第34讲 基因工程的原理和技术（专项训练）（浙江专用）2026年高考生物一轮复习讲练测

第34讲 基因工程的原理和技术 目录 01 课标达标练 【题型一】基因工程的工具 【题型二】DNA粗提取 【题型三】基因工程的基本操作步骤 02 能力突破练（新思维） 03 高考溯源练（含2025高考真题） 题型一 基因工程的工具 1．基因工程的发展离不开理论的突破和技术的创新。下列科学研究体现了基因工程正式问世的是（    ） A．艾弗里等人通过肺炎链球菌的体外转化实验证明DNA可以转移 B．沃森和克里克建立了DNA双螺旋结构模型并提出自我复制假说 C．科学家利用质粒构建重组DNA载体并导入受体细胞中成功表达 D．科学家发现了多种限制性内切核酸酶、DNA连接酶和逆转录酶 2．病毒专营寄生生活，感染动植物时，可引发多种疾病。但病毒并非一无是处，随着科技的不断进步，病毒在多个领域有着广泛的用途。下列有关病毒应用的叙述，错误的是（    ） A．一些病毒经灭活或减毒处理后可制成疫苗，用于预防相应的病毒感染 B．灭活的病毒可作为细胞融合的诱导剂，用于细胞工程中的各项生物技术 C．病毒可作为基因工程的载体，将目的基因导入受体细胞，实现基因重组 D．利用噬菌体来杀死某些污染水体中特定的病原菌，从而达到消毒的目的 3．限制酶、DNA连接酶等的发现为DNA分子的切割，连接及基因表达载体的构建创造了条件。下列关于重组DNA技术基本工具的叙述，正确的是（　　） A．限制酶在原核细胞内的主要作用是切割修剪自身的DNA B．噬菌体、动植物病毒均可作为载体将外源基因导入受体细胞 C．用作载体的质粒DNA分子上可以不含有限制酶切割位点 D．DNA 连接酶可连接DNA分子两条链中碱基对之间的氢键 4．为了降低免疫排斥反应，研究者借助 CRISPR/Cas9 技术对移植的猪心脏进行了基因编辑。CRISPR/Cas9 系统主要由向导 RNA（sgRNA）和 Cas9 蛋白两部分组成，sgRNA 可引导 Cas9 蛋白到特定基因位点进行切割、其机制如图所示。下列说法错误的是（    ）    A．Cas9 蛋白作用于磷酸二酯键 B．sgRNA 通过与目标 DNA 碱基互补配对引导 Cas9 蛋白到位 C．sgRNA 会因错误结合而出现 “脱靶”现象，一般 sgRNA 序列越短，脱靶率越低 D．经过改造的转基因猪，可以利用核移植、胚胎分割得到更多的可移植器官供体 5．研究人员用EcoRI和SmaI两种限制酶处理某DNA分子，图1为EcoRI切割该DNA分子后的结果；图2是酶切后的凝胶电泳图谱，其中1号泳道是DNA Marker，2号、3号、4号分别是EcoRI单独处理、SmaI单独处理、两种酶共同处理后的电泳结果。下列相关叙述错误的是（    ） A．据图1可知EcoRI的识别序列为-GAATTC-，切割位点在G和A之间 B．据图2可知琼脂糖凝胶的加样孔在A端，且连着电泳槽的负极 C．据图2可知该DNA分子最可能是含1000个碱基对的链状DNA D．据图2可知该DNA分子中两种限制酶的酶切位点各有一个 题型二 DNA的粗提取 6．下列有关生物实验试剂以及现象的描述，正确的是（　　） A．二苯胺试剂鉴定DNA结果呈紫色 B．苏丹Ⅲ染液可将蛋白质染成橘黄色 C．甲紫染色可观察根尖细胞染色体的状态 D．用黑藻观察细胞质流动需对叶绿体染色 7．下列与DNA粗提取和鉴定有关的叙述，错误的是（    ） A．预冷的酒精容易使DNA析出 B．DNA能溶于2mol/L的NaCl溶液中 C．若提取出白色丝状物，说明DNA中杂质少 D．可用碱性染料甲紫鉴定提取出来的DNA 8．下列关于DNA相关实验的叙述，错误的是（    ） A．可利用DNA在酒精中溶解度较大的特点来提取DNA B．用二苯胺试剂鉴定DNA时，沸水浴加热后呈蓝色 C．PCR中通过调节温度来控制DNA双链的解聚与结合 D．PCR产物一般可用琼脂糖凝胶电泳来鉴定 9．SDS常用于提取生物组织中的DNA，作为一种阴离子去污剂，它可以溶解细胞膜和核膜蛋白，使染色体离析、蛋白质变性，释放出核酸，获取的核酸可溶于由Tris和EDTA配制的缓冲溶液中保存备用。下列说法正确的是（    ） A．配制研磨液时，需要加入2mol/L的HCl溶液调节pH至8.0 B．提取DNA时加入酒精，目的是使不溶于酒精的蛋白质等物质析出 C．SDS可加速解聚核膜蛋白，有利于提取叶绿体DNA和质粒DNA D．将提取到的DNA与二苯胺溶液充分混匀后，溶液即变为蓝色 题型三 基因工程的基本操作步骤 10.用限制酶Spe Ⅰ和Hind Ⅲ切割质粒，用限制酶Hind Ⅲ和Xba Ⅰ切割目的基因，之后连接，构建基因表达载体。下列叙述不正确的是（　　） A．青霉素抗性基因可作为筛选标记 B．限制酶可使磷酸二酯键发生断裂 C．表中限制酶切割之后均会产生黏性末端 D．连接后的基因表达载体可被Spe I切开 11.为获取玉米编码蔗糖转运蛋白的基因，提取玉米细胞RNA，获得cDNA后导入基因工程酵母菌细胞（产生的蔗糖酶不能分泌到胞外），利用选择培养基筛选到含有目的基因的酵母菌。下列叙述错误的是（    ） A．应选取含有蔗糖转运蛋白的组织提取RNA B．RNA通过逆转录形成cDNA C．选择培养基应以蔗糖为唯一碳源 D．基因工程酵母菌无水解蔗糖的能力 12.转化是指目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。下列有关说法错误的是（    ） A．大肠杆菌转化实验中可使用Ca2+处理以提高转化效率 B．目的基因导入受体细胞前必须构建基因表达载体以便稳定存在 C．将DNA溶液滴加在授粉后的花柱切面上，可以使目的基因进入胚囊 D．