第38讲 微生物的培养技术和应用（复习课件）（山东专用）高考生物一轮复习讲练测

该高中生物学高考复习课件聚焦“微生物的培养技术和应用”专题，依据高考评价体系梳理了培养基配制、无菌技术、纯培养、选择培养及计数五大核心考点，结合山东卷6年真题分析，明确“无菌技术”“稀释涂布平板法”等高频考点（6年3考），归纳出选择题为主的3类常考题型，体现备考针对性。 课件亮点在于“考点突破+真题精析+易错警示”策略，通过对比消毒与灭菌的科学思维训练，结合2025年山东真题解析平板划线法操作要点，培养探究实践能力。特设易错易混点（如“先灭菌再调pH”误区）及答题模板，助力学生掌握实验设计逻辑，教师可精准指导复习，提升备考效率。

讲师：xxx 2026年高考一轮复习 山东专用 第38讲 微生物的培养技术和应用 1 教材深度拓展 01 考情解码·考点定标 智能导览·极速定位 02 体系构建·思维领航 03 考点突破·考向探究 04 真题感知·命题洞见 考点一 微生物的培养技术及应用 知识点一 培养基的配制 知识点二 无菌技术 知识点三 微生物的纯培养 考向1：培养基的配制和无菌技术 考向2：微生物的纯培养 考向3：微生物的分离与培养 考点二 微生物的选择培养和计数 知识点一 选择培养基 知识点二 选择培养基与鉴别培养基的比较 知识点三 微生物的选择培养与数量测定 知识点四 土壤中分解尿素细菌的分离与计数 考向1：微生物的选择培养 考向2：稀释涂布平板法的相关知识 05 学以致用·能力提升 山东卷历年真题 01 考情解码·考点定标 考点要求 考查形式 山东卷真题展示 阐明在发酵工程中灭菌是获得纯净的微生物培养物的基础。举例说明通过调整培养基的配方可有目的的培养某种微生物。 选择题 2021·T14、2021·T20、2023·T15、 （6年3考） 概述平板划线法和稀释涂布平板法是实验室中进行微生物分离和纯化的常用方法概述稀释涂布平板法和显微镜计数法是测定微生物数量的常用方法。 选择题 2024·T15、2025·T15 （6年2考） 考情解码·考点定标 山东专用 | 高考生物 4 考情分析 1.地位：在高考中是必考内容。 2.考查难度、形式及分值：试题难度不大，选择题，2-3分。 3.考查内容：新情境下考查微生物培养操作技术，注重对实验设计、结果分析及解决实际问题能力；考生需要熟练掌握相关实验操作和原理；微生物的应用，如利用微生物降解污染物等。 4.备考聚焦：理解微生物培养技术的原理和方法；熟练掌握培养基配制、无菌技术、接种操作、微生物计数等核心知识点。联系生产实际，强化实验思维及真题训练。 复习目标 1.获得纯净的微生物培养物是发酵工程的基础。 2.阐明在发酵工程中灭菌是获得纯净的微生物培养物的基础。 3.阐明无菌技术是在操作过程中，保持无菌物品和无菌区域不被微生物污染的技术。 4.举例说明通过调整培养基的配方可有目的的培养某种微生物。 5.概述平板划线法和稀释涂布平板法是实验室中进行微生物分离和纯化的常用方法。 6.概述稀释涂布平板法和显微镜计数法是测定微生物数量的常用方法。 考情解码·考点定标 5 02 体系构建·思维领航 选择培养基 微生物的基本培养技术 微生物的基本培养技术 微生物的选择培养和计数 微生物的基本培养技术 培养基的配制 无菌技术 微生物的纯培养 微生物选择培养 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 微生物数量测定 消毒 灭菌 稀释涂布平板法 平板划线法 间接计数法—稀释涂布平板法 直接计数—计数板计数法 培养基的制备 实验设计 微生物的培养技术和应用 03 考点突破·考向探究 考点一 知识点一  培养基的配制 知识夯基 考向研析 微生物的基本培养技术 1.培养基：人们按照微生物对________的不同需求，配制出供其_________的营养基质。 营养物质 2.培养基的种类 划分依据 名称 用途 物理性质 __________ 工业生产 __________ 微生物的分离、鉴定、活菌计数 用途 __________ 富集、分离出特定的微生物 __________ 鉴别不同种类的微生物 生长繁殖 液体培养基 固体培养基 选择培养基 鉴别培养基 判断固体培养基和液体培养基的关键：是否含有凝固剂琼脂。　　　 考点一 知识点一  培养基的配制 知识夯基 考向研析 微生物的基本培养技术 3.培养基的配方 （1）主要营养物质：水、______、氮源、________。 其他条件：pH、______________和氧气。 碳源 无机盐 特殊营养物质 微生物 乳酸杆菌 霉菌 细菌 厌氧微生物 特殊需求 添加________ pH调至______ pH调至 ______________ ______ 维生素 酸性 中性或弱碱性 无氧 （2）特殊条件： 知识点一 培养基 知识夯基 考向研析 考点一 微生物的培养技术 （3）常见微生物的营养和能量来源 微生物 碳源 氮源 能源 蓝细菌 CO2 光能 硝化细菌 CO2 NH3 NH3的氧化 根瘤菌 糖类等有机物 N2 有机物 大肠杆菌 糖类、蛋白质等有机物 蛋白质等 有机物 自养 微生物 异养 微生物 1.目的： 2.关键： 3.方法： 获得 的微生物培养物。 纯净 防止 污染。 杂菌 消毒与灭菌 项目 消毒 灭菌 作用强度 较为 的理化因素 的理化因素 作用程度 杀死物体表面或内部________ 微生物 杀死物体内外的 微生物 芽孢和孢子 一般不能杀灭 能杀灭 温和 强烈 一部分 所有 考点一 微生物的基本培养技术 知识夯基 考向研析 知识点二   无菌技术 特别提醒： 消毒对象是实验验操作的空间、操作者衣着和双手，而灭菌对象是微生物培养器皿、接种用具和培养基等 消毒与灭菌的比较： 类型 适用范围 操作方法 消 毒 灭 菌 较为温和理化方法，杀死部分微生物(不包括芽孢、孢子) 强烈的理化方法，杀死所有微生物(包括芽孢、孢子) 煮沸消毒法 日常生活用品 100 ℃煮沸5～6 min 巴氏消毒法 不耐高温的液体 63～65 ℃煮30 min或72-76 ℃处理15s或80-85 ℃处理10-15s 化学药物消毒 生物活体、水源等 擦拭等,如用酒精擦拭双手、用氯气消毒水源 紫外线消毒法 紫外线照射30 min 灼烧灭菌 接种的金属工具、接种时用的试管口或瓶口等 直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧 干热灭菌 耐高温、需要保持干燥的物品,如玻璃器皿和金属用具等 物品放入干热灭菌箱,160～170 ℃热空气维持1～2h 湿热灭菌 培养基、培养皿等,生产和实验室常用 高压蒸汽灭菌锅内,100 kPa,温度121 ℃,15～30 min 接种室、接种箱，超净工作台 知识点二   无菌技术 最常用的接种方法是______________和__________________。 