专题二十 胚胎工程-【创新大课堂】2026年高考生物五年真题分类汇编168优化重组卷

专题二十 考向 胚胎工程 1.(2025·江苏卷)梅花鹿和马鹿杂交后代生命力 强、茸质好，但自然杂交很难完成，人工授精能 解决此难题。胚胎工程技术的应用，可提高繁 殖率，增加鹿场经济效益。下列相关叙述合理 救 的是 ( A.采集的精液无需固定、稀释，即可用血细胞 计数板检测精子密度 B.人工授精时，采集的精液经获能处理后才能 输入雌性生殖道 拼 C.超数排卵处理时，常用含促性腺激素的促排 卵剂 张 D.母体子宫对胚胎的免疫耐受性低下是胚胎 移植的生理学基础 量 2.（2025·黑吉辽蒙卷)研究显示，约70%的小鼠 体细胞核移植胚胎未能成功发育至囊胚期，且 仅有约2%的胚胎移植到代孕母鼠后可正常发 育。下列叙述错误的是 ( A.体细胞核进入去核的MⅡ期卵母细胞形成 赵 重构胚 B.移植前胚胎发育率低，可能是植入的体细胞 核不能完全恢复分化前的功能状态 C.胚胎移植到代孕母鼠后成活率低，可能是早 期胚胎未能及时从滋养层内孵化 D.为提高胚胎成活率，可用胚胎细胞核移植代 鼠 替体细胞核移植 3.(2025·安徽卷)细胞工程技术已在生物制药和 物种繁育等领域得到了广泛应用。下列关于动 物细胞工程的叙述，正确的是 17 胚胎工程 A.从动物体内取出组织，用胰蛋白酶处理后直 接培养的细胞称为传代细胞 B.将特定基因或特定蛋白导入己分化的T细 胞，可将其诱导形成PS细胞 C.将B淋巴细胞与骨髓瘤细胞混合，经诱导融 合的细胞即为能分泌所需抗体的细胞 D.采用胚胎分割技术克隆动物常选用桑葚胚 或囊胚，因这两个时期的细胞未发生分化 4.(2025·陕晋宁青卷)科研人员通过对绵羊受精 卵进行基因编辑和胚胎移植等操作，获得了羊毛 长度显著长于对照组的优良品系。下列叙述错 误的是 () A.为获取足够的卵子，需对供体绵羊注射促性 腺激素进行超数排卵处理 B.为确保受体绵羊与供体绵羊生理状态一致， 需进行同期发情处理 C.受精卵发育至桑葚胚阶段，细胞数量和胚胎 总体积均增加 D.对照组绵羊的选择需考虑年龄、性别等无关 变量的影响 5.(2024·湖北卷)波尔山羊享有“世界山羊之王” 的美誉，具有生长速度快、肉质细嫩等优点。生 产中常采用胚胎工程技术快速繁殖波尔山羊。 下列叙述错误的是 ) A.选择遗传性状优良的健康波尔母山羊进行 超数排卵处理 B.胚胎移植前可采集滋养层细胞进行遗传学 检测 C.普通品质的健康杜泊母绵羊不适合作为受体 D.生产中对提供精子的波尔公山羊无需筛选 6.(2024·湖北卷)研究者探究不同浓度的雌激素 甲对牛的卵母细胞和受精卵在体外发育的影 响，实验结果如下表所示。根据实验数据，下列 叙述错误的是 甲的浓度 卵母细 第一极体 成熟率 卵裂数卵裂率 (gg/mL) 胞（个） 排出（个） (%) (个) (%) 0 106 70 66.0 28 40.0 120 79 65.8 46 58.2 10 113 53 46.9 15 28.3 100 112 48 42.8 5 10.4 A.实验结果说明甲抑制卵裂过程 B.甲浓度过高抑制第一极体的排出 C.添加1g/mL的甲可提高受精后胚胎发育能力 D.