专题十七 微生物的培养与应用-【创新大课堂】2026年高考生物五年真题分类汇编168优化重组卷

8.【解析】(1)大豆中含有丰富的蛋白质，可为微生物的生长繁殖提： 供氮源。小麦中的淀粉可以为微生物的生长繁殖提供碳源。 (2)米曲霉在发酵过程中产生的蛋白酶能将蛋白质分解为小分· 子的肽和氨基酸，产生的脂肪酶能将脂肪分解为甘油和脂肪· 酸，使发酵的产物具有独特的风味。米曲舞发酵时需要利用现 有的有机物和需要氧气，说明其代谢类型是异养好氧型。 (3)乳酸菌没有核膜包被的细胞核，属于原核生物。酵母菌属· 于兼性厌氧型微生物，既可以进行有氧呼吸，也可以进行无氧 呼吸，无氧呼吸的产物是酒精和二氧化碳。在发酵池中酵母菌 产生的酒精能抑制杂菌的生长，乳酸菌产生的乳酸使发酵液呈 酸性也能抑制杂菌的生长，同时往发酵池中添加的食盐也能抑： 制杂菌的生长。 【答案】(1)蛋白质碳源(2)蛋白酶脂肪酶氨基酸 异养好氧(3)原核生物酒精和二氧化碳酒精、乳酸、食盐！ (答一个即可) 专题十七微生物的培养与应用 考向一 1.【命题点】微生物的实验室培养 D「在以金舞素为唯一碳源的培养基中，只有能降解金舞素的！ 微生物能生存，因此以金雾素为唯一碳源可制备选择培养基， A正确：在逐步提高金露素浓度的培养基中能生存的菌株具有！ 对金霉素的高耐受性，B正确：配制选择培养基时，要确保培养！ 基的pH等条件适宜，C正确；应用涂布器将菌液均匀地涂布在！ 培养基表面，D错误。] 2,B「植物细胞工程过程①中酶处理的时间不同，可能是由两· 种亲本的细胞壁结构有差异造成的，A正确：诱导原生质体融！ 合的方法有高C2+一高pH融合法、聚乙二醇(PEG)融合法、 电融合法等，诱导动物细胞融合的方法主要是灭活病毒诱导· 法，B错误：添加不同浓度和比例的生长素和细胞分裂素能诱： 导愈伤组织的形成和分化，C正确：可对植物丙的染色体进行： 分析，来鉴定其是否为杂种植株，D正确。] 3.B「植物组织培养迷迭香顶端幼嫩的茎段，细胞分裂旺盛，！ 且病毒较少，适合用作外植体，A正确。植物激素中生长素和 细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键激素，它： 们的浓度、比例等都会影响植物细胞的发育方向，NAA(α一茶： 乙酸)是生长素类调节剂，诱导愈伤组织时可以加入NAA,但1 不能加入脱落酸，B错误。悬浮培养时需将愈伤组织打散成单 个细胞或较小的细胞团，以提高其与营养物质的接触面积，从！ 而提高迷选香酸的产量，C正确。由题意可知，加入诱导剂茉 莉酸甲酯可大幅提高迷迭香酸的产量，据此推测，茉莉酸甲酯： 改变了迷迭香次生代谢产物的合成速率，D正确。] 4.B[从图中可以看出甲菌在试管中分布范围小于乙菌，说明乙 菌的运动能力比甲菌强，A正确：为不影响菌的运动需选用半 固体培养基，B错误：该实验可以根据黑色沉淀的多少初步比， 较细菌产生硫化氢的能力，但不能测定产生硫化氢的量，C正 确：微生物接种技术的核心是防止杂菌的污染，D正确。] 5.C[为避免杂菌污染干扰，需对配制的培养基进行高压蒸汽灭} 菌，A正确：葡萄球菌需从人体皮肤的微生物中分离，为避免杂： 菌污染，需要使用无菌棉拭子从皮肤表面取样，B正确：棉拭子 上的微生物需要用平板划线法在培养基上进行接种，C错误；！ 根据微生物在固体平板培养基表面形成的菌落的形状、大小、！ 隆起程度和颜色等特征送行鉴别，D正确。] 6.【解析】(1)通常在实验室培养微生物时，为防止实验用的玻 璃器皿等物品中原有的微生物污染培养物，需要使用强烈的理！ 化因素杀死物体内外一切微生物的细胞、芽孢和孢子，即对所 需的玻璃器皿进行灭菌，玻璃器皿常用的灭菌的方法有干热灭 菌、高压蒸汽灭菌等。 (2)由实验结果可知，与以制糖废液为碳源相比，以葡萄糖为碳： 源时菌株C的细胞干重最大，说明最适于菌株C生长的碳源是} 葡萄糖：而以制糖废液为碳源时，用菌株C生产S的产量高于！ 以葡萄糖为碳源时的产量，说明最适于生产S的碳源是制糖废 液。微生物的生长一般都需要水、碳源、氨源和无机盐，还需要 满足微生物生长对H、氧气以及特殊营养物质的要求，故菌株！ C的生长除需要碳源外，还需要氮源、无机盐、水等营养物质。 26 (3)分析题图表格可以看出在以淀粉为碳源的培养基中，菌株C 不能生长，原因可能是菌株C中缺少分解淀粉的酶，不能利用 淀粉。 (4)要测定生产S的最适制糖废液为碳源的浓度，实验自变量 为制糖废液的浓度，可设计一系列浓度梯度的以制糖废液为唯 一碳源的培养基，分别接种等量的菌株C,在相同且适宜的条 件下培养相同时间，测定各培养基中的S产量，S产量最高的 培养基对应的制糖废液浓度为生产S的最适碳源浓度。 (5)利用制糖废液生产S可以实现废物利用，既有利于减少污 染、节省原料，又能降低生产成本。 【答案】(1)高压蒸汽灭菌、干热灭菌（湿热灭菌）(2)葡萄糖 制糖废液氮源、无机盐、水(3)缺少淀粉酶(4)设计一 系列浓度梯度的以制糖废液为唯一碳源的培养基分别接种等 量的菌株C,在相同且适宜的条件下培养相同时间，测定各培 养基中的S产量，S产量最高的培养基对应的制糖废液浓度为 生产S的最适碳源浓度。(5)既有利于减少污染、节省原料 又能降低生产成本 考向二 1.【命题点】微生物的培养和计数 D[平板划线法可以分离微生物，获得单菌落，但不能进行计 数，A错误；制备培养基的过程中，应先进行高压蒸汽灭菌，再 在酒精灯旁倒平板，B错误；分析表格数据，比较②④组，两组 均以纤雏素为唯一碳源，②组常压条件下无菌落产生，④组高 压条件下有菌落产生，说明在以纤雏素为唯一碳源的培养基 上，该菌可在高压下生长，C错误：比较③④组，高压条件下，该 菌在以淀粉为唯一碳源的培养基上不生长，而在以纤雏素为唯 一碳源的培养基上生长，D正确。] 2.【命题点】微生物的培养 ACD[腐烂的叶片含有丰富的有机碳，而隐甲藻是异养型的 微藻，多在海水中腐烂的植物叶片上生长繁殖，据此可知隐甲 藻可从腐烂的叶片获得生长必需的碳源，A正确；海水中腐烂 的叶片上有隐甲藻，经湿热灭菌后会将隐甲藻杀死，故不能进 行湿热灭菌处理（常考点：湿热灭菌指利用沸水、流通蒸汽或高 压蒸汽进行灭菌的方法。培养基常用高压蒸汽灭菌法进行灭 菌)，B错误；抗生素可抑制细菌的增殖，对隐甲藻不起作用， 因此选择培养基中可加入抗生素，以减少杂菌生长，C正确： 由于隐甲藻是好氧的真核微藻，故适当提高发酵时的通气量 和搅拌速率可增加溶氧量，促进隐甲藻的增殖和代谢，从而提 高DHA产量（常考点：提高通气量和搅拌速率，可提高培养 液的溶氧量，促进好氧生物的细胞呼吸，有利于其生长繁殖)， D正确。] ,【命题点】微生物的分离和纯化 B[紫外线照射只能起到消毒作用，不能起到灭菌效果（常考 点：常见灭菌方法有湿热灭菌、干热灭菌、灼烧灭菌等)，制备的 培养基通常采用高压蒸汽灭菌（湿热灭菌），A错误：从土壤中 分离致病菌，应将土样加入无菌水混匀，梯度稀释后取悬液接 种于平板上，稀释涂布平板法是分离菌种的常用方法，B正确； 平板划线时，每次划线应从上一次划线的末端开始，而不是从 上一次划线的起始端开始，C错误：将目的菌接种到斜面培养 基上，并在4℃左右的环境下保存，而非常温下保存，D错误。] 回归教材人教版选择性必修3P11常用的消毒和灭菌方法 项目 常用方法 应用范围举例 煮沸消毒 日常用品 巴氏消毒 不耐高温的液体，如牛奶 消毒 用酒精擦拭双手： 化学药物消毒 用氯气消毒水源 紫外线消毒 接种室、接种箱、超净工作台 高压蒸汽灭菌 培养基 灭菌 干热灭菌 玻璃器血、金属工具 灼烧灭菌 接种工具 2 4.A[微生物培养根据题意可知，rpX能合成酶Y和酶Z,不： 能合成酶X:trpY能合成酶X和酶Z,不能合成酶Y:trpZ能合1 成酶X和酶Y,不能合成酶Z。已知3种酶均不能进出细胞，而 色氨酸合成途径的中间产物积累到一定程度时可分泌到胞外。· 分析题图可知，①rpX在靠近trpY区域一侧、trpZ区域一侧 均能生长，说明rpX可以利用trpY、trpZ色氨酸合成途径中： 分泌到胞外的中间产物合成色氨酸：②rpY在靠近1rpZ区域！ 一侧可以生长，说明trpY可以利用trpZ色氨酸合成途径中分 泌到胞外的中间产物合成色氨酸；③rpZ不能生长。由①②分： 析可知，rpX,trpY均可合成色氨酸合成途径所需的最后一种 酶，又因为trpX能合成酶Y和酶Z,rpY能合成酶X和酶Z, 故trpX、trpY均可合成的酶为酶Z;由①分析可知，trpY、trpZ 均能合成色氨酸合成途径的中间产物，故trpY、trpZ均可合成1 色氨酸合成途径所需的第一种酶，又因为trpY能合成酶X和 酶Z,trpZ能合成酶X和酶Y,故trpY、trpZ均可合成的酶为！ 酶X。综上，酶X为色氨酸合成途径所需的第一种酶，酶Z为！ 色氨酸合成途径所需的最后一种酶，则酶Y为色氨酸合成途径！ 所需的第二种酶，即3种酶在该合成途径中的作用顺序为X→ Y→Z,A符合题意。] 5.BCD「微生物培养与分离根据题千信息“某些香蕉植株组， 织中存在的内生菌可防治香蕉枯萎病”知，若要筛选出该内生！ 菌，应该从未感染香蕉枯萎病的植林上采样，A错误。要筛选！ 内生菌，同时防止样品表面杂菌对实验结果的影响，需要对样 品进行消毒，用蒸馏水冲洗样品表面，收集冲洗液，对冲洗液进！ 