人正常乳腺细胞与人乳腺癌细胞表面有部分相同的膜蛋白。科研人员设计如图所示流程，生产针对人乳腺癌细胞的单克隆抗体。下列叙述错误的是（    ) A．图中多次免疫小鼠产生抗体的过程属于体液免疫 B．该实验也可用于检测人乳腺癌活细胞内的特殊抗原 C．过程①从小鼠体内能分离得到多种针对人正常乳腺细胞的抗体 D．过程②需对杂交瘤细胞逐步稀释，使多孔培养板每个孔尽量只接种一个细胞 押题4 基因工程 1．（2026·浙江·二模）赖氨酸是动物的必需氨基酸。由于反馈抑制的存在，天然谷物饲料中赖氨酸含量较低。研究人员通过同源重组技术，将已解除反馈抑制的L基因导入受体菌，旨在构建高产赖氨酸的工程菌株作为饲料添加剂，图1为同源重组的构建机制。回答下列问题： 注：图1中同源重组是碱基序列基本相同的DNA区段通过配对、链断裂和再连接而产生片段交换的过程；图2中引物R1、F3的a、b片段分别与L基因两端互补配对。 具体实施过程： (1)获取L基因：以谷氨酸棒状杆菌的L基因的mRNA为模板，在______酶的催化下合成______并用PCR进行扩增。 (2)构建基因表达载体： ①用图2中的引物R1+a、F1组合扩增A片段后，得到的绝大部分DNA片段是下列选项中的______。 ②再用F3+b、R3为引物扩增B片段，接着将大量L基因和扩增得到A、B片段置于PCR反应体系中进行扩增，得到片段A-L-B（200bp+2100bp+200bp）; ③利用______和______酶将A-L-B片段插入质粒形成基因表达载体。 (3)将L基因导入受体菌：将基因表达载体导入用______处理后的受体菌，利用同源重组原理实现基因替换。 (4)L基因的检测与鉴定： ①研究人员选用图1中的______（A．F1和R3    B．F1和R4    C．F4和R2    D．F4和R4）的引物组合进行PCR，得到的PCR扩增产物经______后，若在凝胶中出现1条2300bp的条带，则证明受体菌株成功发生同源重组。 ②将重组菌株接种到含______的LB固体培养基中培养，能正常生长说明L基因成功解除了赖氨酸反馈抑制。 (5)微生物培养与产物测定：将野生型菌株XH0和重组菌株XH1均接种到______培养基中进行扩大培养，定时测定发酵液中的L-赖氨酸含量和OD562（菌体密度相对值）。实验结果（图3）显示，与野生型菌株XH0相比，重组菌株XH1______，说明已成功构建高产赖氨酸的工程菌株。 2．（2026·浙江·二模）甜味蛋白具有高甜度、低热量、安全性高等优点，并且具有一定的营养价值。科研人员将西非竹芋甜味蛋白基因（G基因）转入普通玉米细胞中，培育出了超量表达G蛋白的转基因高甜玉米新品种，提高了玉米的商品价值。在超量表达G基因载体的构建中，所用DNA片段和Ti质粒及酶切位点如图1、2所示。 (1)强启动子是一段特殊序列的DNA片段，能被RNA聚合酶识别并驱动基因持续转录。据图1分析，G基因模板链的________（填“5’”或“3’”）端位于图中的M端。利用PCR技术扩增目的基因时，为确保目的基因与Ti质粒正确连接，需要在图1中左侧和右侧引物的5’端分别添加限制酶________的识别序列。若在PCR反应体系中只加入1个目的DNA片段，经过30次循环，共有________个引物参与目的DNA片段的合成。 (2)通常利用________处理农杆菌，以利于重组质粒导入。转化后的农杆菌先在液体培养基中进行扩大培养，再涂布接种到含抗生素的培养基进行筛选，涂布接种正确的无菌操作流程是________（编号排序）。（①灼烧涂布器    ②在酒精灯火焰旁涂布    ③培养基高压蒸汽灭菌    ④置于超净工作台操作    ⑤在酒精灯火焰旁倒平板） (3)将农杆菌与玉米细胞共同培养完成转化。为了筛选转化成功的玉米细胞，需要在培养基中添加抗生素的种类是卡那霉素，不选羧苄青霉素的原因是________。选择转化成功的玉米细胞进行植物组织培养，芽诱导期需在培养基中添加的植物激素是________。 (4)为鉴定G基因是否成功插入到特定位点，针对插入位点的上下游设计了引物1、2，针对G基因自身序列设计了引物3、4，各引物的位置如图3所示。提取待测样品1、2、3的DNA用引物________进行PCR并电泳，结果如图4所示，加样孔________（填编号）对应的个体是野生型玉米。 (5)简并PCR可以检测复杂样本中低丰度转基因核酸，对转基因作物风险防控至关重要。简并引物可与多种相似序列结合，其简并度为简并核苷酸代码对应的碱基种类数相乘得到的。若某引物序列为5'-AYGNYCGTTYANATYGGT-3'（已知简并核苷酸代码Y=C/T；N=A/C/G/T)，则其简并度为________。针对高度保守区域，需要________（填“降低”或“升高”）引物的简并度以提高特异性。 3．（2026·浙江宁波·二模）乳糖不耐受是因人体乳糖酶分泌不足，无法完全分解牛奶中乳糖而引发的非感染性腹泻，我国约有1/3的成年人对乳糖不耐受。回答下列问题： (1)为减轻乳糖不耐受症状，可用乳酸菌将牛奶中的乳糖分解为________，使pH降低，蛋白质凝固形成酸奶。自制酸奶时，加入少量市售酸奶的目的是______________。 (2)常规低乳糖牛奶生产成本高、效率低，科学家利用外源嗜热菌糖苷酶基因（LacS），结合基因工程与体细胞核移植技术，培育出可在乳腺中特异性表达耐高温乳糖酶的转基因克隆奶牛，其生产的牛奶经加热消毒可实现乳糖高效降解。其基本流程为： ①目的基因的筛选与获取。为使LacS基因在奶牛细胞中高效表达，科学家优化氨基酸序列，遵循________（遗传信息流动的规律）对该基因序列进行改造，再通过________（方法）获得目的基因。 ②构建乳腺特异性表达载体。图1为所用质粒的示意图，图2为目的基因片段，不同限制酶的识别序列及切割位点如表所示。为了将目的基因正确插入到质粒中，需在引物的5′端添加相应限制酶识别序列，a端引物的部分序列为：5′-________-3′（写出10个碱基）。 限制酶名称 BamH I EcoR I Pst I Sal I 识别序列及切割位点 ③表达载体的导入及核移植。取性别为________的牛胚胎成纤维细胞导入表达载体，用培养液将细胞悬液________后，将单个细胞接种于96孔板中进行________培养，筛选含有目的基因的成纤维细胞作为核供体细胞；从牛卵巢获取卵母细胞，体外培养至MII期，经________处理后作为受体细胞。 ④重组细胞的体外培养及胚胎移植。核移植获得的重构胚还需经过________，才能完成细胞分裂和发育进程，经体外培养后再移植到________的代孕母牛子宫。 ⑤目的基因的检测与鉴定。提取初生小牛的基因组DNA，利用________技术鉴定是否存在目的基因。与在牛奶中直接加入乳糖酶相比，利用奶牛乳腺生物反应器生产低乳糖牛奶的优点有_________________（答出2点即可）。 1、基因工程的基本步骤 操作步骤 关键操作细节 核心目的 易错点/难点提醒 目的基因的获取 1. 从基因文库中筛选；2. PCR扩增（需引物、Taq酶、dNTP）；3. 人工合成（适用于短基因、已知序列） 获取完整、可表达的目的基因，为后续操作提供基础 1. PCR需热稳定DNA聚合酶，引物不能互补；2. 基因组文库≠部分基因文库，前者含全部基因 基因表达载体的构建 1. 用相同/互补限制酶切割目的基因和载体；2. DNA连接酶连接（黏性末端用E·coli酶，平末端用T4酶）；3. 构建含启动子、终止子、标记基因的重组载体 使目的基因在受体细胞中稳定存在、自主复制，且能表达和发挥作用 1. 核心步骤，直接决定实验成败；2. 需避免质粒自连、目的基因反向连接（可采用双酶切） 将目的基因导入受体细胞 1. 植物：农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法；2. 动物：显微注射法；3. 微生物：Ca²⁺处理使细胞处于感受态 让目的基因进入受体细胞，完成扩增和后续表达的前提 1. 导入成功≠目的基因表达；2. 不同受体细胞选择对应方法，感受态细胞需新鲜制备 目的基因的检测与鉴定 1. 分子水平：DNA分子杂交（检测导入）、分子杂交（检测转录）、抗原-抗体杂交（检测翻译）；2. 个体水平：性状观察、抗逆性检测等 确认目的基因是否成功导入、转录和表达，筛选出符合要求的受体细胞/个体 1. 三步分子检测层层递进，缺一不可；2. 个体水平鉴定是最终验证手段，需排除干扰性状 2、PCR引物的设计 核心设计要点 具体要求 关键说明 引物长度 长度控制在18-25个碱基，最常用20-22个；不要短于18个或长于25个 引物太长或太短，都会影响PCR扩增效果，要么结合不精准，要么扩增效率低 引物特异性 引物序列只能和目标片段结合，不能和其他无关片段结合 特异性差会导致扩增出无关片段，干扰目标结果，无法得到想要的DNA片段 特殊修饰 可根据需求在引物一端添加标记（如荧光），另一端不能修改 修改引物的扩增起始端（3’端），会直接导致PCR无法延伸，扩增失败 引物方向 一对引物要分别结合目标片段的两端，方向正确才能扩增出目标长度的DNA 引物方向颠倒，无法扩增出目标片段，整个PCR实验都会失败 押题5 基因工程的安全与伦理 1．