本实验中，以第一极体的排出作为卵母细胞 成熟的判断标准 7.(2024·浙江1月)关于生物技术的安全与伦理 问题，我国相关法规明令禁止的是 A.试管动物的培育 B.转基因食品的生产 C.治疗性克隆研究 D.生物武器的发展和生产 8.(2023·广东卷)科学家采用体外受精技术获得紫 羚羊胚胎，并将其移植到长角羚羊体内，使后者成： 功妊娠并产仔，该工作有助于恢复濒危紫羚羊的 种群数量。此过程不涉及的操作是 ( A.超数排卵 B.精子获能处理 C细胞核移植 D.胚胎培养 17 9.(2023·浙江1月)以哺乳动物为研究对象的生 物技术已获得了长足的进步。对生物技术应用 于人类，在安全与伦理方面有不同的观点，下列 叙述正确的是 ( A.试管婴儿技术应全面禁止 B.治疗性克隆不需要监控和审查 C.生殖性克隆不存在伦理道德方面的风险 D.我国不赞成、不允许、不支持、不接受任何生 殖性克隆人实验 10.(2023·浙江卷1月)在家畜优良品种培育过 程中常涉及胚胎工程的相关技术。下列叙述 错误的是 () A.经获能处理的精子才能用于体外受精 B.受精卵经体外培养可获得早期胚胎 C.胚胎分割技术提高了移植胚胎的成活率 D.胚胎移植前需对受体进行选择和处理 11.(2021·浙江6月选考)采用CRISPR/Cas9基 因编辑技术可将增强型绿色荧光蛋白(EGFP) 基因定点插入到受精卵的Y染色体上，获得 转基因雄性小鼠。该转基因小鼠与野生型雌 性小鼠交配，通过观察荧光可确定早期胚胎的 性别。下列操作错误的是 () A.基因编辑处理的受精卵在体外培养时，不 同发育阶段的胚胎需用不同成分的培养液 B.基因编辑处理的受精卵经体外培养至2细 胞期，须将其植入同期发情小鼠的子宫，才 可获得表达EGFP的小鼠 C.分离能表达EGFP的胚胎干细胞，通过核！ 移植等技术可获得大量的转基因小鼠 D.通过观察早期胚胎的荧光，能表达EGFP 的即为雄性小鼠胚胎 12.(2021·江苏)下列关于哺乳动物胚胎工程和 细胞工程的叙述，错误的是 A.细胞培养和早期胚胎培养的培养液中通常 需要添加血清等物质 B.早期胚胎需移植到经同期发情处理的同种： 雌性动物体内发育成个体 C.猴的核移植细胞通过胚胎工程已成功地培 育出了克隆猴 D.将骨髓瘤细胞和B淋巴细胞混合，经诱导 后融合的细胞即为杂交瘤细胞 13.(2022·全国甲卷)某牧场引进一只产肉性能 优异的良种公羊，为了在短时间内获得具有该 公羊优良性状的大量后代，该牧场利用胚胎工： 程技术进行了相关操作。回答下列问题： (1)为了实现体外受精需要采集良种公羊的精 液，精液保存的方法是 。 在体外受精前要对精子进行获能处理， 其原因是 精子体外获能可采用化学诱导法，诱导精子获 能的药物是 (答出1点 即可)。利用该公羊的精子进行体外受精需要 发育到一定时期的卵母细胞，因为卯母细胞达 到 时才具备与精子受精的能力。 179 (2)体外受精获得的受精卵发育成囊胚需要在 特定的培养液中进行，该培养液的成分除无机 盐、激素、血清外，还含的营养成分有 (答出3点即可)等。将培 养好的良种囊胚保存备用。 (3)请以保存的囊胚和相应数量的非繁殖期受 体母羊为材料进行操作，以获得具有该公羊优 良性状的后代。