行无菌检测，B正确。稀释涂布平板法可用于分离微生物。将无： 菌检测合格的样品研磨，经稀释涂布平板法分离能获得内生菌的· 单菌落，C正确。要想判断内生菌对病原菌的抗性效果，需要比较！ 有无接种内生菌的平板上的病原菌菌斑大小，D正确。] 6,D[该实验的目的是筛选能高效降解羽毛、蹄角等废弃物中角！ 蛋白的嗜热菌，应该用以角蛋白为唯一氯源的培养基进行筛选 培养，且应该在高温条件下取样，即c,点时取样，D符合题意。] 由图可知，随着堆肥时间的延长，堆肥温度先升高后保 持稳定，点时堆把温度最低，c点时堆肥温度最高。 01o0r 8 60 4 206 00123456 堆肥时间（天） 7.C[可用血细胞计数板对原生质体进行计数，一般计数总数不 少于300个细胞，A正确：活细胞的细胞膜具有选择透过性，红 墨水中的色素分子不能透过细胞膜，当细胞死亡后，细胞膜失！ 去选择透过性，红墨水中的色素分子能进入细胞，所以可用红： 墨水检测细胞的存活状态并计数，B正确：划线分离法不能用！ 于细胞计数，C错误：酵母菌细胞的密度与浑浊度指标存在一 定的数量关系，所以酵母菌在液体培养基中培养一段时间后， 可用比浊计测定其密度，D正确。] 8.B[根据题干信息“甲菌菌落周围呈现深蓝色”，说明甲菌可以！ 分泌脂肪酶将脂肪分解成甘油和脂肪酸，脂肪酸会使醇溶青琼！ 脂平板变为深蓝色，因此甲菌属于解脂菌，A正确：乙菌落周围！ 没有出现深蓝色，说明乙菌落不能产生脂肪酶，不能利用脂肪 为其供能，但乙菌也可以在培养基上生存并繁殖形成菌落，说· 明该培养基不是以脂肪为唯一碳源，B错误；可将两种菌分别！ 接种在同一平板的不同区域进行对比，更加直规，C正确：由于 解脂菌能利用分泌的脂肪酶将脂肪分解成甘油和脂肪酸，而脂 肪酸能使醇溶青琼脂平板变为深蓝色。因此可根据平板中菌 落周围深蓝色的面积大小比较解脂菌分泌脂肪酶的能力，可以： 以菌落周围深蓝色图的大小为观察指标，D正确。] 9,AB[制备灭菌培养基的方法为将装入锥形瓶中的培养基和！ 空的培养皿分别送行灭菌，待培养基冷却至50℃左右时，将锥！ 形瓶中的培养基分装到灭菌后的培养皿中，A不合理：在统计！ 菌落总数时，应选择菌落数为30一300的平板进行计数，涂布平 板时所用的菌液体积为0.1L,所以涂布用的菌液浓度应该· 控制在300~3000个/mL,B不合理：预实验可以为正式实验 摸索条件，确定最佳诱变时间范围，C合理：实验中，可挑取培！ 养基上长出的较大单菌落，进一步纯化后进行降解效果的分 析，D合理。] 263 0.【解析】基因突变(1)基因突变是指DNA分子中发生碱基 的替换、增添或缺失，而引起的基因碱基序列的改变。紫外线 属于诱发基因突变的物理因素，亚硝酸属于诱发基因突变的 化学因素，两者均通过改变DNA分子的碱基序列诱发基因突 变。(2)基因突变除了具有低频性外，还具有随机性、不定向 性等特点。由于基因突变的随机性，突变了的菌株不一定是 抗生素M合成相关基因突变的菌株：由于基因突变的不定向 性，抗生素M合成相关基因突变了的菌株不一定能产生更多 的抗生素M,也可能是产生更少抗生素M的菌株。(3)据图 分析可知，随着培养基中粗提液浓度的升高，野生型孢子萌发 率逐渐降低，推测粗提液对野生型孢子萌发有抑制作用。 (4)①由图可知，与粗提液浓度为8mL/100mL(Ⅲ组)相比， 粗提液浓度为10mL/100mL(V组)对野生型孢子萌发的抑 制作用较强，Ⅳ组野生型孢子几乎不能萌发，所以在该浓度条 件下，野生型孢子萌发受抑制，导致V组M十株占比明显高于 Ⅲ组。②据图分析可知，Ⅲ组中粗提液浓度相对较低，平板上 可能有野生型菌落：V组中粗提液浓度较高，野生型孢子不能 萌发，没有野生型菌落，故A正确。基因突变具有不定向性和 随机性等特点，所以V组和Ⅲ组中均可能有M产量未提高的 突变体菌落，B错误。V组中粗提液浓度比Ⅲ组高，与Ⅲ组相 比，若诱变处理后的孢子悬液中更多的突变体（包括M十突变 体和非M+突变体)在V组中被抑制，则Ⅲ组和V组中M+株 占比不会接近，C错误。与Ⅲ组相比，若诱变处理后的孢子悬 液中更多的M株在V组中被抑制，可能会导致Ⅲ组和V组 中M十株占比接近，且在筛选平板上形成的菌落有差异，D 正确。 【答案】(1)碱基序列(2)随机性和不定向(3)抑制 (4)①与Ⅲ组相比，V组粗提液对野生型孢子萌发的抑制作用 更强②AD10mL/100mL 1.微生物的培养和计数 【解析】(1)用菌落计数法计数时，当两个或多个细胞连在一 起时，平板上观察到的只是一个菌落，故活菌统计值比实际值 小：用显微镜直接计数法计数时，不能区分死菌和活菌，故测 定的细菌数量往往大于实际的活菌数，因此使用显微镜直接 计数法计数的结采比菌落计数法计数的结果大。