3.1重组DNA技术的基本工具课件-2025-2026学年高二下学期生物人教版选择性必修3

选必三 第1节 重组DNA技术的基本工具 第3章 基因工程 2019人教版·生物·选择性必修3 1 普通棉花在种植过程中常常会受到棉铃虫的侵袭，使棉花大量减产，严重时甚至绝收。大量施用农药杀虫不仅提高了生产成本，还可能造成农产品和环境的污染。 基因工程育种 基因工程 棉花本身不具有“杀虫基因”，而苏云金杆菌有一种“杀虫基因--Bt抗虫蛋白基因”，它能通过编码产生抗虫蛋白来杀死棉铃虫。 普通棉花 转基因抗虫棉 将苏云金杆菌中的Bt抗虫蛋白基因 转入普通棉花 是指按照人们的愿望，通过转基因等技术，赋予生物新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。从技术操作层面看，由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，因此又叫做重组DNA技术。 原理 ____________ 操作水平 水平 目的 _________地改造生物的遗传性状，获得人类所需要的生物类型和生物产品 基因重组 DNA分子 基因工程 概念 定向 水母的绿色荧光蛋白基因 基因重组：产生新的基因型 1.概念：生物体进行有性生殖的过程中，控制不同性状的基因的重新组合。 2.类型： (1)交叉互换型：减数第一次分裂四分体时期，同源染色体上的等位基因随着非姐妹染色单体间的互换而互换位置。 （同源染色体上非等位基因的重组） (2)自由组合型：减数第一次分裂后期，非同源染色体上非等位基因随着非同源染色体的自由组合而组合。（非同源染色体上非等位基因的重组） (3)人为导致的基因重组：目的基因经载体导入受体细胞，导致受体细胞的基因重组。 基因工程诞生的理论基础 思考 1. 为什么不同生物的DNA分子能拼接起来？ ①DNA的组成单位都是4种脱氧核苷酸。 ②空间结构都是规则的双螺旋结构。 2. 为什么一种生物的基因可以在另一种生物细胞内表达？ ①基因是控制生物性状的遗传物质的结构和功能单位。 ②遗传信息的传递都遵循中心法则。 ③生物界共用一套遗传密码。 相同的遗传信息在不同生物体内表达出相同的蛋白质。 ③都遵循碱基互补配对原则。 脱氧 核糖 含氮碱基 磷酸 DNA平面结构 DNA立体结构 思考：培育转基因抗虫棉需要哪些“分子工具”呢？ “分子运输车” “分子手术刀” “分子缝合针” 剪：准确切割DNA分子 接：将DNA片段连接起来 运：将体外重组好的DNA分子导入受体细胞 普通棉花 将苏云金杆菌中的Bt抗虫蛋白基因 转入普通棉花 转基因抗虫棉 限制性内切核酸酶—“分子手术刀” 01 探究新知 8 一、限制性内切核酸酶——“分子手术刀” 1.来源 T G C C G T A A 5' 3' 5' 3' 主要来自原核生物 2.种类 数千种 3.作用特点 专一性(特异性) 能识别双链DNA分子的特定核苷酸序列，并使每一条链中特定部位的磷酸二酯键断开。 简称：限制酶 注意 （不是一种酶，而是一类酶） ①只能识别DNA双链,不识别RNA或DNA单链 ②识别特定的核苷酸序列非碱基序列 ③有专一性,但多种限制酶可识别同一种核苷酸序列 可用于切割DNA获取目的基因和切割载体 习题巩固 1.你能根据所掌握的知识，推测限制酶存在于原核生物中的作用是什么吗？（原核生物容易受到自然界外源DNA的入侵）（P71旁栏思考） 2.想一想，为什么限制酶不剪切细菌本身的DNA？（P74拓展应用1） 切割外源DNA、使之失效，以保证自身安全 原核生物中不存在该酶的识别序列或识别序列已被修饰 1.限制酶是原核生物的一种防御工具，用来切割侵入细胞的外源DNA，以保证自身安全。 2.该生物中不存在该酶的识别序列或识别序列已被修饰。（如甲基化） 一、限制性内切核酸酶——“分子手术刀” 4.识别序列长度 大多数为6个核苷酸，少数为4个、8个或其他数量的核苷酸。 