热点题型2 微生物的分离和鉴定-【学霸黑白题】2025-2026学年高中生物选择性必修3 生物技术与工程（人教版）

热点 强化 热点题型2微生物的分离和鉴定 1.(2023·江苏镇江期末)为从样液中分离到红曲菌（真菌），现用无菌水将其稀释成浓度为 10g/mL、102g/mL、103g/mL的悬液，分别取0.1mL稀释液涂布于含有氯霉素和四环素的 PDA(马铃薯葡萄糖琼脂)平板上，制备3个平行组。然后将PDA平板置于恒温培养箱中培 养，并连续7天统计平板上的菌落数。下列叙述正确的是 () A.制备PDA培养基时，先高压蒸汽灭菌2~3h,冷却至50℃左右，在酒精灯火焰旁进行倒平板 B.若3个平行组中的菌落数分别是210、27、116，此时可取平均值直接计算 C.平板接种后倒置培养的目的是既可以防止培养基中的水分过快挥发，又可以防止皿盖上 的水珠落入培养基，造成污染 D.氯霉素和四环素可以抑制杂菌生长，故培养基中添加的氯霉素和四环素越多，分离得到的 红曲菌越多 2.（2023·吉林长春期末)甲拌磷(3911)是高毒类有机磷农药，在土壤中留存可达50天左右， 我国已禁止在水果蔬菜上使用。下图是从土壤中筛选甲拌磷降解菌XT,的过程，下列有关说 法错误的是 () 逐级 挑取 稀释 人筛选 > 单菌落 10g 细菌 选择 鉴别 土壤样品 培养基 培养基 培养基 菌种 A.图中的选择培养基需用干热灭菌法灭菌并以甲拌磷为唯一碳源进行细菌培养 B.在稀释样品接种的培养基培养的同时，需和一个未接种的空白培养基共同培养在恒温箱 中，12h和24h后分别进行观察 C.该过程用到的接种方法为稀释涂布平板法 D.若用图中的接种方法进行计数，则计数的结果比实际值偏小 3.（2023·福建永春第一中学校联考)结核杆菌是引起结核病的病原体。结核病患者对利福平 (一种抗生素)的耐药率不断上升给结核病的治疗带来较大的困难。为了筛选新的抗结核药 物，科研人员进行了如图1所示的研究。已知罗氏固体培养基中有抑制杂菌生长的物质。回 答下列问题： ① ② 观察鉴定 U ③ 临床痰 三三 罗氏固体 液标本 牛肉膏蛋白胨 液体培养基 培养基 图1 (1)结核病的治疗主要依赖于多种抗结核药物，长期使用单一抗生素容易出现耐药性，原因 是 为延缓耐药性出现，临床上以多种抗生素同时或先后联合 使用的方式用药，原理是 0 02黑白题生物1选择性必修第三册RJ (2)配制牛肉膏蛋白胨液体培养基时，要将培养液的pH调至 。实验 中，步骤①的目的是 步骤②的目的是 (3)为统计样品中结核杆菌的数量，实验小组分别向3个培养基中各加入0.1L未经稀释的 样品，涂布均匀后置于37℃的恒温培养箱中培养24h,结果如图2所示，其中数字表示菌 落数。检测时使用的接种量为0.1mL而不是1mL,原因是 246 298 282 图2 4.(2023·江苏常州联考期中)高浓度的铵盐对土壤中的生物有一定的毒害作用，土壤中具有高 降解能力的硝化细菌可吸收利用铵盐，转变为其他生物可吸收利用的物质，科研人员拟从当 地土壤中筛选出对铵盐降解率高且稳定的硝化细菌菌株Q。下图1表示制备固体培养基过 程中的某操作，图2是科研人员从土壤中分离出菌株Q的部分过程示意图。 1 mL 1 mL 1 mL 0.1mL 土 平板 99 mL 9mL 9mL 9 mL 无菌水无菌水无菌水无菌水 图1 图2 图3 图4 (1)图1所示操作称为 待平板冷凝后 培养，以防止 为了筛选出硝化细菌，在配制选择培养基时，特殊的处理有 0 (2)图2所示接种方法是 。在3个平板上分别接入0.1mL稀释液，经适当 培养后，3个平板上菌落数分别是48个、52个、50个，则1g土壤中的活菌数约为 个。在利用平板计数时，需每隔一个“时间间隔”统计一次菌落数，最后选取稳定时的菌 落数作为记录结果，这样可以避免因培养时间不足造成 导致统计结果偏小。为使获得的实验数据准确，还应对每种候选菌株设置 、0 (3)图3是某同学利用不同于图2方法分离菌株Q的示意图。下列对其操作及结果的叙述， 错误的有 A.操作前用无水乙醇对双手进行消毒处理 B.划线时将蘸有菌液的接种环插入培养基 C.只有在5这一区域中才能得到所需菌落 D.