阶段验收评价(1) 发酵工程（A、B卷）-【新课程学案】2025-2026学年高中生物选择性必修3 生物技术与工程配套练习word（苏教版）

阶段验收评价(一)　发酵工程 A卷——巩固落实练 一、单项选择题:共15小题,每小题2分,共30分。 1.在制备固体培养基的过程中常加入琼脂,下列关于琼脂的叙述,错误的是 (　　) A.琼脂的凝固点较微生物生长的温度低,利于微生物的生长 B.在微生物生长温度范围内保持固体状态 C.琼脂在灭菌过程中不会被破坏,透明度好,凝固力强 D.不易被所培养的微生物分解利用,对所培养的微生物无毒害作用 2.穿刺接种是用接种针蘸取少量的菌种,沿半固体培养基中心向管底作直线穿刺,如某细菌具有鞭毛而能运动,则在穿刺线周围能够生长。下列叙述错误的是 (　　) A.与平板划线法所用的培养基相比,穿刺接种所需的培养基添加的琼脂较少 B.穿刺接种可用于样品中活菌数量统计 C.穿刺接种可用于保藏厌氧菌种或研究微生物的运动 D.穿刺接种可用于鉴定微生物的呼吸作用类型 3.下表是某同学配制的一种培养基的配方,下列有关叙述错误的是 (　　) 成分 蛋白胨 乳糖 K2HPO4 伊红 亚甲蓝 琼脂 含量/g 10.0 5.0 2.0 0.4 0.065 12.0 将上述物质溶解后,用蒸馏水定容到1 000 mL A.若根据用途划分,该培养基属于鉴别培养基 B.若用该培养基筛选土壤中的尿素分解菌,应将蛋白胨改成尿素,将伊红和亚甲蓝改成酚红 C.在该培养基上生长的大肠杆菌,其菌落颜色呈红色 D.该培养基中含有维生素,若培养霉菌需将pH调至酸性 4.(2025·盐城期中)巴氏消毒法常用于酒、奶等的消毒,该消毒法能杀死一般杂菌和病原菌。与灭菌的要求相比,巴氏消毒法 (　　) A.一般不能杀灭芽孢等耐高温的细菌 B.能杀灭芽孢等休眠状态的细菌 C.能杀灭各种细菌,包括芽孢 D.能杀灭各种真菌,包括孢子 5.(2025·南京月考)地衣芽孢杆菌可用于降解土壤中残留的除草剂,修复土壤。某公司生产的企业标准是当发酵液中菌体的浓度为2×1011个/L时发酵结束,经处理后分装、质检、上市。下列说法错误的是 (　　) A.地衣芽孢杆菌菌种的纯培养包括配制培养基、灭菌、接种、分离和培养等步骤 B.为保证活菌数量符合产品要求不宜采用显微镜直接计数 C.发酵结束前取0.2 mL发酵液涂布平板计数时稀释度为107最合适 D.发酵结束后可采用过滤、沉淀等方法将菌体分离和干燥 6.在分离、纯化大肠杆菌实验中,划线接种(甲)、培养结果(乙)如图。下列有关叙述错误的是 (　　) A.甲中a区域为划线的起始位置 B.接种前应对培养基进行高压蒸汽灭菌 C.连续划线的目的是获得单个细菌形成的菌落 D.接种过程中至少需要对接种环灼烧5次 7.L-天冬酰胺酶由细菌和真菌合成,可分解天冬酰胺释放出氨,然后与奈斯勒试剂反应呈棕色。为筛选获得L-天冬酰胺酶高产菌株,设计了如下固体培养基。固体培养基:主要成分有牛肉膏、蛋白胨、水、NaCl、琼脂、奈斯勒试剂。实验结果如下图。下列叙述错误的是 (　　) A.根据实验结果可知,接种时采用的可能是稀释涂布平板法 B.应选择菌落C作为高产L-天冬酰胺酶菌株进行大量培养 C.该培养基从功能来看属于选择培养基,其中充当氮源的成分是牛肉膏 D.无菌技术可以避免操作者被有害微生物感染,实验结束后的培养基不能直接丢弃 8.(2025·南京期末)我们的祖先们用一些坛坛罐罐,与微生物携手让食物转化出了新风味并对营养进行了升华。下列与发酵相关的叙述,错误的是 (　　) A.利用酵母菌的发酵可以用来酿制红酒、白酒、黄酒等产品 B.制作泡菜时加入的“老汤”中含有纯度较高的乳酸菌可加速发酵进程 C.制作腐乳时,原料豆腐的发酵不是纯种发酵,主要菌种毛霉属于真核生物 D.发酵用的坛坛罐罐都应有盖且密封性强,可避免O2进入坛内影响发酵过程 9.下列有关微生物分离、培养和计数的叙述,正确的是 (　　) A.分离土壤中微生物时,需要先对土壤灭菌,再进行培养 B.测定土壤中细菌数量时,一般选用1×103~1×106倍的稀释液 C.测定土壤样品中的细菌数目,常用稀释涂布平板法或平板划线法进行计数 D.统计菌落数目时,当样品的稀释度足够高时,一个活菌会形成一个菌落 10.(2025·苏州期末)塑料制品方便人们生活的同时,也造成了短时期难以降解的“白色污染”。塑料制品的主要成分为聚氯乙烯(PVC)、聚乙烯(PE)和聚丙烯(PP)等,研究人员欲比较大肠杆菌YT1和芽孢杆菌YP1两类细菌降解PE[化学式为(C2H4)n]的能力。分组及实验结果如表所示。下列叙述正确的是 (　　) 培养基及 接种菌株 培养基1 培养基2 单独培养 并接种YT1 单独培养 并接种等量YP1 降解圈 (直径D/mm) 3.5 1.8 A.配制的培养基为液体,有利于细菌充分吸收营养物质 B.PE是培养基中的唯一碳源,否则无法比较两者的降解能力 C.芽孢杆菌YP1对PE的降解能力比大肠杆菌YT1强 D.筛选得到的菌株可直接用于治理“白色污染” 11.下列关于微生物发酵过程的说法,正确的是 (　　) A.菌种选育、扩大培养及配制培养基和灭菌是发酵工程的中心环节 B.只要不断地向发酵罐中通入液体培养基,就能保证发酵的正常进行 C.在发酵工程的发酵环节中,发酵条件会影响微生物的生长繁殖,也会影响微生物的代谢途径 D.在发酵过程中,要严格控制温度、pH、氧含量、通气量与转速等发酵条件,不需添加营养组分 12.我们的生活离不开传统发酵技术制作的食品,酸奶、果酒、果醋、泡菜等极大地满足了人们对饮食多元化的需求。下列相关叙述错误的是 (　　) A.制作酸奶与制作泡菜控制发酵的气体条件和原理是一致的 B.酿果酒时无需对葡萄严格消毒,原因是葡萄皮表面有酿果酒时所需的菌种 C.变酸的酒表面和制作泡菜的坛内都会有白膜出现,都是醋酸菌大量繁殖形成 D.家庭制作的泡菜因亚硝酸盐含量高而不宜过早食用,需等到亚硝酸盐含量较低后食用 13.制造啤酒的工艺流程,实际是应用酵母菌的呼吸作用。将大麦和酵母菌放入发酵罐后,为制造出大量的啤酒,正确的处理方法是 (　　) A.马上密闭,保持18~30 ℃的温度 B.一直通风,不封闭,保持18~30 ℃ C.先通风后密闭,保持60 ℃以上 D.先通风后密闭,保持18~25 ℃ 14.(2025·无锡月考)多环芳烃(PAHs)是一种不溶于水的有机物,在培养基中以微小的颗粒状存在,PAHs在土壤中的降解速率很慢,并具有致癌和致畸作用。科研人员欲从被PAHs污染的土壤中分离出高效降解PAHs的菌株,以下叙述错误的是 (　　) A.培养基甲的作用主要是扩大培养 B.③过程采用的接种方法可用于微生物计数,计数结果与实际活菌数相比往往偏小 C.④过程挑选的单菌落应该是透明圈直径与菌落直径比值最大的 D.接种后的培养基乙应置于无菌培养箱中,无须进行倒置培养 15.(2024·江西高考)井冈霉素是我国科学家发现的一种氨基寡糖类抗生素,它由吸水链霉菌井冈变种(JGs,一种放线菌,菌体呈丝状生长)发酵而来,在水稻病害防治等领域中得到广泛应用。下列关于JGs发酵生产井冈霉素的叙述,正确的是 (　　) A.JGs可发酵生产井冈霉素,因为它含有能够编码井冈霉素的基因 B.JGs接入发酵罐前需要扩大培养,该过程不影响井冈霉素的产量 C.提高JGs发酵培养基中营养物质的浓度,会提高井冈霉素的产量 D.稀释涂布平板法不宜用于监控JGs发酵过程中活细胞数量的变化 二、多项选择题:共4小题,每小题3分,共12分。 16.人体皮肤表面存在着多种微生物,某同学拟从中分离出葡萄球菌。