（2026·浙江·二模）“AI辅助试管婴儿胚胎筛选”技术可对胚胎基因进行检测分析。某些生殖中心利用该技术进行非医疗目的胚胎筛选，引发广泛伦理争议。下列叙述错误的是（　　） A．应禁止使用该技术调控人群的性别比例 B．非医疗目的胚胎筛选违背了生命伦理的规范 C．经过父母双方知情同意，即可开展胚胎筛选 D．由于人体某些性状受多基因调控，胚胎筛选存在不确定性 2．（2026·浙江金华·模拟预测）生物工程技术在给我们带来便利的同时，相关产品的安全性问题也引起了人们的重视。下列叙述错误的是（　　） A．转基因植物的广泛种植不会影响生态系统的稳定 B．转基因品种与天然品种可能存在营养成分上的差异 C．社会公众在购买相关产品时应享有知情权 D．世界范围内应全面禁止生物武器 3．（2026·浙江·二模）生物武器的使用严重违背国际人道主义精神。根据《禁止生物武器公约》及我国政府的立场，下列叙述错误的是（　　） A．国际社会大多数国家已达成了“彻底销毁生物武器”的共识 B．更新和储备疫苗库是预防生物武器威胁的重要策略之一 C．为应对潜在威胁，我国可在特殊情况下少量生产并储存生物武器 D．我国政府反对生物武器及其技术和设备向其他国家或组织扩散 明确基因工程的产物必然存在一些安全和伦理问题 1．（2026·浙江绍兴·二模）黄酒酿造的发酵工艺流程如下图。下列叙述正确的是（    ） A．酒曲和黄酒高活性干酵母均为单一菌种 B．蒸煮不仅能杀死杂菌，还促进淀粉糊化以便于菌种利用 C．主发酵时密闭以提高酵母数量，后发酵时通气以提高酒精产量 D．压榨、滤清的目的是去除代谢废物，实现产物的分离和提纯 2．（2026·浙江·模拟预测）某工厂用液态法酿造黄酒的工艺流程如图，其中糯米需经蒸煮、糖化后进行混合菌种发酵。下列关于该工艺的分析，错误的是（    ） A．温度、pH、酶浓度等会影响过程①②的酶促反应 B．过程②中的糖化酶可使用米曲霉等霉菌替代 C．过程③初期通入无菌空气，可提高黄酒乙醇含量 D．加入植物乳杆菌联合发酵有利于黄酒风味的形成 （2025·浙江嘉兴·一模）阅读下列材料，完成下面小题。 酱油生产四个环节是原料制备、制曲、酶解和发酵。原料经破碎、蒸煮完成制备。制曲是让曲霉在固体原料上产生大量菌丝体。酶解是原料在酶的作用下水解。发酵阶段，鲁氏酵母和嗜盐片球菌分别产生乙醇和乳酸等物质。鲁氏酵母选育流程如下。 3．关于酱油生产流程的叙述，正确的是（    ） A．原料蒸煮可以杀灭所有微生物 B．发酵阶段以厌氧发酵为主 C．酱油生产属于单一菌种发酵 D．酱油生产全过程为液体发酵 4．为了获得既能在苛刻发酵环境条件下生存并发挥作用，又能稳定遗传的鲁氏酵母菌株。下列叙述错误的是（    ） A．可用物理、化学的方法对菌种进行诱变 B．选育的目标菌株应耐盐、耐酸、耐酒精 C．用稀释涂布法实现目标菌种的分离和纯化 D．进行连续传代培养时需在较强选择压力下 5．（2026·浙江宁波·二模）下图展示了植物原生质体制备、分离和检测的过程。下列叙述错误的是（　　） A．①添加相应的酶液以去除细胞壁 B．②将材料放入无菌水中以彻底清洗 C．原生质体密度介于甘露醇和蔗糖溶液密度之间 D．台盼蓝检测后可选择未被染成蓝色的原生质体继续实验 6．（2025·浙江·一模）类柠檬苦素是山金柑的次生代谢产物，具有抗氧化、抗癌等作用，早花柠檬富含维生素C．现利用山金柑愈伤组织细胞（2N=18，细胞核DNA失活）和早花柠檬叶肉细胞（2N=18，细胞质DNA失活）进行体细胞杂交，得到兼具两者优良特性的杂种植株。下列说法正确的是（　　） A．该杂种植株是经过植物体细胞杂交技术形成的二倍体植株 B．可使用灭活的病毒促进杂种细胞原生质体的融合及新细胞壁的形成 C．维生素C的大量合成可能与早花柠檬的线粒体DNA有关 D．类柠檬苦素能维持山金柑的正常代谢，杂种植株也能分泌该代谢产物 7．（2025·浙江·一模）甲植株具有由核基因控制的多种优良性状，另一远缘植物乙细胞质中存在抗除草剂基因，为获得兼具有甲乙优良性状的品种，科学家进行如下图实验操作。下列叙述错误的是（　　） A．控制杂种植株优良性状的基因均可通过花粉遗传给后代 B．利用顶芽细胞分裂能力强、病毒少的特点，易获得脱毒杂种苗 C．紫外线照射乙顶芽细胞需控制强度和时间，避免过度照射破坏细胞质中的基因 D．制备原生质体的酶解过程需在较高渗溶液中进行，防止原生质体吸水涨破 8．（2026·浙江·二模）现代生物工程的操作常常涉及以下流程，下列叙述正确的是（    ） A．若图为试管动物的培育过程，从卵巢中获取的卵母细胞②可以直接与①融合形成③ B．若图为单克隆抗体的制备过程，形成③常用灭活的病毒直接处理①②两种细胞 C．若图为克隆羊多莉的培育过程，形成的③直接植入母体子宫进行培养可得到④ D．若图为细菌细胞杂交过程，①②两种细胞需要先用纤维素酶和果胶酶处理 9．（2025·吉林白城·三模）某病毒对动物养殖业危害十分严重。我国学者拟以该病毒外壳蛋白A为抗原来制备单克隆抗体，以期快速检测该病毒，其主要技术路线如图所示。下列相关说法正确的是（    ） A．与小鼠骨髓瘤细胞融合前，已免疫的B细胞不需要通过原代培养扩大细胞数量 B．诱导已免疫的B细胞和小鼠骨髓瘤细胞融合，主要是利用细胞膜的功能特点 C．在杂交瘤细胞筛选过程中，发生融合的细胞都可以在选择培养基上正常增殖 D．将待筛选抗体与该病毒基因A进行杂交，呈阳性的就是所需的抗体 10．（2025·浙江绍兴·模拟预测）羊乳因其营养成分最接近人乳，且不含牛乳中的某些可致过敏的异性蛋白质而受到消费者的青睐，但市场上存在着用牛乳冒充羊乳欺骗消费者的现象。对此，研究人员开发制备了羊乳asl-酪蛋白单克隆抗体检测试剂盒。下图为制备asl-酪蛋白单克隆抗体的示意图，1~5代表相关过程。 下列叙述正确的是（　　） A．为制备单克隆抗体，应确保图中两处小鼠注射同种抗原 B．过程2可以用灭活的病毒处理 C．过程3表示用HAT培养基筛选得到单一的杂交瘤细胞 D．过程5可以从小鼠血浆中分离得到特异性强的单克隆抗体 11．（2026·浙江·模拟预测）生物技术在造福人类社会的同时也可能带来安全与伦理问题。下列叙述正确的是（    ） A．不允许、不支持任何生物的生殖性克隆 B．反对生物武器及其相关技术和设备扩散 C．全球大规模推广转基因粮食作物种植 D．为社会健康发展应全面禁止试管婴儿技术 12．（2025·浙江·一模）一场围绕“生物技术应用的伦理与风险”的中学辩论赛中，提出了以下观点，请你从专业角度判断哪一项说法是错误的（    ） A．反对设计试管婴儿的原因之一是有人滥用此技术选择性设计婴儿 B．种植转基因植物可能因遗传漂变而影响野生植物的遗传多样性 C．生物武器的扩散可能引发大规模疫情，故战争中患病士兵的衣物等需及时焚烧 D．治疗性克隆对解决供体器官缺乏和器官移植后的免疫排斥反应具有重要意义 13．（2025·浙江嘉兴·一模）下列关于生物武器的叙述，正确的是（    ） A．它是利用致病微生物达到战争目的的武器 B．我国坚决支持禁止生物武器的生产和扩散 C．分子杂交技术不能用于排查生物战剂 D．制备疫苗是防御生物武器的唯一手段 14．（2026·浙江绍兴·二模）高异黄酮是具有多种生物活性的类黄酮化合物，其在番茄等作物中含量较低。紫花苜蓿中的ChoMT基因是高异黄酮合成的关键基因。研究人员以紫花苜蓿的ChoMT为目的基因构建的重组表达载体关键部分如下图所示，并转入番茄植株中，培育得到高异黄酮含量丰富的转基因番茄果实。    注：GFP是绿色荧光蛋白基因，KanR是卡那霉素抗性基因。LB和RB表示左右两边界。 回答下列问题： (1)通过检索基因数据库可获得紫花苜蓿的ChoMT基因的__________，经化学方法合成获得ChoMT基因。构建表达载体需加入相应启动子，启动子的作用是__________。 (2)农杆菌转化法是将目的基因导入植物细胞最常用的方法。该方法中Ti质粒上的关键结构是T-DNA，其作用是__________。图中KanR是常用的标记基因，可用于筛选含有目的基因的__________。制备农杆菌侵染液时，将离心后的菌体用培养液稀释至适宜浓度，浓度过低会影响__________，浓度过高会导致__________。 (3)转基因番茄幼苗培育过程中，包括如下图所示的五个不同阶段①～⑤。    上述五个阶段按照培育过程的先后顺序排列，应为：__________。产生④的过程，细胞主要发生了脱分化和__________。与②的培养过程相比，①的培养过程对培养基的要求有__________。 A．提高生长素含量B．提高细胞分裂素含量C．降低营养物质的浓度D．提高营养物质的浓度 (4)研究人员对获得的转基因番茄植株进行鉴定。将番茄植株放在450～490nm波长光下照射，当观察到__________，可确认为转基因番茄植株。再对转基因番茄的果实做进一步鉴定，鉴定结果是__________时，表明转基因番茄的培育取得成功。 15．