第39讲 微生物的培养技术和应用（复习课件）（安徽专用）2026年高考生物一轮复习讲练测

该高中生物学高考复习课件聚焦微生物的培养技术和选择培养与计数核心考点，依据高考评价体系分析近3年真题考查频率，梳理培养基成分、无菌技术、纯培养方法等考向，归纳选择/鉴别培养基辨析、微生物分离计数等常考题型，体现高考备考的针对性和实用性。 课件以“考情解码-体系构建-真题突破”为特色，融入2025年安徽、湖南等高考真题，通过土壤中分解尿素细菌分离实验案例，训练科学思维和探究实践素养，详解平板划线法灼烧目的、稀释涂布平板法计数误差分析等答题要点，助力学生掌握得分技巧，为教师提供系统复习方案，提升备考效率。

安徽专用 第39讲 微生物的培养 技术和应用 2026年高考一轮复习 1 01 考情解码·考点定标 智能导览·极速定位 02 体系构建·思维领航 03 考点突破·考向探究 04 真题感知·命题洞见 考点一 微生物的培养技术 知识点1 培养基 知识点2 无菌技术 知识点3 微生物的纯培养 考向一 培养基的成分、功能和应用分析 考向二 无菌技术 考向三 微生物的纯培养 考点二　微生物的选择培养与计数 知识点1 微生物的选择培养——稀释涂布平板法的操作步骤 知识点2 微生物的数量测定 知识点3 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 知识点4 分解纤维素的微生物的分离 考向一 微生物的选择与培育 考向二 微生物的分离与计数 05 学以致用·能力提升 长句作答类 比较归纳类 01 考情解码·考点定标 考情解码·考点定标 考点要求 考查形式 近3年出现频率 微生物的培养技术 简答题 选择题 2025.湖南.T5 2025.江苏.T11 2025.黑吉辽·T4 2025.河北.T18 2024·湖南·T6 2024·黑吉辽·T19 2024·山东·T15 2024·浙江6月选考.T10 2023·全国乙·T37 2023·河北·T12 2023·重庆·T9 微生物的选择培养与计数 简答题 选择题 2025.黑吉辽·T4 2025.山东.T15 2024·贵州·T21 2024·江西·T17 2024·重庆·T13 2024·广东·T21 2024·浙江6月选考·T11 4 考情解码·考点定标 考情分析 从命题题型来看，参考2025年全国其他地区真题，微生物的培养技术及应用模块可能会以选择题和非选择题的形式出现，且非选择题的比重可能较大。选择题可能会考查微生物的接种方法、培养基的制备等基础知识，非选择题则可能结合生产生活实际，考查微生物的选择培养、计数等。 从命题内容上，预计会重点考查培养基的配方、无菌技术、微生物的纯培养过程等，还可能涉及微生物的应用，如利用微生物降解污染物等。考生需要熟练掌握相关实验操作和原理，能够运用所学知识解决实际问题。 复习目标 1.获得纯净的微生物培养物是发酵工程的基础。 2.阐明在发酵工程中灭菌是获得纯净的微生物培养物的基础。 3.阐明无菌技术是在操作过程中，保持无菌物品和无菌区域不被微生物污染的技术。 4.举例说明通过调整培养基的配方可有目的的培养某种微生物。 5.概述平板划线法和稀释涂布平板法是实验室中进行微生物分离和纯化的常用方法。 6.概述稀释涂布平板法和显微镜计数法是测定微生物数量的常用方法。 5 02 体系构建·思维领航 体系构建·思维领航 无菌技术 微生物的接种 培养基 培养基的种类 培养基营养成分 消毒 灭菌 湿热灭菌 干热灭菌 灼烧灭菌 平板划线法 微生物的培养 紫外线消毒 化学药物消毒 巴氏消毒 煮沸消毒 稀释涂布平板法 微生物的选择培养和计数 稀释涂布平板法的操作过程 微生物的数量测定 微生物的选择培养 选择培养基 间接计数法— 稀释涂布平板法 直接计数— 计数板计数法 氮源、碳源、水、无机盐 03 考点突破·考向探究 知识点1  培养基 知识夯基 考向研析 考点一 微生物的培养技术 人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。 1.定义： 2.作用： 用以培养、分离、鉴定、保存微生物或积累其代谢物。 3、培养基的种类： 培养基种类 培养基特点 作用 培养基 加凝固剂，如_____ 半固体培养基 容器放倒不致流出，剧烈震动则破散 观察微生物的运动、分类鉴定 培养基 不加凝固剂 固体 琼脂 液体 微生物的分离与鉴定，活菌计数 常用于工业生产、微生物的扩大培养 知识点1  培养基 知识夯基 考向研析 考点一 微生物的培养技术 注：琼脂仅作为凝固剂，不为微生物生长提供能量和碳源 (按物理性质分) 知识点1  培养基 知识夯基 考向研析 考点一 微生物的培养技术 选择培养基 鉴别培养基 如含抗生素的培养基 如不加氮源的培养基 伊红亚甲蓝（大肠杆菌） 酚红（分解尿素菌） 刚果红（分解纤维素菌） 加高浓度NaCl的培养基 培养基的种类 (按用途分) 选择培养基 鉴别培养基 如含抗生素的培养基 如不加氮源的培养基 伊红亚甲蓝（大肠杆菌） 酚红（分解尿素菌） 刚果红（分解纤维素菌） 加高浓度NaCl的培养基 培养基的种类 (按用途分) 知识点1  培养基 知识夯基 考向研析 考点一 微生物的培养技术 水、碳源、氮源、无机盐 ①碳源 无机碳源： 有机碳源： ②氮源 NH4＋、NO3-、NH3等。 牛肉膏、蛋白胨、尿素、氨基酸等。 CO2、CO32-、HCO3-。 葡萄糖、牛肉膏、蛋白胨等。 无机氮源： 有机氮源： 来源于动物，含有糖、维生素和有机氮等营养物质 ③无机盐 Zn、Cu、Mn、Co、Mo等 大量元素： 微量元素： Ca、K 、Mg等 牛肉膏、蛋白胨： （自养微生物） （异养微生物） （异养微生物） （自养微生物） ④水 成分： 4、基本成分： 知识点1  培养基 知识夯基 考向研析 考点一 微生物的培养技术 其他条件： pH、特殊营养物质和氧气。如下表： 微生物 乳酸杆菌 霉菌 细菌 厌氧微生物 特殊需求 添加______ pH调至____ pH调至_____________ _______ 维生素 酸性 中性或弱碱性 无氧 组分 含量 提供的主要营养 牛肉膏 5g 蛋白胨 10g NaCl 5g 无机盐 H2O 定容至1000mL 水 琼脂 20g 凝固剂 培养基的基本成分(主要营养物质) —— 4种 碳源、氮源、磷酸盐和维生素等 碳源、氮源和维生素等 知识点1  培养基 知识夯基 考向研析 考点一 微生物的培养技术 1.为什么培养基需要氮源？ 是微生物合成蛋白质、核酸等物质所必需的。 2.培养微生物时，培养基中是否必须有碳源和氮源？ 不一定。例如，培养自养型微生物时，一般不需要添加碳源，微生物可以利用空气中的二氧化碳；培养固氮微生物时，一般不需要添加氮源，微生物可以利用空气中的氮气。 根据碳/氮源的种类判断微生物同化作用是自养还是异养 a.异养型微生物的碳源为 b.