第一章 第2节 第2课时 微生物的分离与计数-【创新教程】2025-2026学年高中生物选择性必修3 生物技术与工程五维课堂课时作业word（人教版）

[知识点一]选择培养基 1．用来判断选择培养基是否起到了选择作用，需要设置的对照是(　　 ) A．未接种的选择培养基 B．未接种的牛肉膏蛋白胨培养基 C．接种了的牛肉膏蛋白胨培养基 D．接种了的选择培养基 解析：C　[将菌液稀释相同的倍数并接种，牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数目应明显多于选择培养基上的菌落数目，因此，应选择接种菌种的牛肉膏蛋白胨培养基作为对照。对照实验遵循的原则是单一变量原则。] 2．在缺乏氮源的培养基上大部分微生物无法生长；在培养基中加入青霉素可以抑制细菌和放线菌；在培养基中加入10%酚可以抑制细菌和霉菌。利用上述选择培养基依次能从混杂的微生物群体中分离出(　　 ) A．固氮细菌、金黄色葡萄球菌、放线菌 B．固氮细菌、大肠杆菌、放线菌 C．乳酸菌、金黄色葡萄球菌、放线菌 D．固氮细菌、霉菌、放线菌 解析：D　[在缺乏氮源的培养基上大部分微生物无法生长，但固氮细菌可以利用空气中的氮气提供氮源而生长，因此利用无氮培养基可以从混杂的微生物群体中分离出固氮细菌；在培养基中加入青霉素可以抑制细菌和放线菌，而不影响真菌的生长，因此利用含青霉素的培养基可以从混杂的微生物群体中分离出霉菌(属于真菌)；在培养基中加入10%酚可以抑制细菌和霉菌，但不影响放线菌的生长，因此利用含10%酚的培养基可以从混杂的微生物群体中分离出放线菌；综上分析，D正确，ABC错误。] [知识点二] 微生物计数 3．大平板计数异常是指在对自然样品(如土壤)中微生物细胞数进行评估时，显微直接计数法得到的菌体数远远大于平板计数法得出的菌体数。出现大平板计数异常的原因不包括(　　 ) A．一种培养基和培养条件不能符合全部微生物的生长需求 B．培养时间较短时，平板上的菌落数目没有达到最大值 C．平板上两个或多个相邻的菌落形成一个菌落 D．显微直接计数能逐一对细胞进行统计，比平板计数精确 解析：D　[由于一种培养基和培养条件不能符合全部微生物的生长需求，所以造成统计的数目比实际微生物的数目少，A正确；利用平板计数法，由于培养时间较短，平板上的菌落数目没有达到最大值，可能造成统计的菌落数目偏小，B正确；平板上两个或多个相邻的菌落形成一个菌落，造成统计数目偏小，C正确；显微直接计数不能区分死菌和活菌，所以计数结果偏大，D错误。] 4．通过实验测定土壤中的细菌数量，下列与此操作有关的叙述中，不正确的是(　　 ) A．将培养皿倒置，37℃恒温培养24～48小时 B．选择菌落数在300个以上的培养皿进行计数 C．取104、105倍的土壤稀释液0.1 mL，分别涂布于各组平板上 D．用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板 解析：B　[用稀释涂布平板法测定土壤中细菌数量时，应选择菌落数在30－300的培养皿进行计数。] 5．某同学对101、102、103倍稀释液中的细菌进行计数，平均菌落数分别为2 760、295和16，则样品中菌落总数为(所用稀释液体积为0.1 mL)(　　) A．2.76×104个/mL B．2.95×105个/mL C．4.6×104个/mL D．3.775×104个/mL 解析：B　[菌落计数法是计算不同稀释度的平均菌落数。首先选择平均菌落数在30～300之间的平板，以该平均菌落数与体积之比乘以稀释倍数即为该样品的细菌总数。若所有稀释倍数的菌落数均不在30～300之间，则应以最接近300或30的平均菌落数进行计算。] [知识点三] 尿素分解菌的分离 6．某生物兴趣小组欲配制培养基从土壤中选择尿素分解菌。下列相关叙述正确的是(　　 ) A．配制以尿素为唯一氮源的液体培养基可用于选择和观察尿素分解菌 B．为获取102的稀释液可将90 mL无菌水加入10 g土壤样品中 C．实验中若需要统计尿素分解菌的菌落数目，接种时只能用平板划线法 D．