思考 中心轴线 限制酶所识别的序列有什么特点？ ①都可以找到一条中心轴线（如图虚线）。 ②中心轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称重复排列的 ，称为回文序列。 （中心对称、反向重复） ③正向读与另一条链反向读的碱基顺序完全一致。 EcoR Ⅰ *EcoRⅠ识别序列为GAATTC (在G与A之间切割) 中心轴线 黏性末端 平末端 Sam Ⅰ *SmaⅠ识别序列为CCCGGG (在G与C之间切割) 一、限制性内切核酸酶——“分子手术刀” 5.切割结果 形成黏性末端或平末端 在中心轴线两侧切割 在中心轴线处切割 g1 g2 g3 1.现有一段DNA，含有g1、g2、g3，若要将g2提取出来，如何操作？ 需要有几个酶切位点？ 2 产生几个末端？共产生几个磷酸基团？ 4 4 使用EcoRⅠ酶剪切 识别序列GAATTC g1 g2 g3 CT TCATG AATTCCCTAA GAAGTACTTAA GGGAT T GGCATCTTAA AATTCCGTAG 5‘ 5‘ 3‘ 3‘ 习题巩固 *形成 *一个限制酶切割一次形成2个黏性末端 *同一种限制酶切割形成的黏性末端相同 *两个黏性末端有2个游离的磷酸基团。 用同种限制酶切割(EcoRⅠ) T G A A T T C G A C T T A A G C A G A A T T C T T C T T A A G A 缺口怎么办 想一想：把两种来源不同的DNA进行重组，应该怎样处理？ ③用相同的限制酶切割目的基因和运载体（产生相同末端，便于连接）； ④双酶切：确保目的基因与运载体定向连接（减少重组杂物）。 ★重组质粒的形成：用相同的限制酶处理目的基因和运载体，获得相同的末端，然后用DNA连接酶对其进行连接。 DNA连接酶—“分子缝合针” 02 探究新知 15 二、DNA连接酶——“分子缝合针” 1.作用 将双链DNA片段“缝合”起来，恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的_____________。 磷酸二酯键 ★DNA连接酶没有识别特异性(相同或互补的黏性末端以及平末端都能连接) 2.种类 类型 E.coli DNA连接酶 T4 DNA连接酶 来源 功能 结果 恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的_________________ 大肠杆菌 T4噬菌体 缝合_________和_______ 磷酸二酯键 缝合_________和_______ （连接平末端效率远低于T4DNA连接酶） 平末端 黏性末端 黏性末端 平末端 A G T C A T T C G A T A (1)把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来； (2)两DNA片段要具有互补的黏性末端才能拼起来。 黏性末端的缝合作用 T C G A T C 注意： DNA连接酶可连接双链DNA中的DNA单链缺口，但不能将单个脱氧核苷酸连接到DNA链上！ 二、DNA连接酶——“分子缝合针” 平末端的缝合作用 C C C G G G G G G C C C 二、DNA连接酶——“分子缝合针” 把平末端之间的缝隙“缝合”起来，但效率较低。 二 DNA连接酶 ——“分子缝合针” DNA连接酶和DNA聚合酶是一回事吗？为什么？(P72) ▲ DNA复制中DNA聚合酶发挥作用 A A T T G C A A T T A A T T DNA聚合酶 DNA聚合酶 DNA聚合酶 DNA聚合酶 DNA聚合酶作用示意图 二、DNA连接酶——“分子缝合针” DNA聚合酶只能将单个核苷酸连接到已有的核苷酸链上，形成磷酸二酯键。 