农杆菌转化法中需要进行两次体外拼接和两次导入 13.“标记”是生物技术与工程常用的技术手段，下列相关叙述错误的是（    ） A．诱导动物体细胞融合时，通过红绿荧光蛋白标记检测细胞融合情况 B．分析工程酵母发酵产物的合成及分泌时，通过同位素标记监测产物转移路径 C．验证转基因抗虫棉是否成功时，通过RNA分子标记检测目的基因是否表达 D．对目的基因进行扩增时，可通过荧光标记探针技术实时定量测定产物的量 14.研究发现，某农作物的品系N具有抗虫、高产等优良性状，但是甜度不高，而基因Z与农作物的甜度有关。科研人员以Ti质粒为载体，以品系N的叶片外植体为受体，培育转Z基因的新品系n。下列叙述错误的是（    ） A．若只用一种限制酶切割目的基因和Ti质粒可能导致目的基因反向插入载体 B．培育转Z基因的新品系n的过程中利用了植物细胞的全能性 C．成功转入重组Ti质粒的叶片细胞培育成的植株即为新品系n D．重组DNA技术可定向改变生物的性状 15.DNA粗提取和DNA的PCR扩增是常用的生物技术。下列相关原理及过程叙述正确的是（    ） A．DNA在冷酒精溶液中溶解度较大，蛋白质在冷酒精中溶解度较小，可利用溶解度差异初步分离DNA B．采用琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR产物时，在同一电场作用下，DNA片段越长，向负极迁移速率越快 C．PCR的每次循环包括变性、复性、延伸3个阶段，在复性阶段引物与模板DNA链之间形成磷酸二酯键 D．利用引物A和B对双链DNA进行PCR扩增时，经3次循环需消耗7个A引物 1．图1表示基因工程中用到的质粒，其中PstI是目的基因插入位点，Ampr表示氨苄青霉素抗性基因，Tetr表示四环素抗性基因。图2表示筛选出导入重组质粒的受体菌的方法（四环素和氨苄青霉素在高温下不稳定易失效）。下列说法正确的是（    ） A．构建重组DNA分子用到的工具酶有限制酶和质粒 B．图2所用培养基应加入抗生素并调好pH后再灭菌处理 C．图2中利用绒布接种的方法为稀释涂布平板法 D．原板上的甲、乙菌落中，甲菌落是成功导入重组质粒的受体菌 2．借助DNA分子杂交技术进行遗传病基因诊断的一般流程为：制作能与目的基因特异性结合的DNA探针→DNA分子杂交实验→结果分析。下图是某单基因遗传病家系图谱，若要借助DNA分子杂交技术进一步确定该遗传病的遗传方式（不考虑X、Y同源区段），只要设计哪种探针对哪一成员进行检测即可达到目的？（    ） A．与正常基因结合的DNA探针、Ⅰ-1 B．与致病基因结合的DNA探针、Ⅰ-1 C．与正常基因结合的DNA探针、Ⅰ-2或Ⅱ-3 D．与致病基因结合的DNA探针、Ⅰ-2或Ⅱ-3 3．应用农杆菌转化法时，目的基因插入T-DNA后，需要对T-DNA测序。测序前根据目的基因的序列设计引物对T-DNA进行PCR扩增的过程如图所示，下列说法正确的是（    ） A．实验需要清楚目的基因的全部碱基序列 B．L、R酶切位点需要在T-DNA外侧，且需用同种限制酶切割 C．引物设计时需要考虑目的基因两侧序列，选择引物b、c D．1个环状DNA分子首次PCR后得到的DNA分子含有两个游离的磷酸基团 4．最早的双脱氧测序法是PCR反应体系中，分别再加入一种少量的双脱氧腺苷三磷酸（ddATP、ddCTP、ddGTP或ddTTP），子链延伸时，双脱氧核苷三磷酸也遵循碱基互补配对原则，以加入ddATP的体系为例：若配对的为ddATP，延伸终止；若配对的为脱氧核苷三磷酸（dATP），继续延伸；PCR产物变性后电泳检测。通过该方法测序某疾病患者及对照个体的一段序列，结果如图所示。下列叙述错误的是（    ） A．上述PCR反应体系中只需加入一种引物 B．电泳时产物的片段越大，迁移速率越慢 C．5'－TAGTGTCCATC－3'为患者的一段序列 D．患者该段序列中某位点的碱基C突变为T 5．不同生物的DNA的提取方法有所不同，DNA提取的原理和实验流程大致相同（如图所示）。下列说法错误的是（    ）    A．破碎细胞在冷冻下进行，可将组织材料冻裂和降低DNA酶的活性 B．溶于酒精中的可能有某些盐类、蛋白质、糖类或其他大分子物质 C．DNA粗提取时离心需使用塑料离心管，用二苯胺试剂对离心结果进行鉴定 D．鉴定絮状物中DNA时，需用2mol·L-¹NaCl溶液溶解DNA后加入二苯胺试剂直接观察 一、单选题 1．（2024·浙江6月·高考真题）为了筛查疟原虫感染者,以及区分对氯喹的敏感性。现有6份血样,处理后进行PCR。产物用限制酶ApoⅠ消化,酶解产物的电泳结果如图所示。 1~6号血样中,来自于氯喹抗性患者的是 (　) A.1号和6号 B.2号和4号 C.3号和5号 D.1号、2号、4号和6号 2．（2024·安徽·高考真题）下列关于“DNA粗提取与鉴定”实验的叙述,错误的是 (　) A.实验中如果将研磨液更换为蒸馏水,DNA提取的效率会降低 B.利用DNA和蛋白质在酒精中的溶解度差异,可初步分离DNA C.DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同,该原理可用于纯化DNA粗提物 D.将溶解的DNA粗提物与二苯胺试剂反应,可检测溶液中是否含有蛋白质杂质 3．（2024·河北·高考真题）下列相关实验操作正确的是 (　) A.配制PCR反应体系时,加入等量的4种核糖核苷酸溶液作为扩增原料 B.利用添加核酸染料的凝胶对PCR产物进行电泳后,在紫外灯下观察结果 C.将配制的酵母培养基煮沸并冷却后,在酒精灯火焰旁倒平板 D.将接种环烧红,迅速蘸取酵母菌液在培养基上划线培养,获得单菌落 4．（2024·江西·高考真题）γ-氨基丁酸在医药等领域有重要的应用价值。