实验中设置对照，同时培养一个空白培养基可检验培养基灭菌是否彻底 解析：D　[选择和观察尿素分解菌时需要配制以尿素为唯一氮源的固体培养基，A错误；10 g土壤样品加入90 mL无菌水中，振荡摇匀后可获得10倍的稀释液，B错误；实验中若需要统计尿素分解菌的菌落数目，接种时只能用稀释涂布平板法，C错误；实验中设置对照，同时培养一个空白培养基，可通过空白培养基上是否有菌落来判断培养基灭菌是否彻底，D正确。] 7．分离土壤中分解尿素的细菌时，对培养基的要求是(　　 ) ①加尿素　②不加尿素　③加琼脂　④不加琼脂　⑤加葡萄糖　⑥不加葡萄糖　⑦加硝酸盐 ⑧不加硝酸盐 A．①③⑤⑦　　　　　 B．②④⑥⑧ C．①③⑤⑧ D．①④⑥⑦ 解析：C　[土壤中分解尿素的细菌能够合成脲酶，将尿素分解生成氨，利用尿素中的氮合成自身有机物。培养基中尿素作为唯一氮源，分解尿素的细菌能生长，其他微生物不能生长；分离微生物要用固体培养基，需要加琼脂；土壤中分解尿素的细菌属于异养微生物，需要加葡萄糖作为碳源。] 8．在分解尿素菌的分离和鉴定中，对先后用到的两种培养基，叙述正确的是(　　 ) A．加入唯一氮源作为选择培养基，加入酚红指示剂作为鉴别培养基 B．加入唯一氮源作为鉴别培养基，加入酚红指示剂作为选择培养基 C．加入酚红指示剂作为选择培养基，加入碳源作为鉴别培养基 D．加入碳源作为选择培养基，加入酚红指示剂作为鉴别培养基 解析：A　[在分解尿素菌的分离和鉴定中，先加入以尿素为唯一氮源的选择培养基，再加入酚红指示剂作为鉴别培养基，如果培养基变红，说明培养基中已得到能降解尿素的细菌。本题主要考查微生物的分离与鉴定的相关知识，意在考查考生对所学知识的理解，把握知识间内在联系的能力。] 9．原油泄漏对环境的污染十分严重，并且原油中含有大量有害的致癌的多环芳烃。要消除原油污染，可采用微生物降解的方法。下列相关叙述不正确的是(　　) A．要获得能分解原油的微生物应从被原油污染的土壤中分离 B．要分离出菌种应使用以多环芳烃为唯一碳源的培养基 C．分离菌种只能采用稀释涂布平板法 D．以多环芳烃为唯一碳源的培养基是选择培养基 解析：C　[分离获得纯种微生物的接种方法包括平板划线法和稀释涂布平板法，故选C。] 10．图甲、乙是微生物接种常用的两种方法，回答相关问题： (1)图甲是利用　________　法进行微生物接种，图乙是利用　________　法进行微生物接种。这两种方法所用的接种工具分别是　________　和　________　；对这两种接种工具进行灭菌和消毒的方法依次是　____________　和酒精消毒。 (2)平板划线时，为保证微生物的数目随划线次数的增加而逐步减少，每次划线都要从　____________________　开始，平板划线结束后，最后一次划的线不能与第一次划的线　________________　。 (3)接种操作为什么一定要在火焰附近进行？ ________________________________________________________________________。 (4)下图是接种后培养的效果图解，其接种方法是　________　(填“图甲”或“图乙”)。 (5)假设用图乙所示方法接种培养结束后，发现培养基上菌落连成一片，可能的原因是　________________________________　。 解析：(1)图甲和图乙分别是平板划线法和稀释涂布平板法进行微生物接种，这两种方法所用的接种工具分别是接种环和涂布器。(2)平板划线时，每次划线前都要从上一次划线的末端开始，最后一次划线不能与第一次划线相连。(3)由于在酒精灯火焰附近存在着无菌区域，因此接种常在火焰附近进行。(4)培养基上的菌落分布均匀，接种方法为稀释涂布平板法。(5)采用稀释涂布平板法进行菌种分离时，稀释度要足够高，否则会使微生物不能分散成单个细胞。 答案：(1)平板划线　稀释涂布平板　接种环　涂布器　灼烧灭菌　(2)上一次划线的末端　相连(或相接、相交、交叉等)　(3)火焰附近存在着无菌区域　(4)图乙　(5)稀释倍数不够，菌液的浓度太高 1．土壤中的溶磷菌能够把难溶态的磷转化为可被植物直接利用的可溶性磷，从土壤中筛选出溶磷能力强的溶磷菌制成菌肥，有利于植物对磷元素的吸收。下列有关操作和分析错误的是(　　 ) A．土壤取样、称取土壤、稀释样品都在酒精灯的火焰旁进行 B．需要用含难溶态磷的固体培养基进行目的菌株的分离 C．