学易金卷：高二生物下学期期中模拟卷（江苏专用）

………………○………………外………………○………………装………………○………………订………………○………………线………………○……………… ………………○………………内………………○………………装………………○………………订………………○………………线………………○……………… 此卷只装订不密封 ………………○………………内………………○………………装………………○………………订………………○………………线………………○……………… ………………○………………外………………○………………装………………○………………订………………○………………线………………○……………… … 学校：______________姓名：_____________班级：_______________考号：______________________ 2025-2026学年高二生物下学期期中模拟卷 （考试时间：75分钟 试卷满分：100分） 注意事项： 1．本试卷分第Ⅰ卷（选择题）和第Ⅱ卷（非选择题）两部分。答卷前，考生务必将自己的姓名、准考证号填写在答题卡上。 2．回答第Ⅰ卷时，选出每小题答案后，用2B铅笔把答题卡上对应题目的答案标号涂黑。如需改动，用橡皮擦干净后，再选涂其他答案标号。写在本试卷上无效。 3．回答第Ⅱ卷时，将答案写在答题卡上。写在本试卷上无效。 4．测试范围：人教版选择性必修三。 5．考试结束后，将本试卷和答题卡一并交回。 第Ⅰ卷 一、单项选择题：本题共15个小题，每小题2分，共30分。每小题只有一个选项符合题目要求。 1．（原创题）葡萄酒的酿造技术历史悠久，唐代苏敬的《新修本草》云：凡作酒醴须曲，而蒲桃（即葡萄）、蜜等酒独不用曲。下列叙述错误的是（　　） A．在榨汁前对葡萄的处理是先清洗葡萄再去除枝梗 B．装置密闭发酵过程中，酒精度的变化是先增加后趋于稳定 C．若葡萄酒变酸且产生菌膜，一般可从菌膜中分离得到醋酸菌 D．"蒲桃、蜜等酒独不用曲"说明葡萄酒的酿制不需要微生物 2．（改编题）利用传统发酵技术制作的果酒、腐乳、泡菜等极大地丰富了人们的饮食，它们是我国传统饮食文化的重要组成部分。下列有关叙述正确的是（　　） A．制作果酒、腐乳和泡菜所利用的主要微生物均含有细胞核 B．制作腐乳时主要利用了毛霉产生的淀粉酶将淀粉分解成单糖 C．制作果醋、泡菜、果酒的过程中应先通气培养微生物，再密封发酵 D．制作果酒时，适当加大接种量可提高发酵速率，抑制杂菌生长 3．（易错易混）在微生物培养过程中，关于灭菌和消毒的理解，错误的是（　　） A．实验中使用后的培养基丢弃前一定要进行消毒处理，以免污染环境 B．灭菌是杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子 C．消毒是指杀死物体表面或内部部分微生物 D．吸管和培养皿可以采用干热灭菌法 4．（实验操作）如图是微生物平板划线示意图，划线的顺序为1、2、3、4、5.下列相关叙述错误的是（　　） A．第1区和第5区的划线不能相连 B．划线操作时完全打开皿盖，划完立即盖上 C．在五个区域中划线前后都要对接种环进行灭菌 D．平板划线需在酒精灯火焰旁操作 5．（教材拓展）图示植物原生质体制备、分离和检测的流程。下列相关叙述正确的是（    ） A．步骤①添加盐酸以去除细胞壁 B．步骤②吸取原生质体放入无菌水中清洗 C．原生质体密度介于图中甘露醇和蔗糖溶液密度之间 D．台盼蓝检测后应选择蓝色的原生质体继续培养 6．三白草和鱼腥草因疗效相近且具有叠加效应常被中医用作“药对”。研究者欲利用原生质体融合技术将复方的配伍（两种或两种以上药物配合使用）提前到杂种细胞，并实现有效成分的工厂化生产，操作如图所示。下列有关叙述正确的是（　　） A．①过程可用盐酸和酒精混合液（1：1）配制的解离液来完成 B．②过程通常在略高渗溶液中采用灭活病毒诱导原生质体融合 C．③过程融合的原生质体需先形成细胞壁再进行有丝分裂 D．④过程配制培养基时需要添加植物生长调节剂和琼脂 7．下图为小鼠细胞的培养过程示意图。下列叙述正确的是（　　） A．动物细胞培养至一定代数，所培养的细胞全部都会衰老死亡 B．为了保证细胞培养所需的无菌、无毒环境，可以添加适量的抗生素 C．制备细胞悬液时，可用胃蛋白酶处理组织块 D．培养过程中，需要CO2浓度维持在5%左右，以促进细胞呼吸 8．为研制抗病毒A的单克隆抗体，某课题组以小鼠甲为实验对象设计了以下实验流程。下列叙述正确的是（　　） A．实验处理前需给小鼠甲注射单细胞悬液 B．筛选2采用了核酸分子杂交的技术 C．只有体外配制培养液才能使杂交瘤细胞大量增殖 D．经选择培养基获得的杂交瘤细胞能无限增殖但分泌抗体类型不一定相同 9．融合PCR技术采用具有互补末端的引物，形成具有重叠链的PCR产物，通过PCR产物重叠链的延伸，从而将不同来源的任意DNA片段连接起来。其原理如图所示，据图分析错误的是（　　） A．上述过程中使用的引物P2和P3的碱基需要完全互补配对 B．设计引物的目的是能够从其3'端开始连接脱氧核苷酸 C．融合PCR的第一步两条链重叠部位可互为另一条链的引物 D．若融合PCR的第二步获得128个融合基因，理论上该过程消耗了254个引物 10．科研人员研发出单克隆抗体—肺癌药物偶联物，以减少肺癌药物对正常细胞的伤害，基本流程如图所示。下列相关叙述正确的是（　　） A．注射的特定抗原是肺癌细胞特有的大分子 B．①利用选择培养基筛选的方式获得了杂交瘤细胞 C．步骤③细胞培养时应提供95%O2和5%CO2的气体环境 D．抗体—肺癌药物偶联物中的a能特异性结合并杀死肿瘤细胞 11．下列关于 DNA 的粗提取和鉴定实验的叙述，正确的是（　　） A．用猪血作为材料，原因是猪血红细胞有细胞核 B．用二苯胺试剂进行鉴定，原因是 DNA 溶液中加入二苯胺试剂即呈蓝色 C．用酒精进行提纯，原因是DNA 溶于酒精,蛋白质不溶于酒精 D．用不同浓度的 NaCl 溶液进行DNA 粗提取，原因是 DNA 在其中溶解度不同 12．四种限制酶的切割位点如图所示，下列叙述错误的是（　　） A．上图中EcoRⅠ、PstⅠ两种酶切割后的DNA片段可以用E.coliDNA连接酶连接 B．图中SmaⅠ、EcoR V两种酶切割后的DNA片段，可以用T4DNA连接酶连接 C．DNA连接酶催化目的基因片段与质粒载体片段连接的化学键是磷酸二酯键 D．限制酶能识别特定的核苷酸序列，具有专一性，不同的限制酶切割不能产生相同的黏性末端 13．模型构建是生命科学教学、科研的一种重要方法。下图是生物概念模型，相关分析错误的是（　　） A．若图示为基因工程，则C为重组质粒，D为受体细胞 B．若图示为试管婴儿技术，C～D为早期胚胎培养和胚胎移植 C．若图示为植物体细胞杂交部分流程，用灭活的病毒融合A、B得到C D．若图示为核移植技术，则 B 可能为去核卵母细胞 14．下列有关生物技术的叙述，错误的是（　　） A．在动物细胞培养液中添加一定量的抗生素以防止杂菌污染 B．进行单个植物细胞培养必须先用酶水解细胞壁以获得原生质体 C．动物细胞融合与植物体细胞杂交都可用电融合法或PEG融合法诱导融合 D．可利用转基因“工程菌”修复被污染的土壤 15．下列有关实验操作的叙述，正确的是（　　） A．可用蛋白酶合成抑制剂激活重构胚，使其完成细胞分裂和发育进程 B．诱导愈伤组织和后续的培养过程中，每日需要给予适当时间和强度的光照 C．培养前需要用适宜浓度的乙醇和次氯酸钠的混合液对外植体进行消毒 D．脱分化过程中需在培养基中添加特定的激素以诱导愈伤组织形成胚状体 二、多项选择题：本题共4个小题，每小题3分，共12分。每小题少选得1分，多选错选都不得分。 16．研究人员制备了膀胱生物反应器，用其获得人体特殊功能蛋白S，基本过程如图所示。下列相关叙述不正确的是（　　） A．步骤①需要在S基因编码区上游添加乳腺蛋白基因启动子 B．步骤②需要在高Ca2+-高pH条件下将S基因表达载体导入受精卵 C．步骤④可选择发育良好的囊胚，且代孕母体一般需要同期发情处理 D．与乳腺反应器不同的是膀胱生物反应器会受到转基因动物的性别和年龄的限制 17．有些酵母可以利用工业废甲醇作为碳源进行培养，这样既可减少污染又可降低生产成本。研究人员拟从土壤样品中分离该类酵母，并进行大量培养。下图所示为操作流程：有关叙述不正确的是（　　） A．在称取土壤、稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁操作 B．将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行消毒即可 C．步骤③中，将温度约80℃的培养基倒入培养皿混匀，冷凝后倒置培养 D．步骤④中，划线时应避免划破培养基表面，以免不能形成正常菌落 18．北京航空航天大学教授杨军成功从黄粉虫幼虫消化道中分离出能降解聚乙烯塑料的细菌——微小杆菌YT2。下图表示目的菌的获取过程。下列相关叙述中，合理的是（　　） A．富集培养应使用牛肉膏蛋白胨培养基，以促进目的菌增殖 B．选择培养基的成分中应以塑料作为唯一碳源 C．将1ml菌液加入培养基，再使用涂布器进行均匀涂布 D．使用固体斜面培养基保存微生物时，应置于低温环境中 19．基因芯片的测序原理是：先将各不相同的已知序列的八核苷酸探针分别固定在玻片的方格中，再与带荧光标记的待测DNA单链进行杂交，通过确定荧光强度最强的探针位置与对应序列，推出待测序列，如图所示。 下列叙述正确的是（　　） A．上述测序方法是基于DNA-DNA分子杂交实现的 B．通过给探针标记荧光也可达到与上图同样的效果 C．应洗去未与探针结合的待测DNA分子后再检测荧光 D．根据图示结果可推出待测序列为5'-GATCTAACGTAT-3' 第Ⅱ卷 三、非选择题（5小题，共58分） 20．（13分）柠檬酸是一种广泛应用的食品酸度调节剂，食品工业生产柠檬酸时，可以红薯粉为原料经黑曲霉发酵获得，如图为黑曲霉发酵工程生产柠檬酸的简要流程图。请回答下列问题： (1)生产柠檬酸的优良菌种可以从自然界中筛选出来，也可以通过_________（2分）育种获得。（至少答出二种育种方法即可） (2)据图分析，将菌种接种至A培养基的方法为_________，将该菌种由A培养基转接至B培养基的目的是_________。 (3)请从培养基营养成分的角度分析，加蛋白胨的作用是_________（2分）。 (4)在柠檬酸发酵过程中，操作人员会定时检测培养液中的黑曲霉浓度以了解发酵进程，若将稀释了100倍的培养液用血细胞计数板（1mm×1mm×0.1mm，25个中方格，每个中方格包含16个小格）通过显微镜观察计数，则理论上统计的中方格中黑曲霉平均数量应不少于_________（2分）个才能达到7.5×108个/mL的预期浓度。 (5)若用发酵工程制作黄皮甜米酒，为确定黄酒高活性干酵母（YWBY）的添加量及发酵时间，研究人员进行了相关实验，实验结果如下图2所示。根据实验结果制作黄皮甜米酒时，YWBY的最佳接种量及主发酵时间分别是_________（2分）。据下图2分析，YWBY接种量为0.12%时，酒精含量最低的原因可能是_________（2分）。若发酵产品是单细胞蛋白，则往往采用_________方法将其分离和干燥，即可获得产品。 21．（10分）牛支原体是严重危害牛养殖业的一种病原体，它能引起肺炎、关节炎等多种疾病。VspX蛋白是牛支原体表面的一种脂蛋白，在牛支原体感染宿主细胞时起黏附作用。科研人员制备抗VspX单克隆抗体，进行相关研究。请回答下列问题： (1)以VspX蛋白为抗原制备单克隆抗体，需用纯化的VspX蛋白对小鼠进行多次免疫，其目的是刺激机体产生更多的分泌__________（2分）的B淋巴细胞。 (2)杂交瘤细胞__________（2分）（填“能”或“不能”）产生专一抗体，所产生的抗体__________（2分）（填“一定”或“不一定”）能抗VspX蛋白。 (3)若将筛选出的杂交瘤细胞培养、稀释后接种到96孔培养板中，每一个孔中尽量只接种__________个杂交瘤细胞以实现克隆化培养。 (4)将抗VspX抗体与不同抗原进行杂交，免疫印迹分析如图所示，实验结果显示抗VspX单克隆抗体不能与__________（2分）结合，表明抗VspX抗体具有__________。 22．（10分）世界卫生组织解释克隆为“遗传上同一的机体或细胞系(株)的无性繁殖”。相对于植物克隆而言，动物尤其是高等动物的克隆比较困难，如图表示哺乳动物克隆的几种方法的主要步骤，据图所示回答下列问题: (1)方法2获得的小牛的遗传物质主要来源于___________________（2分）。方法3中①和②发育成的小牛的遗传物质______________(填“相同”或“不同”)。 (2)细胞B取自囊胚的___________，具有发育全能性，称为____________细胞。囊胚___________(填“已经”或“尚未”)出现分化。 (3)应用图示方法_________________得到小牛与供体l遗传物质最相似。 (4)方法1、方法2和方法3获得的胚胎通过胚胎移植技术转移到________________处理的受体母牛输卵管或子宫内。 (5)克隆也可以理解为复制、拷贝，结合世界卫生组织的定义，你认为还有哪些现代生物技术也属于克隆__________________（2分）。(至少写出两个) 23．（13分）红斑丹毒丝菌是猪的病原性细菌（引起猪丹毒），其表面抗原A蛋白（SpaA）和胆碱结合蛋白B（CbpB）能诱导猪等产生特异性抗体。枯草芽孢杆菌是一种益生菌，为猪丹毒口服活载体疫苗的研发奠定基础。研究人员构建重组质粒（过程如图1）导入枯草芽孢杆菌，一段时间后分别收集菌体和芽孢（抗逆性强，适宜条件下能萌发形成菌体），制备在菌体表面表达SpaA的重组菌体活载体疫苗、芽孢表面表达CbpB的重组芽孢活载体疫苗，并通过小鼠免疫实验评价免疫效果。请回答下列问题： (1)已知引物R1与引物F2部分序列互补配对，以便合成融合基因spoⅢJ-spaA。其中R1的序列为5'-GCTGCCGCCACCGCCGCTTCCGCCACCGCCGCTTCCACCGCCACCCTTTTTCT-3'，则PCR2过程中构建的引物F2的序列为______。 ①5'-GAGGAGCGAAAACCGAGAGACTTAGGGCCTACGCTATATATCG-3' ②5'-CGCTGGCGGAACCGGCGGTGGCGGCAGCGATTCGAC-3' ③5'-GCCACCGCCTTCCCCCCCACCGCCGTCGCTAAGCTG-3' ④5'-TTGGCTATGTTTTACGATTAGGCAGCGATTCGAC-3' (2)已知过程⑦、⑧都用双酶切构建重组质粒，则设计PCR1时在引物F1的______端添加的限制酶识别序列是______。质粒pDC中BamHⅠ和EcoRⅠ之间的长度______（填“大于”、“小于”或“等于”）MfeⅠ和BelⅠ之间的长度。过程⑦、⑧不能同时在同一体系中进行的主要原因是______（2分），若同时进行，酶切后的连接产物多。 (3)将重组质粒pDG-CBJA导入枯草芽孢杆菌，将发生如图2所示的同源重组过程，pDG中的序列A、序列B的设计依据是______。 (4)对转化的枯草芽孢杆菌进行筛选时，应将菌种接种在含壮观霉素和______的平板上，37℃培养24h，加碘液，3min后弃去碘液，观察菌落周围有无透明圈产生，选择______的菌落来制备疫苗。 (5)科研人员研究了不同疫苗体液免疫应答的效果，结果如图3，A组为磷酸缓冲液，B组为野生型枯草芽孢杆菌菌体，C组为野生型枯草芽孢杆菌芽孢，D组为重组枯草芽孢杆菌菌体活载体疫苗，E组为重组枯草芽孢杆菌芽孢活载体疫苗。 ①五组实验中，______（2分）组为对照组。 ②小鼠口服菌体活载体疫苗（表达SpaA）后，血清抗SpaA抗体低；芽孢活载体疫苗不表达SpaA，但小鼠口服芽孢活载体疫苗后血清抗SpaA抗体较高，其原因是______（2分）。 24．（12分）苹果树腐烂病由真菌感染引起，是限制苹果产量的重要因素之一，目前该病以化学防治为主。为了开发生物防治的途径，研究者拟从土壤中分离筛选出能抑制苹果树腐烂病菌生长的芽孢杆菌。实验流程如图1： (1)分离筛选土壤中的芽孢杆菌：按上图步骤分离筛选土壤中的芽孢杆菌时，步骤①中，将5g土壤加入_________ml（2分）无菌水中充分振荡得到土壤悬液；步骤②中，将1ml土壤悬液进行梯度稀释，每种稀释度经过步骤③各在3个平板上接种（每个平板的接种量为0.2ml），经适当培养后，上图中稀释度为10-3和10-4两组平板上的菌落数分别为49、47、48和2、7、6.根据两组平板上的菌落数可计算出每克土壤中的芽孢杆菌数量为_________（2分）个，该结果会比实际结果偏小，原因是_________（2分）。 (2)筛选能抑制苹果树腐烂病菌生长的芽孢杆菌图1中，应取直径为5mm的_________的菌落移置于A处，B处接种_________。培养3~5天，测量并计算抑菌率。筛选出抑菌率最高的菌株，抑菌效果如图2。请将抑菌率的计算公式补充完整：抑菌率（%）=_________/（D-5）×100%（用图2中的字母表示）（2分） (3)请你说出与化学防治相比，生物防治的优势是_________（2分）。 试题 第7页（共8页） 试题 第8页（共8页） 试题 第1页（共8页） 试题 第2页（共8页） 学科网（北京）股份有限公司 $ 2025-2026学年高二生物下学期期中模拟卷 参考答案 一、单项选择题：本题共15个小题，每小题2分，共30分。每小题只有一个选项符合题目要求。 题号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 答案 D D A B C C B D A A 题号 11 12 13 14 15 答案 D D C B A 二、多项选择题：本题共4个小题，每小题3分，共12分。每小题少选得1分，多选错选都不得分。 题号 16 17 18 19 答案 ABD ABC BD ACD 三、非选择题（本部分共5小题，共计58分） 20．（13分，除注明外，每空1分） 【答案】(1)诱变育种、基因工程（2分） (2) 平板划线法 扩大培养(或增加黑曲霉菌种数量) (3)提供碳源、氮源、维生素（2分） (4)30（2分） (5) 0.1%、8天 （2分） 接种量较大，菌种数量增长过快导致葡萄糖消耗过多，用于酵母菌无氧呼吸产生酒精的葡萄糖减少（2分） 过滤、沉淀 21．（10分，除注明外，每空1分） 【答案】(1)抗VspX抗体（2分） (2) 能 （2分） 不一定（2分） (3)1 (4) 3、4 （2分） 特异性 22．（10分，除注明外，每空1分） 【答案】(1) 供体1和供体2 （2分） 相同 (2) 内细胞团 胚胎干 已经 (3)1 (4)经过同期发情处理 (5)单克隆抗体、植物组织培养、动物细胞培养（2分） 23．（13分，除注明外，每空1分，） 【答案】(1)② (2) 5， CAATTG 等于 BamHI和BclI是同尾酶，EcoRI和MfeI是同尾酶，过程⑦、⑧形成的黏性末端相同，易导致融合基因错误连接（2分） (3)amyE基因两端的部分序列 (4) 淀粉 周围没有透明圈 (5) ABC（2分） 芽孢抗逆性强，芽孢能顺利通过胃肠道进入内环境；适宜条件下芽孢萌发成菌体并表达SpaA， 激活体液免疫（2分） 24．（12分，除注明外，每空1分） 【答案】(1) 45 （2分） 2.4×105（2分） 当两个或多个细菌相连时，在平板上只观察到一个菌落（2分） (2) 苹果树腐烂病菌 芽孢杆菌 （D-d）（2分） (3)降低环境污染；减少化学药剂在果实中的残留；对其他生物扰动小（2分） / 学科网（北京）股份有限公司 $ 2025-2026学年高二生物下学期期中模拟卷 （考试时间：75分钟 试卷满分：100分） 注意事项： 1．本试卷分第Ⅰ卷（选择题）和第Ⅱ卷（非选择题）两部分。答卷前，考生务必将自己的姓名、准考证号填写在答题卡上。 2．回答第Ⅰ卷时，选出每小题答案后，用2B铅笔把答题卡上对应题目的答案标号涂黑。如需改动，用橡皮擦干净后，再选涂其他答案标号。写在本试卷上无效。 3．回答第Ⅱ卷时，将答案写在答题卡上。写在本试卷上无效。 4．测试范围：人教版选择性必修三。 5．考试结束后，将本试卷和答题卡一并交回。 第Ⅰ卷 一、单项选择题：本题共15个小题，每小题2分，共30分。每小题只有一个选项符合题目要求。 1．（原创题）葡萄酒的酿造技术历史悠久，唐代苏敬的《新修本草》云：凡作酒醴须曲，而蒲桃（即葡萄）、蜜等酒独不用曲。下列叙述错误的是（　　） A．在榨汁前对葡萄的处理是先清洗葡萄再去除枝梗 B．装置密闭发酵过程中，酒精度的变化是先增加后趋于稳定 C．若葡萄酒变酸且产生菌膜，一般可从菌膜中分离得到醋酸菌 D．"蒲桃、蜜等酒独不用曲"说明葡萄酒的酿制不需要微生物 2．（改编题）利用传统发酵技术制作的果酒、腐乳、泡菜等极大地丰富了人们的饮食，它们是我国传统饮食文化的重要组成部分。下列有关叙述正确的是（　　） A．制作果酒、腐乳和泡菜所利用的主要微生物均含有细胞核 B．制作腐乳时主要利用了毛霉产生的淀粉酶将淀粉分解成单糖 C．制作果醋、泡菜、果酒的过程中应先通气培养微生物，再密封发酵 D．制作果酒时，适当加大接种量可提高发酵速率，抑制杂菌生长 3．（易错易混）在微生物培养过程中，关于灭菌和消毒的理解，错误的是（　　） A．实验中使用后的培养基丢弃前一定要进行消毒处理，以免污染环境 B．