下述操作正确的是 (　　) A.对配制的培养基进行高压蒸汽灭菌 B.使用无菌棉拭子从皮肤表面取样 C.用取样后的棉拭子在固体培养基上涂布 D.观察菌落的形态和颜色等进行初步判断 17.(2025·淮安月考)黑曲霉可产生蛋白酶、脂肪酶等多种酶。在工业生产中,可利用黑曲酶以豆饼为原料发酵生产酱油。生产酱油的工艺有固态无盐发酵和固态低盐发酵,前者发酵周期短但酱油风味不足,后者发酵周期长但酱油风味好。下列相关叙述正确的是 (　　) A.蛋白酶能将蛋白质水解为多肽和氨基酸,增加酱油的风味 B.选用的菌种及生产工艺不同,会使发酵所得的两种酱油的品质及风味不同 C.固态低盐发酵时食盐抑制黑曲霉的生长而使发酵周期延长 D.一般情况下,常温条件、含水量较高时有利于菌种保存 18.(2024·河北高考)中国传统白酒多以泥窖为发酵基础,素有“千年老窖万年糟”“以窖养糟,以糟养泥”之说。多年反复利用的老窖池内壁窖泥中含有大量与酿酒相关的微生物。下列叙述正确的是 (　　) A.传统白酒的酿造是在以酿酒酵母为主的多种微生物共同作用下完成的 B.窖池内各种微生物形成了相对稳定的体系,使酿造过程不易污染杂菌 C.从窖泥中分离的酿酒酵母扩大培养时,需在CO2或N2环境中进行 D.从谷物原料发酵形成的酒糟中,可分离出产淀粉酶的微生物 19.野生型大肠杆菌菌株能在基本培养基上生长,氨基酸营养缺陷型菌株由于发生基因突变而无法合成某种氨基酸只能在完全培养基上生长,如图为纯化某氨基酸营养缺陷型突变株的部分流程图,数字代表培养基,A、B、C表示操作步骤。下列有关说法错误的是 (　　) A.①②为完全培养基,③④为基本培养基 B.A操作的目的是提高突变菌株的浓度 C.B操作可用涂布器蘸取菌液均匀的涂布在②表面 D.经C操作及培养后,可从④培养基中挑取D菌落进行纯化培养 三、非选择题:共4题,共58分。 20.(13分)酸奶是牛奶、羊奶或马奶经过发酵制成的一种食品,其发酵原理与泡菜制作非常相似。为了研究影响酸奶发酵效果的因素,某小组在A、B两容器中加入一定量的鲜牛奶,将等量的甲、乙两菌种(都能产生乳酸)分别接入其中并混匀,密封后再将两者置于适宜条件下进行发酵,并在6 h内定期取样观测发酵效果。回答下列问题: (1)制作酸奶和泡菜与制作果酒相比,相同点是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。上述实验过程中可能会影响酸奶品质的操作是　　　　　　　　　　　　　 　　　,为什么?  　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。  (2)在家庭制作葡萄酒时,容器瓶的盖子应该是　　　　　　　　　　(填“有螺旋可旋转的”或“密封不可开启的”),原因是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。  (3)在制作酸奶时,人们还会在鲜奶中加一定量的蔗糖,其原理是　　　　　　　　　　　　　　。发现6 h内的酸奶发酵效果越来越好,无法确定发酵的最佳时间。若要确定最佳发酵时间,可以　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。有人提供的自制酸奶信息表明:酸奶制作时间可长可短,有的季节2~3 h即可,有的季节需要10~12 h。影响发酵效果的非生物因素可能是　　　　　。  21.(13分)农田的表层土壤中有丰富的自生固氮菌,某同学计划从农田土壤中分离自生固氮菌并进行计数,现有实验材料及用具:蛋白胨20 g,葡萄糖40 g,琼脂50 g,各种无机盐若干,无菌水2 L,各种无菌操作仪器和恒温培养箱等。设计实验步骤如下,请回答下列问题: (1)从培养基营养成分角度分析,分离自生固氮菌需要使用　　　培养基,所给实验材料或用具中明显使用不到的是　　　　。  (2)该同学应从农田的　　　　　取10 g土样,加入含90 mL无菌水的锥形瓶中,充分摇匀,用无菌吸管吸取1 mL稀释液,转至盛有9 mL无菌水的试管中逐步稀释,每10倍一个梯度,依次稀释到106倍稀释度。  (3)吸取0.1 mL稀释液进行平板涂布,放入恒温培养箱在28~30 ℃下培养3~4天,当菌落数目稳定时,选取菌落数在　　　　范围内的平板进行计数。如果测试平均值为50,则样品中的菌株数=(C÷V)×M,其中M是　　　　,计算可知每克样品中的菌株数为　　　　　,测量统计数据与实际数据相比　　　　(填“偏小”或“偏大”),造成这种现象的原因是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。  22.(16分)科研人员按照如图所示流程从盐湖土壤中分离筛选出了一株高产α-淀粉酶的耐盐性菌株NWU-8,并通过He-Ne激光照射提高该菌株产α-淀粉酶的能力,实验中需要a、b两种培养基,a的组分为牛肉膏、蛋白胨、高浓度NaCl、水,相比培养基a,培养基b的组分增加了可溶性淀粉。回答下列问题。 (1)微生物需要的营养物质中,氮源中的氮元素是合成生物大分子　　　　　　　的必需元素,配制好的培养基通常采用的灭菌方法是　　　　　　　　　　。  (2)要在培养基上形成菌落,a、b培养基中均还应加入　　　　,挑取a培养基平板上的菌落进一步划线纯化时,下列图示中正确的操作示意图为　　　。  (3)培养基a的作用是　　　　　　　　　　,b培养基平板滴加碘液后,部分菌落周围出现透明圈,根据菌落直径和透明圈大小,　　　　　　　　　　　　　　　的菌落初步判断为产酶能力较高的菌株。  (4)He-Ne激光照射诱导后的菌种需要对耐盐性和产酶能力等进行检测和筛选,因为He-Ne激光照射引起的变异具有　　　　的特征。最后获得的纯净高产菌种进行液体摇瓶发酵,摇瓶培养的目的是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　,发酵过程中可通过　　　　　　　法检测活菌的数量。  23.(16分)米诺环素(分子式:C23H27N3O7)是一种四环素类抗生素,应用于人类疾病治疗和畜禽养殖。由于进入人体或动物体内不能完全被吸收,造成其在环境中残留。某研究人员在自然水域中筛选和分离得到了一种米诺环素高效降解菌DM13,并展开相关研究。下表是研究过程中使用的培养基种类及配方,回答下列问题。 种类 配方 BP 培养基 蛋白胨5.0 g、牛肉膏3.0 g、氯化钠5.0 g,蒸馏水定容至1 000 mL BPA 培养基 蛋白胨5.0 g、牛肉膏3.0 g、氯化钠5.0 g、琼脂25.0 g,蒸馏水定容至1 000 mL MM 培养基 MgSO4·7H2O 0.15 g、FeSO4·7H2O 0.01 g、CaCl2 0.02 g、KH2PO4 1 g、Na2HPO4 1 g、NH4NO3 1 g、葡萄糖0.5 g,蒸馏水定容至1 000 mL (1)培养液的配制:按配方计算、称量、溶解等步骤配制培养液,经　　　　　灭菌后使用。  (2)扩大培养:在BP培养基中添加一定浓度的　　　　　　　　,对采集的水样的微生物进行选择培养,该物质为微生物生长提供　　　　　。  (3)分离高效降解菌:用　　　　　　　　　　　　法接种选择培养得到的微生物进行培养,该步骤选择　　　(填“BP”“BPA”或“MM”)培养基。  (4)测定降解效果:为了测定菌株DM13在自然水体中降解米诺环素的效果,在锥形瓶中用　　　配制四种不同初始浓度的米诺环素溶液,进行实验。  ①8 h处理后,在米诺环素溶液初始浓度100 μg/L的水体中,空白对照测得的米诺环素溶液浓度为41.8 μg/L,加入菌株DM13测得的浓度为24.3 μg/L,相较空白对照组,米诺环素降解菌的降解率为　　　(用百分比表示,保留一位小数)。  ②为了测定菌株DM13的实际降解效果,可选择表中的MM培养基替换自然水体,这样做的目的是　　　　　　　　　　　　　　　。  (5)工业上可通过发酵罐制备菌剂,发酵工程的中心环节是　　　　　　　　　　　　　。在发酵过程中,需及时添加必需的营养条件,并严格控制　　　　　　等发酵条件。发酵结束后,采用过滤、沉淀等方法将菌体分离和干燥,得到产品。  B卷——应用提能练 一、单项选择题:共15小题,每小题2分,共30分。 1.(2025·徐州期末)平板接种常用在微生物培养中。下列说法正确的是 (　　) A.不含氮源的平板不能用于微生物培养 B.平板涂布时涂布器使用前必须进行消毒 C.接种后未长出菌落的培养基可以直接丢弃 D.利用以尿素为唯一氮源的平板能分离出合成脲酶的微生物 2.(2025·连云港月考)纤维素酶在生产实践中有广泛的应用,例如制作果汁时加入纤维素酶可以使果汁清亮。为获得纤维素酶高产菌株,研究人员以表中配方配制的培养基进行了相关的实验。下列叙述正确的是 (　　) NaNO3 MgSO4 K2HPO4 FeSO4 X H2O 2.8 g 0.6 g 0.15 g 0.02 g 2.0 g 定容至1 L A.表中X是纤维素,它可以为菌株的生长提供碳源 B.在用稀释涂布平板法分离时,用涂布器蘸取的培养液的量不宜过多 C.在刚果红培养基中,透明圈越大说明该菌落产纤维素酶的能力越强 D.纤维素酶可以将不溶性的纤维素分解成葡萄糖和果糖,使果汁清亮 3.下列关于灭菌和消毒的叙述,正确的是 (　　) A.灭菌和消毒均可以杀死环境中的一切微生物,包括芽孢和孢子 B.无菌操作时,需要对实验操作的空间、操作者的衣物和手进行灭菌 C.火焰灼烧法灭菌的对象是金属器具,不可以是玻璃器具 D.常用的灭菌方法有火焰灼烧灭菌、干热空气灭菌、高压蒸汽灭菌等 4.高中生物学实验中经常使用酵母菌,下列有关实验的叙述正确的是 (　　) A.用吸管将酵母菌培养液加到盖有盖玻片的计数板上后立即放到载物台计数 B.传统果酒由于是利用天然菌种发酵获得,其品质要比工业化生产的果酒好 C.鉴定酵母菌呼吸产物时,为排除无关变量干扰应设法让培养液中呼吸底物消耗完全 D.酵母菌纯培养实验中,制备培养基、倒平板和划线都应在酒精灯火焰旁操作 5.在一系列微生物的作用下,黑茶会产生一种对人体非常有益的金黄色颗粒“金花”。研究人员对“金花”中的微生物进行了分离和鉴定,过程如图。下列说法不正确的是 (　　) A.向“金花”样品中加入蒸馏水制成样品悬液 B.稀释涂布平板法用于微生物的分离计数,统计结果可能比实际值偏小 C.涂布平板上长出的菌落可通过平板划线法进一步纯化 D.可通过基因组测序对菌种进行准确鉴定 6.下列是一些关于微生物的培养和应用的基本理论和基础知识,其中都正确的一组是 (　　) ①接种环、玻璃器皿(如培养皿等)可以通过火焰灼烧灭菌和干热空气灭菌　②人工配制的培养基常需要调pH,其应在分装灭菌前进行　③超净工作台、接种室、空气可以通过紫外线灭菌　④菌种的长期保存通常接种在试管的固体斜面培养基上,-4 ℃下进行　⑤用稀释涂布平板法统计菌落数的缺点是不能观察到微生物的形态、大小、结构　⑥实验室测定土壤中细菌的数量时,选取的稀释度的要求通常分别是:103、104、105 A.①②③ B.①②④ C.②③⑤ D.②③⑥ 7.汞污染对环境和人类危害极大,有些微生物对其具有抗性,可用于修复受汞污染的环境。某科研小组从土壤中分离纯化出一株高抗汞细菌,它具有对汞污染环境的生物修复能力。培养基成分:氯化钠(10 g/L)、酵母浸粉(5 g/L)、蛋白胨(10 g/L)、20 mg/L的氯化汞溶液、琼脂,上述成分按一定比例配制。下列叙述中错误的是 (　　) A.为了快速获得高抗汞细菌,应从重金属污染的土壤中分离纯化 B.蛋白胨为高抗汞细菌提供的主要营养为碳源、氮源和维生素 C.为了纯化并计数高抗汞细菌,常用平板划线法 D.平板划线纯化培养时,在第二次及以后的划线时,总是从上一次划线的末端开始划线　 8.金黄色葡萄球菌是导致人类患病的一种主要病原菌,能引起许多严重感染。金黄色葡萄球菌能被革兰氏染液染成蓝紫色(染色需要制作临时装片并借助显微镜观察),属于革兰氏阳性菌。研究小组在感染者体内采集样本并制成菌液后,进行分离培养。实验基本步骤如下图所示,图中X表示 (　　) 配制培养基→包扎、灭菌→X→培养→观察 A.调节pH B.接种 C.加入革兰氏染液 D.将培养基倒置 9.尿素是一种重要的农业肥料,土壤中的某些细菌能合成脲酶,可以将尿素分解成氨和CO2,然后被植物利用。下列有关土壤中尿素分解菌的分离和培养的叙述,正确的是 (　　) A.为了防止杂菌污染应将采集的土样进行高压蒸汽灭菌 B.若涂布的3个平板中的1组数据结果与另外两组相差太远,则需舍弃此数据 C.本实验采用稀释涂布平板法进行分离和计数,用酚红试剂进行检测鉴别 D.从反刍动物的瘤胃中与从土壤中分离尿素分解菌的实验条件和培养方法相同 10.图甲为利用酵母菌酿制葡萄酒的实验装置,在其他条件相同且适宜的情况下,测得一段时间内装置中相关物质的含量变化如曲线乙所示,下列关于传统发酵技术的叙述,错误的是 (　　) A.利用装置甲进行果酒发酵时,酵母菌无氧呼吸产生酒精和CO2,通过排气管可排出CO2 B.利用装置甲进行果醋发酵时,需同时打开阀a、b C.图乙中曲线①②可分别表示装置甲中O2浓度,酒精含量 D.发酵过程中酵母菌细胞内产生CO2和酒精的场所相同 11.(2025·苏州月考)米酒、酸奶、泡菜等都属于传统发酵制品,下列相关叙述正确的是 (　　) A.制作米酒时添加“酵头”的目的是接种酿酒酵母 B.米酒发酵液中冒出的“气泡”都来源于酵母菌无氧呼吸 C.酸奶和泡菜制作中均需要及时通氧,保证乳酸菌的有氧呼吸 D.为降低杂菌污染,发酵前需要对器具、原料等进行灭菌 12.下列相关实验操作,无法达成实验目的的是 (　　) 选项 实验操作 实验目的 A 向灭菌后温度适宜的牛奶中加入醋酸菌 制作酸奶 B 在豆腐胚中加入含毛霉的卤汁 制作腐乳 C 煮沸冷却的盐水与预处理的蔬菜混合后装坛,用水封住坛口 制作泡菜 D 新鲜的葡萄汁中接种一定量的干酵母菌 制作果酒 13.某地传统名肴“红菌豆渣”的生产过程如下图所示。下列相关叙述错误的是 (　　) 焙烤新鲜豆腐渣→放入铺有荷叶的筛子压平、冷却→撒上菌种→发酵、长红毛→得到成品 A.焙烤可降低豆腐渣含水量,利于后期发酵 B.渣面上长出的红毛是酵母菌繁殖形成的 C.豆腐渣中的蛋白质被分解,可增加成品的营养和风味 D.适当增加菌种量、控制发酵温度可提高发酵效率 14.(2025·镇江月考)以猕猴桃、百香果为原料,采用混菌发酵工艺,研发猕猴桃百香果复合果酒,使两者在营养、香气及口感上互补。下图为此发酵工艺流程图。下列有关说法错误的是 (　　) A.发酵工艺中没有对果汁进行高压蒸汽灭菌,可防止果汁中营养物质被破坏 B.发酵工艺中所加果胶酶有助于果汁清澈 C.发酵过程中发酵液的质量和pH都会降低 D.加酵母混菌发酵时,可采用真空发酵来提高发酵速率 15.高温淀粉酶在大规模工业生产中有很大的实用性。研究者从热泉中筛选高效产生高温淀粉酶的嗜热菌,其筛选过程如图1所示。将得到的菌悬液转接于同时含有葡萄糖和淀粉作碳源的固体培养基上培养,得到若干菌落后用碘液作显色处理,得到如图2所示情况。