第1章 第2节 第1课时 微生物的基本培养技术-【金版新学案】2025-2026学年高中生物选择性必修3 生物技术与工程同步课堂高效讲义配套课件PPT（人教版，多选）

第2节　微生物的培养技术及应用 第1课时　微生物的基本培养技术 　 第1章　发酵工程 学习目标 1.概述培养基的成分和配制方法。　 2.区分消毒和灭菌，掌握不同物品的灭菌方法。　 3.概述微生物纯培养的基本操作要求。 任务一　培养基的配制 1 任务二　无菌技术 2 任务三　微生物的纯培养 3 课时测评 6 课堂小结 4 内容索引 课堂评价 5 培养基的配制 任务一 返回 1.培养基的概念、用途和类型 新知导学 固体 营养物质 生长繁殖 分离 鉴定 液体 2.培养基的配方 (1)主要营养物质：水、______、氮源、无机盐。 (2)其他条件：pH、特殊营养物质和氧气。如下表： 微生物 乳酸杆菌 霉菌 细菌 厌氧型微生物 特殊需求 添加维生素 pH调至______ pH调至中性或弱碱性 无氧 碳源 酸性 微提醒 1.培养基的配制原则：目的要明确；营养要协调；pH要适宜。 2.固体培养基中的琼脂仅作为凝固剂，不能为微生物生长提供能量和碳源。 1.培养基按照物理性质的不同可分为固体培养基和液体培养基两种基本类型，两者的区别在于前者因加入凝固剂呈固体状态而后者为液体状态。 ( 　) 2.培养基的主要成分为水、碳源、氮源、无机盐等，此外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的需求。 (　 ) 3.培养细菌时，需要将培养基的pH调至酸性，培养霉菌时则需调至中性或弱碱性。 (　 ) 4.培养厌氧型微生物时，除需要提供无机碳源之外，还需要提供无氧条件。 (　 ) 5.琼脂固体培养基是在液体培养基中加入琼脂制成的，是实验室中最常用的培养基之一，微生物在其表面或内部生长后可形成光镜可见的菌落。 (　 ) 自我诊断 √ √ × × × 活动1　深入分析培养基的种类和营养构成 材料1：配制培养酵母菌的培养基：称取去皮的马铃薯200 g，切成小块，加水1 000 mL，加热煮沸至马铃薯软烂，用纱布过滤。向滤液中加入20 g葡萄糖(也可用蔗糖代替)、15～20 g琼脂，用蒸馏水定容至1 000 mL。　 材料2：100 g马铃薯中含有80 g水、2 g蛋白质、16 g碳水化合物，还有维生素、无机盐等。 结合提供的材料和教材中的“1 000 mL牛肉膏蛋白胨培养基的营养构成”， 分析并回答下列问题： 探究导思 (1)按物理性质划分上述两种培养微生物的培养基的种类。 提示：由于琼脂是凝固剂，所以培养酵母菌的培养基是固体培养基，而牛肉膏蛋白胨培养基未加凝固剂，是液体培养基。 (2)分析上述两种培养微生物的培养基的营养构成。 提示：都含有水、碳源、氮源、无机盐和维生素等营养物质，其中培养酵母菌的培养基中主要由糖类提供碳源，蛋白质提供氮源，牛肉膏蛋白胨培养基中主要由牛肉膏和蛋白胨提供碳源、氮源。 (3)为什么培养基需要氮源？ 提示：培养基中的氮元素是微生物合成蛋白质、核酸等物质所必需的。 归纳总结 　培养基营养成分的作用和主要来源 针对练1.(2025·江苏启东中学模拟)下列有关以CO2为唯一碳源的自养微生物所需营养物质的描述中，错误的是 A.铵盐和硝酸盐等无机氮为该微生物提供必要的氮素 B.碳源物质不是该微生物的能源物质 C.水、无机盐也是该微生物不可缺少的营养物质 D.琼脂是该微生物的营养要素之一 √ 铵盐和硝酸盐等无机氮为该微生物提供必要的氮元素，A正确；以CO2为唯一碳源的自养微生物，CO2是无机物，不是该微生物的能源物质，B正确；水、无机盐也是该微生物不可缺少的营养物质，C正确；琼脂是凝固剂，不是该微生物的营养要素之一，D错误。 微提醒 不是所有微生物的培养基中都需要加入碳源、氮源 (1)自养微生物能利用无机碳源(如空气中的CO2)，故培养基中不用添加 碳源。 (2)固氮微生物可利用N2作为氮源，故培养基中不用加入氮源。 (3)对异养微生物来说，含C、H、O、N的有机化合物(尿素除外)既可能是碳源，又可能是氮源。 针对练2．(多选)培养基是人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。下列叙述错误的是 A．微生物在液体培养基内部生长，可以形成肉眼可见的菌落 B．培养乳酸杆菌时，需要在培养基中添加维生素 C．在培养细菌时一般需要将培养基调至酸性 D．培养基中的营养物质浓度越高，越有利于微生物的生长 √ 菌落是分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部繁殖形成的，在液体培养基中不会形成菌落，A错误；乳酸杆菌自身不能合成维生素，培养乳酸杆菌时，需要在培养基中添加维生素，B正确；培养细菌时，一般需要将培养基调至中性或弱碱性，C错误；培养基中的营养物质浓度过高，会导致微生物细胞失水，不利于微生物的生长，D错误。 √ √ 规律方法 几种微生物的营养和能量来源 微生物 碳源 氮源 能源 蓝细菌 CO2 N、N等 光能 硝化细菌 CO2 NH3 无机氮化合物的氧化 根瘤菌 糖类等有机物 N2 有机物 大肠杆菌 糖类、蛋白质等有机物 蛋白质等 有机物 返回 无菌技术 任务二 返回 新知导学 1.获得纯净的微生物培养物的关键：防止______污染。 2.消毒和灭菌 杂菌 灼烧 温和 强烈 煮沸 湿热 干热 巴氏 3.注意事项 (1)实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品接触。 (2)为了避免周围环境中微生物的污染，接下来的许多操作都应在超净工作台上并在____________附近进行。 酒精灯火焰 微提醒 1.芽孢是某些细菌生长到一定阶段，在细胞内形成的休眠体。孢子是某些微生物的繁殖体。 2.与煮沸消毒法相比，巴氏消毒法的优点是在达到消毒目的的同时，营养物质损失较少。 1.获得纯净的微生物培养物的关键是防止外来杂菌的入侵。无菌技术应围绕着如何避免杂菌的污染展开，主要包括消毒和灭菌。 (　　) 2.灭菌相比消毒对微生物的杀灭更彻底。 (　　) 3.无菌操作的对象只要是没有生物活性的材料(如培养基、接种环等)都可采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌。 (　　) 4.培养基最常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌。 (　　) 5.做好消毒和灭菌工作后，要注意避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品接触。 (　　) 6.为了避免周围环境中微生物的污染，许多操作都应在超净工作台并在酒精灯火焰的充分燃烧层进行。 (　　) 自我诊断 √ √ × √ √ × 活动2　深入理解无菌技术 情境：获得纯净的微生物培养物的关键是防止杂菌污染。无菌技术应围绕着如何避免杂菌的污染展开，主要包括消毒和灭菌。 阅读教材中消毒和灭菌的相关内容，结合上述情境，回答相关问题： (1)消毒和灭菌的原理有哪些？试举例说明。 提示：使菌体蛋白质凝固变性，如高压蒸汽灭菌法；抑制微生物代谢和生长，或破坏微生物细胞膜的结构，改变其通透性，使细胞破裂、溶解，如某些化学消毒法；损伤微生物DNA等，如紫外线消毒法。 探究导思 (2)消毒和灭菌都能杀死所有的微生物吗？ 提示：灭菌可杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子，而消毒仅能杀死部分微生物。 (3)用化学药物消毒时，某同学认为酒精浓度越高消毒效果越好，于是他用了体积分数为95％的酒精进行消毒，他的这种做法对吗？请解释原因。 提示：不对。体积分数为70％～75％的酒精常用于消毒，原因是环境中酒精浓度过高，会使菌体表面的蛋白质凝固形成一层保护膜，使酒精不能渗入其中。 归纳总结 消毒和灭菌的主要方法及应用范围 项目 主要方法 应用范围 消 毒 巴氏消毒法 在63～65 ℃消毒30 min或72～76 ℃处理15 s或80～85 ℃处理10～15 s 牛奶等不耐高温的液体 煮沸消毒法 100 ℃煮沸5～6 min 家庭餐具等生活用品 紫外线消毒 紫外线照射30 min 接种室、接种箱或超净工作台 化学药 物消毒 用体积分数为70％～75％的酒精、氯气、苯酚或煤酚皂溶液等处理 皮肤、伤口、动植物组织表面消毒和空气、水源 归纳总结 项目 主要方法 应用范围 灭 菌 灼烧灭菌 直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧 涂布器、接种环、接种针或其他金属用具、试管口或瓶口等 干热灭菌 在160～170 ℃的热空气中维持1～2 h 耐高温的和需要保持干燥的物品，如玻璃器皿、金属用具等 高压蒸汽灭菌 (湿热灭菌) 100 kPa、121 ℃维持15～30 min 培养基及多种器材、物品 针对练3.(2025·长沙模拟)消毒和灭菌是微生物培养中常用的操作方法。下列说法不正确的是 A.接种疫苗前要对注射区域进行消毒 B.在100 ℃条件下煮沸5～6 min属于灭菌方法，可以杀死微生物的营养细胞和一部分芽孢 C.微生物接种技术的方法不同，但核心都是要防止杂菌污染，保证培养物的纯度 D.实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围物品相接触 √ 在100 ℃条件下煮沸5～6 min属于消毒方法，B错误。 知识拓展 芽孢和孢子 (1)芽孢：有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体(不是繁殖体)，叫作芽孢。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌。 (2)孢子：细菌、原生动物、真菌和植物等产生的一种有繁殖或休眠作用的生殖细胞。孢子的特点是能直接长成新个体。 针对练4.(2024·甘肃天水高三期末)实验室常用高压蒸汽灭菌锅进行灭菌，下列叙述正确的是 A.放入待灭菌物品后，关闭排气阀，即可打开电源加热 B.一般在压力为100 kPa、温度121 ℃的条件下灭菌10 min C.高压蒸汽灭菌法可以杀灭物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子 D.若压力达到设定要求时，锅内没有达到相应温度，说明灭菌锅的温度计测量有误 √ 放入待灭菌物品后，加热灭菌锅，打开排气阀，排除锅内冷空气，A错误；为达到良好的灭菌效果，一般在压力为100 kPa，温度为121 ℃的条件下，维持15～30 min，B错误；高压蒸汽灭菌法是常用的湿热灭菌法之一，可以杀灭物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子，C正确；若压力达到设定要求，而锅内没有达到相应温度，最可能的原因是未将锅内冷空气排尽，D错误。 特别提醒 高压蒸汽灭菌的2个注意点 (1)高压蒸汽灭菌开始之前要将锅内的冷空气排尽。因为空气的膨胀压大于水蒸气的膨胀压，所以，当水蒸气中含有空气时，在同一压力下，含空气蒸汽的温度低于饱和蒸汽的温度。 (2)灭菌完毕后，要待压力降到0时才能打开排气阀，否则会导致锅内压力突然下降，使容器内的培养基由于内外压力不平衡而冲出瓶口或试管口，造成棉塞沾染培养基而发生污染。 返回 微生物的纯培养 任务三 返回 1.概念辨析 新知导学 定形态结构 固体培养基 一 2.酵母菌的纯培养 50℃ 琼脂 高压蒸汽灭菌 干热灭菌 3.倒平板的操作步骤 4.平板划线法的具体操作 微思考 　　(选择性必修3 P12～13“探究·实践”延伸思考)培养基灭菌后，需要冷却至50 ℃左右才能倒平板的原因是什么？用什么方法来估计培养基的温度？ ___________________________________________________________ ______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________。 琼脂是一种多糖，在水中需加热至95 ℃时才开始熔化，熔化后的溶液温度需降至40 ℃时才开始凝固，倒平板时高于50 ℃则会烫手，低于50 ℃时若不及时操作，琼脂会凝固。可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，即可以进行倒平板操作 1.培养基分装到培养皿后再进行高压蒸汽灭菌。 (　　) 2.倒平板操作中，等待平板冷却凝固后，要将平板倒置。 (　　) 3.平板划线操作中，划完一个区域后要将接种环灼烧，再划下一个区域。 (　　) 4.若皿盖和皿底之间溅上培养基，这个培养基不可再用。 (　　) 5.平板划线法接种时，每一次划线前都要蘸取菌种。 (　　) 6.需要将一个不接种的培养基放在相同的条件下培养，以检验培养基的灭菌是否合格。 (　　) 自我诊断 × √ √ √ × √ 活动3　深入分析平板划线法的操作 情境：发酵生产啤酒的过程中，杂菌产生的微量副产物是啤酒“上头”的原因之一，可采用平板划线法对酵母菌进行纯化。 如图是平板划线操作的示意图，据图回答下列问题： (1)用图中字母和箭头表示平板划线操作的正确步骤：__________________ _______。 探究导思 d→b→f→a→e→c →h→g (2)在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？ 提示：需要；划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免污染环境和感染操作者。 (3)在第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？ 提示：划线后，线条末端菌种的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使菌种的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个微生物繁殖而来的菌落。 (4)接种结束后，为什么要将一个未接种的培养基和一个已接种的培养基放在一起培养？未接种的培养基表面如果有菌落生长，说明了什么？ 提示：培养未接种的培养基的作用是对照，未接种的培养基经过培养后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的；若有菌落生长，说明培养基灭菌不彻底，或培养基被污染了，需要重新制备。 归纳总结 1.配制培养基的注意事项 (1)如果需要调节培养基的pH，应该在定容完成之后、灭菌之前进行操作。 (2)培养基灭菌后需要冷却至50 ℃左右时才能倒平板。温度过高会烫手，且培养基凝固后皿盖上凝结的冷凝水过多，易落入培养基造成污染；温度过低，培养基会凝固。 (3)倒平板时，要使锥形瓶的瓶口通过火焰。通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。 (4)将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，不要完全打开，以免杂菌污染培养基。 (5)整个操作过程要在酒精灯火焰旁进行，避免杂菌污染。 归纳总结 2.平板划线操作的注意事项 (1)灼烧接种环，待其冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种。 (2)接种环蘸取菌液前后，要将试管口通过火焰；划线操作全程都要在酒精灯火焰旁进行。 (3)第二次及其以后的划线操作总是从上一次划线末端开始，能使微生物的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终得到由单个细菌繁殖而来的菌落。划线时最后一次的划线不要与第一次的划线相连。 (4)划线时用力大小要适当，避免用力过大将培养基划破。 (5)操作第一步即取菌种之前以及每次划线之前都需要将接种环进行火焰灼烧灭菌，划线操作结束时，仍需灼烧接种环。 归纳总结 3.实验结果的分析 (1)若未接种的培养基表面有菌落生长，则说明培养基被污染，应该重新制备；若无菌落生长，则说明未被污染。 (2)在接种酵母菌的培养基上可观察到独立的菌落，这些菌落在颜色、形状和大小上相似，酵母菌菌落一般表面光滑、多呈乳白色。 (3)若在培养基中观察到不同形态的菌落，原因可能是菌液中混入了其他杂菌，或在实验操作过程中被杂菌污染。 针对练5.(2025·辽宁沈阳模拟)下列有关微生物的分离与培养的叙述，错误的是 A.获得纯净培养物的关键是防止杂菌污染 B.倒置平板可防止培养皿皿盖上的冷凝水落入培养基 C.倒平板时将培养皿的皿盖拿开，以便于将锥形瓶中的培养基倒入培养皿 D.检验培养基是否被杂菌污染的最有效方法是将未接种的培养基放在恒温培养箱中培养 √ 倒平板时用食指和拇指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，随后倒入培养基，C错误。 针对练6.(2024·广西桂林高二开学考试)微生物的纯培养包括配制培养基、灭菌、接种、分离和培养等步骤。下列关于酵母菌的纯培养的叙述错误的是 A.采用平板划线法和稀释涂布平板法均可分离酵母菌 B.可用湿热灭菌法对培养酵母菌的马铃薯琼脂培养基进行灭菌 C.通过接种环连续蘸取菌液在固体培养基表面划线的操作，可将菌种逐步稀释 D.完成平板划线后，待菌液被培养基吸收，再将接种后的平板进行培养 √ 对于微生物进行分离的方法有平板划线法和稀释涂布平板法，A正确；可用湿热灭菌法(通常是高压蒸汽灭菌法)对培养酵母菌的马铃薯琼脂培养基进行灭菌，B正确；通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面，该过程中只蘸取一次菌液，C错误；完成平板划线后，待菌液被培养基吸收，将接种后的平板(和一个未接种的平板)倒置培养，D正确。 针对练7． (2025·石家庄联考)接种微生物的方法很多，平板划线法是最常用的一种。如图是平板划线示意图，划线的顺序为①②③④。操作方法中错误的是 A．划线操作时，将蘸有菌种的接种环插入培养基 B．平板划线后培养微生物时要倒置 C．不能将第④区域的划线与第①区域的划线相连 D．在②～④区域中划线前后都要对接种环进行灭菌 √ 将蘸有菌种的接种环在培养基表面迅速划三至五条平 行线，而不能插入培养基，A错误；用平板培养基培 养微生物时，为防止水蒸气凝集滴入培养基造成干扰 或污染，应将平板倒过来放置培养，B正确；划线时 要避免最后一区的划线与第一区的划线相连，因为最 后一区的细菌最少，而第一区的细菌最多，如果连在一起则有可能影响单个菌落的分离效果，C正确；在②～④区域中划线前都要对接种环进行灼烧灭菌，保证每次划线的菌种来自上一区域的末端，划线结束灼烧接种环能防止菌种污染环境，D正确。 