(2)100个菌 落代表100个活菌，其来自200L(0.2mL)稀释液，推出 1mL稀释液中大约有500个活菌，稀释液由细菌原液稀释 10倍获得，进而推出细菌原液中细菌浓度为5×103个/mL。 (3)将涂布器放在火焰上灼烧的目的是灭菌，以防止杂菌污 染：涂布器冷却后再进行涂布的目的是以免高温杀死菌种。 (4)由曲线图可以直接看出，用消毒液A处理后活细菌减少量 最大且活细菌减少得最快，说明消毒液A杀菌效果最好。 (5)在伊红美蓝培养基上培养大肠杆菌，大肠杆菌菌落呈 黑色。 【答案】(1)用菌落计数法计数时，只有活菌被统计，且两个 或多个细胞可能连在一起形成一个菌落；用显微镜直接计数 法计数时，不能区分死菌和活菌，统计的结果一般是活菌数和 死菌数的总和(2)5×103(3)灭菌，以防止杂菌污染避 免杀死菌种(4)A活细菌减少量最大且减少得最快 (5)黑 2.【解析】(1)培养基的成分有碳源、氨源、无机盐和水等，从组 成培养基的物质所含化学元素可知，作为碳源的成分是石油。 生物大分子DNA、RNA、登白质都含有N元素，故氯源在菌体 内可以参与合成这些物质。 (2)由题意“资源和空间不受限制”可知，细菌的增殖呈J形曲 线增长，由于DNA的半保留复制，细菌每繁殖一代就是上一 代的2倍，根据公式N,=N0·入，入=2，繁殖n代后细菌的数 量是N。·2”。 (3)分析表格数据可知，实验的结果是：在平板I上，A菌株降 解石油的能力高于B菌株；在平板Ⅱ上，A菌株仍然能降解石 油，而B菌株不能降解，根据实验的单一变量和对照原则，推 测该同学的思路是：分别向培养基I、Ⅱ的甲、乙两孔内注入 等量且适量同浓度的A、B菌液，一段时间后观察菌液周围培 养基透明图的大小。 (4)由表格数据可知，在平板Ⅱ（无氮源的培养基）上，A菌株 仍然能降解石油，而B菌株不能降解，所以要治理贫氯且被石！ 油污染的土壤，应该选用A菌株，因为A菌株在缺少氯源的 培养基Ⅱ上也能生长良好并降解石油，但B菌株在平板Ⅱ上· 无透明圈形成，不能降解石油。 【答案】(1)石油DNA、RNA、蛋白质(2)N。·2m(3)分 别向培养基工、Ⅱ的甲、乙两孔内注人等量且适量同浓度的 A、B菌液，一段时间后观察菌液周围培养基透明圈的大小。 (4)AA菌株在缺少氮源的培养基Ⅱ上也能生长良好并降解 石油，但B菌株在平板Ⅱ上无透明圈形成，不能降解石油 13.【解析】(1)培养基通常采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌。可 以采用稀释涂布平板法或平板划线法，将单个微生物分散在 固体培养基上，经过培养得到单菌落，从而获得纯净培养物。！ 分析图可知，在以纤维素为碳源的培养基中，细胞数量最多，！ 可推知拟杆菌新菌株在以纤雏素为碳源时生长状况最好。 (2)培养基的营养成分不能满足部分微生物的营养需求；培养！ 条件不利于微生物繁殖：与其他微生物之间存在互利共生关 系，故将采集的样品置于各种培养基中培养，仍可能有很多微！ 生物不能被分离筛选出来。 (3)拟杆菌为异养生物，作为该生态系统的分解者，能将动植！ 物遗体残骸中的有机物分解为无机物，归还到无机环境中，有 利于碳循环的顺利进行。 (4)深海冷泉温度较低，故生活在其中的拟杆菌所分泌的各种， 多糖降解酶，应具有耐低温的特性，才能高效降解多糖，保证 拟杆菌的正常生命活动所需。 【答案】(1)高压蒸汽灭菌平板划线纤维素(2)培养基} 的营养成分不能满足部分微生物的营养需求；培养条件不利： 于微生物繁殖：与其他微生物之间存在互利共生关系(3)能 将动植物遗体残骸中的有机物分解成无机物(4)耐低温 专题十八 基因工程与蛋白质工程 考向一 1.【命题点】限制酶 题图解读 HindⅢ HindⅢ HindⅢ A基供盈瓷p AAGCTT AAGCTT序 …40bp“TTCG 片段1 片段2 Hind Ill HindⅢ a基因C·2mpCC0p器 AAGCTG AAGCTTB' 片段1 由上图可知，产前诊断时，可用ndⅢ开最酶切鉴定，D正确。 a基因2mpC…mp图 片段1 片段2 用两种限制酶分别酶切台基因后，产生的片段大小不一致，！ C错误。 BD[分析题图可知，基因A突变为致病基因a是T一A被！ G一C替换造成的，A错误：用限制酶Hi1dⅢ酶切A基因后会 形成黏性末端，用限制酶AluI酶切A基因后，形成的是平末！ 端（常考点：限制酶在它识别序列的中心轴线两侧切开DNA分 子，产生的是黏性末端：限制酶在它识别序列的中心轴线处切！ 