第38讲 微生物的培养技术和应用（专项训练）（山东专用）2026年高考生物一轮复习讲练测

第38讲 微生物的培养技术和应用 目录 01 课标达标练 【题型一】微生物的基本培养技术 【题型二】微生物的选择培养和计数 02 能力突破练（新考法+新情景+新思维） 03 高考溯源练（含2025高考真题） 【题型一】微生物的基本培养技术 1.微生物培养过程中，要重视无菌操作，现代生物学实验中的许多方面也要进行无菌操作，防止杂菌污染，请分析下列操作，正确的是(　　) A.煮沸消毒法中100 ℃煮沸5～6 min可以杀死全部微生物的细胞和芽孢、孢子 B.将接种环直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧，可以迅速彻底地灭菌 C.加入培养基中的指示剂和染料不需要灭菌 D.家庭制作葡萄酒时要将容器和葡萄进行灭菌 2.(2023·湖南名校联盟)“掌心对掌心，手心压手背，十指交叉摩，手握关节搓，拇指围轴转，指尖掌心揉，手腕别放过。”七步洗手法可以清除手部的污物和微生物，是预防新冠病毒感染的有效措施之一。某生物实验小组设计了“比较洗手前后手上细菌分布情况”的探究活动：各小组成员分别将拇指在甲组培养基上轻轻按一下，然后用肥皂将该手洗干净，再将洗净后的拇指在乙组培养基上轻轻按一下。将这两组培养基放入恒温培养箱中，在适宜温度下培养24小时后，统计两组培养基中菌落数目，请回答下列问题： (1)该实验中用到的培养基中加入了牛肉膏、蛋白胨、NaCl和水，蛋白胨可以为微生物的生长提供________________________________________________ 等营养物质，为了使配制的溶液呈固体状态，还需要加入________。为了防止外来杂菌的入侵，可以将培养基放入盛有适量________的高压蒸汽灭菌锅内灭菌15～30 min。 (2)实验中“将拇指在培养基上轻轻按一下”相当于微生物培养操作中的________，该操作应该在酒精灯火焰附近进行，原因是________________________________________________。 (3)统计甲、乙两组培养皿中的菌落，乙组中菌落数比甲少得多，实验结果说明肥皂洗手不能彻底清除手上的微生物。为避免手上微生物在无菌操作中污染培养基，洗过的手还应进行____________________________________________________ 等方法处理(答出1种即可)。 (4)有同学认为乙中也有菌落产生，是因为培养过程受到杂菌污染，请你在本实验的基础上设计一个简单的方案验证他的猜想是否正确，并预期结果和结论。____________________________________________________________________。 3.灭菌、消毒、无菌操作是生物学实验中常见的操作。下列叙述正确的是(　　) A.动、植物细胞DNA的提取必须在无菌条件下进行 B.微生物、动物细胞培养基中需添加一定量的抗生素以防止污染 C.为防止蛋白质变性，不能用湿热灭菌法对牛肉膏蛋白胨培养基进行灭菌 D.可用湿热灭菌法对实验中所使用的微量离心管、细胞培养瓶等进行灭菌 4.解脂菌能利用分泌的脂肪酶将脂肪分解成脂肪酸和甘油并吸收利用。脂肪酸会使醇溶青琼脂平板变为深蓝色。将不能直接吸收脂肪的甲、乙两种菌分别等量接种在醇溶青琼脂平板上培养。甲菌菌落周围呈现深蓝色，乙菌菌落周围不变色。下列说法错误的是(　　) A.甲菌属于解脂菌 B.实验中所用培养基以脂肪为唯一碳源 C.可将两种菌分别接种在同一平板的不同区域进行对比 D.该平板可用来比较解脂菌分泌脂肪酶的能力 5.青霉菌处在葡萄糖浓度不足的环境中时，会通过分泌青霉素杀死细菌，以保证自身生存所需的能量供应。