利用L-谷氨酸脱羧酶(GadB)催化L-谷氨酸脱羧是高效生产γ-氨基丁酸的重要途径之一。研究人员采用如图方法将酿酒酵母S的L-谷氨酸脱羧酶基因(gadB)导入生产菌株E.coliA,构建了以L-谷氨酸钠为底物高效生产γ-氨基丁酸的菌株E.coliB。下列叙述正确的是 (　) A.上图表明,可以从酿酒酵母S中分离得到目的基因gadB B.E.coliB发酵生产γ-氨基丁酸时,L-谷氨酸钠的作用是供能 C.E.coliA和E.coliB都能高效降解γ-氨基丁酸 D.可以用其他酶替代NcoⅠ和KpnⅠ构建重组质粒 5．（2024·山东·高考真题）关于“DNA的粗提取与鉴定”实验,下列说法正确的是 (　) A.整个提取过程中可以不使用离心机 B.研磨液在4 ℃冰箱中放置几分钟后,应充分摇匀再倒入烧杯中 C.鉴定过程中DNA双螺旋结构不发生改变 D.仅设置一个对照组不能排除二苯胺加热后可能变蓝的干扰 二、填空题 1．（2025·浙江1月·高考真题）3-磷酸甘油脱氢酶(GPD)是酵母细胞中甘油合成的关键酶。利用某假丝酵母菌株为材料,克隆具有高效催化效率的3-磷酸甘油脱氢酶的基因(Gpd)。采用的方案是:先通过第1次PCR扩增出该基因的中间部分,再通过第2次PCR分别扩增出该基因的两侧,经拼接获得完整基因的序列,如图所示: 回答下列问题: (1)分析不同物种的GPD蛋白序列,确定蛋白质上相同的氨基酸区段,依据这些氨基酸所对应的________,确定DNA序列,进而设计1对引物。以该菌株基因组DNA为模板进行第1次PCR,利用________凝胶电泳分离并纯化DNA片段,进一步测定PCR产物的序列。在制备PCR反应体系时,每次用微量移液器吸取不同试剂前,需要确认或调整刻度和量程,还需要________________。  (2)若在上述PCR扩增结果中,除获得一条阳性条带外,还出现了另外一条条带,不可能的原因是________________________________。  A.DNA模板被其他酵母细胞的基因组DNA污染 B.每个引物与DNA模板存在2个配对结合位点 C.在基因组中Gpd基因有2个拷贝 D.在基因组中存在1个与Gpd基因序列高度相似的其他基因 (3)为获得完整的Gpd基因,分别用限制性核酸内切酶PstⅠ和SalⅠ单酶切基因组DNA后,各自用DNA连接酶连接形成环形DNA,再用苯酚-氯仿抽提除去杂质,最后加入________沉淀环形DNA。根据第一次PCR产物测定获得的序列,重新设计一对引物,以环形DNA为模板进行第二次PCR,最后进行测序。用于第二次PCR的一对引物,  其序列应是DNA链上的________(A.P1和P2　B.P3和P4　C.P1和P4　D.P2和P3)。根据测序结果拼接获得完整的Gpd基因序列,其中的启动子和终止子具有________功能。  (4)为确定克隆获得的Gpd基因的准确性,可将获得的基因序列与已建立的____________进行比对。将Gpd基因的编码区与________________连接,构建重组质粒,再将重组质粒导入酿酒酵母细胞中,实现利用酿酒酵母高效合成甘油的目的。  / 学科网（北京）股份有限公司 $ 第34讲 基因工程的原理和技术 目录 01 课标达标练 【题型一】基因工程的工具 【题型二】DNA粗提取 【题型三】基因工程的基本操作步骤 02 能力突破练（新思维） 03 高考溯源练（含2025高考真题） 题型一 基因工程的工具 1．基因工程的发展离不开理论的突破和技术的创新。下列科学研究体现了基因工程正式问世的是（    ） A．艾弗里等人通过肺炎链球菌的体外转化实验证明DNA可以转移 B．沃森和克里克建立了DNA双螺旋结构模型并提出自我复制假说 C．科学家利用质粒构建重组DNA载体并导入受体细胞中成功表达 D．科学家发现了多种限制性内切核酸酶、DNA连接酶和逆转录酶 【答案】C 【详解】A、艾弗里等人通过肺炎链球菌的体外转化实验证明DNA可以转移，但没有体现基因工程正式问世，A错误； B、沃森和克里克建立了DNA双螺旋结构模型并提出自我复制假说，但没有体现基因工程正式问世，B错误； C、科学家利用质粒构建重组DNA载体并导入受体细胞中成功表达，体现了基因工程正式问世，C正确； D、科学家发现了多种限制性内切核酸酶、DNA连接酶和逆转录酶，但没有体现基因工程正式问世，D错误。 故选C。 2．病毒专营寄生生活，感染动植物时，可引发多种疾病。但病毒并非一无是处，随着科技的不断进步，病毒在多个领域有着广泛的用途。下列有关病毒应用的叙述，错误的是（    ） A．一些病毒经灭活或减毒处理后可制成疫苗，用于预防相应的病毒感染 B．灭活的病毒可作为细胞融合的诱导剂，用于细胞工程中的各项生物技术 C．病毒可作为基因工程的载体，将目的基因导入受体细胞，实现基因重组 D．利用噬菌体来杀死某些污染水体中特定的病原菌，从而达到消毒的目的 【答案】B 【详解】A、在免疫学上，一些病毒经灭活或减毒处理后可制成疫苗，刺激机体产生免疫反应，预防相应的病毒感染，A正确； B、灭活的病毒可作为细胞融合的诱导剂，促进动物细胞之间的融合，但不一定能用于其他生物技术，B错误； C、病毒可作为基因工程的载体，将目的基因导入受体细胞，实现基因重组，C正确； D、噬菌体是一种专门寄生细菌的病毒，在医疗废水处理或食品加工等污水中，利用噬菌体来杀死特定的病原菌，属于生物消毒法，D正确。 故选B。 3．限制酶、DNA连接酶等的发现为DNA分子的切割，连接及基因表达载体的构建创造了条件。下列关于重组DNA技术基本工具的叙述，正确的是（　　） A．限制酶在原核细胞内的主要作用是切割修剪自身的DNA B．噬菌体、动植物病毒均可作为载体将外源基因导入受体细胞 C．