自养型微生物的碳源为 含碳有机物 含碳无机物 知识点1  培养基 知识夯基 考向研析 考点一 微生物的培养技术 几种微生物的营养和能量来源 微生物 碳源 氮源 能源 蓝细菌 CO2 光能 硝化细菌 CO2 NH3 NH3的氧化 根瘤菌 糖类等有机物 N2 有机物 大肠杆菌 糖类、蛋白质等有机物 蛋白质等 有机物 自养 微生物 异养 微生物 知识点2  无菌技术 知识夯基 考向研析 考点一 微生物的培养技术 1.目的： 2.关键： 3.方法： 获得 的微生物培养物。 纯净 防止 污染。 杂菌 消毒与灭菌 项目 消毒 灭菌 作用强度 较为 的理化因素 的理化因素 作用程度 杀死物体表面或内部_____微生物 杀死物体内外的 微生物 芽孢和孢子 一般不能杀灭 能杀灭 适用对象 实验操作的空间、操作者衣着和双手 微生物培养器皿、接种用具和培养基等 温和 强烈 一部分 所有 知识夯基 考向研析 考点一 微生物的培养技术 4.消毒与灭菌的比较： 类型 适用范围 操作方法 消 毒 灭 菌 较为温和理化方法，杀死部分微生物(不包括芽孢、孢子) 强烈的理化方法，杀死所有微生物(包括芽孢、孢子) 煮沸消毒法 日常生活用品 100 ℃煮沸5～6 min 巴氏消毒法 不耐高温的液体 62～65 ℃煮30 min或80-90 ℃煮30s-1 min 化学药剂 生物活体、水源等 擦拭等,如用酒精擦拭双手、用氯气消毒水源 紫外线 紫外线照射30 min 灼烧灭菌 接种的金属工具、接种时用的试管口或瓶口等 直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧 干热灭菌 耐高温、需要保持干燥的物品,如玻璃器皿和金属用具等 物品放入干热灭菌箱,160～170 ℃加热2～3h 湿热灭菌 培养基、培养皿等,生产和实验室常用 高压蒸汽灭菌锅内,100 kPa,温度121 ℃,15～30 min 接种室、接种箱，超净工作台 知识点2  无菌技术 知识夯基 考向研析 考点一 微生物的培养技术 【教材隐性知识】教材隐性知识：源于选择性必修3 P10“相关信息”：生物消毒法是指利用生物或其_________除去环境中的部分微生物的方法。 代谢物 注意： 消毒和灭菌的原理都是使微生物的蛋白质变性，借此杀死微生物。 但两者的实质不同。消毒的结果实际上是部分灭菌。 知识点2  无菌技术 注：使用后的培养基必须灭菌后才能丢弃，以免污染环境。 知识夯基 考向研析 考点一 微生物的培养技术 知识点2  无菌技术 芽 孢 和 孢 子 孢子：细菌、原生动物、真菌和植物等产生的一种有繁殖作用的无性生殖细胞。能直接发育成新个体。 芽孢：有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体(不是繁殖体)，叫作芽孢。 知识夯基 考向研析 考点一 微生物的培养技术 知识点2  无菌技术 1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？ 2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。 (1)培养细菌用的培养基与培养皿 (2)玻棒、试管、烧瓶和吸管 (3)实验操作者的双手 无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。 (1)、(2)需要灭菌；(3)需要消毒。 思考 知识夯基 考向研析 考点一 微生物的培养技术 知识点3  微生物的纯培养 最常用的接种方法是______________和_______________。 灭菌 分离 平板划线法 稀释涂布平板法 ①培养物： ②纯培养物： 接种于培养基内，在合适条件下形成的含特定种类微生物的群体 ③纯培养： 获得纯培养物的过程 1、培养物、纯培养物、纯培养的概念 (2)菌落的概念 由一个微生物细胞繁殖而来的肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体。 配制培养基、________、接种、________和培养等。 由单一个体繁殖所获得的微生物群体 概念： 步骤： ④接种方法： 微生物在固体培养基表面或内部生长，可以形成肉眼可见的菌落 念珠菌 霉菌 酵母菌 放线菌 菌落是鉴定菌种的重要依据 区分依据：形状、大小、光泽度、颜色、透明度等。 知识夯基 考向研析 考点一 微生物的培养技术 知识点3  微生物的纯培养 知识夯基 考向研析 考点一 微生物的培养技术 知识点3  微生物的纯培养 2.酵母菌纯培养的操作步骤 配制培养基 灭菌 接种 分离 培养等 倒平板 平板划线法 稀释涂布平板法 知识夯基 考向研析 考点一 微生物的培养技术 知识点3  微生物的纯培养 15～20 g琼脂 湿热灭菌(高压蒸汽灭菌)法 干热灭菌 灭菌前调pH 倒平板 2.酵母菌纯培养的操作步骤： 知识夯基 考向研析 考点一 微生物的培养技术 知识点3  微生物的纯培养 防止水分蒸发过快，防止皿盖上的水珠落入培养基。 倒平板注意事项： 温度：50℃左右 冷凝后平板倒置 操作：在酒精灯火焰附近 酒精灯火焰 灼烧灭菌 知识夯基 考向研析 考点一 微生物的培养技术 知识点3  微生物的纯培养 2.酵母菌纯培养的操作步骤： 知识夯基 考向研析 考点一 微生物的培养技术 知识点3  微生物的纯培养 平板划线法和稀释涂布平板法 恒温培养箱 28 作对照，检测培养基灭菌是否合格 知识夯基 考向研析 考点一 微生物的培养技术 知识点3  微生物的纯培养 用图中字母和箭头表示平板划线操作的正确步骤： 。 d→b→f→a→e→c→h→g 平板划线法 通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。经过数次划线后培养可以分离得到单菌落。 知识夯基 考向研析 考点一 微生物的培养技术 知识点3  微生物的纯培养 灼烧时期 目的 取菌种前 每次划线前 接种结束后 杀死接种环上原有微生物。 杀死上次划线残留菌种,使下次划线菌种直接来自上次划线末端 杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。 1 2 3 4 5 ①接种环只蘸一次菌液 平板划线法在划线时注意哪些问题？ ③划线首尾不能相接 ④每次划线前灼烧接种环，待冷却后再开始画线。 ②第二次及其后的划线操作应从上一次划线的末端开始划线 知识夯基 考向研析 考点一 微生物的培养技术 知识点3  微生物的纯培养 平板划线法 方法： 原理： 接种和分离 对照组： 实验组： 培养酵母菌 未接种平板倒置培养 接种平板倒置培养 单个细胞 聚集的菌种 单个菌落 连续划线 分散 生长繁殖 结果分析 ①在未接种的培养基表面是否有菌落生长。 ②在接种酵母菌的培养基上是否可观察到菌落颜色、形状、大小基本一致，并符合酵母菌菌落特点的单菌落。 恒温培养箱 知识夯基 考向研析 考点一 微生物的培养技术 知识点3  微生物的纯培养 (1)在未接种的培养基表面是否有菌落生长?如果有,说明了什么? 