下列叙述错误的是 (　　) A.过程①②合称为稀释涂布平板法 B.甲、乙试管中的液体均为选择培养基 C.Ⅱ号培养基上的接种方法为平板划线法 D.图2中周围不显蓝色的菌落含有所需菌种 二、多项选择题:共4小题,每小题3分,共12分。 16.(2025·南京检测)某酒厂以高粱为主料,辅以小麦、麸皮(干麦粒外层的表皮),再加入大曲、麸曲及生香酵母进行发酵。大曲和麸曲中所含的微生物主要有好氧型微生物霉菌、兼性厌氧型微生物酵母菌,还有乳酸菌、醋酸菌等。酿造工艺流程如下图所示。下列叙述错误的是 (　　) A.蒸煮后摊晾,降低原料温度后才可撒曲,以免杀死菌种 B.若酒的表层长出白膜,可能是酒坛密封不严导致乳酸菌大量繁殖所致 C.撒曲糖化是指利用霉菌等分泌的脂肪酶催化淀粉分解为葡萄糖,葡萄糖为发酵的底物 D.微生物中的蛋白酶可将原料中的蛋白质分解为小分子的肽和氨基酸,增加酒的风味 17.发酵原料的改变推动着发酵工业迅速发展,利用农作物秸秆等纤维废料生产的乙醇,经加工可制成燃料乙醇,从而减少了对石油资源的依赖。如图是发酵工程生产燃料乙醇的简要流程,据图分析下列说法正确的是 (　　) 纤维质原料可溶解复合物燃料乙醇 A.微生物A能分解纤维素,选育菌种时最好从富含纤维素的土壤中进行筛选 B.图中②过程常用的微生物B是酵母菌,在接种前要进行扩大培养,缩短生产周期 C.微生物A和微生物B可利用的碳源相同 D.可用发酵工程生产的纤维素酶制剂代替微生物B起作用　 18.食堂餐余垃圾在垃圾集中点处理后可达到无污染的标准。为筛选对抗生素有抗性、高效降解淀粉的微生物,研究人员制备餐余垃圾浸出液,进行如图所示操作,下列叙述正确的是 (　　) A.餐余垃圾浸出液在接种前通常需要进行高压蒸汽灭菌处理 B.可用稀释涂布平板法将餐余垃圾浸出液接种在X培养基上 C.X培养基含有淀粉和抗生素,Y培养基是不含琼脂的液体培养基 D.图中降解淀粉最高效的微生物是⑤,可根据菌落特征初步判断微生物类型　 19.利用黄粉虫肠道微生物对白色污染物进行生物降解,是一种绿色环保的处理工艺。图示是从黄粉虫肠道中分离、纯化微生物的过程,下列说法错误的是 (　　) A.配制固体培养基时,不需要在无菌的环境中进行 B.平板划线用的菌浓度应控制在300~3 000个/mL C.平板上长出的菌落一定是分解PVC塑料的微生物形成的 D.在富集培养的培养基中含有牛肉膏和琼脂等成分　 三、非选择题:共5题,共58分。 20.(11分)红酸汤是一种很有特色的火锅底料,制作流程如图所示。请分析回答以下问题: (1)密封发酵时,常在坛中加入成品红酸汤,其目的是　　　　　　　　　　　　。乳酸发酵的过程即为乳酸菌进行　　　　　　　的过程,该过程发生在乳酸菌细胞的　　　　　　　　中。   (2)装坛时坛口留有一点空间而不装满的目的是　　　　　　　　　　,红酸汤腌制过程的初期会有气泡冒出,但气泡的产生逐渐停止,试分析原因是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。   (3)红酸汤有利于人体肠道内多种益生菌的生长。消化道炎症往往与益生菌群减少、有害菌群增多有关。研究表明,治疗消化道慢性炎症时,不宜滥用抗生素,滥用抗生素的害处有　　　　　　　　　　　　　　。   (4)亚硝酸盐的含量影响红酸汤的品质,在发酵过程中影响亚硝酸盐含量的因素有　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。   21.(11分)发酵工程生产产品的流程如图所示。回答下列问题: (1)性状优良的菌种可以从　　　　中获取,随着技术的发展,也可以通过　　　　　或　　　　　　等途径获得。  (2)如果发酵产品是微生物细胞本身,可在发酵结束之后,采用　　　　　等方法将菌体分离和干燥,即可得到产品。如果产品是代谢物,可根据产物的性质采取适当的　　　　　　　　　措施来获得产品。  (3)某同学制作的馒头经常会发酸,推测馒头中的酸味可能是醋酸菌或乳酸菌等产酸的微生物所导致的。该同学用保鲜膜将发面的容器密封起来,馒头剂子也用保鲜膜涂油覆盖,结果馒头就不酸了,据此判断导致馒头发酸的微生物主要是　　　　　　　　　　　　,判断的依据是　　　　　　　　　　　　　　　　　。  22.(12分)大熊猫可利用竹子中的纤维素,研究人员欲从大熊猫粪便和土壤中筛选纤维素分解菌。回答下列问题: (1)为筛选纤维素分解菌,将大熊猫新鲜粪便样品稀释液接种至以　　　　为唯一碳源的固体培养基上进行培养,该培养基从功能上分类属于　　　　培养基。  (2)配制的培养基必须进行灭菌处理,目的是　　　　　　　　　　　　　　。检测固体培养基灭菌效果的常用方法是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。  (3)简要写出测定大熊猫新鲜粪便中纤维素分解菌活菌数的实验思路　　　　　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。  (4)为高效降解农业秸秆废弃物,研究人员利用从土壤中筛选获得的3株纤维素分解菌,在37 ℃条件下进行玉米秸秆降解实验,结果如表所示。在该条件下纤维素酶活力最高的是菌株　　　　,理由是　　　　　　 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。  菌株 秸秆总 重/g 秸秆残 重/g 秸秆失 重/% 纤维素降 解率/% A 2.00 1.51 24.50 16.14 B 2.00 1.53 23.50 14.92 C 2.00 1.42 29.00 23.32 23.(11分)(2025·南京期中)扩展青霉是腐烂苹果中常见的微生物之一,其代谢产物棒曲霉素(Pat)是一种具有致突变作用的毒素。为研究腐烂苹果中Pat的分布,研究人员进行了如图所示的实验,其中“病健交界处”为腐烂部位与未腐烂部位的交界处,取样分离的5 个部位分别为①号、②号、③号、④号、⑤号。请回答下列问题: (1)苹果腐烂部位的微生物除扩展青霉外,还有枯草杆菌。两种微生物在结构上的主要区别是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。  (2)活化扩展青霉菌种使用的培养基成分如下表,根据物理性质划分该培养基属于　　　　　培养基,其中能为扩展青霉的生长繁殖提供能源的是　　　　　;NaNO3的作用是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　(答两点)。  蔗糖 NaNO3 MgSO4 KCl FeSO4 KH2PO4 蒸馏水 30 g 2 g 0.5 g 0.5 g 0.01 g 1 g 1 000 mL (3)用平板划线法分离扩展青霉时,划线的某个平板培养后第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌落,其他区域的划线上却均无菌落。操作失误的原因可能是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。  (4)接种扩展青霉前,应对苹果进行　　　　(填“消毒”或“灭菌”)。研究人员测定了病斑直径为1 cm、2 cm、3 cm 的苹果中①~⑤号部位的Pat含量,请推测最可能的结果:　　　　　　　　　　　　　　　;　 　 　 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。  