开DNA分子，产生的是平末端)，B正确。] 2.【命题点】酶的本质与作用 B[耐高温的DNA聚合酶的化学本质是蛋白质，基本单位是！ 氨基酸，A错误；酶既可以在细胞内发挥作用，也可以在细胞外 发挥作用，B正确；DNA复制时需要模板、能量、原料和酶，而！ 酶发挥作用需要适宜的温度和H,因此只有模板DNA和脱氧！ 核苷酸存在时并不一定能催化反应，C错误：高温会破坏酶的· 空间结构使酶失活，低温条件下酶的活性受到抑制，但空间结 构稳定，因此酶适宜在低温条件下保存，D错误。] 易错警示过酸、过碱、高温等都会破坏酶的空间结构，使酶永！ 久失活，而低温时酶活性很低，但酶的空间结构稳定，在适宜的} 温度下酶活性会升高。 3.B[生物实验配制PCR反应体系时，应加入4种脱氧核糖！ 核苷酸溶液作为扩增原料，A错误：凝胶中的DNA分子通过染！ 26 色，可以在波长为300nm的紫外灯下被检测出来，故B正确 配制的酵母培养基先进行高压蒸汽灭菌处理，然后再倒平板，C 错误；烧红的接种环需在酒精灯火焰旁冷却后才能蘸取菌液， 否则会杀死菌种，D错误。] L.D[PCR分析反应管①~④中分别加入的适量单链DNA可 知，①中两条单链DNA分子之间具有互补的序列(10个连续 碱基对)，但双链DNA区之外的3'端无模板，因此无法进行 DNA合成，不能得到带有荧光标记的DNA探针；②中单链 DNA分子内具有互补的序列，由于在本实验的温度条件下不 能产生小于9个连续碱基对的双链DNA区，故该条单链DNA 分子不发生自身环化，但两条链可以形成双链DNA区，由于 DNA合成的序列(5'一TCT一3')中不含碱基A,不能得到带有 荧光标记的DNA探针：③中两条单链DNA分子之间具有互补 的序列(10个连续碱基对)，且双链DNA区之外的5'端有凸出 的碱基（含碱基T),因此进行DNA合成能得到带有荧光标记 的DNA探针：④中单链DNA分子内具有自身互补的序列，结 合题中信息知该条单链DNA分子不发生自身环化，两条链可 以形成双链DNA区，且双链DNA区之外的5'端有凸出的碱基 (含碱基T),因此进行DNA合成能得到带有荧光标记的DNA 探针。综上，能得到带有荧光标记的DNA探针的反应管有 ③④，故答案选D。] 5.A[DNA的粗提取和鉴定实验研磨后，可以将研磨液过滤 到烧杯中，在4℃冰箱中放置儿分钟后，再取上清液，可以不使 用离心机，A正确，B错误。鉴定过程中的沸水浴加热可使 DNA双螺旋结构发生改变，C错误。该实验中，为排除二苯胺 加热后可能变蓝对实验结果造成干扰，可设置加二苯胺不加 DNA的对照组，D错误。] 5.A[琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR产物应根据待分离DNA片 段的大小，用电泳缓冲液配制琼脂糖溶液，一般配制质量体积 比为0.8%一1.2%的琼脂糖溶液，A正确：凝胶载样缓冲液中 指示剂的作用是指示电泳的进度，而不是指示DNA分子的具 体位置，B错误：在凝胶中DNA分子的迁移速率与凝胶的浓 度、DNA分子的大小和构象等有关，在同一电场作用下，DNA 片段（带负电）越长，DNA向正极迁移的速率越慢，C错误：凝 胶中的DNA分子通过染色，可以在波长为300nm的紫外灯下 被检测出来，D错误。] 7.C[只用一种限制酶切割质粒和目的基因，会使质粒和目的基 因发生自身环化或者使目的基因在质粒中反向连接，A错误； 用酶1切割目的基因，产生的是黏性末端，用酶3切割质粒，产 生的是平末端，无法连接，B错误；质粒和目的基因都用酶1和 酶2切割后，可使用T4DNA连接酶连接，使目的基因定向插 到质粒中，C正确：酶2和酶4切割后产生的黏性末端相同，易 导致目的基因和质粒自身环化或者使目的基因在质粒中反向 连接，并且用酶4切割会破坏标记基因，D错误。] 8.D[DNA粗提取与鉴定实验的基本过程是：裂解，分离、沉淀， 鉴定。裂解的目的是使细胞破裂，释放出DNA等物质，A正 确。DNA不溶于酒精，但某些蛋白质溶于酒精，利用这一原 理，可以初步分离DNA与蛋白质等，DNA分离过程中混合物 中的多糖、蛋白质等可被去除，B正确。DNA在不同浓度的 NaCl溶液中溶解度不同，通过控制NaCI溶液的浓度去除杂 质，可反复多次以提高DNA的纯度，C正确。进行DNA鉴定 时可以使用二苯胺试剂，但要进行沸水浴加热后才能观察到颜 色变化，D错误。