第3章 第2节 基因工程的基本操作程序-【新课程能力培养】2025-2026学年高中生物选择必修3 生物技术与工程练习手册（人教版）

第3章基因工程。 第2节 基因工程的基本操作程序 基础练习 知识点一目的基因的筛选与获取 选用引物甲和引物丙 1.下列有关基因工程的说法，正确的是 B.构建基因表达载体，可选用BamHI剪切 ( C.构建基因表达载体时为了防止目的基 A.可用限制酶切割烟草花叶病毒的核酸 因和质粒的自身环化，可以选用BClI B.必须用相同的限制酶处理目的基因和 和HindⅢ剪切 运载体 D.在导入目的基因的受体细胞中，四环 C.DNA连接酶连接DNA片段形成磷酸 素抗性基因和氨苄青霉素抗性基因不 二酯键 能同时表达 D.载体上不一定要有标记基因 4.限制酶I和限制酶Ⅱ的识别序列和切割位 2.实验室常用PCR技术对DNA进行体外扩 点分别是-G'GATCC-和-GATC-,利用 增，下列相关叙述正确的是() 下图所示的质粒构建基因表达载体，仅 A.需要解旋酶和耐高温的DNA聚合酶 考虑图中识别序列。下列叙述错误的是 B.用PCR方法扩增目的基因时不必知道 基因的全部序列 GGATCO GGATCC目的基因GATC CCTAGG CCTAGG CTAG C.95℃时DNA的磷酸二酯键断开 质粒 D.分别与模板DNA单链结合的一对引物， GeneⅡ Gene 其引物间碱基序列应互补配对 注：Gene I和GeneⅡ表示两种标记基因 。表示限制性内切核酸酶仅有的识别序列放大 知识点口基因表达载体的构建 A.用限制酶I和限制酶Ⅱ切割DNA后获 3.下图甲、乙中标注了相关限制酶的酶切位 得的黏性末端相同 点，培育转基因大肠杆菌的叙述错误的是 B.若用限制酶Ⅱ切割质粒，则可得到两 ( ) 种DNA片段 四环素抗性基因 C.若用限制酶I切割目的基因，则有两 BamH Bcl I 质粒 ,BamH I引物甲HindⅢBamH I BamH I 个磷酸二酯键会被水解 HindΠ 启动子氨苄青霉素 3A1 抗性基因 自的基因引物丙引物乙 D.构建基因表达载体时，应用限制酶Ⅱ 甲 乙 切割质粒，用限制酶I切割目的基因 A.若通过PC技术提取该目的基因应该5.人类是乙型肝炎病毒的唯一宿主，接种乙 练 35 高中生物学选择性必修3（人教版） 肝疫苗是预防乙肝病毒感染的最有效方 作为对重组DNA分子鉴定和筛选的标 法。乙型肝炎疫苗的研制先后经历了血源 记基因 性疫苗和基因工程疫苗阶段。如图为乙肝 B.用限制酶和DNA连接酶处理目的基因 病毒基因工程疫苗的生产和使用过程，质 和T1质粒，只涉及磷酸二酯键的断裂 粒中lacZ基因可使细菌利用加入培养基 和形成 的物质X-gal,从而使菌落显现出蓝色， C.基因表达载体组件中的起始密码子是 若无该基因，菌落则呈白色。下列相关说 RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动 法不正确的是( 基因转录 EcoR I EcoRV D.目的基因插入Ti质粒的T-DNA上， EcoR V BamH I 农杆菌的转化作用能够使目的基因进 青霉素 _lacZ基因 乙肝病毒 导人大肠杆菌恩外壳 入植物细胞 抗性基因 ② ④ 7.基因工程中因受体细胞不同，目的基因导 ①》重组质粒 注射型接种 BamH I BamH I ⑤1 入的方法也不同，下列叙述错误的是 上目的基因上 出现抗体 () EcoR V EcoR I A.将目的基因导入棉花细胞内常用花粉 A.过程①最好的限制酶选择方案是BamHI 管通道法 和EcoR I B.