旁栏思考题 DNA连接酶 DNA聚合酶 相同 作用实质 化学本质 不 同 点 模板 作用对象 作用结果 用途 都能催化形成磷酸二酯键 都是蛋白质 不需要 需要DNA的一条链作模板 形成完整的重组DNA分子 形成DNA的一条链 基因工程 DNA复制 在两个DNA片段间形成磷酸二酯键 将单个核苷酸连接到已有DNA片段，形成磷酸二酯键 二、DNA连接酶——“分子缝合针” DNA连接酶和DNA聚合酶是一回事吗？为什么？(P72) 旁栏思考题 归纳小结 与DNA相关的五种酶的比较 项目 DNA连接酶 限制酶 DNA聚合酶 解旋酶 DNA酶 作用部位 作用对象 作用结果 图示 磷酸二酯键 将DNA片段水解为单个脱氧核苷酸 磷酸二酯键 磷酸二酯键 磷酸二酯键 氢键 DNA片段 DNA 单个的脱氧 核苷酸 DNA DNA 将两个DNA片段连接成完整的DNA分子 切割双链DNA分子 将单个的脱氧核苷酸连接到DNA单链末端 将双链DNA分子局部解旋为单链 A．DNA连接酶、限制性内切核酸酶、解旋酶 B．限制性内切核酸酶、解旋酶、DNA连接酶 C．解旋酶、限制性内切核酸酶、DNA连接酶 D．限制性内切核酸酶、DNA连接酶、解旋酶 1.如图为DNA分子的某一片段，其中①②③分别表示某种酶的作用部位，则相应的酶依次是（ ） C 习题巩固 解析:①处为氢键，是解旋酶的作用部位;②处为磷酸二酯键，是限制酶的作用部位;③处为两个DNA片段的缺口，是DNA连接酶的作用部位。 基因进入受体细胞的载体—“分子运输车” 03 探究新知 23 三、基因进入受体细胞的载体——“分子运输车” 1.作用 2.种类 将 导入 ，在受体细胞内对目的基因进行 。 目的基因 受体细胞 大量复制 在基因工程中使用的载体包括 等。 质粒、噬菌体和动植物病毒 ①细菌的质粒：质粒是一种裸露的、结构简单、独立于真核细胞细胞核或原核细胞拟核DNA之外，并具有自我复制能力的环状双链DNA分子。 ②病毒：噬菌体、动植物病毒等。 ①有一个至多个限制酶切割位点 便于插入目的基因 ④有特殊的标记基因 （便于重组DNA筛选与鉴定） ③对受体细胞无害 不会影响受体细胞正常的生命活动 （以质粒为例） ②能够在宿主细胞中复制并稳定地保存 （自我复制或者整合到受体DNA同步复制） 真正被用作载体的质粒，都是在天然质粒的基础上进行过人工改造的。 3.载体需具备的条件 三、基因进入受体细胞的载体——“分子运输车” 三、基因进入受体细胞的载体——“分子运输车” 4.最常用的载体 质粒 质粒是一种裸露的、结构简单、独立于真核细胞细胞核或原核细胞拟核DNA之外，并具有 能力的________________。 自我复制 环状双链DNA分子 启动子: 转录的起点，在转录过程中起调控作用。 终止子: 转录的终点，在转录过程中起调控作用。 DNA复制的起始位点，并带着插入的目的基因一起复制 有标记基因的存在，可用含青霉素的培养基鉴别.便于重组DNA筛选与鉴定 标记基因的筛选原理 导入 受体细胞 培养 加入氨苄青霉素 ①导入重组质粒的受体细胞存活并繁殖 ②导入普通载体的体细胞存活并繁殖 含有氨苄青霉素抗性基因载体（如质粒） 重组DNA导入受体细胞不是100%，而且导入率较低 目的基因一定成功重组到质粒上了吗？ 三、基因进入受体细胞的载体——“分子运输车” 培养基中有几种类型的大肠杆菌？什么样的大肠杆菌能够在该培养基上存活并繁殖？ 载体上的标记基因一般是某种抗生素的抗性基因，而受体细胞没有抵抗该抗生素的能力。将含有某抗生素抗性基因的载体导入受体细胞，抗性基因在受体细胞内表达，受体细胞对该抗生素产生抗性。在含有该抗生素的培养基上，能够生存的是被导入了载体的受体细胞。如图所示： 27 无法存活 存活；白色 存活；蓝色 标记基因的筛选原理 如何提高筛选的准确性？ LacZ 基因表达产生的β-半乳糖甘酶能够分解 X-gal 产生蓝色物质，从而使菌落呈蓝色；否则菌落呈白色。 请分析下列3种大肠杆菌在含 X-gal 和青霉素的固体培养基上的存活情况及菌落颜色。 