门 D[若用HidⅢ酶切质粒和含有目的基因的DNA片段，用 DNA连接酶将两者连接成重组质粒，目的基因和质粒有正向 连接和反向连接两种连接形式，因此，目的基因转录的产物可 能不同，A正确；若用PI酶切，会破坏氨苄青露素抗性基 因，在含Tt(四环素)培养基中的菌落可能是含有目的基因的 重组质粒，也可能是质粒自身连接的普通质粒，因此，在含Tet (四环素)培养基中的菌落，不一定含有目的基因，B正确：若用 ShI酶切，由于重组质粒和普通质粒的碱基对数不同，因此 可通过DNA凝胶电泳技术鉴定重组质粒构建成功与否，C正 确：若用SphI酶切，会破坏四环素抗性基因，氨苄青霉素抗性 基因不受影响，因此携带目的基因的受体菌在含Ap(氨苄青专题十七1 微生 考向一微生物的培养 1.(2025·黑吉辽蒙卷)科研人员通过稀释涂布平 板法筛选出高耐受且降解金霉素(C22H23ClN2Os) 能力强的菌株，旨在解决金霉素过量使用所导 致的环境污染问题。下列叙述错误的是( ) A.以金霉素为唯一碳源可制备选择培养基 B.逐步提高培养基中金霉素的浓度有助于获得 T 高耐受的菌株 C.配制选择培养基时，需确保pH满足实验 要求 D.用接种环将菌液均匀地涂布在培养基表面 ® 2.(2024·湖北卷)植物甲抗旱、抗病性强，植物乙 分蘖能力强、结实性好。科研人员通过植物体 细胞杂交技术培育出兼有甲、乙优良性状的植 r 物丙，过程如下图所示。下列叙述错误的是 ( 酶解(1.5小时)甲的 植物甲 叶片 国 原生 质体 ①混合酶液处理 ② 植物乙 乙的 叶片 居 原生 酶解(2小时) 质体 量 融合 ⑤ ④ 植物丙 愈伤 杂种③的原 组织 细胞 生质 体 A.过程①中酶处理的时间差异，原因可能是两 种亲本的细胞壁结构有差异 和 B.过程②中常采用灭活的仙台病毒或PEG诱 导原生质体融合 赵 C.过程④和⑤的培养基中均需要添加生长素和 细胞分裂素 D.可通过分析植物丙的染色体，来鉴定其是否 为杂种植株 舞 3.(2024·吉林卷)迷迭香酸具有多种药理活性。 进行工厂化生产时，先诱导外植体形成愈伤组 织，再进行细胞悬浮培养获得迷迭香酸，加入诱 导剂茉莉酸甲酯可大幅提高产量。下列叙述错 尔 误的是 A.迷迭香顶端幼嫩的茎段适合用作外植体 母 B.诱导愈伤组织时需加入NAA和脱落酸 C.悬浮培养时需将愈伤组织打散成单个细胞或 较小的细胞团 D.茉莉酸甲酯改变了迷迭香次生代谢产物的 合成速率 物的培养与应用 4.(2021·山东)含硫蛋 白质在某些微生物 作用下产生硫化氢导 穿刺路径 致生活污水发臭，硫 化氢可以与硫酸亚铁 铵结合形成黑色沉 甲 淀。为探究发臭水体中甲、乙菌是否产生硫化 氢及两种菌的运动能力，用穿刺接种的方法分 别将两种菌接种在含有硫酸亚铁铵的培养基上 进行培养，如图所示。若两种菌繁殖速度相等， 下列说法错误的是 A.乙菌的运动能力比甲菌强 B.为不影响菌的运动需选用液体培养基 C.该实验不能比较出两种菌产生硫化氢的量 D.穿刺接种等接种技术的核心是防止杂菌的污染 5.(2021·北京)人体皮肤表面存在着多种微生 物，某同学拟从中分离出葡萄球菌。下述操作 不正确的是 A.对配制的培养基进行高压蒸汽灭菌 B.使用无菌棉拭子从皮肤表面取样 C.用取样后的棉拭子在固体培养基上涂布 D.观察菌落的形态和颜色等进行初步判断 6.(2022·全国乙卷)化合物S被广泛应用于医 药、食品和化工工业。用菌株C可生产S,S的 产量与菌株C培养所利用的碳源关系密切。为 此，某小组通过实验比较不同碳源对菌体生长 和S产量的影响，结果见下表。 碳源 细胞干重(g/L) S产量(g/L) 葡萄糖 3.12 0.15 淀粉 0.01 0.00 制糖废液 2.30 0.18 回答下列问题。 (1)通常在实验室培养微生物时，需要对所需的 玻璃器皿进行灭菌，灭菌的方法有 (答出2点即可)。 (2)由实验结果可知，菌株C生长的最适碳源是 ;用菌株C生产S的最适碳源是 菌株C的生长除需要碳源外，还需要 (答出2点即可)等营养物质。 (3)由实验结果可知，碳源为淀粉时菌株C不能 生长，其原因是 (4)若以制糖废液作为碳源，为进一步确定生产 S的最适碳源浓度，某同学进行了相关实验 请简要写出实验思路： (5)利用制糖废液生产S可以实现废物利用，其 意义是 (答出1点即可)。 考向二微生物的分离与计数 1.(2025·山东卷)深海淤泥中含有某种能降解纤 维素的细菌。探究不同压强下，该细菌在以纤维 素或淀粉为唯一碳源的培养基上的生长情况。 其他条件相同且适宜，实验处理及结果如表所 示。下列说法正确的是 ) 组别 压强 纤维素 淀粉 菌落 ① 常压 ② 常压 ③ 高压 ④ 高压 注：“十”表示有：“一”表示无 A.可用平板划线法对该菌计数 B.