将目的基因导入老鼠细胞内常用显微 B.为了使重组质粒中目的基因正常表达， 注射法 还需要插入启动子和终止子 C.将目的基因导入大肠杆菌内常用Ca+处 C.过程②需要在培养基中加青霉素和X- 理大肠杆菌 gal筛选白色的大肠杆菌菌落 D.将目的基因导入小麦细胞内常用显微 D.基因工程疫苗比血源性疫苗更安全， 注射法 但仍可能出现病毒增殖和感染 山知识点四目的基因的检测与鉴定 知识点三将目的基因导入受体细胞 8.下列用于判断目的基因是否转移成功的方 6.除草剂的有效成分草甘膦能够专一性抑制 法中，不属于分子检测的是() EPSP合成酶的作用，从而使植物多种代 A.通过观察害虫食用棉花的叶子后是否 谢途径受影响而导致植物死亡。草甘膦没 死亡 有选择性，除掉杂草的同时作物也会受损。： B.利用PCR技术检测目的基因是否插入 培育抗草甘膦作物是解决办法之一，下列 受体细胞的DNA 关于转入外源EPSP合成酶基因使矮牵牛 C.目的基因表达产物蛋白质能否与抗体 抗草甘膦流程的叙述，正确的是(） 形成杂交带 A.载体Ti质粒上的抗生素合成基因通常： D.利用PCR法检测目的基因是否转录形 36)练 第3章基因工程。 成的mRNA C.PCR产物常通过琼脂糖凝胶电泳来 9.科学工作者经研究，发现了数种快速检验 鉴定 禽流感病原体的方法，以正确诊断禽流 D.琼脂糖凝胶电泳的缓冲液中含指示 感。下列与禽流感病原体研究、诊断有关 剂，其可以在紫外灯下被检测出来 的说法，错误的是() 11.现用PCR法检测转基因植株中是否成功 A.镜检法：在光学显微镜下直接观察病 导入了目的基因。PCR反应中加入的模 人的痰液或血液，以发现病原体 板DNA依次为：2号是野生型植株DNA; B.PCR:体外基因复制技术，可在几十分 3号是待检测的载体DNA;4~9号是待 钟内把病原体的基因扩展到数百万倍 检测的转基因植株DNA;I0号是加入等 C.抗原一抗体法：用特殊制备的病原体 量的蒸馏水。琼脂糖凝胶电泳的结果如下 蛋白质与病人血清中的抗体特异性结 图所示：1号为DNA标准样液(Marker), 合，发现病原体 据此做出分析不合理的是()》 D.琼脂糖凝胶电泳：将扩增出的基因通 23456789 10 2 过染色，在波长为300nm的紫外灯下 检测出来 50 100H 2号：野生型植株DNA3号：？ 4-9号：转基因植株DNA l知识点五DNA片段的扩增及电泳鉴定。 A.PCR产物的分子大小在250~500bp 10.下列关于核酸片段的扩增及电泳鉴定的 之间 相关叙述，正确的是() B.3号样品为不含目的基因的载体DNA A.PCR反应缓冲液中一般要添加ATP, C.9号样品对应的植株不是所需的转基 以激活耐高温的DNA聚合酶 因植株 B.mRNA也是核酸，因此可直接用PCR D.10号的电泳结果能确定反应体系等对 扩增仪扩增 实验结果没有干扰 提升练)可 一、不定项选择题 绿色荧光来检测 1.ROP蛋白可参与调节根毛和花粉管的生 B.GFP基因在植物体中表达说明生物体 长。科研人员采用含有GFP(绿色荧光蛋 共用一套密码子表 白)基因的载体构建了ROP-GFP的质粒， C.ROP-GFP质粒的构建需用到限制酶、 并利用农杆菌转化法将其转入植物体内。 DNA聚合酶和载体等工具 下列有关叙述正确的是() D.利用农杆菌转化法可以侵染大多数单 A.外源基因在植物体中是否表达可通过： 子叶植物 37 高中生物学选择性必修3（人教版） 2.农杆菌Ti质粒上的T-DNA可以转移并 B细胞内不含质粒A,也不含质粒A上的 随机插入被侵染植物的染色体DNA中。 