高二生物下学期期中模拟卷01（新教材人教版）

2025-2026学年高二下学期期中模拟测试卷01 生 物 （满分100分，考试用时75分钟） 注意事项： 1．答卷前，考生务必用黑色字迹的钢笔或签字笔将自己的准考证号、姓名、考场号和座位号填写在答题卡上。用2B铅笔在“考场号”和“座位号”栏相应位置填涂自己的考场号和座位号。将条形码粘贴在答题卡“条形码粘贴处”。 2．作答选择题时，选出每小题答案后，用 2B 铅笔把答题卡上对应题目选项的答案信息点涂黑；如需改动，用橡皮擦干净后，再选涂其他答案，答案不能答在试卷上。 3．非选择题必须用黑色字迹的钢笔或签字笔作答，答案必须写在答题卡各题目指定区域内相应位置上；如需改动，先划掉原来的答案，然后再写上新的答案；不准使用铅笔和涂改液。不按以上要求作答的答案无效。 4．考生必须保持答题卡的整洁。考试结束后，将试卷和答题卡一并交回。 5．测试范围：人教版高中选择性必修3全部。 6. 难度系数：0.65。 一、选择题：本题共25个小题，每小题2分，共50分。每小题只有一个选项符合题目要求。 1．（检测手机表面微生物）涂抹法可用于手机表面的微生物检测，其操作为用湿润的无菌棉签，在手机表面一定区域内均匀擦拭，然后将棉签在固体培养基表面进行滚动涂抹，培养后计数菌落。下列叙述错误的是（　　） A．将棉签浸湿时可使用无菌水 B．可使用酒精擦拭表面对手进行消毒 C．需要同时培养空白培养基作为对照 D．统计的菌落数即手机调查区域细菌的实际数 2．（新情境·金龟子绿僵菌）金龟子绿僵菌（Ma）是一种昆虫病原真菌，可以侵染某些农林害虫。Ma寄生时其孢子（单细胞后代）萌发后侵入昆虫体内大量增殖并产生毒素，导致寄主僵化、死亡。下列叙述错误的是（　　） A．可利用Ma开发成微生物杀虫剂 B．为分离Ma可从研磨的僵虫组织中取样 C．稀释涂布平板法可用于分离样品中的Ma D．接种培养Ma时使用的器具需消毒 3．（实验探究）某实验小组从老浆水中筛选出对胃酸有较强耐受力的乳酸菌株，并进行抑菌培养（将灭菌牛津杯置于接种某菌的平板上，杯中注入待测溶液等），流程如图。其中A、B分别表示含等量JYF2和JYF3乳酸菌菌液的牛津杯（圆形小管）。下列说法错误的是（　　） A．为了满足乳酸菌生长繁殖的需求，培养基需要添加维生素 B．过程Ⅰ采用的接种方法是平板划线法 C．图中C可表示含等量清水的牛津杯 D．抑菌测试时，可将A、B、C牛津杯放在涂布有大肠杆菌的培养基上混合培养，并观察抑菌圈大小 4．（科学思维）物质D是某细菌繁殖所需的必需营养物质，在野生型细菌体内的合成途径为A→B→C→D。现有5株物质D合成缺陷型突变菌，每株仅存在合成途径中1个或2个步骤的合成缺陷，且该途径中间产物积累到一定程度时可分泌至细胞外。为确定各菌株的缺陷类型，研究人员将5株缺陷菌依次均匀划线接种于不含B、C、D三种物质的培养基上，生长情况如图。向培养基中加入铁的配合物（可与物质C发生特异性显色反应），在菌株2的b端、菌株5的a端和b端出现明显显色反应。下列说法错误的是（　　） A．培养基应在灭菌前将pH调至中性或弱碱性 B．菌株3、4均不能利用物质A为原料合成物质B C．菌株5的a、b端的物质D来源于菌株1、4的分泌 D．若在培养基中添加物质C，菌株3的a端仍不会出现菌落 5．（地域特色）甘肃特色发酵食品甜醅子，通常以莜麦或青稞为原料发酵制成，口感香甜且带有酒香。关于甜醅子发酵过程的叙述，错误的是（    ） A．甜醅子发酵主要利用的是酵母菌，酵母菌无氧呼吸产生酒精使其有独特风味 B．甜醅子发酵后期需不断搅拌原料，增加氧气含量，从而促进酵母菌快速繁殖 C．需将发酵温度控制在，此温度是发酵微生物生长和代谢的适宜温度 D．对莜麦或青稞进行清洗后需要适当晾干，从而防止水分过多影响微生物发酵 6．河南某中学兴趣小组尝试利用本地特产-南阳黄酒酒曲，分离高产糖化酶的霉菌，用于优化黄酒生产工艺。实验基本流程为：酒曲研磨→梯度稀释→涂布马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）平板→培养→筛选透明圈大的菌落。下列相关叙述错误的是（　　） A．配制PDA培养基时，添加葡萄糖的目的是作为唯一碳源 B．在平板上滴加碘液进行染色，若菌落周围出现透明圈，说明该霉菌可能分泌淀粉酶 C．分离纯化得到的菌种，常在酸性条件下保存 D．发酵过程中需监测菌体密度、还原糖浓度和pH值等参数，以评估发酵进程 7．儒艮是一种珍稀的海洋哺乳动物。为提高人们对儒艮生存威胁的认识，每年的5月28日被定为世界儒艮日。下列用于提高儒艮种群繁殖能力或提高其种群数量的措施，错误的是（　　） A．采用细胞融合技术将雌雄配子融合，培育儒艮 B．采用动物体细胞核移植技术，获得克隆儒艮 C．采用体外受精技术，提高儒艮的繁殖能力 D．采用胚胎分割技术，增加儒艮胚胎的数量 8．2025年2月，青岛农业大学成功克隆出马尔济斯幼犬。一直以来，犬类克隆被认为是体细胞克隆方面的技术高地。犬科动物缺少高效同期发情和体外成熟体系，可用的卵子数量较少，同时，犬科动物细胞核不可见，导致细胞核去除效率降低，这些都限制了克隆犬的生产效率和技术推广。下列相关叙述错误的是（　　） A．可使用外源促性腺激素促进母犬超数排卵 B．胚胎移植前要对受体进行免疫检查，以防止其排斥移入的胚胎 C．去核就是去除MⅡ期卵母细胞中的纺锤体——染色体复合物 D．胚胎移植的实质是早期胚胎在相同生理环境下空间位置的转移 9．每年4月份，洛阳牡丹盛开，吸引着大批国内外的游客前来观赏。除了观赏价值外，牡丹还有重要的药用价值，其含有的黄酮类化合物具有抗氧化和抗菌等作用。现对牡丹进行如图所示的相关处理，下列相关叙述正确的是（　　） A．若过程①的A部位为根尖或茎尖，则可获得抗病毒植株 B．图示培养基中需要添加起调节作用的植物激素和供能的糖类 C．愈伤组织分化程度高，易受培养条件和诱变因素的影响 D．过程⑥可获得大量的黄酮类化合物，与植物细胞的全能性有关 10．中国科学家成功培育出世界首例高嵌合率灵长类嵌合猴，试验操作步骤如图。检测发现该猴全身多组织嵌合率达67%，表现出荧光色的手指，墨绿色的眼睛，颜色不均的毛发。嵌合猴的培育为研究器官发育和疾病治疗提供了重要模型。下列叙述错误的是（　　） A．胚胎干细胞和重构胚的培养液中通常加入血清 B．重构胚需培养到原肠胚时期才能进行胚胎移植 C．嵌合体猴d的遗传性状由a和b的遗传物质决定 D．重构胚在移植前需要用电刺激、Ca²⁺载体等激活 11．甘蔗花叶病是一种严重的病害，由甘蔗花叶病毒引起。该病毒以甘蔗为寄主，传播途径包括种蔗携带和田间土壤中的病毒，培育甘蔗脱毒苗的途径如图所示。下列叙述错误的是（　　） A．用茎尖进行脱毒，原因是茎尖不携带病毒或携带的病毒极少 B．②的温度处理可能会促进甘蔗茎尖组织中的病毒失去活性 C．在培养基A中进行脱分化处理可以得到胚状体 D．培养基B中的植物激素比例不同于培养基A中的，且需要适当的光照 12．线粒体替代疗法（MRT）是一种细胞质替换技术，将目标细胞核转移到健康去核细胞中以预防细胞质基因遗传病，主要包括受精卵细胞核移植（PNT）和卵母细胞纺锤体—染色体复合物移植（ST）两种方法。已知在卵母细胞中，纺锤体区域的线粒体数量较少，而受精卵中线粒体均匀分布。下列说法正确的是（　　） A．与ST相比，PNT的操作时间较早，细胞较为脆弱，因此成功率比ST低 B．与PNT相比，ST能够更好地避免线粒体DNA的遗传 C．只有通过PNT获得的胚胎才可能拥有三个个体的遗传物质 D．ST没有对胚胎进行操作，因此ST结束后不需要对重构胚进行激活处理 13．沙子岭猪是国家地理标志农产品，不仅具有产仔数量多、生长速度快、瘦肉率较高、肉质优良等独特特性，还具有杂交效果好、耐粗饲、适应性强、抗病力强等良好的遗传特性。2025年1月，湖南首例体细胞克隆猪——沙子岭猪克隆猪在湘潭县诞生，其生产流程如图所示，下列有关叙述错误的是（　　） A．沙子岭猪的胚胎细胞核移植比体细胞核移植更容易成功 B．可以用乙醇激活重构胚，使其完成细胞分裂和发育进程 C．胚胎移植之前需切取滋养层细胞做DNA分析和性别鉴定 D．图中克隆猪的多种优良特性与沙子岭猪相同，不受代孕母体影响 14．科研团队探究不同预处理温度对洋葱DNA提取效果的影响。将洋葱分别置于4℃、25℃、-20℃处理24小时，按统一流程进行DNA粗提取（研磨→过滤→加2mol/LNaCl溶解→加冷酒精析出DNA）。实验结果：4℃组：滤液澄清，但DNA析出量少，丝状物稀疏；25℃组：研磨后呈糊状，过滤困难，滤液浑浊，DNA析出物含较多杂质；-20℃组：解冻后细胞易破碎，滤液量大，DNA析出量多且丝状物粗壮。下列对实验结果分析正确的是（　　） A．4℃组DNA析出量少是因低温提高了DNA在酒精中的溶解度 B．25℃组过滤困难是因高温导致DNA变性凝固堵塞滤网所致 C．三组实验均需在析出DNA时快速搅拌，以增加DNA的获取量 D．-20℃组效果最佳的原因是冷冻破坏了细胞结构且抑制DNA酶活性 15．血友病患者体内缺乏某种凝血因子，易出现自发性出血。利用细胞工程技术制备重组人凝血因子的核心流程如下：①将人凝血因子基因通过载体导入仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)；②筛选获得能稳定表达凝血因子的重组CHO细胞；③在体外培养重组CHO细胞，从培养液中收集并纯化凝血因子。下列相关分析错误的是（　　） A．步骤②中，可利用凝血因子的特异性抗体对重组CHO细胞进行筛选 B．重组CHO细胞同时具备“体外大量增殖”和“表达人凝血因子”的特性 C．步骤③的体外培养过程中，可向培养液中添加血清、抗生素等物质 D．重组人凝血因子的制备仅依赖动物细胞培养技术，不涉及其他技术 16．为实现水稻产量提升，科研人员构建含有动物来源的肥胖基因FTO cDNA的T-DNA序列如下图，用于将FTO转入水稻细胞，下列说法错误的是（    ） A．T-DNA可携带FTO整合到水稻细胞染色体DNA上 B．可用含潮霉素的培养基筛选含重组Ti质粒的农杆菌 C．Flag与FTO串联便于通过抗原抗体杂交检测目标蛋白 D．构建该T-DNA需用到逆转录酶、限制酶、DNA连接酶 17．科研人员研发了一种新型的PCR技术用于罕见病的早期诊断。传统PCR技术在检测罕见病相关基因时，由于样本中目标基因含量极低，容易出现假阴性结果。新型PCR技术通过优化引物设计，使引物能更精准地与罕见病相关基因的特定序列结合，并且调整了反应体系中Mg²⁺的浓度，显著提升了扩增效率。下列关于该新型PCR技术的叙述，正确的是（    ） A．该技术中引物的碱基序列应与待扩增的罕见病相关基因的模板链完全相同 B．Mg²⁺浓度的调整主要影响PCR反应中游离脱氧核苷酸合成DNA链的过程 C．该技术是通过提高TaqDNA聚合酶活性来实现更高效扩增罕见病相关基因的 D．优化引物设计主要是为了缩短引物的长度，使引物与模板链的特异性结合增强 18．用高通量筛选技术可快速、高效从大量微生物群体中筛选出具有特定功能或表型的菌株，高通量筛选石油降解菌的流程主要是样品采集与预处理→微型化高通量培养与单细胞分离→高通量检测“降解活性”→自动挑菌、复筛和鉴定。下列相关叙述错误的是（　　） A．配制含有石油的培养基进行选择培养，以提高目标菌株的比例 B．高通量培养需开发适宜培养基，培养基添加胰蛋白酶可获得单细胞菌体 C．显色底物经微生物降解后发生颜色变化，可用于高通量检测“降解活性” D．复筛可用于筛选高效降解菌，可通过检测目标基因的序列对菌株进行鉴定 19．基因水平转移是指基因不通过父母到子代的垂直传递，而是在不同物种间直接传递的过程。下列操作中不属于基因水平转移的是（　　） A．农杆菌侵染植物时，将Ti质粒上的T-DNA转移到植物细胞的基因组中 B．利用基因工程技术，将人的凝血因子基因通过载体导入山羊受精卵 C．