灭菌 分离 平板划线法 稀释涂布平板法 ①培养物： ②纯培养物： 接种于培养基内，在合适条件下形成的含特定种类微生物的群体 ③纯培养： 获得纯培养物的过程 (1)培养物、纯培养物、纯培养的概念 (2)菌落的概念 由一个微生物细胞繁殖而来的肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体。 配制培养基、________、接种、________和培养等。 由单一个体繁殖所获得的微生物群体 概念： 步骤： ④接种方法： 1.概念 考点一 微生物的基本培养技术 知识夯基 考向研析 知识点三 微生物的纯培养 2.酵母菌纯培养的操作步骤：配置培养基、灭菌、接种、分离和培养 15～20 g琼脂 湿热灭菌(高压蒸汽灭菌)法 干热灭菌 调pH在灭菌之前 考点一 微生物的基本培养技术 知识夯基 考向研析 知识点三 微生物的纯培养 2.酵母菌纯培养的操作步骤：配置培养基、灭菌、接种、分离和培养 酒精灯火焰 灼烧灭菌 考点一 微生物的基本培养技术 知识夯基 考向研析 知识点三 微生物的纯培养 2.酵母菌纯培养的操作步骤：配置培养基、灭菌、接种、分离和培养 防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染 倒平板注意事项： 考点一 微生物的基本培养技术 知识夯基 考向研析 知识点三 微生物的纯培养 温度：50℃左右；操作：在酒精灯火焰附近且冷凝后平板倒置 平板划线法 恒温培养箱 28 做对照，检测培养基灭菌是否合格 2.酵母菌纯培养的操作步骤：配置培养基、灭菌、接种、分离和培养 考点一 微生物的基本培养技术 知识夯基 考向研析 知识点三微生物的纯培养 知识夯基 考向研析 考点一 微生物的培养技术 平板划线法 方法： 结果分析： ①在未接种的培养基表面是否有菌落生长。（对照组） ②在接种酵母菌的培养基上是否可观察到菌落颜色、形状、大小基本一致，并符合酵母菌菌落特点的单菌落。（实验组） 知识点三微生物的纯培养 2.酵母菌纯培养的操作步骤：配置培养基、灭菌、接种、分离和培养 3.平板划线法操作步骤： 第1区划线 接种环灭菌 第2区划线 接种环灭菌 第3区划线 接种环灭菌 接种环灭菌 1 2 3 4 5 ①接种环只蘸一次菌液,在培养基不同位置连续划线多次 ②划线首尾不能相接 ③每次划线前接种环进行灼烧灭菌，待冷却后再开始画线 ④划线后,培养皿倒置培养 【平板划线法注意事项】 知识点三微生物的纯培养 知识夯基 考向研析 考点一 微生物的基本培养技术 易错易混点 (1)消毒的原则是既杀死材料表面的微生物,又减少消毒剂对细胞的伤害。(　　) (2)无菌操作的对象只要是没有生物活性的材料(如培养基、接种环等)都可采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌。(　　) (3)倒平板时,应将打开的皿盖放到一边,以免培养基溅到皿盖上。(　　) (4)平板划线法中每一次划线前要将接种环灼烧。(　　) (5)配制培养基时应先灭菌再调pH。(　　) (6)为了防止污染,接种环经灼烧灭菌后应趁热快速挑取菌落。(　　) √ × √ × × × 1.（2022·山东·一模）地衣芽孢杆菌具有调节动物肠道微生态平衡，增加动物机体抗病力的功能。仔兔饲喂地衣芽孢杆菌20～40天后，其免疫器官生长发育迅速，血中T淋巴细胞值较对照组高。下列叙述不正确的是（    ） A．培养地衣芽孢杆菌时，需要将培养基调至酸性 B．可用液体培养基对地衣芽孢杆菌进行扩大培养 C．使用后的培养基在丢弃前要经过灭菌处理 D．地衣芽孢杆菌改变了仔兔肠道菌群的结构 A 知识夯基 考向研析 考向1 培养基的配置和无菌技术 考点一 微生物的培养技术及应用 地衣芽孢杆菌属于细菌，其培养基是中性或弱碱性的。 [解析] 沸盐水需要冷却后加入坛中，防止杀死菜料表面的乳酸菌，A错误；盐水需要浸没全部菜料，主要目的是制造无氧环境，有利于乳酸菌无氧呼吸，B错误；盖好坛盖后，向坛盖边沿的水槽中注满水，目的是排气减压、隔绝空气、防止杂菌污染等，C正确；整个发酵过程中，亚硝酸盐的含量变化是先增加后逐渐下降并趋于相对稳定，不是一直降低，D错误。 2.（22-23高三上·山东日照·期末）我国科学家从北极分离、鉴定出了一种耐冷细菌，过程如下：①接种在人造海水中，15℃条件下振荡培养3h；②梯度稀释后将样品涂布在TYS培养基中，15℃条件下培养7d；③挑取生长菌落，进行划线，15℃条件下培养；④选择不同形态的菌落进行培养、鉴定和保藏。下列叙述错误的是（    ） A．过程①中的振荡培养可以提高培养液中的溶氧量 B．过程②中的TYS培养基灭菌前需将pH调至酸性 C．过程②③使用的接种器具均需灼烧并冷却后接种 D．涂布后再次划线培养的目的是进一步纯化所得菌种 B 知识夯基 考向研析 考向1 培养基的配置和无菌技术 考点一 微生物的培养技术及应用 过程②中的TYS培养基灭菌前需将pH调至酸性，会破坏该细菌的细胞结构，应将pH调至中性或弱碱性。 [解析] 沸盐水需要冷却后加入坛中，防止杀死菜料表面的乳酸菌，A错误；盐水需要浸没全部菜料，主要目的是制造无氧环境，有利于乳酸菌无氧呼吸，B错误；盖好坛盖后，向坛盖边沿的水槽中注满水，目的是排气减压、隔绝空气、防止杂菌污染等，C正确；整个发酵过程中，亚硝酸盐的含量变化是先增加后逐渐下降并趋于相对稳定，不是一直降低，D错误。 3. (2023·山东滨州·二模）土壤中的部分细菌处于“寡营养”状态，若这些细菌过度摄入营养物质，则会破坏细胞的 结构甚至导致死亡。在人工培养基上，高浓度营养物质比较适合生长快的微生物，但会抑制生长较慢的微生物。