特别提醒 培养基中微生物数目过多或连成一片的原因 (1)菌液浓度过高。 (2)培养过程中被杂菌污染。 (3)利用接种环划线时，每次划线前未灼烧灭菌。 返回 课堂小结 返回 思维导图 要语必背 返回 1.培养基中一般都含有水、碳源、氮源和无机盐等营养物质。 2.获得纯净的微生物培养物的关键是防止杂菌污染。 3.消毒是指使用较为温和的物理、化学或生物等方法杀死物体表面或内部一部分微生物。灭菌是指使用强烈的理化方法杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。 4.由单一个体繁殖所获得的微生物群体称为纯培养物，获得纯培养物的过程就是纯培养。 5.菌落是分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部繁殖形成的肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体。 课堂评价 返回 1.(2024·陕西西安高二期末)下列有关微生物培养基的配制表述错误的是 A.培养硝化细菌的培养基中添加的铵盐可作为能量来源 B.尿素固体培养基中的K2HPO4能用于维持培养基的pH C.培养光能自养型蓝细菌的培养基中不需提供有机碳源 D.马铃薯琼脂固体培养基中的琼脂能作为酵母菌的碳源 √ 硝化细菌是化能自养型生物，可利用氧化无机氮化合物获得能量，将无机物转化为有机物，故培养硝化细菌的培养基中的铵盐可作为能量来源，A正确；HP既能解离产生H＋，又能结合H＋，故尿素固体培养基中的K2HPO4能用于维持培养基的pH，保证微生物所需的酸碱环境，B正确；培养光能自养型蓝细菌的培养基中不需提供有机碳源，蓝细菌可利用二氧化碳和水合成有机物，C正确；琼脂的作用是凝固剂，不能作为碳源，D错误。 2．我国科学家从北极分离、鉴定出了一种耐冷细菌，过程如下：①接种在人造海水中，15 ℃条件下振荡培养3 h；②依次等比稀释后将样品涂布在TYS培养基中，15 ℃条件下培养7 d；③挑取生长菌落，进行划线， 15 ℃条件下培养；④选择不同形态的菌落进行培养、鉴定和保存。下列叙述错误的是 A．过程①中的振荡培养可以提高培养液中的溶氧量 B．过程②③使用的接种器具均需灼烧并冷却后才能用于接种 C．过程②中的TYS培养基灭菌前需将pH调至酸性 D．涂布后再次划线培养的目的是进一步纯化所得菌种 √ 过程①中的振荡培养，能使人造海水与氧气充分接触，提高溶解氧的供应量，A正确；过程②③使用的接种器具均需灼烧，是防止杂菌污染，冷却后操作是避免因接种器具温度太高杀死菌种，B正确；过程②中的TYS培养基灭菌前将pH调至酸性，会破坏该细菌的细胞结构，应将pH调至中性或弱碱性，C错误；稀释涂布平板法能获得单菌落，但为避免杂菌污染，保证培养物的纯度，会在涂布后再次划线培养，以保证可以进一步得到纯化的菌种，D正确。 3.(2025·武汉模拟)平板接种是微生物培养常用技术。下列叙述错误的是 A.不含碳源的平板可以用于某些微生物的培养 B.进行平板划线时，接种环使用前必须进行灼烧灭菌 C.接种后未长出菌落的培养基可以直接丢弃 D.以尿素为唯一氮源的培养基上长出的菌落不一定可以分泌脲酶 不含碳源的平板可以用于某些自养型微生物的培养，A正确；进行平板划线时，接种环使用前必须进行灼烧灭菌，冷却后接种，B正确；接种后未长出菌落的培养基上，可能含有少量肉眼观察不到的菌落，不可以直接丢弃，C错误；以尿素为唯一氮源的培养基上长出的菌落不一定可以分泌脲酶，也可能有固氮微生物的生长，D正确。 √ 4．(多选)(2025·江苏南通期末)许多生物学实验十分重视无菌操作，防止杂菌污染。下列操作正确的是 A．对无菌室、超净工作台和实验员可采用紫外线杀菌 B．家庭制作酸奶时，要将容器和鲜牛奶进行灭菌 C．加入培养基中的指示剂和染料需要灭菌 D．灼烧灭菌法可杀死微生物的营养体和芽孢 √ 对无菌室、超净工作台可采用紫外线杀菌，对实验员的衣着和手可用酒精进行消毒，A错误；家庭制作酸奶时，要将容器煮沸消毒，鲜牛奶要进行巴氏消毒，保留营养成分，B错误；加入培养基中的指示剂和染料也需要灭菌，否则可能会污染培养基，C正确；灼烧灭菌法可杀死物体内外所有的微生物(包括微生物的营养体、芽孢和孢子)，D正确。 √ 5.(2025·黑吉辽蒙卷)科研人员通过稀释涂布平板法筛选出高耐受且降解金霉素(C22H23ClN2O8)能力强的菌株，旨在解决金霉素过量使用所导致的环境污染问题。下列叙述错误的是 A.以金霉素为唯一碳源可制备选择培养基 B.逐步提高培养基中金霉素的浓度有助于获得高耐受的菌株 C.配制选择培养基时，需确保pH满足实验要求 D.用接种环将菌液均匀地涂布在培养基表面 √ 以金霉素为唯一碳源的选择培养基，仅允许能利用金霉素的微生物生长(其他无法利用金霉素的微生物被抑制)，符合选择培养基的设计原理，A正确；逐步提高金霉素浓度可模拟环境胁迫，筛选出耐受性更强的菌株(类似“驯化”过程)，B正确；培养基的pH需根据目标微生物的生长需求调整(如细菌通常需要中性或弱碱性环境，培养霉菌时，一般需要酸性环境)，是配制培养基的基本要求，C正确；稀释涂布平板法需用涂布器将菌液均匀涂布在培养基表面，而接种环用于平板划线法(分离单菌落)，用接种环涂布无法保证菌液均匀，D错误。 6.(创新情境)牛奶是微生物生长的良好培养基。牛奶在饮用前都要经过巴氏消毒，以杀死有害微生物。为检测自制酸奶是否被杂菌污染，先将酸奶进行一定程度的稀释，回答下列问题： (1)牛奶用巴氏消毒的好处是________________________________________ _______ 。 牛奶的营养成分不被破坏(或营养成分没有 损失) 巴氏消毒的方法是指63～65 ℃消毒30 min或72～76 ℃处理15 s或80～85 ℃处理10～15 s，使用这种方法对生鲜牛奶进行消毒的好处是牛奶的营养成分不被破坏。 (2)取最终的牛奶稀释液在培养基上划线，应选择的工具是下图中的_____ (填选项)。 A 划线时所用的接种工具是接种环，即图中的A。 (3)理想情况下，培养一段时间后可在培养基表面形成菌落，如果培养基上出现_______________________________的菌落，说明自制酸奶已被杂菌污染。 (形状、大小、颜色、光泽度)不同 如果培养基上出现(形状、大小、颜色、光泽度)不同的菌落，说明自制酸奶已被杂菌污染。 (4)已知酸奶中的有益菌主要是乳酸菌，纯化乳酸菌时划线操作正确的是______(填选项)。 B A图很难得到由单个菌株繁殖而来的菌落；B图划线从上次划线末端开始，容易得到由单个菌株繁殖而来的菌落；C图划线没有从上次划线的末端开始，接种环上没有菌种，不能得到由单个菌株繁殖而来的菌落；D图划线不是从上次划线末端开始，不容易得到由单个菌株繁殖而来的菌落。 返回 课时测评 返回 知识点一　培养基的配制 1.(2024·江西南昌高三开学考试)培养基是人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。下列关于培养基的叙述错误的是 A.制作固体培养基时可加入琼脂作为凝固剂 B.培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素 C.培养霉菌时需要将培养基调至碱性 D.对培养基进行灭菌可以采用湿热灭菌 √ 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 向液体培养基中加入琼脂可以制作成固体培养基，A正确；维生素是细菌生长的必需营养物质，培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素，B正确；培养霉菌时需要将培养基调至酸性，C错误；对培养基进行灭菌可以利用高压蒸汽灭菌，属于湿热灭菌，D正确。 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 2.(2025·山东临沂高二月考)下列关于微生物培养的叙述，正确的是 A.微生物在培养液中培养一段时间后用显微镜观察，可见到形成的菌落 B.NH3可以作为硝化细菌的氮源和能源物质 C.固体培养基中加入的琼脂能提供额外的碳源和氮源 D.某些细菌生长过程中需要额外补充营养物质，比如培养酵母菌时，要添加维生素 √ 微生物在固体培养基表面或内部生长，可以形成肉眼可见的菌落，A错误；硝化细菌可利用氧化NH3释放的能量合成有机物，B正确；固体培养基中加入的琼脂作为凝固剂，不能被微生物分解利用，故琼脂不能提供额外的碳源和氮源，C错误；酵母菌不属于细菌，D错误。 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 知识点二　无菌技术 3.(2024·河北保定高三期末)在生产、生活和科研实践中，经常通过消毒和灭菌来避免杂菌的污染。下列相关叙述错误的是 A.玻璃器皿和金属用具可利用干热灭菌箱进行干热灭菌 B.巴氏消毒法处理牛奶，能减少牛奶中营养物质的损失 C.无水酒精能加速蛋白质脱水，常用酒精对病毒进行灭菌 D.由于紫外线能破坏DNA结构，病房中常采用紫外线进行消毒 √ 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 玻璃器皿和金属用具常用干热灭菌法灭菌，A正确；巴氏消毒法既能杀死牛奶中绝大多数的微生物，又不破坏牛奶中的营养物质，B正确；体积分数为70％～75％的酒精能加速蛋白质的脱水，从而达到消毒的目的，C错误；紫外线通过破坏蛋白质和DNA结构来杀死微生物，常用于密闭空间内空气的消毒，D正确。 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 4.(2024·海南高三期末)无菌技术主要包括消毒和灭菌，是微生物学实验成功的关键。下列有关叙述错误的是 A.获得纯净的微生物培养物的关键是防止杂菌污染 B.倒平板和接种操作都需要在酒精灯的火焰附近进行 C.平板划线时，若划线区域有五个，则接种环至少需要灼烧五次 D.与紫外线照射相比，高压蒸汽灭菌防止杂菌污染的效果更好 √ 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 要获得纯净的微生物培养物必须要保证没有杂菌污染，A正确；为了防止杂菌污染，倒平板和接种操作都需要在酒精灯的火焰附近进行，B正确；第一次划线前灼烧一次，每次划线后灼烧一次，因此若划线区域有五个，则接种环至少需要灼烧六次，C错误；与紫外线照射相比，高压蒸汽灭菌法灭菌更彻底，防止杂菌污染的效果更好，D正确。 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 知识点三　酵母菌的纯培养 5.(2024·广东深圳一模)在“酵母菌纯培养”的实验课中，学生进行平板划线的实践操作。下列叙述错误的是 A.开始接种前和划线完毕后都要将接种环进行灼烧 B.棉塞拔出后和塞上前装有培养液的试管口都要通过火焰 C.在酒精灯火焰附近用接种环蘸取一环菌液 D.将皿盖完全打开后用接种环在培养基表面连续划线 √ 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 接种前将接种环放在酒精灯火焰上灼烧灭菌，并需要在酒精灯火焰旁冷却才能接种，划线完毕后要将接种环进行灼烧，以防止污染环境和感染操作者，A正确；接种环蘸取菌液前，需将试管口通过火焰，蘸取菌液后，需将试管口通过火焰并塞上棉塞，通过灼烧防止杂菌污染，B正确；酒精灯火焰旁存在无菌区域，在酒精灯火焰附近用接种环蘸取一环菌液，C正确；划线操作时，为了防止杂菌污染，培养皿盖不能完全打开，操作时需要在酒精灯火焰旁进行，D错误。 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 6.(2025·肇庆模拟)幽门螺杆菌(含有脲酶)感染是急慢性胃炎和消化性溃疡的主要致病因素。在患者体内采集样本并制成菌液后，进行分离培养。实验基本步骤如图所示，图中X表示 配制培养基→灭菌、倒平板→X→培养→观察 A.调节pH B.接种 C.加入酚红指示剂 D.将培养基倒置 √ 培养基配制好后，经过高压蒸汽灭菌，然后在无菌条件下进行接种，再进行培养、观察，故X是接种，B正确。 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 7.(2025·江苏卷)从种植草莓的土壤中分离致病菌，简易流程如下：制备土壤悬液、分离、纯化、鉴定。下列相关叙述正确的是 A.