实验结果分析与评价 在未接种的培养基表面应该没有菌落生长，如果有，说明培养基被杂菌污染或灭菌不彻底。 可以在培养12h和24h后，观察菌落的大小、形状、颜色。培养24h后，菌落的大小、形状是否发生变化，菌落颜色是否加深，光泽度是否增加，等等 在接种酵母菌的培养基上可观察到单菌落。如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合酵母菌菌落的特点（一般菌落表面光滑，多呈乳白色)，则说明纯化酵母菌的操作成功；如果观察到了不同形态的菌落，可能是接种的菌种不纯或者无菌操作不规范等原因引起的。 (2)在接种酵母菌的培养基上,你是否观察到了单菌落?这些菌落的颜色、形状和大小是否一致?如果你观察到了不同形态的菌落,你能分析出可能是由哪些原因引起的吗? (3)你是如何记录实验结果的? 请与其他同学交流、互评。 A 需要调节PH值才能保证微生物正常生长 需要添加碳源 也可以用固体培养基 1.培养细菌、真菌的过程一般包括配制培养基、高温灭菌冷却、接种、恒温培养等步骤。下列关于配制培养基的叙述，正确的是（ ） 配制培养基是指将各种营养物质按照一定的比例混合在一起，制成适合细菌、真菌生长的营养基质，一般包括称量、溶解、灭菌等步骤 B. 配制培养基只能用液体培养基，不能用固体培养基 C. 培养基中不需要添加碳源，因为细菌、真菌都能自己合成碳源 D. 配制培养基时不需要考虑pH值，细菌、真菌对pH值要求不高 知识夯基 考向研析 考向1   培养基的成分、功能和应用分析 考点一 微生物的培养技术 2.（2020，浙江卷）下列关于微生物培养及利用的叙述，错误的是(　 　) A. 利用尿素固体培养基可迅速杀死其他微生物，而保留利用尿素的微生物 B. 配制培养基时应根据微生物的种类调整培养基的pH C. 酵母菌不能直接利用糯米淀粉发酵得到糯米酒 D. 适宜浓度的酒精可使醋化醋杆菌活化 A 利用尿素固体培养基筛选尿素分解菌时，尿素固体培养基并不直接杀死其他微生物，而是其他微生物不能以尿素为氮源，无法在尿素固体培养基中存活 知识夯基 考向研析 考向1   培养基的成分、功能和应用分析 考点一 微生物的培养技术 利用尿素固体培养基筛选尿素分解菌时，尿素固体培养基并不直接杀死其他微生物，而是其他微生物不能以尿素为氮源，无法在尿素固体培养基中存活，A错误；不同的微生物生长所需的最适pH不同，因此配制培养基时应根据微生物的种类调整培养基的pH，B正确；酵母菌不能直接利用淀粉进行酒精发酵，需要在淀粉酶作用下将淀粉水解成葡萄糖，C正确；醋化醋杆菌可以以酒精为发酵底物，适宜浓度的酒精可使醋化醋杆菌活化，D正确。 A. 从物理性质看该培养基属于固体培养基，从用途看该培养基属于鉴别培养基 B. 能在此培养基上生长的只有大肠杆菌 C. 培养基中的牛肉膏、琼脂等含碳物质，可为该细菌提供碳源 D. 该培养基调节合适的 后就可以接种使用 还要进行湿热灭菌操作 3. 下表为某培养基的配方，下列叙述正确的是( ) 成分 牛肉膏 葡萄糖 伊红—亚甲蓝 琼脂 蒸馏水 含量 适量 注：伊红—亚甲蓝可用于检测大肠杆菌，使菌落染成深紫色，带金属光泽。 A 琼脂是凝固剂，不能为细菌提供碳源 能生长多种微生物 知识夯基 考向研析 考向1   培养基的成分、功能和应用分析 考点一 微生物的培养技术 从物理性质看该培养基含有琼脂，属于固体培养基，从用途看该培养基含有鉴定性物质伊红—亚甲蓝，可用于鉴定大肠杆菌，属于鉴别培养基，A正确；此培养基中（含有牛肉膏）能生长多种微生物，不仅仅只有大肠杆菌，B错误；该培养基调节合适的 后要进行湿热灭菌（高压蒸汽灭菌）操作，D错误。 4.2某同学将5个手指尖在贴有“洗手前”标签的固体培养基上轻轻按一下，然后用肥皂将该手洗干净，再将5个手指尖在贴有“洗手后”标签的同种培养基上轻轻按一下。将这两个培养皿放入37 ℃恒温培养箱中培养24 h后，发现贴有“洗手后”标签的培养皿中菌落较少。下列相关叙述错误的是(　　) A.这个实验中需要进行灭菌处理的材料用具有培养皿和培养基等 B.“将手指尖在培养基上轻轻按一下”相当于微生物培养中的接种 C.从实验结果来看，洗手后的操作不会污染培养基 D.培养基中的氮元素是微生物合成蛋白质、核酸等物质所必需的 C 不能说明不会污染培养基 知识夯基 考向研析 考向2   无菌技术 考点一 微生物的培养技术 5.（2022·湖北卷）灭菌、消毒、无菌操作是生物学实验中常见的操作。 下列叙述正确的是(　　) A．动、植物细胞DNA的提取必须在无菌条件下进行 B．微生物、动物细胞培养基中需添加一定量的抗生素以防止污染 C．为防止蛋白质变性，不能用湿热灭菌法对牛肉膏蛋白胨培养基进行灭菌 D．可用湿热灭菌法对实验中所使用的微量离心管、细胞培养瓶等进行灭菌 D 动物细胞培养基中需添加一定量抗生素以防止污染，而微生物培养不能加 动、植物细胞DNA的提取不需要在无菌条件下进行 一般用湿热灭菌法对牛肉膏蛋白胨培养基进行灭菌，以防止杂菌污染 知识夯基 考向研析 考向2   无菌技术 考点一 微生物的培养技术 动、植物细胞DNA的提取不需要在无菌条件下进行，A错误；动物细胞培养基中需添加一定量的抗生素以防止污染，保证无菌环境，而微生物的培养不能加入抗生素，B错误；一般用湿热灭菌法对牛肉膏蛋白胨培养基进行灭菌，以防止杂菌污染，C错误。 6.防止杂菌污染是获得纯净的微生物培养物的关键。下列叙述错误的是(　　) A．利用微生物能够寄生于多种细菌体内使细菌裂解，可实现生物消毒 B．利用紫外线对超净工作台进行消毒前，喷洒消毒液可加强消毒效果 C．利用干热灭菌箱对培养基进行灭菌时，应在160～170 ℃的热空气中维持1～2 h D．利用酒精灯对金属用具进行灼烧灭菌时，应在酒精灯火焰充分燃烧层进行 C 应用湿热灭菌法（高压蒸汽灭菌法）对培养基进行灭菌 知识夯基 考向研析 考向2   无菌技术 考点一 微生物的培养技术 D 7.下列关于“酵母菌的纯培养”实验的叙述，错误的是(　　) A.马铃薯捣烂后的滤液中含有酵母菌生长所需的多种营养成分 B.接种环灭菌时，顶端的环和环后的部分柄均需通过火焰灼烧 C.平板划线时，接种环应在固体培养基表面轻轻地连续划线 D.完成平板划线后，应将平板立刻倒置培养以免污染培养基 完成平板划线后，待菌液被培养基吸收，再将平板倒置培养 知识夯基 考向研析 考向3   微生物的纯培养 考点一 微生物的培养技术 8.物质 A 是一种难降解的有机物，细菌 X 体内存在可降解 A 的酶。科研人员欲从淤泥中分离得到细菌 X，相关叙述正确的是（ ） 需对配制好的培养基进行湿热灭菌 用于分离 X 的培养基蛋添加葡萄糖作为碳源 细菌 X 的纯化与计数可使用平板划线法 培养后某平板无菌落生长，则原因不可能是样品稀释倍数过大 A 只能以物质A为唯一的碳源 平板划线法不能用于计数 样品稀释倍数过大是可能的原因 知识夯基 考向研析 考向3   微生物的纯培养 考点一 微生物的培养技术 9.