用作载体的质粒DNA分子上可以不含有限制酶切割位点 D．DNA 连接酶可连接DNA分子两条链中碱基对之间的氢键 【答案】B 【详解】A、限制酶主要从原核生物中分离纯化而来，其在原核细胞中的主要作用是切割外源DNA使之失效，从而达到保护自身的目的，A错误； B、将外源基因导入受体细胞，常常需要将目的基因与运载体结合构建基因基因表达载体，常用的载体有质粒、噬菌体和动植物病毒，B正确； C、作为载体的质粒上有限制酶的切割位点，这是质粒作为运载体的条件之一， C错误； D、DNA 连接酶是连接的磷酸二酯键，D错误； 故选B。 4．为了降低免疫排斥反应，研究者借助 CRISPR/Cas9 技术对移植的猪心脏进行了基因编辑。CRISPR/Cas9 系统主要由向导 RNA（sgRNA）和 Cas9 蛋白两部分组成，sgRNA 可引导 Cas9 蛋白到特定基因位点进行切割、其机制如图所示。下列说法错误的是（    ）    A．Cas9 蛋白作用于磷酸二酯键 B．sgRNA 通过与目标 DNA 碱基互补配对引导 Cas9 蛋白到位 C．sgRNA 会因错误结合而出现 “脱靶”现象，一般 sgRNA 序列越短，脱靶率越低 D．经过改造的转基因猪，可以利用核移植、胚胎分割得到更多的可移植器官供体 【答案】C 【详解】A、由于DNA和RNA之间可进行碱基互补配对，因而sgRNA可以特异性识别目标DNA分子，Cas9蛋白作用于磷酸二酯键进而可以将目标基因剪切下来，A正确； B、由于DNA和RNA之间可进行碱基互补配对，因而sgRNA可以特异性识别目标DNA分子，进而引导Cas9蛋白到特定基因位点进行切割，B正确； C、sgRNA序列越短，DNA分子上与其互补的特定序列会越多，错误结合概率越高，C错误； D、经过改造的转基因猪，可以利用核移植，胚胎分割得到更多的可移植器官供体，D正确。 故选C。 5．研究人员用EcoRI和SmaI两种限制酶处理某DNA分子，图1为EcoRI切割该DNA分子后的结果；图2是酶切后的凝胶电泳图谱，其中1号泳道是DNA Marker，2号、3号、4号分别是EcoRI单独处理、SmaI单独处理、两种酶共同处理后的电泳结果。下列相关叙述错误的是（    ） A．据图1可知EcoRI的识别序列为-GAATTC-，切割位点在G和A之间 B．据图2可知琼脂糖凝胶的加样孔在A端，且连着电泳槽的负极 C．据图2可知该DNA分子最可能是含1000个碱基对的链状DNA D．据图2可知该DNA分子中两种限制酶的酶切位点各有一个 【答案】C 【详解】A、图1中DNA双链片段被EcoRI切割成两段，该片段序列是—GAATTC—，断开的部位是在G和A碱基之间，A正确； B、相对分子质量大小会影响物质在电泳时的迁移速率，DNA片段相对分子质量越大，迁移就越慢，分子量越小，迁移速度越快，据图2可知琼脂糖凝胶的加样孔在A端，B正确； C、2号、3号、分别是EcoRI单独处理、Smal单独处理后的电泳结果，两个泳道均只出现一个DNA片段，且分子量是1000，说明该DNA分子最可能是含1000个碱基对的环状DNA，C错误； D、图2中4号是EcoRI和Smal两种酶共同处理后的电泳结果，显示800bp和200bp两个条带，说明在该DNA分子中，两种限制酶的酶切位点各有一个，D正确。 故选C。 题型二 DNA的粗提取 6．下列有关生物实验试剂以及现象的描述，正确的是（　　） A．二苯胺试剂鉴定DNA结果呈紫色 B．苏丹Ⅲ染液可将蛋白质染成橘黄色 C．甲紫染色可观察根尖细胞染色体的状态 D．用黑藻观察细胞质流动需对叶绿体染色 【答案】C 【详解】A、二苯胺试剂鉴定DNA结果呈蓝色，A错误； B、苏丹Ⅲ染液可将脂肪染成橘黄色，B错误； C、染色体容易被碱性染料甲紫溶液着色，因此，甲紫染色可观察根尖细胞染色体的状态，C正确； D、黑藻叶片薄而小，细胞有叶绿体，因此不需要染色就可观察细胞质流动，D错误。 故选C。 7．下列与DNA粗提取和鉴定有关的叙述，错误的是（    ） A．预冷的酒精容易使DNA析出 B．DNA能溶于2mol/L的NaCl溶液中 C．若提取出白色丝状物，说明DNA中杂质少 D．可用碱性染料甲紫鉴定提取出来的DNA 【答案】D 【详解】A、预冷酒精溶液的作用有：抑制核酸水解酶的活性，防止DNA降解；降低分子运动，易于形成沉淀使DNA析出等，A正确； B、DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，在2mol/L的NaCl溶液中溶解度较高，B正确； C、蛋白质杂质会使丝状提取物变黄，若提取出白色丝状物，说明DNA中杂质少，C正确； D、碱性染料甲紫用于染色观察染色体，提取出来的DNA用二苯胺试剂鉴定，D错误。 故选D。 8．下列关于DNA相关实验的叙述，错误的是（    ） A．可利用DNA在酒精中溶解度较大的特点来提取DNA B．用二苯胺试剂鉴定DNA时，沸水浴加热后呈蓝色 C．PCR中通过调节温度来控制DNA双链的解聚与结合 D．PCR产物一般可用琼脂糖凝胶电泳来鉴定 【答案】A 【详解】A、DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精，利用这一原理，可以将DNA与蛋白质进一步的分离，A错误； B、在沸水浴的条件下，DNA遇二苯胺会被染成蓝色，B正确； C、PCR技术利用了DNA的热变性原理，通过调节温度来控制DNA双链的解聚与结合，C正确； D、不同的DNA片段在电泳时移动的速率不同，可以将PCR产物的电泳结果与标准DNA样品的电泳结果进行比对，从而鉴定PCR的产物，常采用琼脂糖凝胶电泳，D正确。 故选A。 9．