制备的培养基可用紫外线照射进行灭菌 B.将土样加入无菌水混匀，依次等比稀释后取悬液加入平板并涂布 C.连续划线时，接上次划线的起始端开始划线 D.鉴定后的致病菌，可接种在斜面培养基上，并在室温下长期保存 √ 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 制备的培养基需用高压蒸汽灭菌法灭菌，紫外线仅用于表面或空气消毒，无法灭菌，A错误； 将土样加入无菌水制成悬液，经依次等比稀释后，取各稀释度菌液涂布于培养基表面，分离并计数，B正确； 连续划线时，每次应从上次划线的末端开始，以逐步稀释菌体，若从起始端开始无法有效分离单菌落，C错误；斜面培养基保存菌种需置于4 ℃短期保存，长期保存应使用甘油管藏法(－20 ℃)，室温下无法长期保存，D错误。 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 8.(2025·辽宁营口模拟)下列关于实验室培养和纯化酵母菌过程中的部分操作的说法，正确的是 A.培养酵母菌的试剂和器具都要进行湿热灭菌 B.称量、溶化和倒平板都需要在酒精灯火焰旁进行 C.倒好的平板要立即使用，以免表面干燥，影响酵母菌生长 D.将平板倒置放入适宜温度的恒温培养箱中培养 √ 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 接种环等常用灼烧灭菌法处理，吸管、培养皿等常用干热灭菌法处理，培养基及多种器材用湿热灭菌法处理，A错误；倒平板、接种需要在酒精灯火焰旁进行，而称量、溶化不需要在酒精灯火焰旁进行，B错误；倒好的平板需要冷却后使用，C错误；为防止冷凝水污染培养基，平板需倒置放入恒温箱中培养，D正确。 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 9.(2025·中山高二期末)为了研究抗生素X对四种不同细菌(1、2、3、4)的作用效果，有人做了如图的抗菌实验，四天后菌落形态如图所示，则下列相关分析正确的是 A.抗生素X对细菌3的抑制效果最好 B.抗生素X对细菌4的抑制效果最差 C.抗生素X对细菌2的抑制比对细菌3的抑制效果好 D.可以用抗生素X去治疗由细菌1引起的疾病 √ 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 四天后细菌2的灰色区域最短，说明抗生素X对细菌2的抑制效果最好，A错误；四天后细菌1可在浸透抗生素X的纸条处生长，说明抗生素X对细菌1的抑制效果最差，B错误；根据图中结果可知，抗生素X对细菌2的抑制效果比对细菌3的抑制效果好，C正确；由图可知，抗生素X对细菌1不起作用，因此不能用抗生素X去治疗由细菌1引起的疾病，D错误。 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 10.(2025·江苏苏州模拟)纸片扩散法是药敏试验中一种常用的方法。取少量大肠杆菌的培养液，均匀涂在培养皿内的培养基上，再放上4片含有链霉素(抗生素的一种)的圆形滤纸，然后在无菌适宜条件培养12～16 h，滤纸片周围出现抑制大肠杆菌生长的环圈(简称抑菌圈，见图)。下列相关叙述错误的是 A.图1中的培养基需冷却至50 ℃左右时再倒平板，该操作需要在酒精灯旁完成 B.图2所示培养基的放置方式，能防止水分过快蒸发和冷凝水珠冲散菌落 C.图3培养皿上大肠杆菌的接种方式为稀释涂布平板法，Ⅳ号纸片上抗生素浓度最高 D.图3所示的抑菌圈内出现大肠杆菌菌落的原因是链霉素使其发生了基因突变 √ 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 Ⅳ的抑菌圈中出现了少数几个菌落说明这几个菌落出现了抗药性，抗药性的获得是由于这些大肠杆菌发生了基因突变，抗生素只是将具有抗药性突变的大肠杆菌从中筛选出来，D错误。 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 11.(2024·山东日照模拟)某种除草剂(一种含氮有机物，在水中溶解度低，含一定量该除草剂的培养基不透明)在土壤中不易降解，长期使用会污染土壤。为修复被该除草剂污染的土壤，按下图过程选育能降解该除草剂的细菌。下列叙述正确的是 A.图中培养基分装前需进行灭菌 B.图中接种方法为平板划线法，该方法可用于细菌计数 C.实验过程中需要将培养皿中培养基调至中性或弱碱性 D.培养基上形成的两种菌落中的细菌所利用的氮源相同 √ 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 培养基分装到锥形瓶后再进行灭菌，A错误；平板划线法用于分离菌种，不能用于细菌记数，B错误；一般培养细菌时需要将培养基调至中性或弱碱性，C正确；培养基上形成的两种菌落中的细菌所利用的氮源不同，有透明圈的，是能够利用除草剂中的氮源，没有透明圈的，不能利用除草剂中的氮源，D错误。 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 12．(多选) (2025·无锡模拟)生长图形法是一种测定微生物营养需求的简便方法。为探究某嗜热菌所需生长因子的种类，某研究小组把该菌的悬浮液与不含任何特殊营养物质但含有其他必需营养物质的培养基混合后倒平板，然后在平板上划分数区，将甲、乙、丙三种生长因子分别添加到不同区域，培养结果如图所示。下列说法不正确的是 A．倒平板后直接培养可判断有无污染 B．将所有平板放置在适宜的37 ℃下倒置培养并观察 C．图示结果表明该菌需要特殊营养物质乙和丙 D．生长图形法不可用于某些菌种的筛选 √ √ 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 倒平板后不接种任何菌种直接进行培养观察有无 菌落的出现，可以判断培养基有无污染，A正确； 该菌为嗜热菌，应放置在其适宜的高温条件下培 养，而不是37 ℃，B错误；图中嗜热菌在添加了 乙、丙特殊营养物质的区域生长，故该菌需要的 特殊营养物质是乙和丙，C正确；不同的菌种所需的特殊营养物质不同，利用生长图形法可用于某些菌种的筛选，菌种只会在提供其需要的生长因子的区域生长，D错误。 