主要的操作步骤是 4.(2021·浙江6月选考)回答下列小题： 斑马鱼是一种模式动物，体外受精发育，胚胎 透明、便于观察，可用于水质监测，基因功能分 析以及药物毒性与安全性评价等。 (1)由于人类活动产生的生活污水日益增多， 大量未经处理的污水直接排入河流、湖泊会引 起水体 ,导致藻类大量繁殖形成水 华。取水样喂养斑马鱼，可用斑马鱼每周的体 重和死亡率等指标监测水体污染程度。 (2)为了研究某基因在斑马鱼血管发育过程中 的分子调控机制，用DNA连接酶将该基因连 接到质粒载体形成 ,导入到大肠杆菌 菌株DH5α中。为了能够连接上该目的基因， 并有利于获得含该目的基因的DH5α阳性细 胞克隆，质粒载体应含有 (答出2点即可)。 提取质粒后，采用 法，将该基因导入 到斑马鱼受精卵细胞中，培养并观察转基因斑 马鱼胚胎血管的发育情况。 (3)为了获取大量斑马鱼胚胎细胞用于药物筛 选，可用 分散斑马鱼囊胚的内细胞 团，取分散细胞作为初始材料进行 培 养。培养瓶中添加成纤维细胞作为 以提高斑马鱼胚胎细胞克隆的形成率。 15.(2021·湖南)M基因编码的M蛋白在动物A 的肝细胞中特异性表达。现设计实验，将外源 DNA片段F插入M基因的特定位置，再通过 核移植、胚胎培养和胚胎移植等技术获得M 基因失活的转基因克隆动物A,流程如图所 示。回答下列问题： : 质粒 卵母细胞 M基因 0 成纤维细胞 去核卵母细胞 、核移植 : 胚胎培养 早期胚胎 ↓胚胎移植 代孕母亲 克隆动物A (1)在构建含有片段F的重组质粒过程中，切 割质粒DNA的工具酶是 ,这类 180 酶能将特定部位的两个核苷酸之间的 断开。 (2)在无菌、无毒等适宜环境中进行动物A成 纤维细胞的原代和传代培养时，需要定期更换 培养液，目的是 (3)与胚胎细胞核移植技术相比，体细胞核移 植技术的成功率更低，原因是 从早期胚胎中分离获得的胚胎干细胞，在形态 上表现为 (答出两点即可)，功能 上具有 (4)鉴定转基因动物：以免疫小鼠的 淋巴细胞与骨髓瘤细胞进行融合，筛选融合杂 种细胞，制备M蛋白的单克隆抗体。简要写 出利用此抗体确定克隆动物A中M基因是否 失活的实验思路5.D「动物细胞培养动物细胞培养所需气体主要有O2和！ C○2，O2是细胞代谢所必需的。传代培养时，培养皿不能密！ 封，A错误。处于指数增长期的细胞形态和生理特性相对稳 定，适合进行传代培养，离体培养的细胞生命力比较脆弱，需要· 适应培养基的环境，传代最好在细胞生长覆盖瓶底80%一90%· 进行，选取②的细胞进行传代培养比①更合理，B错误。题千： 显示从小鼠胚胎中分离获取胚胎成纤雏细胞进行贴壁培养，贴！ 壁细胞需要重新用胰蛋白酶等处理，使之分散成单个细胞，然！ 后再用离心法收集，C错误。悬浮培养的细胞会因细胞密度过！ 大、有害代谢物积累和培养液中营养物质缺乏等因素而分裂受！ 阻，因此，细胞增长进入平台期可能与细胞密度过大有关，D 正确。 6,D[体液调节越野跑、马拉松等运动后，运动员体内血糖大！ 量消耗，血糖含量降低，胰岛素含量降低，胰高血糖素含量上： 升，促进肝糖原分解和非糖物质转化为糖；此时，机体代谢旺： 盛，甲状腺激素水平较高；同时机体大量排汗，导致细胞外液渗！ 透压升高，抗利尿激素分泌增加。