推测难溶态磷的分解可能与溶磷菌分泌的代谢产物有关 D．实验组与对照组可溶性磷含量差值最大的菌株适合制成菌肥 解析：A　[土壤是土壤微生物的培养基，土壤取样时不需要在酒精灯火焰旁操作，A错误；分离菌株需用固态的选择培养基，土壤中的溶磷菌能够把难溶态的磷转化为可被植物直接利用的可溶性磷，而其他微生物不能在此环境中生长，所以要用含难溶态磷的固体培养基进行目的菌株的分离，B正确；土壤中的溶磷菌能够把难溶态的磷转化为可被植物直接利用的可溶性磷，说明难溶态磷的分解可能与溶磷菌分泌的代谢产物有关，C正确；实验组与对照组可溶性磷含量差值最大的菌株说明其把难溶态的磷转化为可被植物直接利用的可溶性磷的能力较强，适合制成菌肥，D正确。] 2．青霉素一般只对革兰氏阳性菌有作用，利用滤纸条法可测定青霉素的抑菌情况，方法如下图。下列分析错误的是(　　 ) A．青霉素是由青霉菌产生的次级代谢产物，可分泌到培养基中 B．滤纸条周围已被抑制的区域不会再出现菌落 C．青霉素对大肠杆菌几乎不起作用，推测大肠杆菌可能不属于革兰氏阳性菌 D．相对于枯草芽孢杆菌，青霉素对金黄色葡萄球菌的抑制作用更明显 解析：B　[青霉菌产生的青霉素是一种抗生素，可分泌到培养基中，对细菌具有抑制作用，A正确；滤纸条周围已被抑制的区域可能会出现新的菌落，如可以利用试验菌代谢产物的一些菌类可能繁殖，B错误；青霉素是青霉菌在代谢过程中产生的能够抑制细菌生长的广谱抗生素，尤其是对革兰氏阳性菌生长抑制明显，青霉素对大肠杆菌几乎不起作用，故推测大肠杆菌可能不属于革兰氏阳性菌，C正确；据图可知，相对于枯草芽孢杆菌，大肠杆菌的菌落更多，而金黄色葡萄球菌的菌落更少，故推测青霉素对金黄色葡萄球菌的抑制作用更明显，D正确。] 3．土壤中有丰富的微生物，若利用其中某种微生物，则需要进行菌种的分离和纯化，过程如图。下列相关叙述错误的是(　　 ) A．若目的是筛选分解尿素[CO(NH2)2]的细菌，则尿素可以作为该菌的氮源和碳源 B．3号试管的稀释倍数为104，理论上3号试管的活菌数应是4号试管的10倍 C．4号试管的结果表明每克土壤中的活菌数约为1.1×108个 D．该种方法统计的菌落数比活菌的实际数目少 解析：A　[若目的是筛选分解尿素[CO(NH2)2]的细菌，则尿素可以作为该菌的氮源，不能作为碳源，A错误；由样品稀释示意图分析可知，3号试管的稀释倍数为104倍，活菌数应是4号试管的10倍，B正确；4号试管进行稀释涂布平板法计数的结果表明每克土壤中的菌株数为(110＋108＋112)÷3×10×105＝1.1×108个，C正确；稀释涂布平板得到的菌落可能存在两个或多个细菌细胞长成一个菌落，使该实验方法统计得到的结果往往会比实际活菌数目要小，D正确。] 4．现有菌液10 mL，按下图进行系列稀释，在最后一个试管中测得细菌数为20个，则未稀释前的试管中有细菌(　　 ) A．600个　　　　　 B．1 200个 C．2×107个 D．2×106个 解析：C　[从本题的图中可看出，每次都是稀释10倍，总共稀释6次，即稀释106倍，最后一个试管细菌数为20个，则原来菌液中应该有细菌2×107个，C正确。] 5．(多选)不同的微生物对营养物质的需求各不相同。下列有关一种以CO2为唯一碳源的自养微生物营养的描述中，正确的是(　　 ) A．氮源为该微生物提供必要的氮素 B．碳源也是该微生物的能源物质 C．无机盐是该微生物不可缺少的营养物质 D．水是该微生物的营养要素之一 解析：ACD　[以CO2为唯一碳源的自养型微生物需要的营养物质有碳源、氮源、水、无机盐和生长因子，对自养微生物而言，其氮源可以是有机氮，也可以是无机氮，都能为微生物提供氮素；碳源CO2只能为微生物提供碳素，不能为其提供能量，其能量可能来自光能或化学能。但对异养微生物而言，其碳源为有机碳，既可以为微生物提供碳素，又能为其提供能量。] 6．(多选)下图中甲是稀释涂布平板法中的部分操作，乙是平板划线法操作结果。 下列叙述中，正确的是(　　 ) A．甲中涂布前要将涂布器灼烧，冷却后才能取菌液 B．对于浓度较高的菌液，如果甲中的稀释倍数仅为102，则所得的菌落不是由单一的细胞或孢子繁殖而成 C．乙中培养皿中所得的菌落都符合要求 D．