分散的微生物在适宜的固体培养基表面繁殖形成的肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体，称为菌落。由单个微生物在固体培养基表面繁殖形成的单菌落就是纯培养物，获取纯培养物的常用方法是平板划线法和稀释涂布平板法。下列有关这两种方法的说法，错误的是(　　) A.这两种方法的关键都是要防止杂菌污染以保证获得培养物的纯度 B.这两种方法均需同时将接种的平板和未接种的平板倒置进行培养 C.接种环和涂布器均需要在火焰上灼烧，且涂布器灼烧前需用酒精引燃 D.用稀释涂布平板法统计菌落数目时，所获得的数据往往比实际值大 D 当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，故用稀释涂布平板法进行微生物的计数时，所获得的数据往往比实际值小。 知识夯基 考向研析 考向3   微生物的纯培养 考点一 微生物的培养技术 10.某中学为宣传正确佩戴口罩可降低患呼吸道传染疾病的风险，进行了相关实验。实验 中将牛肉膏蛋白胨培养基置于距正确佩戴口罩的实验者口部前方 处，然后对着培 养基讲话 或咳嗽2次，再进行微生物培养和观察。下列叙述错误的是（ ） A.实验中牛肉膏蛋白胨应为固体培养基，并进行严格灭菌 B.实验者对培养基进行处理后，放入恒温培养箱中培养 C.实验中还应设置不戴口罩直接讲话或咳嗽进行实验对照 D.培养结束后可根据菌落的形状、大小、颜色等特征初步区分不同种的微生物 B 知识夯基 考向研析 考向3   微生物的纯培养 考点一 微生物的培养技术 实验中牛肉膏蛋白胨培养基应为固体培养基，为了防止其他 微生物的干扰，应进行严格灭菌处理，A正确；分析题意可知，本实 验是为了确定正确佩戴口罩可降低患呼吸道传染疾病的风险，而人 的体温约为 ，因此应设置与人的体温基本相同的温度，即在 恒温培养箱中培养 ，B错误；为宣传正确佩戴口罩可降 低患呼吸道传染疾病的风险，本实验的实验组为佩戴口罩对着培养 基讲话 或咳嗽2次，实验中还应该设置不戴口罩直接讲话或咳 嗽进行实验对照，C正确；不同微生物的菌落具有其特殊的特征，在 实验培养结束后，可根据菌落的形状、大小、色泽等特征初步区分 不同种的微生物，D正确。 41 11.(2024·湖南卷)微生物平板划线和培养的 具体操作如图所示，下列操作正确的是(　　) D A.①②⑤⑥ B.③④⑥⑦ C.①②⑦⑧ D.①③④⑤ ②中拔出棉塞后应握住棉塞上部；⑥中划线时不能将培养皿的皿盖完全拿开，应只打开一条缝隙；⑦中划线时第5次的划线不能与第1次的划线相连；⑧中平板应倒置培养 知识夯基 考向研析 考向3   微生物的纯培养 考点一 微生物的培养技术 12.(2020·江苏卷)为纯化菌种，在鉴别培养基上划线接种纤维素降解细菌，培养结果如图所示。下列叙述正确的是(　　) B A.倒平板后需间歇晃动，以保证表面平整 B.图中Ⅰ、Ⅱ区的细菌数量均太多，应从Ⅲ区挑取单菌落 C.该实验结果因单菌落太多，不能达到菌种纯化的目的 D.菌落周围的纤维素被降解后，可被刚果红染成红色 无需间歇晃动 存在单菌落，能达到菌种纯化的目的 刚果红能与纤维素形成红色复合物，但不能和纤维素水解后的纤维二糖和葡萄糖等形成红色复合物，因此菌落周围的纤维素被降解后，不能被刚果红染成红色 知识夯基 考向研析 考向3   微生物的纯培养 考点一 微生物的培养技术 知识点1  微生物的选择培养--稀释涂布平板法的操作步骤 知识夯基 考向研析 考点二 微生物的选择培养与计数 人为提供有利于目的菌生长的条件（包括营养、温度和pH等），同时抑制或阻止其他微生物的生长。 在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基称为选择培养基。 实验室中微生物筛选的原理： 选择培养基的概念： 加入青霉素的培养基 不加氮源的无氮培养基 不加含碳有机物的无碳培养基 分离自养型微生物 分离固氮菌 分离酵母菌、霉菌等真菌 分离金黄色葡萄球菌 分离能消除石油污染的微生物 加高浓度食盐 石油是唯一碳源 1.选择培养基 项目 选择培养基 鉴别培养基 原理 用途 举例 图示 加入不影响甚至促进目标微生物生长，而抑制或阻止其他种类微生物生长的化学物质 加入某种指示剂或化学药品(不影响微生物正常生长)，使微生物的某种代谢产物与培养基中的特定指示剂或化学药品发生反应 培养、分离出目标微生物 鉴别目标微生物 培养酵母菌和霉菌时，可在培养基中加入青霉素，抑制细菌的生长；利用以尿素为唯一氮源的培养基来培养可分解尿素的细菌 可用伊红亚甲蓝培养基鉴定饮用水或乳制品中是否含有大肠杆菌(若有，则菌落呈深紫色，并有金属光泽 知识点1  微生物的选择培养--稀释涂布平板法的操作步骤 知识夯基 考向研析 考点二 微生物的选择培养与计数 2.选择培养基与鉴别培养基的比较 怎样选择出抗氨苄青霉素能力的细菌? 培养基中加氨苄青霉素 具有氨苄青霉素抗性的菌落 没有氨苄青霉素抗性的细菌 培养基应有菌落 没有氨苄青霉素抗性的细菌被淘汰 怎么证明一个选择培养基具有选择性呢？ 知识点1  微生物的选择培养--稀释涂布平板法的操作步骤 知识夯基 考向研析 考点二 微生物的选择培养与计数 应该设置基础培养基（如牛肉膏蛋白胨培养基）或完全培养基作为对照，若基础培养基或完全培养基中生长的菌落数菌多于该选择培养基，则该选择培养基具有选择性。 基础培养基 怎么证明一个选择培养基具有选择性呢？ 如果让你配制一种培养基，将土壤稀释液中能分解尿素的细菌分离出来，培养基的配方该如何设计？ 选择培养基 知识点1  微生物的选择培养--稀释涂布平板法的操作步骤 知识夯基 考向研析 考点二 微生物的选择培养与计数 如果想知道1g土壤中有多少能分解尿素的细菌，还需对土壤菌液进行稀释及科学的微生物数量测定方法---稀释涂布平板法。 90mL无菌水 2 铲取土样，将样品装入纸袋中。 将10g土样加入盛有90mL无菌水的锥形瓶，充分摇匀 1 3 取1mL上清液加入盛有9mL无菌水的试管中 1×10 1×102 知识点1  微生物的选择培养--稀释涂布平板法的操作步骤 知识夯基 考向研析 考点二 微生物的选择培养与计数 数量最大、种类最多 大约70%—90%是细菌 取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。 48 1mL 1mL 1mL 1mL 1mL 3 取1mL上清液加入盛有9mL无菌水的试管中，依次等比稀释。 1×102 1×103 1×104 1×105 1×106 1×107 知识点1  微生物的选择培养--稀释涂布平板法的操作步骤 知识夯基 考向研析 考点二 微生物的选择培养与计数 1×107 知识点1  微生物的选择培养--稀释涂布平板法的操作步骤 知识夯基 考向研析 考点二 微生物的选择培养与计数 待涂布的菌液被培养基吸收后,将平板倒置,放入30~37℃的恒温培养箱中培养1~2d。