综上可知，A、B、C错误，D 正确。] 7,D[根据抗原和抗体发生特异性结合的原理推测，双抗可同时} 与2种抗原结合，A正确：根据抗原与抗体能够发生特异性结 合的特性，利用双抗可以将蛋白类药物运送至靶细胞，从而使！ 药物发挥相应的作用，B正确；由于双抗是在两种不同的抗原！ 刺激下，B细胞增殖、分化产生不同的浆细胞分泌形成的，因 此，筛选双抗时需使用制备单克隆抗体时所使用的2种抗原来！ 进行抗原一抗体检测，从而实现对双抗的筛选，C正确：同时注 射2种抗原可刺激B细胞分化形成不同的浆细胞，而不是分化！ 成产双抗的浆细胞，D错误。】 8.C[促进动物细胞的融合除了物理方法和化学方法外，还可以！ 采用灭活的病毒，A正确：病毒作为抗原可刺激机体发生特异； 性免疫，产生抗体，用特定的病毒免疫小鼠可制备单克隆抗体， B正确：基因工程中常用农杆菌转化植物细胞，农杆菌的特点！ 是其细胞内的Tⅰ质粒上的TDNA片段能够转移至受体细胞， 并整合到受体细胞的染色体上，C错误：经过灭活或减毒处理 的病毒可以作为免疫学中的疫苗，用于免疫预防，D正确。 9,C[动物细胞培养过程需要无菌操作，故步骤①的操作需要在 无菌环境中进行，A错误：动物细胞培养过程需要用胰蛋白酶！ 或胶原蛋白酶处理动物组织，分散成单个细胞，制成细胞悬液，！ B错误；传代培养时需要用胰蛋白酶处理贴壁生长的细胞，使！ 之分散成单个细胞，再分瓶培养，C正确：步骤④为传代培养过！ 程，该过程中部分细胞可能发生细胞转化，核型改变，D错误。]！ 10.D[单抗制备过程中有多次的筛选和鉴定，注入小鼠体内的抗！ 原纯度对单抗的纯度影响很小，注入小鼠体内的抗原纯度越： 高，说明抗原的种类越少，多抗的纯度就会越高，A错误；单抗 制备过程中并不是分离出浆细胞与骨髓瘤细胞融合的，而是融： 合以后进行筛选，B错误：题千信息“也可以从该小鼠的血清中 直接分离出多抗”可说明，非洲猪盘病毒衣壳蛋白72的表面： 有多种抗原决定簇，每种抗原决定簇都能刺激机体产生一种抗！ 体，所以利用该小鼠能制备出多种抗p72的单抗，C错误；非洲！ 猪瘟病毒衣壳蛋白p72是一种抗原，其表面有多种抗原决定 簇，每种抗原决定簇都能刺激机体产生一种抗体，所以p72部！ 分结构改变，会导致改变部位刺激产生的单抗失效，但未改变！ 部位刺激产生的抗体仍然能起作用，所以多抗仍有效，D正确。]！ 11.【解析】(1)一般认为，已免疫的脾细胞（含浆细胞）中已含足： 够数量的能产生特异性抗体的效应B细胞，不需要通过原代： 培养扩大细胞数量。聚乙二醇(PEG)分子能改变膜结构，使 两细胞接触，点处质膜的脂类分子发生疏散和重组，由于两细 胞接触点处双分子层质膜的相互亲和以及彼此的表面张力作！ 用，使细胞融合。(2)淋巴细胞和骨髓瘤细胞混合后，有的细！ 胞未融合，有的细胞已融合；融合细胞中有的是具有同种核的！ 细胞，有的是具有不同种核的细胞（杂交瘤细胞）。使用选择！ 培养基的目的是筛选出能分泌特定抗体的杂交瘤细胞；在该！ 培养基上，未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞的！ 生长受到抑制，只有融合的杂交瘤细胞才能生长。