下列说法错误的是（    ） A．筛选“寡营养”状态微生物时，可降低营养物质的浓度 B．在不更换培养液的条件下，培养后期可能更有利于生长较慢的微生物生长 C．与普通培养基相比，选择培养基上生长的微生物种类一般较少 D．“寡营养”状态微生物可在不含碳源的培养基上正常生长 D 知识夯基 考向研析 考向1 培养基的配置和无菌技术 考点一 微生物的培养技术及应用 “寡营养”状态微生物需要碳源，不含碳源的培养基上不能正常生长 。 [解析] 沸盐水需要冷却后加入坛中，防止杀死菜料表面的乳酸菌，A错误；盐水需要浸没全部菜料，主要目的是制造无氧环境，有利于乳酸菌无氧呼吸，B错误；盖好坛盖后，向坛盖边沿的水槽中注满水，目的是排气减压、隔绝空气、防止杂菌污染等，C正确；整个发酵过程中，亚硝酸盐的含量变化是先增加后逐渐下降并趋于相对稳定，不是一直降低，D错误。 1.（2025·山东济宁·一模）在微生物的培养过程中，下列实验操作规范的是（    ） A．制作培养基的过程中先灭菌再调整pH B．微生物培养过程中可以使用平板划线法进行计数 C．使用刚果红培养基选择性培养土壤中分解纤维素的微生物 D．待培养基冷却至50℃左右时在酒精灯火焰附近倒平板制备培养基 D 知识夯基 考向研析 考向2  微生物的纯培养 考点一 微生物的培养技术及应用 先调整PH再灭菌 平板划线法的目的主要是分离纯化微生物，不能用于准确计数。 C. 刚果红能与纤维素形成红色复合物，当纤维素被分解后，红色复合物无法形成，会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，所以刚果红培养基可用于鉴别土壤中分解纤维素的微生物，而不是选择性培养 [解析] 沸盐水需要冷却后加入坛中，防止杀死菜料表面的乳酸菌，A错误；盐水需要浸没全部菜料，主要目的是制造无氧环境，有利于乳酸菌无氧呼吸，B错误；盖好坛盖后，向坛盖边沿的水槽中注满水，目的是排气减压、隔绝空气、防止杂菌污染等，C正确；整个发酵过程中，亚硝酸盐的含量变化是先增加后逐渐下降并趋于相对稳定，不是一直降低，D错误。 2.（2023·山东·模拟预测）金黄色葡萄球菌是人类的一种重要病原菌，会引起许多严重感染，它可耐受质量分数为7.5%的NaCl溶液。金黄色葡萄球菌在添加适量血液的血平板上生长时，可破坏菌落周围的红细胞，使其褪色。为检测鲜牛奶中是否存在金黄色葡萄球菌，科研人员设计了如图所示的流程。下列有关叙述错误的是（    ） A 知识夯基 考向研析 考向2  微生物的纯培养 考点一 微生物的培养技术及应用 金黄色葡萄球菌可耐受质量分数为7.5%的NaCl溶液，故振荡培养时应选用含质量分数为7.5%NaCl溶液的选择培养基，从而将金黄色葡萄球菌筛选出来 A．振荡培养时选用含质量分数为7.5%NaCl溶液的目的鉴别金黄色葡萄球菌 B．振荡培养可使微生物与营养物质充分接触，提高培养液中的氧气含量 C．若血平板中菌落周围出现透明圈，则初步说明鲜牛奶中存在金黄色葡萄球菌 D．为使检测更严谨，应设置加灭菌的鲜牛奶但其他操作均与图示相同的对照组 [解析] 沸盐水需要冷却后加入坛中，防止杀死菜料表面的乳酸菌，A错误；盐水需要浸没全部菜料，主要目的是制造无氧环境，有利于乳酸菌无氧呼吸，B错误；盖好坛盖后，向坛盖边沿的水槽中注满水，目的是排气减压、隔绝空气、防止杂菌污染等，C正确；整个发酵过程中，亚硝酸盐的含量变化是先增加后逐渐下降并趋于相对稳定，不是一直降低，D错误。 3. （2023·山东淄博·二模）碳酸钙可被有机酸分解，为从酸奶中分离乳酸菌，用完全培养基进行筛选，结果如图。下列说法正确的是（    ） C 知识夯基 考向研析 考向2  微生物的纯培养 考点一 微生物的培养技术及应用 Ⅲ区的单菌落可能由同一个细菌或多个细菌繁殖而来的子细胞群体 A．完成倒平板后，需在平板上加入碳酸钙 B．Ⅲ区的单菌落一定是由一个细胞增殖而来 C．在接种I区、Ⅱ区前，接种针均需灼烧灭菌 D．周围有透明圈的菌落均为乳酸菌菌落 灭菌后在未凝固的培养基中加入无菌碳酸钙粉末、充分混匀后倒平板 碳酸钙可被有机酸分解，故周围有透明圈的菌落不一定都为乳酸菌菌落，也可能是其他产酸的微生物 [解析] 沸盐水需要冷却后加入坛中，防止杀死菜料表面的乳酸菌，A错误；盐水需要浸没全部菜料，主要目的是制造无氧环境，有利于乳酸菌无氧呼吸，B错误；盖好坛盖后，向坛盖边沿的水槽中注满水，目的是排气减压、隔绝空气、防止杂菌污染等，C正确；整个发酵过程中，亚硝酸盐的含量变化是先增加后逐渐下降并趋于相对稳定，不是一直降低，D错误。 1．（2024·山东滨州·一模）下列有关微生物的分离、培养及计数的相关说法，正确的是（　　） A．培养霉菌时一般需要将培养基调至中性或碱性 B．用平板划线法分离菌种，划线5个区域，接种环需要灼烧灭菌6次 C．用稀释涂布平板法进行微生物计数时，结果往往比实际值偏高 D．接种、分离后使用过的器皿须先洗涤再彻底灭菌 B 知识夯基 考向研析 考向3  微生物的分离与培养 考点一 微生物的培养技术及应用 酸性 C.当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落所以，偏低 D.先灭菌 [解析] 沸盐水需要冷却后加入坛中，防止杀死菜料表面的乳酸菌，A错误；盐水需要浸没全部菜料，主要目的是制造无氧环境，有利于乳酸菌无氧呼吸，B错误；盖好坛盖后，向坛盖边沿的水槽中注满水，目的是排气减压、隔绝空气、防止杂菌污染等，C正确；整个发酵过程中，亚硝酸盐的含量变化是先增加后逐渐下降并趋于相对稳定，不是一直降低，D错误。 2.（2023·山东聊城·一模）三糖铁（TSI）培养基含有牛肉膏、蛋白胨、蔗糖、乳糖、微量葡萄糖、硫酸亚铁、氯化钠、酚红、琼脂等成分，可根据观察单一细菌对三种糖的分解能力及是否产生硫化氢，来鉴别细菌的种类。操作流程如下：使用笔直的接种针挑取待测菌落，将接种针平稳刺入三糖铁固体斜面培养基内，然后沿原穿刺途径慢慢抽出接种针，最后在斜面上进行“之”字划线，36℃下培养18～24h，观察实验结果（酚红在酸性条件下显黄色，在碱性条件下显红色；硫化氢与铁盐反应生成黑色沉淀）。下列叙述错误的是（　　） A．先穿刺接种再进行“之”字划线，可以兼顾厌氧菌和好氧菌的培养与观察 B．