基因。下列说法正确的是( 研究者将下图中被侵染植物的DNA片段 a人的生长激素基因注： 连接成环，并以此环为模板，利用PCR ■抗四环素基因 吉合 ☑抗氨苄青霉素基因 技术扩增出T-DNA插入位置两侧的未知 a点为目的基因与质粒A的结合点 序列，以此可确定T-DNA插入的具体位 4画-国型 置。下列说法正确的是( 多本序列引物①TpNA引物②未知字列 A.检测人的生长激素基因在受体细胞中 限制酶切点引物③ 引物④限制酶切点 是否转录出mRNA用抗原一抗体杂交 注：子链从引物的3端开始延伸 技术 A.进行PCR扩增的依据是DNA半保留 B.将完成导入过程后的细菌涂布在含有 复制的原理 氨苄青霉素的培养基上，能生长的是 B.进行PCR扩增需要的酶有解旋酶和耐 导入了重组质粒的细菌 高温DNA聚合酶 C.将完成导入过程后的细菌涂布在含有 C.利用图中的引物②③组合可扩增出两 四环素的培养基上，能生长的是导入 侧的未知序列 了普通质粒A的细菌 D.通过与受体细胞的基因组序列比对， D.目的基因成功表达了的标志是受体细 可确定T-DNA的插入位置 胞能产生人的生长激素 3.下图是利用基因工程培育抗虫植物的流程 二、非选择题 示意图。下列说法错误的是() 5.如图表示某生物DNA结构的一部分及限 质粒 制酶的识别序列和酶切位点，请回答以下 ①重组Ti 质粒 农杆菌 植物 转基因 细胞N 植株M 问题： 抗虫基因 -CCGAATTCGAGCTG CCGAGCTCGG- -GGCTTAAGCTCGAC GGCTCGAGCC- A.①过程中重组Ti质粒的构建需要限制 目的基因序列 酶和DNA连接酶参与 限制酶 识别序列和切割位点 B.②过程中农杆菌的重组Ti质粒整合到 EcoR I GAATTC 了植物细胞的染色体上 BamHI GGATCC C.图中植物细胞N染色体上若含抗虫基 HindⅢ AAGCTT 因就能够表现出抗虫性状 Sac I GAGCT C D.植株M是否发生定向变异需做个体生 物学水平的抗虫性状鉴定 (1)若目的基因为抗虫基因，需要在连接 4.下图是将人的生长激素基因导入细菌B Ti质粒前进行PCR扩增，需要在样 细胞内制“工程菌”的示意图。已知细菌： 本中再加入 一般 38)练 第3章基因工程。 要经历多次循环，每次循环可以分为 构建重组载体需要的酶有 三步。扩增后切割 。在重组质粒上 目的基因，应使用表中的限制酶 插入大肠杆菌复制原点的目的是 这样做的原因是 。 图中的启动子上有 的识别和结合位点，从而驱 (2)若目的基因为胰岛素基因，科研人员 动基因的转录。将重组载体导入大肠 构建了如图所示的重组载体，TetR为 杆菌体内后，将其涂布于含 四环素抗性基因，AmpR为氨苄青霉 的选择培养基上。 素抗性基因。 启动子 TetR 目的基因 大肠杆菌 复制原点中 重组载体 终止子 练（39高中生物学选择性必修3（人教版） 5.C【解析】a为磷酸二酯键，可被限制性内切核 酸酶切断，而限制性内切核酸酶简称为限制酶，又被称 为“分子手术刀”，A错误；a为磷酸二酯键，可被 DNA连接酶连接起来，而DNA连接酶称为分子缝合 针，DNA聚合酶不是基因工程的工具酶，B、D错误； RNA聚合酶可通过识别基因中的特定碱基序列（启动 子)与DNA分子结合，催化转录过程，C正确。 6.C【解析】猪是哺乳动物，其血细胞中主要是红 细胞，成熟红细胞无细胞核，不能提取DNA,一般用 鸡血提取，A错误；DNA在2molL的氯化钠溶液中 溶解度较高，在裂解液中加入NaC溶液并调至2mol/L, 不能析出DNA,B错误：利用DNA不溶于酒精，但 细胞中的其他物质可溶于酒精的特点，可将冷却过的 酒精加人DNA溶液中以降低DNA在其中的溶解 度，C正确；DNA遇二苯胺呈蓝色，需进行沸水浴， D错误。 