三、基因进入受体细胞的载体——“分子运输车” 当质粒上有两个标记基因时，可将目的基因插入其中一个标记基因中，也就是重组质粒上只含一个标记基因，普通质粒上含有两个标记基因。则没有导入质粒的受体细胞不具有标记基因控制的性状，导入普通质粒的受体细胞具有两个标记基因控制的性状，导入重组质粒的受体细胞只具有一个标记基因控制的性状。这样可根据标记基因控制的性状准确筛选出含有重组质粒的受体细胞。 28 …TATCGTACGATAGGTACTTAA …ATAGCATGCTATCCATG AATTCGGCATAC… GCCGTATG… …TCCTAG …AGGATCTTAA GAGCCATACTTAA AATTCTCGGTATG AATTCCATAC… GGTATG… GAGCCATACTTAA AATTCTCGGTATG 5′ 3′ 5′ 3′ 5′ 3′ 5′ 3′ 重组DNA分子 思考.讨论 1.剪刀和透明胶条分别代表哪种“分子工具”？ 剪刀代表限制酶；透明胶条代表DNA连接酶。 讨论 如果制作的黏性末端的碱基不能互补配对，可能是剪切位点或连接位点选得不对，也可能是其他原因。 不能，因为基因的长度一般在100个碱基对以上。 2.你制作的黏性末端的碱基能不能互补配对？如果不能，可能是什么原因造成的？ 3.你插入的DNA片段能称得上一个基因吗？ …TATCGTACGATAGGTACTTAA …ATAGCATGCTATCCATG AATTCGGCATAC… GCCGTATG… GAGCCATACTTAA AATTCTCGGTATG 思考•讨论 重组DNA分子 动手剪一剪，拼一拼 …TATCGTACGATAGGTACTTAA …ATAGCATGCTATCCATG AATTCGGCATAC… GCCGTATG… GAGCCATACTTAA AATTCTCGGTATG 思考•讨论 重组DNA分子 进一步探究 思考 1. 从以上操作可推知，在切割含“目的片段”的DNA分子时，需用限制酶切割____次此DNA分子，产生____个黏性末端。 2. 目的片段翻转过来，可以连接吗？______ 3. 目的片段可以自身环化吗？_______ 4. 切割目的基因和载体时，一般需要用______限制酶，目的是__________________。 2 4 可以 可以 同种 产生相同的黏性末端 *必须用同一种限制酶吗？ 不一定，不同的限制酶切割可能形成相同的黏性末端。 习题巩固 1.有2个不同来源的DNA片段A和B，A片段用限制酶切speⅠ进行切割，B片段分别用限制酶HindⅢ、 XbaⅠ、EcoRⅤ和XhoⅠ进行切割。各限制酶的识别序列和切割位点如下。 教材P75拓展应用2 (1)哪种限制酶切割B片段产生的DNA片段能与限制酶speⅠ切割A片段产生的DNA片段相连接？为什么？ XbaⅠ。 因为XbaⅠ与SpeⅠ切割产生了相同的黏性末端。 习题巩固 教材P75拓展应用2 (2)不同的限制酶切割可能产生相同的黏性末端，这在基因工程操作中有什么意义？ 识别DNA分子中不同核苷酸序列，但能切割产生相同黏性末端的限制酶被称为同尾酶。同尾酶使构建载体时，切割位点的选择范围扩大。 例如，我们选择了用某种限制酶切割载体，如果目的基因的核苷酸序列中恰好含有该限制酶的识别序列，那么用该限制酶切割含有目的基因的DNA片段时，目的基因就很可能被切断；这时可以考虑用合适的同尾酶（目的基因的核苷酸序列中不能有它的识别序列）来获取目的基因。 习题巩固 2.下列操作中最好选用什么限制酶切割来构建重组质粒？ 图1 图2 BamH I 和 Hind III ① 防止目的基因、质粒自身环化 不能单用E.coRI的原因 ② 防止目的基因反向连接到载体 选择酶切位点的原则： 1.所选酶切位点不能破坏目的基因以及标记基因。 2.选目的基因两端和运载体都有的酶切位点。 （双酶切法优于单酶切法） 3.下面是四种不同质粒的示意图，其中ori为复制原点，Amp为氨苄青霉素抗性基因，TetR为四环素抗性基因，箭头表示一种限制性内切核酸酶的酶切位点。