单元过关(15)基因工程(含生物技术安全性和伦理问题)-【衡水真题密卷】2026年高考生物单元过关检测（黔甘云晋豫陕青宁新藏A版）

勤奋为舟，智慧为帆，驶向成功 2025一2026学年度单元过关检测（十五） Cerl WT 班级 M冰道1泳道2泳道3泳道4泳道5 卺题 生物学·基因工程 2000bp 1960bp1960b 19%60b 姓名 (含生物技术安全性和伦理问题) IS00bp日 1530bp1530b 1 000 bp 1100bp 1100bp 1100bp 得分 本试卷总分100分，考试时间75分钟。 A.突变体是C基因内部发生碱基对替换突变为c基因 一、选择题：本题共16小题，每小题3分，共48分。在每小题给出的四个选项中，只有一 B.设计引物时应尽可能让2个引物之间有较多的互补序列 项是符合题目要求的。 C,F。中个体的DNA扩增后可得到泳道1和泳道3的带型 题号 1 2 3 4 6 8 D.电泳后可加人溴酚蓝染色以便于观察电泳条带位置 答案 5.重组人干扰素a1b是我国批准生产的第一个基因工程药物，利用基因工程获得工程菌 题号 的过程如图所示。步骤①一④中，不发生碱基互补配对的是 () 9 10 11 12 13 14 15 16 干扰素基因 答案 ○逆转 干找素干找索基因 目的基因白 1.以下是几种不同限制性内切核酸酶切割DNA分子后形成的部分片段。下列叙述正确 的是 淋巴细胞mRNA ①-CTGCA②G3.T0④GGC 四环素抗性基因 大肠杆菌 工程南 G CTTAA-AC CTGCACG A.① B.② C.③ D.④ A.以上DNA片段是由5种限制酶切割后产生的，切割产生①片段的限制酶识别序列由 6.利用P℃R获得目的基因后，用限制酶EcoR I同时处理目的基因与质粒，拼接后可得到 5个碱基对构成 重组基因表达载体，其部分DNA片段如图所示。下列有关引物的分析正确的是() B.限制酶只存在于原核生物，作用的化学键为磷酸二键和氢键 EcoR I C上述能选行连接的两个影性片段，北连接后形成的DNA分子是-GACCTC 引物1 日的基因 ，引物2 D.两个③片段只能被E.coli DNA连接酶催化连接形成重组DNA 2.某同学将质粒DNA进行限制酶酶切时，发现DNA完全没有被酶切，最不可能的原因是 引物3 引物4 引物5 () A.通过PCR获取目的基因时，所选的引物可为引物2和引物3 A.限制酶失活 B.醇的用量不足 B.检测目的基因是否插入质粒且方向是否正确时，应选用引物1和引物4进行PCR C.酶识别位点突变 D.酶识别位点甲基化 C.若设计的引物与模板不完全配对，可适当提高PCR复性的温度 3.如图为蛛丝蛋白基因对应的DNA片段结构示意图，目前利用现代生物技术生产蜘蛛丝 D.DNA聚合酶能与引物结合，并从引物的5'端连接脱氧核苷酸 已取得成功，下列叙述正确的是 () 7.某科研小组采用PCR技术构建了红色荧光蛋白基因(dsred2)和a-淀粉酶基因(amy)的 5 ,陈签蛋白因工 dsred2-amy融合基因，其过程如图所示，其中引物②和引物③中部分序列（黑色区域） 可互补配对。下列说法错误的是 () A,一个基因扩增4次共消耗引物32个 5 dm2W国 5 B.获取该基因，要破坏2个磷酸二酯键 二1物1引物2己马 5 己列物出物后少 C.用PCR技术获取该基因，设计的引物应分别结合在1、4部位 D.在PCR仪中至少需经过6次循环，才可获得32个符合要求的目的基因 4.植物体表蜡质对耐干早有重要作用，研究人员通过诱变获得一个大麦突变体Cer](纯合 体)。初步研究表明，突变表型是因为染色体上的C基因突变为c。在C基因两侧设计 占显合 引物，PCR扩增，电泳检测PCR产物。如图，泳道1和2分别是突变体Cer1与野生型 杂交错 (WT,纯合体)。将突变体Cerl与纯合野生型杂交。F1全为野生型，F1与突变体Cerl 占惩种 杂交，获得若干个后代F:,利用上述引物PCR扩增这些后代的基因组DNA,电泳检测 PCR产物。下列叙述正确的是 () m合 单元过关检测（十五）生物学第1页（共8页） 真题密卷 单元过关检测（十五）生物学第2页（共8页） 1A A.利用PCR技术扩增基因时不需要解旋酶来打开DNA双链 A.将目的基因插入质粒中时，需要用到的酶有XhoI、NheI和DNA连接酶 B.不能在同一反应体系中进行dsred2基因和amy基因的扩增 B.需要用Ca2+处理大肠杆菌，使其处于易于吸收周围环境中DNA分子的状态 C.dsred2基因和amy基因混合后只能得到一种类型的杂交链 C.按图示构建的重组质粒导人大肠杆菌后，大肠杆菌可正常表达该目的基因 D.杂交链延伸得到dsred.2-amy融合基因的过程不需要加引物 D.