训练(四十八) 微生物的培养技术及应用（学生用书Word）-【高考领航】2026年高考生物大一轮复习学案

训练(四十八)　微生物的培养技术及应用 (建议用时：50分钟　满分：50分) (选择题1～8题每题2分，9～10题每题3分，共22分) [基础巩固] 1．(2025·辽宁抚顺模拟)做微生物的纯培养实验时，既要配制适宜的培养基，又要防止杂菌污染。下列说法正确的是(　　) A．培养基上获得的菌落是由单个微生物繁殖形成的 B．培养霉菌时，一般需将培养基的pH调至酸性 C．不含氮源的培养基不能用于微生物培养 D．配制好的培养基采用干热灭菌，以防止杂菌污染 2．(2025·河南安阳模拟)下列关于无菌操作的叙述，正确的是(　　) A．煮沸消毒不能杀死微生物的细胞 B．应尽量选择脱脂棉塞住试管口，否则容易造成吸水污染 C．配制培养基时应该先灭菌再调节pH D．对于接种室应采用紫外线或药物熏蒸的方法进行杀菌或消毒 3．(2025·江苏镇江模拟)下列关于微生物的纯培养实验的叙述，正确的是(　　) A．微生物的培养基中需添加一定量的抗生素以防止污染 B．为防止蛋白质变性，不能用湿热灭菌法对牛肉膏蛋白胨培养基进行灭菌 C．平板划线时，接种环应在固体培养基表面轻轻地连续划线 D．完成平板划线后，应将平板立刻倒置培养以免污染培养基 4．(2025·江苏南京模拟)熔喷布的主要成分是聚丙烯，会对环境造成污染。某科研小组从土壤中分离到一种能分解聚丙烯的细菌。下列说法正确的是(　　) A．配制固体培养基时，需要在无菌的环境中进行 B．分离纯化细菌时，转换划线角度后需灼烧接种环再进行划线 C.从土壤中分离能分解聚丙烯的细菌，可采用平板划线法进行分离与计数 D．通常培养该细菌的培养基比酵母菌培养基有更高的碳氮比 5．(2025·湖北武汉模拟)工业化生产酸奶所需的乳酸菌一般是从自然发酵的酸奶中分离得到的纯培养物。下列有关纯培养乳酸菌的叙述，错误的是(　　) A．配制适合乳酸菌生长的培养基并用湿热灭菌法灭菌 B．可用无菌水将自然发酵的酸奶进行一系列浓度梯度稀释 C．取适量各稀释倍数下的酸奶滴加到灭菌后的平板上且均匀涂布 D．将平板倒置厌氧培养一段时间后长出的单菌落即为所需乳酸菌 6．(2025·河南新乡模拟)某实验小组通过控制苯浓度，对从污泥处理厂的活性污泥中筛选获得的苯降解菌进行驯化培养，挑选出合适的培养条件，同时驯化培养出较好的苯降解菌，培养的实验结果如下表所示。下列有关叙述错误的是(　　) 组别 加入苯浓 度/(g·L-1) 菌落个 体/个 菌落密度 /(个·L-1) ① 200 几乎无 几乎无 ② 20 60 1200 ③ 2 54 1120 ④ 0.2 24 450 A．该实验中驯化苯降解菌的培养基上应该加入适量的琼脂 B．第①组几乎没有菌落的原因可能是苯浓度过高对细菌产生了毒性 C．第④组菌落数目少的原因可能是培养基上的碳源的含量不足 D．由该实验可知，20 g·L-1的苯浓度是培养苯降解菌的最适浓度 7．(2025·湖北咸宁模拟)袋装酸奶的包装上通常都会注明“胀袋勿食”。某同学选择一过期的胀袋密封酸奶，按图中的操作流程，研究其中的某微生物生长情况，下列有关叙述正确的是(　　) A．巴氏消毒法可以杀死牛奶中的微生物和芽孢 B．酸奶胀袋是由于其中的乳酸菌无氧呼吸产生了CO2 C．利用图示方法向培养基接种前和接种后都要对涂布器进行灼烧灭菌 D．若3个平板的平均菌落数是180个，则1 mL 酸奶中该微生物个数为1.8×106个 8．(2025·辽宁沈阳模拟)纤维素是一种有待开发利用的生物资源，对于能源危机、环境污染问题的解决具有重要作用。从牛粪堆肥中可分离出产纤维素酶的细菌(纤维素分解菌)。