(3)将抗体 与该病毒外壳蛋白进行杂交的目的是从杂交瘤细胞中筛选出 能分泌特定抗体的杂交瘤细胞。(4)在核酸中，一个核苷酸的 3'端羟基与另一个核苷酸的5'端磷酸基团发生脱水缩合，形！ 成磷酸二酯键。故④符合题意。 27 【答案】(1)不需要改变细胞膜结构（使两细胞接触点处质膜 的脂类分子发生疏散和重组)(2)未融合的（亲本）细胞融合 的具有同种核的细胞(3)筛选能分泌与该病毒外壳蛋白A特 异性结合的抗体的杂交瘤细胞(4)④单克隆抗体的制备、基因 工程 12.【解析】(1)通过抑制或减弱一开始的变化，维持物质含量稳定， 这种调节方式属于负反馈调节。人为添加一定浓度的赖氨酸类 似物，使不抗赖氨酸类似物的细胞死亡，而抗赖氨酸类似物的细 胞突变体能够存活。(2)①可通过检索生物信息数据库（或遗传 序列数据库)获取目的基因的编码序列。②脂质体由磷脂等构 成，脂质体可以与牛胚胎成纤雏细胞的细胞膜发生融合，从而使 表达载体进入细胞，最终进入细胞核，发生转化。③卵母细胞去 核后作为受体细胞。经核移植的重组细胞需利用电刺激进行胚 激活。④将重组细胞体外培养至早期囊胚后，可移植至代孕母牛 子宫角。⑤DNA水平检测的目的是，检测转基因牛中是否含有 目的基因。分析可知，可以转基因牛耳组织细胞作为阳性对照。 进行RNA水平检测时，需利用DNA酶(DNA水解酶)处理总 RNA,以去除DNA污染。RNA经逆转录形成的cDNA可作为 PCR扩增的模板，通过PCR技术可获取大量的目的基因片段。 目的基因只在转基因牛乳腺细胞中表达的原因是在构建基因表 达载体时，将目的基因与含有乳腺特异性启动子的相应载体连 接，构建出了乳腺专一表达载体，该表达载体中的特异性启动子 使目的基因仅在乳腺细胞中表达，而不会在其他细胞中表达。 【答案】(1)负反馈调节一定浓度的赖氨酸类似物(2)①生 物信息数据库/遗传序列数据库②融合③受体细胞激活 ④早期囊胚⑤转基因牛耳组织细胞DNA酶模板构建的 表达载体含乳腺特异性启动子，使日的基因仅在乳腺细胞中表达 专题二十胚胎工程 考向 1.【命题点】胚胎工程 C[若血细胞计数板的一个小格内精子数量过多，计数时会因 为重叠而数不清楚，应将采集的精液固定、稀释一定倍数后再 进行计数，A错误：人工授精时，精子可在雌性动物生殖道内获 能，无需提前进行获能处理，B错误：胚胎工程中，常用外源促 性腺激素进行超数排卵处理，C正确；母体对移植入子宫的外 来胚胎基本上不发生免疫排斥反应，免疫耐受高，这是胚胎移 植的生理学基础，D错误。] 易错警示胚胎移植成功的生理基础：①同种动物的供、受体 的生殖器宫的生理变化是相同的，为供体胚胎移入受体提供相 同的生理环境：②早期胚胎在一定时间内处于游离状态，为胚 胎的收集提供了可能：③受体对移入子宫的外来胚胎基本上不 发生免疫排斥反应，为胚胎在受体内的存活提供了可能：④供 体胚胎可与受体子宫建立正常的生理和组织联系，但供体胚胎 的遗传特性在孕育过程中不受影响。 