在含Xgl的培养基上培养导人了重组质粒的大肠杆菌，可出现蓝色南落 8,科研人员将寒带地区海鱼中的抗冻基因转人千禧果细胞中，成功培育出抗冻千禧果。 12.草甘膦是一种广谱、非选择性的系统性除草剂，通过抑制植物中E印sps酶的话性，使植 如图为培有过程中使用的Ti质粒示意图，其中Vir区的基因活化能促进TDNA的加 工和转移，下列叙述正确的是 () 物细胞内某些氨基酸不能合成，从而达到除草的目的。为提高小麦对草甘膦的耐受 限制南Ⅲ限制南Ⅱ 性，科学家将细菌的Ess基因转入小麦叶绿体中，得到抗草甘膜转基因小麦。下列 相关叙述错误的是 () 下-DNA A.将Epsps基因导入小麦的叶绿体可避免基因污染 高 B.Esps基因在细菌和小麦中转录形成的mRNA相同 C.可通过喷洒草甘腾来检验转基因小麦是否培育成功 A.构建基因表达载体时，最好选择限制酶Ⅱ和Ⅲ来切割质粒 D.转基因小麦中Epsps酶参与合成的氨基酸数量下降 B.利用PCR扩增抗冻基因，需提前检测抗冻基因的全部碱基序列 13.如图所示，研究人员将雪花莲凝集素基因(GNA)和尾德觉凝集素基因(ACA)与载体 C.Vir区的基因活化促进抗冻基因整合到千禧果细胞的染色体DNA上 (pBI121)结合，然后导人棉花细胞。下列操作不符合实验目的是 () D.利用含卡那霉素的培养基可筛选出成功导入抗冻基因的千禧果细胞 KpnI BsaB I 卡那荐素 9,科学家在人类的基因中发现36种病毒基因的片段，并提取相关基因片段进行扩增及电 GNA ACA 抗性基因 泳鉴定。下列叙述正确的是 () A,用PCR仪进行扩增时，扩增缓冲液中一般要添加Ca2 pBI 121 B.基因片段扩增过程中，脱氧核苷酸会依次加到引物的5'端 GNA □ACA 启动子 C.电泳时，在凝胶中基因片段的迁移速率与DNA分子的构象无关 nopm】 Kpnl Xho I D.将基因片段与凝胶载样缓冲液的混合液加入凝胶加样孔时，要留一个加样孔加标准 参照物 重组线体 10.红豆草是一种品质优良的多年生高蛋白豆科牧草作物，被誉为“牧草皇后”。为提高红 A.用PCR技术可检测GNA和ACA基因是否导入棉花细胞中 豆草的耐盐性、增大种植范围，科研人员将盐生植物碱蓬中的耐盐基因SsPSL转人红 B.将棉花细胞接种在含氨苄青霉素的培养基上可筛选出转基因细胞 豆草中，对转基因耐盐红豆草DNA进行PCR,再对PCR的产物进行琼脂糖凝胶电泳 C.用限制酶Bsa BI和DNA连接酶处理两种基因可获得GNA-ACA融合基因 鉴定。下列叙述错误的是 D.与只用KpnI相比，KpnI和XhoI处理融合基因和载体可保证基因转录方向 A.利用PCR获取和扩增耐盐基因SsPSL,需添加一种引物，四种核糖核苷酸等组分 正确 B.构建基因表达载体是培育转基因耐盐红豆草的核心工作 14.实验小组利用PCR技术获得了含有目的基因的DNA片段，并用图示的限制酶对其进 C,将植物材料和农杆菌共同培养之前，植物材料需要消毒处理 行酶切，再用所得DNA片段成功构建了基因表达载体，下列叙述错误的是 () D.凝胶中的DNA分子通过染色，可以在波长为300nm的紫外灯下被检测出来 11.研究人员将目的基因插入质粒，构建重组质粒的过程如图所示，再将该重组质粒导入 限制聘peIS-ACTAGT-3NMe13 GCTAGC-3C6IS.GCGC- 识别序列 大肠杆菌中。由3半乳糖苷酶基因编码产生的B半乳糖苷酶可分解X-g产生蓝色物 3-TGATCA-S 3-CGATCG-5 3-CGCG-5' 质，使菌落呈蓝色，否则菌落为白色。下列叙述错误的是 () 扩增获得S'AGCTAGCAATGCTC.......ATGAACTGCGCA-3 的DNA片段3'.TCGATCGTTACGAG:·TACTTGACGCGT5 Nhe l ①剧切 :半乳德苷南基国 5'-CTAGCAATGCTC-......-ATGAACTGCG-3 四环素 抗性甚用 3-GTTACGAG......TACTTGAC-S 启动子 A.PCR技术中用到的一个引物的前8个碱基序列为5'-TGCGCAGT-3 、复原点 B.步骤①中用到的限制酶是SpeI和CfoI C.用步骤①中的限制酶对质粒进行酶切，可至少获得2个DNA片段 的 、复刺原点 D.可用E,coli DNA连接酶或T4DNA连接酶连接酶切后的目的基因片段和质粒 1A 单元过关检测（十五）生物学第3页（共8页） 真题密卷 单元过关检测（十五）生物学第4页（共8页） 15.图1表示基因工程中用到的质粒，其中PstI是目的基因插入位点，AmpR表示氨苄青 (4)人乳铁蛋白是一种分泌蛋白，通过转基因大肠杆菌不能生产有活性的人乳铁蛋白， 霉素抗性基因，TtR表示四环素抗性基因。