7.B【解析】哺乳动物成熟的红细胞没有细胞核。 不能用猪血做DNA提取的实验，A错误；提取DNA 时，加入等体积的体积分数为95%的冷酒精，可以提取 出DNA,利用了DNA不溶于酒精的原理，B正确；提 纯时在滤液中加人与滤液体积相等、冷却的酒精溶液后 会出现白色丝状物DNA,但是加人2mol/L的NaCI溶 液，会使DNA溶于NaCI中，C错误；DNA鉴定时可 通过两支试管都加入二苯胺试剂后，比较两支试管溶 液颜色的变化，看看溶解有DNA的溶液是否变蓝，D 错误。 提升练习 1.BCD【解析】大肠杆菌一般不作为外源基因送入 受体细胞的载体，A错误；常用的载体有质粒、噬菌体 的衍生物、动植物病毒等，基因工程中所用的载体是在 天然载体的基础上改造的，B、C、D正确。 2.AC【解析】限制性核酸内切酶和DNA连接酶是 基因工程的工具酶，A正确：DNA连接酶只能催化具有 互补黏性末端或平末端的DNA片段之间形成磷酸二酯 键，B错误；质粒上必须有标记基因才可作为载体，便 于筛选含有目的基因的受体细胞，C正确；限制性内切 核酸酶的作用是不切割自身DNA分子，只切割外源 DNA,以保护自身DNA的安全，D错误。 3.ABD【解析】据图分析可知，限制酶3和4不能 识别并切割含有GTAC序列的DNA片段，A错误； 据图可知，限制酶1和3切割出的黏性末端相同，均为 -GATC,黏性末端上的碱基能互补配对，B错误；据图 可知，限制酶3和4识别的序列都是由6个脱氧核苷酸 对组成的，C正确：限制酶2和4切割出的末端分别 是黏性末端和平末端，不能由T4DNA连接酶拼接，D 50 错误。 4.(1)蛋白质氨基酸(2)GAATTC专一 (3)中轴线E.coli DNA连接酶或T4DNA连接酶 (4)切割外来DNA,起到防御作用 【解析】(1)EcoR I限制酶和SmaI限制酶的化学 本质是蛋白质，蛋白质是生物大分子，其单体是氨 基酸。(2)分析题图1可知，EcoR I限制酶识别的碱 基序列是GAATTC,SmaI限制酶的识别序列是 CCCGGG,EcoR I限制酶和SmaI限制酶的识别序列不 相同，说明限制酶具有专一性。(3)由图2可知，当 限制酶在它识别序列的中轴线切开时，产生的末端是平 末端：DNA连接酶可以连接两个DNA片段，要将图1 中的末端再连接起来，需要用E.coli DNA连接酶或T4 DNA连接酶。(4)1970年，科学家在细菌中发现了第 一个限制酶，而在该细菌中没有此限制酶的识别序列， 推测该限制酶在细菌细胞中的作用可能是切割外来 DNA,起到防御作用。 。"第2节基因工程的基本操作程序 基础练习 1.C【解析】限制酶只能专一地切割DNA,而烟草 花叶病毒的核酸是RNA,所以不可用限制酶切割烟草 花叶病毒的核酸，A错误；不同的限制酶可能选择一样 的DNA特定序列处进行切割，也能切出相同的黏性末 端，所以并不是必须用相同的限制酶处理目的基因和载 体，B错误；DNA连接酶连接具有相同末端的DNA片 段形成磷酸二酯键，C正确；载体上必须有标记基因， 用于检测目的基因是否导入受体细胞从而进行筛选，D 错误。 2.B【解析】需要耐高温的DNA聚合酶，但不需要 解旋酶，A错误：用PCR方法扩增目的基因时，只要知 道目的基因前后的序列用以设计引物就可以，不必知道 基因的全部序列，B正确；95℃时DNA的氢键断开， 两条链解开螺旋，C错误；两引物分别与DNA的两条 互补单链结合，是子链延伸的起点，其引物间碱基序列 不能互补配对，否则会形成引物二聚体，不能有效扩增 目的基因，D错误。 