在涂有合适浓度菌液的平板上就可以观察到分离的单菌落 培养： 7 知识点1  微生物的选择培养--稀释涂布平板法的操作步骤 知识夯基 考向研析 考点二 微生物的选择培养与计数 主要方法 稀释涂布平板法 平板划线法 主要步骤 接种工具 菌体获取 能否用于计数 共同点 系列梯度稀释操作和涂布平板操作 接种环在固体培养基表面连续划线 涂布器 接种环 从适宜稀释度的平板上的菌落中挑取菌体 在具有显著的菌落特征的区域挑取菌体 可以计数，但是操作复杂，需涂布多个平板 不能计数 使培养基上形成由单个细菌细胞繁殖而来的子细胞群体——菌落 稀释涂布平板法和平板划线法的比较 知识点1  微生物的选择培养--稀释涂布平板法的操作步骤 知识夯基 考向研析 考点二 微生物的选择培养与计数 稀释涂布平板计数法 ——间接计数法 （1）原理： 当样品的稀释度足够 时，培养基表面生长的一个 ，来源于 中的一个 。通过计数平板上的 数，就能推测出样品中大约含有多少 。 高 菌落 样品稀释液 活菌 菌落 活菌 样品的稀释度将直接影响平板上的菌落数目 知识点2 微生物的数量测定 知识夯基 考向研析 考点二 微生物的选择培养与计数 （2）计数原则： 选择菌落数为30~300的平板计数。 同一稀释度下，应至少对3个平板进行重复计数，然后求出平均值 统计的菌落往往比活菌的实际数目低 统计的结果一般用菌落数而不是活菌数。 恰当的稀释度、涂布是否均匀是成功统计菌落数目的关键。 原因：当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。 知识点2 微生物的数量测定 知识夯基 考向研析 考点二 微生物的选择培养与计数 稀释涂布平板计数法 ——间接计数法 快速、直观 显微镜直接计数法 ——直接计数法 两者计数原理相同 原理： 利用细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下观察、计数。 优点： 缺点： 不能区分死菌与活菌 对细菌等较小的细胞进行观察和计数 常用于相对较大的酵母菌细胞、霉菌孢子等的计数 思考:为了避免上述缺点，我们该如何做？ 可以染色（如使用台盼蓝，死细胞会被染成蓝色）后再进行显微镜计数。 知识点2 微生物的数量测定 知识夯基 考向研析 考点二 微生物的选择培养与计数 知识夯基 考向研析 考点二 微生物的选择培养与计数 项目 直接计数法 间接计数法 原理 利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量 当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌 主要用具 显微镜、细菌计数板 培养基 计数数据 菌体本身 培养基上菌落数 优点 计数方便、操作简单 计数的是活菌 缺点 死菌、活菌都计算在内 操作较复杂，有一定误差 计算公式 每毫升原液含菌数=每小格平均菌体数×400×10000×稀释倍数 每毫升原液含菌数=培养基上平均菌落数×稀释倍数÷涂布液体积 比较稀释涂布平板法和显微镜直接计数法 知识点2 微生物的数量测定 尿素［CO(NH2)2］含氮量高，化学性质稳定，是现代农业生产中一种重要的氮肥。尿素施入土壤后，会被土壤中的某些细菌分解成NH3，再被转化为NO3-、NH4+等被植物吸收。而这些细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成脲酶，脲酶催化尿素分解产生NH3，NH3可以作为细菌生长的氮源。 讨论： 1.如果让你配制一种培养基，将土壤稀释液中能分解尿素的细菌分离出来，培养 基的配方该如何设计？ 设计一种选择培养基，以尿素作为唯一氮源。 (细菌生长的氮源) 尿素 NH3 脲酶 尿素分解菌 尿素 2.该培养基与普通培养基有哪些共同点和不同点？ 除以尿素作为唯一氮源外，该培养基的其他营养成分与普通培养基基本相同。 知识点3  土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 知识夯基 考向研析 考点二 微生物的选择培养与计数 知识夯基 考向研析 考点二 微生物的选择培养与计数 实验原理 ①士壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成脲酶； ②配制以尿素为唯一氮源的培养基，能够在该培养基中生长的细菌就是能分解尿素的细菌 葡萄糖 10.0g 尿素 1.0g KH2PO4 1.4g Na2HPO4 2.1g MgSO4·7H2O 0.2g 琼脂 15.0g 蒸馏水 1000ml ①制备选择培养基（尿素为唯一氮源） 提供无机盐；调节pH ②制备牛肉膏蛋白胨培养基 培养基的制备 知识点3  土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 细菌宜在酸碱度接近中性的潮湿土壤中生长，绝大部分分布在距地表3~8cm的土壤层。铲去表层土3cm左右，取样，将样品装入事先准备好的信封中。 ①土壤取样 取土样时用的铁铲和取样袋在使用前都需要灭菌。操作完成后，一定要洗手。 步骤： 公园里、街道旁、花盆中 城市： 农田里、菜园里 农村： 知识夯基 考向研析 考点二 微生物的选择培养与计数 知识点3  土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 测细菌数：一般用104、105、106稀释液。 测放线菌：一般用103、104、105稀释液。 测真菌数：一般用102、103、104稀释液。 不同微生物在土壤中含量不同，分离不同的微生物采用不同的稀释度，以保证获得菌落数在30～300之间适于计数的平板。 在初次实验中，对于稀释的范围没有把握，怎样做才能保证从中选择出菌落数在30～300的平板进行计数？ 选用稀释范围更大的稀释液进行平板培养 知识夯基 考向研析 考点二 微生物的选择培养与计数 知识点3  土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 将10g土样加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀。取1mL上清液加入盛有9mL无菌水的试管中，依次等比稀释。 1×10 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL 1×102 1×103 1×104 1×105 1×106 1×107 9 mL 无菌水 90mL无菌水 10g ②样品的稀释 知识夯基 考向研析 考点二 微生物的选择培养与计数 知识点3  土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 步骤： (1)每个浓度设置了 个平板， 3个平板是选择培养基（ 实验）， 1个平板为 培养基（条件对照：验证选择培养基是否具有选择作用）； (2)另外，整个实验还要设置 个空白 对照平板：未接种的_____________ _____________培养基，以验证培养基 中是否有杂菌污染。 