图2表示筛选出导入重组质粒的受体菌的 其原因是 方法（四环素和氨苄青霉素在高温下不稳定易失效）。下列说法正确的是 () 18.(11分)家畜胚胎的性别鉴定技术对畜牧业的发展具有重要意义。巢式PCR中的两次 PCR使用了2对不同引物，先使用外引物对目标区域DNA片段进行第一次PCR扩 灭菌城布 增，产生中间产物，然后使用内引物对中间产物进行第二次P℃R扩增，产生目标产物。 原板 培养复制板 BR322 甲 如图是巢式PCR工作原理示意图。回答下列问题： 销养结果哥 Z777777277Z777277Z7772772727777@ 原板（四环素） 复制板氨苄青霉素 模板 多 图2 A.构建重组DNA分子用到的工具酶有限制酶和质粒 使用外引物进行第一次CR扩增 B.图2所用培养基应加人抗生素并调好pH后再灭菌处理 中同产物 C.图2中利用绒布接种的方法为稀释涂布平板法 使用内引物进行第二次PCR扩增 D.原板上的甲、乙菌落中，甲菌落是成功导人重组质粒的受体菌 目标产物 16.PCR引物的3'端有结合模板DNA的关键碱基，5'端无严格限制，可用于添加限制酶切 点等序列。下列叙述错误的是 (1)巢式PCR反应体系中需要加入的原料是 ,巢式PCR过程用 () 代替解旋酶，为激活反应体系中的DNA聚合酶，还需要加入 5 3 (2)相比于常规PCR获得的产物，巢式PCR获得的产物特异性 (3)科研人员利用多重巢式PCR技术同时扩增Y染色体上的雄性决定基因(SRY)和 A图中两条子链合成一定都是从5端向3'端延伸 常染色体上的酪蛋白基因(CSN1S1),用以进行早期胚脸的性别鉴定，并对鉴定后的胚 B.图示表示复性阶段，该过程的温度与引物的长短有关 胎进行移植。 C.用图示引物扩增5次后，可以产生22个目标产物 ①取囊胚的滋养层细胞提取DNA,原因是 D.PCR每次循环都消耗引物和原料，在实验过程中需要及时补充 ②根据牛的SRY和CSN1S1基因序列共可设计合成 对引物。 二、非选择题：本题共5小题，共52分。 ③PCR过程：预变性→变性→复性→延伸。 17.(11分)人乳铁蛋白是母乳中的重要抗菌蛋白。科研人员利用基因工程技术构建含人 ④观察扩增结果：电泳分析。 乳铁蛋白基因的重组质粒，如图为质粒和人乳铁蛋白基因示意图，Tt表示四环素抗 ⑤对符合要求的胚胎进行移植，在操作过程中不需要对受体提供免疫抑制剂，原因是 性基因，AmpR表示氨苄青霉素抗性基因，Bam HI、BclI、NotI、Sau3AI表示不同 的限制酶，对应箭头指向位置为相应限制酶的切割位点（不考虑其他未知的酶切位 点)。请回答下列问题： 19,(10分)某科研团队为建立具有红色荧光的转基因小鼠，将红色荧光基因R(图1)插人 表达载体（图2）中，构建基因表达截体。已知图中R基因的转录方向为从左到右，几种 启动子 Bell Not1 限制酶的识别序列和切割位点如表。回答下列问题： 终止子 自动 复制原点 人乳铁蛋白基因子 BamH I EcoR I Me l HiⅢ (1)为了获取更多人乳铁蛋白基因，可利用PCR技术对其进行扩增。为保证扩增效 甲链5 乙链3 H 率，至少需加人种引物，合成引物时需要已知 R基 启动子 终止子 (2)构建重组质粒时，技术人员仅使用了Sau3AI一种限制酶以及 酶即实现 图1 FcoR I图2 了人乳铁蛋白基因与质粒的重新连接，说明 限制酶 Bam H I MfeI EcoR I HiwdⅢ (3)为存储含人乳铁蛋白基因的重组质粒，可以用C+处理大肠杆菌，使细胞处于能吸 识别序列和切割位点 G+GATCC CAATTG GAATTC A+AGCTT 收周围环境中DNA分子的生理状态，并在含 (填“四环素”或“氨苄青霉 (1)使用限制酶 切割含R基因的DNA片段，使用限制酶 切割图中的 素”)的培养基中培养大肠杆菌，判断重组质粒是否导人成功。 质粒，再用 酶连接成重组质粒。 单元过关检测（十五）生物学第5页（共8页） 真题密卷 单元过关检测（十五）生物学第6页（共8页） 1A (2)已知R基因转录形成的mRNA序列为5'-UGAACGCUA…(中间序列)… (3)根据图中T1质粒限制酶识别位点，需要使用 切割Ti质粒，便于融合基 GUCGACUCG3',请写出R基因进行PCR扩增时所用的2种引物序列 因的插人。通过含融合基因的农杆菌的转化作用，可以使融合基因进人番茄细胞，这 (各写出6个碱基序列即可)。 是利用农杆菌 的特点。 (3)利用PCR技术扩增目的基因，其原理与细胞内DNA复制类似（如图所示）。第 (4)获得重组细胞后，通常使用含 (填“卡那霉素”或“氨苄青霉素”)的选择培 轮循环产物中开始出现目的基因两条脱氧核苷酸链等长的DNA片段，第四 养基培养番茄细胞以抑制农杆菌生长，番茄细胞经 生理过程，最终培育出 轮循环后，产物中日的基因两条脱氧核苷酸链等长的DNA片段有 个。 