3.B【解析】PCR技术要求两种引物分别和目的基 因的两条单链结合，沿相反的方向合成子链，故所用的 引物组成为图乙中引物甲和引物丙，A正确；构建基因 表达载体时至少保留一个标记基因的完整，便于目的基 因的检测和筛选，图甲中BamH I同时切割两种标记基 因，不能选用BamH I剪切，B错误；图乙中目的基因 左侧只能选BclI，而质粒上没有目的基因右侧Samu3AI 的切点，两者都有HidⅢ的切点，为了防止目的基因 与质粒自身环化，故质粒和目的基因构建表达载体，应 选用BclI和HindⅢ剪切，C正确；在构建基因表达 载体时，使用BclⅡ和HindⅢ两种限制酶切割质粒， 氨苄青霉素抗性基因被破坏，不能表达，四环素抗性基 因能表达，D正确。 4.D【解析】根据题干信息“限制酶I和限制 酶Ⅱ的识别序列和切割位点分别是-G↓GATCC-和 -↓GATC-”,则用限制酶I和限制酶Ⅱ切割DNA后获 得的黏性末端相同，都是-GATC-,A正确；质粒上含 有限制酶Ⅱ的两个酶切位点，若用限制酶Ⅱ切割质粒， 两个标记基因都会被破坏，产生两种DNA分子，B正 确；目的基因两端只含有限制酶I的一个酶切位点，若 用限制酶I切割目的基因，则有两个磷酸二酯键会被水 解，C正确：若用限制酶Ⅱ切割质粒，两个标记基因都 会被破坏，目的基因两端只含有限制酶I的一个酶切位 点，若用限制酶I切割目的基因，不能获得目的基因， 因此质粒用限制酶I切割，目的基因用限制酶Ⅱ切割， D错误 5.D【解析】过程①表示获取目的基因，构建重组 质粒，需要限制酶，BamH I和EcoR I的酶切位点在目 的基因两侧，可以获得完整的目的基因，且质粒上也存 在这两种酶的识别位点，A正确；为了使重组质粒中目 的基因正常表达，需要构建基因表达载体，除了目的基 因、标记基因外，还需要插入启动子和终止子，B正 确；过程②表示将重组质粒导人受体细胞，培养基中加 青毒素和X-gl可以用于筛选含有重组质粒的大肠杆 菌，限制酶BamH I和EcoR I破坏了质粒中lacZ基因. 却保留了青霉素抗性基因，故白色的大肠杆菌菌落即为 所需菌落，C正确；基因工程疫苗由于只利用了乙肝病 毒的外壳，不含其遗传物质，所以不能完成病毒的增殖 和感染，D错误。 6.D【解析】载体Tⅰ质粒上的抗生素抗性基因通常 作为对重组DNA分子鉴定和筛选的标记基因，不是抗 生素合成基因，A错误；用限制酶和DNA连接酶处理 目的基因和Ti质粒，涉及碱基之间的氢键和DNA片段 之间的磷酸二酯键的断裂和形成，B错误：起始密码子 位于mRNA上，RNA聚合酶识别的位点是基因中的启 动子，C错误；由于T-DNA可转移到受体细胞并整合 到受体细胞染色体的DNA上，故目的基因要整合到Ti 质粒的T-DNA上才能成功整合到植物细胞染色体上， D正确。 7.D【解析】将目的基因导入棉花细胞内常用花粉 管通道法，A正确；显微注射技术是将目的基因导人动 物细胞最有效的方法，B正确；Ca2+处理法能使大肠杆 菌细胞的生理状态发生改变，使之成为易于吸收周围环 参考答案与解析⊙ 境中DNA分子的状态，故将目的基因导入大肠杆菌， 应采用Ca2+处理法，C正确；将目的基因导入动物细胞 内常用显微注射法，D错误。 