若要得到一个能在四环素培养基上生长而不能在氨苄青霉素培养基上生长的含重组DNA的细胞，应选用的质粒是（ ） C 习题巩固 解析:A图中酶切位点在ori序列上，该序列被破坏，重组质粒将无法进行复制，因此受体细胞既不能在四环素培养基上生长，也不能在氨苄 青霉素培养基上生长。 B图中限制性内切核酸酶没有破坏三个基因，因此含重组DNA的细胞既能在四环素培养基上生长，也能在氨苄青霉素培养基上生长。 C图中酶切位点在氨苄青霉素抗性基因上，氨苄青霉素抗性基因被破坏，则含重组 DNA的细胞能在四环素培养基上生长而不能在氨苄青霉素培养基上生长。 D图中酶切位点在四环素抗性基因上，由于仅四环素抗性基因被破坏，则含重组 DNA的细胞能在氨苄青霉素培养基上生长而不能在四环素培养基上生长。 限制酶 DNA连接酶 载体 ①对受体细胞无害； ②有一个至多个限制酶切割位点； ③有特殊的标记基因； ④能自我复制或能整合到宿主DNA上。 质粒、噬菌体 、动植物病毒 基因工程的基本工具 作为载体的条件 种类： 磷酸二酯键 来源 ： 主要来源于原核生物 特点： 作用部位： 具有专一性 结果： 形成黏性末端或平末端 连接部位：磷酸二酯键 种类： E.coliDNA连接酶、T4 DNA连接酶 作用： 把两条双链DNA片段拼接起来 课堂小结 DNA的粗提取与鉴定 04 探究新知 37 四、DNA的粗提取与鉴定 1.实验原理 （1）提取DNA的原理 利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分。 DNA不溶于酒精，但某些蛋白质溶于酒精 DNA在不同浓度的NaCl溶液中的溶解度不同，能溶于2mol/L的NaCl溶液。 初步分离DNA和蛋白质 溶解DNA （2）鉴定DNA的原理 在一定温度下（沸水浴），DNA遇二苯胺试剂会呈现蓝色。 实验材料及用具： DNA含量相对较高的生物组织，如新鲜洋葱、香蕉、菠菜、菜花和猪肝等。 1.选材： 1.能否选用牛、羊、马、猪等哺乳动物的红细胞做实验材料？ 不能选择哺乳动物成熟的红细胞，因为哺乳动物成熟的红细胞中没有细胞核和线粒体，几乎不含DNA。 四、DNA的粗提取与鉴定 四、DNA的粗提取与鉴定 3.材料用具 （2）试剂 ①研磨液 ②体积分数为95%的酒精 ③2mol/L 的NaCl溶液 ④二苯胺试剂 ⑤蒸馏水 溶解并提取DNA 研磨液成分 作用 SDS 使蛋白质变性 EDTA 抑制DNA酶 Tris-HCl缓冲液 稳定DNA 析出DNA 溶解DNA 鉴定DNA，要现配现用 四、DNA的粗提取与鉴定 4.方法步骤 破碎细胞 过滤 析出DNA 鉴定DNA 称取洋葱，切碎，放入研钵，倒入研磨液，充分研磨。 思考 1.如果研磨不充分会对实验结果产生怎样的影响？ 研磨不充分会使DNA分子不能从细胞核中释放出来，从而使研磨液中的DNA含量较低，影响最终提取的DNA量。 四、DNA的粗提取与鉴定 4.方法步骤 破碎细胞 过滤 析出DNA 鉴定DNA 思考 2.过滤能否用滤纸代替纱布？ 不可以。因为DNA会被吸附到滤纸上而大量损失，影响最终提取的DNA量。 在漏斗中垫上纱布过滤研磨液，4℃冰箱中静置后取上清液；或将研磨液倒入塑料离心管中离心取上清液。 3.此步骤获得的上清液中可能含有哪些细胞成分？ 可能含有DNA、RNA以及蛋白质、脂质、糖类等。 四、DNA的粗提取与鉴定 4.方法步骤 破碎细胞 过滤 析出DNA 鉴定DNA 思考 4.酒精预冷的作用？ ①抑制核酸水解酶的活性，进而抑制DNA降解； ②抑制分子运动，使DNA易形成沉淀析出； ③低温有利于增加DNA分子的柔韧性，减少断裂。 5.为什么要用玻璃棒沿一个方向缓慢搅拌？ 减少DNA断裂，以便获得较完整的DNA分子。 在上清液中加入体积相等的预冷的酒精溶液, 静置2~3min，溶液中出现的白色丝状物就是粗提取的DNA。