转基因番茄植株。 tmmmmmmmmmm 21.(10分)将天然Ti质粒改造成含有Vr基因的辅助质粒（辅助T-DNA转移）和不含有 女变性 Vir基因、含有T-DNA的穿梭质粒，共同转入农杆菌，可提高转化效率。细菌和棉花 ↓复性 对密码子偏好不同，为提高翻译效率，增强棉花抗病虫害能力，进行如下操作。请回答 第一轮循环 一歌二 下列问题： ↓廷伸 苏云金杆菌 tnmim ummmmwpwwpuuouuuuummmmooo 棉花植株 。变性 ·组织培养 (4)科研团队继续研究得到了蓝色荧光转基因小鼠。现将一只红色荧光转基因雌性小 分离和扩增基因 棉花叶圆片 鼠（导人1个R基因，未导入的用r表示）与一只蓝色荧光转基因雄性小鼠（导入1个B 】与青性有关，1848与毒性无关3540 业因题 切 农杆菌 「共培养、转化 基因，未导入的用b表示)作亲本杂交获得F1,取F:中表型为红蓝荧光的雌、雄小鼠杂 辅助质粒 交得F:,统计F:表型及比例是红蓝荧光雌性1红蓝荧光雄性：红色荧光雌性：红色 3540 卷○⊙ 荧光雄性t蓝色荧光雄性：无荧光雄性=6：3：2：1：3：1。据此分析，控制红色荧 R3 导入 光和控制蓝色荧光的基因 (填“是”或“否”)遵循基因自由组合定律，母本的基 3 1363-1848基因序列 因型是 人工合成序列 拼接 20.(10分)基因工程在育种方面得到广泛应用。研究人员将油体蛋白基因SOLE1与红 (氨基酸序列不变」 T-DNA-LB 天然序列 等梭质粒 色荧光蛋白基因TagRFP连接形成融合基因SIOLE1-TagRFP,并将此融合基因转 HB 重组 Kan 人番茄细胞中获得高产油体蛋白的转基因番茄，培育过程如图所示。回答下列问题： -DNA-RB SIOLEI TagRFP 注，FI~F3,R1~R3表示引物，T-DNA-LB表示左边界，T-DNA-RB表示右边界，Oi表示复制原 点：KanR表示卡那荐素抗性基因：HygBR表示潮荐素B抗性基因 SIOLE!TagRFP (1)在操作过程中关键是构建基因表达载体，基因表达载体包括的主要组成部分为 (答出三点即可)。 触合基因 (2)图中p35s为穿梭质粒上的启动子，KanR和HygB是标记基因，应用 初 启动子mI 步筛选转化的棉花愈伤组织。 复制原点 .ha l +EcoR I 一重组质数一农轩商一哥酸一模 (3)为检测棉花植株是否导入目的基因，以 作棋板，可用引物 T质制 氨苄青霉素抗性基因 终止子 和进行PCR,PCR反应中需要使用TagDNA聚合酶，原因是 EcoR I (1)将油体蛋白基因SIOLE1与红色荧光蛋白基因TagRFP连接形成融合基因 SIOLE1-TagRFP需要使用 酶，融合基因中整合上基因TagRFP的目的 (4)本研究采用的部分生物技术属于蛋白质工程，理由是 (2)构建基因表达载体时需要数量较多的融合基因，需要在体外扩增融合基因，首先要 根据融合基因的 端碱基序列设计引物，在PCR过程中需要使用引物的原因 是 1A 单元过关检测（十五）生物学第7页（共8页） 真题密卷 单元过关检测（十五）生物学第8页（共8页）·生物学· 参考答案及解析 殖、又能产生所需抗体的特点；对经选择培养的 【解析】(1)在受精过程中，为保证单精入卵，卵 杂交瘤细胞进行克隆化培养和抗体检测，多次筛 细胞会发生相关生理反应，发生这些生理反应的 选后可获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞， 结构依次是卵细胞膜外的透明带、卵细胞膜。 再将其注射到小鼠的腹腔内增殖或在体外培养 (2)受精卵形成后即在输卵管内进行有丝分裂， 合成抗体，故最终能从小鼠腹水或培养液中获得 这一阶段在透明带内进行，细胞只分裂不生长， 大量的单克隆抗体。 胚胎体积并不增加（或基本不变），以确保胚胎顺 (4)根据图可知，1~50aa序列片段与抗体无反应， 利从受精场所适时输出。随后，透明带破裂、胚 而1~55aa序列片段与抗体有反应，说明该单克隆 胎从中伸展出来继续发育，这一过程称为孵化。 抗体识别的区域大概为50~55位aa。50~153aa (3)①胎盘是由囊胚的滋养层细胞发育而成的。 序列片段与抗体无反应，而40~153aa序列片段与 ②依据题干信息“胚胎的胎盘细胞则分泌人绒毛 抗体有反应，说明该单克隆抗体识别的区域大概为 膜促性腺激素(HCG),抑制母体淋巴细胞的活 40~50位aa。综上分析可知，该单克隆抗体识别抗 动”，因此母体对胎儿不会发生免疫排斥反应。 原(X蛋白)的区域大概为40~55位aa。 ③利用从经HCG免疫的小鼠体内采集的B淋巴 21.(11分，除标注外，每空1分) 细胞（简称B淋巴细胞）、小鼠骨髓瘤细胞制备抗 (1)卵细胞膜外的透明带卵细胞膜 HCG单克隆抗体的过程中，抗原是HCG,依据 (2)输卵管基本不变孵化 单克隆抗体的制备流程，可知制备抗HCG单克 (3)①滋养层细胞②胎盘细胞分泌人绒毛膜促 隆抗体的主要流程为： 性腺激素(HCG),抑制母体淋巴细胞的活动，阻 B淋巴细胞诱导多种杂筛选 止排斥反应的发生(2分) 骨髓瘤细胞>融合交细胞 杂交瘤克隆化培养抗体阳性的培养抗HCG单 B淋巴细胞、诱导多种杂筛选 细胞抗体检测杂交瘤细胞 克隆抗体 ③骨髓瘤细胞>融合交细胞 (3分) 杂交瘤克隆化培养抗体阳性的培养抗HCG单 细胞抗体检测·杂交瘤细胞 克隆抗体 2025一2026学年度单元过关检测（十五） 生物学·基因工程（含生物技术安全性和伦理问题） 一、选择题 成重组DNA,D错误。 1.C【解析】图中①④是同一种限制酶切割形成2.B【解析】限制酶失活会使DNA完全不被酶切， 的，因此以上DNA片段是由4种限制酶切割后产 A正确；酶的用量不足，不会导致DNA完全没有 生的，切割产生①片段的限制酶，识别的碱基序列 被酶切，B错误；酶识别位点突变，造成限制酶无 为一CTGCAG-,由6个碱基对构成，A错误；限 法进行切割，C正确；质粒DNA上酶切位，点被甲 制酶主要是从原核细胞中分离纯化出来的，作用 基化修饰，会导致对DNA甲基化敏感的限制酶无 的化学键为磷酸二酯键，B错误；图中①④具有相 法进行酶切，D正确。 同的黏性末端，可被DNA连接酶连接形成的 3.D【解析】一个基因扩增4次，新合成的DNA数 …CTGCAG… 有24=16个，但新合成的链数为30个，所以共消 DNA分子是 ,C正确：两个③片段 …GACGTC… 耗引物30个，A错误；获取该基因，要破坏4个磷 属于平末端，只能被T4DNA连接酶催化连接形 酸二酯键，B错误；用PCR技术获取该基因，引物 ·17· 1A 真题密卷 单元过关检测 结合到模板链的3'端，设计的引物应分别结合在 Cerl杂交，获得若千个后代F2,F2基因型为Cc: 2、3部位，C错误；如图所示： cC=1:1,故F2中个体的DNA扩增后可得到泳 引物1引物2 道1和泳道3中的带型，C正确；电泳后可加入亚 3 5' 甲基蓝染色以便于观察电泳条带位置，D错误。 5′ 3' 5.C【解析】①表示干扰素基因的复制，本质是 X基因 DNA的复制，会发生碱基互补配对，A错误；②表 图1 示基因表达载体的构建，会发生目的基因（千扰素 3: 53 基因)与质粒间的碱基互补配对，B错误；③表示 5'■ -3′5 3 ① ② 将目的基因导入受体细胞，不会发生碱基互补配 3 5 3 5' -3' 3' 对，C正确；④表示目的基因的检测与鉴定，其是 ④ 3 在分子水平上的鉴定，会发生碱基互补配对，D 5' 错误。 ⑤ 图2 6.A【解析】引物结合在模板链的3端，通过PCR 设X基因为目的基因。经过第一轮复制以亲代 获取目的基因时，所选的引物可为引物2和引物3， DNA的两条链做模板，可以得到①和②两种 A正确；引物结合在模板链的3′端，检测目的基因 DNA;经过第二轮复制可以得到①和③、②和④； 是否插入质粒且方向是否正确时，应选用引物2和 经过第三轮复制可以得到①和③、③和⑤、②和 引物4进行PCR,B错误；若设计的引物与模板不完 ④、④和⑤；第四轮复制得到16个DNA分子，即 全配对，可适当降低PCR复性的温度，以便引物与 ①和③、2个③和2个⑤、②和④、2个④和2个 模板链结合，C错误；DNA聚合酶能与引物结合，并 ⑤、第三轮的2个⑤得到4个⑤（统计为①、②、3 从引物的3'端连接脱氧核苷酸，D错误 个③、3个④、8个⑤)；第五轮复制得到32个 7.C【解析】利用PCR技术扩增基因时，高温变性 DNA分子，即①和③、②和④、3个③和3个⑤、3 使DNA双链解旋，不需要解旋酶来打开DNA双 个④和3个⑤、第四轮的8个⑤得16个⑤（统计 链，A正确；引物之间的结合会干扰引物和模板链 为①、②、4个③、4个④、22个⑤；⑤为目的基因即 的结合，从而影响PCR过程，因此不能在同一个 还未获得32个目的基因)，第六轮复制得64个 反应体系中进行dsred.2基因和amy基因的扩 DNA分子，即①和③、②和④、4个③和4个⑤、4 增，B正确；dsred2基因和amy基因混合可以得 个④和4个⑤、第五轮的22个⑤得44个⑤（统计 到两种类型的杂交链，C错误；杂交链延伸得到 为①、②、5个③、5个④、52个⑤；⑤为目的基因， dsred2-amy融合基因的过程中，不需要加入引 即此时获得32个以上符合条件的目的基因)，综 物，两条母链的起始位置的碱基序列即为引物，可 上所述，需要至少6次循环可获得32个以上符合 以作为子链合成的引物，D正确。 