8.A【解析】通过害虫食用棉花的叶子观察其是否 死亡，属于个体水平上的鉴定，A正确；利用PCR技术 检测目的基因是否插人受体细胞的DNA,属于分子水 平上的鉴定，B错误；目的基因表达产物蛋白质能否与 抗体形成杂交带，属于分子水平上的鉴定，C错误；利 用PCR法检测目的基因是否转录形成的mRNA,属于 分子水平上的鉴定，D错误。 9.A【解析】光学显微镜下观察不到病毒，不能检 测病原体的种类，A错误：PCR是利用DNA分子复制 的原理在体外扩增目的基因的技术，利用PCR技术可 在几十分钟内把病原体的基因扩展到数百万倍，B正 确：病原体进入人体后会刺激机体产生特异性免疫反 应，产生相应抗体，由于抗体与抗原结合具有特异性， 因此，抗原通过用特殊制备的病原体蛋白质与病人血清 中的相关抗体特异性结合，通过酶联反应，可以发现病 原体，C正确：可以将扩增出的基因通过染色，在波长 为300nm的紫外灯下检测出来，证明有病原体存在， D正确。 IO.C【解析】耐高温的DNA聚合酶不需要添加 ATP激活，A错误；mRNA是核酸，但不能直接用PCR 扩增仪扩增，需要先逆转录为cDNA再用PCR扩增仪 扩增，B错误；PCR的产物一般通过琼脂糖凝胶电泳来 鉴定，在凝胶中DNA分子的迁移速率与凝胶的浓度、 DNA分子的大小和构象等有关，C正确；琼脂糖凝胶电 泳中的缓冲液中不含指示剂，不能在紫外灯下被检测 出来，凝胶中的DNA分子通过染色，可以在波长为 300nm的紫外灯下被检测出来，D错误。 11.B【解析】PCR过程中，可以通过设计特定的引 物来扩增特定的DNA片段，4~9号是转基因植株，理 论上应包含目的基因，结合2号野生型和10号蒸馏水 组的结果，推测包含目的基因的片段大小应为250500bp, 所以PCR产物的分子大小在250~500bp之间，A正确； 3号PCR结果包含250-500bp片段，应包含目的基因， B错误；9号PCR结果不包含250-500bp片段，所以不 是所需转基因植株，C正确；10号放入蒸馏水，可排除 反应体系等对结果的干扰，由图可知，10号的电泳结果 能确定反应体系等对实验结果没有干扰，D正确。 提升练习 1.AB【解析】导入的载体含有GFP(绿色荧光蛋 白)基因，可以指导绿色荧光蛋白合成，若是在植物体 中表达，则可以表现出绿色荧光，A正确；GFP基因在 植物体中表达，GFP基因在受体中也能转录、翻译为绿 51 高中生物学选择性必修3（人教版） 色荧光蛋白，说明供体和受体共用一套密码子表，B正 确；ROP-GFP质粒的构建需用到限制酶、DNA连接酶 和载体等工具，C错误；由于农杆菌对大多数单子叶植 物没有感染能力，因此将目的基因导入这类植物的时 候，一般不采用这种方法，D错误。 2.AD【解析】PCR扩增依据的是DNA半保留复制 的原理，A正确；进行PCR扩增需要耐高温的DNA聚 合酶(TagDNA聚合酶)，但不需要解旋酶，B错误； DNA的两条链反向平行，子链从引物的3'端开始延伸， 则利用图中的引物①④组合可扩增出两侧的未知序列， C错误；通过与受体细胞的基因组序列比对，即可确定 T-DNA的插入位置，D正确。 3.BC【解析】重组Ti质粒的构建过程中需要用到 限制酶和DNA连接酶，A正确：②过程中重组Ti质粒 上的T-DNA整合到植物细胞的染色体上，B错误；如 果受体细胞的染色体上含有抗虫基因，只能说明抗虫基 因成功整合到受体细胞的染色体上，不代表该基因就一 定能成功表达，因此不能确定是否会表现出抗虫性状， C错误：检测植株M是否能表现出抗虫的性状，需要进 行个体水平检测，即进行抗虫接种实验，若抗虫，说明 植株M发生了定向变异，D正确 4.CD【解析】检测人的生长激素基因在受体细胞 中是否转录出mRNA用PCR技术，A错误：根据题意， 细菌B不含有质粒A及其上的基因，即没有抗氨苄青 霉素基因；质粒含抗四环素基因和抗氨苄青毒素基因， 基因发生重组时抗四环素基因被破坏，抗氨苄青霉素基 因被保留，故在含氨苄青霉素的培养基上能生长的是导 入了普通质粒或者重组质粒的细菌，B错误；同理，在 含四环素的培养基上，能生长的是导入了普通质粒A的 细菌，C正确：目的基因成功表达的标志是受体细胞能 产生出人的生长激素，D正确。 