24.(13分)乳链菌肽是由乳酸乳球菌分泌的一种由34个氨基酸组成的多肽,对引起食品腐败的细菌具有强烈的抑制作用,是一种高效无毒的天然食品防腐剂。研究人员从新鲜牛奶中获得多株产乳链菌肽的菌株,为了筛选出抑菌作用最强的菌株,进行了如下实验:将上述菌株在液体培养基中培养,离心后获取上清液。将革兰氏阳性菌涂布于平板上,将灭菌的大小相同的滤纸片均匀地摆放在培养基表面,在其上分别滴加等量备选菌株培养液的上清液,培养后对比观察,选取抑制作用最强的菌株。将相应的菌株按照下图所示的流程进行纯化培养。请回答: A.制备培养基B.灭菌C.扩大培养D.划线分离和培养E.菌种临时保存 (1)滤纸片周围透明的抑菌圈　　　　　　,相应菌株产生的乳链菌肽抑菌作用越强。  (2)在菌株纯化培养过程中,A过程中除了加入特定的营养物质以外,还要加入一定量的氯化钠,以维持　　　　　　。B过程常用的方法是　　　　。D过程与C过程相比,培养基中增加的物质是　　　　　　。E过程需将纯化的菌株接种于　　　　　　培养基中4 ℃保藏。  (3)为了了解乳链菌肽对革兰氏阳性菌的作用方式是抑制细菌生长、溶菌性杀死细菌(细胞破裂)还是非溶菌性杀死细菌,科研人员将乳链菌肽加入革兰氏阳性菌菌液中,随着发酵时间的延长,检测革兰氏阳性菌的活菌数、经离心除去菌体的上清液中核酸含量,实验结果如图所示。曲线1是对照组的活菌数;曲线2是对照组和实验组上清液中的核酸含量;曲线3是实验组的活菌数。对革兰氏阳性菌活菌的计数方法为　　　　　　　　　　　　　　　　。以上实验表明乳链菌肽对革兰氏阳性菌的作用方式为　　　　　　　,理由是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。  (4)乳链菌肽作为天然防腐剂,不会改变人体肠道中的正常菌群,也不会进入人体内环境,这是因为　　　　。  阶段验收评价(一) A卷——巩固落实练 1．选A　琼脂的凝固点相对于微生物生长的温度较高，凝固剂的凝固点不能太低，否则不利于微生物的生长，A错误；琼脂在微生物生长温度范围内保持固体状态，B正确；琼脂不易被微生物利用且对微生物无毒害作用，在灭菌过程中不会被破坏，透明度好，凝固力强，C、D正确。 2．选B　与平板划线法所用的培养基相比，穿刺接种的培养基是半固体培养基，故添加的琼脂较少，A正确；穿刺接种不可用于样品中活菌数量统计，因为接种是不定量的，B错误；穿刺接种所用培养基是半固体培养基，可用于保藏厌氧菌种或研究微生物的运动，C正确；厌氧微生物可在培养基深处的厌氧环境下生长，接触氧气会受到抑制，损伤甚至死亡，好氧微生物大多相反，因此穿刺接种可用于鉴定微生物的呼吸作用类型，D正确。 3．选C　从用途看此培养基属于鉴别培养基，伊红和亚甲蓝可用来鉴别大肠杆菌，A正确；用该培养基筛选土壤中的尿素分解菌，需要将蛋白胨去掉，用尿素作为唯一的氮源，将伊红和亚甲蓝改成酚红，B正确；在该培养基上生长的大肠杆菌，其菌落颜色为具有金属光泽的深紫色，C错误；该培养基中的蛋白胨含有维生素，若培养霉菌需将pH调至酸性，D正确。 4．选A　巴氏消毒法可以杀死绝大多数微生物，但一般不能杀灭芽孢等耐高温细菌。 5．选C　地衣芽孢杆菌菌种属于微生物，其纯培养包括配制培养基、灭菌、接种、分离和培养等步骤，A正确；显微镜直接计数时死菌和活菌均包含在内，导致统计结果偏大，不符合产品要求，B正确；符合生产标准的发酵液中菌体的浓度为2×1011个/L，发酵结束前取0.2 mL发酵液涂布平板计数时稀释度为107时平板上的菌落数约为2×1011个/L×0.2 mL×10－7×10－3＝4个，不在30～300范围内，影响结果的准确性，因此稀释度为107不合适，C错误；发酵产品不同，分离提纯的方法一般不同，如果产品是微生物细胞本身，可采用过滤、沉淀等方法将菌体从培养液中分离和干燥，D正确。 6．选A　每次划线的菌种来自上一区域的末端，因此划线的起始区域菌落最多，由图乙可知，甲中的d区域菌落较多，为划线的起始位置，A错误；微生物培养过程应注意无菌操作，一般采用高压蒸汽灭菌法对培养基进行灭菌，B正确；经过连续划线，菌液中的菌体会越来越少，最终会获得单个细菌形成的菌落，故连续划线的目的是获得单个细菌形成的菌落，C正确；每次划线前后都需要将接种环灼烧，因此按照图中划线顺序(d→c→b→a)，整个划线过程需要对接种环灼烧5次，D正确。 7．选C　从接种结果来看，菌落均匀分布在一定的圆形区域内，应该采用的是稀释涂布平板法，A正确；菌落B和菌落C周围棕色圈的直径相同，但C的菌落直径更小，因此菌落C的单个细胞产生的L－天冬酰胺酶更多，应选择菌落C作为高产L－天冬酰胺酶菌株进行大量培养，B正确；培养基中加入有奈斯勒试剂，若微生物能产生L－天冬酰胺酶则菌落周围会出现棕色圈，因此该培养基从功能来看属于鉴别培养基，其中充当氮源的成分是牛肉膏和蛋白胨，C错误；无菌技术可用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染，还可以避免操作者被有害微生物感染，实验结束后为避免环境污染，培养基在丢弃前要进行灭菌处理，D正确。 8．选D　酵母菌在无氧条件下进行酒精发酵，可用于生产红酒、白酒、黄酒等产品，A正确；泡菜制作依赖乳酸菌，制作泡菜时加入的“老汤”中含纯度较高的乳酸菌能缩短发酵时间，B正确；腐乳制作过程中多种微生物共同发挥作用，其中起主要作用的是毛霉(真核生物)，C正确；有的发酵需在有氧条件下进行，D错误。 9．选D　分离土壤中微生物时，不能先对土壤灭菌，因为灭菌可能杀死目的菌种而导致实验失败，A错误；测定土壤中细菌数量时，一般选用106～108倍的稀释液，B错误；测定土壤样品中的细菌数目，常用稀释涂布平板法进行计数，平板划线法不适宜进行计数，C错误；当样品的稀释度足够高时，一个活菌会形成一个菌落，D正确。 10．选B　要在培养基上形成降解圈，故配制的培养基为固体培养基，A错误；要比较两类细菌降解PE的能力，应以PE为培养基中的唯一碳源，B正确；大肠杆菌YT1在培养基上形成的降解圈明显大于芽孢杆菌YP1的降解圈，故大肠杆菌YT1降解PE的能力更强，C错误；筛选得到的菌株用来治理PE造成的污染问题时，还要考虑菌株大量繁殖是否会产生对环境有害的代谢产物、是否会对环境产生二次污染等问题，D错误。 11．选C　发酵工程的内容包括菌种选育、培养基的配制、灭菌、扩大培养和接种、发酵过程和产品的分离提纯等方面，其中发酵过程是发酵的中心环节，A错误；发酵过程中应随时检测培养液中的微生物数目、产物浓度等，同时应对发酵过程中的一些条件进行控制才能保证发酵的正常进行，B错误；发酵过程中要严格控制温度、pH、氧含量、通气量与转速等发酵条件，这是因为环境条件的变化，不仅会影响菌种的生长繁殖，而且会影响菌种代谢产物的形成，还要及时添加必需的培养基组分，以满足菌种的营养需要，C正确，D错误。 12．选C　变酸的酒的表面观察到的菌膜是醋酸菌在液面大量繁殖形成的，而制作泡菜时形成的白膜是酵母菌繁殖形成的，C错误。 13．选D　将大麦和酵母菌放入发酵罐后，应先通风使酵母菌进行有氧呼吸而大量繁殖，然后密闭使酵母菌进行无氧呼吸产生酒精。此过程温度应适宜(18～25 ℃)，否则会影响酵母菌内酶的活性。 14．