4 重复 牛肉膏蛋白胨 2 选择培养基和 牛肉膏蛋白胨 ③样品的稀释与涂布平板 知识夯基 考向研析 考点二 微生物的选择培养与计数 知识点3  土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 步骤： 设置对照： 判断选择培养基是否具有筛选作用 以验证培养基中是否含有杂菌 通用型培养基上所有菌种都生长 选择培养基上部分菌种才能生长 不涂布稀释液的选择培养基和牛肉膏蛋白胨培养基 牛肉膏蛋白胨培养基 知识夯基 考向研析 考点二 微生物的选择培养与计数 知识点3  土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 步骤： ④培养与观察 恒温培养箱 待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板倒置，放入30-37℃的恒温培养箱中，培养1-2d。 知识夯基 考向研析 考点二 微生物的选择培养与计数 知识点3  土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 步骤： 内容 现象 结论 有无杂菌污染的判断 对照的培养皿中无菌落生长 未被杂菌污染 培养基中菌落数偏高 被杂菌污染 菌落形态多样，菌落数偏高 培养基中混入其他杂菌 选择培养基的筛选作用 牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数目大于选择培养基上的数目 选择培养基具有筛选作用 样品的稀释操作 得到3个或3个以上菌落数目在30~300的平板 操作成功 重复组的结果 若选取同一土样，统计结果应接近 知识夯基 考向研析 考点二 微生物的选择培养与计数 知识点3  土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 总结 1.结合对照组，分析培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是否筛选出一些菌落。 如果没有接种的培养基上没有菌落生长，说明培养基没有被杂菌污染。如果接种后的完全培养基上的菌落数明显多于选择培养基上的菌落数，说明选择培养基筛选出了一些尿素分解菌。 2.你是否获得了某一稀释度下菌落数 为30-300的平板？在这一稀释度下，是否至少有2个平板的菌落数接近？ 如果得到了两个或多个菌落数为30-300的平板，说明稀释度合适，操作比较成功，能够进行菌落的计数。 知识夯基 考向研析 考点二 微生物的选择培养与计数 知识点3  土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 思考 3.你统计的每克土样中能分解尿素的细菌的菌落数是多少？与其他同学统计的结果接近吗？如果差异很大，可能是什么原因引起的？ 如果是用同一土样进行的操作，数据应该比较接近。如果差异很大，就需要从操作是否规范、培养基配制是否合理等方面查找原因。 4.得到的菌落一定是分解尿素的细菌吗？ 不一定，还需要进一步的鉴定 如自生固氮菌或利用（分解尿素的）细菌的代谢物进行生长繁殖的微生物 知识夯基 考向研析 考点二 微生物的选择培养与计数 知识点3  土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 思考 知识夯基 考向研析 考点二 微生物的选择培养与计数 知识点3  土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 进一步探究 在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂。 培养某种细菌后，如果PH升高，指示剂将变红，说明该细菌能够分解尿素。 原理：脲酶催化尿素分解成氨→培养基碱性增强→ 酚红变红 酚红培养基——鉴定分解尿素的细菌 脲酶 CO（NH2）2+H2O CO2+2NH3 知识夯基 考向研析 考点二 微生物的选择培养与计数 知识点4  分解纤维素的微生物的分离 分离方法与原理 方法： 鉴定原理： 利用富含纤维素的选择培养基进行选择培养 以纤维素为唯一碳源，加入刚果红染料 纤维素 刚果红 红色复合物 培养基成分： 纤维素酶 红色消失 现透明圈 纤维素分解菌 红色环带直径与菌落直径比值越大，说明分解能力越强。 知识夯基 考向研析 考点二 微生物的选择培养与计数 知识点4  分解纤维素的微生物的分离 土壤取样 →富含纤维素的环境 →制备系列稀释液 →筛选产生透明圈的菌落 梯度稀释 富集培养 涂布平板 挑选 →以纤维素为唯一碳源，增加目的菌浓度 （选择培养基） →将样品涂布到含刚果红的培养基上 （鉴别培养基） 1.(2023·广东卷)研究者拟从堆肥中取样并筛选能高效降解羽毛、蹄角等废弃物中角蛋白的嗜热菌。根据堆肥温度变化曲线(如图)和选择培养基筛选原理来判断，下列最可能筛选到目标菌的条件组合是(　　) D A.A点时取样、尿素氮源培养基 B.B点时取样、角蛋白氮源培养基 C.B点时取样、蛋白胨氮源培养基 D.C点时取样、角蛋白氮源培养基 研究目的是筛选能高效降解羽毛、蹄角等废弃物中角蛋白的嗜热菌，因此目标菌具有既耐高温，又能够高效降解角蛋白的功能，所以在C点时取样，并且用角蛋白氮源培养基进行选择培养 知识夯基 考向研析 考向1   微生物的选择与培育 考点二 微生物的选择培养与计数 A 2.野生型大肠杆菌菌株能在基本培养基上生长，氨基酸营养缺陷型突变株无法合成某种氨基酸，只能在完全培养基上生长，下图为纯化某氨基酸营养缺陷型突变株的部分流程图，①②③④代表培养基，A、B、C表示操作步骤，D、E为菌落。下列叙述错误的是(　　) A.图中①②④为基本培养基，③为 完全培养基 B.A操作的目的是提高突变频率， 增加突变株的数量 C.B的正确操作是用涂布器把菌液 均匀地涂布在②表面 D.经C过程原位影印及培养后，可从④中挑取D进行纯化培养 知识夯基 考向研析 考向1   微生物的选择与培育 考点二 微生物的选择培养与计数 菌落①的透明圈范围大，而且菌落小，说明菌落①降解纤维素能力强，因此菌落①是需要筛选和分离的目标菌株 3. 研究人员筛选和分离纤维素分解菌，在刚果红培养基平板上，筛选到有透明圈 的菌落，所形成的菌落如图所示。相关说法错误的是( ) D A. 纤维素基本单位是葡萄糖 B. 透明圈的形成是由于纤维素被分解后刚果红不能与纤维素 结合形成红色复合物 C. 透明圈可能是分解刚果红的菌种形成的，为确定得到的是 纤维素分解菌还需进行发酵产纤维素酶实验 D. 菌落②的中心区域最大，纤维素分解菌含量多，是需要筛 选和分离的目标菌株 知识夯基 考向研析 考向1   微生物的选择与培育 考点二 微生物的选择培养与计数 4.厨房中的厨余垃圾多为湿垃圾，湿垃圾处理的有效方法之一是用微生物对其进行降解。