（2026·浙江绍兴·二模）水稻为雌雄同花植物，矮秆水稻具有抗倒伏、高产等优点。为培育矮秆品种，研究人员将一段DNA序列（Ds）定向插入到野生型水稻的某基因内部，获得一矮秆突变株。以该突变株为亲本自交获得F1，F1部分幼苗发生叶片黄化而死亡；存活植株中既有矮秆水稻也有正常株高水稻（野生型）。回答下列问题： (1)Ds插入某基因引起水稻发生矮秆变异，这一变异来源属于__________。矮秆和正常株高这一对相对性状中，显性性状为__________。F1中黄化水稻的出现可能是另一个Ds插入到亲本相关基因，阻碍了__________（物质）的合成，使得叶片黄化。 (2)欲培养能稳定遗传的矮秆水稻品种，先要确定上述株高相关基因A（a）与叶色相关基因R（r）是否独立遗传。研究人员对F1存活植株的表型及比例进行了统计，若结果为矮秆水稻∶正常水稻＝2∶1，则说明__________，这种情况下将难以利用该矮杆突变株繁育获得目标品种。请用遗传图解和必要的文字进行解释。 (3)若A（a）基因与R（r）基因独立遗传，可从F1植株中选择矮秆水稻单独种植，并在开花前进行套袋处理，套袋的目的是__________。分别收获每株水稻上种子进行单独种植，长成的所有个体为一个株系。当株系表型为__________，即为所需的目标品种。 (4)为确定Ds在染色体上的具体插入位置，研究人员提取能稳定遗传的矮秆突变株的DNA，用某种限制酶处理，酶切位点如下图，其中P1、P2、P3、P4代表4种PCR扩增引物。 经限制酶酶切后，利用__________酶将其连接成环状，并以此为模板，选择引物__________来扩增未知序列。后续通过测序比对发现，Ds插入的目标基因能编码赤霉素信号转导途径的关键蛋白，Ds的插入导致该关键蛋白失活。据此，可直接在种子阶段筛选出萌发__________（填：“迟缓”或“提早”）的种子来获得矮秆突变株。 1 / 2 学科网（北京）股份有限公司 $ 抢分06 生物技术与工程 题型 考情分析 考向预测 发酵工程 2025浙江选考：醋生产的基本工艺流程；2026浙江选考：现代发酵工程；微生物培养 重点考查果酒、果醋以及泡菜的制作过程 植物组织培养 2025浙江选考：植物细胞培养和原生质体培养； 重点考查原生质体的制备以及组培的过程 动物细胞培养 2025浙江选考：排卵、受精以及观察受精卵发育；2026浙江选考：单克隆抗体技术 重点考查动物细胞培养的过程，以及单克隆抗体的制备 基因工程 2025浙江选考：PCR和电泳；2026浙江选考：基因工程的步骤 重点考查限制酶的选择，PCR相关知识，引物的设计以及应用 基因工程的安全与伦理问题 2025浙江选考：生物技术安全和伦理问题 重点考查生物技术的安全和伦理 押题1 发酵工程 1．（2026·浙江·二模）白酒生产时常用国标法检测样品中的沙门氏杆菌数目。当样品中积累了过多乙醇、乳酸及抗菌肽等抑菌物质时，会干扰检测。科研人员在此基础上优化检测方法，大大提升检出率，两种方法如下图所示。下列叙述正确的是（　　） 注：BPW主要成分为蛋白胨、磷酸盐缓冲盐、氯化钠、水等。 A．取样后直接用血细胞计数板在显微镜下计数活菌 B．可采用划线法或稀释涂布法将待测液接种至选择培养基 C．优化法中增加BPW用量的主要目的是提供更多营养物质 D．BPW培养液中的蛋白胨可为沙门氏杆菌提供碳源、氮源 【答案】D 【详解】A、血细胞计数板在显微镜下计数不能区分死菌和活菌，无法直接统计活菌数目，A错误； B、平板划线法只能用于分离微生物，不能用于计数，要统计活菌数目只能用稀释涂布平板法，B错误； C、题干说明样品中原本过多的乙醇、乳酸、抗菌肽等抑菌物质会干扰检测，增加BPW用量的主要目的是稀释样品中的抑菌物质，降低其浓度，减小抑菌作用，不是为了提供更多营养，C错误； D、蛋白胨含有多种有机物，可为微生物（沙门氏杆菌）提供碳源、氮源，D正确。 （2026·浙江杭州·二模）阅读下列材料，回答下列小题： 奶酒是游牧民族传统食品，以奶为原料经乳酸菌和酵母菌发酵，发酵时经马背颠簸，风味独特。科研人员用山羊奶、多菌种混合发酵，打造营养风味俱佳的羊奶酒。 2．下列关于奶酒形成的过程，叙述正确的是（    ） A．乳酸菌和酵母菌的代谢类型相同 B．马背颠簸为发酵过程提供充足氧气 C．乳酸菌发酵时产生ATP的场所为线粒体 D．酵母菌发酵产生酒精的场所为细胞质基质 3．下列关于羊奶酒的研究，叙述错误的是（    ） A．可在发酵前向山羊奶额外添加白砂糖以提高酒精产量 B．发酵时可搅拌发酵物以模拟奶酒在马背上的颠簸过程 C．发酵结束后可通过离心、沉淀提高羊奶酒的酒精浓度 D．不同种类和比例的乳酸菌和酵母菌会影响奶酒的风味 【答案】2．D 3．C 【解析】2．A、乳酸菌代谢类型为异养厌氧型，酵母菌为异养兼性厌氧型，二者代谢类型不同，A错误； B、乳酸菌发酵、酵母菌产酒精的发酵过程均需要无氧环境，若提供充足氧气会抑制无氧发酵，B错误； C、乳酸菌是原核生物，不含线粒体，其产生ATP的场所为细胞质基质，C错误； D、酵母菌通过无氧呼吸产生酒精，无氧呼吸的全过程都在细胞质基质中进行，D正确。 3．A、白砂糖可作为酵母菌无氧呼吸的底物，额外添加白砂糖能增加反应原料，进而提高酒精产量，A正确； B、题干明确传统奶酒发酵时会经马背颠簸，搅拌发酵物可模拟该过程，B正确； C、离心、沉淀仅能去除发酵液中的固体杂质，无法提高酒精浓度，通常使用蒸馏的方法提高酒精浓度，C错误； D、不同种类、比例的乳酸菌和酵母菌代谢产物存在差异，会直接影响奶酒的风味，D正确。 4．（2026·浙江嘉兴·二模）饮用水卫生标准规定总菌数小于100个/mL。下列检测方法合理的是（　　） A．将水样滴加到血细胞计数板上，在显微镜下计数 B．取一定量水样过滤，将滤膜贴在平板培养基上，培养后计数 C．用接种环蘸取一定量的水样，划线到平板培养基上，培养后计数 D．对水样梯度稀释，各取0.1mL稀释液涂布到平板培养基上，培养后计数 【答案】B 【详解】A、血细胞计数板计数法为直接计数法，无法区分死菌和活菌，统计结果包含死菌不符合检测要求，且饮用水中微生物浓度极低，直接计数误差极大，A错误； B、滤膜法适用于微生物含量低的水样检测，将定量水样过滤后，微生物截留到滤膜上，再将滤膜贴在培养基上培养，统计菌落数即可计算原水样的活菌数，符合饮用水检测需求，B正确； C、平板划线法的功能是分离纯化微生物，无法准确定量接种的微生物量，不能用于计数，C错误； D、稀释涂布平板法适用于微生物浓度较高的样品，饮用水总菌数小于100个/mL，本身浓度极低，梯度稀释后很难得到菌落数处于合理计数范围（30~300个）的平板，无法准确计数，D错误。 项目 酵母菌 醋酸菌 乳酸菌 生物学 分类 真核生物 原核生物 原核生物 代谢 类型 异养兼性 厌氧型 异养需氧型 异养厌氧型 发酵 条件 前期需氧， 后期不需氧 一直需氧 无氧 生长适 宜温度 18～30 ℃ 30～35 ℃ 室温 原理 酵母菌在无氧条件下将葡萄糖氧化成乙醇 氧气、糖源都充足时，醋酸菌将糖分解成乙酸；缺少糖源时，醋酸菌将乙醇转化为乙醛，再将乙醛变为乙酸 乳酸菌在无氧条件下将葡萄糖转化为乳酸 押题2 植物组织培养 1．（2026·浙江·二模）人参作为名贵中药材，素有“百草之王”的美誉，其主要活性成分为人参皂苷。药用参主要依赖人工栽培，不仅生长周期漫长，还易受病虫害侵扰。为解决这些问题，科研人员制定了研究方案，过程如图所示。下列叙述正确的是（　　） A．过程②可用相应的酶处理以除去细胞间隙中的蛋白质 B．高浓度的PEG对细胞有毒性，过程③后可向体系中加入无菌水进行稀释 C．杂种细胞经⑤⑥过程形成三倍体杂种植株体现了植物细胞全能性 D．为获得次生代谢产物人参皂苷，可对高产细胞进行液体悬浮培养 【答案】D 【详解】A、过程②是去除植物细胞壁，细胞壁的主要成分是纤维素和果胶，因此需要用纤维素酶和果胶酶处理，A错误； B、PEG（聚乙二醇）是诱导原生质体融合的常用试剂，高浓度 PEG 确实对细胞有毒性。 但原生质体没有细胞壁，直接加入无菌水会导致原生质体吸水涨破，因此不能用无菌水稀释，而应使用等渗溶液（如甘露醇溶液）进行稀释和洗涤，B错误； C、植物细胞全能性的定义是：已分化的细胞，仍具有发育成完整个体的潜能。 ⑤是脱分化形成愈伤组织，⑥是再分化形成杂种植株，这个过程确实体现了细胞全能性。 但要注意：人参是 4n=48，胡萝卜是 2n=18，融合后的杂种细胞染色体数是 48+18=66，属于异源六倍体，C错误； D、人参皂苷是细胞的次生代谢产物，可以通过植物细胞培养来生产。 液体悬浮培养能让细胞与营养成分充分接触，细胞增殖快、代谢旺盛，更利于次生代谢产物的积累，是工业生产中常用的方法，D正确。 2．（2026·浙江·二模）斛生物碱是铁皮石斛的次生代谢产物，具有抗炎镇痛、神经保护、镇静调压的作用，但其在铁皮石斛中含量偏低。下图是利用植物细胞培养技术大量生产石斛生物碱的流程。下列叙述错误的是（    ） A．此项技术依据的原理是细胞增殖 B．过程①需对铁皮石斛幼茎进行消毒，以防止杂菌污染 C．过程②是脱分化过程，细胞发生基因的选择性表达 D．