土壤中的真菌可以把自身的纤维素分解酶基因传递给寄生于植物的线虫 D．用核移植技术培育“三亲婴儿”，目的是将亲代的正常基因传递给后代 20．聚羟基丁酸酯（PHB）是一种可降解塑料，可由木质素转化合成。某研究团队将关键代谢基因整合到微生物基因组中，并对工程菌进行驯化和筛选，实现了木质素向PHB的高效转化。下列叙述正确的是（　　） A．木质素为工程菌提供碳源，无需添加其他营养物质 B．对工程菌进行的驯化和筛选是通过选择培养基实现的 C．关键代谢基因整合到微生物基因组实现了诱变育种 D．获得PHB的工程菌需要利用提取、分离和纯化等技术 21．某公司拟开发一种新型碱性蛋白酶，用于高效去除衣物上的蛋白质污渍。已知天然蛋白酶X在pH=10时活性较低，且易被洗涤剂中的氧化剂破坏。研究人员计划通过蛋白质工程改造酶X，使其在碱性环境中活性提升并增强抗氧化能力。为实现上述目标，下列哪项技术手段不属于蛋白质工程的关键步骤（　　） A．利用冷冻电镜解析酶X的三维结构，确定影响pH敏感性和抗氧化性的关键氨基酸位点 B．通过体外定向进化技术，在模拟洗涤环境的培养基中筛选高活性突变体 C．将人工设计的突变基因导入毕赤酵母表达系统，验证改造后酶的催化性能 D．对产酶X的枯草芽孢杆菌进行紫外线诱变，随机筛选耐碱性菌株 22．为了培养能生产人乳铁蛋白的转基因山羊，某生物兴趣小组设计了如下技术方案。下列说法正确的是（　　） A．通过PCR获取目的基因，适当提高复性温度可减少非特异性产物产生 B．必须用同种限制酶处理目的基因和质粒，以确保目的基因和质粒成功连接 C．用含肝素的获能液处理精子，保证精子获得足够的能量完成受精作用 D．胚胎移植前用免疫抑制剂处理受体母羊，降低它对早期胚胎的免疫排斥反应 23．红梅杏是固原市的特色水果之一，带动了当地农民的收入。其色泽鲜艳、富含果糖和葡萄糖以及人体需要的微量元素、成熟期能保留足够的水分而口感鲜嫩，因此享誉全国。有人试图利用苏云金芽孢杆菌Bt毒蛋白基因培育抗虫红梅杏，以降低生产成本和环境污染，设计了如下图的方案。下列有关该研究说法错误的是（　　） A．通过基因工程技术培育的抗虫红梅杏，有利于保护环境 B．完成过程①→②一般选用双酶切法 C．在植株⑤中检测到Bt毒蛋白基因，就代表抗虫红梅杏已经培育成功 D．过程④→⑤依据了植物体细胞全能性的原理 24．近年来，转基因技术取得了众多成果，但其安全性也引发了广泛争论。面对这种情况，我们需要秉持科学理性的态度。以下关于转基因成果与安全性的说法错误的是（　　） A．生存和繁殖上有优势的转基因生物可能会破坏原有生态平衡 B．转基因抗虫棉中的Bt抗虫蛋白只在某类昆虫中表现出毒性，一般不会对人畜造成影响 C．转基因抗病毒动物的抗病毒基因可能会发生突变，转变为具有潜在致病风险的基因，因其概率极低可忽略不计 D．我国科学家将玉米的α-淀粉酶基因与目的基因一起转入植物，可阻断淀粉储藏使花粉失活，从而有效防止转基因花粉的传播 25．生物安全是指与生物有关的各种因素对社会、经济、人类健康以及生态环境所产生的危害或潜在风险。下列相关叙述错误的是（    ） A．消除生物武器威胁、防止生物武器扩散是生物安全防控的重要方面 B．由于技术问题，生殖性克隆可能孕育出有严重生理缺陷的克隆动物 C．为避免可能产生的基因歧视，基因检测机构不能随意泄露基因检测的结果 D．从外来入侵害虫的原产地引入天敌进行治理，不会对入侵地造成生态影响 二、非选择题：本题共5小题，共50分。 26．（10分，每空1分）杨梅果醋具有促进消化、抗氧化等功效，其加工工艺流程如图所示，图中A、B表示参与发酵的菌种。回答下列问题： (1)在酒精发酵阶段起主要作用的菌种A是______，在将其接种到大型发酵罐前一般要先经______和______处理，若需测定该菌的活菌数，常采用______法进行计数。A菌种和B菌种在结构上最主要的区别是______。 (2)杨梅压榨的主要目的是______。在经压榨的杨梅汁中加入一定量的蔗糖可加快酒精发酵，但若过量加入则会使发酵减慢或停止，其原因可能是______。在发酵罐中进行的酒精发酵过程通常需要监控______等（写出两点）变化。当酒精浓度达到11.4%时，菌种A会受到抑制，此时可采用______（填方法）对产物乙醇进行初步提取。 (3)在杨梅果醋的发酵工程中，防止杂菌污染是保证产品质量的关键。下列有关该生产过程中无菌操作的叙述，正确的有______。 A．在接种前，需对发酵罐进行彻底的灭菌处理 B．对压榨后的杨梅汁进行适当消毒，可有效减少杂菌污染 C．醋酸发酵阶段需要持续通入经过滤除菌处理的无菌空气 D．酒精发酵后，发酵液中的乙醇本身已能完全抑制所有杂菌生长，无需额外处理 27．（8分，除标注外每空1分）种业是农业的芯片，柑橘及其近缘属主要为有籽二倍体（2n=18），2023年3月央视报道邓秀新院士及其团队建立的细胞工程技术体系，创立了无籽柑橘品种培育的新途径。科研人员培育无籽柑橘的途径有如下流程（如下图），请回答相关问题。 (1)科研人员制备原生质体时使用到的A物质可来自蜗牛的消化道提取液，据此推测提取液中可能含有的成分是___________，取自柑橘2的M细胞处于分裂前期时含有____________个染色体组。 (2)B是培育过程的一个关键环节，常采用的物理方法有___________，经B过程得到的某些融合原生质体中检测到了4个染色体组，分析其产生的原因是____________。 (3)杂种细胞经C过程培养至幼苗阶段需使用到____________种培养基，移栽前需对幼苗进行倍性鉴定（即检测幼苗的染色体组数），结果如下图所示。请判断科研人员应选择___________（选填a、b、c）对应的幼苗继续培养以获得无籽柑橘3，简述理由是___________。（2分） 28．（13分，除标注外每空2分）紧密连接蛋白（CLDN6）是一种跨膜蛋白，在乳腺癌、肝癌等多种癌症中特异性高表达，能促进肿瘤发生、生长和迁移等，美登素（DM1）是一种抑制微管蛋白聚集的化疗药物，副作用较大。为实现DM1对肿瘤细胞的靶向作用，研究人员以CLDN6为靶点制备相应单克隆抗体并构建抗体-药物偶联物，部分过程及作用机制如图，回答下列问题。 (1)本研究中使用的抗原是______，（1分）需多次对小鼠注射该抗原，目的是______。 (2)过程③需要进行的操作是______。过程②筛选出的杂交瘤细胞还需要进行过程③处理的目的是______。 (3)过程④构建的抗体-药物偶联物（CLDN6抗体-DM1），其中CLDN6抗体是图中的______（填“a”或“b”）部分。 (4)据图分析CLDN6抗体-DM1能特异性杀伤肝肿瘤细胞的机制是______。若用红色荧光分别标记CLDN6抗体-DM1和IgG-DM1（中和某种毒素抗体-DM1），再处理肝肿瘤细胞来证明上述机制，则观察到两组肝肿瘤细胞内的现象是_____。 29．（11分，除标注外每空2分）2025年我国某海域养殖的鲍鱼、海参爆发“白化病”，病原体为新型嗜盐古菌，其分泌的白化毒素A（WhnA）是致病的关键，该毒素合成酶基因whnA部分序列已测定。研究团队通过基因克隆、细胞工程及转基因技术防控，图1和图2为反向PCR的原理。请回答下列问题： (1)已知EDTA可抑制DNA酶的活性。提取嗜盐古菌基因组DNA并提纯DNA时，需在含有EDTA的缓冲液中剧烈振荡并加入蛋白酶K，推测EDTA和蛋白酶K的主要作用分别是______。图1中，用限制酶EcoRI切割基因whnA时，产生的黏性末端为5′-______-3′。（1分） (2)据图2分析，以环化DNA为模板进行PCR扩增时，需确保引物A与引物B的3'端分别指向环化DNA的______（填“已知序列”或“未知序列”）方向。（1分）PCR中，引物的作用是_____。 (3)制备抗白化毒素A的单克隆抗体时，脾脏B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合的常用物理诱导方法是_____；（1分）融合后第二次筛选过程中，进行抗体检测所利用的原理是______。构建“抗病藻类生物滤器”时，若要定量评估基因whnA上游调控序列在不同盐度下的活性，可将该调控序列与绿色荧光蛋白（GFP）基因融合构建报告载体，通过检测______反映该调控序列的活性大小。 30．（8分，除标注外每空1分）近来，科研人员将光遗传学技术(光控蛋白的时空特异性调控)和传统 CRISPR/Cas9系统结合，构建出光控CRISPR/Cas9系统，实现了对基因编辑、转录调控的时空精准化操控，如图1所示。回答下列问题。 (1)传统CRISPR/Cas9系统是由 sgRNA 和 Cas9 蛋白形成的复合物，其中前者可以识别并结合目标基因序列，同时引导后者切割目标基因并断裂其________(填化学键名称)，由此说明，该系统具有类似________酶的功能。sgRNA 识别目标基因的原理是_______，在实际应用中，sgRNA 的识别序列越________(填“长”或“短”)，基因编辑的错误率往往越高。 (2)核定位序列和核输出序列分别引导蛋白质定位于细胞核和细胞质，Cas9(N)蛋白1复合物和 Cas9(C)蛋白2复合物在细胞中相遇时可结合成 Cas9全酶并恢复活性。由图1可知，接受远红光刺激后，激活的 BphS蛋白促使 GTP 转化成 GMP，该物质与pVPBD蛋白结合后，转移到细胞核，激活远红光诱导启动子，诱导________基因进行转录。 (3)科研人员将该光控CRISPR/Cas9系统递送至红色荧光报告小鼠的肝脏(红色荧光蛋白基因前有一段特殊序列，当Cas9对该序列进行切割并破坏其功能后，红色荧光蛋白基因大量表达)，因此通过观察不同条件下________，即可得知肝脏细胞中 DNA 被编辑的情况。实验结果显示，该系统在个体中能够有效进行基因编辑，请在图2中画出相应实验结果________。（2分） 2 / 2 学科网（北京）股份 学科网（北京）股份有限公司 $ 2025-2026学年高二下学期期中模拟测试卷01 生 物·参考答案 1、 单项选择题：本题共25个小题，每小题2分，共50分。 题号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 答案 D D C B B A A B B B 题号 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 答案 C B C D D B B B D B 题号 21 22 23 24 25 答案 D A C C D 二、非选择题（5小题，共50分） 26．（每空2分，共10分） (1)酵母菌 活化 扩大培养（扩增） 稀释涂布平板法 有无核膜包被的细胞核 (2)使细胞破裂（细胞内营养物质外流，增加酵母菌与底物的接触，加快发酵进程） 导致酵母菌因失水活性降低或死亡 营养供给、酒精浓度、温度、pH 真空发酵 (3)ABC 27．（每空2分，共10分） (1)纤维素酶和果胶酶 2/二/两 (2)离心、振动、电激 含有柑橘1和柑橘2的全部染色体 (3)3 c 含有的染色体数目最多 28．（每空2分，共10分） (1)CLDN6蛋白 刺激机体产生更多的能产生抗体的B淋巴细胞 (2)克隆化培养和抗体检测 得到能分泌抗CLDN6蛋白的杂交瘤细胞 (3)a (4)CLDN6抗体-DM1特异性与肝肿瘤细胞表面的CLDN6结合后，进入细胞中，通过溶酶体裂解，将DM1释放出来发挥作用，导致肿瘤细胞裂解死亡 用红色荧光标记的CLDN6抗体-DM1处理肝肿瘤细胞可在细胞及溶酶体中检测到红色荧光，而用IgG-DM1处理则不能检测到 29．（每空2分，共10分） (1)EDTA可防止DNA降解，蛋白酶K可降解细胞内的蛋白质从而纯化DNA AATT (2)未知序列 使DNA聚合酶能够从引物的3’端开始连接脱氧核苷酸 (3)电融合法 抗原与抗体特异性结合 绿色荧光强度/GFP的表达量 30．