若底层穿刺线四周出现扩散生长现象，可推测细菌是可以运动的 C．若培养基出现黑色沉淀，可推测该细菌能够分解牛肉膏、蛋白胨 D．若细菌能分解乳糖而产酸、产CO2，推测斜面为黄色、底层为红色且有气泡 D 知识夯基 考向研析 考向3  微生物的分离与培养 考点一 微生物的培养技术及应用 当细菌分解葡萄糖、乳糖产酸产气，使斜面与底层均成黄色 A、 “之”字划线一般适用于分离本身在此培养基上单一且黏性较大的菌类或可疑菌落的纯培养，可以兼顾厌氧菌和好氧菌的培养与观察，A正确； B、细菌有运动能力，可由穿刺线向四周扩散生长，B正确； C、牛肉膏、蛋白胨中含有蛋白质，细菌产生的硫化氢与铁盐反应生成黑色沉淀。若培养基出现黑色沉淀，可推测该细菌能够分解牛肉膏、蛋白胨，产生硫化氢，C正确； [解析] 沸盐水需要冷却后加入坛中，防止杀死菜料表面的乳酸菌，A错误；盐水需要浸没全部菜料，主要目的是制造无氧环境，有利于乳酸菌无氧呼吸，B错误；盖好坛盖后，向坛盖边沿的水槽中注满水，目的是排气减压、隔绝空气、防止杂菌污染等，C正确；整个发酵过程中，亚硝酸盐的含量变化是先增加后逐渐下降并趋于相对稳定，不是一直降低，D错误。 3.（2024·山东淄博·二模）DDT（C14H9Cl5）是20世纪上半叶曾在世界范围内被广泛使用的杀虫剂，因难以降解而被禁用。土壤中的某些微生物能降解DDT，分离、纯化DDT降解菌的过程如图。下列说法错误的是（    ） C 知识夯基 考向研析 考向3  微生物的分离与培养 考点一 微生物的培养技术及应用 ①区域的菌体密集，而②③部位的菌体形成了单个菌落，因此划线纯化时，划线顺序为①区→②区→③区 A．通常采用干热灭菌法对培养皿进行灭菌处理 B．选择培养和纯化培养时培养基应以DDT为唯一碳源 C．划线纯化时，划线顺序为③区→②区→①区 D．保存菌种时，减少菌种的传代次数可减少菌种衰退 [解析] 沸盐水需要冷却后加入坛中，防止杀死菜料表面的乳酸菌，A错误；盐水需要浸没全部菜料，主要目的是制造无氧环境，有利于乳酸菌无氧呼吸，B错误；盖好坛盖后，向坛盖边沿的水槽中注满水，目的是排气减压、隔绝空气、防止杂菌污染等，C正确；整个发酵过程中，亚硝酸盐的含量变化是先增加后逐渐下降并趋于相对稳定，不是一直降低，D错误。 考点二 知识点1  选择培养基 知识夯基 考向研析 微生物的选择培养和计数 1.选择培养基 将允许特定种类的微生物生长，同时____________其他种类微生物生长的培养基。 2.常见选择培养基 抑制或阻止 目的 培养基特点 筛选分解尿素的细菌 筛选耐高温的微生物 筛选利用大气中N2的微生物 筛选出真菌 筛选出自养微生物 以尿素为唯一氮源的培养基 将培养基放在高温环境中培养 缺少氮源的培养基 含青霉素的培养基 无机碳源的培养基 考点二 知识点一  选择培养基 知识夯基 考向研析 微生物的选择培养和计数 怎么证明一个选择培养基具有选择性呢？ 设置基础培养基（如牛肉膏蛋白胨培养基）或完全培养基作为对照，若基础培养基或完全培养基中生长的菌落数菌多于该选择培养基，则该选择培养基具有选择性。 知识夯基 考向研析 考点二 微生物的选择培养和计数 知识点二  选择培养基和鉴别培养基的比较 种类 制备方法 原理 用途 举例 选择培养基 培养基中加入某些化学物质 依据微生物对某些物质的特殊需求或抗性 从众多微生物中分离所需的微生物 加入青霉素　分离得到酵母菌和霉菌　  鉴别培 养基 培养基中加入某种指示剂或化学药品 产生特定的颜色或其他变化 鉴别不同种类的微生物 用 伊红—亚甲蓝培养基鉴别大肠杆菌  考点二 知识点三 微生物的选择培养与数量测定 知识夯基 考向研析 微生物的选择培养和计数 1.稀释涂布平板法 当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过计数平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌 1.原理： 恰当的稀释度、涂布是否均匀是成功统计菌落数目的关键 2.关键： 3.计数原则: 选择30-300个菌落的平板进行计数；每个稀释度至少取3个平板取其平均值； 用此种方法统计的菌落数目往往比活菌的实际数目低，因为 4.误差分析: 当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落 细菌适宜在酸碱度接近中性的潮湿土壤中生长，绝大多数分布在距地表3~8cm的土壤层。取样时，一般要铲去表层土。 取样时用的铁铲和取样纸袋在使用前都需要灭菌，操作完整后，一定要洗手。 考点二 微生物的选择培养和计数 知识点三 微生物的选择培养与数量测定 知识夯基 考向研析 4.稀释涂布平板法步骤：（1）土壤取样 1.稀释涂布平板法 将10g土样加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀。取1mL上清液加入盛有9mL无菌水的试管中，依次等比稀释。 1×10 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL 1×102 1×103 1×104 1×105 1×106 1×107 10g 9 mL 无菌水 90mL无菌水 知识夯基 考向研析 4.稀释涂布平板法步骤：（2）样品的稀释 考点二微生物的选择培养和计数 知识点三 微生物的选择培养与数量测定 1.稀释涂布平板法 考点二 微生物的选择培养基和计数 序号 图示 操作 1   取0.1 mL菌液，滴加到培养基表面   2   将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中 3   将沾有少量酒精的涂布器在火焰上灼烧，待酒精燃尽、涂布器冷却后，再进行涂布 4   用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使菌液涂布均匀 知识点三 微生物的选择培养与数量测定 4.稀释涂布平板法步骤：（3）样品的涂布 1.稀释涂布平板法 ①待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板倒置（同时放一个未接种的培养基），放入30~37℃的恒温培养箱中培养1~2d。 ②每隔24h统计一次菌落数目，选取菌落数目稳定时的记录作为结果，防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。 ③一般来说，在相同的培养条件下，同种微生物表现出稳定的菌落特征 注意： 培养未接种的培养基的作用是对照。 知识夯基 考向研析 考点二微生物的选择培养和计数 知识点三 微生物的选择培养与数量测定 4.稀释涂布平板法步骤（4）微生物的观察与培养 1.稀释涂布平板法 考点二 知识点三 微生物的选择培养与数量测定 知识夯基 考向研析 微生物的选择培养和计数 1.稀释涂布平板法 用此种方法统计的菌落数目往往比活菌的实际数目低，因为？ 4.稀释涂布平板法步骤 (5)数据误差分析: 当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落 考点二 知识点三微生物的选择培养与数量测定 知识夯基 考向研析 微生物的选择培养和计数 2.显微镜直接计数法 缺点：不能区分死菌和活菌使计数偏大 思考:为了避免上述缺点，我们该如何做？ 可以染色（如使用台盼蓝，死细胞会被染成蓝色）后再进行显微镜计数。 知识夯基 考向研析 考点二 微生物的选择培养与计数 项目 直接计数法 间接计数法 原理 利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量 当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌 主要用具 显微镜、细菌计数板 培养基 计数数据 菌体本身 培养基上菌落数 优点 计数方便、操作简单 计数的是活菌 缺点 死菌、活菌都计算在内 操作较复杂，有一定误差 计算公式 每毫升原液含菌数=每小格平均菌体数×400×10000×稀释倍数 每毫升原液含菌数=培养基上平均菌落数×稀释倍数÷涂布液体积 比较稀释涂布平板法和显微镜直接计数法 知识点三 微生物的选择培养与数量测定 考点二 微生物的选择培养基和计数 知识点四 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 2.培养基的设置： 尿素［CO(NH2)2］含氮量高，化学性质稳定，是现代农业生产中一种重要的氮肥。尿素被土壤中某些细菌分解成NH3,再被转化为NO3-、NH4+等被植物吸收。这些细菌之所以能分解尿素，是因为能合成脲酶，来催化尿素分解。 你如何设计培养基配方，将土壤稀释液中能分解尿素的细菌分离出来？ 培养基添加尿素作唯一氮源，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素、缺乏氮源而不能生长发育繁殖。 除以尿素作为唯一氮源外，该培养基的其他营养成分与普通培养基基本相同。 1.原理： 知识夯基 考向研析 注意：(1)每个浓度设置了 个平板， 3个平板是选择培养基（ 实验）， 1个平板为 培养基（条件对照：验证选择培养基是否具有选择作用）； (2)另外，整个实验还要设置 个空白 对照平板：未接种的_____________ _____________培养基，以验证培养基 中是否有杂菌污染。 4 重复 牛肉膏蛋白胨 2 选择培养基和 牛肉膏蛋白胨 取样、样品的稀释与涂布平板、培养观察 知识夯基 考向研析 考点二 微生物的选择培养与计数 知识点四 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 3.步骤： 知识夯基 考向研析 考点二 微生物的基本培养技术 易错易混点 (1)血细胞计数板既可用于酵母菌的数量测定，也可用于细菌的数量测定。( ) (2)某同学欲分离产脲酶菌，可在选择培养基中添加尿素作为唯一氮源。( ) (3)稀释涂布平板法和平板划线法均能得到单菌落，都可用于细菌计数。 ( ) (4)利用尿素固体培养基可迅速杀死其他微生物，而保留利用尿素的微生物。( ) (5)稀释涂布平板法计数时，平板上的一个菌落就是一个细菌( ) √ × × × × 1.（2025·山东济南·一模）科研人员先在12个固体培养基上各涂以数目相等（约5×104个）的对T1噬菌体敏感的大肠杆菌，经5h培养后，平板上长出大量的微菌落（约5100个细胞/菌落）。取其中6个（A组）直接喷上T1噬菌体，另6个（B组）则先用灭菌后的涂布器把平板上的微菌落重新均匀涂布一遍，然后喷上等量T1噬菌体。培养后计算这两组平板上形成的抗T1噬菌体的菌落数。结果发现，A组长出28个菌落，B组长出353个菌落。下列说法正确的是（    ） A．该实验使用了稀释涂布平板法对微菌落进行计数 B．B组中所使用的培养基为选择培养基 C．B组的涂布使单个抗T1噬菌体自发突变大肠杆菌形成一个菌落的概率增加 D．该实验证明重新涂布后再喷T1噬菌体导致了抗性突变的大量发生 C 知识夯基 考向研析 考向1   微生物的选择培养 考点二 微生物的选择培养和计数 没有进行梯度稀释，只是使用涂布法 B.两组培养基成分相同，不是通过特定成分来筛选抗T1噬菌体的大肠杆菌，B组培养基不属于选择培养基， D.抗性突变在接触T1噬菌体之前就已存在，T1噬菌体只是起选择作用 [解析] 沸盐水需要冷却后加入坛中，防止杀死菜料表面的乳酸菌，A错误；盐水需要浸没全部菜料，主要目的是制造无氧环境，有利于乳酸菌无氧呼吸，B错误；盖好坛盖后，向坛盖边沿的水槽中注满水，目的是排气减压、隔绝空气、防止杂菌污染等，C正确；整个发酵过程中，亚硝酸盐的含量变化是先增加后逐渐下降并趋于相对稳定，不是一直降低，D错误。 2.（2024·山东菏泽·一模）酸奶主要是用优质牛奶为原料经乳酸菌发酵而成。为从酸奶中分离出乳酸菌，现用无菌水将酸奶稀释成浓度为10-1g/mL的悬液，分别取0.1ml，稀释液涂布在3个平板上，登于恒温培养箱中培养，连续6天定时统计平板上的菌落数。下列相关叙述错误的是（    ） A．制备培养基时，先倒平板再进行高压蒸汽灭菌，防止污染 B．恒温培养前，需在培养皿底部标明组别和培养日期等信息 C．连续6天定时统计平板上的菌落数可防止遗漏菌落 D．