5.(1)引物、原料（或脱氧核苷酸）、酶（耐高温 的DNA聚合酶)变性、复性、延伸EcoR I和SacI 可以防止目的基因和Ti质粒自身环化（保证Ti质粒 与目的基因的正确连接)(2)DNA连接酶和限制酶 使重组载体能在大肠杆菌中复制扩增RNA聚合酶 氨苄青毒素 【解析】(1)若目的基因为抗虫基因，需要在连接 Ti质粒前进行PCR扩增，根据PCR技术需要的条件， 在样本中需要再加入引物、原料（或脱氧核苷酸）、酶 (耐高温的DNA聚合酶)，一般要经历多次循环，每次 循环可以分为变性、复性、延伸三步。扩增后切割目的 基因，根据限制酶识别的序列可以看出，应使用表中的 限制酶EcoR I和SacI切割图中的目的基因，这样做使 目的基因两端产生了不同的黏性末端，这样可以在目的 52 基因和质粒连接时，防止目的基因和T质粒自身环化， 保证Ti质粒与目的基因的正确连接。(2)DNA连接酶 和限制酶是构建重组载体需要的工具酶。在重组质粒上 插人大肠杆菌复制原点可保证重组载体在大肠杆菌中复 制扩增。图中的启动子上有与RNA聚合酶识别和结合 位点，从而驱动基因的转录，便于基因的正常表达。 将重组载体导入大肠杆菌体内后，将其涂布于含氨苄青 霉素的选择培养基上，在其上能正常生长的大肠杆菌是 成功导人目的基因的大肠杆菌。 >m第3节基因工程的应用 基础练习 1.D【解析】乳腺生物反应器生产药用蛋白属于动 物基因工程技术的应用，A错误；培育抗除草剂的作物 新品种属于植物基因工程技术的应用，B错误；利用微 生物生产重组人干扰素属于基因工程技术的应用，C错 误；用高产青毒菌生产青霉素属于诱变育种，不属于基 因工程成果，D正确。 2.A【解析】若将治疗遗传性囊性纤维病的正常基 因转入患者的体细胞中使其正常表达，则不会通过遗传 传递给子代，A正确；将治疗乙型肝炎的重组人干扰素 -1b基因转入大肠杆菌，筛选获得基因工程菌，重组 质粒能随细菌分裂而遗传给后代，B错误；将鱼的抗冻 蛋白基因导入番茄，培育出的耐寒的番茄植株细胞中都 含鱼的抗冻蛋白基因，因而能遗传给后代，C错误；将 外源生长激素基因导入鲤鱼受精卵，培育出转基因鲤鱼 细胞中都含外源生长激素基因，因而能遗传给后代，D 错误。 3.D【解析】植物基因工程技术的主要应用之一是 提高农作物的抗逆能力，如抗寒性、抗旱性等，A正 确；遗传密码具有通用性，生物界共用一套遗传密码， 故原核生物的基因能够在真核生物中表达，B正确；制 备乳腺生物反应器时，将目的基因（药用蛋白基因）和 乳腺中特异表达的基因的启动子重组，转基因动物就能 通过分泌乳汁来生产药品，称为乳腺生物反应器，C正 确：将肠乳糖酶基因导人奶牛受精卵中，得到转基因奶 牛，分泌的乳汁中，乳糖含量降低，D错误。 4.C【解析】用基因工程培育的抗虫植物能抗虫， 但不是所有害虫，A错误：基因工程在畜牧业上的应用 主要是提高动物生长速度、改善畜产品品质、用转基因 动物生产药物，B错误；基因工程可用来培育高产、稳 产、品质优良和抗逆性强的作物，C正确；科学家将必 需氨基酸含量多的基因导人植物中，以提高氨基酸的含 量，D错误。 5.D【解析】转基因克隆猪的培育过程中，需要用