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 13．(多选) (2024·山东淄博高三期末)生物指示剂常用于 对医疗器械高压蒸汽灭菌的质量监测。将某批次的多支 生物指示剂(如图)与医疗器械一并放入压力锅中，待灭 菌完成后，挤破安瓿瓶，让含芽孢的菌片(嗜热脂肪芽 孢杆菌)与培养液接触，培养并检测结果。下列说法正 确的是 A．安瓿瓶内培养液的成分应适于嗜热脂肪芽孢杆菌的生长 B．制备生物指示剂时，安瓿瓶内的培养液需要进行灭菌处理 C．嗜热脂肪芽孢杆菌的热耐受性大于已知污染菌的热耐受性 D．当压力锅中的生物指示剂培养结果为阴性时说明医疗器械灭菌合格 √ √ √ 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 生物指示剂待灭菌完成后，挤破安瓿瓶，让嗜热脂 肪芽孢杆菌与培养液接触，培养并检测结果，则安 瓿瓶内培养液的成分应适于嗜热脂肪芽孢杆菌的生 长，A正确。制备生物指示剂时，为了防止污染， 安瓿瓶内的培养液需要进行灭菌处理，B正确。芽 孢是细菌的休眠体，芽孢壁厚，含水量极低，代谢缓慢，抗逆性强，能经受高温紫外线、电离辐射以及多种化学物质灭杀，可以帮助细菌度过不良环境。因此菌片中芽孢的耐热性大于器械上的已知污染菌，C正确。若灭菌与未灭菌的生物指示剂均不出现阳性变化，则说明灭菌前无有活性芽孢，也就无法说明灭菌效果，D错误。 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 14.(10分)(2025·河北石家庄期末)扩展青霉是腐烂苹果中常见的微生物之一，其次级代谢物棒曲霉素(Pat)是一种具有致突变作用的毒素。为研究腐烂苹果中Pat的分布，研究人员进行了如图所示的实验，其中“病健交界处”为腐烂部位与未腐烂部位的交界处，取样分离的5个部位分别为①号、②号、③号、④号、⑤号。请回答下列问题： 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 (1)苹果腐烂部位的微生物除扩展青霉外，还有枯草杆菌。两种微生物在结构上的主要区别是________________________________________________ ________________。 扩展青霉有以核膜为界限的细胞核，枯草杆菌无以核膜为界限的细胞核 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 活化扩展青霉菌种使用的培养基成分中没有凝固剂，故根据物理性质划分该培养基属于液体培养基。 (2)活化扩展青霉菌种使用的培养基成分如下表，根据物理性质划分该培养基属于_____培养基，其中能为扩展青霉的生长繁殖提供能源的是_____；NaNO3的作用是__________________________________________________ __________(答两点)。 蔗糖 NaNO3 MgSO4 KCl FeSO4 KH2PO4 蒸馏水 30 g 2 g 0.5 g 0.5 g 0.01 g 1 g 1 000 mL 液体 蔗糖 为扩展青霉的生长提供氮源和无机盐、维持培养液一定的渗透压 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 (3)用平板划线法分离扩展青霉时，划线的某个平板培养后，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌落，其他区域的划线上却均无菌落。操作失误的原因可能是__________________________________________________ _______________。 第一区域划线结束，接种环灼烧后未冷却或划线未从第一区域末端开始 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 每次从上一次划线的末端开始，能使扩展青霉的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细胞繁殖而来的菌落。若划线的某个平板培养后第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌落，其他区域的划线上却均无菌落，可能是因为第一区域划线结束，接种环灼烧后未冷却或划线未从第一区域末端开始。 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 (4)接种扩展青霉前，应对苹果进行_____(填“消毒”或“灭菌”)。研究人员测定了病斑直径为1 cm、2 cm、3 cm的苹果中①～⑤号部位的Pat含量，请推测最可能的结果：________________________________________ _______；________________________________。 消毒 相同部位病斑越大，Pat含量越高 相同病斑情况下，离病斑越远的部位，Pat含 量越低 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 接种扩展青霉前，为了避免苹果上其他杂菌、病原微生物的污染，应对苹果进行消毒处理。由图可知，①号为腐烂部位，②③④⑤依次距离腐烂部位越来越远，推测相同病斑情况下，①号部位的Pat含量最高，离腐烂部位越远的果肉中Pat含量越低；相同部位病斑越大，Pat含量越高。 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 15.(14分)(2024·广东广州期中)ε-聚赖氨酸(ε-PL)能抑制多种微生物的活性，且人体可将其分解为赖氨酸，是一种优良的天然食品防腐剂。科研人员欲从土壤中分离能分泌ε-PL的微生物，做了如图所示的实验(Ⅰ～Ⅴ表示过程，①～③表示菌落)，已知ε-PL可使亚甲基蓝褪色，形成透明圈。 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 (1)图中第Ⅰ步最常用的接种方法是__________________。若经第Ⅱ步培养后发现菌落铺满了整个培养基、无法分辨出单菌落，则应在第Ⅰ步之前______，再进行接种。 