（每空2分，共10分） (1)磷酸二酯键 限制 碱基互补配对 短 (2)Cas9(N) (3)肝脏组织的红色荧光强度 2 / 2 学科网（北京）股份有限公司 $ 2025-2026学年高二下学期期中模拟测试卷01 生 物 （满分100分，考试用时75分钟） 注意事项： 1．答卷前，考生务必用黑色字迹的钢笔或签字笔将自己的准考证号、姓名、考场号和座位号填写在答题卡上。用2B铅笔在“考场号”和“座位号”栏相应位置填涂自己的考场号和座位号。将条形码粘贴在答题卡“条形码粘贴处”。 2．作答选择题时，选出每小题答案后，用 2B 铅笔把答题卡上对应题目选项的答案信息点涂黑；如需改动，用橡皮擦干净后，再选涂其他答案，答案不能答在试卷上。 3．非选择题必须用黑色字迹的钢笔或签字笔作答，答案必须写在答题卡各题目指定区域内相应位置上；如需改动，先划掉原来的答案，然后再写上新的答案；不准使用铅笔和涂改液。不按以上要求作答的答案无效。 4．考生必须保持答题卡的整洁。考试结束后，将试卷和答题卡一并交回。 5．测试范围：人教版高中选择性必修3全部。 6. 难度系数：0.65。 一、选择题：本题共25个小题，每小题2分，共50分。每小题只有一个选项符合题目要求。 1．（检测手机表面微生物）涂抹法可用于手机表面的微生物检测，其操作为用湿润的无菌棉签，在手机表面一定区域内均匀擦拭，然后将棉签在固体培养基表面进行滚动涂抹，培养后计数菌落。下列叙述错误的是（　　） A．将棉签浸湿时可使用无菌水 B．可使用酒精擦拭表面对手进行消毒 C．需要同时培养空白培养基作为对照 D．统计的菌落数即手机调查区域细菌的实际数 【答案】D 【详解】A、湿润棉签需保证无菌且不引入杂菌，使用无菌水浸湿可避免污染，A正确； B、操作前用酒精消毒双手，可减少操作者手部微生物对实验的干扰，B正确； C、设置空白对照组（不接种的培养基）可检测培养基是否被污染，排除非目标微生物的影响，C正确； D、菌落数不等于实际细菌数，因单个菌落可能由多个细菌聚集形成，且部分细菌可能未形成可见菌落，D错误。 故选D。 2．（新情境·金龟子绿僵菌）金龟子绿僵菌（Ma）是一种昆虫病原真菌，可以侵染某些农林害虫。Ma寄生时其孢子（单细胞后代）萌发后侵入昆虫体内大量增殖并产生毒素，导致寄主僵化、死亡。下列叙述错误的是（　　） A．可利用Ma开发成微生物杀虫剂 B．为分离Ma可从研磨的僵虫组织中取样 C．稀释涂布平板法可用于分离样品中的Ma D．接种培养Ma时使用的器具需消毒 【答案】D 【详解】A、金龟子绿僵菌（Ma）作为昆虫病原真菌，可通过寄生导致害虫死亡，符合微生物杀虫剂的特点，可用于生物防治，A正确； B、僵化死亡的昆虫体内含有大量Ma菌体，因此从研磨的僵虫组织取样是分离Ma的合理方法，B正确； C、稀释涂布平板法可通过梯度稀释和菌落形成来分离纯化微生物，适用于分离样品中的Ma，C正确； D、微生物培养中，接种环等直接接触菌种的器具需严格灭菌（如灼烧灭菌），而非仅消毒，消毒无法彻底杀灭微生物的芽孢或孢子，D错误。 故选D。 3．（实验探究）某实验小组从老浆水中筛选出对胃酸有较强耐受力的乳酸菌株，并进行抑菌培养（将灭菌牛津杯置于接种某菌的平板上，杯中注入待测溶液等），流程如图。其中A、B分别表示含等量JYF2和JYF3乳酸菌菌液的牛津杯（圆形小管）。下列说法错误的是（　　） A．为了满足乳酸菌生长繁殖的需求，培养基需要添加维生素 B．过程Ⅰ采用的接种方法是平板划线法 C．图中C可表示含等量清水的牛津杯 D．抑菌测试时，可将A、B、C牛津杯放在涂布有大肠杆菌的培养基上混合培养，并观察抑菌圈大小 【答案】C 【详解】A、乳酸菌是厌氧菌，在培养时需要无氧环境，且培养基中需添加维生素，因为乳酸菌自身不能合成某些维生素，需要从培养基中获取，A正确； B、分析题图可知，过程Ⅰ采用的接种方法是平板划线法，B正确； C、在实验中，为了设置对照，需要有不含待测菌液的对照组，C应表示含等量无菌水的牛津杯，作为空白对照，C错误； D、抑菌测试时，将A、B、C牛津杯放在涂布有大肠杆菌的培养基上混合培养，乳酸菌产生的代谢产物会抑制大肠杆菌的生长，从而形成抑菌圈，通过观察抑菌圈大小可以判断乳酸菌的抑菌效果，D正确。 故选C。 4．（科学思维）物质D是某细菌繁殖所需的必需营养物质，在野生型细菌体内的合成途径为A→B→C→D。现有5株物质D合成缺陷型突变菌，每株仅存在合成途径中1个或2个步骤的合成缺陷，且该途径中间产物积累到一定程度时可分泌至细胞外。为确定各菌株的缺陷类型，研究人员将5株缺陷菌依次均匀划线接种于不含B、C、D三种物质的培养基上，生长情况如图。向培养基中加入铁的配合物（可与物质C发生特异性显色反应），在菌株2的b端、菌株5的a端和b端出现明显显色反应。下列说法错误的是（　　） A．培养基应在灭菌前将pH调至中性或弱碱性 B．菌株3、4均不能利用物质A为原料合成物质B C．菌株5的a、b端的物质D来源于菌株1、4的分泌 D．若在培养基中添加物质C，菌株3的a端仍不会出现菌落 【答案】B 【详解】A、培养基应先将pH调至中性或弱碱性，最后灭菌，A正确； BCD、题干描述菌株2的b端、菌株5的a端和b端出现明显显色反应说明在这些地方产生了大量的C，不能向D转变，因此菌株2和菌株5都不能完成由C→D的过程。但图中展示5的a、b端都产生了菌落，临近的1只有a端，4只有b端产生了菌落，说明菌株1和菌株4利用了菌株5产生的C合成了D才能生长，菌株5利用菌株1、4合成并分泌的D实现了生长，而菌株1和4本身不能完成由A→B或不能完成由B→C的过程，C正确。再分析菌株2的b端可以产生C并分泌，说明菌株2能完成由B→C的过程，但不能完成由C→D的过程，但菌株2的a端并没有积累C物质，说明菌株2的b端能产生C物质是因为临近的菌株3为其提供了物质B，而菌株1的b端不能为其提供物质B，由此证明菌株3能完成由A→B的过程，菌株1不能完成该过程，B错误。图中菌株2的b端能为3的a端提供C物质，但仍然没有菌株生长，因此菌株3不能完成由C→D的过程，再培养基中添加物质C，菌株3仍不会出现菌落，D正确。 故选B。 5．（地域特色）甘肃特色发酵食品甜醅子，通常以莜麦或青稞为原料发酵制成，口感香甜且带有酒香。关于甜醅子发酵过程的叙述，错误的是（    ） A．甜醅子发酵主要利用的是酵母菌，酵母菌无氧呼吸产生酒精使其有独特风味 B．甜醅子发酵后期需不断搅拌原料，增加氧气含量，从而促进酵母菌快速繁殖 C．需将发酵温度控制在，此温度是发酵微生物生长和代谢的适宜温度 D．对莜麦或青稞进行清洗后需要适当晾干，从而防止水分过多影响微生物发酵 【答案】B 【详解】A、甜醅子的独特酒香源于酵母菌无氧呼吸产生的酒精，酵母菌是发酵的主要微生物，A正确； B、酒精发酵需严格无氧环境，搅拌增氧会促使酵母菌进行有氧呼吸，抑制酒精生成，且发酵后期无需促进繁殖，B错误； C、25~30℃是酵母菌最适生长温度，利于其代谢活动和发酵效率，C正确； D、适当晾干可控制水分含量，避免水分过高稀释发酵产物或抑制微生物活动，D正确。 故选B。 6．河南某中学兴趣小组尝试利用本地特产-南阳黄酒酒曲，分离高产糖化酶的霉菌，用于优化黄酒生产工艺。实验基本流程为：酒曲研磨→梯度稀释→涂布马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）平板→培养→筛选透明圈大的菌落。下列相关叙述错误的是（　　） A．配制PDA培养基时，添加葡萄糖的目的是作为唯一碳源 B．在平板上滴加碘液进行染色，若菌落周围出现透明圈，说明该霉菌可能分泌淀粉酶 C．分离纯化得到的菌种，常在酸性条件下保存 D．发酵过程中需监测菌体密度、还原糖浓度和pH值等参数，以评估发酵进程 【答案】A 【详解】A、配制PDA培养基时，葡萄糖虽可作为碳源，但马铃薯提取物中也含有机碳源（如淀粉），因此葡萄糖并非唯一碳源，A错误； B、碘液可与淀粉结合显蓝色，若菌落周围出现透明圈，说明淀粉被水解，表明该霉菌可能分泌淀粉酶，B正确； C、在培养霉菌时，一般需要将培养基调至酸性；分离纯化得到的菌种，常在酸性条件下保存，C正确； D、发酵过程中需实时监测菌体密度（反映生长情况）、还原糖浓度（反映底物消耗）和pH值（影响酶活性），以优化发酵进程，D正确。 故选A。 7．儒艮是一种珍稀的海洋哺乳动物。为提高人们对儒艮生存威胁的认识，每年的5月28日被定为世界儒艮日。下列用于提高儒艮种群繁殖能力或提高其种群数量的措施，错误的是（　　） A．采用细胞融合技术将雌雄配子融合，培育儒艮 B．采用动物体细胞核移植技术，获得克隆儒艮 C．采用体外受精技术，提高儒艮的繁殖能力 D．采用胚胎分割技术，增加儒艮胚胎的数量 【答案】A 【详解】A、细胞融合技术是将两个或多个细胞融合成一个细胞，无法直接将雌雄配子融合培育新个体。雌雄配子的融合属于受精作用，不是细胞融合技术的应用范畴，A错误； B、动物体细胞核移植技术（克隆技术）可将体细胞核移入去核卵细胞，培育新个体，获得克隆儒艮，B正确； C、体外受精技术可克服自然受精障碍，提高受精成功率，有效提升繁殖能力，C正确； D、胚胎分割技术将早期胚胎分割成多份，经移植可发育为多个个体，能成倍增加胚胎利用率，D正确。 故选A。 8．2025年2月，青岛农业大学成功克隆出马尔济斯幼犬。一直以来，犬类克隆被认为是体细胞克隆方面的技术高地。犬科动物缺少高效同期发情和体外成熟体系，可用的卵子数量较少，同时，犬科动物细胞核不可见，导致细胞核去除效率降低，这些都限制了克隆犬的生产效率和技术推广。下列相关叙述错误的是（　　） A．可使用外源促性腺激素促进母犬超数排卵 B．胚胎移植前要对受体进行免疫检查，以防止其排斥移入的胚胎 C．去核就是去除MⅡ期卵母细胞中的纺锤体——染色体复合物 D．胚胎移植的实质是早期胚胎在相同生理环境下空间位置的转移 【答案】B 【详解】A、促性腺激素可促进母犬超数排卵，以获取更多卵母细胞用于核移植，A正确； B、胚胎移植时，受体对移入的胚胎通常不会发生免疫排斥，无需进行免疫检查，B错误； C、去核操作需去除MⅡ期卵母细胞的纺锤体-染色体复合物，确保供体核的遗传物质主导发育，C正确； D、胚胎移植的实质是将早期胚胎转移到生理状态相同的受体子宫内继续发育，D正确。 故选B。 9．每年4月份，洛阳牡丹盛开，吸引着大批国内外的游客前来观赏。除了观赏价值外，牡丹还有重要的药用价值，其含有的黄酮类化合物具有抗氧化和抗菌等作用。现对牡丹进行如图所示的相关处理，下列相关叙述正确的是（　　） A．若过程①的A部位为根尖或茎尖，则可获得抗病毒植株 B．图示培养基中需要添加起调节作用的植物激素和供能的糖类 C．愈伤组织分化程度高，易受培养条件和诱变因素的影响 D．过程⑥可获得大量的黄酮类化合物，与植物细胞的全能性有关 【答案】B 【详解】A、根尖或茎尖细胞进行植物组织培养得到的是脱毒植株，不是抗病毒植株（抗病毒需转入抗病毒基因等操作），A错误； B、植物组织培养培养基需要添加生长素、细胞分裂素等植物激素调节分化，且需要蔗糖供能，B正确； C、愈伤组织是未分化的细胞团，分化程度低，C错误； D、过程⑥是培养愈伤组织获取黄酮类化合物，利用的是细胞增殖，未体现植物细胞全能性，D错误。 故选B。 10．中国科学家成功培育出世界首例高嵌合率灵长类嵌合猴，试验操作步骤如图。检测发现该猴全身多组织嵌合率达67%，表现出荧光色的手指，墨绿色的眼睛，颜色不均的毛发。嵌合猴的培育为研究器官发育和疾病治疗提供了重要模型。下列叙述错误的是（　　） A．胚胎干细胞和重构胚的培养液中通常加入血清 B．重构胚需培养到原肠胚时期才能进行胚胎移植 C．嵌合体猴d的遗传性状由a和b的遗传物质决定 D．重构胚在移植前需要用电刺激、Ca²⁺载体等激活 【答案】B 【详解】A、胚胎干细胞和重构胚的培养液中通常加入血清，以提供天然营养物质，A正确； B、胚胎移植通常选择桑葚胚或囊胚时期，B错误； C、嵌合体猴d重构胚的获得是将供体猴的胚胎干细胞注入到受体猴b的胚胎中，嵌合体猴d的遗传物质来自a和b，C正确； D、用物理或化学方法(如电刺激、Ca2+载体、 乙醇和蛋白酶合成抑制剂等)激活重构胚，使其完成细胞分裂和发育进程，然后进行胚胎移植，D正确。 