为了获得石斛生物碱，过程④要先把细胞放在清水中进行破碎处理 【答案】D 【详解】A、这项技术是植物细胞培养，原理是细胞增殖，通过细胞分裂增加细胞数量，从而获得更多代谢产物，A正确； B、过程①是获取外植体，需要对铁皮石斛幼茎进行消毒，避免杂菌污染培养物，B正确； C、过程②是脱分化，已经分化的细胞失去特有的结构和功能，这个过程存在基因的选择性表达，C正确； D、石斛生物碱是铁皮石斛细胞的次生代谢产物，但细胞有细胞壁，故只能通过研磨破碎，而不能用吸水胀破法，D错误。 3．（2026·浙江·二模）植物甲抗旱、抗病性强，植物乙分蘖能力强、结实性好。科研人员通过植物体细胞杂交技术培育出兼有甲、乙优良性状的植物丙，过程如图所示。下列叙述错误的是（　　） A．过程①中酶处理的时间差异，原因可能是两种亲本的细胞壁结构有差异 B．过程②中可采用电刺激、离心、振荡和PEG等方法诱导原生质体融合 C．过程③融合的原生质体再生出新的细胞壁就形成了杂种细胞 D．过程④和⑤的培养基中均需要添加生长素类和细胞分裂素类物质 【答案】C 【详解】A、据图可知，过程①表示去壁获取原生质体的过程，酶解是为了去除植物细胞的细胞壁，该过程酶处理的时间不同，说明两种亲本的细胞壁结构可能有差异，A正确； B、据图可知，过程②表示人工诱导原生质体融合，常用电融合法、离心法等物理方法和PEG等化学方法诱导原生质体融合，B正确； C、据图可知，过程③融合的原生质体再生出新的细胞壁说明原生质体融合成功，但未必都是杂种细胞，还需要进行筛选，C错误； D、据图可知，过程④表示脱分化形成愈伤组织，过程⑤表示再分化以及个体发育形成植株丙的过程。过程④脱分化和⑤再分化的培养基中均需要添加生长素和细胞分裂素，但在两个过程中比例不同，D正确。 故选C。 押题3 动物细胞培养 1．（2026·浙江·二模）抗原表位是位于抗原表面决定抗原特异性的特殊化学基团，一种抗原表位只能与T细胞或B细胞表面一种受体结合，刺激机体产生一种抗体。如图为利用具有三种抗原表位的抗原制备单抗的过程，下列说法正确的是（　　） A．用胰蛋白酶或胃蛋白酶处理脾脏获得B细胞悬液 B．培养杂交瘤细胞需定期更换培养液以保证无菌环境 C．经选择培养基筛选所得的杂交瘤细胞群至少产生3种抗体 D．该抗原制备的单克隆抗体的特异性与传统方式制备的一样高 【答案】C 【详解】A、脾脏中的组织块需要分散成单个细胞，通常使用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理。 胃蛋白酶的最适pH为酸性（约1.5~2.2），而细胞培养液的pH为中性（约7.2~7.4），胃蛋白酶在中性环境下会失活，无法发挥作用，A错误； B、培养分离出的B细胞时，由于培养过程中代谢废物的积累以及营养物质的消耗，因此需要定期更换培养液，即培养分离出的B细胞时，需定期更换培养液以保证无毒环境，B错误； C、第一步选择培养基筛选的是杂交瘤细胞（排除未融合的细胞、自身融合的细胞），但此时筛选出的杂交瘤细胞是 “混合群”： 由于该抗原有3种抗原表位，小鼠体内会产生3种不同的B淋巴细胞，分别针对表位1、表位2、表位3； 这些B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合后，形成的杂交瘤细胞也对应3种，分别产生针对不同表位的抗体。   因此，此时的杂交瘤细胞群至少能产生3种不同的抗体，后续还需进行抗体特异性检测，筛选出能产生单一目标抗体的杂交瘤细胞，C正确； D、传统方式制备的是多克隆抗体：血清中包含多种针对不同表位的抗体，特异性较差，易出现交叉反应； 单克隆抗体是由单一杂交瘤细胞克隆产生的，只针对抗原的一种特定表位，特异性远高于多克隆抗体，D错误。 2．（2026·浙江绍兴·二模）肿瘤细胞的表面通常存在过量的受体EGFR，而CD3则是T细胞表面的标志性抗原。根据图示流程可制备双特异性单克隆抗体。细胞甲只有一条DNA合成途径（X途径），细胞乙和细胞丙有两条DNA合成途径（X、Y途径）。下列叙述正确的是（    ） A．双特异性抗体能够同时结合肿瘤细胞和T细胞 B．过程①和③从骨髓中获取的细胞需用胰蛋白酶分散成单细胞 C．过程②和④中使用能阻止X途径的选择培养基就能筛选出目标细胞 D．体外培养双杂交瘤细胞时需使用CO2培养箱以刺激细胞呼吸 【答案】A 【详解】A、由题意和题图可知，该双特异性抗体可分别结合肿瘤细胞表面的EGFR、T细胞表面的CD3，因此能同时结合肿瘤细胞和T细胞，A正确； B、过程①③是从小鼠脾脏中获取已免疫的B淋巴细胞，不是骨髓，B错误； C、阻止X途径的选择培养基仅能筛选出融合的杂交细胞，还需要通过克隆化培养和抗体检测才能筛选出能产生所需特异性抗体的目标细胞，C错误； D、体外培养时，CO2培养箱中CO2的作用是维持培养液的pH，不是刺激细胞呼吸，D错误。 3．（2025·浙江杭州·一模）人正常乳腺细胞与人乳腺癌细胞表面有部分相同的膜蛋白。科研人员设计如图所示流程，生产针对人乳腺癌细胞的单克隆抗体。下列叙述错误的是（    ) A．图中多次免疫小鼠产生抗体的过程属于体液免疫 B．该实验也可用于检测人乳腺癌活细胞内的特殊抗原 C．过程①从小鼠体内能分离得到多种针对人正常乳腺细胞的抗体 D．过程②需对杂交瘤细胞逐步稀释，使多孔培养板每个孔尽量只接种一个细胞 【答案】B 【详解】A、体液免疫的核心是B细胞增殖分化为浆细胞，浆细胞产生抗体；多次免疫小鼠诱导其产生抗体的过程，属于体液免疫，A正确； B、该实验获得的单克隆抗体经过了人乳腺癌细胞表面抗原的诱导，因而可用于检测人乳腺癌活细胞表面的特殊抗原，B错误； C、人正常乳腺细胞表面有多种膜蛋白，多次免疫小鼠后，小鼠体内的B细胞会针对这些不同膜蛋白产生多种抗体，因此过程①能分离得到多种针对人正常乳腺细胞的抗体，C正确； D、过程②是杂交瘤细胞的克隆化培养，需通过“逐步稀释法”使每个培养孔尽量只接种一个细胞，保证每个孔的杂交瘤细胞来自单个细胞的增殖，从而获得能产生单一抗体的杂交瘤细胞株，D正确。 故选B。 押题4 基因工程 1．（2026·浙江·二模）赖氨酸是动物的必需氨基酸。由于反馈抑制的存在，天然谷物饲料中赖氨酸含量较低。研究人员通过同源重组技术，将已解除反馈抑制的L基因导入受体菌，旨在构建高产赖氨酸的工程菌株作为饲料添加剂，图1为同源重组的构建机制。回答下列问题： 注：图1中同源重组是碱基序列基本相同的DNA区段通过配对、链断裂和再连接而产生片段交换的过程；图2中引物R1、F3的a、b片段分别与L基因两端互补配对。 具体实施过程： (1)获取L基因：以谷氨酸棒状杆菌的L基因的mRNA为模板，在______酶的催化下合成______并用PCR进行扩增。 (2)构建基因表达载体： ①用图2中的引物R1+a、F1组合扩增A片段后，得到的绝大部分DNA片段是下列选项中的______。 ②再用F3+b、R3为引物扩增B片段，接着将大量L基因和扩增得到A、B片段置于PCR反应体系中进行扩增，得到片段A-L-B（200bp+2100bp+200bp）; ③利用______和______酶将A-L-B片段插入质粒形成基因表达载体。 (3)将L基因导入受体菌：将基因表达载体导入用______处理后的受体菌，利用同源重组原理实现基因替换。 (4)L基因的检测与鉴定： ①研究人员选用图1中的______（A．F1和R3    B．F1和R4    C．F4和R2    D．F4和R4）的引物组合进行PCR，得到的PCR扩增产物经______后，若在凝胶中出现1条2300bp的条带，则证明受体菌株成功发生同源重组。 ②将重组菌株接种到含______的LB固体培养基中培养，能正常生长说明L基因成功解除了赖氨酸反馈抑制。 (5)微生物培养与产物测定：将野生型菌株XH0和重组菌株XH1均接种到______培养基中进行扩大培养，定时测定发酵液中的L-赖氨酸含量和OD562（菌体密度相对值）。实验结果（图3）显示，与野生型菌株XH0相比，重组菌株XH1______，说明已成功构建高产赖氨酸的工程菌株。 【答案】(1) 逆转录 cDNA (2) 丁 限制酶 DNA连接酶 (3)Ca2+ (4) B 琼脂糖凝胶电泳（电泳） 高浓度赖氨酸 (5) 液体 大量合成赖氨酸但生长并未受到明显抑制 【详解】（1）获取L基因：以谷氨酸棒状杆菌的L基因的mRNA为模板，在逆转录酶的催化下合成cDNA并用PCR进行扩增，进而获得更多的L基因。 （2）①用图2中的引物R1+a、F1组合扩增A片段后，得到的绝大部分是引物之间的序列，即得到的DNA片段是下列选项中的丁。 ③利用限制酶和DNA连接酶将A-L-B片段插入质粒形成基因表达载体，因为二者是基因的剪刀和针线。 （3）将基因表达载体导入用Ca2+处理后的受体菌，这样可以提高受体菌的转化率，而后利用同源重组原理实现基因替换。 （4）①研究人员选用图1中的F1和R4的引物组合进行PCR，因为F1能与A片段互补，R4能与L基因的右侧配对，因此这两种引物可以扩增出A片段和L基因，这一段的长度为200bp+2100bp=2300bp，因此，得到的PCR扩增产物经琼脂糖凝胶电泳（电泳）后，若在凝胶中出现1条2300bp的条带，则证明受体菌株成功发生同源重组。 ②将重组菌株接种到含高浓度赖氨酸的LB固体培养基中培养，能正常生长说明L基因成功解除了赖氨酸反馈抑制，该检测属于个体生物学鉴定的方法。 （5）将野生型菌株XH0和重组菌株XH1均接种到液体培养基中进行扩大培养，液体培养基能使菌种和培养液充分接触，保证菌种获取足够的营养，定时测定发酵液中的L-赖氨酸含量和OD562（菌体密度相对值）。实验结果（图3）显示，与野生型菌株XH0相比，重组菌株XH1能大量合成赖氨酸，且菌体数量基本不受影响，即重组菌株XH1可大量合成赖氨酸但生长并未受到明显抑制，说明已成功构建高产赖氨酸的工程菌株。 2．（2026·浙江·二模）甜味蛋白具有高甜度、低热量、安全性高等优点，并且具有一定的营养价值。科研人员将西非竹芋甜味蛋白基因（G基因）转入普通玉米细胞中，培育出了超量表达G蛋白的转基因高甜玉米新品种，提高了玉米的商品价值。在超量表达G基因载体的构建中，所用DNA片段和Ti质粒及酶切位点如图1、2所示。 (1)强启动子是一段特殊序列的DNA片段，能被RNA聚合酶识别并驱动基因持续转录。据图1分析，G基因模板链的________（填“5’”或“3’”）端位于图中的M端。利用PCR技术扩增目的基因时，为确保目的基因与Ti质粒正确连接，需要在图1中左侧和右侧引物的5’端分别添加限制酶________的识别序列。若在PCR反应体系中只加入1个目的DNA片段，经过30次循环，共有________个引物参与目的DNA片段的合成。 (2)通常利用________处理农杆菌，以利于重组质粒导入。转化后的农杆菌先在液体培养基中进行扩大培养，再涂布接种到含抗生素的培养基进行筛选，涂布接种正确的无菌操作流程是________（编号排序）。（①灼烧涂布器    ②在酒精灯火焰旁涂布    ③培养基高压蒸汽灭菌    ④置于超净工作台操作    ⑤在酒精灯火焰旁倒平板） (3)将农杆菌与玉米细胞共同培养完成转化。为了筛选转化成功的玉米细胞，需要在培养基中添加抗生素的种类是卡那霉素，不选羧苄青霉素的原因是________。选择转化成功的玉米细胞进行植物组织培养，芽诱导期需在培养基中添加的植物激素是________。 (4)为鉴定G基因是否成功插入到特定位点，针对插入位点的上下游设计了引物1、2，针对G基因自身序列设计了引物3、4，各引物的位置如图3所示。提取待测样品1、2、3的DNA用引物________进行PCR并电泳，结果如图4所示，加样孔________（填编号）对应的个体是野生型玉米。 (5)简并PCR可以检测复杂样本中低丰度转基因核酸，对转基因作物风险防控至关重要。简并引物可与多种相似序列结合，其简并度为简并核苷酸代码对应的碱基种类数相乘得到的。若某引物序列为5'-AYGNYCGTTYANATYGGT-3'（已知简并核苷酸代码Y=C/T；N=A/C/G/T)，则其简并度为________。针对高度保守区域，需要________（填“降低”或“升高”）引物的简并度以提高特异性。 【答案】(1) 5' Kpn I、Xba I 231-2 (2) CaCl2（Ca2+） ③④⑤①②或③④⑤（④）①②（①） (3) （只有）卡那霉素抗性基因位于T-DNA上，可整合到植物染色体DNA上，（羧苄青霉素抗性基因在T-DNA外，不进入玉米细胞） 生长素和细胞分裂素 (4) 1、2 3 (5) 256 降低 【详解】（1）启动子是RNA聚合酶识别和结合的位点，位于基因的上游，可驱动基因转录。转录时RNA聚合酶和启动子结合，N端是DNA模板链的3′端，RNA链自身延伸的方向是5′端到3′端，因此模板链的5′端位于M端。结合Ti质粒（图2）的酶切位点，需选择不破坏启动子、终止子和标记基因的限制酶，且保证目的基因正确插入。图1中目的基因两侧需添加：左加Kpn I，右加Xba I。PCR循环中，n次循环后，目的DNA片段数为2n，引物数为2n+1-2。30次循环，1个初始模板，引物数为231-2。 （2）通常用Ca2+（氯化钙）处理农杆菌，使其处于感受态，利于重组质粒导入。涂布接种的无菌操作流程： ③培养基高压蒸汽灭菌 →④置于超净工作台操作 →  ⑤在酒精灯火焰旁倒平板 → ①灼烧涂布器 → ②在酒精灯火焰旁涂布， 即顺序为：③④⑤①②或③④⑤（④）①②（①）。 （3）不选羧苄青霉素的原因：（只有）卡那霉素抗性基因位于T-DNA上，可整合到植物染色体DNA上，（羧苄青霉素抗性基因在T-DNA外，不进入玉米细胞）。 植物组织培养诱导期（脱分化/再分化）需添加的植物激素是生长素和细胞分裂素。 （4）野生型玉米没有插入G基因，插入位点的上下游序列是连续的，用引物1和引物2可以扩增出对应片段；若G基因成功插入特定位点，引物1和引物2之间的片段会因插入G基因而变长，而引物3和4可以扩增出G基因的片段。题目要鉴定G基因是否插入特定位点，需用引物1、2进行PCR，通过扩增产物的大小区分野生型和转基因型。电泳方向是从加样孔向下，片段越短，迁移距离越远；野生型无G基因插入，引物1、2扩增的片段短，迁移距离最远；转基因型有G基因插入，引物1、2扩增的片段长，迁移距离近；图4中加样孔3的条带迁移距离最远，对应野生型玉米。 （5）简并度计算：Y=2种（C/T），N=4种（A/C/G/T）。序列为5'-AYGNYCGTTYANATYGGT-3'，统计简并位点： 第2位Y（2）、第4位N（4）、第5位Y（2）、第10位Y（2）、第11位N（4）、第14位Y（2） 简并度 = 2×4×2×2×4×2 = 256 。针对高度保守区域，需降低引物的简并度以提高特异性（减少非特异性结合）。 3．（2026·浙江宁波·二模）乳糖不耐受是因人体乳糖酶分泌不足，无法完全分解牛奶中乳糖而引发的非感染性腹泻，我国约有1/3的成年人对乳糖不耐受。回答下列问题： (1)为减轻乳糖不耐受症状，可用乳酸菌将牛奶中的乳糖分解为________，使pH降低，蛋白质凝固形成酸奶。自制酸奶时，加入少量市售酸奶的目的是______________。 (2)常规低乳糖牛奶生产成本高、效率低，科学家利用外源嗜热菌糖苷酶基因（LacS），结合基因工程与体细胞核移植技术，培育出可在乳腺中特异性表达耐高温乳糖酶的转基因克隆奶牛，其生产的牛奶经加热消毒可实现乳糖高效降解。其基本流程为： ①目的基因的筛选与获取。为使LacS基因在奶牛细胞中高效表达，科学家优化氨基酸序列，遵循________（遗传信息流动的规律）对该基因序列进行改造，再通过________（方法）获得目的基因。 ②构建乳腺特异性表达载体。图1为所用质粒的示意图，图2为目的基因片段，不同限制酶的识别序列及切割位点如表所示。为了将目的基因正确插入到质粒中，需在引物的5′端添加相应限制酶识别序列，a端引物的部分序列为：5′-________-3′（写出10个碱基）。 限制酶名称 BamH I EcoR I Pst I Sal I 识别序列及切割位点 ③表达载体的导入及核移植。取性别为________的牛胚胎成纤维细胞导入表达载体，用培养液将细胞悬液________后，将单个细胞接种于96孔板中进行________培养，筛选含有目的基因的成纤维细胞作为核供体细胞；从牛卵巢获取卵母细胞，体外培养至MII期，经________处理后作为受体细胞。 ④重组细胞的体外培养及胚胎移植。核移植获得的重构胚还需经过________，才能完成细胞分裂和发育进程，经体外培养后再移植到________的代孕母牛子宫。 ⑤目的基因的检测与鉴定。提取初生小牛的基因组DNA，利用________技术鉴定是否存在目的基因。与在牛奶中直接加入乳糖酶相比，利用奶牛乳腺生物反应器生产低乳糖牛奶的优点有_________________（答出2点即可）。 【答案】(1) 乳酸 接种乳酸菌/提供菌种 (2) 中心法则 化学合成/人工合成 GAATTCTACT 雌性 稀释 细胞克隆/克隆化/克隆 去核 激活/电刺激/电激活/Ca²⁺载体、乙醇、蛋白酶合成抑制剂 同期发情 PCR/DNA分子杂交/DNA 测序 不需要体外酶解，成本更低；生产过程更简单、效率更高；避免外源添加，更安全稳定；奶牛可长期持续地产出低乳糖奶 【详解】（1）乳酸菌无氧呼吸将乳糖分解为乳酸，使牛奶pH下降、蛋白质凝固，形成酸奶。市售酸奶含活乳酸菌，加入后可提供发酵菌种，快速启动酸奶发酵。 （2）①改造基因序列需遵循中心法则（DNA→RNA→蛋白质），保证氨基酸序列正确翻译。已知氨基酸序列反推基因序列，常用化学（人工）合成法获取目的基因。 ②转录方向从启动子到终止子，a端需匹配EcoR Ⅰ位点（GAATTC），后接目的基因起始端TACT，组合为GAATTCTACT。 ③乳腺特异性表达需雌性牛，只有母牛能泌乳。 细胞悬液需稀释，再接种到96孔板做克隆化培养，获得单克隆阳性细胞。 受体卵母细胞需去核，避免核基因干扰。 ④重构胚需激活（电激活/Ca²⁺载体、乙醇、蛋白酶合成抑制剂等），才能启动分裂发育。 代孕母牛需同期发情处理，保证胚胎移植后能正常着床发育。 ⑤检测基因组DNA中目的基因，常用PCR、DNA分子杂交或 DNA测序。乳腺生物反应器优点：省去体外酶解步骤、成本低、效率高、安全稳定、可持续产奶。 1、基因工程的基本步骤 操作步骤 关键操作细节 核心目的 易错点/难点提醒 目的基因的获取 1. 从基因文库中筛选；2. PCR扩增（需引物、Taq酶、dNTP）；3. 人工合成（适用于短基因、已知序列） 获取完整、可表达的目的基因，为后续操作提供基础 1. PCR需热稳定DNA聚合酶，引物不能互补；2. 基因组文库≠部分基因文库，前者含全部基因 基因表达载体的构建 1. 用相同/互补限制酶切割目的基因和载体；2. DNA连接酶连接（黏性末端用E·coli酶，平末端用T4酶）；3. 构建含启动子、终止子、标记基因的重组载体 使目的基因在受体细胞中稳定存在、自主复制，且能表达和发挥作用 1. 核心步骤，直接决定实验成败；2. 需避免质粒自连、目的基因反向连接（可采用双酶切） 将目的基因导入受体细胞 1. 植物：农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法；2. 动物：显微注射法；3. 微生物：Ca²⁺处理使细胞处于感受态 让目的基因进入受体细胞，完成扩增和后续表达的前提 1. 导入成功≠目的基因表达；2. 不同受体细胞选择对应方法，感受态细胞需新鲜制备 目的基因的检测与鉴定 1. 分子水平：DNA分子杂交（检测导入）、分子杂交（检测转录）、抗原-抗体杂交（检测翻译）；2. 个体水平：性状观察、抗逆性检测等 确认目的基因是否成功导入、转录和表达，筛选出符合要求的受体细胞/个体 1. 三步分子检测层层递进，缺一不可；2. 个体水平鉴定是最终验证手段，需排除干扰性状 2、PCR引物的设计 核心设计要点 具体要求 关键说明 引物长度 长度控制在18-25个碱基，最常用20-22个；不要短于18个或长于25个 引物太长或太短，都会影响PCR扩增效果，要么结合不精准，要么扩增效率低 引物特异性 引物序列只能和目标片段结合，不能和其他无关片段结合 特异性差会导致扩增出无关片段，干扰目标结果，无法得到想要的DNA片段 特殊修饰 可根据需求在引物一端添加标记（如荧光），另一端不能修改 修改引物的扩增起始端（3’端），会直接导致PCR无法延伸，扩增失败 引物方向 一对引物要分别结合目标片段的两端，方向正确才能扩增出目标长度的DNA 引物方向颠倒，无法扩增出目标片段，整个PCR实验都会失败 押题5 基因工程的安全与伦理 1．（2026·浙江·二模）“AI辅助试管婴儿胚胎筛选”技术可对胚胎基因进行检测分析。某些生殖中心利用该技术进行非医疗目的胚胎筛选，引发广泛伦理争议。下列叙述错误的是（　　） A．应禁止使用该技术调控人群的性别比例 B．非医疗目的胚胎筛选违背了生命伦理的规范 C．经过父母双方知情同意，即可开展胚胎筛选 D．由于人体某些性状受多基因调控，胚胎筛选存在不确定性 【答案】C 【详解】A、我国明确禁止非医疗目的的胚胎性别鉴定，使用该技术调控人群性别比例会造成性别比例失衡，引发严重社会问题，因此应禁止该行为，A正确； B、非医疗目的的胚胎筛选会引发基因歧视、公平性失衡等问题，违背生命伦理的基本规范，B正确； C、胚胎筛选必须严格符合国家法律法规和伦理规范，仅可用于医疗目的（如排查严重遗传病），并非父母双方知情同意就可开展，尤其是非医疗目的的筛选是被明令禁止的，C错误； D、人体的性状不仅受基因控制还受环境影响，且多基因调控的性状表达更复杂，因此胚胎筛选存在不确定性，D正确。 2．（2026·浙江金华·模拟预测）生物工程技术在给我们带来便利的同时，相关产品的安全性问题也引起了人们的重视。下列叙述错误的是（　　） A．转基因植物的广泛种植不会影响生态系统的稳定 B．转基因品种与天然品种可能存在营养成分上的差异 C．社会公众在购买相关产品时应享有知情权 D．世界范围内应全面禁止生物武器 【答案】A 【详解】A、转基因植物广泛种植可能发生基因漂移、产生“超级杂草”，或通过影响食物链破坏原有物种的种间关系，进而威胁生态系统的稳定，A错误； B、转基因品种转入了特定外源基因，可能合成天然品种不具备的物质，因此二者可能存在营养成分上的差异，B正确； C．我国对转基因产品有明确标识要求，保障社会公众购买相关产品时的知情权与选择权，C正确； D、生物武器传染性强、杀伤范围大、危害性极高，符合国际共识，世界范围内应全面禁止生物武器，D正确。 3．（2026·浙江·二模）生物武器的使用严重违背国际人道主义精神。根据《禁止生物武器公约》及我国政府的立场，下列叙述错误的是（　　） A．国际社会大多数国家已达成了“彻底销毁生物武器”的共识 B．更新和储备疫苗库是预防生物武器威胁的重要策略之一 C．为应对潜在威胁，我国可在特殊情况下少量生产并储存生物武器 D．我国政府反对生物武器及其技术和设备向其他国家或组织扩散 【答案】C 【详解】A、《禁止生物武器公约》已经获得国际上绝大多数国家的签署和认可，“彻底销毁生物武器”是国际社会的普遍共识，A正确； B、生物武器多包含致病菌、病毒、生物毒素等致病类物质，提前更新、储备对应疫苗可以在遭遇生物武器威胁时快速开展防护和救治工作，是重要的预防策略，B正确； C、我国政府对生物武器始终坚持不发展、不生产、不储存的明确立场，任何情况下都不会生产、储存生物武器，C错误； D、我国政府明确反对生物武器及其相关技术、设备向其他国家或非政府组织扩散，D正确。 故选C。 明确基因工程的产物必然存在一些安全和伦理问题 1．（2026·浙江绍兴·二模）黄酒酿造的发酵工艺流程如下图。下列叙述正确的是（    ） A．酒曲和黄酒高活性干酵母均为单一菌种 B．蒸煮不仅能杀死杂菌，还促进淀粉糊化以便于菌种利用 C．主发酵时密闭以提高酵母数量，后发酵时通气以提高酒精产量 D．压榨、滤清的目的是去除代谢废物，实现产物的分离和提纯 【答案】B 【详解】A、酒曲是多种微生物的混合体系，包含酵母菌、霉菌等多种菌种；黄酒高活性干酵母一般为酿酒酵母，属于单一菌种，A错误； B、蒸煮糯米的过程，一方面可以高温杀死糯米中的杂菌，避免杂菌污染发酵过程；另一方面可以使糯米中的淀粉发生糊化，更易被菌种产生的淀粉酶分解为葡萄糖，供酵母菌利用，B正确； C、酵母菌在有氧条件下进行有氧呼吸，大量繁殖，在无氧条件下进行无氧呼吸，产生酒精。主发酵阶段需要先通气让酵母菌大量繁殖，再密闭进行无氧发酵产酒；后发酵阶段也需要密闭无氧环境，持续产生酒精，提高酒精产量，C错误； D、压榨、滤清的目的是去除发酵液中的酒糟、菌体等固体杂质，实现酒液与固体残渣的分离，D错误。 2．（2026·浙江·模拟预测）某工厂用液态法酿造黄酒的工艺流程如图，其中糯米需经蒸煮、糖化后进行混合菌种发酵。下列关于该工艺的分析，错误的是（    ） A．温度、pH、酶浓度等会影响过程①②的酶促反应 B．过程②中的糖化酶可使用米曲霉等霉菌替代 C．过程③初期通入无菌空气，可提高黄酒乙醇含量 D．加入植物乳杆菌联合发酵有利于黄酒风味的形成 【答案】C 【详解】A、酶促反应的速率会受到温度、pH、酶浓度等因素的影响（温度 /pH 过高过低会影响酶活性，酶浓度不足会限制反应速率）。过程①②均是酶催化的反应，因此这些因素会影响过程①②，A正确； B、米曲霉等霉菌可以产生糖化酶（例如米曲霉能分泌淀粉酶，可将淀粉水解为糖），因此过程②中的糖化酶可以用米曲霉等霉菌替代，B正确； C、过程③是黄酒发酵，主要依靠酿酒酵母的无氧呼吸产生乙醇。若初期通入无菌空气，酵母会进行有氧呼吸（大量繁殖但不产生乙醇），反而会减少乙醇的生成量，C错误； D、植物乳杆菌属于乳酸菌，联合发酵时会产生有机酸等代谢产物，这些物质能丰富黄酒的风味（例如增加酸味、香气层次），D正确。 故选C。 （2025·浙江嘉兴·一模）阅读下列材料，完成下面小题。 酱油生产四个环节是原料制备、制曲、酶解和发酵。原料经破碎、蒸煮完成制备。制曲是让曲霉在固体原料上产生大量菌丝体。酶解是原料在酶的作用下水解。发酵阶段，鲁氏酵母和嗜盐片球菌分别产生乙醇和乳酸等物质。鲁氏酵母选育流程如下。 3．关于酱油生产流程的叙述，正确的是（    ） A．原料蒸煮可以杀灭所有微生物 B．发酵阶段以厌氧发酵为主 C．酱油生产属于单一菌种发酵 D．酱油生产全过程为液体发酵 4．为了获得既能在苛刻发酵环境条件下生存并发挥作用，又能稳定遗传的鲁氏酵母菌株。下列叙述错误的是（    ） A．可用物理、化学的方法对菌种进行诱变 B．选育的目标菌株应耐盐、耐酸、耐酒精 C．用稀释涂布法实现目标菌种的分离和纯化 D．进行连续传代培养时需在较强选择压力下 【答案】3．B 4．D 【分析】培养基，是指供给微生物、植物或动物（或组织）生长繁殖的，由不同营养物质组合配制而成的营养基质。一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐（包括微量元素）、维生素和水等几大类物质。 3．