刚果红可以与纤维素这样的多糖物质形成红色复合物，但不与纤维素水解产物发生这种反应。图中a～d表示在培养基上生长的四个单菌落及透明圈。下列关于分离、鉴定纤维素分解菌实验相关操作的叙述，正确的是(　　) A．称取1 g牛粪堆肥样品，再用蒸馏水进行梯度稀释 B．将一定稀释度的稀释液涂布于牛肉膏蛋白胨培养基上进行培养 C.该实验可以采用平板划线法进行分离计数 D．使用刚果红染色法对初筛菌株进行检测，d组细菌可能产纤维素酶最多 [能力提升] 9．(2025·安徽芜湖模拟)下表所示是培养尿素分解细菌的配方，如图所示是对土壤样品的稀释及取样培养的流程图，每支试管装有9 mL无菌水。下列相关叙述错误的是(　　) KH2PO4 Na2HPO4 MgSO4·7H2O 葡萄糖 尿素 琼脂 1.4 g 2.1 g 0.2 g 1 g 10 g 15 g 将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000 mL A．培养尿素分解细菌的配方中，尿素和葡萄糖分别是唯一氮源和碳源 B．对土壤样品进行稀释，当稀释到最后一支试管时，总共稀释了107倍 C．从菌落的数目和分布来看，适宜用来计数的是稀释度为105倍的一组 D．理论上还应设置一组相同条件下培养的空白培养基，以判断培养基是否污染 10．(2025·河南郑州模拟)某种物质S(一种含有C、H、N的有机物)难以降解，会对环境造成污染，只有某些细菌能降解S。研究人员按照如图所示流程从淤泥中分离得到能高效降解S的细菌菌株。实验过程中需要甲、乙两种培养基，甲的组分为无机盐、水和S，乙的组分为无机盐、水、S和Y。下列相关叙述正确的是(　　) A．甲、乙培养基都是选择培养基，其中Y应是凝固剂琼脂 B．甲培养基中进行的是扩大培养，扩大培养后稀释度数越低越好 C．在乙培养基上统计活菌时，平板上的一个菌落就是一个细菌 D．多次筛选的过程是诱导细菌发生基因突变，产生高效降解S的菌株 11．(13分)(2025·河北张家口模拟)幽门螺杆菌(Hp)是急慢性胃炎和消化道溃疡的主要致病因子，能分泌X酶分解对热不稳定的尿素。某同学欲从患者胃黏膜提取物中分离出幽门螺杆菌并培养检测，请回答下列问题： 得分 (1)筛选Hp的培养基成分应具有的主要特点是____________________。培养基中还应加入KH2PO4和Na2HPO4，作用是____________________________。尿素应在培养基灭菌冷却后添加，获得无菌尿素的方法可用滤膜法。 (2)Hp的培养条件应选择________(填“有氧”或“无氧”)条件。 (3)该同学在显微镜下用血细胞计数板对幽门螺杆菌进行计数，取稀释倍数为103倍的菌液观察，测得5个中方格(16个小方格)的数目分别为17、29、23、19、22，测得每毫升样品中的细菌数为______________。 (4)若比较两种抗生素A和B抑制幽门螺杆菌能力的强弱，请用简洁的语言写出实验思路：_______________________________________。 12．(15分)(2025·广东广州模拟)为探究链霉素对大肠杆菌抗性的作用，某科研小组设计实验，先将对链霉素敏感的大肠杆菌原始菌种涂布在1号培养基上，培养出菌落后，将灭菌绒布在1号上印模，绒布沾上菌落并进行转印，使绒布上的菌落按照原位接种到2号和3号培养基上。待3号上长出菌落后，在2号上找到对应的菌落，然后接种到不含链霉素的4号培养液中，培养后再涂布到5号培养基上，并重复以上步骤。请根据实验回答下列问题： 得分 注：影印法指用无菌绒布轻盖在已长好菌落的原培养基上，然后不转动任何角度，“复印”至新的培养基上进行接种。 (1)实验中影印培养的目的是_______________________________________。 比较2、3培养基与6、7培养基可以得出：与原始菌种相比，4号培养液中__________________________________________。 (2)如果将4号培养液稀释104倍后取0.1 mL涂布到5号培养基上，重复三次统计菌落数目分别为131、132、136个，则4号培养液中大肠杆菌的密度约为______________。理论上，使用此方法比使用血细胞计数板直接计数的结果________(填“大”“小”或“相等”)，原因是________________________________。 (3)4号培养液中不含链霉素，一段时间后，4号培养液中大肠杆菌的数量减少了，原因是___________________________________。 (4)通过本实验结果，可以得出结论：____________________________。 答案与精析 训练(四十八)　微生物的培养技术及应用 1．B　微生物的纯培养实验中培养基上经培养得到的单菌落一般是由单个微生物繁殖形成的纯培养物，但是有的菌落可能由两个或多个细胞连在一起繁殖形成一个菌落，A错误；培养霉菌时，一般需将培养基的pH调至酸性，B正确；微生物培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，不含氮源的培养基可以用于固氮微生物的培养，C错误；配制好的培养基可以采用湿热灭菌，其目的是防止杂菌污染培养基，这是获得纯净培养物的关键，D错误。 2．D　煮沸消毒法在100 ℃煮沸5～6 min可杀死微生物的营养细胞和一部分芽孢，A错误；由于脱脂棉吸水后容易引起污染，所以制作棉塞应该使用普通棉花，而不能使用脱脂棉，B错误；为避免杂菌污染，应先调节pH再灭菌，C错误；紫外线能破坏DNA结构，对于接种室应采用紫外线或药物熏蒸的方法进行杀菌或消毒，以营造无菌环境，D正确。 3．C　抗生素会杀死菌种，故微生物的培养基中不能添加抗生素，A错误；可用湿热灭菌法对牛肉膏蛋白胨培养基进行灭菌，以防止杂菌污染，培养基中的蛋白质变性失活，不影响微生物对其的利用，B错误；平板划线时，接种环应在固体培养基表面轻轻地连续划线，防止划破培养基表面，影响实验结果的观察，C正确；完成平板划线后，待菌液被培养基吸收，再将平板倒置培养，D错误。 4．B　配制固体培养基时，无需在无菌的环境中进行，A错误；利用平板划线接种时，每次划线前后都要灼烧接种环，因此转换划线角度后需灼烧接种环再进行划线，B正确；从土壤中分离能分解聚丙烯的细菌，可采用平板划线法进行分离，不能计数，C错误；通常培养该细菌的培养基比酵母菌培养基有更低的碳氮比，D错误。 5．D　将平板倒置厌氧培养一段时间后长出的单菌落为厌氧菌，但不一定是所需的乳酸菌，D错误。 6．D　仅根据这几组实验数据，不能确定20 g·L-1的苯浓度就是培养苯降解菌的最适浓度，还需要更多更小浓度梯度的实验来进一步确定，D错误。 7．C　消毒是指使用较为温和的物理、化学或生物等方法，杀死物体表面或内部一部分微生物，不包括芽孢和孢子，巴氏消毒法不能杀死芽孢，A错误；酸奶制作的原理是乳酸菌发酵，乳酸菌是异养厌氧型原核生物，无氧呼吸可将葡萄糖分解形成乳酸，并释放少量的能量。胀袋是由于杂菌污染产生了气体，B错误；图示方法是稀释涂布平板法，使用的工具是涂布器，接种前和接种后都要对涂布器进行灼烧灭菌，C正确；利用公式C÷V×M，可以计算1 mL 酸奶中该微生物数量为180÷0.2×104＝9×106，D错误。 