要求的目的基因，D正确。 8.C【解析】使用限制酶Ⅱ会破坏Vir区的基因， 4.C【解析】由图可见，突变体电泳结果DNA长度 Vir区的基因活化能促进T-DNA的加工和转移， 为1100bp,比野生型1960bp短，由此推测突变 是T-DNA转移整合到受体细胞DNA上必不可 体是C基因内部发生碱基对缺失突变为c基因，A 少的，不能选择限制酶Ⅱ，A错误；使用PCR技术 错误；若2个引物之间有较多的互补序列，则引物 扩增抗冻基因，只需要知道抗冻基因两端碱基序 会相互结合，从而影响引物与模板DNA结合，B 列设计引物即可，B错误；农杆菌侵染植物细胞 错误；将突变体Cerl与纯合野生型杂交，F1全为 后，Ti质粒上的T-DNA能转移到被侵染的细胞 野生型，说明野生型为显性，用C/c基因表示，则 并整合到该细胞的染色体DNA上，所以Vir区基 F1基因型为Cc,电泳结果为泳道3，F1与突变体 因活化可促进抗冻基因整合到千禧果细胞的染色 1A ·18· ·生物学· 参考答案及解析 体DNA上，C正确；为筛选成功导入抗冻基因的 了Epsps基因，细胞内Epsps酶数量增加，促进 千禧果细胞，最好在培养基中添加四环素，可以筛 了相关氨基酸的合成，D错误。 选出成功导入抗冻基因的千禧果细胞，D错误。 13.B【解析】根据GNA-ACA融合基因的两端序 9.D【解析】用PCR仪进行扩增时，扩增缓冲液中 列设计合适的引物，可以利用PCR技术检测 一般要添加Mg2+,A错误；基因片段扩增过程中， GNA和ACA基因是否导入棉花细胞中，A正 脱氧核苷酸会依次加到引物的3'端，B错误；电泳 确；由于重组质粒含有卡那霉素的抗性基因，故 时，在凝胶中基因片段的迁移速率与DNA分子的 将棉花细胞接种在含卡那霉素的培养基上可筛 大小、构象都有关，C错误；将基因片段与凝胶载 选出转基因细胞，B错误；GNA和ACA均有 样缓冲液的混合液加入凝胶加样孔时，要留一个 Bsa BI酶切位点，所以用限制酶Bsa B I和DNA 加样孔加指示分子大小的标准参照物，D正确。 连接酶处理两种基因可获得GNA-ACA融合基 1O.A【解析】利用PCR获取和扩增耐盐基因 因，C正确；图中质粒与ACA-GNA上都含有 SsPSL,需添加两种引物，四种脱氧核苷酸等组 KpnI和XhoI的酶切位点，与只用KpnI相 分，A错误；构建基因表达载体是基因工程的核 比，KpnI和XhoI处理融合基因和载体可保证 心，B正确；为防止杂菌污染，将植物材料和农杆 基因转录方向正确，D正确。 菌共同培养之前，植物材料需要消毒处理，C正 14.B【解析】由于引物只能引导子链从5到3'，根 确；DNA分子的大小和构象等有关，凝胶中的 据碱基互补配对原则，其中一个引物序列为 DNA分子通过染色，可以在波长为300nm的紫 5'-TGCGCAGT-3',A正确；根据三种酶的酶切 外灯下被检测出来，D正确。 位点，左侧的黏性末端是使用NheI切割形成 11.C【解析】目的基因两侧含有限制酶XhoI、 的，右边的黏性末端是用Cf0I切割形成的，B NheI的识别序列，将目的基因插入质粒中时， 错误；用步骤①的酶对载体进行酶切，使用了 需要用到的限制酶XhoI、NheI切割目的基因 NheI和CfoI进行切割，根据他们的识别位，点以 和质粒，再用DNA连接酶将目的基因和质粒连 及原本DNA的序列，切割之后至少获得了2个片 接在一起，A正确；将目的基因导入受体细胞时， 段，C正确；图中形成的是黏性末端，E.coli DNA连 需要用Ca+处理大肠杆菌，使其处于易于吸收周 接酶只能连接黏性末端，T4DNA连接酶既可连 围环境中DNA分子的状态，B正确；按图示构建 接平末端，又可连接黏性末端，所以可用 的重组质粒导入大肠杆菌后，由于目的基因的转 E.coli DNA连接酶或T4DNA连接酶连接酶 录方向和启动子的方向相反，大肠杆菌不能正常 切后的目的基因片段和质粒，D正确。 表达该目的基因，C错误；在含X-gal的培养基上 15.D【解析】构建重组DNA分子用到的工具酶有 培养导入了重组质粒的大肠杆菌，阝半乳糖苷酶 限制酶和DNA连接酶，质粒为载体，A错误；由 基因编码产生的B半乳糖苷酶可分解Xgl产生 于四环素和氨苄青霉素在高温下不稳定易失效， 蓝色物质，使菌落呈蓝色，D正确。 