故选B。 11．甘蔗花叶病是一种严重的病害，由甘蔗花叶病毒引起。该病毒以甘蔗为寄主，传播途径包括种蔗携带和田间土壤中的病毒，培育甘蔗脱毒苗的途径如图所示。下列叙述错误的是（　　） A．用茎尖进行脱毒，原因是茎尖不携带病毒或携带的病毒极少 B．②的温度处理可能会促进甘蔗茎尖组织中的病毒失去活性 C．在培养基A中进行脱分化处理可以得到胚状体 D．培养基B中的植物激素比例不同于培养基A中的，且需要适当的光照 【答案】C 【分析】植物的茎尖病毒极少，甚至无病毒，取芽培养可以利用其较强的分裂和分化能力培养脱毒苗，经过脱水处理脱毒效果好与阻碍病毒进入有一定的关系，图中的③、④均属于再分化。 【详解】A、由于茎尖不携带病毒或携带的病毒极少，所以用茎尖进行脱毒，获取脱毒苗，A正确； B、高温会使病毒的蛋白质变性，经过②的温度处理，可能会促进甘蔗茎尖组织中的病毒失去活性，B正确； C、在培养基A中进行再分化处理，诱导生芽，C错误； D、培养基B诱导生根，培养基A诱导生芽，诱导生根时，培养基中的生长素与细胞分裂素的比例更大，且需要适当的光照，有利于叶绿素的合成，D正确。 故选C。 12．线粒体替代疗法（MRT）是一种细胞质替换技术，将目标细胞核转移到健康去核细胞中以预防细胞质基因遗传病，主要包括受精卵细胞核移植（PNT）和卵母细胞纺锤体—染色体复合物移植（ST）两种方法。已知在卵母细胞中，纺锤体区域的线粒体数量较少，而受精卵中线粒体均匀分布。下列说法正确的是（　　） A．与ST相比，PNT的操作时间较早，细胞较为脆弱，因此成功率比ST低 B．与PNT相比，ST能够更好地避免线粒体DNA的遗传 C．只有通过PNT获得的胚胎才可能拥有三个个体的遗传物质 D．ST没有对胚胎进行操作，因此ST结束后不需要对重构胚进行激活处理 【答案】B 【分析】细胞质基因存在于线粒体等细胞器中，具有母系遗传的特点，即后代的细胞质基因主要来自母方。 【详解】A、PNT是受精卵细胞核移植，受精卵比卵母细胞发育程度高，操作时间较晚，A错误； B、因为卵母细胞中纺锤体区域线粒体数量较少，ST将卵母细胞纺锤体—染色体复合物移植到去核卵母细胞中，能更好地避免线粒体DNA的遗传，B正确； C、PNT是将受精卵的细胞核移植到去核的健康细胞中，ST是将卵母细胞的纺锤体—染色体复合物移植到去核卵母细胞中，这两种方法获得的胚胎都拥有供核方、供质方以及精子来源方三个个体的遗传物质，C错误；   D、不管是PNT还是ST，重构胚都需要进行激活处理才能正常发育，D错误。 故选B。 13．沙子岭猪是国家地理标志农产品，不仅具有产仔数量多、生长速度快、瘦肉率较高、肉质优良等独特特性，还具有杂交效果好、耐粗饲、适应性强、抗病力强等良好的遗传特性。2025年1月，湖南首例体细胞克隆猪——沙子岭猪克隆猪在湘潭县诞生，其生产流程如图所示，下列有关叙述错误的是（　　） A．沙子岭猪的胚胎细胞核移植比体细胞核移植更容易成功 B．可以用乙醇激活重构胚，使其完成细胞分裂和发育进程 C．胚胎移植之前需切取滋养层细胞做DNA分析和性别鉴定 D．图中克隆猪的多种优良特性与沙子岭猪相同，不受代孕母体影响 【答案】C 【分析】体细胞克隆技术是指采用核移植的方法，利用细胞拆合或细胞重组技术，将卵母细胞去核作为核受体，以体细胞或含少量细胞质的细胞核即核质体作为核供体，将后者移入前者中，构建重组胚，供体核在去核卵母细胞的胞质中重新编程，并启动卵裂，开始胚胎发育过程，妊娠产仔，克隆出动物的技术。 【详解】A、由于胚胎细胞的分化程度低，恢复全能性容易，因此胚胎细胞核移植比体细胞核移植更容易成功，A正确； B、在克隆技术中，可以采用电刺激、乙醇等方法激活重构胚，使其完成细胞分裂和发育进程，这是常见的激活重构胚的方法，B正确； C、克隆的动物，性别不需要做鉴定，是已知的性别，与供体性别一致，C错误； D、代孕母体仅为胚胎提供营养物质及适宜的发育环境，一般不会影响其遗传特性，D正确。 故选C。 14．科研团队探究不同预处理温度对洋葱DNA提取效果的影响。将洋葱分别置于4℃、25℃、-20℃处理24小时，按统一流程进行DNA粗提取（研磨→过滤→加2mol/LNaCl溶解→加冷酒精析出DNA）。实验结果：4℃组：滤液澄清，但DNA析出量少，丝状物稀疏；25℃组：研磨后呈糊状，过滤困难，滤液浑浊，DNA析出物含较多杂质；-20℃组：解冻后细胞易破碎，滤液量大，DNA析出量多且丝状物粗壮。下列对实验结果分析正确的是（　　） A．4℃组DNA析出量少是因低温提高了DNA在酒精中的溶解度 B．25℃组过滤困难是因高温导致DNA变性凝固堵塞滤网所致 C．三组实验均需在析出DNA时快速搅拌，以增加DNA的获取量 D．-20℃组效果最佳的原因是冷冻破坏了细胞结构且抑制DNA酶活性 【答案】D 【详解】A、分析题意可知，4℃组DNA析出量少可能是因低温导致细胞破碎不充分，DNA释放量少，A错误； B、25℃组过滤困难是因常温下细胞内容物（如果胶、多糖等）大量释放，使研磨液黏稠呈糊状，堵塞滤网，并非DNA变性凝固（DNA变性需高温），B错误； C、获取DNA时需要用玻璃棒轻缓搅拌，以保证DNA分子完整，C错误； D、-20℃冷冻使细胞中水分结晶，破坏细胞膜结构（解冻后细胞易破碎），同时低温显著抑制DNA酶活性，减少DNA降解，因此DNA析出量多且纯度高，D正确。 故选D。 15．血友病患者体内缺乏某种凝血因子，易出现自发性出血。利用细胞工程技术制备重组人凝血因子的核心流程如下：①将人凝血因子基因通过载体导入仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)；②筛选获得能稳定表达凝血因子的重组CHO细胞；③在体外培养重组CHO细胞，从培养液中收集并纯化凝血因子。下列相关分析错误的是（　　） A．步骤②中，可利用凝血因子的特异性抗体对重组CHO细胞进行筛选 B．重组CHO细胞同时具备“体外大量增殖”和“表达人凝血因子”的特性 C．步骤③的体外培养过程中，可向培养液中添加血清、抗生素等物质 D．重组人凝血因子的制备仅依赖动物细胞培养技术，不涉及其他技术 【答案】D 【详解】A、步骤②筛选重组CHO细胞时，可利用抗原-抗体杂交原理，通过凝血因子特异性抗体检测细胞是否表达目标蛋白，从而筛选成功转化的细胞，A正确； B、重组CHO细胞需在体外培养中持续分裂增殖（体外大量增殖），同时稳定表达人凝血因子基因产物，B正确； C、动物细胞培养液中需添加血清（提供生长因子等必需成分）和抗生素（防止细菌污染），以维持细胞生长和产物合成，C正确； D、流程中步骤①涉及基因工程，步骤②③涉及动物细胞培养技术，因此该过程是基因工程与细胞工程的综合应用，D错误。 故选D。 16．为实现水稻产量提升，科研人员构建含有动物来源的肥胖基因FTO cDNA的T-DNA序列如下图，用于将FTO转入水稻细胞，下列说法错误的是（    ） A．T-DNA可携带FTO整合到水稻细胞染色体DNA上 B．可用含潮霉素的培养基筛选含重组Ti质粒的农杆菌 C．Flag与FTO串联便于通过抗原抗体杂交检测目标蛋白 D．构建该T-DNA需用到逆转录酶、限制酶、DNA连接酶 【答案】B 【详解】A、 农杆菌转化植物时，Ti质粒的T-DNA会从农杆菌转移到植物细胞，并随机整合到植物染色体DNA 上，因此携带的FTO基因也会一同整合，A正确； B、图中潮霉素抗性基因的启动子是植物细胞特异性启动子（仅在植物细胞中启动转录），而农杆菌是原核生物，该启动子在农杆菌中无法激活潮霉素抗性基因的表达。因此，含重组Ti质粒的农杆菌仍对潮霉素敏感，无法在含潮霉素的培养基中存活，B错误； C、Flag是一种短肽标签，与FTO基因串联后，会表达出 “FTO 蛋白 + Flag 标签” 的融合蛋白。利用抗Flag的抗体进行抗原 - 抗体杂交，可高效检测FTO蛋白是否成功表达，C正确； D、逆转录酶：用于以动物FTO基因的mRNA为模板，逆转录合成cDNA（图中FTO以cDNA形式存在）。 限制酶：切割载体（Ti质粒的T-DNA区）和目的基因（FTOcDNA），产生互补黏性末端。 DNA连接酶：连接切割后的载体与目的基因，形成重组T-DNA，D正确。 故选B。 17．科研人员研发了一种新型的PCR技术用于罕见病的早期诊断。传统PCR技术在检测罕见病相关基因时，由于样本中目标基因含量极低，容易出现假阴性结果。新型PCR技术通过优化引物设计，使引物能更精准地与罕见病相关基因的特定序列结合，并且调整了反应体系中Mg²⁺的浓度，显著提升了扩增效率。下列关于该新型PCR技术的叙述，正确的是（    ） A．该技术中引物的碱基序列应与待扩增的罕见病相关基因的模板链完全相同 B．Mg²⁺浓度的调整主要影响PCR反应中游离脱氧核苷酸合成DNA链的过程 C．该技术是通过提高TaqDNA聚合酶活性来实现更高效扩增罕见病相关基因的 D．优化引物设计主要是为了缩短引物的长度，使引物与模板链的特异性结合增强 【答案】B 【详解】A、引物是一段与模板DNA链特定区域互补的单链核苷酸序列，需遵循碱基互补配对原则与模板链结合。若引物碱基序列与模板链完全相同，则无法实现特异性结合与扩增，A错误。 B、Mg²⁺是DNA聚合酶催化反应的必需辅因子，参与激活酶活性，直接影响游离脱氧核苷酸聚合成DNA链的过程，B正确。 C、题干强调优化措施为引物设计和Mg²⁺浓度调整，未涉及改变Taq酶活性。Taq酶活性主要受温度及反应条件影响，C错误。 D、优化引物设计的核心是提高特异性，而非缩短引物长度。引物过长或过短均可能影响结合效率，长度需根据靶序列特性科学设计，D错误。 故选B。 18．用高通量筛选技术可快速、高效从大量微生物群体中筛选出具有特定功能或表型的菌株，高通量筛选石油降解菌的流程主要是样品采集与预处理→微型化高通量培养与单细胞分离→高通量检测“降解活性”→自动挑菌、复筛和鉴定。下列相关叙述错误的是（　　） A．配制含有石油的培养基进行选择培养，以提高目标菌株的比例 B．高通量培养需开发适宜培养基，培养基添加胰蛋白酶可获得单细胞菌体 C．显色底物经微生物降解后发生颜色变化，可用于高通量检测“降解活性” D．复筛可用于筛选高效降解菌，可通过检测目标基因的序列对菌株进行鉴定 【答案】B 【详解】A、配制含石油的培养基进行选择培养，可抑制非降解菌生长，使目标菌株（石油降解菌）富集，提高其在菌群中的比例，A正确； B、高通量培养需开发适宜培养基，但添加胰蛋白酶主要用于动物组织消化，微生物单细胞分离通常采用过滤、沉淀等方法将菌体分离和干燥，胰蛋白酶不适用于微生物单细胞菌体制备，B错误； C、显色底物（如含染色剂的石油类似物）被微生物降解后，底物颜色变化可指示降解活性，便于高通量检测，C正确； D、复筛可评估菌株降解效率以筛选高效菌株，通过PCR扩增目标基因（如烃类降解酶基因）并测序，可进行菌株分子鉴定，D正确。 故选B。 19．基因水平转移是指基因不通过父母到子代的垂直传递，而是在不同物种间直接传递的过程。下列操作中不属于基因水平转移的是（　　） A．农杆菌侵染植物时，将Ti质粒上的T-DNA转移到植物细胞的基因组中 B．利用基因工程技术，将人的凝血因子基因通过载体导入山羊受精卵 C．土壤中的真菌可以把自身的纤维素分解酶基因传递给寄生于植物的线虫 D．用核移植技术培育“三亲婴儿”，目的是将亲代的正常基因传递给后代 【答案】D 【详解】A、农杆菌的Ti质粒通过侵染将T-DNA（含外源基因）整合到植物基因组中，实现了细菌与植物间的跨物种基因传递，属于基因水平转移，A正确； B、利用载体将人凝血因子基因导入山羊受精卵，使人类基因在山羊中表达，实现了跨物种（人→动物）的基因转移，属于基因水平转移，B正确； C、真菌将自身基因直接传递给线虫（不同物种），属于自然界中微生物间的基因水平转移，C正确； D、核移植技术培育"三亲婴儿"是将父母细胞核与捐赠者去核卵细胞结合，本质是细胞核移植而非基因跨物种传递。