乙中连续划线的每一次划线起点是上一次划线的末端 解析：ABD　[灼烧后的涂布器如果没有冷却就接触菌种，会将菌体杀死，A正确；稀释倍数过低，会导致多个菌体聚集在一起繁殖成菌落，B正确；平板划线法中最后一次划线的末端处形成的菌落才是由单一的细胞或孢子繁殖而成，这种菌落才符合要求，C错误；连续划线中，除了第一次划线外，每一次划线的起点是上一次划线的末端，目的是使得菌体密度越来越小，保证最后划线末端处的菌落是由单一的细胞或孢子繁殖而成。] 7．(多选)地球上的植物每年产生的纤维素超过70亿吨，其中40%～60%能被土壤中的某些微生物分解利用，这是因为他们能够产生纤维素酶。研究者从牛的瘤胃中筛选产生纤维素酶的纤维素分解菌，其筛选过程如图1所示。将丙中的菌悬液转接于含有纤维素作碳源的固体培养基上培养，得到若干菌落后用刚果红处理，看到如图2所示情况，下列有关叙述，正确的是(　　 ) A．甲管中的液体是液体培养基，作用是富集培养，②过程是为了筛选单菌落 B．Ⅰ号培养基属于选择培养基，除需加入纤维素外，还需加入硝酸铵为其提供氮源 C．Ⅱ号培养基属于固体培养基，配制时应先灭菌再调节pH D．可挑取图2中周围出现透明圈的菌落，用平板划线法继续纯化 解析：BD　[甲中的液体是无菌水，不是液体培养基，目的是对样品进行稀释，A错误；Ⅰ号培养基属于选择培养基，要筛选纤维素分解菌，应该以纤维素为唯一碳源，还需加入硝酸铵为其提供氮源，B正确；配制固体培养基的基本步骤是计算、称量、溶化、调pH、灭菌、倒平板，故需要先调pH，再灭菌，C错误；刚果红能与纤维素形成红色复合物，若菌落周围出现透明圈，说明纤维素分解菌将纤维素进行了分解，可挑取该菌落用平板划线法继续纯化该菌体，D正确。故选BD。] 8．多氯联苯是一种对人体有很大危害的有机物，呈油状液体，污染土壤后，很难清除。研究发现部分酵母菌具有分解多氯联苯的作用。为消除这种污染，科研人员计划从受污染的土壤中筛选出高效分解多氯联苯的菌株。 (1)筛选分解多氯联苯的菌株时，应将土壤样品　________　，接种到以　________　为唯一碳源的培养基上，从功能上讲，该培养基属于　____________　。 (2)对初步提取到的菌株要进行　________　，一般操作方法有两种，如图是　________　法。 (3)若要测定培养液中酵母菌的菌体数，可在显微镜下直接计数。用　____________　法统计菌落数，在涂布接种前，随机取若干灭菌后的培养基空白平板培养一段时间，这样做的目的是________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________。 解析：(1)依题意可知：筛选分解多氯联苯的菌株时，应将土壤样品稀释(溶解)接种到以多氯联苯为唯一碳源的培养基上。在该培养基中，只有能降解多氯联苯的微生物才能生长，而其他微生物则不能生长，所以从功能上讲，该培养基属于选择培养基。(2)对初步提取到的菌株要进行纯化。图中采用的操作方法是平板划线法。(3)若要测定培养液中酵母菌的菌体数，既可在显微镜下用血细胞计数板直接计数，也可选用稀释涂布平板法统计活菌数目。在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板培养一段时间，其目的是检验培养基平板灭菌是否成功(或倒平板是否感染杂菌或是否彻底灭菌)。 答案：(1)稀释(溶解)　多氯联苯　选择培养基　(2)纯化　平板划线　(3)稀释涂布平板　检验培养基平板灭菌是否成功(倒平板是否感染杂菌或是否彻底灭菌) 一、选择培养基的配制 1．分离土壤中分解尿素的细菌，对培养基的要求是(　　) 选项 尿素 琼脂 葡萄糖 硝酸盐 A ＋ ＋ ＋ ＋ B － － － － C ＋ ＋ ＋ － D ＋ － － ＋ 注：“＋”表示加入，“－”表示不加。 解析：C　[分离土壤中分解尿素的细菌，培养基中要有碳源，且以尿素作为唯一的氮源，故不能添加硝酸盐。] 二、稀释涂布平板法计数结果的分析 2．用稀释涂布平板法来统计样品中活菌的数目，其结果与实际值相比(　　 ) A．比实际值高 B．比实际值低 C．和实际值一致 D．比实际值可能高也可能低 解析：B　[培养基上的一个菌落也可能由相连的两个或多个菌体繁殖而来，因此统计的活菌数要少于菌体实际值。] 学科网（北京）股份有限公司 $