SDS常用于提取生物组织中的DNA，作为一种阴离子去污剂，它可以溶解细胞膜和核膜蛋白，使染色体离析、蛋白质变性，释放出核酸，获取的核酸可溶于由Tris和EDTA配制的缓冲溶液中保存备用。下列说法正确的是（    ） A．配制研磨液时，需要加入2mol/L的HCl溶液调节pH至8.0 B．提取DNA时加入酒精，目的是使不溶于酒精的蛋白质等物质析出 C．SDS可加速解聚核膜蛋白，有利于提取叶绿体DNA和质粒DNA D．将提取到的DNA与二苯胺溶液充分混匀后，溶液即变为蓝色 【答案】A 【详解】A、配制研磨液时，需要加入2mol/L的HCl溶液调节pH至8.0，使DNA的结构不被破坏，A正确； B、提取DNA时加入酒精，目的是使不溶于酒精的DNA析出，B错误； C、SDS可使核膜蛋白质变性，有利于提取核DNA，C错误； D、将提取到的DNA与二苯胺溶液充分混匀后，沸水浴条件下变为蓝色，D错误。 故选A。 题型三 基因工程的基本操作步骤 10.用限制酶Spe Ⅰ和Hind Ⅲ切割质粒，用限制酶Hind Ⅲ和Xba Ⅰ切割目的基因，之后连接，构建基因表达载体。下列叙述不正确的是（　　） A．青霉素抗性基因可作为筛选标记 B．限制酶可使磷酸二酯键发生断裂 C．表中限制酶切割之后均会产生黏性末端 D．连接后的基因表达载体可被Spe I切开 【答案】D 【详解】A、青霉素抗性基因是质粒中的标记基因，表达产物能抵抗青霉素，故青霉素抗性基因可作为筛选标记，A正确； B、限制酶能够识别双链DNA分子的特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的磷酸二酯键断开，B正确； C、由表格可知，这3种限制酶都是在它识别序列的中心轴线两侧将DNA分子的两条链分别切开，产生黏性末端，C正确； D、题干中用限制酶Spe Ⅰ切割质粒产生的黏性末端和用限制酶Xba Ⅰ切割目的基因产生的黏性末端遵循碱基互补配对，在DNA连接酶的作用下拼接起来，拼接起来的部分碱基序列为ACTAGA，而限制酶Spe Ⅰ识别的碱基序列为ACTAGT，所以连接后的基因表达载体不能被Spe I切开，D错误。 故选D。 11.为获取玉米编码蔗糖转运蛋白的基因，提取玉米细胞RNA，获得cDNA后导入基因工程酵母菌细胞（产生的蔗糖酶不能分泌到胞外），利用选择培养基筛选到含有目的基因的酵母菌。下列叙述错误的是（    ） A．应选取含有蔗糖转运蛋白的组织提取RNA B．RNA通过逆转录形成cDNA C．选择培养基应以蔗糖为唯一碳源 D．基因工程酵母菌无水解蔗糖的能力 【答案】D 【详解】A、基因的表达具有选择性，提取玉米编码蔗糖转运蛋白的基因的RNA，应在含有蔗糖转运蛋白的组织提取，A正确； B、RNA在逆转录酶的作用下，通过逆转录过程形成cDNA，B正确； C、获取的目的基因是编码蔗糖转运蛋白的基因，为研究目的基因是否表达后起作用，选择培养基应以蔗糖为唯一碳源，C正确； D、基因工程酵母菌产生的蔗糖酶不能分泌到胞外，因而具有水解蔗糖的能力，D错误。 故选D。 12.转化是指目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。下列有关说法错误的是（    ） A．大肠杆菌转化实验中可使用Ca2+处理以提高转化效率 B．目的基因导入受体细胞前必须构建基因表达载体以便稳定存在 C．将DNA溶液滴加在授粉后的花柱切面上，可以使目的基因进入胚囊 D．农杆菌转化法中需要进行两次体外拼接和两次导入 【答案】D 【详解】A、可以用Ca2+处理大肠杆菌细胞，使其能吸收周围环境中的DNA分子（使大肠杆菌处于感受态细胞状态），有利于重组的基因表达载体导入其中，提高转化效率，A正确； B、将目的基因导入受体细胞前必须构建基因表达载体，这是基因工程的核心步骤，B正确； C、花粉管通道法：可以用微量注射器将含目的基因的DNA溶液直接注射到子房中，也可以在植物受粉后的一定时间内，剪去柱头，将DNA溶液滴加在花柱切面上，使目的基因借助花粉管通道进入胚囊，C正确； D、农杆菌转化法总体上有两次的拼接过程，发生在Ti质粒与目的基因之间（体外拼接）、携带目的基因的T-DNA与植物细胞的染色体DNA之间（体内拼接）；两次的导入过程基因表达载体，即基因表达载体导入农杆菌、农杆菌导入植物细胞，D错误。 故选D。 13.“标记”是生物技术与工程常用的技术手段，下列相关叙述错误的是（    ） A．诱导动物体细胞融合时，通过红绿荧光蛋白标记检测细胞融合情况 B．分析工程酵母发酵产物的合成及分泌时，通过同位素标记监测产物转移路径 C．验证转基因抗虫棉是否成功时，通过RNA分子标记检测目的基因是否表达 D．对目的基因进行扩增时，可通过荧光标记探针技术实时定量测定产物的量 【答案】C 【详解】A、在诱导动物体细胞融合时，可利用红绿荧光标记蛋白。将不同的荧光蛋白分别标记在不同的动物体细胞上，当动物体细胞融合后，就可以通过观察红绿荧光蛋白的混合情况来检测细胞融合情况，A正确； B、同位素标记法是生物学研究中常用的方法。在工程酵母发酵产物的合成及分泌过程中，给参与反应的某些物质标记上同位素，然后追踪这些同位素的去向，就能监测产物在细胞内以及分泌到细胞外的转移路径，B正确； C、验证转基因抗虫棉是否成功，关键是看其是否真的具有抗虫能力。接种实验是验证的有效方法，即给转基因抗虫棉接种相应的害虫，观察抗虫棉是否能抵抗害虫侵害，表现出抗虫特性。而通过RNA分子标记检测目的基因是否表达，只能知道目的基因有没有转录出RNA，但不知道是否翻译出相应的蛋白质，不能说明抗虫棉是否成功具备抗虫能力，C错误； D、在对目的基因进行扩增时，荧光标记技术可以实现实时定量测定产物的量。