整个过程需要对接种环至少进行6次灼烧 (4)固体培养基中难溶性磷酸盐在菌株Q的作用下溶解，会在菌落周围形成透明圈（图4）， 透明圈直径(D)与菌落直径(d)的比值(D/d)代表微生物溶解难溶性磷酸盐的能力大小。 如表是初步筛选出的三种优良解磷菌株。 菌株 透明圈直径(D)》 菌落直径(d) M301 14.8mm 4.3mm B356 18.7mm 5.0mm T401 23.5mm 4.5mm 根据实验结果分析，溶解难溶性磷酸盐能力最强的菌株是 进阶突破·专项练03进阶突破·专 热点题型1传统工艺 1,B解析：当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为乙 酸，A正确：加水的目的是对酒进行稀释，避免酒精浓度过高杀死醋 酸菌，B错误：醋酸菌为好氧菌，“衣”位于变酸的酒表面，是由醋酸菌 大量繁殖形成的，C正确；醋酸菌为好氧菌，“挠搅”有利于酒精与醋 酸菌充分接触，还可以增加溶液中的溶解氧，有利于发酵过程，D正 确。故选B。 2.B解析：麦曲中主要含有淀粉酶和蛋白酶，进而把淀粉等大分子变 成小分子，利于酒酿菌种发酵，A正确：“煎煮”是进行消毒，除去发酵 产品中的酵母菌等微生物，利于储藏，B错误：“陈藏”过程中，黄酒中 醇与酸发生酯化反应，使酒更加芳香，提高了酒的品质，C正确；“开 粑”（搅拌）是通过适当增加溶氧量，让酵母菌进行有氧呼吸，增加酵 母菌的数量，有利于活化酵母，D正确。故选B。 3.C解析：发酵后期，乳酸产生过多，pH降低，会使乳酸菌的繁殖受到 抑制，A正确：用热水短时间处理“庐”“瓜”，高温可破坏微生物产生 的果胶酶，保证植物细胞壁的结构，使泡菜口感更脆，B正确；乳酸菌 需要在pH偏酸的条件下培养，不宜用偏碱性培养基，C错误：乳酸菌 为厌氧菌，泡菜坛边水槽中应随时加满水，以防止外界空气进入，保 证无氧环境，D正确。故选C。 4.ACD解析：腐乳生产过程中发挥主要作用的微生物是毛霉，A错 误：本实验的自变量是时间和食盐浓度，从题图中可以看出，在同一 时间的不同食盐浓度中，氨基酸含量不同；在同一食盐浓度的不同时 间内，氨基酸含量也不同，所以时间和食盐浓度均可影响腐乳中氨基 酸的含量，B正确：经过发酵，豆腐中的蛋白质被分解为小分子的肽 和氨基酸，C错误；高浓度食盐能抑制微生物的生长，但同样会影响 腐乳的口感，D错误。故选ACD。 热点题型2微生物的分离和鉴定 1.C解析：PDA制备过程中，需用高压蒸气灭菌法在压力为100kPa 温度为121℃的条件下，维持15~30min,A错误；一般选取菌落数 为30~300的平板进行计数，且平行组中的菌落数应相差不大，B错 误；平板接种后倒置培养既可以防止培养基中的水分过快挥发，又 可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染，C正确；氯霉素和四 环素是针对细菌起作用的抗生素，且大幅度提高氯霉素和四环素含 量会导致培养液渗透压升高，反而会抑制红曲菌生长，D错误。故 选C。 2.A解析：培养基灭菌应采用高压蒸汽灭菌法，A错误：为检验培养基 灭菌是否合格，可在稀释样品接种的培养基培养的同时，需和一个未 接种的空白培养基共同培养在恒温箱中，12h和24h后分别进行观 察，B正确：由题图可知，平板中菌落均匀分布，说明该过程用到的接 种方法为稀释涂布平板法，C正确；题图所示接种方法为稀释涂布平 板法，由于当两个或多个菌体连在一起形成一个菌落时，会计数成一 个菌体，所以该种方法统计的菌体数量比实际值偏小，D正确。故 选A。 3.(1)抗生素对细菌定向选择不同抗生素选择的方向不同，多种抗生 素同时或先后联合用药能延缓耐药菌株的出现(2)中性或弱碱性 扩大培养结核杆菌，以便筛选筛选结核杆菌(3)1mL样品中 细菌数目较多，经培养后平板菌落数可能会超过300 解析：(1)由于抗生素对细菌的定向选择作用，长期使用单一抗生素 会出现耐药性，不同抗生素的选择方向不同，因此多种抗生素同时或 先后联合用药能有效延缓耐药菌株的出现。(2)不同微生物培养时 所需pH不同，细菌培养基一般需将pH调至中性或弱碱性。