灭菌是杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子 C．消毒是指杀死物体表面或内部部分微生物 D．吸管和培养皿可以采用干热灭菌法 4．（实验操作）如图是微生物平板划线示意图，划线的顺序为1、2、3、4、5.下列相关叙述错误的是（　　） A．第1区和第5区的划线不能相连 B．划线操作时完全打开皿盖，划完立即盖上 C．在五个区域中划线前后都要对接种环进行灭菌 D．平板划线需在酒精灯火焰旁操作 5．（教材拓展）图示植物原生质体制备、分离和检测的流程。下列相关叙述正确的是（    ） A．步骤①添加盐酸以去除细胞壁 B．步骤②吸取原生质体放入无菌水中清洗 C．原生质体密度介于图中甘露醇和蔗糖溶液密度之间 D．台盼蓝检测后应选择蓝色的原生质体继续培养 6．三白草和鱼腥草因疗效相近且具有叠加效应常被中医用作“药对”。研究者欲利用原生质体融合技术将复方的配伍（两种或两种以上药物配合使用）提前到杂种细胞，并实现有效成分的工厂化生产，操作如图所示。下列有关叙述正确的是（　　） A．①过程可用盐酸和酒精混合液（1：1）配制的解离液来完成 B．②过程通常在略高渗溶液中采用灭活病毒诱导原生质体融合 C．③过程融合的原生质体需先形成细胞壁再进行有丝分裂 D．④过程配制培养基时需要添加植物生长调节剂和琼脂 7．下图为小鼠细胞的培养过程示意图。下列叙述正确的是（　　） A．动物细胞培养至一定代数，所培养的细胞全部都会衰老死亡 B．为了保证细胞培养所需的无菌、无毒环境，可以添加适量的抗生素 C．制备细胞悬液时，可用胃蛋白酶处理组织块 D．培养过程中，需要CO2浓度维持在5%左右，以促进细胞呼吸 8．为研制抗病毒A的单克隆抗体，某课题组以小鼠甲为实验对象设计了以下实验流程。下列叙述正确的是（　　） A．实验处理前需给小鼠甲注射单细胞悬液 B．筛选2采用了核酸分子杂交的技术 C．只有体外配制培养液才能使杂交瘤细胞大量增殖 D．经选择培养基获得的杂交瘤细胞能无限增殖但分泌抗体类型不一定相同 9．融合PCR技术采用具有互补末端的引物，形成具有重叠链的PCR产物，通过PCR产物重叠链的延伸，从而将不同来源的任意DNA片段连接起来。其原理如图所示，据图分析错误的是（　　） A．上述过程中使用的引物P2和P3的碱基需要完全互补配对 B．设计引物的目的是能够从其3'端开始连接脱氧核苷酸 C．融合PCR的第一步两条链重叠部位可互为另一条链的引物 D．若融合PCR的第二步获得128个融合基因，理论上该过程消耗了254个引物 10．科研人员研发出单克隆抗体—肺癌药物偶联物，以减少肺癌药物对正常细胞的伤害，基本流程如图所示。下列相关叙述正确的是（　　） A．注射的特定抗原是肺癌细胞特有的大分子 B．①利用选择培养基筛选的方式获得了杂交瘤细胞 C．步骤③细胞培养时应提供95%O2和5%CO2的气体环境 D．抗体—肺癌药物偶联物中的a能特异性结合并杀死肿瘤细胞 11．下列关于 DNA 的粗提取和鉴定实验的叙述，正确的是（　　） A．用猪血作为材料，原因是猪血红细胞有细胞核 B．用二苯胺试剂进行鉴定，原因是 DNA 溶液中加入二苯胺试剂即呈蓝色 C．用酒精进行提纯，原因是DNA 溶于酒精,蛋白质不溶于酒精 D．用不同浓度的 NaCl 溶液进行DNA 粗提取，原因是 DNA 在其中溶解度不同 12．四种限制酶的切割位点如图所示，下列叙述错误的是（　　） A．上图中EcoRⅠ、PstⅠ两种酶切割后的DNA片段可以用E.coliDNA连接酶连接 B．图中SmaⅠ、EcoR V两种酶切割后的DNA片段，可以用T4DNA连接酶连接 C．DNA连接酶催化目的基因片段与质粒载体片段连接的化学键是磷酸二酯键 D．限制酶能识别特定的核苷酸序列，具有专一性，不同的限制酶切割不能产生相同的黏性末端 13．模型构建是生命科学教学、科研的一种重要方法。下图是生物概念模型，相关分析错误的是（　　） A．若图示为基因工程，则C为重组质粒，D为受体细胞 B．若图示为试管婴儿技术，C～D为早期胚胎培养和胚胎移植 C．若图示为植物体细胞杂交部分流程，用灭活的病毒融合A、B得到C D．若图示为核移植技术，则 B 可能为去核卵母细胞 14．下列有关生物技术的叙述，错误的是（　　） A．在动物细胞培养液中添加一定量的抗生素以防止杂菌污染 B．进行单个植物细胞培养必须先用酶水解细胞壁以获得原生质体 C．动物细胞融合与植物体细胞杂交都可用电融合法或PEG融合法诱导融合 D．可利用转基因“工程菌”修复被污染的土壤 15．下列有关实验操作的叙述，正确的是（　　） A．可用蛋白酶合成抑制剂激活重构胚，使其完成细胞分裂和发育进程 B．诱导愈伤组织和后续的培养过程中，每日需要给予适当时间和强度的光照 C．培养前需要用适宜浓度的乙醇和次氯酸钠的混合液对外植体进行消毒 D．脱分化过程中需在培养基中添加特定的激素以诱导愈伤组织形成胚状体 二、多项选择题：本题共4个小题，每小题3分，共12分。每小题少选得1分，多选错选都不得分。 16．研究人员制备了膀胱生物反应器，用其获得人体特殊功能蛋白S，基本过程如图所示。下列相关叙述不正确的是（　　） A．步骤①需要在S基因编码区上游添加乳腺蛋白基因启动子 B．步骤②需要在高Ca2+-高pH条件下将S基因表达载体导入受精卵 C．步骤④可选择发育良好的囊胚，且代孕母体一般需要同期发情处理 D．与乳腺反应器不同的是膀胱生物反应器会受到转基因动物的性别和年龄的限制 17．有些酵母可以利用工业废甲醇作为碳源进行培养，这样既可减少污染又可降低生产成本。研究人员拟从土壤样品中分离该类酵母，并进行大量培养。下图所示为操作流程：有关叙述不正确的是（　　） A．在称取土壤、稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁操作 B．将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行消毒即可 C．步骤③中，将温度约80℃的培养基倒入培养皿混匀，冷凝后倒置培养 D．步骤④中，划线时应避免划破培养基表面，以免不能形成正常菌落 18．北京航空航天大学教授杨军成功从黄粉虫幼虫消化道中分离出能降解聚乙烯塑料的细菌——微小杆菌YT2。下图表示目的菌的获取过程。下列相关叙述中，合理的是（　　） A．富集培养应使用牛肉膏蛋白胨培养基，以促进目的菌增殖 B．选择培养基的成分中应以塑料作为唯一碳源 C．将1ml菌液加入培养基，再使用涂布器进行均匀涂布 D．使用固体斜面培养基保存微生物时，应置于低温环境中 19．基因芯片的测序原理是：先将各不相同的已知序列的八核苷酸探针分别固定在玻片的方格中，再与带荧光标记的待测DNA单链进行杂交，通过确定荧光强度最强的探针位置与对应序列，推出待测序列，如图所示。 下列叙述正确的是（　　） A．上述测序方法是基于DNA-DNA分子杂交实现的 B．通过给探针标记荧光也可达到与上图同样的效果 C．应洗去未与探针结合的待测DNA分子后再检测荧光 D．根据图示结果可推出待测序列为5'-GATCTAACGTAT-3' 第Ⅱ卷 三、非选择题（5小题，共58分） 20．（13分）柠檬酸是一种广泛应用的食品酸度调节剂，食品工业生产柠檬酸时，可以红薯粉为原料经黑曲霉发酵获得，如图为黑曲霉发酵工程生产柠檬酸的简要流程图。请回答下列问题： (1)生产柠檬酸的优良菌种可以从自然界中筛选出来，也可以通过_________（2分）育种获得。（至少答出二种育种方法即可） (2)据图分析，将菌种接种至A培养基的方法为_________，将该菌种由A培养基转接至B培养基的目的是_________。 (3)请从培养基营养成分的角度分析，加蛋白胨的作用是_________（2分）。 (4)在柠檬酸发酵过程中，操作人员会定时检测培养液中的黑曲霉浓度以了解发酵进程，若将稀释了100倍的培养液用血细胞计数板（1mm×1mm×0.1mm，25个中方格，每个中方格包含16个小格）通过显微镜观察计数，则理论上统计的中方格中黑曲霉平均数量应不少于_________（2分）个才能达到7.5×108个/mL的预期浓度。 (5)若用发酵工程制作黄皮甜米酒，为确定黄酒高活性干酵母（YWBY）的添加量及发酵时间，研究人员进行了相关实验，实验结果如下图2所示。根据实验结果制作黄皮甜米酒时，YWBY的最佳接种量及主发酵时间分别是_________（2分）。据下图2分析，YWBY接种量为0.12%时，酒精含量最低的原因可能是_________（2分）。若发酵产品是单细胞蛋白，则往往采用_________方法将其分离和干燥，即可获得产品。 21．（10分）牛支原体是严重危害牛养殖业的一种病原体，它能引起肺炎、关节炎等多种疾病。VspX蛋白是牛支原体表面的一种脂蛋白，在牛支原体感染宿主细胞时起黏附作用。科研人员制备抗VspX单克隆抗体，进行相关研究。请回答下列问题： (1)以VspX蛋白为抗原制备单克隆抗体，需用纯化的VspX蛋白对小鼠进行多次免疫，其目的是刺激机体产生更多的分泌__________（2分）的B淋巴细胞。 (2)杂交瘤细胞__________（2分）（填“能”或“不能”）产生专一抗体，所产生的抗体__________（2分）（填“一定”或“不一定”）能抗VspX蛋白。 (3)若将筛选出的杂交瘤细胞培养、稀释后接种到96孔培养板中，每一个孔中尽量只接种__________个杂交瘤细胞以实现克隆化培养。 (4)将抗VspX抗体与不同抗原进行杂交，免疫印迹分析如图所示，实验结果显示抗VspX单克隆抗体不能与__________（2分）结合，表明抗VspX抗体具有__________。 22．（10分）世界卫生组织解释克隆为“遗传上同一的机体或细胞系(株)的无性繁殖”。相对于植物克隆而言，动物尤其是高等动物的克隆比较困难，如图表示哺乳动物克隆的几种方法的主要步骤，据图所示回答下列问题: (1)方法2获得的小牛的遗传物质主要来源于___________________（2分）。方法3中①和②发育成的小牛的遗传物质______________(填“相同”或“不同”)。 (2)细胞B取自囊胚的___________，具有发育全能性，称为____________细胞。囊胚___________(填“已经”或“尚未”)出现分化。 (3)应用图示方法_________________得到小牛与供体l遗传物质最相似。 (4)方法1、方法2和方法3获得的胚胎通过胚胎移植技术转移到________________处理的受体母牛输卵管或子宫内。 (5)克隆也可以理解为复制、拷贝，结合世界卫生组织的定义，你认为还有哪些现代生物技术也属于克隆__________________（2分）。(至少写出两个) 23．（13分）红斑丹毒丝菌是猪的病原性细菌（引起猪丹毒），其表面抗原A蛋白（SpaA）和胆碱结合蛋白B（CbpB）能诱导猪等产生特异性抗体。