若平板上菌落过于密集，则需要将酸奶悬液再次稀释重复上述实验 A 知识夯基 考向研析 考向1   微生物的选择培养 考点二 微生物的选择培养和计数 高压蒸汽灭菌再进行倒平板 [解析] 沸盐水需要冷却后加入坛中，防止杀死菜料表面的乳酸菌，A错误；盐水需要浸没全部菜料，主要目的是制造无氧环境，有利于乳酸菌无氧呼吸，B错误；盖好坛盖后，向坛盖边沿的水槽中注满水，目的是排气减压、隔绝空气、防止杂菌污染等，C正确；整个发酵过程中，亚硝酸盐的含量变化是先增加后逐渐下降并趋于相对稳定，不是一直降低，D错误。 3.（2024·山东德州·二模）烟草的多糖含量偏高是造成烟叶原料品质不高的重要因素，微生物在烟叶醇化阶段可有效降低烟草的多糖含量。为提高烟叶质量，科研人员筛选出S1～S5微生物菌株，并测定其相关酶活力，结果如图所示。下列说法正确的是（　　） C 知识夯基 考向研析 考向1   微生物的选择培养 考点二 微生物的选择培养和计数 S1∼S5微生物菌株均能降低烟草中的多糖含量，但不能确定该微生物是否利用淀粉为碳源 B.未经稀释的微生物样本进行划线操作即可 适宜温度 A．筛选获得S1～S5微生物菌株时，应以淀粉为唯一碳源 B．用平板划线法分离单菌落前需对培养液进行稀释 C．用下进行，培养获得的纯培养物对烟叶进行醇化效果最好 D．烟叶醇化发酵应在低温下进行，以抑制杂菌繁殖 [解析] 沸盐水需要冷却后加入坛中，防止杀死菜料表面的乳酸菌，A错误；盐水需要浸没全部菜料，主要目的是制造无氧环境，有利于乳酸菌无氧呼吸，B错误；盖好坛盖后，向坛盖边沿的水槽中注满水，目的是排气减压、隔绝空气、防止杂菌污染等，C正确；整个发酵过程中，亚硝酸盐的含量变化是先增加后逐渐下降并趋于相对稳定，不是一直降低，D错误。 4．（2025·山东青岛·三模）随着能源和环境问题日益严峻，利用纤维素酶降解秸秆生产燃料乙醇，对缓解全球能源危机有着重大意义。科研人员开展筛选、诱变及选育高产纤维素酶菌株的相关研究，过程如下图。下列说法正确的是（　　） D 知识夯基 考向研析 考向1  微生物的分离与培养 考点二 微生物的选择培养和计数 透明圈直径/菌落直径值最大的 B.基因突变具有不定向性和多害少利性，需要筛选 C.也可能是自养细菌 A．诱变选育高产菌株时，通过向培养基加入刚果红染液，选择透明圈大的即为目的菌株 B．可使用紫外线进行诱变，无需筛选即可得到产纤维素酶高的菌种 C．能在以纤维素为唯一碳源培养基中生长的菌株一定是纤维素分解菌 D．富集培养应使用液体培养基，目的是能得到更多能产纤维素酶的菌株 [解析] 沸盐水需要冷却后加入坛中，防止杀死菜料表面的乳酸菌，A错误；盐水需要浸没全部菜料，主要目的是制造无氧环境，有利于乳酸菌无氧呼吸，B错误；盖好坛盖后，向坛盖边沿的水槽中注满水，目的是排气减压、隔绝空气、防止杂菌污染等，C正确；整个发酵过程中，亚硝酸盐的含量变化是先增加后逐渐下降并趋于相对稳定，不是一直降低，D错误。 5.（2025·山东德州·三模）TCBS琼脂培养基（盐度较高）是一种用于选择性分离致病性弧菌（如霍乱弧菌、副溶血弧菌）的培养基，其关键成分如表所示。溴麝香草酚蓝为酸碱指示剂，酸性时为黄色，碱性时为蓝色。已知蔗糖代谢会产生乳酸，在碳源不足的情况下，乳酸可被继续分解供能。研究人员将某水体涂布于TCBS琼脂培养基上，24h后观察到平板上出现了黄色和蓝色两种菌落。48h后观察到黄色菌落变蓝。下列说法正确的是（    ） CD 知识夯基 考向研析 考向1   微生物的选择培养 考点二 微生物的选择培养和计数 先灭菌再调PH 该培养基盐度较高，能抑制不耐盐细菌的生长，由于真菌培养的最适pH为酸性，该培养基pH为8.6，能抑制真菌的生长 配方（每升） 酵母膏粉 蛋白胨 蔗糖 氯化钠 琼脂 溴麝香草酚蓝 pH 含量 5g 10g 20g 10g 15g 0.04g 8.6 A．为避免高温对pH的影响，应该在培养基灭菌之后调pH B．该培养基能抑制不耐盐细菌的生长，但不能抑制真菌的生长 C．不同颜色菌落的出现说明不同弧菌利用蔗糖的能力不同 D．黄色菌落一段时间后变蓝与乳酸被分解供能有关 [解析] 沸盐水需要冷却后加入坛中，防止杀死菜料表面的乳酸菌，A错误；盐水需要浸没全部菜料，主要目的是制造无氧环境，有利于乳酸菌无氧呼吸，B错误；盖好坛盖后，向坛盖边沿的水槽中注满水，目的是排气减压、隔绝空气、防止杂菌污染等，C正确；整个发酵过程中，亚硝酸盐的含量变化是先增加后逐渐下降并趋于相对稳定，不是一直降低，D错误。 1.（2025·山东聊城·二模）使用时间过长的玩具表面可能会滋生细菌，容易导致儿童患接触性皮炎。为了检测某玩具表面是否存在大肠杆菌，某团队进行了如图所示实验：使用伊红—亚甲蓝染液（用于鉴别大肠杆菌，能使其菌落呈深紫色，并带有金属光泽）对培养基C进行染色，初步统计大肠杆菌的数量，图中1～6表示不同菌落。下列叙述正确的是（     ） ACD 知识夯基 考向研析 考向2 稀释涂布平板法的相关知识 考点二 微生物的选择培养和计数 平板 A为固体培养基，配制时还需要加入琼脂作为凝固剂 A．对菌液进行系列梯度稀释，菌落数为30～300时适合进行计数 B．配制平板A时只需要加入碳源、氮源、水、无机盐这几类物质即可 C．图中平板B的接种方法为稀释涂布平板法，初步判断3是大肠杆菌的菌落 D．为保护儿童健康，平时可用75%的酒精对玩具进行擦拭消毒 [解析] 沸盐水需要冷却后加入坛中，防止杀死菜料表面的乳酸菌，A错误；盐水需要浸没全部菜料，主要目的是制造无氧环境，有利于乳酸菌无氧呼吸，B错误；盖好坛盖后，向坛盖边沿的水槽中注满水，目的是排气减压、隔绝空气、防止杂菌污染等，C正确；整个发酵过程中，亚硝酸盐的含量变化是先增加后逐渐下降并趋于相对稳定，不是一直降低，D错误。 2.（2025·山东枣庄·二模）关于“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”实验，下列说法正确的是（     ） A．取样时用的铁铲、纸袋在使用前进行消毒处理，对培养基进行湿热灭菌，对培养皿要进行干热灭菌 B．实验中的培养基以尿素为唯一氮源，属于选择培养基，含酚红指示剂的培养基变红说明有尿素分解菌 C．用平板划线法和稀释涂布平板法都可以对尿素分解菌进行计数，但是统计结果往往比实际值偏低 D．