其原理是利用荧光基团和淬灭基团制成探针，随着扩增反应的进行，荧光信号会发生变化，通过检测荧光信号的强度等，就能实时定量测定扩增产物的量，D正确。 故选C。 14.研究发现，某农作物的品系N具有抗虫、高产等优良性状，但是甜度不高，而基因Z与农作物的甜度有关。科研人员以Ti质粒为载体，以品系N的叶片外植体为受体，培育转Z基因的新品系n。下列叙述错误的是（    ） A．若只用一种限制酶切割目的基因和Ti质粒可能导致目的基因反向插入载体 B．培育转Z基因的新品系n的过程中利用了植物细胞的全能性 C．成功转入重组Ti质粒的叶片细胞培育成的植株即为新品系n D．重组DNA技术可定向改变生物的性状 【答案】C 【详解】A、若只用一种限制酶切割目的基因和Ti质粒，会产生相同的末端而导致反向连接，A正确； B、培育转Z基因的新品系n的过程利用了叶片作为外植体培育成植株，利用了植物细胞的全能性，B正确； C、成功转入重组Ti质粒的叶片细胞培育成的植株中基因Z不一定能稳定遗传和表达，还要进行进一步的筛选，C错误； D、重组DNA技将不同来源的基因按预先设计的蓝图，在体外构建杂种DNA分子，然后导入活细胞，以改变生物原有的遗传特性、获得新品种、生产新产品的遗传技术，可定向改变生物的性状，D正确。 故选C。 15.DNA粗提取和DNA的PCR扩增是常用的生物技术。下列相关原理及过程叙述正确的是（    ） A．DNA在冷酒精溶液中溶解度较大，蛋白质在冷酒精中溶解度较小，可利用溶解度差异初步分离DNA B．采用琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR产物时，在同一电场作用下，DNA片段越长，向负极迁移速率越快 C．PCR的每次循环包括变性、复性、延伸3个阶段，在复性阶段引物与模板DNA链之间形成磷酸二酯键 D．利用引物A和B对双链DNA进行PCR扩增时，经3次循环需消耗7个A引物 【答案】D 【详解】A、DNA不溶于酒精溶液，但细胞中的某些蛋白质溶于酒精，据此可以初步分离DNA，A错误； B、在琼脂糖凝胶电泳中，当电场作用时，DNA片段实际上是向正极迁移的，而不是向负极迁移，同时，DNA片段的迁移速率与其大小成反比，即DNA片段越长，迁移速率越慢，B错误； C、复性阶段引物与模板DNA链之间形成氢键，C错误； D、经3次循环产生的DNA分子数目为23=8，则需消耗引物A的数目为（8×2-2）÷2=7，D正确。 故选D。 1．图1表示基因工程中用到的质粒，其中PstI是目的基因插入位点，Ampr表示氨苄青霉素抗性基因，Tetr表示四环素抗性基因。图2表示筛选出导入重组质粒的受体菌的方法（四环素和氨苄青霉素在高温下不稳定易失效）。下列说法正确的是（    ） A．构建重组DNA分子用到的工具酶有限制酶和质粒 B．图2所用培养基应加入抗生素并调好pH后再灭菌处理 C．图2中利用绒布接种的方法为稀释涂布平板法 D．原板上的甲、乙菌落中，甲菌落是成功导入重组质粒的受体菌 【答案】D 【详解】A、构建重组DNA分子用到的工具酶有限制酶和DNA连接酶，质粒为载体，A错误； B、由于四环素和氨苄青霉素在高温下不稳定易失效，因此应在灭菌后再加入抗生素，B错误； C、图2中利用绒布接种的方法为影印法，不改变菌落的位置，C错误； D、原板上的甲、乙菌落中，甲菌落在含四环素的培养基上能生存，在含氨苄青霉素的培养基上不能生存，说明其甲菌落中质粒的氨苄青霉素抗性基因被破坏，说明其是成功导入重组质粒的受体菌，D正确。 故选D。 2．借助DNA分子杂交技术进行遗传病基因诊断的一般流程为：制作能与目的基因特异性结合的DNA探针→DNA分子杂交实验→结果分析。下图是某单基因遗传病家系图谱，若要借助DNA分子杂交技术进一步确定该遗传病的遗传方式（不考虑X、Y同源区段），只要设计哪种探针对哪一成员进行检测即可达到目的？（    ） A．与正常基因结合的DNA探针、Ⅰ-1 B．与致病基因结合的DNA探针、Ⅰ-1 C．与正常基因结合的DNA探针、Ⅰ-2或Ⅱ-3 D．与致病基因结合的DNA探针、Ⅰ-2或Ⅱ-3 【答案】A 【详解】Ⅰ-1和Ⅰ-2患病，生下Ⅱ-4正常，说明该病为显性，若位于常染色体上，则Ⅰ-1和Ⅰ-2基因型为Aa、Aa，若位于X染色体上，则基因型为XAY、XAXa，因此可以与Ⅰ-1结合，且探针应为与正常基因结合的DNA探针，这样若有结合的条带就说明为常染色体遗传，若无结合的条带，则在X染色体上。 故选A。 3．应用农杆菌转化法时，目的基因插入T-DNA后，需要对T-DNA测序。测序前根据目的基因的序列设计引物对T-DNA进行PCR扩增的过程如图所示，下列说法正确的是（    ） A．实验需要清楚目的基因的全部碱基序列 B．L、R酶切位点需要在T-DNA外侧，且需用同种限制酶切割 C．引物设计时需要考虑目的基因两侧序列，选择引物b、c D．1个环状DNA分子首次PCR后得到的DNA分子含有两个游离的磷酸基团 【答案】D 【详解】A、实验只需要清楚目的基因两侧的碱基序列，以便设计引物，A错误； B、L、R酶切位点需要在T-DNA内侧，且需用同种限制酶切割，B错误； C、引物设计时需要考虑目的基因两侧序列，选择引物a、d，bc只能扩增出目的基因，C错误； D、1个环状DNA分子首次PCR后得到的DNA分子为链状，含有两个游离的磷酸基团，D正确。 故选D。 4．最早的双脱氧测序法是PCR反应体系中，分别再加入一种少量的双脱氧腺苷三磷酸（ddATP、ddCTP、ddGTP或ddTTP），子链延伸时，双脱氧核苷三磷酸也遵循碱基互补配对原则，以加入ddATP的体系为例：若配对的为ddATP，延伸终止；若配对的为脱氧核苷三磷酸（dATP），继续延伸；PCR产物变性后电泳检测。