8．D　进行梯度稀释时使用的是无菌水，A错误；应将一定稀释度的稀释液涂布在以纤维素为唯一碳源的培养基上进行选择培养，B错误；该实验可以采用稀释涂布平板法进行分离计数，平板划线法不能用于计数，C错误；与a、b、c三组相比，d组的透明圈直径和菌落直径的比值最大，说明该组细菌可能产纤维素酶最多或酶活性最高，D正确。 9．A　培养尿素分解细菌的配方中，尿素作为唯一氮源是为了筛选出能利用尿素作为氮源的细菌——尿素分解菌，但尿素含有碳元素，也可作为碳源，A错误。 10．A　根据题干信息可知，甲中组分含有无机盐、水和S，S作为该培养基中唯一的碳源和氮源，只允许能降解S的细菌菌种生长，为选择培养基，由图可知，甲培养基是液体培养基，乙是固体培养基，二者的组分差别在于Y，这说明Y是凝固剂琼脂，同时也可说明乙也是选择培养基，A正确；稀释涂布平板法中，稀释度数要足够高且适宜，具体稀释倍数由菌液浓度决定，否则得不到单个细菌繁殖而成的菌落，B错误；当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，因此，统计结果中，平板上的一个菌落可能是一个或多个细菌，C错误；多次筛选是通过人为营造只有S提供碳源和氮源的环境，选择出适应该环境的能分解S的细菌菌株，即目的是从多种能降解物质S的菌株中将高效降解的菌株筛选出来，而不是诱导基因突变，D错误。 11．(1)以尿素为唯一氮源　提供无机盐和维持培养基的pH稳定　(2)无氧　(3)5.5×109　(4)在两组培养基中分别添加等量的抗生素A和B，在两组平板上涂布等量的幽门螺杆菌菌液，在相同且适宜的条件下培养一段时间后，统计和比较两组平板上的菌落数目 12．解析：(1)将对链霉素敏感的大肠杆菌原始菌种涂布在1号培养基上，培养出菌落后，将灭菌绒布在1号上印模，绒布沾上菌落并进行转印，使绒布上的菌落按照原位接种到2号和3号培养基上。待3号上长出菌落后，在2号上找到对应的菌落，然后接种到不含链霉素的4号培养液中，培养后再涂布到5号培养基上，并重复以上步骤，影印培养的目的是在不含链霉素的培养基的众多菌落中，选出含有抗链霉素菌的菌落，3号与2号、7号与6号培养基中的菌落数的比值，是抗性菌落占全部菌落的比例，观察实验结果可知，4号培养液中，抗链霉素菌株的比例在逐渐增大。(2)重复三次统计菌落数目分别为131、132、136个，则4号培养液中大肠杆菌的密度约为(131＋132＋136)÷3÷0.1×104＝1.33×107(个/mL)，血细胞计数板计数会把死菌也计入，用稀释涂布平板法计数，当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，理论上，使用此方法比使用血细胞计数板直接计数的结果小。(3)培养大肠杆菌需要营养物质，大肠杆菌也会产生代谢废物，4号培养液中不含链霉素，一段时间后，4号培养液中大肠杆菌的数量减少的原因是营养物质大大减少，有害物质不断积累。(4)影印培养的目的是在不含链霉素的培养基的众多菌落中，选出含有抗链霉素菌的菌落，通过本实验结果，可以得出结论：链霉素在大肠杆菌抗链霉素抗性的形成中起到选择作用。 答案：(1)在不含链霉素的培养基的众多菌落中，选出含有抗链霉素菌的菌落　抗链霉素的大肠杆菌所占比例增大　(2)1.33×107个/mL　小　血细胞计数板计数会把死菌也计入；当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落　(3)营养物质大大减少，有害物质不断积累　(4)链霉素在大肠杆菌抗链霉素抗性的形成中起到选择作用 学科网（北京）股份有限公司 $