若取稀释105倍的0.1mL菌液进行涂布，获得菌落数目的平均值为168，则每克土样中尿素分解菌的数量为1.68×108 BD 知识夯基 考向研析 考向2 稀释涂布平板法的相关知识 考点二 微生物的选择培养和计数 应该是灭菌处理 平板划线法不能计数 [解析] 沸盐水需要冷却后加入坛中，防止杀死菜料表面的乳酸菌，A错误；盐水需要浸没全部菜料，主要目的是制造无氧环境，有利于乳酸菌无氧呼吸，B错误；盖好坛盖后，向坛盖边沿的水槽中注满水，目的是排气减压、隔绝空气、防止杂菌污染等，C正确；整个发酵过程中，亚硝酸盐的含量变化是先增加后逐渐下降并趋于相对稳定，不是一直降低，D错误。 3.（2024·山东德州·一模）为了筛选出能高效降解石油的细菌，某研究人员利用石油污染滩涂土壤进行了如下图所示的操作(①~⑤表示不同的菌落)。下列说法正确的是（     ） ACD 知识夯基 考向研析 考向2 稀释涂布平板法的相关知识 考点二 微生物的选择培养和计数 甲过程采用的是稀释涂布平板法，但这种方法在用于计数时，由于可能存在两个或多个细菌聚在一起形成一个菌落的情况，往往会导致结果偏小 A．图中液体富集培养基和液体选择培养基的成分不同，后者以石油为唯一碳源 B．甲过程采用的是稀释涂布平板法，该方法用于计数时往往使结果偏大 C．菌落①可能是自养细菌，因不能分解石油而无降解圈产生 D．乙过程选择菌落⑤接种到石油培养基，可根据石油剩余量进行降解能力评估 [解析] 沸盐水需要冷却后加入坛中，防止杀死菜料表面的乳酸菌，A错误；盐水需要浸没全部菜料，主要目的是制造无氧环境，有利于乳酸菌无氧呼吸，B错误；盖好坛盖后，向坛盖边沿的水槽中注满水，目的是排气减压、隔绝空气、防止杂菌污染等，C正确；整个发酵过程中，亚硝酸盐的含量变化是先增加后逐渐下降并趋于相对稳定，不是一直降低，D错误。 4.（2023·山东威海·二模）质检部门常用滤膜法测定水样中的大肠杆菌数目以确定水样是否符合饮用水的卫生标准。滤膜法是将一定量的水样注入已灭菌的微孔薄膜滤器中，经过抽滤使细菌被截留在滤膜上，将滤膜贴于伊红-亚甲蓝琼脂培养基上培养后计数。已知大肠杆菌在伊红-亚甲蓝琼脂培养基上培养呈深紫黑色。若无菌操作下将90mL无菌水加入10mL待测水样中，将稀释后的菌液通过滤膜法测得培养基上的菌落数为45个，其中深紫黑色菌落数为6个。下列说法正确的是（     ） A．测定前需对实验中用到的滤杯、滤膜、滤瓶、镊子和水样进行灭菌处理 B．为检测伊红-亚甲蓝琼脂培养基灭菌是否彻底，可将未接种的培养基在恒温箱中培养一段时间，观察是否有菌落产生 C．每个菌落中的大肠杆菌数目是固定的，据此可精准推测出样品中的活菌数 D．1升待测水样中的大肠杆菌数目约为600个 BD 知识夯基 考向研析 考向2 稀释涂布平板法的相关知识 考点二 微生物的选择培养和计数 滤膜法测定水样中的大肠杆菌数目，水样不需要经过灭菌处理 菌落可能是一个或几个活菌形成的种群，菌落中的大肠杆菌数目不是固定的，不能精准推测出样品中的活菌数 [解析] 沸盐水需要冷却后加入坛中，防止杀死菜料表面的乳酸菌，A错误；盐水需要浸没全部菜料，主要目的是制造无氧环境，有利于乳酸菌无氧呼吸，B错误；盖好坛盖后，向坛盖边沿的水槽中注满水，目的是排气减压、隔绝空气、防止杂菌污染等，C正确；整个发酵过程中，亚硝酸盐的含量变化是先增加后逐渐下降并趋于相对稳定，不是一直降低，D错误。 5.（2025·山东泰安·二模）根据国家标准每毫升合格的巴氏杀菌乳中细菌总数不得超过50000个。某兴趣小组进行了新鲜牛奶最合适的消毒温度和时间的探究，相关实验操作合理的是（    ） A．统计培养基上全部菌落数，以菌落数最少组的处理温度作为最适消毒温度 B．将等量的新鲜牛奶分别置于60℃、80℃、100℃恒温水浴锅中处理相同的时间 C．对处理后的牛奶利用平板划线法进行接种后，在37℃下培养24h，然后计数 D．通常要用同一稀释度下的牛奶至少接种3个平板进行重复计数，然后求取平均值 D 知识夯基 考向研析 考向2 稀释涂布平板法的相关知识 考点二 微生物的选择培养和计数 考虑消毒效果的同时，还应考虑牛奶的营养物质流失，故统计培养基上全部菌落数，不一定以菌落数最少组的处理温度作为最适消毒温度 B.应设置一系列温度梯度 C.用稀释涂布平板法计数 [解析] 沸盐水需要冷却后加入坛中，防止杀死菜料表面的乳酸菌，A错误；盐水需要浸没全部菜料，主要目的是制造无氧环境，有利于乳酸菌无氧呼吸，B错误；盖好坛盖后，向坛盖边沿的水槽中注满水，目的是排气减压、隔绝空气、防止杂菌污染等，C正确；整个发酵过程中，亚硝酸盐的含量变化是先增加后逐渐下降并趋于相对稳定，不是一直降低，D错误。 6. （2025·山东日照·二模）有些细菌具有溶菌特性，能够破坏其他细菌的结构使细胞内容物释出。研究人员试图从某湖泊水样中分离出有溶菌特性的细菌。先将含有一定浓度α菌的少量培养基倾倒在固体培养平板上，凝固形成薄层。一段时间后，将1mL湖泊水样加入9mL无菌水中、继续重复该操作3次，取0.1mL涂布于薄层上，稳定后获得56个菌落，其中15个菌落周围出现溶菌圈。下列说法正确的是（　　） A．应选用由水、碳源、氮源和无机盐组成的培养基分离细菌 B．应使用灼烧灭菌后的涂布器将α菌均匀地接种到培养基上 C．溶菌细菌的接种需在含α菌的培养基变浑浊后才能进行 D．每毫升的湖泊水样中约有1.5×105个具溶菌特性的细菌 C 知识夯基 考向研析 考向2 稀释涂布平板法的相关知识 考点二 微生物的选择培养和计数 还要加琼脂 B.将含有一定浓度α菌的少量培养基倾倒在固体培养平板上，凝固形成薄层，然后使用灼烧灭菌后的涂布器将0.1mL稀释过的湖泊水样均匀地接种到培养基上 0.1ml稀释液含溶菌细菌15个，稀释倍数为10000倍，因此每毫升水样中约有15×10×10000=1.5×106个具溶菌特性的细菌 [解析] 沸盐水需要冷却后加入坛中，防止杀死菜料表面的乳酸菌，A错误；盐水需要浸没全部菜料，主要目的是制造无氧环境，有利于乳酸菌无氧呼吸，B错误；盖好坛盖后，向坛盖边沿的水槽中注满水，目的是排气减压、隔绝空气、防止杂菌污染等，C正确；整个发酵过程中，亚硝酸盐的含量变化是先增加后逐渐下降并趋于相对稳定，不是一直降低，D错误。 04 真题感知·命题洞见 真题感知·命题洞见 组②为常压 + 纤维素，结果无菌落，而组④为高压 + 纤维素，结果是有菌落。 