A、原料蒸煮是一种高温灭菌的过程，可以杀灭绝大部分微生物，A错误； B、酱油制作的发酵阶段，鲁氏酵母和嗜盐片球菌分别产生乙醇和乳酸等物质，该过程中以厌氧发酵为主，B正确； C、酱油制作需要曲霉、酵母菌、乳酸菌等多种菌种参与，是一种混菌发酵过程，C错误； D、酱油生产四个环节是原料制备、制曲、酶解和发酵，制曲是让曲霉在固体原料上产生大量菌丝体，可见该过程不是液体发酵，D错误。 故选B。 4．A、可用物理、化学的方法对菌种进行诱变，进而通过选育获得目标菌种，A正确； B、选育的目标菌株应耐盐、耐酸、耐酒精，因为酱油制作的发酵阶段会产生乙醇和乳酸等，B正确； C、用稀释涂布法实现目标菌种的分离和纯化，同时也可计数，C正确； D、进行连续传代培养时需给予适宜的环境条件进而获得大量的目标菌种，D错误。 故选D。 5．（2026·浙江宁波·二模）下图展示了植物原生质体制备、分离和检测的过程。下列叙述错误的是（　　） A．①添加相应的酶液以去除细胞壁 B．②将材料放入无菌水中以彻底清洗 C．原生质体密度介于甘露醇和蔗糖溶液密度之间 D．台盼蓝检测后可选择未被染成蓝色的原生质体继续实验 【答案】B 【详解】A、①步骤是去除植物细胞壁，需要添加纤维素酶和果胶酶，A正确； B、原生质体没有细胞壁的保护，若放入无菌水中会因渗透作用吸水涨破，所以不能用无菌水清洗，应该用等渗溶液清洗，B错误； C、结合图示可知原生质体处于甘露醇和蔗糖溶液之间，因而可推测原生质体的密度介于图中甘露醇和蔗糖溶液密度之间，C正确； D、台盼蓝染色时，活的原生质体不会被染成蓝色（因为细胞膜具有选择透过性），死细胞会被染成蓝色，所以可选择未被染成蓝色的原生质体继续实验，D正确。 6．（2025·浙江·一模）类柠檬苦素是山金柑的次生代谢产物，具有抗氧化、抗癌等作用，早花柠檬富含维生素C．现利用山金柑愈伤组织细胞（2N=18，细胞核DNA失活）和早花柠檬叶肉细胞（2N=18，细胞质DNA失活）进行体细胞杂交，得到兼具两者优良特性的杂种植株。下列说法正确的是（　　） A．该杂种植株是经过植物体细胞杂交技术形成的二倍体植株 B．可使用灭活的病毒促进杂种细胞原生质体的融合及新细胞壁的形成 C．维生素C的大量合成可能与早花柠檬的线粒体DNA有关 D．类柠檬苦素能维持山金柑的正常代谢，杂种植株也能分泌该代谢产物 【答案】A 【详解】A、得到的杂种植株具有早花柠檬的细胞核(2n=18)和山金柑的线粒体和叶绿体基因，杂种植株核DNA与早花柠檬细胞核DNA完全相同，而早花柠檬属于二倍体生物，故杂种植株应该是二倍体，A正确； B、灭活病毒是诱导动物细胞融合的方法，植物原生质体融合需使用聚乙二醇（PEG）或电刺激，且新细胞壁形成需植物激素调控，与病毒无关，B错误； C、早花柠檬的细胞质DNA（包括线粒体DNA和叶绿体DNA）已失活，维生素C为水溶性物质，其合成主要受核基因控制的酶系统调控，与失活的线粒体DNA无关，C错误； D、杂种植株是经植株体细胞杂交形成的，类柠苦素是山金柑的次生代谢产物，故其不是维持山金柑正常代谢所必需的，而且形成的杂种植株并不一定能正常分泌该代谢产物，D错误。 故选A。 7．（2025·浙江·一模）甲植株具有由核基因控制的多种优良性状，另一远缘植物乙细胞质中存在抗除草剂基因，为获得兼具有甲乙优良性状的品种，科学家进行如下图实验操作。下列叙述错误的是（　　） A．控制杂种植株优良性状的基因均可通过花粉遗传给后代 B．利用顶芽细胞分裂能力强、病毒少的特点，易获得脱毒杂种苗 C．紫外线照射乙顶芽细胞需控制强度和时间，避免过度照射破坏细胞质中的基因 D．制备原生质体的酶解过程需在较高渗溶液中进行，防止原生质体吸水涨破 【答案】A 【详解】A、乙的抗除草剂基因位于细胞质中，细胞质基因通常通过卵细胞（而非花粉）遗传给后代（花粉中细胞质极少），因此该基因无法通过花粉遗传，甲的核基因可通过花粉遗传，A错误； B、植物顶芽细胞分裂能力强，且病毒在植物体内多集中于成熟组织，顶芽（尤其是分生区）病毒含量少，因此利用顶芽细胞易获得脱毒苗，B正确； C、实验中乙的细胞核需失活，但细胞质中的抗除草剂基因需保留功能，因此紫外线照射需控制强度和时间，避免破坏细胞质基因，C正确； D、原生质体无细胞壁保护，在较高渗溶液中可防止其吸水涨破，故酶解过程需在高渗溶液中进行，D正确。 故选A。 8．（2026·浙江·二模）现代生物工程的操作常常涉及以下流程，下列叙述正确的是（    ） A．若图为试管动物的培育过程，从卵巢中获取的卵母细胞②可以直接与①融合形成③ B．若图为单克隆抗体的制备过程，形成③常用灭活的病毒直接处理①②两种细胞 C．若图为克隆羊多莉的培育过程，形成的③直接植入母体子宫进行培养可得到④ D．若图为细菌细胞杂交过程，①②两种细胞需要先用纤维素酶和果胶酶处理 【答案】B 【详解】A、试管动物的培育过程，从卵巢中获取的卵母细胞②需成熟处理才能与①融合形成③，A 错误； B、若图为单克隆抗体的制备过程，形成③杂交瘤细胞常用灭活的病毒处理①（B淋巴细胞）和②（骨髓瘤细胞）两种细胞，促使两种细胞融合，B正确； C、克隆羊多莉培育过程，形成的③是在体外培养至早期胚胎才植入母体子宫进行培养可得到④，C错误； D、细菌的细胞壁成分不是纤维素和果胶，故用纤维素酶和果胶酶处理无法去除其细胞壁，D错误。 9．（2025·吉林白城·三模）某病毒对动物养殖业危害十分严重。我国学者拟以该病毒外壳蛋白A为抗原来制备单克隆抗体，以期快速检测该病毒，其主要技术路线如图所示。下列相关说法正确的是（    ） A．与小鼠骨髓瘤细胞融合前，已免疫的B细胞不需要通过原代培养扩大细胞数量 B．诱导已免疫的B细胞和小鼠骨髓瘤细胞融合，主要是利用细胞膜的功能特点 C．在杂交瘤细胞筛选过程中，发生融合的细胞都可以在选择培养基上正常增殖 D．将待筛选抗体与该病毒基因A进行杂交，呈阳性的就是所需的抗体 【答案】A 【详解】A、已免疫的B细胞是高度分化的细胞，不能分裂，故不需要进行原代培养，A正确； B、诱导已免疫的B细胞和小鼠骨髓瘤细胞融合，主要利用的是细胞膜的流动性，即细胞膜的结构特点，B错误； C、诱导细胞融合时，同种核型融合的细胞（即B细胞相互融合、骨髓瘤细胞相互融合）不能在选择培养基上正常增殖，只有B细胞与骨髓瘤细胞融合的细胞才能在选择培养基上正常增殖，C错误； D、待筛选的抗体是蛋白质，无法与基因A进行杂交，应与蛋白A进行杂交，D错误。 故选A。 10．（2025·浙江绍兴·模拟预测）羊乳因其营养成分最接近人乳，且不含牛乳中的某些可致过敏的异性蛋白质而受到消费者的青睐，但市场上存在着用牛乳冒充羊乳欺骗消费者的现象。对此，研究人员开发制备了羊乳asl-酪蛋白单克隆抗体检测试剂盒。下图为制备asl-酪蛋白单克隆抗体的示意图，1~5代表相关过程。 下列叙述正确的是（　　） A．为制备单克隆抗体，应确保图中两处小鼠注射同种抗原 B．过程2可以用灭活的病毒处理 C．过程3表示用HAT培养基筛选得到单一的杂交瘤细胞 D．过程5可以从小鼠血浆中分离得到特异性强的单克隆抗体 【答案】B 【分析】单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原的抗体。通常采用杂交瘤技术来制备，杂交瘤抗体技术是在细胞融合技术的基础上，将具有分泌特异性抗体能力的效应B细胞和具有无限繁殖能力的骨髓瘤细胞融合为杂交瘤细胞，杂交瘤细胞既能产生抗体，又能无限增殖。用具备这种特性的单个杂交瘤细胞培养成细胞群，可制备针对一种抗原的特异性抗体即单克隆抗体。 【详解】A、左侧注射抗原是为了使小鼠产生更多的B细胞，右侧注射的是杂交瘤细胞，使其在小鼠腹腔的腹水中生长，A错误； B、过程2为B细胞与骨髓瘤细胞的融合，可以用灭活的病毒处理，B正确； C、过程3表示用HAT培养基筛选杂交瘤细胞，得到的杂交瘤细胞为多种，C错误； D、过程5可以从小鼠腹水中分离得到特异性强的单克隆抗体，D错误。 故选B。 11．（2026·浙江·模拟预测）生物技术在造福人类社会的同时也可能带来安全与伦理问题。下列叙述正确的是（    ） A．不允许、不支持任何生物的生殖性克隆 B．反对生物武器及其相关技术和设备扩散 C．全球大规模推广转基因粮食作物种植 D．为社会健康发展应全面禁止试管婴儿技术 【答案】B 【详解】A、我国明确 “不允许、不支持、不接受任何生殖性克隆人实验”，但并非 “任何生物的生殖性克隆”（如动物生殖性克隆有研究应用），A错误； B、生物武器具有大规模杀伤性，具有极大危害性，国际社会普遍反对其技术、设备的扩散，B正确； C、转基因作物需经长期安全评估，其生态风险（如基因污染）和食品安全性尚存争议，目前仅部分国家有限种植，全球大规模推广不符合审慎原则，C错误； D、试管婴儿技术为众多不孕家庭带来了希望，虽然存在伦理问题，但不能全面禁止，而是需要合理规范和引导，D错误。 故选B。 12．（2025·浙江·一模）一场围绕“生物技术应用的伦理与风险”的中学辩论赛中，提出了以下观点，请你从专业角度判断哪一项说法是错误的（    ） A．反对设计试管婴儿的原因之一是有人滥用此技术选择性设计婴儿 B．种植转基因植物可能因遗传漂变而影响野生植物的遗传多样性 C．生物武器的扩散可能引发大规模疫情，故战争中患病士兵的衣物等需及时焚烧 D．