【命题点】动物体细胞核移植、胚胎工程 C[动物体细胞核移植的基本过程是将体细胞核移植到去核 的MⅡ期卵母细胞中，形成重构胚（关靛，点：M期卵母细胞是 核移植的常用受体，其细胞质环境有利于核全能性体现)，A正 确；移植前胚胎发育率低，可能是体细胞核在去核卵母细胞中 无法恢复到分化前的功能状态，从而影响胚胎的正常发育，B 正确胚胎移植后成活率低可能与孵化失败有关，但孵化是指 透明带破裂，豚胎从其中伸展出来的过程，滋养层是沿透明带 内壁扩展和排列的细胞结构，C错误；与体细胞相比，胚胎细胞 分化程度低，因此胚胎细胞核移植的成功率通常高于体细胞核 移植的，D正确。] 【命题点】细胞工程 B[从动物体内取出组织，用胰蛋白酶等处理一段时间，将组 织分散成单个细胞。然后，用培养液将细胞制成细胞悬液，再 将细胞悬液放入培养瓶或培养皿内的初次培养，称为原代培养 （易错点：分瓶前的培养是原代培养，分瓶后的培养是传代培 养)，A错误。科学家已尝试采用多种方法来制备PS细胞，包 括借助载体将特定基因导入细胞中，直接将特定蛋白导入细胞 中或者用小分子化合物等来诱导形成PS细胞，PS细胞最初 是由成纤锥细胞转化而来的，后来发现已分化的T细胞、B细 胞等也能被诱导为PS细胞，B正确。将B淋巴细胞与骨髓瘤 细胞混合，经诱导融合后的细胞有未融合的亲本细胞、融合的 具有同种核的细胞和杂交瘤细胞，需要用特定的选择培养基进！ 行筛选，才能获得杂交瘤细胞，再经克隆化培养和抗体检测，才！ 能得到能分泌所需抗体的细胞，C错误。囊胚期的细胞已经发 生分化，D错误。] 4.【命题点】胚胎工程 C[胚胎移植过程中为获取足够的卵子，对优良供体母斋注射： 促性腺激素，可使其超数排卵，A正确：为确保早期胚胎移植后 处于相同的生理状态下，需要对供体和受体进行同期发情处！ 理，B正确：受精卵发育至桑葚胚阶段，细胞数量增加，但胚胎 总体积并不增加，C错误；对照实验中无关变量均应相同且适 宜，故对照组绵羊的选择应考虑年龄、性别等的影响，D正确。] 回归教材人教版选择性必修3P58胚胎早期发育 胚胎发育早期，细胞的数量不断增加，但胚胎总体积并不增加，！ 这种受精卵的早期分裂称为卵裂，卵裂产生的子细胞逐渐形成！ 致密的细胞团，形似桑葚，称为桑甚胚。 5.D[胚胎工程采用胚胎工程技术快速繁殖波尔山羊过程中， 应选择遺传性状优良、生产能力强的健康波尔母山羊进行超数· 排卵处理，以获得更多的卵子，A正确；胚胎移植前，可采集滋 养层细胞进行遗传学检测，这对于人工控制动物性别、动物繁 育健康后代具有重要意义，B正确：接受胚胎的个体叫受体，其！ 应具备健康的体质和正常繁殖能力，应将胚胎移植到同种的、！ 生理状态相同的雌性动物体内，因此，普通品质的健康杜泊母绵羊！ 不适合作为受体，C正确：生产中提供精子的波尔公山羊应具备优】 良性状，因此，需对提供精子的波尔公山羊筛选，D错误。] 6.A[胚胎工程与对照组相比，添加1g/mL雌激素甲的组 别，其卵裂率较高，说明低浓度的雌激素甲能够促进卵裂过程； 与对照组相比，添加10g/mL和100g/mL雌激素甲的组} 别，其卵裂率较低，说明高浓度的雌激素甲能够抑制卵裂过程， A错误。与对照组相比，添加1g/mL雌激素甲的组别，其第 一极体排出率较高，而添加104g/mL和100g/mL雌激素甲 的组别，其第一极体排出率较低，说明甲浓度过高抑制第一极 体的排出，B正确。添加1g/mL甲的组别，其卵裂数和卵裂 率都比对照组高，说明添加1g/L的甲可提高受精后胚胎发！ 