稀释涂布平板法 稀释 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 据图可知，步骤Ⅰ为接种，结合培养Ⅱ后的平板上菌落呈现均匀分布可知，所用接种方法是稀释涂布平板法；若经第Ⅱ步培养后发现菌落铺满了整个培养基、无法分辨出单菌落，说明密度过大，故应在第Ⅰ步之前先稀释，再进行接种。 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 (2)第Ⅲ步接种，应挑选_____(填“①”“②”或“③”)号菌落。一般来说，在相同培养条件下，用不同微生物表现出的稳定的________________ ____________________来判断微生物种类。 ① 形状、大小和颜色等) 菌落特征(菌落的 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 培养过程中由于ε-PL可使亚甲基蓝褪色，形成透明圈，因此应挑选透明圈直径大的菌落继续培养，故选①。不同微生物在固体培养基表面形成的菌落特征不同，一般来说，在相同培养条件下，用不同微生物表现出的稳定的菌落特征(菌落的形状、大小和颜色等)来判断微生物 种类。 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 (3)本实验中用到了4种培养基，其中乙、丁培养基的作用分别是________ _____________________________________。 ε-PL的菌种、增加目的菌数量和生产ε-PL 选择产 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 本实验中用到了4种培养基，甲培养基是液体培养基，能提供目的菌所需的全部营养，以保证目的菌的正常生长；乙培养基是固体培养基，用于选择产生ε-PL的菌种，通常需要添加琼脂等凝固剂；丙培养基是固体培养基，用于分离、纯化产生ε-PL的菌种；丁培养基是液体培养基，用于富集培养目的菌，即可对目的菌进行扩大培养，让目的菌增殖、生产ε-PL。 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 (4)为检测上述收集到的ε-PL对不同种类微生物的抑制能力，研究人员将大肠杆菌等菌种分别涂布于某培养基表面，再将浸有不同浓度ε-PL的滤纸圆片置于平板培养基表面，培养后测量清晰区(单位：mm)的宽度，得到了下表所示的结果。 ε-PL浓度/ (mg·L－1) 微生物 20 30 40 50 60 70 大肠杆菌 ＋ ＋ 7.2 10.8 11.6 13.3 沙门氏菌 ＋ ＋ 6.5 9.2 10.9 13.0 酿酒酵母 7.2 9.1 12.6 13.4 14.8 － 红曲霉 ＋ ＋ ＋ ＋ 5.1 6.3 注：“＋”表示无清晰区，“－”表示未进行实验。 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 ①下列关于上述抑菌实验的叙述，正确的是______。 A.结果显示ε-PL对酿酒酵母的抑制作用最强 B.ε-PL对四种微生物的抑制效果与浓度正相关 C.用于实验的培养基应该用液体的选择培养基 D.接种需在超净工作台上酒精灯火焰周围进行 ε-PL浓度/ (mg·L－1) 微生物 20 30 40 50 60 70 大肠杆菌 ＋ ＋ 7.2 10.8 11.6 13.3 沙门氏菌 ＋ ＋ 6.5 9.2 10.9 13.0 酿酒酵母 7.2 9.1 12.6 13.4 14.8 － 红曲霉 ＋ ＋ ＋ ＋ 5.1 6.3 ABD 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 ②该实验在设置ε-PL浓度梯度方面还有不完善之处，请提出2条修改建议：____________________________________________________________ ________________________________。 ε-PL浓度/ (mg·L－1) 微生物 20 30 40 50 60 70 大肠杆菌 ＋ ＋ 7.2 10.8 11.6 13.3 沙门氏菌 ＋ ＋ 6.5 9.2 10.9 13.0 酿酒酵母 7.2 9.1 12.6 13.4 14.8 － 红曲霉 ＋ ＋ ＋ ＋ 5.1 6.3 增加空白对照组；增加ε-PL浓度大于70 mg·L－1的实验组；增加ε-PL浓度小于20 mg·L－1的实验组 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 表中结果显示：不同浓度的ε-PL处理下，酿酒酵母清晰区的宽度最大，说明ε-PL对酿酒酵母的抑制作用最强，A正确；表中数据显示随浓度增加，清晰区域宽度越大，即ε-PL对四种微生物的抑制效果与浓度正相关，B正确；用于实验的培养基应该用固体的选择培养基， ε-PL浓度/ (mg·L－1) 微生物 20 30 40 50 60 70 大肠杆菌 ＋ ＋ 7.2 10.8 11.6 13.3 沙门氏菌 ＋ ＋ 6.5 9.2 10.9 13.0 酿酒酵母 7.2 9.1 12.6 13.4 14.8 － 红曲霉 ＋ ＋ ＋ ＋ 5.1 6.3 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 C错误；为了避免周围环境中微生物的污染，接种应在超净工作台上并在酒精灯火焰附近进行，D正确。故选ABD。该实验缺乏空白对照组，应增加空白对照组；同时增加ε-PL浓度大于70 mg·L－1的实验组、增加ε-PL浓度小于20 mg·L－1的实验组，这样结果更具有说服力。 ε-PL浓度/ (mg·L－1) 微生物 20 30 40 50 60 70 大肠杆菌 ＋ ＋ 7.2 10.8 11.6 13.3 沙门氏菌 ＋ ＋ 6.5 9.2 10.9 13.0 酿酒酵母 7.2 9.1 12.6 13.4 14.8 － 红曲霉 ＋ ＋ ＋ ＋ 5.1 6.3 返回 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 谢 谢 观 看 第1章　发酵工程 $