治疗性克隆对解决供体器官缺乏和器官移植后的免疫排斥反应具有重要意义 【答案】B 【详解】A、设计试管婴儿存在技术滥用风险（如筛选特定性状），该观点符合伦理争议的客观事实，A正确； B、“遗传漂变”指小种群中基因频率随机变化的现象，而转基因植物对野生植物的影响主要通过“基因污染”（即外源基因通过杂交扩散），与遗传漂变无直接关联，B错误； C、生物武器病原体具有强传染性，焚烧污染物可阻断传播途径，符合生物安全防控原则，C正确； D、治疗性克隆通过体细胞核移植获得胚胎干细胞，可培育自体组织器官，有效解决供体短缺和免疫排斥问题，D正确。 故选B。 13．（2025·浙江嘉兴·一模）下列关于生物武器的叙述，正确的是（    ） A．它是利用致病微生物达到战争目的的武器 B．我国坚决支持禁止生物武器的生产和扩散 C．分子杂交技术不能用于排查生物战剂 D．制备疫苗是防御生物武器的唯一手段 【答案】B 【详解】A、生物武器是利用细菌、病毒等致病微生物或毒素作为生物战剂，以达到战争目的的武器，并非仅仅是致病微生物，A错误； B、我国是《禁止生物武器公约》缔约国，支持禁止其生产和扩散，B正确； C、分子杂交技术（如DNA探针杂交）可用于检测特定病原体的核酸序列，因此能用于排查生物战剂，C错误； D、防御生物武器的手段包括接种疫苗、使用防护服、消毒灭菌、隔离检疫等，疫苗只是其中一种免疫预防方式，并非唯一手段，D错误。 故选B。 14．（2026·浙江绍兴·二模）高异黄酮是具有多种生物活性的类黄酮化合物，其在番茄等作物中含量较低。紫花苜蓿中的ChoMT基因是高异黄酮合成的关键基因。研究人员以紫花苜蓿的ChoMT为目的基因构建的重组表达载体关键部分如下图所示，并转入番茄植株中，培育得到高异黄酮含量丰富的转基因番茄果实。    注：GFP是绿色荧光蛋白基因，KanR是卡那霉素抗性基因。LB和RB表示左右两边界。 回答下列问题： (1)通过检索基因数据库可获得紫花苜蓿的ChoMT基因的__________，经化学方法合成获得ChoMT基因。构建表达载体需加入相应启动子，启动子的作用是__________。 (2)农杆菌转化法是将目的基因导入植物细胞最常用的方法。该方法中Ti质粒上的关键结构是T-DNA，其作用是__________。图中KanR是常用的标记基因，可用于筛选含有目的基因的__________。制备农杆菌侵染液时，将离心后的菌体用培养液稀释至适宜浓度，浓度过低会影响__________，浓度过高会导致__________。 (3)转基因番茄幼苗培育过程中，包括如下图所示的五个不同阶段①～⑤。    上述五个阶段按照培育过程的先后顺序排列，应为：__________。产生④的过程，细胞主要发生了脱分化和__________。与②的培养过程相比，①的培养过程对培养基的要求有__________。 A．提高生长素含量B．提高细胞分裂素含量C．降低营养物质的浓度D．提高营养物质的浓度 (4)研究人员对获得的转基因番茄植株进行鉴定。将番茄植株放在450～490nm波长光下照射，当观察到__________，可确认为转基因番茄植株。再对转基因番茄的果实做进一步鉴定，鉴定结果是__________时，表明转基因番茄的培育取得成功。 【答案】(1) 核苷酸序列 RNA聚合酶识别和结合的位点，驱动基因转录出mRNA (2) 携带目的基因进入植物细胞并整合到植物细胞染色体DNA上 受体细胞 转化效率 对植物细胞产生毒害（或抑制植物细胞生长、导致植物组织死亡） (3) ⑤④②①③ 分裂 A (4) 叶片（或植株）发出绿色荧光 果实中高异黄酮含量显著高于普通番茄 【详解】（1）通过检索基因数据库，可以获得目标基因的核苷酸序列，这是后续化学合成基因的前提。化学合成法依据已知序列人工合成DNA片段。启动子是位于基因上游的调控序列，是RNA聚合酶识别与结合的位点，启动转录过程，使目的基因得以表达。 （2）Ti质粒上的T-DNA是农杆菌转化法的核心——它能将携带的目的基因转移并整合进受体植物细胞的基因组中，实现稳定遗传。KanR用于筛选含有目的基因的受体细胞（番茄细胞），只有成功导入载体的细胞能在含卡那霉素的培养基上存活。浓度过低会影响农杆菌对受体细胞的转化效率（侵染成功率），浓度过高会导致农杆菌过度增殖，抑制受体细胞的生长（甚至导致受体细胞死亡）。 （3）植物组织培养的流程为：外植体脱分化形成愈伤组织→愈伤组织再分化形成胚状体/丛芽→生根→炼苗移栽，对应图中阶段：⑤（外植体接种）→④（愈伤组织）→②（丛芽分化）→①（生根）→③（炼苗移栽），即顺序为⑤④②①③。产生④的过程，细胞主要发生了脱分化和分裂。植物激素（生长素/细胞分裂素）的比例调控分化方向：生长素比例高促进生根，细胞分裂素比例高促进芽的分化， 因此①（生根）需提高生长素含量，对应选项A。 （4）因载体中含有GFP（绿色荧光蛋白基因），它作为报告基因，若表达成功，在特定波长（450–490 nm）激发下会发出绿色荧光，即可初步判定为转基因植株。转基因的目的是提高高异黄酮含量，因此鉴定结果为转基因番茄果实中高异黄酮的含量显著高于普通番茄（非转基因番茄）时，表明培育成功。 15．（2026·浙江绍兴·二模）水稻为雌雄同花植物，矮秆水稻具有抗倒伏、高产等优点。为培育矮秆品种，研究人员将一段DNA序列（Ds）定向插入到野生型水稻的某基因内部，获得一矮秆突变株。以该突变株为亲本自交获得F1，F1部分幼苗发生叶片黄化而死亡；存活植株中既有矮秆水稻也有正常株高水稻（野生型）。回答下列问题： (1)Ds插入某基因引起水稻发生矮秆变异，这一变异来源属于__________。矮秆和正常株高这一对相对性状中，显性性状为__________。F1中黄化水稻的出现可能是另一个Ds插入到亲本相关基因，阻碍了__________（物质）的合成，使得叶片黄化。 (2)欲培养能稳定遗传的矮秆水稻品种，先要确定上述株高相关基因A（a）与叶色相关基因R（r）是否独立遗传。研究人员对F1存活植株的表型及比例进行了统计，若结果为矮秆水稻∶正常水稻＝2∶1，则说明__________，这种情况下将难以利用该矮杆突变株繁育获得目标品种。请用遗传图解和必要的文字进行解释。 (3)若A（a）基因与R（r）基因独立遗传，可从F1植株中选择矮秆水稻单独种植，并在开花前进行套袋处理，套袋的目的是__________。分别收获每株水稻上种子进行单独种植，长成的所有个体为一个株系。当株系表型为__________，即为所需的目标品种。 (4)为确定Ds在染色体上的具体插入位置，研究人员提取能稳定遗传的矮秆突变株的DNA，用某种限制酶处理，酶切位点如下图，其中P1、P2、P3、P4代表4种PCR扩增引物。 经限制酶酶切后，利用__________酶将其连接成环状，并以此为模板，选择引物__________来扩增未知序列。后续通过测序比对发现，Ds插入的目标基因能编码赤霉素信号转导途径的关键蛋白，Ds的插入导致该关键蛋白失活。据此，可直接在种子阶段筛选出萌发__________（填：“迟缓”或“提早”）的种子来获得矮秆突变株。 【答案】(1) 基因突变 矮秆 叶绿素 (2)基因A和基因r位于一条染色体上，基因a和基因R位于另一条染色体上；由于基因型AArr的个体在幼苗期致死，将始终不能获得稳定遗传的矮秆植株 (3) 防止外来花粉干扰，保证自花授粉 无黄化致死且全为矮秆水稻 (4) DNA连接 P2和P3 迟缓 【详解】（1）Ds序列定向插入水稻某基因内部，导致基因碱基序列发生改变，故属于基因突变。矮秆突变株自交后代出现性状分离，说明矮秆为显性性状。叶片呈现绿色，是因为叶绿素的含量远高于类胡萝卜素，当叶绿素的合成过程受阻时，叶片中的叶绿素含量会大幅下降，原本被掩盖的类胡萝卜素的颜色就会显现出来，导致叶片呈现黄色，也就是黄化现象。 （2）F1存活植株中矮秆：正常株高=2：1，且存在黄化致死现象。若两基因独立遗传，AaRr自交后代理论上会出现多种基因型组合，即使存在致死，也很难稳定出现矮秆：正常株高=2：1的单一比例，而当A与r 连锁、a与R连锁时，亲本仅产生Ar和aR两种配子，自交后代基因型为AArr（黄化致死）：AaRr（矮秆）：aaRR（正常株高）=1：2：1，存活个体恰好呈现2：1的比例，且所有矮秆个体均为杂合子，无法获得稳定遗传的纯合矮秆植株，因此难以繁育目标品种。具体的遗传图解如下。 （3）水稻为雌雄同花植物，开花前套袋的目的是防止外来花粉干扰，保证植株进行自花授粉。若A与R独立遗传，且矮秆为显性（A）、黄化致死基因型为rr，则所需能稳定遗传的矮秆品种基因型为AARR（矮秆不黄化）。从F1中选择矮秆水稻自交，逐代筛选，当某株系所有个体均表现为无黄化致死且全为矮秆水稻时，说明该株系基因型为AARR，即为目标品种。 （4）限制酶切割后的DNA片段需通过DNA连接酶连接形成环状DNA。因为合成子链的延伸方向为5'端至3'端，且扩增的目的是扩增出未知序列，所以选择引物P2和P3来扩增。Ds插入使赤霉素信号转导关键蛋白失活，赤霉素能促进种子萌发，失活后萌发受抑制，因此在种子阶段可筛选萌发迟缓的种子作为矮秆突变株。 1 / 2 学科网（北京）股份有限公司 $