选D　由题图可知，培养基甲的作用主要是扩大培养，A正确；培养基乙上单菌落的分布比较均匀，采用的接种方法是稀释涂布平板法，稀释涂布平板法可用于微生物计数，由于两个或两个以上细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，导致结果与实际值相比往往偏小，B正确；透明圈直径与菌落直径比值越大，降解PAHs的效果越好，C正确；接种后的培养基乙应置于无菌培养箱中，应进行倒置培养，因为倒置培养能防止水分过快蒸发以及冷凝水落入培养基造成污染，D错误。 15．选D　基因表达的产物是蛋白质，而井冈霉素是JGs发酵生产的一种氨基寡糖类抗生素，是JGs的代谢物，A错误；JGs接入发酵罐前需要扩大培养，该过程会影响JGs的数量，进而影响井冈霉素的产量，B错误；在一定范围内提高JGs发酵培养基中营养物质的浓度，会提高井冈霉素的产量，但若浓度过大，反而会降低井冈霉素的产量，C错误；JGs是一种放线菌，菌体呈丝状生长，形成的菌落难以区分，因此稀释涂布平板法不宜用于监控JGs发酵过程中活细胞数量的变化，D正确。 16．选ABD　为避免杂菌污染，需对配制的培养基进行高压蒸汽灭菌，A正确；葡萄球菌需从人体皮肤表面的多种微生物中分离，为避免杂菌污染，需要使用无菌棉拭子从皮肤表面取样，B正确；取样后的棉拭子需要进行选择培养→梯度稀释，再将稀释液涂布到选择培养基上，C错误；根据微生物在固体平板培养基表面形成的菌落的形状、大小、隆起程度和颜色等特征进行初步鉴别，D正确。 17．选ABC　低温、含水量较低时菌种代谢不活跃，有利于菌种保存，D错误。 18．选ABD　白酒的酿造主要依靠酿酒酵母，由于窖泥中含有大量与酿酒相关的微生物，故传统白酒的酿造是在以酿酒酵母为主的多种微生物共同作用下完成的，A正确；窖池内各种微生物形成了相对稳定的体系，且酿造过程产生的酒精也会抑制杂菌的生长与繁殖，使酿造过程不易污染杂菌，B正确；酵母菌是兼性厌氧菌，与无氧呼吸相比，细胞有氧呼吸产生的能量更多，更能满足酵母菌大量繁殖时的需求，因此，对分离的酿酒酵母扩大培养时需要在有氧的条件下进行，C错误；谷物原料如高粱、大米等富含淀粉，因此从谷物原料发酵形成的酒糟中，可分离出产淀粉酶的微生物，D正确。 19．选AC　结合题图信息分析可知，①②④为完全培养基，③为基本培养基，A错误；紫外线可用于诱导突变，提高突变的频率，A操作为扩大培养，目的是提高突变菌株的浓度，B正确；B操作是先将梯度稀释后的菌液滴加到培养基的表面，再用涂布器均匀的涂布在②表面，C错误；由图观察可知，D菌落在基本培养基上无法生长，而在完全培养基上能够生长，这说明D菌落是氨基酸营养缺陷型菌株，故经C操作及培养后，可从④培养基中挑取D菌落进行纯化培养，D正确。 20．解析：(1)制作酸奶和泡菜与制作果酒相比，相同点为都是利用微生物在无氧条件下进行无氧呼吸。制作酸奶的过程中，定期取样观测发酵效果须在无菌条件下进行(或进行无菌操作)。取样时，外界空气进入酸奶液，有可能会造成杂菌污染，进而影响酸奶品质。 (2)在果酒发酵过程中产生的较多CO2需及时排出，才有利于发酵的持续进行。所以，在家庭制作葡萄酒时，容器瓶的盖子应选择有螺旋可旋转的，其原因是有螺旋可旋转的瓶盖拧松可排出CO2气体，有利于发酵的持续进行。 (3)在制作酸奶时，人们在鲜奶中加一定量的蔗糖，一方面是为乳酸菌提供乳酸发酵所需的原料，另一方面是改善口感。要确定酸奶发酵的最佳时间，可以适当延长发酵时间，观测发酵效果，找到最好的发酵效果所对应的时间。据题意可知，不同的季节，酸奶制作的时间不同，说明影响发酵效果的非生物因素可能是温度。 答案：(1)都是利用微生物在无氧条件下进行无氧呼吸　定期取样观测发酵效果　因为取样时可能会造成杂菌污染　(2)有螺旋可旋转的　酒精发酵会产生较多的CO2，有螺旋可旋转的瓶盖拧松可排出CO2气体，有利于发酵的持续进行 (3)为乳酸菌提供乳酸发酵所需的原料，改善口感　延长发酵时间，观测发酵效果，以找到最好的发酵效果所对应的时间　温度 21．解析：(1)一般而言，培养基成分都含有水、无机盐、碳源和氮源，但自生固氮菌的筛选需要将其接种到无氮培养基上进行培养，在该培养基中，只有自生固氮菌才能生长繁殖。用这种方法，可以将自生固氮菌与其他细菌分离开来，所给实验材料中蛋白胨可提供氮源，故其在实验中明显使用不到。 (2)自然界筛选菌株应在富含该目的菌的环境中筛选，因“农田的表层土壤中有丰富的自生固氮菌”，故应从农田的表层土壤中取样进行筛选自生固氮菌。 (3)为保证结果准确，当菌落数目稳定时，选取菌落数在30～300范围内的平板进行计数；计算样品菌液中的菌株数时，每克样品中的菌株数＝(C÷V)×M，其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)，M代表样品菌液的稀释倍数；如果稀释倍数为1×106的稀释液，在平板上测定的菌落平均值为50，则每克样品中的菌株数为(50÷0.1)×106＝5×108；采用稀释涂布平板法计数时，由于两个或多个细胞连在一起时只形成一个菌落，因此统计的结果会比实际数值偏小。 答案：(1)无氮　蛋白胨　(2)表层土壤　(3)30～300　稀释倍数　5×108　偏小　两个或多个细胞连在一起时只形成一个菌落 22．解析：(1)生物大分子有蛋白质、多糖和核酸，其中蛋白质和核酸含有N元素，故微生物需要的营养物质中，氮源中的氮元素是合成生物大分子蛋白质、核酸(DNA和RNA)的必需元素，配制好的培养基通常采用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌法(或湿热灭菌法)。 (2)要在培养基上形成菌落，a、b培养基中均还应加入琼脂，制备固体培养基，便于菌落生长和观察。平板划线时，从第一次划线的末端开始作第二次划线。重复以上操作，作第三、四、五次划线，注意不要将最后一次的划线与第一次的划线相连，故选A。 (3)a的组分中含高浓度NaCl，因此培养基a的作用是分离出耐盐微生物(耐盐菌)，b培养基平板滴加碘液后，部分菌落周围出现透明圈，根据菌落直径和透明圈大小，透明圈直径与菌落直径的比值大的菌落初步判断为产酶能力较高的菌株。 (4)变异是不定向的，故He－Ne激光照射诱导后的菌种需要对耐盐性和产酶能力等进行检测和筛选。最后获得的纯净高产菌种进行液体摇瓶发酵，摇瓶培养的目的是增大培养液的溶氧量，利于微生物和培养液充分接触，利于其繁殖，发酵过程中可通过稀释涂布平板法检测活菌的数量。 答案：(1)蛋白质、核酸(DNA和RNA)　高压蒸汽灭菌法(或湿热灭菌法)　(2)琼脂　A　(3)分离出耐盐微生物(耐盐菌)　透明圈直径与菌落直径的比值大　(4)不定向　增大培养液的溶氧量，利于微生物和培养液充分接触　稀释涂布平板 23．解析：(1)培养基的灭菌方法一般是高压蒸汽灭菌法。 (2)分析题意可知，本实验目的是筛选能降解米诺环素的降解菌，故应在BP培养基中添加一定浓度的米诺环素溶液，以扩大培养；米诺环素的分子式是C23H27N3O7，含有C和N元素，故可为微生物的生长提供碳源和氮源。 (3)微生物的接种方法是平板划线法或稀释涂布平板法；为对选择培养得到的微生物进行培养，应用固体培养基，需要加入凝固剂琼脂，故该步骤选择BPA培养基。 (4)分析题意可知，本实验目的是测定菌株DM13在自然水体中降解米诺环素的效果，故在锥形瓶中用自然水体配制四种不同初始浓度的米诺环素溶液，进行实验。①8 h处理后，在米诺环素溶液初始浓度为100 μg/L的水体中，空白对照测得的米诺环素溶液浓度为41.8 μg/L，加入菌株DM13测得的浓度为24.3 μg/L，相较空白对照组，米诺环素降解菌的降解率为(41.8－24.3)÷41.8≈41.9%。