通过该方法测序某疾病患者及对照个体的一段序列，结果如图所示。下列叙述错误的是（    ） A．上述PCR反应体系中只需加入一种引物 B．电泳时产物的片段越大，迁移速率越慢 C．5'－TAGTGTCCATC－3'为患者的一段序列 D．患者该段序列中某位点的碱基C突变为T 【答案】C 【详解】A、利用双脱氧测序法时，PCR反应体系中加入的模板是待测的单链DNA，故只需加入一种引物，A正确； B、电泳时，DNA的片段越大，迁移速率越慢，B正确； C、依据分析中双脱氧测序法的原理，可以确定每个泳道中的条带（DNA片段）的3'终端的碱基，如+ddATP的泳道中出现的条带（DNA片段）的3'终端碱基就是A。另外由于每个片段的起始点相同，但终止点不同，因此可以通过比较片段的长度来确定DNA序列中每个位置上的碱基；图示电泳方向为从上→下，即对应的DNA片段为长→短，则对应的DNA测序结果为3'→5'，如对照个体的电泳结果最短的条带为+ddCTP泳道组的条带，则说明该DNA片段5'端第一个碱基为C；因此对照个体的测序结果为5'-CTACCCGTGAT-3'，患者的测序结果为5'-CTACCTGTGAT-3'，C错误； D、对比患者和对照个体的测序结果可知，患者该段序列中某位点的碱基C突变为T，D正确。 故选C。 5．不同生物的DNA的提取方法有所不同，DNA提取的原理和实验流程大致相同（如图所示）。下列说法错误的是（    ）    A．破碎细胞在冷冻下进行，可将组织材料冻裂和降低DNA酶的活性 B．溶于酒精中的可能有某些盐类、蛋白质、糖类或其他大分子物质 C．DNA粗提取时离心需使用塑料离心管，用二苯胺试剂对离心结果进行鉴定 D．鉴定絮状物中DNA时，需用2mol·L-¹NaCl溶液溶解DNA后加入二苯胺试剂直接观察 【答案】C 【详解】A、破碎细胞在冷冻下进行，可将组织材料冻裂，方便研磨，低温可以降低DNA酶的活性，防止DNA被降解，A正确； B、DNA不溶于酒精，但细胞中的某些物质却可以溶于酒精，据此推测，溶于酒精中的可能有某些盐类、蛋白质、糖类或其他大分子物质，B正确； C、DNA容易吸附在玻璃表面，使用塑料离心管可减少提取过程中DNA的损失，用二苯胺试剂对离心结果进行鉴定，C正确； D、鉴定絮状物中DNA时，需用2mol·L-¹NaCl溶液溶解DNA，向溶液中加入二苯胺试剂后，需要置于沸水中加热，D错误。 故选D。 一、单选题 1．（2024·浙江6月·高考真题）为了筛查疟原虫感染者,以及区分对氯喹的敏感性。现有6份血样,处理后进行PCR。产物用限制酶ApoⅠ消化,酶解产物的电泳结果如图所示。 1~6号血样中,来自于氯喹抗性患者的是 (　) A.1号和6号 B.2号和4号 C.3号和5号 D.1号、2号、4号和6号 【答案】B 【详解】根据题干信息可知,疟原虫pfcrt基因编码的蛋白,在第76位发生了赖氨酸到苏氨酸的改变,从而获得了对氯喹的抗性。根据酶切位点可知,具有氯喹抗性的基因组没有ApoⅠ酶切位点,而敏感型个体的基因组中具有该酶切位点,因此对6份血样处理后进行PCR,产物用限制酶ApoⅠ消化,酶解产物的电泳结果出现两个条带则为敏感型,只有一个条带的为具有氯喹抗性,所以1~6号血样中,来自于氯喹抗性患者的是2号和4号,B正确,A、C、D错误。 故选B。 2．（2024·安徽·高考真题）下列关于“DNA粗提取与鉴定”实验的叙述,错误的是 (　) A.实验中如果将研磨液更换为蒸馏水,DNA提取的效率会降低 B.利用DNA和蛋白质在酒精中的溶解度差异,可初步分离DNA C.DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同,该原理可用于纯化DNA粗提物 D.将溶解的DNA粗提物与二苯胺试剂反应,可检测溶液中是否含有蛋白质杂质 【答案】D 【详解】研磨液有利于DNA的溶解,若将研磨液更换为蒸馏水,会降低DNA提取的效率,A正确;由于DNA不溶于酒精,但某些蛋白质溶于酒精,所以利用DNA和蛋白质在酒精中的溶解度差异,可初步分离DNA,B正确;DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同,它能溶于2 mol/L的NaCl溶液,利用该原理可纯化DNA粗提物,C正确;二苯胺试剂可以用于鉴定DNA,但不能检测溶液中是否含有蛋白质杂质,D错误。 故选D。 3．（2024·河北·高考真题）下列相关实验操作正确的是 (　) A.配制PCR反应体系时,加入等量的4种核糖核苷酸溶液作为扩增原料 B.利用添加核酸染料的凝胶对PCR产物进行电泳后,在紫外灯下观察结果 C.将配制的酵母培养基煮沸并冷却后,在酒精灯火焰旁倒平板 D.将接种环烧红,迅速蘸取酵母菌液在培养基上划线培养,获得单菌落 【答案】B 【详解】PCR技术能在体外进行DNA片段的扩增,故PCR反应体系中应加入4种脱氧核苷酸作为扩增的原料,A错误;PCR的产物一般通过琼脂糖凝胶电泳来鉴定,凝胶中的DNA分子通过染色,可以在波长为300 nm的紫外灯下被检测出来,B正确;将配制好的酵母培养基进行高压蒸汽灭菌,待培养基冷却至50 °C左右后,在酒精灯火焰附近倒平板,C错误;接种时,先将接种环放在酒精灯火焰上灼烧,直到接种环的金属丝烧红,在火焰旁冷却后再蘸取酵母菌液,否则会杀死菌种,D错误。 故选B。 4．（2024·江西·高考真题）γ-氨基丁酸在医药等领域有重要的应用价值。利用L-谷氨酸脱羧酶(GadB)催化L-谷氨酸脱羧是高效生产γ-氨基丁酸的重要途径之一。研究人员采用如图方法将酿酒酵母S的L-谷氨酸脱羧酶基因(gadB)导入生产菌株E.coliA,构建了以L-谷氨酸钠为底物高效生产γ-氨基丁酸的菌株E.coliB。