这个对比恰好说明，在以纤维素为碳源的条件下，该菌不能在常压下生长，而能在高压下生长 BC 先灭菌再倒平板 组别 压强 纤维素 淀粉 菌落 ① 常压 - + - ② 常压 + - - ③ 高压 - + - ④ 高压 + - + 1．（2025·山东·高考真题）深海淤泥中含有某种能降解纤维素的细菌。探究不同压强下，该细菌在以纤维素或淀粉为唯一碳源的培养基上的生长情况。其他条件相同且适宜，实验处理及结果如表所示。下列说法正确的是（    ） 注： “+”表示有；“一”表示无 A．可用平板划线法对该菌计数 B．制备培养基的过程中，应先倒平板再进行高压蒸汽灭菌 C．由②④组可知，在以纤维素为唯一碳源的培养基上，该菌可在常压下生长 D．由③④组可知，高压下该菌不能在以淀粉为唯一碳源的培养基上生长 无法计数 57 2．（2024·山东·高考真题）酵母菌在合成色氨酸时需要3种酶X、Y和Z，trpX、trpY和trpZ分别为相应酶的编码基因突变的色氨酸依赖型突变体。已知3种酶均不能进出细胞，而色氨酸合成途径的中间产物积累到一定程度时可分泌到胞外。将这3种突变体均匀划线接种到含有少量色氨酸的培养基上，生长情况如图。据图分析，3种酶在该合成途径中的作用顺序为（　　） 解析：添加少量色氨酸，突变体菌株可以生长，色氨酸合成途径的中间产物积累后可排出胞外，进入培养基后，通过扩散，从而给其他突变型提供代谢原料，帮助其长出明显的菌落。trpX、trpY和trpZ分别为相应酶的编码基因突变的色氨酸依赖型突变体，据图可知，trpX不能为trpY和trpZ提供原料，trpY不能为trpZ提供原料，trpZ可以为trpX、trpY的生长提供原料，推测3种酶在该合成途径中的作用顺序为X→Y→Z。 A 真题感知·命题洞见 A．X→Y→Z B．Z→Y→X C．Y→X→Z D．Z→X→Y [解析] 沸盐水需要冷却后加入坛中，防止杀死菜料表面的乳酸菌，A错误；盐水需要浸没全部菜料，主要目的是制造无氧环境，有利于乳酸菌无氧呼吸，B错误；盖好坛盖后，向坛盖边沿的水槽中注满水，目的是排气减压、隔绝空气、防止杂菌污染等，C正确；整个发酵过程中，亚硝酸盐的含量变化是先增加后逐渐下降并趋于相对稳定，不是一直降低，D错误。 3．（2023·山东·高考真题）平板接种常用在微生物培养中。下列说法正确的是（    ） A．不含氮源的平板不能用于微生物培养 B．平板涂布时涂布器使用前必须进行消毒 C．接种后未长出菌落的培养基可以直接丢弃 D．利用以尿素为唯一氮源的平板能分离出合成脲酶的微生物 即使未长出菌落也要在丢弃前进行灭菌处理，不能直接丢弃，以免污染环境 D 真题感知·命题洞见 不含氮源的平板可用于固氮菌的培养 灼烧灭菌 [解析] 沸盐水需要冷却后加入坛中，防止杀死菜料表面的乳酸菌，A错误；盐水需要浸没全部菜料，主要目的是制造无氧环境，有利于乳酸菌无氧呼吸，B错误；盖好坛盖后，向坛盖边沿的水槽中注满水，目的是排气减压、隔绝空气、防止杂菌污染等，C正确；整个发酵过程中，亚硝酸盐的含量变化是先增加后逐渐下降并趋于相对稳定，不是一直降低，D错误。 4．（2021·山东·高考真题）含硫蛋白质在某些微生物的作用下产生硫化氢导致生活污水发臭。硫化氢可以与硫酸亚铁铵结合形成黑色沉淀。为探究发臭水体中甲、乙菌是否产生硫化氢及两种菌的运动能力，用穿刺接种的方法，分别将两种菌接种在含有硫酸亚铁铵的培养基上进行培养，如图所示。若两种菌繁殖速度相等，下列说法错误的是（    ） A．乙菌的运动能力比甲菌强 B．为不影响菌的运动需选用液体培养基 C．该实验不能比较出两种菌产生硫化氢的量 D．穿刺接种等接种技术的核心是防止杂菌的污染 为不影响菌的运动需选用半固体培养基 B 真题感知·命题洞见 [解析] 沸盐水需要冷却后加入坛中，防止杀死菜料表面的乳酸菌，A错误；盐水需要浸没全部菜料，主要目的是制造无氧环境，有利于乳酸菌无氧呼吸，B错误；盖好坛盖后，向坛盖边沿的水槽中注满水，目的是排气减压、隔绝空气、防止杂菌污染等，C正确；整个发酵过程中，亚硝酸盐的含量变化是先增加后逐渐下降并趋于相对稳定，不是一直降低，D错误。 5．（2021·山东·高考真题）解脂菌能利用分泌的脂肪酶将脂肪分解成甘油和脂肪酸并吸收利用。脂肪酸会使醇溶青琼脂平板变为深蓝色。将不能直接吸收脂肪的甲，乙两种菌分别等量接种在醇溶青琼脂平板上培养。甲菌菌落周围呈现深蓝色，乙菌菌落周围不变色，下列说法错误的是（    ） A．甲菌属于解脂菌 B．实验中所用培养基以脂肪为唯一碳源 C．可将两种菌分别接种在同一平板的不同区域进行对比 D．该平板可用来比较解脂菌分泌脂肪酶的能力 乙菌落周围没有出现深蓝色，说明乙菌落不能产生脂肪酶，不能利用脂肪为其供能，但乙菌落也可以在培养基上生存，说明该培养基不是以脂肪为唯一碳源 B 真题感知·命题洞见 [解析] 沸盐水需要冷却后加入坛中，防止杀死菜料表面的乳酸菌，A错误；盐水需要浸没全部菜料，主要目的是制造无氧环境，有利于乳酸菌无氧呼吸，B错误；盖好坛盖后，向坛盖边沿的水槽中注满水，目的是排气减压、隔绝空气、防止杂菌污染等，C正确；整个发酵过程中，亚硝酸盐的含量变化是先增加后逐渐下降并趋于相对稳定，不是一直降低，D错误。 05 学以致用·能力提升 教材深度拓展 学以致用·能力提升 1、在富含纤维素的环境中寻找纤维素分解菌的原因是？ 生物与环境具有相互依存关系，在富含纤维素的环境中，纤维素分解菌的含量相对较高，从这种土样中获得目的微生物的概率要高于普通环境 2.在含有纤维素的培养基中加入刚果红对纤维素分解菌进行选择形成透明圈的原因是? 刚果红与纤维素形成红色复合物；而当纤维素被纤维素分解菌分解后，复合物就无法形成，培养基中会出现以这些菌为中心的透明圈 63 教材深度拓展 学以致用·能力提升 3、接种结束后，为什么要将一个未接种的培养基和一个已接种的培养基放在一起培养，未接种的培养基表面如果有菌落生长，说明了什么？ 培养未接种的培养基的作用是对照，未接种的培养基经过培养后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的；若有菌落形成，说明培养基灭菌不彻底，或培养基被污染了，需要重新制备。 4.在灼烧接种环之后，要等其冷却后再进行划线的原因是? 以免接种环温度太高，杀死菌种 64 讲师：xxx 2026年高考一轮复习 山东专用 感谢观看 THANK YOU 65 NH、NO等 $