制备培养基的过程中，应先倒平板再进行高 压蒸汽灭菌 C.由②④组可知，在以纤维素为唯一碳源的培 养基上，该菌可在常压下生长 D.由③④组可知，高压下该菌不能在以淀粉为 唯一碳源的培养基上生长 2.(2025·河北卷)隐甲藻是一种好氧的异养真核 微藻，多在海水中腐烂的植物叶片上生长繁殖，是 工业生产DHA(一种功能性脂肪酸)的藻类之一。 从海洋中筛选获得的高产油脂隐甲藻，可用于 DHA的发酵生产。下列叙述正确的是 () A.隐甲藻可从腐烂的叶片获得生长必需的 碳源 B.采集海水中腐烂的叶片，湿热灭菌后接种到 固体培养基，以获得隐甲藻 C.选择培养基中可加入抑制细菌生长的抗生 素，以减少杂菌生长 D.适当提高发酵时的通气量和搅拌速率均可 增加溶氧量，以提高DHA产量 3.(2025·江苏卷)从种植草莓的土壤中分离致病 菌，简易流程如下：制备土壤悬液、分离、纯化、 鉴定。下列相关叙述正确的是 A.制备的培养基可用紫外线照射进行灭菌 B.将土样加入无菌水混匀，梯度稀释后取悬液 加入平板并涂布 C.连续划线时，接上次划线的起始端开始划线 D.鉴定后的致病菌，可接种在斜面培养基上， 并在室温下长期保存 4.(2024·山东卷)酵母菌在合成色 氨酸时需要3种酶X、Y和Z, trpX、trpY和trpZ分别为相应酶 的编码基因突变的色氨酸依赖型 trpZ 15 突变体。已知3种酶均不能进出细胞，而色氨酸 合成途径的中间产物积累到一定程度时可分泌 到胞外。将这3种突变体均匀划线接种到含有 少量色氨酸的培养基上，生长情祝如图。据图分 析，3种酶在该合成途径中的作用顺序为( A.X→Y→Z B.Z→Y→X C.Y→X→Z D.Z→X→Y 5.(2024·吉林卷)某些香蕉植株组织中存在的内 生菌可防治香蕉枯萎病，其筛选流程及抗性检 测如图。下列操作正确的是 内生菌 菌液划线 样品采集样品消毒无菌检测→样品研磨 病原菌 抗性检测获得纯培养物稀释涂布 菌班 抗性检测 A.在大量感染香蕉枯萎病的香蕉种植园内，从 感病植株上采集样品 B.将采集的样品充分消毒后，用蒸馏水冲洗，收 集冲洗液进行无菌检测 C.将无菌检测合格的样品研磨，经稀释涂布平 板法分离得到内生菌的单菌落 D.判断内生菌的抗性效果需比较有无接种内 生菌的平板上的病原菌菌斑大小 6.(2023·广东卷)研究者拟从堆肥中取样并筛选 能高效降解羽毛、蹄角等废弃物中角蛋白的嗜 热菌。根据堆肥温度变化曲线（如图）和选择培 养基筛选原理来判断，下列最可能筛选到目标 菌的条件组合是 100 80 60 40 b 20a 0 01 23456 堆肥时间（天） A.a点时取样、尿素氮源培养基 B.b点时取样、角蛋白氮源培养基 C.b点时取样、蛋白胨氮源培养基 D.c点时取样、角蛋白氮源培养基 7.(2021·浙江6月选考)下列关于原生质体和细 胞计数的叙述，错误的是 ( A.测定植物原生质体的密度时，可用血细胞计 数板 B.红墨水不能进入活细胞，可用于检测细胞的 存活状态并计数 C.涂布分离法和划线分离法均能得到单菌落， 都可用于细胞计数 D.酵母菌在液体培养基中培养一段时间后，可 用比浊计测定其密度 8.(2021·山东)解脂菌能利用分泌的脂肪酶将脂 肪分解成甘油和脂肪酸并吸收利用。脂肪酸会 使醇溶青琼脂平板变为深蓝色。将不能直接吸 收脂肪的甲、乙两种菌分别等量接种在醇溶青琼 脂平板上培养。甲菌菌落周围呈现深蓝色，乙菌 菌落周围不变色，下列说法错误的是( A.甲菌属于解脂菌 B.实验中所用培养基以脂肪为唯一碳源 C.可将两种菌分别接种在同一平板的不同区域 进行对比 D.该平板可用来比较解脂菌分泌脂肪酶的 能力 9.(2021·江苏)（不定项）为提高一株石油降解菌 的净化能力，将菌涂布于石油为唯一碳源的固体 培养基上，以致死率为90%的辐照剂量诱变处 理，下列叙述不合理的是 () A.将培养基分装于培养皿中后灭菌，可降低培 养基污染的概率 B.涂布用的菌浓度应控制在30一300个/mI C.需通过预实验考察辐照时间对存活率的影 响，以确定最佳诱变时间 D.挑取培养基上长出的较大单菌落，纯化后进 行降解效率分析 10.(2025·北京卷)链霉菌A能产生一种抗生素 M,可用于防治植物病害，但产量很低。为提 高M的产量，科研人员用紫外线和亚硝酸对 野生型链霉菌A的孢子悬液进行诱变处理， 筛选M产量提高的突变体(M+株)，以应用于 农业生产 (1)紫外线和亚硝酸均通过改变DNA的 ,诱发基因突变 (2)因基因突变频率低，孢子悬液中突变体占 比很低；又因基因突变的 性，M十株 在全部突变体中的占比低。要获得M十株，需 进行筛选。 (3)链霉菌A主要进行孢子繁殖。研究者对 链霉菌A发酵液进行了粗提浓缩，得到粗提 液，测定粗提液对野生型链霉菌A孢子萌发 的影响，结果如图。 80 60 40 名 0 2 4 6 8 1012 培养基中粗提液浓度(mL/100mL) 155 由图可知，粗提液对野生型孢子萌发有 作用。 (4)随后研究者进行筛选实验。诱变处理后， 将适量孢子悬液涂布在含有不同浓度粗提液 的筛选平板上，每个浓度的筛选平板设若干个 重复，28℃培养7天。从每个浓度的筛选平板 上挑取100个单菌落，再次分别培养后逐一测 定M产量，统计结果如表。 组别 筛选平板中粗提液 2 5 10 1215 浓度(mL/100mL) 所取菌落中M+ 0 13 25 65 20 3 株占比(%) ①用图中信息，解释表中V组M+株占比明显 高于Ⅲ组的原因： ②表中Ⅲ组和V组中M十株占比接近，但在筛 选平板上形成的菌落有差异。下列叙述正确的 有 (多选)。 A.Ⅲ组中有野生型菌落，而V组中没有野生 型菌落 B.V组中有M产量未提高的突变体菌落，而 Ⅲ组中没有 C.与Ⅲ组相比，诱变处理后的孢子悬液中更多 的突变体在V组中被抑制 D.与Ⅲ组相比，诱变处理后的孢子悬液中更 多的M+株在V组中被抑制 综上所述，用 粗提液筛选是获得M 株的有效方法。 1.(2024·全国甲卷)合理使用消毒液有助于减 少传染病的传播。某同学比较了3款消毒液 A、B、C杀灭细菌的效果，结果如图所示。回 答下列问题。 处理时间 (1)该同学采用显微镜直接计数法和菌落计数 法分别测定同一样品的细菌数量，发现测得的 细菌数量前者大于后者，其原因是 (2)该同学从100mL细菌原液中取1mL加 入无菌水中得到10mL稀释菌液，再从稀释菌 液中取200uL涂布平板，菌落计数的结果为 100,据此推算细菌原液中细菌浓度为 个/mL。 (3)菌落计数过程中，涂布器应先在酒精灯上 灼烧，冷却后再涂布。灼烧的目的是 冷却的目的是 (4)据图可知杀菌效果最好的消毒液是 ,判断依据是 (答出2点即可)。 (5)鉴别培养基可用于反映消毒液杀灭大肠杆 菌的效果。大肠杆菌在伊红美蓝培养基上生 长的菌落呈 色。 12.(2022·全国甲卷)某同学从被石油污染的土 壤中分离得到A和B两株可以降解石油的细 菌，在此基础上采用平板培养法比较二者降解 石油的能力，并分析两个菌株的其他生理 功能。 实验所用的培养基成分如下。 培养基I:K2HPO4,MgSO4,NH4NO3,石油。 培养基Ⅱ：K2HPO4,MgSO4,石油。 操作步骤： ①将A、B菌株分别接种在两瓶液体培养基I 中培养，得到A、B菌液； ②液体培养基I、Ⅱ中添加琼脂，分别制成平 板I、Ⅱ，并按图中所示在平板上打甲、乙 两孔。 回答下列问题。 透明圈大小 菌株 平板I 平板Ⅱ A 十+十 ++ B ++ (1)实验所用培养基中作为碳 源的成分是 甲 培养基中NH4NO3的作用是 为菌株的生长提供氮源，氮源 在菌体内可以参与合成 (答出2 种即可)等生物大分子。 156 (2)步骤①中，在资源和空间不受限制的阶段， 若最初接种N。个A细菌，繁殖n代后细菌的 数量是 (3)为了比较A、B降解石油的能力，某同学利 用步骤②所得到的平板I、Ⅱ进行实验，结果 如表所示(“十”表示有透明圈，“十”越多表示 透明圈越大，“一”表示无透明圈)，推测该同学 的实验思路是 (4)现有一贫氮且被石油污染的土壤，根据上 表所示实验结果，治理石油污染应选用的菌株 是 ,理由是 3.(2022·广东卷)研究深海独特的生态环境对 于开发海洋资 一。纤雏素 源具有重要意 *木聚糖 ·果胶 义。近期在 +甘露聚糖 。。二·淀粉 “科学号”考察 810 时间（天） 船对中国南海 科考中，中国科学家采集了某海域1146米深 海冷泉附近沉积物样品，分离、鉴定得到新的 微生物菌株并进一步研究了其生物学特性。 回答下列问题： (1)研究者先制备富集培养基，然后采用 法灭菌，冷却后再接入沉积物样 品，28℃厌氧培养一段时间后，获得了含拟杆 菌的混合培养物，为了获得纯种培养，除了稀 释涂布平板法，还可采用 法。据图分析，拟杆菌新菌株在以 为 碳源时生长状况最好。 (2)研究发现，将采集的样品置于各种培养基 中培养，仍有很多微生物不能被分离筛选出 来，推测其原因可能是 (答一点即可) (3)藻类细胞解体后难以降解为多糖物质，通 常会聚集形成碎屑沉降到深海底部。从生态 系统组成成分的角度考虑，拟杆菌对深海生态 系统碳循环的作用可能是 (4)深海冷泉环境特殊，推测此环境下生存的 拟杆菌所分泌的各种多糖降解酶，除具有酶的 一般共性外，其特性可能还有