②为了测定菌株DM13的实际降解效果，可选择表中的MM培养基替换自然水体，这样做的目的是排除自然水体中其他微生物的影响。 (5)通过发酵工程制备菌剂的中心环节是发酵罐内发酵；在发酵过程中，需及时添加必需的营养条件，并严格控制温度、pH和氧含量等发酵条件。 答案：(1)高压蒸汽　(2)米诺环素溶液　碳源、氮源　(3)平板划线法或稀释涂布平板　BPA　(4)自然水体　①41.9%　②排除自然水体中其他微生物的影响　(5)发酵罐内发酵　温度、pH和氧含量 B卷——应用提能练 1．选D　不含氮源的平板可用于固氮微生物的培养，A错误；平板涂布时涂布器使用前必须浸在酒精中，然后在火焰上灼烧灭菌，B错误；使用后的培养基即使未长出菌落也要在丢弃前进行灭菌处理，不能直接丢弃，以免污染环境，C错误；只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，利用以尿素为唯一氮源的平板能分离出合成脲酶的微生物，D正确。 2．选A　要筛选出纤维素酶高产菌株，应该用以纤维素作为唯一碳源的选择培养基，A正确；在用稀释涂布平板法分离时，用移液枪取0.1 mL菌液，添加到培养基表面，再用灭菌的涂布器将菌液均匀地涂布在培养基的表面，B错误；在刚果红培养基中，透明圈直径与菌落直径的比值越大，说明该菌落产纤维素酶的能力越强，C错误；组成纤维素的单体是葡萄糖，纤维素酶无法将不溶性的纤维素分解出果糖，D错误。 3．选D　灭菌可以杀死环境中的一切微生物，包括芽孢和孢子，消毒是杀死部分微生物，A错误；无菌操作时，需要对实验操作的空间、操作者的衣物和手进行消毒，B错误；火焰灼烧法灭菌的对象是金属器具，也可以是部分玻璃器具，如涂布器，C错误；常用的灭菌方法有火焰灼烧灭菌、干热空气灭菌、高压蒸汽灭菌等，D正确。 4．选C　用血球计数板计数时，先将盖玻片放在计数室上，再用吸管吸取培养液，滴于盖玻片边缘，让培养液自行渗入，稍待片刻，待酵母菌沉降到计数室底部，就可以将计数板放到载物台中央进行观察、计数，A错误；与自然发酵相比，人工接种过程中利用了严格的灭菌措施，可以防止其他杂菌污染，所以发酵获得的产品品质更好，B错误；因为检测酒精的酸性重铬酸钾也可以和培养液中的葡萄糖发生反应，故鉴定酵母菌呼吸产物时，为排除无关变量干扰应设法让培养液中呼吸底物消耗完全，C正确；酵母菌的纯培养时，倒平板、接种都需要在超净工作台的酒精灯火焰旁进行，配制培养基不需要，D错误。 5．选A　应向“金花”样品中加入无菌水制成样品悬液，A错误。 6．选C　接种环用火焰灼烧灭菌，玻璃器皿用干热空气灭菌，①错误；人工配制的培养基常需要调 pH，其应在分装灭菌前进行，②正确；超净工作台、接种室、空气可以通过紫外线灭菌，③正确；菌种的临时保存通常接种在试管的固体斜面培养基上， 4 ℃左右的冰箱中保藏，④错误；用稀释涂布平板法统计菌落数的缺点是不能观察到微生物的形态、大小、结构，观察到的是菌落的形态、大小、结构，⑤正确；测定土壤中的细菌数量一般选106、107、108倍的稀释液进行平板培养，⑥错误。 7．选C　为了快速获得高抗汞细菌，应从重金属污染的土壤中分离纯化，A正确；蛋白胨为高抗汞细菌提供的主要营养为碳源、氮源和维生素，B正确；平板划线法不能用于细菌计数，C错误；平板划线纯化培养时，在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线，最后能获得单个菌落，D正确。 8．选B　制备培养基的基本步骤包括配制培养基、调节pH、分装、包扎、灭菌，分离金黄色葡萄球菌时，应在无菌条件下，先将菌液稀释，然后将菌液接种到培养基平面上，故步骤X表示接种过程。 9．选C　采集的土样中含有欲分离的尿素分解菌，不能进行高压蒸汽灭菌，A错误；若满足有3组数据在30～300之间，则可以取符合要求的数据求平均值，若不满足有3组数据处于30～300之间，则需要重新实验，B错误；分离土壤中尿素分解菌实验可以采用稀释涂布平板法进行分离和计数，由于尿素分解产生氨，使培养基pH升高，可用酚红试剂进行检测鉴别，C正确；反刍动物的瘤胃中酸性较大，而土壤中尿素分解菌能使培养基呈碱性，因此两组分离尿素分解菌的实验条件不同，D错误。 10．选D　用装置甲进行果酒发酵时，酵母菌无氧呼吸产生酒精和CO2，需定时打开阀b释放CO2，A正确；果醋发酵时需要O2，因此用装置甲进行果醋发酵时，需同时打开阀a、b，B正确；酵母菌发酵初期进行有氧呼吸，不断消耗O2，O2含量逐渐减少，因此曲线①可表示装置甲中O2浓度的变化，酵母菌发酵过程中不断产生酒精，因此曲线②可表示装置甲中酒精含量的变化，C正确；发酵前期，酵母菌细胞进行有氧呼吸，产生的CO2来自线粒体，发酵后期进行无氧呼吸，产生的CO2来自细胞质基质，酒精的产生场所是细胞质基质，故发酵过程中酵母菌细胞内产生CO2和酒精的场所不相同，D错误。 11．选A　利用酵母菌的无氧呼吸可制作米酒，制作米酒时添加“酵头”的目的是接种酿酒酵母，A正确；米酒发酵液中冒出的“气泡”既来源于酵母菌无氧呼吸，也来源于酵母菌有氧呼吸，B错误；酸奶和泡菜的制作利用的微生物是乳酸菌，乳酸菌是厌氧菌，因此酸奶和泡菜制作中不需要通氧，以保证乳酸菌的无氧呼吸，C错误；传统发酵过程中，发酵前不能对原料进行灭菌，否则会杀死原料中的发酵菌种，D错误。 12．选A　酸奶制作过程中的主要菌种是乳酸菌，A错误；在豆腐胚中加入含毛霉的卤汁，可用于制作腐乳，因为腐乳制作过程中的主要菌种是毛霉，B正确；煮沸冷却的盐水与预处理的蔬菜混合后装坛，用水封住坛口，可利用蔬菜表面的乳酸菌在无氧条件下发酵完成泡菜的制作，C正确；新鲜的葡萄汁可作为酵母菌的培养液，接种一定量的干酵母菌后，在无氧环境中可制作果酒，D正确。 13．选B　过多的水分可能导致腐败菌滋生，而适当的干燥有利于目标菌种的生长，焙烤可以降低豆腐渣的含水量，同时可以杀死部分微生物，有利于后期发酵，A正确。渣面上长出的红毛是丝状霉菌的菌丝，B错误。豆腐渣中的蛋白质被分解成小分子的肽和氨基酸，可增加成品的营养和风味，C正确。适当增加菌种量可加快发酵速度，缩短发酵时间；适宜温度能优化微生物代谢活性，有利于菌种生长，提高发酵效率，D正确。 14．选D　发酵工艺中无需对果汁进行高压蒸汽灭菌，防止果汁中营养物质被破坏，A正确；果胶酶能催化分解细胞壁及细胞间质，加入果胶酶有助于果汁清澈，B正确；发酵过程中产生CO2，发酵液的质量和pH都会降低，C正确；提高发酵速率需要适当增加酵母菌的数量，而酵母菌需通过有氧呼吸进行大量繁殖以达到增加数量的目的，故加酵母混菌发酵时，不可采用真空发酵来提高发酵速率，D错误。 15．选B　根据题图分析可知，Ⅰ号培养基上菌落分布均匀，因此①②过程为稀释涂布平板法，A正确；甲、乙试管中的液体是用于样品稀释，应为无菌水，B错误；由Ⅱ号培养基上的划线区域可知，从Ⅰ号培养基上挑选的菌落进行接种的方法是平板划线法，C正确；淀粉与碘液反应呈蓝色，但如果淀粉分解菌中的淀粉酶将淀粉水解后就不能呈蓝色，因此周围不显蓝色的菌落含有所需菌种，D正确。 16．选BC　蒸煮后摊晾，降低原料温度后才可撒曲，以免高温杀死菌种，A正确；若酒的表层长出白膜，可能是酒坛密封不严导致好氧杂菌(如醋酸菌)大量繁殖所致，而乳酸菌是厌氧菌，酒坛密封不严会有空气流入，乳酸菌不能在表层大量繁殖，B错误；撒曲糖化是指利用霉菌等分泌的淀粉酶催化淀粉分解为葡萄糖，为酒精发酵提供底物，C错误；微生物产生的蛋白酶能将原料中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸，增加酒的风味，D正确。 17．