后代基因仍来自父母双方的细胞核DNA，捐赠者仅提供线粒体DNA（非主要基因），未发生不同物种间的基因转移，D错误。 故选D。 20．聚羟基丁酸酯（PHB）是一种可降解塑料，可由木质素转化合成。某研究团队将关键代谢基因整合到微生物基因组中，并对工程菌进行驯化和筛选，实现了木质素向PHB的高效转化。下列叙述正确的是（　　） A．木质素为工程菌提供碳源，无需添加其他营养物质 B．对工程菌进行的驯化和筛选是通过选择培养基实现的 C．关键代谢基因整合到微生物基因组实现了诱变育种 D．获得PHB的工程菌需要利用提取、分离和纯化等技术 【答案】B 【详解】A、木质素主要提供碳源，但微生物生长还需氮源、无机盐等，仅木质素无法满足所有营养需求，A错误； B、驯化和筛选工程菌时，选择培养基能抑制其他微生物生长，从而筛选出目标菌株，B正确； C、关键代谢基因整合到微生物属于基因工程（转基因技术），而非诱变育种（由物理、化学等因素诱导基因突变），C错误； D、“获得PHB的工程菌”需通过基因工程构建和筛选，而提取、分离和纯化技术用于获取PHB产物本身，D错误。 故选B。 21．某公司拟开发一种新型碱性蛋白酶，用于高效去除衣物上的蛋白质污渍。已知天然蛋白酶X在pH=10时活性较低，且易被洗涤剂中的氧化剂破坏。研究人员计划通过蛋白质工程改造酶X，使其在碱性环境中活性提升并增强抗氧化能力。为实现上述目标，下列哪项技术手段不属于蛋白质工程的关键步骤（　　） A．利用冷冻电镜解析酶X的三维结构，确定影响pH敏感性和抗氧化性的关键氨基酸位点 B．通过体外定向进化技术，在模拟洗涤环境的培养基中筛选高活性突变体 C．将人工设计的突变基因导入毕赤酵母表达系统，验证改造后酶的催化性能 D．对产酶X的枯草芽孢杆菌进行紫外线诱变，随机筛选耐碱性菌株 【答案】D 【分析】蛋白质工程是指以蛋白质分子的结构规律及其生物功能的关系作为基础，通过基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行改造，或制造一种新的蛋白质，以满足人类的生产和生活的需求。 【详解】A、蛋白质工程的核心是基于结构的理性设计或可控的定向进化。结构解析为改造提供理论依据，利用冷冻电镜解析酶X的三维结构，确定影响pH敏感性和抗氧化性的关键氨基酸位点，这是为蛋白质工程提供理论支撑，不符合题意，A错误； B、定向进化属于蛋白质工程的体外筛选技术，不符合题意，B错误； C、将人工设计的突变基因导入毕赤酵母表达系统，验证改造后酶的催化性能，这是基因表达验证阶段，该阶段是蛋白质工程化改造的必要环节，不符合题意，C错误； D、紫外线诱变属于传统随机诱变技术，未针对目标蛋白进行定向设计，不属于蛋白质工程，符合题意，D正确。 故选D。 22．为了培养能生产人乳铁蛋白的转基因山羊，某生物兴趣小组设计了如下技术方案。下列说法正确的是（　　） A．通过PCR获取目的基因，适当提高复性温度可减少非特异性产物产生 B．必须用同种限制酶处理目的基因和质粒，以确保目的基因和质粒成功连接 C．用含肝素的获能液处理精子，保证精子获得足够的能量完成受精作用 D．胚胎移植前用免疫抑制剂处理受体母羊，降低它对早期胚胎的免疫排斥反应 【答案】A 【详解】A、PCR扩增目的基因时，适当提高复性温度，可减少与引物不完全配对从而导致的非特异性扩增，A正确； B、在基因工程中，目的基因和质粒通常使用同种限制酶切割，这样可以产生相同的黏性末端或平末端，便于连接，但并非必须使用同种限制酶，只要目的基因和质粒的切割末端能够互补配对，就可以成功连接，B错误； C、精子的“获能”主要是指其在与卵细胞结合前完成细胞膜结构和功能上的一系列变化，使其具备受精能力，并非为精子提供“足够能量”，C错误； D、同种动物的早期胚胎移植通常不需要额外注射免疫抑制剂来防止排异，D错误。 故选A。 23．红梅杏是固原市的特色水果之一，带动了当地农民的收入。其色泽鲜艳、富含果糖和葡萄糖以及人体需要的微量元素、成熟期能保留足够的水分而口感鲜嫩，因此享誉全国。有人试图利用苏云金芽孢杆菌Bt毒蛋白基因培育抗虫红梅杏，以降低生产成本和环境污染，设计了如下图的方案。下列有关该研究说法错误的是（　　） A．通过基因工程技术培育的抗虫红梅杏，有利于保护环境 B．完成过程①→②一般选用双酶切法 C．在植株⑤中检测到Bt毒蛋白基因，就代表抗虫红梅杏已经培育成功 D．过程④→⑤依据了植物体细胞全能性的原理 【答案】C 【详解】A、通过基因工程培育抗虫红梅杏，植株自身可表达 Bt 毒蛋白实现抗虫，能减少农药的使用量，从而降低环境污染、保护生态环境，A正确； B、过程①—②是构建重组 Ti 质粒（将 Bt 毒蛋白基因与 Ti 质粒连接），为了避免目的基因（Bt 毒蛋白基因）和载体（Ti 质粒）发生 “自身环化”，同时保证目的基因与载体的正确连接方向，通常会选择双酶切法（用两种不同的限制酶切割目的基因和载体），B正确； C、基因工程培育抗虫植株的 “成功标准”，不仅要求目的基因（Bt 毒蛋白基因）导入受体细胞并稳定存在，还需要目的基因能正常转录、翻译（表达出 Bt 毒蛋白），且植株表现出抗虫性状。仅检测到 Bt 毒蛋白基因的存在，无法确定基因是否表达、植株是否具有抗虫能力，因此不能代表培育成功，C错误； D、过程④—⑤是 “植物细胞培养再生植株”，依据的是植物细胞的全能性（已分化的植物细胞，在适宜条件下能发育成完整的新植株），D正确。 故选C。 24．近年来，转基因技术取得了众多成果，但其安全性也引发了广泛争论。面对这种情况，我们需要秉持科学理性的态度。以下关于转基因成果与安全性的说法错误的是（　　） A．生存和繁殖上有优势的转基因生物可能会破坏原有生态平衡 B．转基因抗虫棉中的Bt抗虫蛋白只在某类昆虫中表现出毒性，一般不会对人畜造成影响 C．转基因抗病毒动物的抗病毒基因可能会发生突变，转变为具有潜在致病风险的基因，因其概率极低可忽略不计 D．我国科学家将玉米的α-淀粉酶基因与目的基因一起转入植物，可阻断淀粉储藏使花粉失活，从而有效防止转基因花粉的传播 【答案】C 【分析】转基因生物的安全性问题包括：食物安全（滞后效应、过敏源、营养成分改变等）、生物安全（对生物多样性的影响等）、环境安全（对生态系统稳定性的影响等）。 【详解】A、转基因生物若在生存和繁殖上具有优势，可能通过竞争排斥原有物种，导致生态失衡，A正确； B、Bt抗虫蛋白特异性作用于鳞翅目昆虫的碱性肠道环境，而人畜的酸性消化系统无法激活该蛋白，故对人畜无害，B正确； C、基因突变具有低频性，但一旦发生可能导致潜在风险，不能因概率低而完全忽略其安全性，C错误； D、α-淀粉酶基因的转入可抑制花粉中淀粉的积累，使花粉失活，从而阻断转基因花粉的传播，D正确。 故选C。 25．生物安全是指与生物有关的各种因素对社会、经济、人类健康以及生态环境所产生的危害或潜在风险。下列相关叙述错误的是（    ） A．消除生物武器威胁、防止生物武器扩散是生物安全防控的重要方面 B．由于技术问题，生殖性克隆可能孕育出有严重生理缺陷的克隆动物 C．为避免可能产生的基因歧视，基因检测机构不能随意泄露基因检测的结果 D．从外来入侵害虫的原产地引入天敌进行治理，不会对入侵地造成生态影响 【答案】D 【分析】生物安全在农业领域中，指遗传修饰生物（如转基因作物）对人体及生态系统造成的安全性问题；在生态领域中，指外来有害生物的引进和扩散，对人类生产和健康造成不利影响的各种传染病、害虫、真菌、细菌、线虫、病毒和杂草等。除此之外，生物安全还包括生物遗传资源流失、实验室生物安全、微生物耐药性、生物恐怖袭击等。生物安全是人的健康、动植物健康、生态环境健康三者安全统一的概念。 【详解】A、在生物恐怖威胁不断上升、全球传染病疫情频发的情况下，消除生物武器威胁、防止生物武器扩散是生物安全防控的重要方面，A正确； B、由于克隆技术尚不成熟，现在做克隆人很可能孕育出有严重生理缺陷的孩子。理由是重构胚胎成功率低，移植入母体子宫后胚胎着床率低、流产率高、胎儿畸形率高，出生后死亡率高等，正常的个体极少，B正确； C、为了尽力规避基因诊断的风险，避免可能产生的基因歧视，基因检测机构不能随意泄露基因检测的结果，C正确； D、从外来入侵害虫的原产地引入天敌进行治理，由于短期内天敌没有资源和空间等的限制，可能会对入侵地造成生态影响，D错误。 故选D。 二、非选择题：本题共5小题，共50分。 26．（10分，每空1分）杨梅果醋具有促进消化、抗氧化等功效，其加工工艺流程如图所示，图中A、B表示参与发酵的菌种。回答下列问题： (1)在酒精发酵阶段起主要作用的菌种A是______，在将其接种到大型发酵罐前一般要先经______和______处理，若需测定该菌的活菌数，常采用______法进行计数。A菌种和B菌种在结构上最主要的区别是______。 (2)杨梅压榨的主要目的是______。在经压榨的杨梅汁中加入一定量的蔗糖可加快酒精发酵，但若过量加入则会使发酵减慢或停止，其原因可能是______。在发酵罐中进行的酒精发酵过程通常需要监控______等（写出两点）变化。当酒精浓度达到11.4%时，菌种A会受到抑制，此时可采用______（填方法）对产物乙醇进行初步提取。 (3)在杨梅果醋的发酵工程中，防止杂菌污染是保证产品质量的关键。下列有关该生产过程中无菌操作的叙述，正确的有______。 A．在接种前，需对发酵罐进行彻底的灭菌处理 B．对压榨后的杨梅汁进行适当消毒，可有效减少杂菌污染 C．醋酸发酵阶段需要持续通入经过滤除菌处理的无菌空气 D．酒精发酵后，发酵液中的乙醇本身已能完全抑制所有杂菌生长，无需额外处理 【答案】(1)酵母菌 活化 扩大培养（扩增） 稀释涂布平板法 有无核膜包被的细胞核 (2)使细胞破裂（细胞内营养物质外流，增加酵母菌与底物的接触，加快发酵进程） 导致酵母菌因失水活性降低或死亡 营养供给、酒精浓度、温度、pH 真空发酵 (3)ABC 【分析】酵母菌是兼性厌氧微生物，在无氧条件下，酵母菌能进行酒精发酵。温度是酵母菌生长和发酵的重要条件。 【详解】（1）酒精发酵的主要菌种是酵母菌，因此菌种A是酵母菌，在将其接种到大型发酵罐前一般要先经扩大培养（增加菌种数量） 和活化（让处于休眠状态的酵母菌恢复活性）处理，若需测定该菌的活菌数，常采用稀释涂布平板法进行计数（测定活菌数的常用方法）。A（酵母菌）是真核生物，B（醋酸菌）是原核生物， A有核膜包被的细胞核，B没有。因此A菌种和B菌种在结构上最主要的区别是有无核膜包被的细胞核。 （2）杨梅压榨的主要目的是使细胞破裂（细胞内营养物质外流，增加酵母菌与底物的接触，加快发酵进程）。在经压榨的杨梅汁中加入一定量的蔗糖可加快酒精发酵，但若过量加入则会使发酵减慢或停止，其原因可能是酵母菌因失水活性降低或死亡。在发酵罐中进行的酒精发酵过程通常需要监控营养供给、酒精浓度、温度、pH等变化。当酒精浓度达到11.4%时，菌种A会受到抑制，此时可采用真空发酵对产物乙醇进行初步提取。 （3）A、接种前对发酵罐彻底灭菌，可避免杂菌污染，A正确； B、对杨梅汁适当消毒，能减少杂菌，B正确； C、醋酸菌是好氧菌，发酵阶段需持续通入无菌空气，C正确； D、乙醇不能完全抑制所有杂菌生长，仍需处理，D错误。 故选ABC。 27．（8分，除标注外每空1分）种业是农业的芯片，柑橘及其近缘属主要为有籽二倍体（2n=18），2023年3月央视报道邓秀新院士及其团队建立的细胞工程技术体系，创立了无籽柑橘品种培育的新途径。科研人员培育无籽柑橘的途径有如下流程（如下图），请回答相关问题。 (1)科研人员制备原生质体时使用到的A物质可来自蜗牛的消化道提取液，据此推测提取液中可能含有的成分是___________，取自柑橘2的M细胞处于分裂前期时含有____________个染色体组。 (2)B是培育过程的一个关键环节，常采用的物理方法有___________，经B过程得到的某些融合原生质体中检测到了4个染色体组，分析其产生的原因是____________。 (3)杂种细胞经C过程培养至幼苗阶段需使用到____________种培养基，移栽前需对幼苗进行倍性鉴定（即检测幼苗的染色体组数），结果如下图所示。请判断科研人员应选择___________（选填a、b、c）对应的幼苗继续培养以获得无籽柑橘3，简述理由是___________。（2分） 【答案】(1)纤维素酶和果胶酶 2/二/两 (2)离心、振动、电激 含有柑橘1和柑橘2的全部染色体 (3) 3/三 c 含有的染色体数目最多 【分析】植物体细胞杂交是指将不同种的植物体细胞，在一定条件下融合成杂种细胞，并把杂种细胞培育成新的植物体的技术。诱导原生质体融合的方法：物理法（离心、振动、电激等）和化学法（聚乙二醇等）。植物体细胞杂交的意义：克服远缘杂交不亲和的障碍，扩大亲本范围，培育作物新品种。 【详解】（1）植物细胞壁的主要成分是纤维素和果胶，根据酶的专一性原理，要分解植物细胞壁应该用纤维素酶和果胶酶，即蜗牛消化道提取液中，可能含有纤维素酶和果胶酶；据图可知，柑橘2是二倍体生物，含有两个染色体组，有丝分裂前期的染色体数目和染色体组数目与体细胞相同，有2个染色体组。 （2）过程B是诱导原生质体融合，该过程常采用的物理方法有离心、振动、电激等；B过程是原生质体融合过程，该过程得到的融合细胞中含有柑橘1和柑橘2的全部染色体，由于柑橘1和柑橘2都含有2个染色体组，故经B过程得到的某些融合原生质体中检测到了4个染色体组。 （3）杂种细胞经C过程培养至幼苗阶段需使用到3种培养基，分别是诱导愈伤组织形成的培养基、诱导生芽的培养基和诱导生根的培养基；无籽柑橘3中含有的染色体数目是柑橘1和柑橘2的和，据图可知，c中含有的染色体数目最多，故科研人员应选择c对应的幼苗继续培养以获得无籽柑橘3。 28．（13分，除标注外每空2分）紧密连接蛋白（CLDN6）是一种跨膜蛋白，在乳腺癌、肝癌等多种癌症中特异性高表达，能促进肿瘤发生、生长和迁移等，美登素（DM1）是一种抑制微管蛋白聚集的化疗药物，副作用较大。为实现DM1对肿瘤细胞的靶向作用，研究人员以CLDN6为靶点制备相应单克隆抗体并构建抗体-药物偶联物，部分过程及作用机制如图，回答下列问题。 (1)本研究中使用的抗原是______，（1分）需多次对小鼠注射该抗原，目的是______。 (2)过程③需要进行的操作是______。过程②筛选出的杂交瘤细胞还需要进行过程③处理的目的是______。 (3)过程④构建的抗体-药物偶联物（CLDN6抗体-DM1），其中CLDN6抗体是图中的______（填“a”或“b”）部分。 (4)据图分析CLDN6抗体-DM1能特异性杀伤肝肿瘤细胞的机制是______。若用红色荧光分别标记CLDN6抗体-DM1和IgG-DM1（中和某种毒素抗体-DM1），再处理肝肿瘤细胞来证明上述机制，则观察到两组肝肿瘤细胞内的现象是_____。 【答案】(1) CLDN6蛋白 刺激机体产生更多的能产生抗体的B淋巴细胞 (2)克隆化培养和抗体检测 得到能分泌抗CLDN6蛋白的杂交瘤细胞 (3)a (4) CLDN6抗体-DM1特异性与肝肿瘤细胞表面的CLDN6结合后，进入细胞中，通过溶酶体裂解，将DM1释放出来发挥作用，导致肿瘤细胞裂解死亡 用红色荧光标记的CLDN6抗体-DM1处理肝肿瘤细胞可在细胞及溶酶体中检测到红色荧光，而用IgG-DM1处理则不能检测到 【分析】单克隆抗体的制备过程：用特定抗原对小鼠进行免疫→从该小鼠脾脏中得到能产生抗体的B淋巴细胞→将B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合→用特定的选择培养基进行筛选，得到杂交瘤细胞→对选择培养得到的杂交瘤细胞进行克隆化培养和抗体检测，经过多次筛选获得足够多的能分泌所需抗体的细胞→将抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞进行扩大化培养或注射到小鼠腹腔内增殖→从细胞培养液或小鼠腹水中获取大量的单克隆抗体。 【详解】（1）根据题干信息“研究人员以CLDN6为靶点制备相应单克隆抗体”，因此可知本研究中使用的抗原是CLDN6蛋白。在制备单克隆抗体过程中需多次对小鼠注射该抗原，目的是为了刺激机体产生更多的能产生抗体的B淋巴细胞。 （2）将CLDN6蛋白抗原注射到小鼠体内，从该小鼠脾脏中获得能产生抗体的B淋巴细胞，将B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，通过第一次筛选获得杂交瘤细胞，然后对杂交瘤细胞进行克隆化培养和抗体检测，多次筛选后得到能分泌抗CLDN6蛋白的杂交瘤细胞。因此过程①为B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，过程②为筛选获得杂交瘤细胞，过程③为筛选获得能分泌抗CLDN6蛋白的杂交瘤细胞，过程③需要进行的操作是克隆化培养和抗体检测。过程②筛选出的杂交瘤细胞还需要进行第二次筛选的目的是得到能分泌抗CLDN6蛋白的杂交瘤细胞。 （3）由图可知，过程④是将获得的a单克隆抗体和b特异性的抗原这两部分，通过接头结合在一起，从而获得了抗体-药物偶联物（CLDN6抗体-DM1）。因此CLDN6抗体是图中的a部分。 （4）由图分析，CLDN6抗体-DM1特异性与肝肿瘤细胞表面的CLDN6结合，随后该肿瘤细胞以胞吞的方式摄入药物和抗体，CLDN6抗体-DM1进入细胞后，通过溶酶体裂解，将DM1释放出来发挥作用，导致肝肿瘤细胞裂解死亡。IgG-DM1（中和某种霉素的抗体-DM1）不能与肝肿瘤细胞表面的CLDN6结合，因此若用红色荧光标记的CLDN6抗体-DM1和IgG-DM1处理肝肿瘤细胞来证明上述机制，红色荧光标记的CLDN6抗体-DM1处理肝肿瘤细胞可在细胞中及溶酶体中检测到红色荧光，而用IgG-DM1处理则不能检测到红色荧光。 29．（11分，除标注外每空2分）2025年我国某海域养殖的鲍鱼、海参爆发“白化病”，病原体为新型嗜盐古菌，其分泌的白化毒素A（WhnA）是致病的关键，该毒素合成酶基因whnA部分序列已测定。研究团队通过基因克隆、细胞工程及转基因技术防控，图1和图2为反向PCR的原理。请回答下列问题： (1)已知EDTA可抑制DNA酶的活性。提取嗜盐古菌基因组DNA并提纯DNA时，需在含有EDTA的缓冲液中剧烈振荡并加入蛋白酶K，推测EDTA和蛋白酶K的主要作用分别是______。图1中，用限制酶EcoRI切割基因whnA时，产生的黏性末端为5′-______-3′。（1分） (2)据图2分析，以环化DNA为模板进行PCR扩增时，需确保引物A与引物B的3'端分别指向环化DNA的______（填“已知序列”或“未知序列”）方向。（1分）PCR中，引物的作用是_____。 (3)制备抗白化毒素A的单克隆抗体时，脾脏B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合的常用物理诱导方法是_____；（1分）融合后第二次筛选过程中，进行抗体检测所利用的原理是______。构建“抗病藻类生物滤器”时，若要定量评估基因whnA上游调控序列在不同盐度下的活性，可将该调控序列与绿色荧光蛋白（GFP）基因融合构建报告载体，通过检测______反映该调控序列的活性大小。 【答案】(1) EDTA可防止DNA降解，蛋白酶K可降解细胞内的蛋白质从而纯化DNA AATT (2)未知序列 使DNA聚合酶能够从引物的3’端开始连接脱氧核苷酸 (3)电融合法 抗原与抗体特异性结合 绿色荧光强度/GFP的表达量 【分析】PCR是聚合酶链式反应的简称，指在引物指导下由酶催化的对特定模板的扩增反应，是模拟体内DNA复制过程，在体外特异性扩增DNA片段的一种技术。 【详解】（1）提取基因组DNA时，需防止DNA被细胞内的DNA酶降解，EDTA可抑制DNA酶的活性，防止DNA降解；蛋白酶K能特异性降解细菌细胞内的蛋白质，便于进行DNA的纯化。由图2可知，限制酶EcoRI切割后产生的黏性末端为5'-AATT-3'。 （2）由图2可知，以环化DNA为模板进行反向PCR扩增时，反向PCR的引物设计需与已知序列的特定方向结合，确保引物A与引物B的3'端都指向环化DNA的未知序列方向，使DNA聚合酶沿环状模板合成包含未知序列的DNA片段。PCR中，引物的作用是使DNA聚合酶能够从引物的3’端开始连接脱氧核苷酸。 （3）动物细胞融合的物理诱导方法包括电融合法，其原理是通过物理手段使细胞膜的流动性增强，进而发生融合。融合后的细胞需经过两次筛选，第一次用选择性培养基淘汰未融合的细胞和同种融合细胞，第二次筛选是进行克隆化培养和抗体检测，抗体检测的原理是抗原与抗体特异性结合。基因whnA上游调控序列可驱动下游基因的转录，将其与GFP基因融合后，调控序列的活性越强，GFP基因的转录和翻译水平越高，绿色荧光强度就越强，因此可通过检测绿色荧光强度（或GFP的表达量）来评估调控序列在不同盐度下的活性。 30．（8分，除标注外每空1分）近来，科研人员将光遗传学技术(光控蛋白的时空特异性调控)和传统 CRISPR/Cas9系统结合，构建出光控CRISPR/Cas9系统，实现了对基因编辑、转录调控的时空精准化操控，如图1所示。回答下列问题。 (1)传统CRISPR/Cas9系统是由 sgRNA 和 Cas9 蛋白形成的复合物，其中前者可以识别并结合目标基因序列，同时引导后者切割目标基因并断裂其________(填化学键名称)，由此说明，该系统具有类似________酶的功能。sgRNA 识别目标基因的原理是_______，在实际应用中，sgRNA 的识别序列越________(填“长”或“短”)，基因编辑的错误率往往越高。 (2)核定位序列和核输出序列分别引导蛋白质定位于细胞核和细胞质，Cas9(N)蛋白1复合物和 Cas9(C)蛋白2复合物在细胞中相遇时可结合成 Cas9全酶并恢复活性。由图1可知，接受远红光刺激后，激活的 BphS蛋白促使 GTP 转化成 GMP，该物质与pVPBD蛋白结合后，转移到细胞核，激活远红光诱导启动子，诱导________基因进行转录。 (3)科研人员将该光控CRISPR/Cas9系统递送至红色荧光报告小鼠的肝脏(红色荧光蛋白基因前有一段特殊序列，当Cas9对该序列进行切割并破坏其功能后，红色荧光蛋白基因大量表达)，因此通过观察不同条件下________，即可得知肝脏细胞中 DNA 被编辑的情况。实验结果显示，该系统在个体中能够有效进行基因编辑，请在图2中画出相应实验结果________。（2分） 【答案】(1)磷酸二酯键 限制 碱基互补配对 短 (2) Cas9(N) (3)肝脏组织的红色荧光强度 【分析】1、CRISPR/Cas9基因编辑系统是由sgRNA通过碱基互补配对原则准确地识别并结合到DNA的特定位点，从而引导切割Cas9蛋白到达准确位置进行DNA的切割，在随后DNA自我修复过程中，容易随机引起一些碱基对的插入和缺失，导致基因功能改变。 2、基因工程的工具：（1）限制性内切核酸酶，又称限制酶。这类酶主要是从原核生物中分离纯化出来的，能够识别双链DNA分子的特定核苷酸序列，并在特定部位将磷酸二酯键切开。（2）DNA连接酶，连接两个核苷酸之间的磷酸二酯键。（3）基因进入受体细胞的载体，质粒是最常用的载体，除此之外，还有噬菌体、动植物病毒等。 【详解】（1）DNA分子中相邻脱氧核苷酸之间通过磷酸二酯键连接，Cas9蛋白切割目标基因断裂的是磷酸二酯键。限制酶能够识别特定的核苷酸序列并在特定部位切割DNA分子，所以该系统具有类似限制酶的功能。sgRNA能与目标基因进行碱基互补配对从而识别目标基因。