育能力，C正确。卵子一般在排出2~3h后才能被精子穿入。 动物排出的卵子成熟程度不同，有的可能是初级卵母细胞，有： 的可能是次级卵母细胞，本实验中成熟率=第一极体排出个数/ 卵母细胞个数，因此，在本实验中，以第一极体的排出作为卵母 细胞成熟的判断标准，D正确。] 7.D[生物技术的安全与伦理问题我国政府主张全面禁止和 彻底销毁生物武器等各类大规模杀伤性武器，D符合题意。] 8.C[试管动物的培育过程主要包括：①精子的采集与体外获能 处理，卵子采集（注：为获得更多卵子可进行超数排卵处理）与： 成熟培养：②卵子与精子的体外受精：③胚胎的早期培养：④待 胚胎生长到一定阶段后，进行胚胎移植。综上，C符合题意。] 9,D[试管婴儿属于有性生殖，合理范围内，试管婴儿技术是可以！ 使用的，A错误；治疗性克隆要在严格监管下进行，B错误：生殖性： 克隆会引起严重的道德、伦理、社会和法律问题，C错误。] 10.C[精子获能后才能进行体外受精，A正确：受精卵经体外培， 养后可以获得早期胚胎，B正确：胚胎分割可增加胚胎的数 量，提高胚胎利用率，C错误；胚胎移植的受体需要与供体是同种！ 的且生理状态相同，因此需要对受体进行选择和处理，D正确。] 11.B「依据胚胎在不同发育阶段对培养条件的特定需要，受精卵 在体外培养时，不同发育阶段的胚胎需用不同成分的培养液，： A正确：基因编辑处理的受精卵一般经体外培养至桑葚胚或囊！ 胚阶段，进行胚胎移植，可获得表达EGFP的小鼠，B错误；分离 能表达EGFP的胚胎干细胞，通过核移植、早期胚胎培养、胚胎 移植等技术，可获得大量的转基因小鼠，C正确：由题意分析可 知，通过基因编辑技术将Y染色体用绿色荧光蛋白基因标记， 通过观察早期胚胎的荧光，能表达EGFP的个体含有Y染色： 体，即为雄性小鼠胚胎，D正确。] 12.D[由于人们对细胞所需的营养物质尚未全部研究清楚，故： 细胞培养和早期胚胎培养的培养液中通常需添加血清等物· 质，A正确：早期胚胎需移植到经同期发情处理的同种雌性动 物体内发育成个体，有利于胚胎着床，B正确；我国利用核移植技· 术成功培养出克隆猴“中中”和“华华”，C正确：将骨髓瘤细胞和B! 淋巴细胞混合，经诱导融合后的细胞不都是杂交瘤细胞，还有B! 细胞自身融合的细胞、骨髓瘤细胞自身融合的细胞等，D错误。]： 27 3.【解析】(1)精液可以冷冻保存，使用前再将精液解冻离心分 离。刚排出的精子必须在雌性生殖道内发生相应生理变化后 才能受精，故在体外受精前要对精子进行获能处理。通常采 用的体外获能方法有培养法和化学诱导法，化学诱导法是将 精子放在一定浓度的肝素或钙离子载体A23187溶液中，用化 学药物诱导精子获能。卵母细胞需要培养到减数第二次分裂 中期(MⅡ中期)才能具备与精子受精的能力 (2)进行早期胚胎培养的培养液中，除了无机盐、激素、血清 外，还含有维生素、氨基酸、核苷酸等。 (3)由题干信息“以…非繁殖期受体母羊为材料”可知，在进行 胚胎移植前，需对母羊进行发情处理，主要的操作步骤见答案。 