如图表示筛选高效降解淀粉菌种的过程。下列有关叙述错误的是(　　) D A.配制培养基后需进行灭菌处理，常用的灭 菌方法是高压蒸汽灭菌法 B.菌落①与菌落②周围产生了透明圈，说明菌落①与菌落②能产生淀粉酶 C.培养基上的一个菌落可能来源于样品稀释液中的一个甚至几个活菌 D.初步判断培养基上菌种的类型，需要用显微镜观察菌体的形态特征 菌落肉眼可见 知识夯基 考向研析 考向1   微生物的选择与培育 考点二 微生物的选择培养与计数 5.(2024·重庆卷)养殖场粪便是农家肥的重要来源，其中某些微生物可使氨氮化合物转化为尿素进而产生NH3，影响畜禽健康。为筛选粪便中能利用氨氮化合物且减少NH3产生的微生物。兴趣小组按图进行实验获得目的菌株，正确的是(　　) C A.①通常在等比稀释后用平板划线 法获取单个菌落 B.②挑取在2种培养基上均能生长的 用于后续的实验 C.③可通过添加脲酶并检测活性，筛选得到甲、乙 D.粪便中添加菌株甲比乙更有利于NH3的减少 平板划线法无需稀释 ②筛选不能在尿素唯一氮源培养基上生长，而能在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌株用于后续的实验 菌株乙比甲更有利于NH3的减少 知识夯基 考向研析 考向2   微生物的分离与计数 考点二 微生物的选择培养与计数 A 6.北京冬奥会食堂让各国运动健儿爱上中国味道，其餐余垃圾在垃圾集中点采用生化＋雾化＋膜过滤技术处理后，可以达到无二次污染的标准。为筛选对抗生素有抗性、高效降解淀粉的微生物，提高“生化”处理的效率，研究人员将餐余垃圾机械化处理后加入装有无菌水的锥形瓶中制备餐余垃圾浸出液，然后进行如图所示操作，下列说法错误的是(　　) A.餐余垃圾浸出液在接种前通常需要进行 高压蒸汽灭菌处理 B.可用稀释涂布平板法将餐余垃圾浸出液 接种在X培养基上 C.X培养基含有淀粉和抗生素，Y培养基是 不含琼脂的液体培养基 D.图中高效降解淀粉的微生物是⑤，可根据菌落特征初步判断微生物类型 知识夯基 考向研析 考向2   微生物的分离与计数 考点二 微生物的选择培养与计数 A. 该培养基应以尿素为唯一氮源， 筛选的菌种可用酚红指示剂来鉴定 B. 根据实验结果，该土壤样本中 约有分解尿素的细菌 个 C. 稀释涂布平板法既能分离微生物，也能统计样品中活菌的数目 D. 利用上述稀释涂布平板法对尿素分解菌计数的结果较真实值高 计数结果较真实值低 7. 尿素是一种重要的农业肥料，经土壤中的细菌分解后才能被植物利用。某生物兴趣小 组开展了“土壤中分解尿素的细菌分离与计数”的实验，具体操作流程如图所示。某同 学接种了3个培养基平板，一段时间后3个平板中分别长出了54个、46个、50个菌落。 下列相关叙述错误的是( ) D 知识夯基 考向研析 考向2   微生物的分离与计数 考点二 微生物的选择培养与计数 分解尿素的细菌能合成脲酶，在以尿素为唯一氮源的培养基中也能正常生存，在脲酶的催化下能将尿素分解成和二氧化碳， 可用酚红指示剂来鉴定，A正确；根据图解知，对菌液进行稀释时共稀释了 倍，接种了3个培养皿，一段时间后三个培养皿中分别长出了54个、46个、50个菌落，该 土壤样本中约有分解尿素的细菌数 （个），B正确；稀释涂布平板法可通过统计菌落数量进行活菌计数，C正确；用稀释涂布平板法对尿素分解菌计数时，当两个或多个细胞连在一起时，平板上只出现一个菌落，故此计数结果较真实值低，D错误。 8. (2024·浙江6月)脲酶催化尿素水解，产生的氨可作为细菌的氮源。脲酶 被去除镍后失去活性。下列叙述错误的是(　　) A.镍是组成脲酶的重要元素 B.镍能提高尿素水解反应的活化能 C.产脲酶细菌可在以NH4Cl为唯一氮源的培养基生长繁殖 D.以尿素为唯一氮源的培养基可用于筛选产脲酶细菌 B 脲酶催化尿素水解的机理为降低化学反应所需的活化能，镍作为脲酶的重要组成元素，应该与降低尿素水解反应的活化能有关 知识夯基 考向研析 考向2   微生物的分离与计数 考点二 微生物的选择培养与计数 78 04 真题感知·命题洞见 1.（2025，安徽，节选）稻瘟病是一种真菌病害，水稻叶片某些内生放线菌对该致病菌有抑制作用。科研小组分离筛选出内生放线菌，并开展了相关研究。回答下列问题。 （1）采集有病斑的水稻叶片，经表面消毒、研磨处理，制备研磨液。此后，采用______________（填方法）将研磨液接种于不同的选择培养基，分别置于不同温度下培养，目的是______________________________________。 (1) 稀释涂布平板法    分离不同条件下生长的内生放线菌   真题感知·命题洞见 （1）从含有多种微生物的研磨液中分离出单一菌落，并接种到选择培养基中常用的接种方法是稀释涂布平板法。使用选择培养基和不同的温度条件，目的是为了抑制其他杂菌的生长，分离不同条件下生长的内生放线菌。 2. （2025·湖南）采集果园土壤进行微生物分离或计数。下列叙述正确的是（ ） A. 稀释涂布平板法和平板划线法都能用于尿素分解菌的分离和计数 B. 完成平板划线后，培养时需增加一个未接种的平板作为对照 C. 土壤中分离得到的醋酸菌能在无氧条件下将葡萄糖分离成乙酸 D. 用于筛选尿素分解菌的培养基含有蛋白胨、尿素和无机盐等营养物质 B 真题感知·命题洞见 稀释涂布平板法可通过菌落数进行计数，而平板划线法仅用于分离纯化菌种，无法计数，A错误；醋酸菌为严格好氧菌，其代谢需氧气，无氧条件下无法将葡萄糖转化为乙酸，C错误；筛选尿素分解菌的培养基应以尿素为唯一氮源，若含蛋白胨（含其他氮源），则无法筛选目标菌，D错误。 3. （2025·山东）深海淤泥中含有某种能降解纤维素的细菌。探究不同压强下，该细菌在以纤维素或淀粉为唯一碳源的培养基上的生长情况。其他条件相同且适宜，实验处理及结果如表所示。下列说法正确的是（    ） A. 可用平板划线法对该菌计数 B. 制备培养基的过程中，应先倒平板再进行高压蒸汽灭菌 组别 压强 纤维素 淀粉 菌落 ① 常压 - + - ② 常压 + - - ③ 高压 - + - ④ 高压 + - + D 真题感知·命题洞见 注： “+”表示有；“一”表示无 C. 由②④组可知，在以纤维素为唯一碳源的培养基上，该菌可在常压下生长 D. 由③④组可知，高压下该菌不能在以淀粉为唯一碳源的培养基上生长 A、平板划线法是用来分离和纯化微生物，获得单个菌落的技术，其主要目的是分离而不是计数。用于活菌计数的方法通常是稀释涂布平板法，A错误； B、制备固体培养基（琼脂平板）的正确流程是：先将培养基成分溶解、调整pH值后，分装到三角瓶中，然后进行高压蒸汽灭菌。待培养基冷却至50℃左右时，再在无菌条件下（如超净工作台）倒入无菌的培养皿中（即“倒平板”），B错误； C、组②为常压 + 纤维素，结果无菌落，而组④为高压 + 纤维素，结果是有菌落。 这个对比恰好说明，在以纤维素为碳源的条件下，该菌不能在常压下生长，而能在高压下生长，C错误； D、③④组形成了一个对照实验，变量是碳源。