选AB　微生物A利用的碳源是纤维素，故要获得微生物A，最好选择富含纤维素的土壤采集土样，A正确；过程②表示生产乙醇的过程，常用的微生物是酵母菌，在接种前要进行扩大培养，可以在短时间内获得大量菌种，缩短生产周期，B正确；微生物A利用的碳源是纤维素，微生物B利用的碳源是纤维素分解后的可溶解复合物，二者利用的碳源不同，C错误；微生物A可以分解纤维素，可以用纤维素酶制剂代替微生物A起作用，D错误。 18．选BCD　餐余垃圾浸出液中含有目的菌，因此不能对其进行高压蒸汽灭菌处理，A错误；根据培养后培养基上形成的菌落分布可知，将含目的菌的餐余垃圾浸出液接种在X培养基上采用的是稀释涂布平板法，B正确；实验目的是筛选对抗生素有抗性、高效降解淀粉的微生物，并且图示中在X培养基上滴加碘液后形成了透明圈，说明X培养基上含有淀粉，菌体分解淀粉的能力越强，在其周围形成的透明圈就越大，同时为了筛选到对抗生素有抗性的菌体，X培养基还应该含有抗生素，Y培养基是将筛选到的目的菌扩大培养，为不含琼脂的液体培养基，C正确；淀粉遇碘变蓝，淀粉被分解，蓝色消失，图中⑤的透明圈最大，说明菌体降解淀粉的能力最强，不同菌体形成的菌落特征不同，因此可根据菌落特征初步判断微生物类型，D正确。 19．选BCD　配制固体培养基时，不需要在无菌的环境中进行，因为培养基配制好之后要进行高压蒸汽灭菌，A正确。稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到固体培养基表面，进行培养，在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个菌落，在涂布时吸取的菌液一般为0.1 mL，平板上的菌落数应介于30～300个，涂布用的菌浓度应控制在300～3 000个/mL；平板划线法不能计数，对于平板划线用的菌浓度没有严格要求，B错误。平板上长出的菌落也可能是利用PVC塑料降解物的微生物形成的，C错误。富集培养基是为了增加微生物的数量，采用的是液体培养基，液体培养基中不含琼脂，D错误。 20．解析：(1)在坛中加入成品红酸汤的目的是增加乳酸菌含量，乳酸发酵是利用了乳酸菌的无氧呼吸，该过程发生在乳酸菌的细胞质基质中。 (2)装坛时坛口留有一点空间而不装满的目的是防止西红柿发酵后液体膨胀外溢。红酸汤腌制过程的初期会有气泡冒出，但气泡的产生逐渐停止，其原因是刚入坛时，西红柿表面的杂菌呼吸产生二氧化碳，随着乳酸积累抑制了杂菌的生长，乳酸菌产生乳酸的过程不产生二氧化碳。 (3)根据题意分析，人体肠道内有很多益生菌，若使用抗生素会杀死肠道内多种益生菌，因此不宜滥用抗生素。 (4)发酵过程中影响亚硝酸盐含量的因素有温度高低、食盐用量、腌制时间、腌制方法等。 答案：(1)增加乳酸菌含量(以缩短制作时间)　无氧呼吸　细胞质基质　(2)防止西红柿发酵后液体膨胀外溢　刚入坛时，西红柿表面的杂菌呼吸产生二氧化碳，随着乳酸积累抑制了杂菌的生长，乳酸菌产生乳酸的过程不产生二氧化碳　(3)抗生素会杀死肠道内多种益生菌　(4)温度、食盐用量、腌制时间、腌制方法等 21．解析：(1)性状优良的菌种可以从自然界中筛选出来，也可以通过诱变育种或基因工程育种获得。 (2)不同微生物产品分离、提纯方法不同，如果发酵产品是微生物细胞本身，可在发酵结束之后，采用过滤、沉淀等方法将菌体分离和干燥，即可得到产品；如果产品是代谢物，可根据产物的性质采取适当的提取、分离和纯化措施来获得产品。 (3)如果馒头中的酸味主要是乳酸菌导致的，则密封后乳酸菌无氧发酵，馒头仍将是酸的；如果馒头中的酸味是由醋酸菌导致的，醋酸菌是好氧细菌，则密封后醋酸菌不能生长，馒头中的酸味将消失，由题干信息分析可知，导致馒头发酸的微生物主要是醋酸菌。 答案：(1)自然界　诱变育种　基因工程育种　(2)过滤、沉淀　提取、分离和纯化　(3)醋酸菌　密封后隔绝了氧气，好氧细菌醋酸菌不能进行醋酸发酵，馒头中的酸味也随之消失 22．解析：(1)为筛选纤维素分解菌，将大熊猫新鲜粪便样品稀释液接种至以纤维素为唯一碳源的固体培养基上进行培养；从功能上分类该培养基属于选择培养基。 (2)配制的培养基常用高压蒸汽灭菌，目的是杀死培养基中的所有微生物(微生物和芽孢、孢子)。为检测灭菌效果可对培养基进行空白培养，若在适宜条件下培养无菌落出现，说明培养基灭菌彻底，否则说明培养基灭菌不彻底。 (3)为测定大熊猫新鲜粪便中纤维素分解菌活菌数，常采用稀释涂布平板法，具体实验思路见答案。 (4)由题表可知，在适宜的条件下，C菌株在相同的温度和时间下，秸秆失重最多，纤维素降解率最大，说明该菌株的纤维素分解菌产生的纤维素酶活力最高。 答案：(1)纤维素　选择　(2)杀死培养基中的所有微生物(微生物和芽孢、孢子)　不接种培养(或空白培养 )　(3)将大熊猫新鲜粪便样液稀释适当倍数后，取0.1 mL涂布到若干个平板(每个稀释度至少涂布三个平板)，对菌落数在30～300的平板进行计数，则可根据公式推测大熊猫新鲜粪便中纤维素分解菌活菌数　(4)C　接种C菌株后秸秆失重最多，纤维素降解率最大 23．解析：(2)活化扩展青霉菌种使用的培养基成分中没有凝固剂，故根据物理性质划分该培养基属于液体培养基。 (3)若划线的某个平板培养后第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌落，其他区域的划线上却均无菌落，可能是因为第一区域划线结束，接种环灼烧后未冷却或划线未从第一区域末端开始。 (4)接种扩展青霉前，为了避免苹果上其他杂菌、病原微生物的污染，应对苹果进行消毒处理。由图可知，①号为腐烂部位，②③④⑤依次距离腐烂部位越来越远，推测相同病斑直径情况下，①号部位的Pat含量最高，离腐烂部位越远的果肉中Pat含量越低，相同部位病斑越大，Pat含量越高。 答案：(1)扩展青霉有以核膜为界限的细胞核，枯草杆菌无　(2)液体　蔗糖　为扩展青霉的生长提供氮源和无机盐；维持培养液一定的渗透压　(3)第一区域划线结束，接种环灼烧后未冷却(或划线未从第一区域末端开始)　(4)消毒　相同病斑直径情况下，离病斑越远的部位，Pat含量越低　相同部位病斑越大，Pat含量越高 24．解析：(1)滤纸片周围透明的抑菌圈越大，相应菌株产生的乳链菌肽抑菌作用越强。 (2)在菌株纯化培养过程中，A过程中除了加入特定的营养物质以外，还要加入一定量的氯化钠，以维持渗透压。B过程常用的方法是高压蒸汽灭菌法(或湿热灭菌法)。D过程通过划线培养法分离菌株，需使用固体培养基，扩大培养时需使用液体培养基，与C过程相比，D过程培养基中增加的物质是琼脂。E过程需将纯化的菌株接种于固体斜面(或斜面)培养基中4 ℃保藏。 (3)对革兰氏阳性菌活菌的计数方法为稀释涂布平板法。图中曲线3表明活菌数降为零，说明是杀死细菌，而不是抑制细菌生长；曲线2表明除去菌体的上清液中核酸的含量实验组与对照组一样，说明不是溶菌性杀死细菌。所以实验表明乳链菌肽对革兰氏阳性菌的作用方式为非溶菌性杀死细菌。 (4)乳链菌肽作为天然防腐剂，进入消化道后可能被消化道中的蛋白酶所降解，因此不会改变人体肠道中的正常菌群，也不会进入人体内环境。 答案：(1)越大　(2)渗透压　高压蒸汽灭菌法(或湿热灭菌法)　琼脂　固体斜面(或斜面)　(3)稀释涂布平板法　非溶菌性杀死细菌　曲线3表明活菌数降为零，说明是杀死细菌，而不是抑制细菌生长；曲线2表明除去菌体的上清液中核酸的含量实验组与对照组一样，说明不是溶菌性杀死细菌　(4)可能被消化道中的蛋白酶所降解 1 / 15 学科网（北京）股份有限公司 $