枯草芽孢杆菌是一种益生菌，为猪丹毒口服活载体疫苗的研发奠定基础。研究人员构建重组质粒（过程如图1）导入枯草芽孢杆菌，一段时间后分别收集菌体和芽孢（抗逆性强，适宜条件下能萌发形成菌体），制备在菌体表面表达SpaA的重组菌体活载体疫苗、芽孢表面表达CbpB的重组芽孢活载体疫苗，并通过小鼠免疫实验评价免疫效果。请回答下列问题： (1)已知引物R1与引物F2部分序列互补配对，以便合成融合基因spoⅢJ-spaA。其中R1的序列为5'-GCTGCCGCCACCGCCGCTTCCGCCACCGCCGCTTCCACCGCCACCCTTTTTCT-3'，则PCR2过程中构建的引物F2的序列为______。 ①5'-GAGGAGCGAAAACCGAGAGACTTAGGGCCTACGCTATATATCG-3' ②5'-CGCTGGCGGAACCGGCGGTGGCGGCAGCGATTCGAC-3' ③5'-GCCACCGCCTTCCCCCCCACCGCCGTCGCTAAGCTG-3' ④5'-TTGGCTATGTTTTACGATTAGGCAGCGATTCGAC-3' (2)已知过程⑦、⑧都用双酶切构建重组质粒，则设计PCR1时在引物F1的______端添加的限制酶识别序列是______。质粒pDC中BamHⅠ和EcoRⅠ之间的长度______（填“大于”、“小于”或“等于”）MfeⅠ和BelⅠ之间的长度。过程⑦、⑧不能同时在同一体系中进行的主要原因是______（2分），若同时进行，酶切后的连接产物多。 (3)将重组质粒pDG-CBJA导入枯草芽孢杆菌，将发生如图2所示的同源重组过程，pDG中的序列A、序列B的设计依据是______。 (4)对转化的枯草芽孢杆菌进行筛选时，应将菌种接种在含壮观霉素和______的平板上，37℃培养24h，加碘液，3min后弃去碘液，观察菌落周围有无透明圈产生，选择______的菌落来制备疫苗。 (5)科研人员研究了不同疫苗体液免疫应答的效果，结果如图3，A组为磷酸缓冲液，B组为野生型枯草芽孢杆菌菌体，C组为野生型枯草芽孢杆菌芽孢，D组为重组枯草芽孢杆菌菌体活载体疫苗，E组为重组枯草芽孢杆菌芽孢活载体疫苗。 ①五组实验中，______（2分）组为对照组。 ②小鼠口服菌体活载体疫苗（表达SpaA）后，血清抗SpaA抗体低；芽孢活载体疫苗不表达SpaA，但小鼠口服芽孢活载体疫苗后血清抗SpaA抗体较高，其原因是______（2分）。 24．（12分）苹果树腐烂病由真菌感染引起，是限制苹果产量的重要因素之一，目前该病以化学防治为主。为了开发生物防治的途径，研究者拟从土壤中分离筛选出能抑制苹果树腐烂病菌生长的芽孢杆菌。实验流程如图1： (1)分离筛选土壤中的芽孢杆菌：按上图步骤分离筛选土壤中的芽孢杆菌时，步骤①中，将5g土壤加入_________ml（2分）无菌水中充分振荡得到土壤悬液；步骤②中，将1ml土壤悬液进行梯度稀释，每种稀释度经过步骤③各在3个平板上接种（每个平板的接种量为0.2ml），经适当培养后，上图中稀释度为10-3和10-4两组平板上的菌落数分别为49、47、48和2、7、6.根据两组平板上的菌落数可计算出每克土壤中的芽孢杆菌数量为_________（2分）个，该结果会比实际结果偏小，原因是_________（2分）。 (2)筛选能抑制苹果树腐烂病菌生长的芽孢杆菌图1中，应取直径为5mm的_________的菌落移置于A处，B处接种_________。培养3~5天，测量并计算抑菌率。筛选出抑菌率最高的菌株，抑菌效果如图2。请将抑菌率的计算公式补充完整：抑菌率（%）=_________/（D-5）×100%（用图2中的字母表示）（2分） (3)请你说出与化学防治相比，生物防治的优势是_________（2分）。 / 学科网（北京）股份有限公司 $ 2025-2026学年高二生物下学期期中模拟卷 （考试时间：75分钟 试卷满分：100分） 注意事项： 1．本试卷分第Ⅰ卷（选择题）和第Ⅱ卷（非选择题）两部分。答卷前，考生务必将自己的姓名、准考证号填写在答题卡上。 2．回答第Ⅰ卷时，选出每小题答案后，用2B铅笔把答题卡上对应题目的答案标号涂黑。如需改动，用橡皮擦干净后，再选涂其他答案标号。写在本试卷上无效。 3．回答第Ⅱ卷时，将答案写在答题卡上。写在本试卷上无效。 4．测试范围：人教版选择性必修三。 5．考试结束后，将本试卷和答题卡一并交回。 第Ⅰ卷 一、单项选择题：本题共15个小题，每小题2分，共30分。每小题只有一个选项符合题目要求。 1．（原创题）葡萄酒的酿造技术历史悠久，唐代苏敬的《新修本草》云：凡作酒醴须曲，而蒲桃（即葡萄）、蜜等酒独不用曲。下列叙述错误的是（　　） A．在榨汁前对葡萄的处理是先清洗葡萄再去除枝梗 B．装置密闭发酵过程中，酒精度的变化是先增加后趋于稳定 C．若葡萄酒变酸且产生菌膜，一般可从菌膜中分离得到醋酸菌 D．"蒲桃、蜜等酒独不用曲"说明葡萄酒的酿制不需要微生物 【答案】D 【分析】在葡萄酒的自然发酵过程中，起主要作用的是附着在葡萄皮上的野生型酵母菌。在发酵过程中，随着酒精度数的提高，红葡萄皮的色素也进入发酵液，使葡萄酒呈现深红色。在缺氧、呈酸性的发酵液中，酵母菌可以生长繁殖，而绝大多数其他微生物都因无法适应这一环境而受到抑制。 【详解】A、在榨汁前对葡萄的处理是先清洗葡萄再去除枝梗，这样能够防止去除枝梗时露出的果肉被杂菌污染，A正确； B、装置密闭发酵过程中，随着发酵的进行酵母活细胞数量和酒精度逐渐增大，而在发酵后期酒精度趋于稳定，B正确； C、若发现葡萄酒变酸且产生表面菌膜，是由于醋酸菌大量的繁殖产生的菌膜，故一般可从菌膜中分离得到醋酸菌，C正确； D、在葡萄酒的自然发酵过程中，起主要作用的是附着在葡萄皮上的野生型酵母菌，因此可以“蒲桃、蜜等酒独不用曲”，并不是葡萄酒的酿制不需要微生物，D错误。 故选D。 2．（改编题）利用传统发酵技术制作的果酒、腐乳、泡菜等极大地丰富了人们的饮食，它们是我国传统饮食文化的重要组成部分。下列有关叙述正确的是（　　） A．制作果酒、腐乳和泡菜所利用的主要微生物均含有细胞核 B．制作腐乳时主要利用了毛霉产生的淀粉酶将淀粉分解成单糖 C．制作果醋、泡菜、果酒的过程中应先通气培养微生物，再密封发酵 D．制作果酒时，适当加大接种量可提高发酵速率，抑制杂菌生长 【答案】D 【分析】参与果酒制作的微生物是酵母菌；参与果醋制作的微生物是醋酸菌，醋酸菌能将糖或酒精转变成醋酸；参与腐乳制作的微生物有多种，如青霉、酵母、曲霉、毛霉等，其中起主要是毛霉；参与泡菜制作的微生物是乳酸菌。 【详解】A、制作果酒、腐乳和泡菜所利用的主要微生物分别是酵母菌、毛霉、乳酸菌，酵母菌和毛霉是真核生物，乳酸菌是原核生物，不含有细胞核，A错误； B、制作腐乳时主要利用了毛霉产生的蛋白酶和脂肪酶，B错误； C、酵母菌是兼性厌氧菌，制作果酒的过程中应先通气培养微生物使其大量繁殖，再密封发酵，醋酸菌是好氧菌，因此果醋需要一直通气，乳酸菌是厌氧菌，因此泡菜需要营造无氧环境，C错误； D、在制作果酒时，适当加大接种量可以提高微生物的初始数量，从而提高发酵速率，同时通过种间竞争抑制杂菌生长繁殖，D正确。 故选D。 3．（易错易混）在微生物培养过程中，关于灭菌和消毒的理解，错误的是（　　） A．实验中使用后的培养基丢弃前一定要进行消毒处理，以免污染环境 B．灭菌是杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子 C．消毒是指杀死物体表面或内部部分微生物 D．吸管和培养皿可以采用干热灭菌法 【答案】A 【分析】1、灭菌是指使用强烈的理化因素杀死物体内外一切微生物的细胞、芽孢和孢子的过程，常用的方法有灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌。 2、消毒是指用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体体表或内部的一部分微生物的过程，常用的方法有煮沸消毒法、巴氏消毒法、紫外线或化学药物消毒法等。 【详解】A、实验中使用后的培养基丢弃前一定要进行灭菌处理，以免污染环境，A错误； B、灭菌是将处理物体中的一切生物全部杀灭。在经过灭菌后的物体中，不再存在任何活着的生命，包括芽孢和孢子，B正确； C、消毒和灭菌的结果不完全相同，消毒只能杀灭物体体表或内部的一部分微生物，不能杀死孢子和芽孢，而灭菌能杀灭环境中一切微生物，包括孢子和芽孢，C正确； D、常用的灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌等，吸管和培养皿是玻璃器皿，可以采用干热灭菌法，D正确。 故选A。 4．（实验操作）如图是微生物平板划线示意图，划线的顺序为1、2、3、4、5.下列相关叙述错误的是（　　） A．第1区和第5区的划线不能相连 B．划线操作时完全打开皿盖，划完立即盖上 C．在五个区域中划线前后都要对接种环进行灭菌 D．平板划线需在酒精灯火焰旁操作 【答案】B 【分析】平板划线的操作的基本步骤是： （1）右手持接种环，经火焰灭菌，待凉后，在火焰旁打开盛有菌液的试管棉塞，并将试管口过火焰，将已冷却的接种环伸入菌液，沾取一环菌液，将试管口过火焰并塞上棉塞。 （2）左手斜持琼脂平板，皿盖打开一条缝，右手于火焰近处将接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿盖，接种环不应划破培养基表面。 （3）烧灼接种环，杀灭环上残留菌液，待冷却，从第一区域划线的末端开始往第二区内划线，重复以上操作，在第三四五区内划线，注意不要将最后一区的划线与第一区相连。 （4）将平板倒置，放入培养箱中培养。 【详解】A、进行平板划线时，不能将第1区和第5区的划线相连，避免已分离开的菌种再次聚集，最终无法获得单菌落，A正确； B、为避免杂菌污染，划线操作时不能将皿盖完全打开，只能打开一条缝，B错误； C、在五个区域中划线前后都要对接种环进行灭菌，以防止杂菌污染，并保证每次划线的菌种来自上一区域的末端以及防止污染环境和操作者，C正确； D、平板划线在酒精灯火焰旁操作，因为火焰旁是无菌区，能避免环境中杂菌污染培养基，D正确。 故选B。 5．（教材拓展）图示植物原生质体制备、分离和检测的流程。下列相关叙述正确的是（    ） A．步骤①添加盐酸以去除细胞壁 B．步骤②吸取原生质体放入无菌水中清洗 C．原生质体密度介于图中甘露醇和蔗糖溶液密度之间 D．台盼蓝检测后应选择蓝色的原生质体继续培养 【答案】C 【分析】植物的体细胞杂交是将不同植物的细胞通过细胞融合技术形成杂种细胞，进而利用植物的组织培养将杂种细胞培育成多倍体的杂种植株。植物体细胞杂交依据的原理是细胞膜的流动性和植物细胞的全能性。 