因此应在灭菌后再加入抗生素，B错误；图2中利 12.D【解析】将目的基因整合到受体细胞的叶绿 用绒布接种的方法为影印培养法，不改变菌落的 体基因组中能防止基因污染，因为叶绿体基因组 位置，C错误；原板上的甲、乙菌落中，甲菌落在 不会进入花粉，A正确；由于Ess基因相同，其 含四环素的培养基上能生存，在含氨苄青霉素的 在细菌和小麦中转录形成的mRNA相同，这也 培养基上不能生存，说明其甲菌落中质粒的氨苄 是基因工程得以实现的基础之一，B正确；若转 青霉素抗性基因被破坏，说明其是成功导入重组 基因小麦培育成功，则会产生Epsps酶，能抵抗 质粒的受体菌，D正确。 草甘膦，因此可以通过喷洒草甘膦来检验转基因 16.D【解析】TaqDNA聚合酶只能从引物的3'端 小麦是否培育成功，C正确；转基因小麦中导入 开始延伸DNA子链，所以两条子链合成一定都 ·19. 1A 真题密卷 单元过关检测 是从5端向3'端延伸，A正确；图示表示复性阶 18.(11分，除标注外，每空2分) 段，该过程的温度与引物的长短、碱基组成等有 (1)4种脱氧核苷酸(1分)高温(1分)Mg2+ 关，引物长度越长或者GC含量越高，则复性的 (1分) 温度设置越高，B正确：经过5次循环后会产生 (2)更强 25=32个，其中只有2个DNA分子含有最初的 (3)①不损伤内细胞团，不影响胚胎发育②4 模板链，另仅含有第一次复制产生的单链参与形 ⑤受体对移植的胚胎基本不会发生免疫排斥反应 成的DNA分子有8个，因此经过5次复制产生 【解析】(I)巢式PCR反应体系中需要加入的原 等长的目的基因片段32一10一22个，C正确； 料是4种脱氧核苷酸。巢式PCR过程用高温代替 PCR所需要的引物和原料是一次性添加的，在实 解旋酶，在PCR过程中，通过加热到90~95℃ 验过程中不需要补充，D错误。 使DNA双链解开，这一过程不需要解旋酶。为 二、非选择题 激活反应体系中的DNA聚合酶，还需要加入 17.(11分，除标注外，每空2分) Mg2+,Mg2+是Taq酶的激活剂。 (1)2(1分)（人乳铁蛋白）基因的一段碱基序列 (2)相比于常规PCR获得的产物，巢式PCR获得 (2)DNA连接Sau3AI可以识别BamH I、 的产物特异性更强。因为巢式PCR经过两轮扩 BcLI的切割位点，并切割产生相同的黏性末端 增，第一轮扩增产生中间产物，第二轮以内引物 (3)氨苄青霉素 对中间产物进行扩增，这样可以减少非特异性扩 (4)大肠杆菌为原核生物，没有内质网和高尔基 增产物，提高产物的特异性。 体，缺乏加工人乳铁蛋白的能力 (3)①取囊胚的滋养层细胞提取DNA,原因是滋 【解析】(1)引物是根据目的基因核苷酸序列合 养层细胞将来发育成胎膜和胎盘，取滋养层细胞 成的单链DNA,因DNA复制只能从子链的5'端 不损伤内细胞团，不会影响胚胎的发育。②根据 向3√端进行，DNA由两条单链构成，为保证扩增 牛的SRY和CSN1S1基因序列共可设计合成4 效率，至少需加入2种引物，合成引物需要已知 对引物。因为要对Y染色体上的SRY基因和常 人乳铁蛋白基因的一段碱基序列。 染色体上的CSN1S1基因进行扩增，每个基因的 (2)构建重组质粒时，首先利用限制酶可以切割 巢式PCR需要2对引物（外引物和内引物），所 目的基因所在的DNA片段以及质粒从而获得相 以共需要4对引物。⑤对符合要求的胚胎进行 同的黏性末端，然后用DNA连接酶实现了人乳 移植，在操作过程中不需要对受体提供免疫抑制 铁蛋白基因与质粒的重新连接。人乳铁蛋白基 剂，原因是受体对移入子宫的外来胚胎基本上不 因与质粒能够连接在一起，说明了Sau3AI可以 发生免疫排斥反应。 识别Bam H I、BclI的切割位，点，并切割产生相 19.(10分，除标注外，每空1分) 同的黏性末端。 (l)EcoR I、HindⅢMfeI、HindⅢDNA (3)在构建重组DNA分子时，破坏了TetR基因， 连接 AmpR正常，因此成功导入重组质粒的大肠杆菌 (2)5-TGAACG-3 5-CGAGTC-3 对氨苄青霉素有抗性，可在含氨苄青霉素的培养 (3)3/三8 基中培养受体细胞，以判断重组质粒是否导入 (4)是bbXEXR(2分) 成功。 【解析】(I)BamHI会破坏启动子，EcoR I不在 (4)由于大肠杆菌为原核生物，没有内质网和高 启动子和终止子之间，因此应该选择限制酶 尔基体，缺乏加工人乳铁蛋白的能力，因此通过 MfeI、HindⅢ切割质粒。若使用MfeI切割 转基因大肠杆菌不能生产有活性的人乳铁蛋白。 含R基因的DNA片段，则会破坏目的基因，MfeI 1A ·20· ·生物学· 参考答案及解析 的识别序列和EcoR I相同，故应选用EcoR I、 色体DNA上(2分) HindⅢ切割含R基因的DNA片段，再用DNA (4)卡那霉素脱分化和再分化 连接酶连接成重组质粒。 【解析】(1)将油体蛋白基因SIOLE1与红色 (2)已知mRNA的序列为5'-UGAACGCUA… 荧光蛋白基因TagRFP连接形成融合基因 (中间序列)·GUCGACUCG3,则cDNA的序 SIOLE1-TagRFP需要使用DNA连接酶。