步骤① 是将细菌接种在基本培养基上，目的是扩大培养目的菌，步骤②是将 扩繁后的菌种接种到选择培养基上，筛选目的菌株。(3)题图2中， 三个平板上的菌落数均接近300，若接种1mL样液，则培养后菌落数 专项练参考答案 项练参考答案 目可能超过接种0.1mL的10倍，即菌落数远超300，而计数时符合 要求的菌落数为30~300。 4.(1)倒平板倒置冷凝水落入培养基对培养基造成污染需要以 铵盐为唯一氨源(2)稀释涂布平板法5.0×107遗漏菌落的数目 (至少3个)平行组(3)ABC(4)T401 解析：(1)题图1所示操作称为倒平板；待平板冷凝后需要将其倒置 培养，以防止皿盖上的冷凝水落入培养基，对培养基造成污染。硝化 细菌是一类能降解铵盐的自养型细菌，故为了筛选出硝化细菌，在配 制选择培养基时，需要以铵盐为唯一氮源。(2)题图2所示接种方法 是稀释涂布平板法：取1g土壤按题图依次等比稀释，在三个平板 上分别接人0.1mL稀释液后，经适当培养后，3个平板上的菌落数分 别是48、52、50，据此可计算出每克土样中的活菌数为(48+52+50)÷ 3÷0.1×10=5.0×10?个。菌落生长需要时间，在利用平板计数时，需 每隔一定“时间间隔”统计一次菌落数，最后选取稳定时的菌落数作 为记录结果，这样可以避免因培养时间不足造成遗漏菌落的数目，导 致统计结果偏小。为使获得的实验数据准确，还应对每种候选菌株 设置（至少3个）平行组。(3)题图3是通过平板划线法接种操作， 结合该接种方法的步骤和注意事项分析如下：操作前用70%的酒精 溶液对接种人员的双手进行消毒处理，A错误；划线操作时将蘸取一 环菌液的接种环涂抹在培养基表面，不能插入培养基以避免划破培 养基表面，B错误：在5个区域中，无论哪个区域，只要有单个活细 菌，通过培养即可获得所需菌落，C错误：在每次划线前后都要对接 种环进行灭菌，接种环的灭菌方法应是在火焰上灼烧，整个过程需要 对接种环至少进行6次灼烧，D正确。故选ABC。(4)根据实验原理 中“透明圈直径(D)与菌落直径(d)的比值(D/d)代表微生物溶解难 溶性磷酸盐的能力大小”，结合题表数据可以确定解磷能力最强的菌 株是T401。 热点题型3单克隆抗体制备的过程 1,A解析：已免疫的B细胞和骨髓瘤细胞融合制备单克隆抗体，表达 Myo基因的细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合，不能制备抗Myo的单克隆 抗体，A错误：单克隆抗体与常规的血清抗体相比，最大的优势在于 特异性强，灵敏度高，可大量制备，B正确；抗原和抗体的结合具有特 异性，故将人肌红蛋白作为抗原固定来检测抗体，C正确；酶标抗体 可与待测抗体结合，且携带的酶可与相应底物反应显色，因此根据是 否显色来判断是否有抗Myo的单克隆抗体产生，D正确。故选A。 2.A解析：单克隆抗体制备时，首先要给实验动物进行免疫，产生相应 的浆细胞，然后将浆细胞与骨髓瘤细胞融合，经过选择培养基两次筛 选，最后获得能产生所需抗体的杂交瘤细胞。在单克隆抗体的制备 过程中，使用了动物细胞培养和动物细胞融合等动物细胞工程技术。 B淋巴细胞在骨髓中发育成熟，可分布于淋巴结和脾脏等处，故B淋 巴细胞可来源于抗原刺激后动物的淋巴结和脾脏等处，A正确：HAT 培养基的作用主要是为让细胞存活，而乌本苷(Oua)起筛选作用，B 错误；EBV转化细胞死亡是因为无法增殖而死亡，骨髓瘤细胞死亡是 因为对鸟本苷(Oua)敏感而死亡，C错误；D、本实验中EBV的作用是 获得染色体核型稳定的EBV转化细胞，而不是刺邀B细胞分化成浆 细胞产生抗体，所以该杂交瘤细胞不能产生抗EBV的抗体，D错误。 故选A。 3.(1)定期更换培养液加强免疫，刺激小鼠机体产生更多的B淋巴细 胞聚乙二醇(PEG)(2)乙和丙能产生特异性强、灵敏度高的 抗cTnI抗体的杂交瘤细胞(3)不同部位酶标抗体与待测抗原 结合，酶催化特定底物反应 解析：(1)在动物细胞培养的过程中，为防止有害代谢物的积累，需要 定期更换培养液：为了提高淋巴细胞的免疫能力，刺激小鼠机体形成 更多能产生抗cTnI抗体的B淋巴细胞，一般通过多次注射相同抗原 黑白题29