【详解】A、步骤①添加纤维素酶或果胶酶去除细胞，其原理是酶的专一性，A错误； B、步骤②吸取原生质体放入等渗液中清洗，否则会导致原生质体吸水涨破，B错误； C、结合图示可知原生质体处于甘露醇和蔗糖溶液之间，因而可推测原生质体的密度介于图中甘露醇和蔗糖溶液密度之间，C正确； D、台盼蓝检测后应选择无色的原生质体继续培养，染成蓝色的原生质体活性差或死亡，D错误。 故选C。 6．三白草和鱼腥草因疗效相近且具有叠加效应常被中医用作“药对”。研究者欲利用原生质体融合技术将复方的配伍（两种或两种以上药物配合使用）提前到杂种细胞，并实现有效成分的工厂化生产，操作如图所示。下列有关叙述正确的是（　　） A．①过程可用盐酸和酒精混合液（1：1）配制的解离液来完成 B．②过程通常在略高渗溶液中采用灭活病毒诱导原生质体融合 C．③过程融合的原生质体需先形成细胞壁再进行有丝分裂 D．④过程配制培养基时需要添加植物生长调节剂和琼脂 【答案】C 【分析】图示为三白草和鱼腥草体细胞杂交过程，其中①为去除细胞壁，②为原生质体融合，③脱分化形成愈伤组织，④是植物细胞培养并提取代谢产物。 【详解】A、植物细胞壁的主要成分是纤维素和果胶，因此过程①三白草和鱼腥草体细胞杂交过程中要利用纤维素酶和果胶酶水解细胞壁获得原生质体，盐酸和酒精混合液（1：1）配制的解离液会杀死细胞，A错误； B、过程②通常在等渗或略高渗溶液中，不能用低渗溶液，否则，原生质体会吸水涨破；可以采用化学法（PEG融合法、高Ca2+—高pH融合法）或物理法诱导原生质体融合，不能灭活病毒诱导，B错误； C、杂种原生质体再生出细胞壁是杂种细胞形成的标志，只有先形成杂种细胞，才能进行有丝分裂，C正确； D、植物细胞培养用的是液体培养基，能够使分散开的植物细胞充分与营养液混合，有利于细胞对营养物质的吸收和利用，D错误。 故选C。 7．下图为小鼠细胞的培养过程示意图。下列叙述正确的是（　　） A．动物细胞培养至一定代数，所培养的细胞全部都会衰老死亡 B．为了保证细胞培养所需的无菌、无毒环境，可以添加适量的抗生素 C．制备细胞悬液时，可用胃蛋白酶处理组织块 D．培养过程中，需要CO2浓度维持在5%左右，以促进细胞呼吸 【答案】B 【分析】动物细胞培养的过程：取动物组织块→剪碎组织→用胰蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养液中（原代培养）→放入二氧化碳培养箱培养→贴满瓶壁的细胞用酶分散为单个细胞，制成细胞悬液→转入培养液（传代培养）→放入二氧化碳培养箱培养，在传代培养的过程中可能会发生癌变。动物细胞培养的目的是获得细胞群或细胞产物。 【详解】A、动物细胞培养至一定代数，部分细胞的遗传物质可能发生改变，并且带有癌变的特点，能在培养条件下无限制地传代下去，A错误； B、抗生素能抑制细菌生长，因此为了保证细胞培养所需的无菌、无毒环境，可以添加适量的抗生素，B正确； C、制备细胞悬浮液时应用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理，不能使用胃蛋白酶，因为胃蛋白酶需要在酸性环境下才能起作用，但这样的环境不适于细胞生存，C错误； D、恒温培养箱中的CO2浓度维持在5%左右，CO2的作用是维持培养液的pH，D错误。 故选B。 8．为研制抗病毒A的单克隆抗体，某课题组以小鼠甲为实验对象设计了以下实验流程。下列叙述正确的是（　　） A．实验处理前需给小鼠甲注射单细胞悬液 B．筛选2采用了核酸分子杂交的技术 C．只有体外配制培养液才能使杂交瘤细胞大量增殖 D．经选择培养基获得的杂交瘤细胞能无限增殖但分泌抗体类型不一定相同 【答案】D 【分析】单克隆抗体制备流程：先给小鼠注射特定抗原使之发生免疫反应，之后从小鼠脾脏中获取已经免疫的B淋巴细胞；诱导B细胞和骨髓瘤细胞融合，利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞；进行抗体检测，筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞；进行克隆化培养，即用培养基培养和注入小鼠腹腔中培养；最后从培养液或小鼠腹水中获取单克隆抗体。 【详解】A、实验处理前需给小鼠甲注射病毒A，获得以免疫的B淋巴细胞，再从小鼠甲的脾脏获取相关部位制备单细胞悬液，A错误； B、筛选2进行克隆化培养和抗体检测，依据原理是杂交瘤细胞能产生抗病毒A的抗体，抗原和抗体特异性结合，不属于核酸分子杂交技术，B错误； C、杂交瘤细胞的大量增殖可以在体外条件下做大规模培养，也可注射到小鼠腹腔内进行体内培养，C错误； D、由于分离出的B细胞有多种类型，而一种B细胞经分化为浆细胞后分泌一种抗体，故经选择培养基获得的杂交瘤细胞能无限增殖但分泌抗体类型不一定相同，D正确。 故选D。 9．融合PCR技术采用具有互补末端的引物，形成具有重叠链的PCR产物，通过PCR产物重叠链的延伸，从而将不同来源的任意DNA片段连接起来。其原理如图所示，据图分析错误的是（　　） A．上述过程中使用的引物P2和P3的碱基需要完全互补配对 B．设计引物的目的是能够从其3'端开始连接脱氧核苷酸 C．融合PCR的第一步两条链重叠部位可互为另一条链的引物 D．若融合PCR的第二步获得128个融合基因，理论上该过程消耗了254个引物 【答案】A 【分析】PCR是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链，低温（经常是60°C左右）时引物与单链按碱基互补配对的原则结合，再调温度至DNA聚合酶最适反应温度（72°C左右），DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链。基于聚合酶制造的PCR仪实际就是一个温控设备，能在变性温度，复性温度，延伸温度之间很好地进行控制。 【详解】A、上述过程中使用的引物P2和P3的碱基不需要完全互补配对，只需要部分碱基互补配对即可，A错误； B、引物为一段核苷酸，引物与DNA模板链结合后，能够从其3'端开始连接脱氧核苷酸，开始子链的合成，B正确； C、结合图示可知，融合PCR的第一步两条链重叠部位即互补配对，可互为另一条链的引物，C正确； D、若融合PCR的第二步获得了128个融合基因，引物数目和新合成的子链数目相同，即该过程消耗了128×2-2=254个引物，D正确。 故选A。 10．科研人员研发出单克隆抗体—肺癌药物偶联物，以减少肺癌药物对正常细胞的伤害，基本流程如图所示。下列相关叙述正确的是（　　） A．注射的特定抗原是肺癌细胞特有的大分子 B．①利用选择培养基筛选的方式获得了杂交瘤细胞 C．步骤③细胞培养时应提供95%O2和5%CO2的气体环境 D．抗体—肺癌药物偶联物中的a能特异性结合并杀死肿瘤细胞 【答案】A 【分析】单克隆抗体制备流程：先给小鼠注射特定抗原使之发生免疫反应，之后从小鼠脾脏中获取已经免疫的B淋巴细胞；诱导B细胞和骨髓瘤细胞融合，利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞；进行抗体检测，筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞；进行克隆化培养，即用培养基培养和注入小鼠腹腔中培养；最后从培养液或小鼠腹水中获取单克隆抗体。 【详解】A、要制备针对肺癌细胞的单克隆抗体，注射的特定抗原应是肺癌细胞特有的大分子，这样才能刺激小鼠产生能特异性结合肺癌细胞的B淋巴细胞 ，A正确； B、①是细胞融合过程，之后还需用选择培养基筛选（获得杂交瘤细胞 ）以及进行抗体检测（获得能产生特定抗体的杂交瘤细胞 ），并非仅通过①利用选择培养基筛选就获得杂交瘤细胞，B错误； C、动物细胞培养时应提供95%空气（其中O2满足细胞呼吸需求 ）和5%CO2（维持培养液的pH）的气体环境，C错误； D、抗体-肺癌药物偶联物中的a为抗体，能特异性结合肿瘤细胞，起到导向作用，杀死肿瘤细胞的是偶联的药物，不是抗体，D错误。 故选A。 11．下列关于 DNA 的粗提取和鉴定实验的叙述，正确的是（　　） A．用猪血作为材料，原因是猪血红细胞有细胞核 B．用二苯胺试剂进行鉴定，原因是 DNA 溶液中加入二苯胺试剂即呈蓝色 C．用酒精进行提纯，原因是DNA 溶于酒精,蛋白质不溶于酒精 D．用不同浓度的 NaCl 溶液进行DNA 粗提取，原因是 DNA 在其中溶解度不同 【答案】D 【分析】1、DNA粗提取选材的标准： DNA含量高，并且材料易得。由于哺乳动物成熟的红细胞中没有细胞核和细胞器，因此不采用哺乳动物的血液。 2、DNA粗提取和鉴定的原理： （1）DNA的溶解性：DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同(DNA在0.14mol/L的氯化钠中溶解度最低) ；DNA不溶于酒精溶液，但细胞中的某些蛋白质溶于酒精。 （2）DNA对酶、 高温和洗涤剂的耐受性不同。 （3）DNA的鉴定：在沸水浴的条件下，DNA遇二苯胺会被染成蓝色。 【详解】A、猪是哺乳动物，做DNA粗提取和鉴定实验时，实验材料用鸡血而不用猪血，原因是哺乳动物的成熟的红细胞中没有细胞核和细胞器，因此不含DNA，A错误； B、DNA溶液加入二苯胺试剂必须在沸水浴条件下才呈现蓝色，B错误； C、在对DNA提纯时，由于DNA不溶于酒精，而其它杂质可以溶于酒精，因此可以除去溶于酒精的杂质，C错误； D、由于DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，根据此原理可以对DNA粗提取，D正确。 故选D。 12．四种限制酶的切割位点如图所示，下列叙述错误的是（　　） A．上图中EcoRⅠ、PstⅠ两种酶切割后的DNA片段可以用E.coliDNA连接酶连接 B．图中SmaⅠ、EcoR V两种酶切割后的DNA片段，可以用T4DNA连接酶连接 C．DNA连接酶催化目的基因片段与质粒载体片段连接的化学键是磷酸二酯键 D．限制酶能识别特定的核苷酸序列，具有专一性，不同的限制酶切割不能产生相同的黏性末端 【答案】D 【分析】1、基因工程的基本操作步骤为：获取目的基因、形成重组DNA分子、将重组DNA分子导入受体细胞、筛选含有目的基因的受体细胞和目的基因的表达。 2、基因工程的工具：限制性核酸内切酶（限制酶）、DNA连接酶、运载体。 【详解】A、EcoRⅠ、PstⅠ两种酶切割后，都会形成黏性末端，而E.coliDNA连接酶可以连接具有相同黏性末端的DNA片段，A正确； B、SmaⅠ、EcoRV两种酶切割后形成的是平末端，而T4DNA连接酶可以连接具有平末端的DNA片段，B正确； C、DNA连接酶是催化DNA片段的连接，形成的是磷酸二酯键，C正确； D、不同的限制酶也可能形成相同的黏性末端，D错误。 