下列叙述正确的是 (　) A.上图表明,可以从酿酒酵母S中分离得到目的基因gadB B.E.coliB发酵生产γ-氨基丁酸时,L-谷氨酸钠的作用是供能 C.E.coliA和E.coliB都能高效降解γ-氨基丁酸 D.可以用其他酶替代NcoⅠ和KpnⅠ构建重组质粒 【答案】A 【详解】题图显示,研究人员采用如图方法将酿酒酵母S的L-谷氨酸脱羧酶基因(gadB)导入生产菌株E.coliA,说明可以从酿酒酵母S中分离得到目的基因gadB,A正确;题意显示,研究人员构建了以L-谷氨酸钠为底物高效生产γ-氨基丁酸的菌株E.coliB,因此用E.coliB发酵生产γ-氨基丁酸的过程中L-谷氨酸钠的作用不是供能,B错误;E.coliA中没有L-谷氨酸脱羧酶(GadB),因而不能降解L-谷氨酸,而E.coliB中含有该酶的基因,能高效降解L-谷氨酸,C错误;图中质粒上含有多个酶切位点,但目的基因上不一定有对应位点,D错误。 故选A。 5．（2024·山东·高考真题）关于“DNA的粗提取与鉴定”实验,下列说法正确的是 (　) A.整个提取过程中可以不使用离心机 B.研磨液在4 ℃冰箱中放置几分钟后,应充分摇匀再倒入烧杯中 C.鉴定过程中DNA双螺旋结构不发生改变 D.仅设置一个对照组不能排除二苯胺加热后可能变蓝的干扰 【答案】A 【详解】在DNA的粗提取与鉴定实验中,可将获得的研磨液用纱布过滤后,在4 ℃的冰箱中放置几分钟,再取上清液,也可以直接将研磨液用离心机进行离心后取上清液,A正确,B错误;鉴定过程中用沸水浴加热,DNA双螺旋结构会发生改变,C错误;加入二苯胺试剂后沸水浴处理的时间要在5分钟以上,且要等到冷却后再观察结果,这样才可以观察到较为明显的显色反应,仅设置一个对照组可以排除二苯胺加热后可能变蓝的干扰,D错误。 故选A。 二、填空题 1．（2025·浙江1月·高考真题）3-磷酸甘油脱氢酶(GPD)是酵母细胞中甘油合成的关键酶。利用某假丝酵母菌株为材料,克隆具有高效催化效率的3-磷酸甘油脱氢酶的基因(Gpd)。采用的方案是:先通过第1次PCR扩增出该基因的中间部分,再通过第2次PCR分别扩增出该基因的两侧,经拼接获得完整基因的序列,如图所示: 回答下列问题: (1)分析不同物种的GPD蛋白序列,确定蛋白质上相同的氨基酸区段,依据这些氨基酸所对应的________,确定DNA序列,进而设计1对引物。以该菌株基因组DNA为模板进行第1次PCR,利用________凝胶电泳分离并纯化DNA片段,进一步测定PCR产物的序列。在制备PCR反应体系时,每次用微量移液器吸取不同试剂前,需要确认或调整刻度和量程,还需要________________。  (2)若在上述PCR扩增结果中,除获得一条阳性条带外,还出现了另外一条条带,不可能的原因是________________________________。  A.DNA模板被其他酵母细胞的基因组DNA污染 B.每个引物与DNA模板存在2个配对结合位点 C.在基因组中Gpd基因有2个拷贝 D.在基因组中存在1个与Gpd基因序列高度相似的其他基因 (3)为获得完整的Gpd基因,分别用限制性核酸内切酶PstⅠ和SalⅠ单酶切基因组DNA后,各自用DNA连接酶连接形成环形DNA,再用苯酚-氯仿抽提除去杂质,最后加入________沉淀环形DNA。根据第一次PCR产物测定获得的序列,重新设计一对引物,以环形DNA为模板进行第二次PCR,最后进行测序。用于第二次PCR的一对引物,  其序列应是DNA链上的________(A.P1和P2　B.P3和P4　C.P1和P4　D.P2和P3)。根据测序结果拼接获得完整的Gpd基因序列,其中的启动子和终止子具有________功能。  (4)为确定克隆获得的Gpd基因的准确性,可将获得的基因序列与已建立的____________进行比对。将Gpd基因的编码区与________________连接,构建重组质粒,再将重组质粒导入酿酒酵母细胞中,实现利用酿酒酵母高效合成甘油的目的。  【答案】(1)密码子　琼脂糖　更换移液器枪头(2分) (2)C(2分) (3)冷的95%乙醇　D(2分)　调控 (4)基因数据库　表达载体 【详解】 (1)分析不同物种的GPD蛋白序列,确定蛋白质上相同的氨基酸区段,依据这些氨基酸所对应的密码子,确定DNA序列,进而设计1对引物。可通过琼脂糖凝胶电泳分离并纯化目标DNA片段。在制备PCR反应体系时,每次用微量移液器吸取不同试剂前,需要更换微量移液器的枪头,以避免交叉污染。(2)DNA模板被其他酵母细胞的基因组DNA污染,可能扩增出其他DNA,从而出现另外一条条带,A不符合题意;每个引物与DNA模板存在2个配对结合位点,可扩增出不同的DNA片段,从而出现另外一条条带,B不符合题意;在基因组中Gpd基因有2个拷贝,扩增出的DNA是相同DNA,电泳时只会出现一个条带,C符合题意;在基因组中存在1个与Gpd基因序列高度相似的其他基因,可能将相似的基因扩增出来,从而出现另外一条条带,D不符合题意。(3)DNA在冷的95%乙醇中溶解度较低,可通过将酶切后的DNA经苯酚-氯仿抽提除去杂质,再加入冷的95%乙醇中沉淀,得到环形DNA。 PCR过程中,子链的延伸方向为5'→3',结合图 示可知,应选择P2和P3引物进行第二次扩增。启动子可启动转录,终止子可终止转录,即启动子和终止子具有调控功能。(4)为确定克隆获得的Gpd基因的准确性,可将获得的基因序列与已建立的基因数据库进行对比,若二者相同,则说明克隆获得的Gpd基因准确。将Gpd基因的编码区与表达载体连接,构建重组质粒,再将重组质粒导入酿酒酵母细胞中,使之进行表达,实现利用酿酒酵母高效合成甘油的目的。 / 学科网（北京）股份有限公司 $