3.2探究实践 DNA片段的扩增和电泳鉴定课件-2025-2026学年高二下学期生物人教版选择性必修3

DNA片段的扩增及电泳鉴定 抗除草剂大豆MON89788 图示大豆是抗除草剂大豆MON89788吗？如何鉴定？ 鉴定转基因大豆的流程 一. 实验设计 提取大豆DNA PCR扩增抗除草剂基因（MON89788） 电泳鉴定 组别 阳性对照 阴性对照 实验组 样品 MON89788标准质粒   普通大豆 待测大豆  结果 一 .实验设计 二.进行实验 （一）PCR扩增目的基因 MON89788 标准质粒  普通大豆DNA  待测大豆DNA  材料 用量 2× Det PCR MasterMix 10μL 正向引物(10μM) 0.5μL 反向引物(10μM) 0.5μL 模板DNA （用量为1pg-1μg） 1μL ddH2O 补至20μL 二.进行实验 （一）PCR扩增目的基因 移液 离心 扩增 循环程序 变性 复性 延伸 预变性 94℃,3min 35循环 94℃,30s 55℃,30s 72℃,1min 终延伸 72℃,5min / / 二.进行实验 二.进行实验 （二）琼脂糖凝胶电泳鉴定扩增产物 琼脂糖凝胶电泳鉴定DNA的原理是什么？ 二.进行实验 （二）琼脂糖凝胶电泳鉴定扩增产物 琼脂糖凝胶电泳鉴定DNA的原理是什么？ 原理：DNA分子在中性条件下会带负电，在电场的作用下，DNA会朝着正极移动。DNA分子在凝胶中的迁移速率与DNA分子的大小和构象有关，DNA分子的碱基越少，迁移的速度越快。凝胶中的DNA分子可以通过染色，在紫外灯下被检测出来。 二.进行实验 （二）琼脂糖凝胶电泳鉴定扩增产物 1、制作琼脂糖凝胶 2、电泳 3、观察 二.进行实验 称琼脂0.3g，倒入锥形瓶中 （1）称量 （2）溶解 向锥形瓶中倒入加入了核酸染料的 TAE 30mL， 放入微波炉加热 1 min （3）组装制胶槽 （4）倒胶 倒胶，静置 20 min 1、制作琼脂糖凝胶 二.进行实验 （1）组装电泳槽 电泳槽中放入足量 TAE，将凝固的琼脂糖凝胶放入电泳槽中，点样孔一端放在负极（黑色端） （2）加样 吸取样品 10 μL，分别打入相应点样孔内 2、电泳 二.进行实验 2、电泳 泳道1 泳道2 泳道3 泳道4 Mark 阳性对照  阴性对照 待测大豆  MARKER Sample1 Sample2 Sample3 二.进行实验 3、观察 Mark 待测大豆 阳性对照 阴性对照 点样孔 1000bp 500bp 200bp 100bp 二.进行实验 3、观察 三.分析结果，得出结论 （一）待测大豆是否为转基因大豆？原因是什么？ （二）根据对照组的现象判断，实验结果是否可信？ 三.分析结果，得出结论 MARKER 阳性对照 阴性对照 待测大豆 200bp 100bp 三.分析结果，得出结论 （一）待测大豆是否为转基因大豆？原因是什么？ （二）根据对照组的现象判断，实验结果是否可信？ 待测大豆不是为转基因大豆，实验组没有出现抗除草剂基因的条带 可信，阳性对照出现条带，长度与MON89788基因相同（139bp） 阴性对照未出现条带 三.分析结果，得出结论 （三）联系电泳的原理，思考： 出现的产物一定是MON89788吗？ 也有可能是它的基因，因为电泳条带表示的是基因的长度，而不是特定的序列，因此产物有可能是长度与抗除草剂基因相同或相似的其他基因。 三.分析结果，得出结论 MARKER 阳性对照 阴性对照 待测大豆 可能是在PCR的时，设计的引物太短，导致特异性低，扩增出了其他基因。 （四）如果电泳条带不止一条，可能是什么原因造成的？ $