故选D。 13．模型构建是生命科学教学、科研的一种重要方法。下图是生物概念模型，相关分析错误的是（　　） A．若图示为基因工程，则C为重组质粒，D为受体细胞 B．若图示为试管婴儿技术，C～D为早期胚胎培养和胚胎移植 C．若图示为植物体细胞杂交部分流程，用灭活的病毒融合A、B得到C D．若图示为核移植技术，则 B 可能为去核卵母细胞 【答案】C 【分析】1、动物细胞核移植技术是将动物一个细胞的细胞核移入去核的卵母细胞中，使这个重新组合的细胞发育成新胚胎，继而发育成动物个体的技术。 2、基因工程是指按照人们的愿望，通过转基因等技术，赋予生物新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。从技术操作层面看，由于基因工程是在DNA 分子水平上进行设计和施工的，因此又叫作重组DNA技术。 【详解】A、若图示为基因工程，则C为重组质粒，是目的基因和载体相连形成的，D为受体细胞，为重组质粒的表达提供条件，A正确； B、若图示为试管婴儿技术，A和B结合表示体外受精，C为早期胚胎培养，D为胚胎移植，B正确； C、若图示为植物体细胞杂交部分流程，则A、B表示两种不同的植物细胞除去细胞壁之后采用物理或化学方法进行融合形成杂种细胞C，该过程中没有用到灭活的病毒，灭活的病毒一般用于动物细胞融合而不是植物细胞融合，C错误； D、核移植技术需要将一个细胞的细胞核移植到去核的卵母细胞中，若图示为核移植技术，则B可能为去核卵母细胞，此时A可能是细胞核供体细胞，D正确。 故选C。 14．下列有关生物技术的叙述，错误的是（　　） A．在动物细胞培养液中添加一定量的抗生素以防止杂菌污染 B．进行单个植物细胞培养必须先用酶水解细胞壁以获得原生质体 C．动物细胞融合与植物体细胞杂交都可用电融合法或PEG融合法诱导融合 D．可利用转基因“工程菌”修复被污染的土壤 【答案】B 【分析】发酵工程是指采用现代工程技术手段，利用微生物的某些特定功能，为人类生产有用的产品，或直接把微生物应用于工业生产过程的一种技术。发酵工程的内容包括菌种选育、培养基的配制、灭菌、种子扩大培养和接种、发酵过程和产品的分离提纯（生物分离工程）等方面。 【详解】A、抗生素可杀灭细菌，在动物细胞培养液中添加一定量的抗生素以防止杂菌污染，A正确； B、进行单个植物细胞培养时不需要用酶解法去除细胞壁，植物体细胞杂交过程中必须先用酶水解细胞壁以获得原生质体，B错误； C、动物细胞融合与植物体细胞杂交都可用电融合法或PEG融合法诱导融合，动物细胞融合还可利用灭火病毒诱导，C正确； D、工程菌是指用基因工程的方法，使外源基因得到高效率表达的菌类细胞株系，故可利用转基因“工程菌”修复被污染的土壤，D正确。 故选B。 15．下列有关实验操作的叙述，正确的是（　　） A．可用蛋白酶合成抑制剂激活重构胚，使其完成细胞分裂和发育进程 B．诱导愈伤组织和后续的培养过程中，每日需要给予适当时间和强度的光照 C．培养前需要用适宜浓度的乙醇和次氯酸钠的混合液对外植体进行消毒 D．脱分化过程中需在培养基中添加特定的激素以诱导愈伤组织形成胚状体 【答案】A 【分析】植物组织培养过程是：离体的植物器官、组织或细胞脱分化形成愈伤组织，然后再分化生成根、芽，最终形成植物体。植物组织培养依据的原理是植物细胞的全能性。 【详解】A、蛋白酶合成抑制剂通过阻断细胞周期调控蛋白（如促成熟因子）的降解，维持这些蛋白的活性水平，使重构胚重启细胞周期并进入分裂阶段，A正确； B、诱导愈伤组织不需要每日给予适当时间和强度的光照，B错误； C、培养前需要用适宜浓度的乙醇和次氯酸钠分别对外植体进行消毒，C错误； D、再分化过程中需在培养基中添加特定的激素以诱导形成胚状体，D错误。 故选A。 二、多项选择题：本题共4个小题，每小题3分，共12分。每小题少选得1分，多选错选都不得分。 16．研究人员制备了膀胱生物反应器，用其获得人体特殊功能蛋白S，基本过程如图所示。下列相关叙述不正确的是（　　） A．步骤①需要在S基因编码区上游添加乳腺蛋白基因启动子 B．步骤②需要在高Ca2+-高pH条件下将S基因表达载体导入受精卵 C．步骤④可选择发育良好的囊胚，且代孕母体一般需要同期发情处理 D．与乳腺反应器不同的是膀胱生物反应器会受到转基因动物的性别和年龄的限制 【答案】ABD 【分析】题图分析：①表示基因表达载体的构建，②表示将目的基因导入受体细胞，③表示早期胚胎培养，④表示胚胎移植。 【详解】A、步骤①需要在S基因编码区上游导入膀胱上皮细胞蛋白基因启动子，A错误； B、步骤②是将重组表达载体导入受体细胞，受精卵的全能性最大，利用受精卵作为重组表达载体的宿主细胞常采用显微注射的方法将载体导入，B错误； C、步骤④的代孕母体需进行同期发情处理，这样可以为移入的胚胎提供相同的生理环境，C正确； D、乳腺生物反应器要求性别是雌性、年龄适宜，膀胱生物反应器没有这些要求，D错误。 故选ABD。 17．有些酵母可以利用工业废甲醇作为碳源进行培养，这样既可减少污染又可降低生产成本。研究人员拟从土壤样品中分离该类酵母，并进行大量培养。下图所示为操作流程：有关叙述不正确的是（　　） A．在称取土壤、稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁操作 B．将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行消毒即可 C．步骤③中，将温度约80℃的培养基倒入培养皿混匀，冷凝后倒置培养 D．步骤④中，划线时应避免划破培养基表面，以免不能形成正常菌落 【答案】ABC 【分析】由图分析可知，①表示称量土样，土样中含有需要分离的酵母菌；②表示梯度稀释，目的是尽量使样品中的微生物细胞分散开，使成单个细胞存在；③表示倒平板，需要冷却到50℃左右，培养基才能用来倒平板。可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，当感觉到锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板。操作时应使锥形瓶的瓶口通过火焰，以防止瓶口的微生物污染培养基；④表示平板划线法，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落，目的是纯化培养。 【详解】A、称取土壤、稀释土壤溶液的过程可以不用在火焰旁进行，A错误； B、用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌处理，B错误； C、倒平板时，当感觉到锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板，一般温度在50℃左右，C错误； D 、平板划线时，应避免划破培养基表面，以免不能形成正常的单个菌落，D正确。 故选ABC。 18．北京航空航天大学教授杨军成功从黄粉虫幼虫消化道中分离出能降解聚乙烯塑料的细菌——微小杆菌YT2。下图表示目的菌的获取过程。下列相关叙述中，合理的是（　　） A．富集培养应使用牛肉膏蛋白胨培养基，以促进目的菌增殖 B．选择培养基的成分中应以塑料作为唯一碳源 C．将1ml菌液加入培养基，再使用涂布器进行均匀涂布 D．使用固体斜面培养基保存微生物时，应置于低温环境中 【答案】BD 【分析】培养基是人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质；培养基是人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质；分为固体培养基和液体培养基，培养基中一般含有水、碳源、氮源和无机盐。在提供上述几种主要营养物质的基础上，培养基还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质和氧气的要求。在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称做选择培养基。 【详解】A、富集培养的目的是促进目的菌增殖，因此应该提供适合降解聚乙烯塑料的细菌生长的环境，使用相应选择培养基，A错误； B、要分离出能降解聚乙烯塑料的细菌，选择培养基的成分中应以塑料作为唯一碳源，B正确； C、一般情况下，取0.1ml菌液加入培养基，再涂布，C错误； D、使用固体斜面培养基保存微生物时，应置于低温环境中，低温抑制微生物代谢和繁殖，有利于菌种保存，D正确。 故选BD。 19．基因芯片的测序原理是：先将各不相同的已知序列的八核苷酸探针分别固定在玻片的方格中，再与带荧光标记的待测DNA单链进行杂交，通过确定荧光强度最强的探针位置与对应序列，推出待测序列，如图所示。 下列叙述正确的是（　　） A．上述测序方法是基于DNA-DNA分子杂交实现的 B．通过给探针标记荧光也可达到与上图同样的效果 C．应洗去未与探针结合的待测DNA分子后再检测荧光 D．根据图示结果可推出待测序列为5'-GATCTAACGTAT-3' 【答案】ACD 【分析】1、基因工程是指按照人们的意愿，进行严格的设计，并通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品； 2、基因工程技术的基本步骤：目的基因的获取；基因表达载体的构建；将目的基因导入受体细胞；目的基因的检测与鉴定； 3、题意分析：题干信息：基因芯片测序原理是将已知序列的八核苷酸探针固定在玻片方格中，与带荧光标记的待测DNA单链杂交，通过确定荧光强度最强的探针位置与对应序列推出待测序列。 【详解】A、因为是已知序列的探针与待测DNA单链杂交，所以上述测序方法是基于DNA-DNA分子杂交实现的，A正确； B、由题干可知是给待测DNA单链标记荧光，若给探针标记荧光，则无法区分与待测DNA单链结合的不同探针，B错误； C、若不洗去未与探针结合的待测DNA分子，会干扰对与探针结合的待测DNA分子的荧光检测，所以应洗去未结合的，C正确； D、根据图示，待测DNA单链可以与1~5探针结合，1~5探针的碱基序列连在一起是5'-ATACGTTAGATC-3'，待测序列为5'-GATCTAACGTAT-3'，D正确。 故选ACD。 第Ⅱ卷 三、非选择题（5小题，共58分） 20．（13分）柠檬酸是一种广泛应用的食品酸度调节剂，食品工业生产柠檬酸时，可以红薯粉为原料经黑曲霉发酵获得，如图为黑曲霉发酵工程生产柠檬酸的简要流程图。请回答下列问题： (1)生产柠檬酸的优良菌种可以从自然界中筛选出来，也可以通过_________（2分）育种获得。（至少答出二种育种方法即可） (2)据图分析，将菌种接种至A培养基的方法为_________，将该菌种由A培养基转接至B培养基的目的是_________。 (3)请从培养基营养成分的角度分析，加蛋白胨的作用是_________（2分）。 (4)在柠檬酸发酵过程中，操作人员会定时检测培养液中的黑曲霉浓度以了解发酵进程，若将稀释了100倍的培养液用血细胞计数板（1mm×1mm×0.1mm，25个中方格，每个中方格包含16个小格）通过显微镜观察计数，则理论上统计的中方格中黑曲霉平均数量应不少于_________（2分）个才能达到7.5×108个/mL的预期浓度。 (5)若用发酵工程制作黄皮甜米酒，为确定黄酒高活性干酵母（YWBY）的添加量及发酵时间，研究人员进行了相关实验，实验结果如下图2所示。根据实验结果制作黄皮甜米酒时，YWBY的最佳接种量及主发酵时间分别是_________（2分）。据下图2分析，YWBY接种量为0.12%时，酒精含量最低的原因可能是_________（2分）。若发酵产品是单细胞蛋白，则往往采用_________方法将其分离和干燥，即可获得产品。 【答案】(1)诱变育种、基因工程（2分） (2) 平板划线法 扩大培养(或增加黑曲霉菌种数量) (3)提供碳源、氮源、维生素（2分） (4)30（2分） (5) 0.1%、8天 （2分） 接种量较大，菌种数量增长过快导致葡萄糖消耗过多，用于酵母菌无氧呼吸产生酒精的葡萄糖减少（2分） 过滤、沉淀 【分析】虽然各种培养基的具体配方不同，但一般都含有水、碳源（提供碳元素的物质）、氮源（提供氮元素的物质）和无机盐。另外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。例如，培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素，培养霉菌时需将培养基的pH调至酸性，培养细菌时需将pH调至中性或微碱性，培养厌氧微生物时则需要提供无氧的条件。 【详解】（1）优良菌种可以从自然界中筛选，也可以通过诱变育种、基因工程育种获得。 （2）据图分析，将菌种接种至A培养基的方法为平板划线法，将该菌种由A培养基转接至B培养基的目的是 扩大培养（增加菌种数量，为大规模发酵做准备 ）（振荡提供氧气，利于菌种繁殖 ）。 （3）蛋白胨含多种有机物，满足微生物生长需求，能为黑曲霉提供 碳源、氮源和维生素等营养物质。 （4）血细胞计数板规格1mm×1mm×0.1mm，25个中方格，每个中方格16小格。设中方格中黑曲霉平均数量为x，则1mL原液中数量为 x×25×100÷(0.1×10−3)=7.5×108，计算得x=30 ，即中方格中平均数量不少于30个。 （5）为确定黄酒高活性干酵母（YWBY）的添加量及发酵时间，由图可知0.1%YWBY的接种量时酒精的产生量最高，产酒精量比其它接种量高，因此最佳接种量为0.1%。培养第8天酒精的产量和还原糖的含量各组趋于稳定，故YWBY的最佳接种量及主发酵时间分别是0.1%、8天。据图2可知，接种量为0.12%时，酒精含量最低，原因可能是接种量较大，菌数剧增过快导致葡萄糖消耗过多，用于酵母菌无氧呼吸产生酒精的葡萄糖减少。若发酵产品是单细胞蛋白，则往往采用过滤、沉淀方法将其分离和干燥，即可获得产品。 21．（10分）牛支原体是严重危害牛养殖业的一种病原体，它能引起肺炎、关节炎等多种疾病。VspX蛋白是牛支原体表面的一种脂蛋白，在牛支原体感染宿主细胞时起黏附作用。科研人员制备抗VspX单克隆抗体，进行相关研究。请回答下列问题： (1)以VspX蛋白为抗原制备单克隆抗体，需用纯化的VspX蛋白对小鼠进行多次免疫，其目的是刺激机体产生更多的分泌__________（2分）的B淋巴细胞。 (2)杂交瘤细胞__________（2分）（填“能”或“不能”）产生专一抗体，所产生的抗体__________（2分）（填“一定”或“不一定”）能抗VspX蛋白。 (3)若将筛选出的杂交瘤细胞培养、稀释后接种到96孔培养板中，每一个孔中尽量只接种__________个杂交瘤细胞以实现克隆化培养。 (4)将抗VspX抗体与不同抗原进行杂交，免疫印迹分析如图所示，实验结果显示抗VspX单克隆抗体不能与__________（2分）结合，表明抗VspX抗体具有__________。 【答案】(1)抗VspX抗体（2分） (2) 能 （2分） 不一定（2分） (3)1 (4) 3、4 （2分） 特异性 【分析】单克隆抗体的制备过程：首先用特定抗原注射小鼠体内，使其发生免疫，小鼠体内产生具有免疫能力的B淋巴细胞。利用动物细胞融合技术将B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合。单克隆抗体制备过程中的两次筛选：第一次筛选：利用特定选择培养基筛选，获得杂交瘤细胞，即AB型细胞(A为B淋巴细胞，B为骨髓瘤细胞)，不需要A、B、AA、BB型细胞；第二次筛选：利用多孔板法和抗原-抗体杂交法筛选，获得产生特定抗体的杂交瘤细胞。 【详解】（1）依据题干信息，制备以VspX蛋白为抗原制备单克隆抗体，首先需要用纯化的VspX蛋白对小鼠进行多次免疫，其目的是为了刺激机体产生更多的分泌抗VspX抗体的B淋巴细胞，然后利用细胞融合技术，获得杂交瘤细胞。 （2）一个B淋巴细胞只能产生一种抗体，筛选出来的杂交瘤细胞有多个，每一个杂交瘤细胞能产生专一抗体，但产生的不一定是抗VspX蛋白的抗体，故杂交瘤细胞所产生的抗体不一定能抗VspX蛋白。 （3）将筛选出的杂交瘤细胞培养、稀释后接种到96孔培养板中，每一个孔中尽量只接种1个杂交瘤细胞以实现克隆化培养。 （4）据图可知，抗VspX抗体不能与3羊无乳支原体全菌蛋白、4丝状支原体丝状全菌蛋白结合，也说明了抗VspX抗体具有特异性。 22．（10分）世界卫生组织解释克隆为“遗传上同一的机体或细胞系(株)的无性繁殖”。相对于植物克隆而言，动物尤其是高等动物的克隆比较困难，如图表示哺乳动物克隆的几种方法的主要步骤，据图所示回答下列问题: (1)方法2获得的小牛的遗传物质主要来源于___________________（2分）。方法3中①和②发育成的小牛的遗传物质______________(填“相同”或“不同”)。 (2)细胞B取自囊胚的___________，具有发育全能性，称为____________细胞。囊胚___________(填“已经”或“尚未”)出现分化。 (3)应用图示方法_________________得到小牛与供体l遗传物质最相似。 (4)方法1、方法2和方法3获得的胚胎通过胚胎移植技术转移到________________处理的受体母牛输卵管或子宫内。 (5)克隆也可以理解为复制、拷贝，结合世界卫生组织的定义，你认为还有哪些现代生物技术也属于克隆__________________（2分）。(至少写出两个) 【答案】(1) 供体1和供体2 （2分） 相同 (2) 内细胞团 胚胎干 已经 (3)1 (4)经过同期发情处理 (5)单克隆抗体、植物组织培养、动物细胞培养（2分） 【分析】分析题图：图示表示哺乳动物克隆的几种方法的主要步骤，其中方法1主要采用了核移植技术来培育克隆动物，该技术得到的子代的遗传物质主要来自供体；方法2主要采用体外受精技术，该技术得到的子代的遗传物质来自双亲；方法3主要采用了胚胎分割技术。 【详解】（1）方法2提取的细胞来自正常受精作用形成的胚胎，而受精卵的遗传物质来自双亲，结合图解可知方法2获得的小牛的遗传物质来源于供体1和供体2。方法3中采用了胚胎分割技术，而来自同一个胚胎的后代具有相同的遗传物质，因此方法3中①和②发育成的小牛的遗传物质相同。’ （2）细胞B取自囊胚的内细胞团，内细胞团的细胞具有很高的全能性，称为胚胎干细胞。囊胚已经出现了内细胞团细胞和滋养层细胞的分化。 （3）动物细胞核移植获得个体，遗传物质几乎与供体相同。因此，应用图示方法1得到的小牛与供体1遗传物质最相似。 （4）胚胎移植时需将受体母体进行同期发情处理。 （5）根据世界卫生组织对克隆的概念可知除上述个体克隆外，植物组织培养也是个体克隆，制备单克隆抗体是细胞的克隆，PCR技术是分子的克隆。 23．（13分）红斑丹毒丝菌是猪的病原性细菌（引起猪丹毒），其表面抗原A蛋白（SpaA）和胆碱结合蛋白B（CbpB）能诱导猪等产生特异性抗体。枯草芽孢杆菌是一种益生菌，为猪丹毒口服活载体疫苗的研发奠定基础。研究人员构建重组质粒（过程如图1）导入枯草芽孢杆菌，一段时间后分别收集菌体和芽孢（抗逆性强，适宜条件下能萌发形成菌体），制备在菌体表面表达SpaA的重组菌体活载体疫苗、芽孢表面表达CbpB的重组芽孢活载体疫苗，并通过小鼠免疫实验评价免疫效果。请回答下列问题： (1)已知引物R1与引物F2部分序列互补配对，以便合成融合基因spoⅢJ-spaA。其中R1的序列为5'-GCTGCCGCCACCGCCGCTTCCGCCACCGCCGCTTCCACCGCCACCCTTTTTCT-3'，则PCR2过程中构建的引物F2的序列为______。 ①5'-GAGGAGCGAAAACCGAGAGACTTAGGGCCTACGCTATATATCG-3' ②5'-CGCTGGCGGAACCGGCGGTGGCGGCAGCGATTCGAC-3' ③5'-GCCACCGCCTTCCCCCCCACCGCCGTCGCTAAGCTG-3' ④5'-TTGGCTATGTTTTACGATTAGGCAGCGATTCGAC-3' (2)已知过程⑦、⑧都用双酶切构建重组质粒，则设计PCR1时在引物F1的______端添加的限制酶识别序列是______。质粒pDC中BamHⅠ和EcoRⅠ之间的长度______（填“大于”、“小于”或“等于”）MfeⅠ和BelⅠ之间的长度。过程⑦、⑧不能同时在同一体系中进行的主要原因是______（2分），若同时进行，酶切后的连接产物多。 (3)将重组质粒pDG-CBJA导入枯草芽孢杆菌，将发生如图2所示的同源重组过程，pDG中的序列A、序列B的设计依据是______。 (4)对转化的枯草芽孢杆菌进行筛选时，应将菌种接种在含壮观霉素和______的平板上，37℃培养24h，加碘液，3min后弃去碘液，观察菌落周围有无透明圈产生，选择______的菌落来制备疫苗。 (5)科研人员研究了不同疫苗体液免疫应答的效果，结果如图3，A组为磷酸缓冲液，B组为野生型枯草芽孢杆菌菌体，C组为野生型枯草芽孢杆菌芽孢，D组为重组枯草芽孢杆菌菌体活载体疫苗，E组为重组枯草芽孢杆菌芽孢活载体疫苗。 ①五组实验中，______（2分）组为对照组。 ②小鼠口服菌体活载体疫苗（表达SpaA）后，血清抗SpaA抗体低；芽孢活载体疫苗不表达SpaA，但小鼠口服芽孢活载体疫苗后血清抗SpaA抗体较高，其原因是______（2分）。 