sgRNA识别序列越短，能与之互补配对的目标基因片段就可能越多，基因编辑的错误率往往越高。 （2）由图1可知，接受远红光刺激后，激活的 BphS蛋白促使 GTP 转化成 GMP，该物质与pVPBD蛋白结合后，转移到细胞核，激活远红光诱导启动子，而由图可知Cas9(N)基因受远红光诱导启动子调控，所以诱导的是Cas9(N)基因进行转录。 （3）由题意可知，红色荧光蛋白基因前有一段特殊序列，当Cas9对该序列进行切割并破坏其功能后，红色荧光蛋白基因大量表达，说明红色荧光强度可以反映小鼠肝脏细胞中的DNA 是否被编辑，所以通过观察不同条件下肝脏组织的红色荧光强度，即可得知肝脏细胞中 DNA 被编辑的情况。结合图2可知，当有远红光照射时，光控CRISPR/Cas9系统发挥作用，切割特殊序列，红色荧光蛋白基因表达，肝脏组织红色荧光强度高；无远红光照射（黑暗）时，系统不发挥作用，红色荧光蛋白基因不表达或表达量低，肝脏组织红色荧光强度低，具体图示可见答案。 2 / 2 学科网（北京）股份 学科网（北京）股份有限公司 $………………○………………外………………○………………装………………○………………订………………○………………线………………○……………… ………………○………………内………………○………………装………………○………………订………………○………………线………………○……………… 此卷只装订不密封 ………………○………………内………………○………………装………………○………………订………………○………………线………………○……………… ………………○………………外………………○………………装………………○………………订………………○………………线………………○……………… … 学校：______________姓名：_____________班级：_______________考号：______________________ 2025-2026学年高二下学期期中模拟测试卷01 生 物 （满分100分，考试用时75分钟） 注意事项： 1．答卷前，考生务必用黑色字迹的钢笔或签字笔将自己的准考证号、姓名、考场号和座位号填写在答题卡上。用2B铅笔在“考场号”和“座位号”栏相应位置填涂自己的考场号和座位号。将条形码粘贴在答题卡“条形码粘贴处”。 2．作答选择题时，选出每小题答案后，用 2B 铅笔把答题卡上对应题目选项的答案信息点涂黑；如需改动，用橡皮擦干净后，再选涂其他答案，答案不能答在试卷上。 3．非选择题必须用黑色字迹的钢笔或签字笔作答，答案必须写在答题卡各题目指定区域内相应位置上；如需改动，先划掉原来的答案，然后再写上新的答案；不准使用铅笔和涂改液。不按以上要求作答的答案无效。 4．考生必须保持答题卡的整洁。考试结束后，将试卷和答题卡一并交回。 5．测试范围：人教版高中选择性必修3全部。 6. 难度系数：0.65。 一、选择题：本题共25个小题，每小题2分，共50分。每小题只有一个选项符合题目要求。 1．（检测手机表面微生物）涂抹法可用于手机表面的微生物检测，其操作为用湿润的无菌棉签，在手机表面一定区域内均匀擦拭，然后将棉签在固体培养基表面进行滚动涂抹，培养后计数菌落。下列叙述错误的是（　　） A．将棉签浸湿时可使用无菌水 B．可使用酒精擦拭表面对手进行消毒 C．需要同时培养空白培养基作为对照 D．统计的菌落数即手机调查区域细菌的实际数 2．（新情境·金龟子绿僵菌）金龟子绿僵菌（Ma）是一种昆虫病原真菌，可以侵染某些农林害虫。Ma寄生时其孢子（单细胞后代）萌发后侵入昆虫体内大量增殖并产生毒素，导致寄主僵化、死亡。下列叙述错误的是（　　） A．可利用Ma开发成微生物杀虫剂 B．为分离Ma可从研磨的僵虫组织中取样 C．稀释涂布平板法可用于分离样品中的Ma D．接种培养Ma时使用的器具需消毒 3．（实验探究）某实验小组从老浆水中筛选出对胃酸有较强耐受力的乳酸菌株，并进行抑菌培养（将灭菌牛津杯置于接种某菌的平板上，杯中注入待测溶液等），流程如图。其中A、B分别表示含等量JYF2和JYF3乳酸菌菌液的牛津杯（圆形小管）。下列说法错误的是（　　） A．为了满足乳酸菌生长繁殖的需求，培养基需要添加维生素 B．过程Ⅰ采用的接种方法是平板划线法 C．图中C可表示含等量清水的牛津杯 D．抑菌测试时，可将A、B、C牛津杯放在涂布有大肠杆菌的培养基上混合培养，并观察抑菌圈大小 4．（科学思维）物质D是某细菌繁殖所需的必需营养物质，在野生型细菌体内的合成途径为A→B→C→D。现有5株物质D合成缺陷型突变菌，每株仅存在合成途径中1个或2个步骤的合成缺陷，且该途径中间产物积累到一定程度时可分泌至细胞外。为确定各菌株的缺陷类型，研究人员将5株缺陷菌依次均匀划线接种于不含B、C、D三种物质的培养基上，生长情况如图。向培养基中加入铁的配合物（可与物质C发生特异性显色反应），在菌株2的b端、菌株5的a端和b端出现明显显色反应。下列说法错误的是（　　） A．培养基应在灭菌前将pH调至中性或弱碱性 B．菌株3、4均不能利用物质A为原料合成物质B C．菌株5的a、b端的物质D来源于菌株1、4的分泌 D．若在培养基中添加物质C，菌株3的a端仍不会出现菌落 5．（地域特色）甘肃特色发酵食品甜醅子，通常以莜麦或青稞为原料发酵制成，口感香甜且带有酒香。关于甜醅子发酵过程的叙述，错误的是（    ） A．甜醅子发酵主要利用的是酵母菌，酵母菌无氧呼吸产生酒精使其有独特风味 B．甜醅子发酵后期需不断搅拌原料，增加氧气含量，从而促进酵母菌快速繁殖 C．需将发酵温度控制在，此温度是发酵微生物生长和代谢的适宜温度 D．对莜麦或青稞进行清洗后需要适当晾干，从而防止水分过多影响微生物发酵 6．河南某中学兴趣小组尝试利用本地特产-南阳黄酒酒曲，分离高产糖化酶的霉菌，用于优化黄酒生产工艺。实验基本流程为：酒曲研磨→梯度稀释→涂布马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）平板→培养→筛选透明圈大的菌落。下列相关叙述错误的是（　　） A．配制PDA培养基时，添加葡萄糖的目的是作为唯一碳源 B．在平板上滴加碘液进行染色，若菌落周围出现透明圈，说明该霉菌可能分泌淀粉酶 C．分离纯化得到的菌种，常在酸性条件下保存 D．发酵过程中需监测菌体密度、还原糖浓度和pH值等参数，以评估发酵进程 7．儒艮是一种珍稀的海洋哺乳动物。为提高人们对儒艮生存威胁的认识，每年的5月28日被定为世界儒艮日。下列用于提高儒艮种群繁殖能力或提高其种群数量的措施，错误的是（　　） A．采用细胞融合技术将雌雄配子融合，培育儒艮 B．采用动物体细胞核移植技术，获得克隆儒艮 C．采用体外受精技术，提高儒艮的繁殖能力 D．采用胚胎分割技术，增加儒艮胚胎的数量 8．2025年2月，青岛农业大学成功克隆出马尔济斯幼犬。一直以来，犬类克隆被认为是体细胞克隆方面的技术高地。犬科动物缺少高效同期发情和体外成熟体系，可用的卵子数量较少，同时，犬科动物细胞核不可见，导致细胞核去除效率降低，这些都限制了克隆犬的生产效率和技术推广。下列相关叙述错误的是（　　） A．可使用外源促性腺激素促进母犬超数排卵 B．胚胎移植前要对受体进行免疫检查，以防止其排斥移入的胚胎 C．去核就是去除MⅡ期卵母细胞中的纺锤体——染色体复合物 D．胚胎移植的实质是早期胚胎在相同生理环境下空间位置的转移 9．每年4月份，洛阳牡丹盛开，吸引着大批国内外的游客前来观赏。除了观赏价值外，牡丹还有重要的药用价值，其含有的黄酮类化合物具有抗氧化和抗菌等作用。现对牡丹进行如图所示的相关处理，下列相关叙述正确的是（　　） A．若过程①的A部位为根尖或茎尖，则可获得抗病毒植株 B．图示培养基中需要添加起调节作用的植物激素和供能的糖类 C．愈伤组织分化程度高，易受培养条件和诱变因素的影响 D．过程⑥可获得大量的黄酮类化合物，与植物细胞的全能性有关 10．中国科学家成功培育出世界首例高嵌合率灵长类嵌合猴，试验操作步骤如图。检测发现该猴全身多组织嵌合率达67%，表现出荧光色的手指，墨绿色的眼睛，颜色不均的毛发。嵌合猴的培育为研究器官发育和疾病治疗提供了重要模型。下列叙述错误的是（　　） A．胚胎干细胞和重构胚的培养液中通常加入血清 B．重构胚需培养到原肠胚时期才能进行胚胎移植 C．嵌合体猴d的遗传性状由a和b的遗传物质决定 D．重构胚在移植前需要用电刺激、Ca²⁺载体等激活 11．甘蔗花叶病是一种严重的病害，由甘蔗花叶病毒引起。该病毒以甘蔗为寄主，传播途径包括种蔗携带和田间土壤中的病毒，培育甘蔗脱毒苗的途径如图所示。下列叙述错误的是（　　） A．用茎尖进行脱毒，原因是茎尖不携带病毒或携带的病毒极少 B．②的温度处理可能会促进甘蔗茎尖组织中的病毒失去活性 C．在培养基A中进行脱分化处理可以得到胚状体 D．培养基B中的植物激素比例不同于培养基A中的，且需要适当的光照 12．线粒体替代疗法（MRT）是一种细胞质替换技术，将目标细胞核转移到健康去核细胞中以预防细胞质基因遗传病，主要包括受精卵细胞核移植（PNT）和卵母细胞纺锤体—染色体复合物移植（ST）两种方法。已知在卵母细胞中，纺锤体区域的线粒体数量较少，而受精卵中线粒体均匀分布。下列说法正确的是（　　） A．与ST相比，PNT的操作时间较早，细胞较为脆弱，因此成功率比ST低 B．与PNT相比，ST能够更好地避免线粒体DNA的遗传 C．只有通过PNT获得的胚胎才可能拥有三个个体的遗传物质 D．ST没有对胚胎进行操作，因此ST结束后不需要对重构胚进行激活处理 13．沙子岭猪是国家地理标志农产品，不仅具有产仔数量多、生长速度快、瘦肉率较高、肉质优良等独特特性，还具有杂交效果好、耐粗饲、适应性强、抗病力强等良好的遗传特性。2025年1月，湖南首例体细胞克隆猪——沙子岭猪克隆猪在湘潭县诞生，其生产流程如图所示，下列有关叙述错误的是（　　） A．沙子岭猪的胚胎细胞核移植比体细胞核移植更容易成功 B．可以用乙醇激活重构胚，使其完成细胞分裂和发育进程 C．胚胎移植之前需切取滋养层细胞做DNA分析和性别鉴定 D．图中克隆猪的多种优良特性与沙子岭猪相同，不受代孕母体影响 14．科研团队探究不同预处理温度对洋葱DNA提取效果的影响。将洋葱分别置于4℃、25℃、-20℃处理24小时，按统一流程进行DNA粗提取（研磨→过滤→加2mol/LNaCl溶解→加冷酒精析出DNA）。实验结果：4℃组：滤液澄清，但DNA析出量少，丝状物稀疏；25℃组：研磨后呈糊状，过滤困难，滤液浑浊，DNA析出物含较多杂质；-20℃组：解冻后细胞易破碎，滤液量大，DNA析出量多且丝状物粗壮。下列对实验结果分析正确的是（　　） A．4℃组DNA析出量少是因低温提高了DNA在酒精中的溶解度 B．25℃组过滤困难是因高温导致DNA变性凝固堵塞滤网所致 C．三组实验均需在析出DNA时快速搅拌，以增加DNA的获取量 D．-20℃组效果最佳的原因是冷冻破坏了细胞结构且抑制DNA酶活性 15．血友病患者体内缺乏某种凝血因子，易出现自发性出血。利用细胞工程技术制备重组人凝血因子的核心流程如下：①将人凝血因子基因通过载体导入仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)；②筛选获得能稳定表达凝血因子的重组CHO细胞；③在体外培养重组CHO细胞，从培养液中收集并纯化凝血因子。下列相关分析错误的是（　　） A．步骤②中，可利用凝血因子的特异性抗体对重组CHO细胞进行筛选 B．重组CHO细胞同时具备“体外大量增殖”和“表达人凝血因子”的特性 C．步骤③的体外培养过程中，可向培养液中添加血清、抗生素等物质 D．重组人凝血因子的制备仅依赖动物细胞培养技术，不涉及其他技术 16．为实现水稻产量提升，科研人员构建含有动物来源的肥胖基因FTO cDNA的T-DNA序列如下图，用于将FTO转入水稻细胞，下列说法错误的是（    ） A．T-DNA可携带FTO整合到水稻细胞染色体DNA上 B．