实验结果表明，在高压条件下，该细菌可以利用纤维素生长（组④），但不能利用淀粉生长（组③），D正确。 4.(2025·江苏)从种植草莓的土壤中分离致病菌，简易流程如下：制备土壤悬液、分离、纯化、鉴定。下列相关叙述正确的是（    ） A．制备的培养基可用紫外线照射进行灭菌 B．将土样加入无菌水混匀，梯度稀释后取悬液加入平板并涂布 C．连续划线时，接上次划线的起始端开始划线 D．鉴定后的致病菌，可接种在斜面培养基上，并在室温下长期保存 B 真题感知·命题洞见 A、制备的培养基需用高压蒸汽灭菌法灭菌，紫外线仅用于表面或空气消毒，无法灭菌，A错误； B、将土样加入无菌水制成悬液，经梯度稀释后，取各稀释度菌液涂布于培养基表面，分离并计数，B正确； C、连续划线时，每次应从上次划线的末端开始，以逐步稀释菌体，若从起始端开始无法有效分离单菌落，C错误； D、斜面培养基保存菌种需置于4℃短期保存，长期保存应使用甘油管藏法（-20℃），室温下无法长期保存，D错误。 5.(2025·河北)隐甲藻是一种好氧的异养真核微藻。多在海水中腐烂的植物叶片上生长繁殖，是工业生产DHA（一种功能性脂肪酸）的藻类之一、从海洋中筛选获得的高产油脂隐甲藻，可用于DHA的发酵生产。下列叙述正确的是（    ） A．隐甲藻可从腐烂的叶片获得生长必需的碳源 B．采集海水中腐烂的叶片，湿热灭菌后接种到固体培养基，以获得隐甲藻 C．选择培养基中可加入抑制细菌生长的抗生素，以减少杂菌生长 D．适当提高发酵时的通气量和搅拌速率均可增加溶氧量，以提高DHA产量 ACD 真题感知·命题洞见 A、根据题目信息“隐甲藻是一种好氧的异养真核微藻，多在海水中腐烂的植物叶片上生长繁殖”可知，隐甲藻可从腐烂的叶片获得生长必需的碳源，A正确； B、采集海水中腐烂的叶片进行湿热灭菌后，会杀死所有的微生物，此时接种到固体培养基上无法获得隐甲藻，B错误； C、根据题目信息可知，隐甲藻为真核生物，抗生素可通过抑制细菌细胞壁合成或影响代谢过程来抑制细菌生长，不会影响真核生物的生命活动，因此在筛选或培养隐甲藻时，加入抗生素可有效抑制细菌杂菌，提高隐甲藻的纯度和生长效率，C正确； D、根据题目信息可知，隐甲藻为好氧生物，因此利用隐甲藻进行DHA发酵生产时，适当提高发酵时的通气量和搅拌速率均可增加溶氧量，以提高DHA产量，D正确。 05 学以致用·能力提升 (1)(选择性必修3 P10)培养基的化学成分包括 等。 (2)(选择性必修3 P10)获得纯净的微生物培养物的关键是 ，无菌技术除了用来 外，还能 。 (3)(选择性必修3 P12)菌落是指_____________________________________ 。采用 法和 法能将单个微生物分散在固体培养基上，之后经培养得到的单菌落一般是由单个微生物繁殖形成的纯培养物。 水、无机盐、碳源、氮源 防止杂菌污染 防止实验室的培养物被其他外来微生物污染 有效避免操作者自身被微生物感染 分散的微生物在适宜的固体培养基表面或 内部可以繁殖形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体 平板划线 稀释涂布平板 学以致用·能力提升 长句作答类 (4)(选择性必修3 P16)选择培养基是指_______________________________ 。 (5)(选择性必修3 P12)平板冷凝后，要将平板倒置的原因是_____________ _______________________________________________________________ ________________________________________________________________________________。 在微生物学中，将允许特定种类的 微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基 平板冷凝后， 皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以减少培养基中的水分过快地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染 学以致用·能力提升 长句作答类 (6)(选择性必修3 P13)平板划线操作的第一步灼烧接种环是为了_________ ；每次划线前灼烧接种环是为了___ ______________________________________________________________ ________________________________，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到单菌落。划线结束后灼烧接种环，能 。 (7)(选择性必修3 P13)在灼烧接种环之后，要等其冷却后再进行划线的原因是 。 避免接种 环上可能存在的微生物污染培养物 杀 死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端 及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者 以免接种环温度太高，杀死菌种 学以致用·能力提升 长句作答类 (8)(选择性必修3 P13)在第二次以及其后的划线操作时，总是从上一次划线的末端开始划线的原因是______________________________________ __________________________________________________________________________________________________________________。 (9)(选择性必修3 P18)当___________________________________________ ，统计的菌落数往往比活菌的实际数目少。 (10)(选择性必修3 P19)检测培养物中是否有杂菌污染的方法是__________ 。判断选择培养基是否起到筛选作用的方法是_____________________________________________ ________________________________________________________。 划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落 两个或多个细 胞连在一起时，平板上观察到的只 是一个菌落 同时培养灭 菌后的未接种的培养基，观察是否有菌落产生 配制牛肉膏蛋白胨培养基作为对照，观察选择培养基上的菌落数是否远少于牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数目 学以致用·能力提升 长句作答类 讲师：xxx 感谢观看 THANK YOU 90 NH、NO等 $