【答案】(1)② (2) 5， CAATTG 等于 BamHI和BclI是同尾酶，EcoRI和MfeI是同尾酶，过程⑦、⑧形成的黏性末端相同，易导致融合基因错误连接（2分） (3)amyE基因两端的部分序列 (4) 淀粉 周围没有透明圈 (5) ABC（2分） 芽孢抗逆性强，芽孢能顺利通过胃肠道进入内环境；适宜条件下芽孢萌发成菌体并表达SpaA， 激活体液免疫（2分） 【分析】基因工程的基本操作步骤主要包括四步：①目的基因的获取；②基因表达载体的构建；③将目的基因导入受体细胞；④目的基因的检测与表达。其中，基因表达载体的构建是基因工程的核心。 【详解】（1）已知引物R1与引物F2部分序列互补配对，②中5，GGTGGCGG 3，序列与R1的序列5，CCGCCACC 3，互补配对，PCR后可以合成融合基因spoⅢJ-spaA，因此引物F2的序列为②对应的序列。故选②。 （2）融合基因spoⅢJ-spaA两端的引物为F1和R2，结合接入质粒的位置，两边的限制酶序列对应为MfeⅠ和Bel Ⅰ，因此F1的5'端应加上MfeⅠ的识别序列，R2的5'端应加上Bel Ⅰ的识别序列，接入融合基因spoⅢJ-spaA，同理在BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ之间接入catC-cbpB融合基因。质粒pDC中BamHⅠ和EcoRⅠ之间的长度为7602-（9876-2295）=21bp，MfeⅠ和BelⅠ之间的长度为9876-（11377-1522）=21bp，二者相等；BamH Ⅰ和Bel Ⅰ形成的黏性末端均为5，GATC 3，，EcoR Ⅰ和Mfe Ⅰ形成的黏性末端均为5，AATT 3，，会导致两种融合基因错接入质粒，酶切后的连接产物多，因此过程⑦、⑧不能同时在同一体系中进行。 （3）将重组质粒pDG-CBJA导入枯草芽孢杆菌，与序列A、B所在的地方发生同源重组，即融合基因的两侧与序列A、B的基因序列相同，发生同源替换，故序列A应与amyE基因两端的部分序列相同。 （4）转化的枯草芽孢杆菌含有壮观霉素抗性基因和不完整的淀粉酶基因，应将菌种接种在含壮观霉素和淀粉的平板上进行筛选；由于淀粉酶基因被破坏，因此不能降解淀粉，菌落周围无透明圈。 （5）①红斑丹毒丝菌表面抗原A蛋白（SpaA）和胆碱结合蛋白B（CbpB）能诱导猪等产生特异性抗体，为研究不同疫苗体液免疫应答的效果，ABC均为对照组，DE为实验组。②菌体疫苗在消化道内易死亡，而芽孢是细菌休眠体，芽孢抗逆性强，芽孢能顺利通过胃肠道进入内环境；适宜条件下芽孢萌发成菌体并表达SpaA， 激活体液免疫。 24．（12分）苹果树腐烂病由真菌感染引起，是限制苹果产量的重要因素之一，目前该病以化学防治为主。为了开发生物防治的途径，研究者拟从土壤中分离筛选出能抑制苹果树腐烂病菌生长的芽孢杆菌。实验流程如图1： (1)分离筛选土壤中的芽孢杆菌：按上图步骤分离筛选土壤中的芽孢杆菌时，步骤①中，将5g土壤加入_________ml（2分）无菌水中充分振荡得到土壤悬液；步骤②中，将1ml土壤悬液进行梯度稀释，每种稀释度经过步骤③各在3个平板上接种（每个平板的接种量为0.2ml），经适当培养后，上图中稀释度为10-3和10-4两组平板上的菌落数分别为49、47、48和2、7、6.根据两组平板上的菌落数可计算出每克土壤中的芽孢杆菌数量为_________（2分）个，该结果会比实际结果偏小，原因是_________（2分）。 (2)筛选能抑制苹果树腐烂病菌生长的芽孢杆菌图1中，应取直径为5mm的_________的菌落移置于A处，B处接种_________。培养3~5天，测量并计算抑菌率。筛选出抑菌率最高的菌株，抑菌效果如图2。请将抑菌率的计算公式补充完整：抑菌率（%）=_________/（D-5）×100%（用图2中的字母表示）（2分） (3)请你说出与化学防治相比，生物防治的优势是_________（2分）。 【答案】(1) 45 （2分） 2.4×105（2分） 当两个或多个细菌相连时，在平板上只观察到一个菌落（2分） (2) 苹果树腐烂病菌 芽孢杆菌 （D-d）（2分） (3)降低环境污染；减少化学药剂在果实中的残留；对其他生物扰动小（2分） 【分析】1、菌落是指由一个微生物细胞或一堆同种细胞在适宜固体培养基表面或内部生长繁殖到一定程度，形成肉眼可见的子细胞群落。菌落形态包括菌落的大小、形状、边缘、光泽、质地、颜色和透明程度等，每一种细菌在一定条件下形成固定的菌落特征。不同种或同种在不同的培养条件下，菌落特征是不同的．这些特征对菌种识别、鉴定有一定意义。 2、由题干信息分析可知，该实验的目的是从土壤中分离筛选出能抑制苹果树腐烂病菌生长的芽孢杆菌，故实验组中应接种苹果树腐烂病菌，而对照组应接种芽孢杆菌。 【详解】（1）分离筛选土壤中的芽孢杆菌图1中①取5g土壤加入45mL无菌水中充分振荡得到10-1的土壤悬液。选择菌落数在30-300个的平板进行计数，每升土壤悬液中的活菌数为（49+47+48）÷3×103×0.2=2.4×105个；该结果会比实际结果偏小，原因是当两个或多个细菌相连时，在平板上只观察到一个菌落。 （2）图1中，应取直径为5mm的苹果树腐烂病菌的菌落移置于A处，B处接种芽孢杆菌。抑菌率（%）=（D-d）/（D-5）×100%。 （3）与化学防治相比，生物防治的优势是降低环境污染；减少化学药剂在果实中的残留；对其他生物扰动小。 / 学科网（北京）股份有限公司 $ 11 2025-2026学年高二生物下学期期中模拟卷 生物·答题卡 贴条形码区 考生禁填： 缺考标记 违纪标记 以上标志由监考人员用2B铅笔填涂 选择题填涂样例： 正确填涂 错误填涂 [×] [√] [／] 1．答题前，考生先将自己的姓名，准考证号填写清楚，并认真核准条形码上的姓名、准考证号，在规定位置贴好条形码。 2．选择题必须用2B铅笔填涂；非选择题必须用0.5 mm黑色签字笔答题，不得用铅笔或圆珠笔答题；字体工整、笔迹清晰。 3．请按题号顺序在各题目的答题区域内作答，超出区域书写的答案无效；在草稿纸、试题卷上答题无效。 4．保持卡面清洁，不要折叠、不要弄破。 注意事项 姓 名：__________________________ 准考证号： 一、单项选择题：1-15题，每小题2分，共30分； 二、多项选择题：16-19题，每小题3分，少选得1分，多选错选都不得分，共12分。 1.[ A ] [ B ] [ C ] [ D ] 2.[ A ] [ B ] [ C ] [ D ] 3.[ A ] [ B ] [ C ] [ D ] 4.[ A ] [ B ] [ C ] [ D ] 5.[ A ] [ B ] [ C ] [ D ] 6.[ A ] [ B ] [ C ] [ D ] 7.[ A ] [ B ] [ C ] [ D ] 8.[ A ] [ B ] [ C ] [ D ] 9.[ A ] [ B ] [ C ] [ D ] 10.[ A ] [ B ] [ C ] [ D ] 11.[ A ] [ B ] [ C ] [ D ] 12.[ A ] [ B ] [ C ] [ D ] 13.[ A ] [ B ] [ C ] [ D ] 14.[ A ] [ B ] [ C ] [ D ] 15.[ A ] [ B ] [ C ] [ D ] 16.[ A ] [ B ] [ C ] [ D ] 17.[ A ] [ B ] [ C ] [ D ] 18.[ A ] [ B ] [ C ] [ D ] 19.[ A ] [ B ] [ C ] [ D ] 三、非选择题：（本分共5小题，共计58分） 20．（13分，除注明外，每空1分） 【答案】(1) （2分） (2) (3) （2分） (4) （2分） (5) （2分） （2分） 请在各题目的答题区域内作答，超出黑色矩形边框限定区域的答案无效！ 21．（10分，除注明外，每空1分） 【答案】(1) （2分） (2) （2分） （2分） (3) (4) （2分） 22．（10分，除注明外，每空1分） 【答案】(1) （2分） (2) (3) (4) (5) （2分） 23．（13分，除注明外，每空1分，） 【答案】(1) (2) （2分） (3) (4) (5) （2分） （2分） 24．（12分，除注明外，每空1分） 【答案】(1) （2分） （2分） （2分） (2) （2分） (3) （2分） 学科网（北京）股份有限公司 $2025-2026学年高二生物下学期期中模拟卷 日 生物答题卡 姓 名： 准考证号： 贴条形码区 注意事项 ===-==-。。==--=--。====-=●一一==- 1.答题前，考生先将自己的姓名，准考证号填写清楚，并认真核准 考生禁填： 缺考标记 口 条形码上的姓名、准考证号，在规定位置贴好条形码。 违纪标记 ▣ 2.选择题必须用2B铅笔填涂；非选择题必须用0.5mm黑色签字笔 以上标志由监考人员用2B铅笔填涂 答题，不得用铅笔或圆珠笔答题；字体工整、笔迹清晰。 3.请按题号顺序在各题目的答题区域内作答，超出区域书写的答案 选择题填涂样例： 无效；在草稿纸、试题卷上答题无效。 正确填涂 4. 保持卡面清洁，不要折叠、不要弄破。 错误填涂[×1【√1[/1 。 单项选择题：1-15题，每小题2分，共30分： 二、 多项选择题：1619题，每小题3分，少选得1分，多选错选都不得分，共12分。 1.A][B][CJ[D] 6.[A][B][C][D] 11.[AJ[B][C][D] 16.[A][B][C][D] 2.[A][B][C][D] 7.A][B1[C][Dj 12.[A][B][C][D] 17.A][B1[C1[D] 3.IA[B][C][D] 8[A][B][C][D] 13.[AJ[BJ[C][D] 18.[AJ[BJ[C][D] 4A][B][C][D] 9.A][BJ[C][D] 14.[A][B][C][D] 19.A][B1[CJ[D] 5.[A][B][C][D] 10.[A][B][C][D] 15.[AJ[B][CI[D] 三、非选择题： (本分共5小题，共计58分) 20. (13分，除注明外，每空1分) 【答案】（①）】 (2分) (2) (3) (2分) (4)】 (2分) (5) (2分) (2分) 请在各题目的答题区域内作答，超出黑色矩形边框限定区域的答案无效！ 21. (10分，除注明外，每空1分) 【答案】(1) (2分) (2) (2分) (2分) (3) (4) (2分) 22. (10分，除注明外，每空1分) 【答案】(1) (2分) (2) (3) (4) (5) (2分) 23. (13分，除注明外，每空1分，) 【答案】(1) (2) (2分) (3) (4) (5) (2分) (2分) 24. (12分，除注明外，每空1分) 【答案】(1) (2分) (2分) (2分) (2) (2分) (3) (2分)