【答案】(1)液氮冷冻保存刚排出的精子必须在雌性生殖 道内发生相应生理变化后才能受精肝素或钙离子载体 A23187MⅡ中期(2)维生素、氨基酸、核苷酸(3)第一步 对非繁殖期的受体母羊用激素处理，使其发情：第二步，将质 量好的囊胚移植到受体母羊的子宫；第三步，一段时间后，对 受体母羊进行是否妊娠的检查；第四步，一段时间后，受体母 羊生产胚胎移植的小羊 4.【解析】(1)人类活动产生的生活污水中含有大量的氨磷等 无机盐，未经处理排入河流湖泊会引起水体的富营养化，导致 藻类大量繁殖形成水华 (2)为了研究某基因在斑马鱼血管发育过程中的分子调控机 制，用DNA连接酶将该基因连接到质粒载体形成重组DNA 分子，导入到大肠杆菌菌株DH5a中。为了能够连接上该目 的基因，并有利于获得含该目的基因的DH5α阳性细胞克隆， 质粒载体应含有限制性核酸内切酶的识别序列、抗生素抗性 基因等组件。将目的基因导入动物细胞可采用显微注射法。 (3)获取大量斑马鱼胚胎细胞可采用动物细胞培养技术。用 胰蛋白酶分散斑马鱼囊胚内细胞团，进行初次细胞培养，即原 代培养。培养瓶中添加成纤维细胞作为饲养层细胞，可促进胚胎 千细胞分裂而抑制分化，有利于斑马鱼胚胎细胞克隆的形成。 【答案】(1)富营养化(2)重组DNA分子限制性核酸内 切酶的识别序列、抗生素抗性基因显微注射(3)胰蛋白酶 原代饲养层细胞 5.【解析】(1)基因工程中切割DNA的工具酶是限制性核酸内 切酶（限制酶），故在构建含有片段F的重组质粒过程中，切割 质粒DNA的工具酶是限制性核酸内切酶（限制酶）。限制性 核酸内切酶是作用于其所识别序列中两个脱氧核苷酸之间的 磷酸二酯锭。不同的限制酶可以获得不同的末端，主要分为 黏性末端和平末端。 (2)在无菌、无毒等适宜环境中进行动物A成纤雏细胞的原代 和传代培养时，需要定期更换培养液，目的是清除代谢产物， 防止细胞代谢产物积累对细胞自身造成危害。 (3)由于动物胚胎细胞分化程度低，恢复其全能性相对容易， 动物体细胞分化程度高，恢复其全能性十分困难，故与胚胎细 胞核移植技术相比，体细胞核移植技术的成功率低。胚胎干 细胞在形态上表现为细胞体积小，细胞核大，核仁明显：在功 能上具有发育的全能性，可分化为成年动物体内任何一种组 织细胞。另外，在体外培养的条件下，可以增殖而不发生分 化，可进行冷冻保存，也可进行遗传改造。 (4)先给小鼠注射特定抗原使之发生免疫反应，之后从小鼠脾 脏中获取已经免疫的B淋巴细胞：诱导B细胞和骨髓瘤细胞 融合，利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞，制备M蛋白的单 克隆抗体；若要利用此抗体确定克隆动物A中M基因是否失 活，如果M基因已经失活，则克隆动物A中无法产生M蛋 白，则可利用抗原一抗体杂交技术进行检测。提取此克隆动 物的肝脏蛋白作为抗原，与M蛋白的单克隆抗体进行抗原 抗体杂交，若未出现杂交带，证明M基因已失活。 【答案】(1)限制性核酸内切酶（限制酶）磷酸二酯键 (2)清除代谢产物，防止细胞代谢产物积累对细胞自身造成危 害(3)动物胚胎细胞分化程度低，恢复其全能性相对容易， 动物体细胞分化程度高，恢复其全能性十分困难细胞体积 小，细胞核大，核仁明显（任选两点作答）发育的全能性 (4)B提取此克隆动物的肝脏蛋白作为抗原，与M蛋白的单 克隆抗体进行抗原一抗体杂交，若未出现杂交带，证明M基 因已失活。