红 列为5'-CGAGTCGAC·(中间序列)… 色荧光蛋白基因TagRFP表达产物可以发出红 TAGCGTTCA-3,互补链序列为5'-TGAACGC 色荧光，融合基因中整合上基因TagRFP的目 TA…(中间序列)…GTCGACTCG3'。由于引物是 的是转基因番茄发出红色荧光，便于筛选。 根据目的基因两端的碱基序列设计的，且引物的延 (2)DNA复制是从模板的3→5'，引物是能与目 伸方向是5端→3'端，所以PCR扩增时所需一对引 的基因两端序列互补配对的单链DNA,因此首 物的碱基序列5-TGAACG3'、5-CGAGTC-3'。 先要根据融合基因的3'端碱基序列设计引物，在 (3)由图示可知，第一、二轮循环合成的子链长度 PCR过程中需要使用引物的原因是使DNA聚 均不同，根据半保留复制特点可知，前两轮循环 合酶能够从引物的3'端开始连接脱氧核苷酸。 产生的4个DNA分子的两条链均不等长，第三 (3)为了保证目的基因成功表达，目的基因应该 轮循环产生的DNA分子存在等长的两条核苷酸 插入在质粒的启动子和终止子之间，若选择 链，如分析中的图示。由于第三轮出现2个等长 EcoRI切割Ti质粒，会导致氨苄青霉素抗性基 的DNA,经过第四次复制产生4个等长的DNA, 因的破坏，无法完成后续的筛选过程，因此需要 另外有4个DNA通过第四次复制也会分别产生 使用KpnI、XbaI切割Ti质粒，便于融合基因 1个等长的DNA,即总共8个。 的插入。通过含融合基因的农杆菌的转化作用， (4)由题意可知，F,中同时表现红蓝荧光的雌、雄 可以使融合基因进入番茄细胞，这是利用农杆菌 小鼠杂交得F2,F2中红蓝荧光雌性：红蓝荧光 能将Ti质粒上的T-DNA转移到被侵染的细胞， 雄性：红色荧光雌性：红色荧光雄性：蓝色荧 并将其整合到该细胞的染色体DNA上的特点。 光雄性：无荧光雄性=6：3：2：1：3：1，比例 (4)重组质粒上含有氨苄青霉素抗性基因，氨苄 为9：3：3：1的变形，因此红色荧光和蓝色荧 青霉素无法抑制农杆菌生长，因此获得重组细胞 光基因遵循基因的自由组合定律，且F2中红色 后，通常使用含卡那霉素的选择培养基培养番茄 荧光雌性占2/16(1/8)，红色荧光雄性占1/16， 细胞以抑制农杆菌生长，番茄细胞经脱分化和再 说明红色荧光在雌雄中的表现不同，说明红色荧 分化生理过程，最终培育出转基因番茄植株 光基因位于X染色体上，则蓝色荧光基因位于常 21.(10分，除标注外，每空2分) 染色体上，F1红蓝荧光的雌、雄小鼠的基因型分 (1)目的基因、启动子、终止子和标记基因(1分) 别为BbXFX、BbXRY,母本（红色荧光）的基因型 (2)潮霉素(1分) 是bbXRXR。 (3)棉花植株染色体DNAF3(1分)R2(1分) 20.(10分，除标注外，每空1分) 在PCR反应中，需要利用高温使DNA双链解 (1)DNA连接转基因番茄发出红色荧光，便于 旋，普通的DNA聚合酶在高温下会变性失活，而 筛选 TagDNA聚合酶能够耐高温，在高温条件下依然 (2)3'使DNA聚合酶能够从引物的3'端开始 具有活性 连接脱氧核苷酸(2分) (4)用1~1362合成基因序列和1363~1848天 (3)KpnI、XbaI能将Ti质粒上的T-DNA 然基因序列获得改造的抗虫蛋白（对苏云金杆菌 转移到被侵染的细胞，并将其整合到该细胞的染 基因进行改造，获得相应的抗虫蛋白) ·21· 1A 真题密卷 单元过关检测 【解析】(1)在操作过程中关健是构建基因表达 DNA双链解旋，普通的DNA聚合酶在高温下会 载体，基因表达载体包括的主要组成部分为目的 变性失活，而TaqDNA聚合酶能够耐高温，在高 基因、启动子、终止子和标记基因。 温条件下依然具有活性。 (2)结合基因表达载体的示意图，根据图中穿梭 (4)蛋白质工程是指以蛋白质分子的结构规律及 质粒上的KanR和HygBR两个标记基因的位 其与生物功能的关系作为基础，通过改造或合成 置，用潮霉素初步筛选转化的棉花愈伤组织。 基因，来改造现有蛋白质，或制造一种新的蛋白 (3)PCR扩增目的基因时，以棉花植株染色体 质，以满足人类生产和生活的需求，用1~1362 DNA作模板，引物应在目的基因的两端，所以为 合成基因序列和1363~1848天然基因序列获 检测棉花植株是否导入目的基因，应选用的引物 得改造的抗虫蛋白，将1~1362基因序列改变为 是F3和R2。PCR反应中需要使用TagDNA聚 棉花细胞偏好密码子的基因序列来产生新的蛋 合酶，原因是在PCR反应中，需要利用高温使 白质，属于蛋白质工程。 1A ·22·