用玻璃棒沿一个方向缓慢搅拌，卷起丝状物；或将溶液倒入塑料离心管中离心，取沉淀物晾干。 这一步的目的是蛋白质溶解在酒精中，DNA不溶于酒精而析出。 将丝状物或沉淀物溶于 溶液中，加入 试剂，混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min。 （4）溶解与鉴定 二苯胺 2mol/L的NaCl DNA的粗提取和鉴定 探究.实验 加入2mol/L氯化钠溶液 不加入丝状物 加入4mL二苯胺试剂 加入2mol/L氯化钠溶液 加入丝状物 加入4mL二苯胺试剂 实验组 空白对照组 水浴加热 如何评价结果？ （1）DNA纯度：看提取物颜色 （2）DNA的量：看与二苯胺反应颜色的深浅 四、DNA的粗提取与鉴定 试管编号 A（对照组） B（实验组） 步骤1 2mol/L的NaC1溶液5mL 步骤2 不进行任何处理 步骤3 步骤4 沸水浴加热5min 实验现象 溶液不变蓝色 实验结论 加丝状物或沉淀物 加4mL的二苯胺试剂 溶液逐渐变蓝 DNA在沸水浴的情况下遇二苯胺试剂会被染成蓝色 4.方法步骤 四、DNA的粗提取与鉴定 5.结果分析与评价 (1)你提取出白色丝状物或沉淀物了吗？用二苯胺试剂鉴定的结果如何 观察提取的DNA的颜色，如果不是白色丝状物，说明DNA中的杂质较多。二苯胺试剂鉴定呈现蓝色说明实验基本成功；如果不呈现蓝色，可能的原因有所提取的DNA含量低，或者在实验操作过程中出现了失误等。 (2)分析出粗提取的DNA中可能含有哪些杂质？ 本实验粗提取的DNA可能仍然含有核蛋白、多糖等杂质。 四、DNA的粗提取与鉴定 5.结果分析与评价 (3)与其他同学提取的DNA进行比较，看看实验结果有何不同，分析产生差异的原因。 实验结果不明显的可能原因： ①材料中的核物质没有充分释放出来，如研磨不充分或蒸馏水的量不够。 ②加入酒精后摇动或搅拌时过猛，DNA被破坏。 ③二苯胺最好现用现配，否则二苯胺变成浅蓝色， 影响鉴定效果。 四、DNA的粗提取与鉴定 6.进一步探究 本试验只是对DNA进行了粗提取，请查阅资料，了解实验室提取纯度较高的DNA的一种方法，并与本实验中所使用的方法进行比较，总结两种方法的异同。 方法一：可以先添加质量分数为25%的SDS溶液，使蛋白质变性后与DNA分开；随后，加入氯仿—异丙醇混合液(体积比为24：1)，通过离心将蛋白质及其他杂质除去，取上清液；可重复上述操作几次，直至上清液变成透明的黏稠液体。 方法二：由于苯酚可以迅速使蛋白质变性，抑制核酸酶的活性，因此还可以先用苯酚处理，然后离心分层，这时DNA溶于上层水相，蛋白质变性后存在于酚层中，用吸管、微量移液器等实验用具就可以将两者分开。 限制酶 作用部位： 种类 E.coli DNA连接酶 载体 条件 ③ 有一个至多个限制酶切割位点 质粒、噬菌体、动植物病毒 DNA连接酶 作用部位： 切开DNA分子的磷酸二酯键 来源： 主要存在于原核生物中 特点： 具有专一性（能识别双链DNA分子的特定核苷酸序列） T4 DNA连接酶 ① 对受体细胞无害 ② 能自我复制或整合到宿主DNA上。 ④ 常有特殊的标记基因 种类： 磷酸二酯键 作用结果： 产生黏性末端或平末端 课堂小结 基因工程的基本工具 49 练习与应用 04 50 一、概念检测 1.DNA连接酶是重组DNA技术常用的一种工具酶。下列相关叙述正确的是（ ） A.能连接DNA分子双链碱基对之间的氢键 B.能将单个脱氧核苷酸加到DNA片段的末端，形成磷酸二酯键 C.能连接用同种限制酶切开的两条DNA片段，重新形成磷酸二酯键 D.只能连接双链DNA片段互补的黏性末端，不能连接双链DNA片段的平末端 2.在重组DNA技术中,将外源基因送入受体细胞的载体可以是 （ ） A.大肠杆菌的质粒 B.切割DNA分子的酶 C.DNA片段的黏性末端 D.用来识别特定基因的DNA探针 C A 磷酸二酯键 DNA聚合酶的作用 既可以连接互补的黏性末端，又可连接平末端 51 $