可用含潮霉素的培养基筛选含重组Ti质粒的农杆菌 C．Flag与FTO串联便于通过抗原抗体杂交检测目标蛋白 D．构建该T-DNA需用到逆转录酶、限制酶、DNA连接酶 17．科研人员研发了一种新型的PCR技术用于罕见病的早期诊断。传统PCR技术在检测罕见病相关基因时，由于样本中目标基因含量极低，容易出现假阴性结果。新型PCR技术通过优化引物设计，使引物能更精准地与罕见病相关基因的特定序列结合，并且调整了反应体系中Mg²⁺的浓度，显著提升了扩增效率。下列关于该新型PCR技术的叙述，正确的是（    ） A．该技术中引物的碱基序列应与待扩增的罕见病相关基因的模板链完全相同 B．Mg²⁺浓度的调整主要影响PCR反应中游离脱氧核苷酸合成DNA链的过程 C．该技术是通过提高TaqDNA聚合酶活性来实现更高效扩增罕见病相关基因的 D．优化引物设计主要是为了缩短引物的长度，使引物与模板链的特异性结合增强 18．用高通量筛选技术可快速、高效从大量微生物群体中筛选出具有特定功能或表型的菌株，高通量筛选石油降解菌的流程主要是样品采集与预处理→微型化高通量培养与单细胞分离→高通量检测“降解活性”→自动挑菌、复筛和鉴定。下列相关叙述错误的是（　　） A．配制含有石油的培养基进行选择培养，以提高目标菌株的比例 B．高通量培养需开发适宜培养基，培养基添加胰蛋白酶可获得单细胞菌体 C．显色底物经微生物降解后发生颜色变化，可用于高通量检测“降解活性” D．复筛可用于筛选高效降解菌，可通过检测目标基因的序列对菌株进行鉴定 19．基因水平转移是指基因不通过父母到子代的垂直传递，而是在不同物种间直接传递的过程。下列操作中不属于基因水平转移的是（　　） A．农杆菌侵染植物时，将Ti质粒上的T-DNA转移到植物细胞的基因组中 B．利用基因工程技术，将人的凝血因子基因通过载体导入山羊受精卵 C．土壤中的真菌可以把自身的纤维素分解酶基因传递给寄生于植物的线虫 D．用核移植技术培育“三亲婴儿”，目的是将亲代的正常基因传递给后代 20．聚羟基丁酸酯（PHB）是一种可降解塑料，可由木质素转化合成。某研究团队将关键代谢基因整合到微生物基因组中，并对工程菌进行驯化和筛选，实现了木质素向PHB的高效转化。下列叙述正确的是（　　） A．木质素为工程菌提供碳源，无需添加其他营养物质 B．对工程菌进行的驯化和筛选是通过选择培养基实现的 C．关键代谢基因整合到微生物基因组实现了诱变育种 D．获得PHB的工程菌需要利用提取、分离和纯化等技术 21．某公司拟开发一种新型碱性蛋白酶，用于高效去除衣物上的蛋白质污渍。已知天然蛋白酶X在pH=10时活性较低，且易被洗涤剂中的氧化剂破坏。研究人员计划通过蛋白质工程改造酶X，使其在碱性环境中活性提升并增强抗氧化能力。为实现上述目标，下列哪项技术手段不属于蛋白质工程的关键步骤（　　） A．利用冷冻电镜解析酶X的三维结构，确定影响pH敏感性和抗氧化性的关键氨基酸位点 B．通过体外定向进化技术，在模拟洗涤环境的培养基中筛选高活性突变体 C．将人工设计的突变基因导入毕赤酵母表达系统，验证改造后酶的催化性能 D．对产酶X的枯草芽孢杆菌进行紫外线诱变，随机筛选耐碱性菌株 22．为了培养能生产人乳铁蛋白的转基因山羊，某生物兴趣小组设计了如下技术方案。下列说法正确的是（　　） A．通过PCR获取目的基因，适当提高复性温度可减少非特异性产物产生 B．必须用同种限制酶处理目的基因和质粒，以确保目的基因和质粒成功连接 C．用含肝素的获能液处理精子，保证精子获得足够的能量完成受精作用 D．胚胎移植前用免疫抑制剂处理受体母羊，降低它对早期胚胎的免疫排斥反应 23．红梅杏是固原市的特色水果之一，带动了当地农民的收入。其色泽鲜艳、富含果糖和葡萄糖以及人体需要的微量元素、成熟期能保留足够的水分而口感鲜嫩，因此享誉全国。有人试图利用苏云金芽孢杆菌Bt毒蛋白基因培育抗虫红梅杏，以降低生产成本和环境污染，设计了如下图的方案。下列有关该研究说法错误的是（　　） A．通过基因工程技术培育的抗虫红梅杏，有利于保护环境 B．完成过程①→②一般选用双酶切法 C．在植株⑤中检测到Bt毒蛋白基因，就代表抗虫红梅杏已经培育成功 D．过程④→⑤依据了植物体细胞全能性的原理 24．近年来，转基因技术取得了众多成果，但其安全性也引发了广泛争论。面对这种情况，我们需要秉持科学理性的态度。以下关于转基因成果与安全性的说法错误的是（　　） A．生存和繁殖上有优势的转基因生物可能会破坏原有生态平衡 B．转基因抗虫棉中的Bt抗虫蛋白只在某类昆虫中表现出毒性，一般不会对人畜造成影响 C．转基因抗病毒动物的抗病毒基因可能会发生突变，转变为具有潜在致病风险的基因，因其概率极低可忽略不计 D．我国科学家将玉米的α-淀粉酶基因与目的基因一起转入植物，可阻断淀粉储藏使花粉失活，从而有效防止转基因花粉的传播 25．生物安全是指与生物有关的各种因素对社会、经济、人类健康以及生态环境所产生的危害或潜在风险。下列相关叙述错误的是（    ） A．消除生物武器威胁、防止生物武器扩散是生物安全防控的重要方面 B．由于技术问题，生殖性克隆可能孕育出有严重生理缺陷的克隆动物 C．为避免可能产生的基因歧视，基因检测机构不能随意泄露基因检测的结果 D．从外来入侵害虫的原产地引入天敌进行治理，不会对入侵地造成生态影响 二、非选择题：本题共5小题，共50分。 26．（10分，每空1分）杨梅果醋具有促进消化、抗氧化等功效，其加工工艺流程如图所示，图中A、B表示参与发酵的菌种。回答下列问题： (1)在酒精发酵阶段起主要作用的菌种A是______，在将其接种到大型发酵罐前一般要先经______和______处理，若需测定该菌的活菌数，常采用______法进行计数。A菌种和B菌种在结构上最主要的区别是______。 (2)杨梅压榨的主要目的是______。在经压榨的杨梅汁中加入一定量的蔗糖可加快酒精发酵，但若过量加入则会使发酵减慢或停止，其原因可能是______。在发酵罐中进行的酒精发酵过程通常需要监控______等（写出两点）变化。当酒精浓度达到11.4%时，菌种A会受到抑制，此时可采用______（填方法）对产物乙醇进行初步提取。 (3)在杨梅果醋的发酵工程中，防止杂菌污染是保证产品质量的关键。下列有关该生产过程中无菌操作的叙述，正确的有______。 A．在接种前，需对发酵罐进行彻底的灭菌处理 B．对压榨后的杨梅汁进行适当消毒，可有效减少杂菌污染 C．醋酸发酵阶段需要持续通入经过滤除菌处理的无菌空气 D．酒精发酵后，发酵液中的乙醇本身已能完全抑制所有杂菌生长，无需额外处理 27．（8分，除标注外每空1分）种业是农业的芯片，柑橘及其近缘属主要为有籽二倍体（2n=18），2023年3月央视报道邓秀新院士及其团队建立的细胞工程技术体系，创立了无籽柑橘品种培育的新途径。科研人员培育无籽柑橘的途径有如下流程（如下图），请回答相关问题。 (1)科研人员制备原生质体时使用到的A物质可来自蜗牛的消化道提取液，据此推测提取液中可能含有的成分是___________，取自柑橘2的M细胞处于分裂前期时含有____________个染色体组。 (2)B是培育过程的一个关键环节，常采用的物理方法有___________，经B过程得到的某些融合原生质体中检测到了4个染色体组，分析其产生的原因是____________。 (3)杂种细胞经C过程培养至幼苗阶段需使用到____________种培养基，移栽前需对幼苗进行倍性鉴定（即检测幼苗的染色体组数），结果如下图所示。请判断科研人员应选择___________（选填a、b、c）对应的幼苗继续培养以获得无籽柑橘3，简述理由是___________。（2分） 28．（13分，除标注外每空2分）紧密连接蛋白（CLDN6）是一种跨膜蛋白，在乳腺癌、肝癌等多种癌症中特异性高表达，能促进肿瘤发生、生长和迁移等，美登素（DM1）是一种抑制微管蛋白聚集的化疗药物，副作用较大。为实现DM1对肿瘤细胞的靶向作用，研究人员以CLDN6为靶点制备相应单克隆抗体并构建抗体-药物偶联物，部分过程及作用机制如图，回答下列问题。 (1)本研究中使用的抗原是______，（1分）需多次对小鼠注射该抗原，目的是______。 (2)过程③需要进行的操作是______。过程②筛选出的杂交瘤细胞还需要进行过程③处理的目的是______。 (3)过程④构建的抗体-药物偶联物（CLDN6抗体-DM1），其中CLDN6抗体是图中的______（填“a”或“b”）部分。 (4)据图分析CLDN6抗体-DM1能特异性杀伤肝肿瘤细胞的机制是______。若用红色荧光分别标记CLDN6抗体-DM1和IgG-DM1（中和某种毒素抗体-DM1），再处理肝肿瘤细胞来证明上述机制，则观察到两组肝肿瘤细胞内的现象是_____。 29．（11分，除标注外每空2分）2025年我国某海域养殖的鲍鱼、海参爆发“白化病”，病原体为新型嗜盐古菌，其分泌的白化毒素A（WhnA）是致病的关键，该毒素合成酶基因whnA部分序列已测定。研究团队通过基因克隆、细胞工程及转基因技术防控，图1和图2为反向PCR的原理。请回答下列问题： (1)已知EDTA可抑制DNA酶的活性。提取嗜盐古菌基因组DNA并提纯DNA时，需在含有EDTA的缓冲液中剧烈振荡并加入蛋白酶K，推测EDTA和蛋白酶K的主要作用分别是______。图1中，用限制酶EcoRI切割基因whnA时，产生的黏性末端为5′-______-3′。（1分） (2)据图2分析，以环化DNA为模板进行PCR扩增时，需确保引物A与引物B的3'端分别指向环化DNA的______（填“已知序列”或“未知序列”）方向。（1分）PCR中，引物的作用是_____。 (3)制备抗白化毒素A的单克隆抗体时，脾脏B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合的常用物理诱导方法是_____；（1分）融合后第二次筛选过程中，进行抗体检测所利用的原理是______。构建“抗病藻类生物滤器”时，若要定量评估基因whnA上游调控序列在不同盐度下的活性，可将该调控序列与绿色荧光蛋白（GFP）基因融合构建报告载体，通过检测______反映该调控序列的活性大小。 30．（8分，除标注外每空1分）近来，科研人员将光遗传学技术(光控蛋白的时空特异性调控)和传统 CRISPR/Cas9系统结合，构建出光控CRISPR/Cas9系统，实现了对基因编辑、转录调控的时空精准化操控，如图1所示。回答下列问题。 (1)传统CRISPR/Cas9系统是由 sgRNA 和 Cas9 蛋白形成的复合物，其中前者可以识别并结合目标基因序列，同时引导后者切割目标基因并断裂其________(填化学键名称)，由此说明，该系统具有类似________酶的功能。sgRNA 识别目标基因的原理是_______，在实际应用中，sgRNA 的识别序列越________(填“长”或“短”)，基因编辑的错误率往往越高。 (2)核定位序列和核输出序列分别引导蛋白质定位于细胞核和细胞质，Cas9(N)蛋白1复合物和 Cas9(C)蛋白2复合物在细胞中相遇时可结合成 Cas9全酶并恢复活性。由图1可知，接受远红光刺激后，激活的 BphS蛋白促使 GTP 转化成 GMP，该物质与pVPBD蛋白结合后，转移到细胞核，激活远红光诱导启动子，诱导________基因进行转录。 (3)科研人员将该光控CRISPR/Cas9系统递送至红色荧光报告小鼠的肝脏(红色荧光蛋白基因前有一段特殊序列，当Cas9对该序列进行切割并破坏其功能后，红色荧光蛋白基因大量表达)，因此通过观察不同条件下________，即可得知肝脏细胞中 DNA 被编辑的情况。实验结果显示，该系统在个体中能够有效进行基因编辑，请在图2中画出相应实验结果________。（2分） 试题 第3页（共6页） 试题 第4页（共6页） 试题 第1页（共6页） 试题 第2页（共6页） 学科网（北京）股份有限公司 $