目前已实现青霉素的工业化生产，关于该生产过程，下列说法错误的是(　　) A.发酵液中的碳源不宜使用葡萄糖 B.可用深层通气液体发酵技术提高产量 C.选育出的高产菌株经扩大培养后才可接种到发酵罐中 D.青霉素具有杀菌作用，因此发酵罐不需严格灭菌 6.某同学从被石油污染的土壤中分离得到A和B两株可以降解石油的细菌，在此基础上采用平板培养法比较二者降解石油的能力，并分析两个菌株的其他生理功能。 实验所用的培养基成分如下： 培养基Ⅰ：K2HPO4、MgSO4、NH4NO3、石油。 培养基Ⅱ：K2HPO4、MgSO4、石油。 操作步骤： ①将A、B菌株分别接种在两瓶液体培养基Ⅰ中培养，得到A、B菌液； ②液体培养基Ⅰ、Ⅱ中添加琼脂，分别制成平板Ⅰ、Ⅱ，并按图中所示在平板上打甲、乙两孔。 回答下列问题： (1)实验所用培养基中作为碳源的成分是__________。培养基中NH4NO3的作用是为菌株的生长提供氮源，氮源在菌体内可以参与合成__________(答出2种即可)等生物大分子。 (2)步骤①中，在资源和空间不受限制的阶段，若最初接种N0个A细菌，繁殖n代后细菌的数量是__________。 (3)为了比较A、B降解石油的能力，某同学利用步骤②所得到的平板Ⅰ、Ⅱ进行实验，结果如表所示(“＋”表示有透明圈，“＋”越多表示透明圈越大，“－”表示无透明圈)，推测该同学的实验思路是_________________________________________________________________。 (4)现有一贫氮且被石油污染的土壤，根据上表所示实验结果，治理石油污染应选用的菌株是__________，理由是_____________________________________。 7.培养基是人们按照培养对象对营养物质的不同需求配制的营养基质。下列有关培养基的配制和使用的叙述，正确的是(　　) A.微生物培养基的组成成分必需含有碳源、氮源、水和无机盐 B.用动、植物的体细胞进行细胞培养，均可用固体培养基 C.接种前要了解固体培养基是否被污染可接种蒸馏水来培养检测 D.使用过的微生物培养基应进行高压蒸汽灭菌处理后再丢弃 8.为探究校内植物园土壤中的细菌种类，某兴趣小组采集园内土壤样本并开展相关实验。下列有关叙述错误的是(　　) A.采样时应随机采集植物园中多个不同地点的土壤样本 B.培养细菌时，可选有牛肉膏蛋白胨固体培养基 C.土壤溶液稀释倍数越低，越容易得到单菌落 D.鉴定细菌种类时，除形态学鉴定外，还可借助生物化学的方法 9.在生产、生活和科研实践中，经常通过消毒和灭菌来避免杂菌的污染。下列相关叙述，错误的是(　　) A.玻璃和金属材质的实验器具可放入干热灭菌箱中干热灭菌 B.接种前后的接种环都要在酒精灯的火焰上进行灼烧消毒 C.没有将高压蒸汽灭菌锅内的冷空气排尽将影响培养基的灭菌效果 D.喷洒石炭酸同时配合紫外线照射可提高对接种室的消毒效果 【题型二】微生物的选择培养和计数 10.下图为实验室培养和纯化大肠杆菌过程中的部分操作步骤，下列说法正确的是(　　) A.步骤①后需将培养基灭菌并调节pH B.步骤①②③操作时需要在酒精灯火焰附近进行 C.步骤③到④的过程中，接种环共灼烧处理了5次 D.图中步骤①结束后需倒置平板，④结束后不需要 11.丁草胺是一种有机除草剂，主要用于水稻田杂草的防除，具有潜在的致畸变和致突变性。而在水稻种植过程中农田有一段很长的淹水期，淹水会导致水稻田深层土壤处于厌氧状态。因此研究丁草胺厌氧降解菌对于水稻田土壤中丁草胺的降解具有重要意义。研究人员要对丁草胺厌氧降解菌进行分离、鉴定和扩大培养(如图)，请回答下列问题： (1)你认为研究小组应该在哪里取样？_________________________________。 (2)配制选择培养基时，研究人员先加入了K2HPO4、KH2PO4、FeSO4、MgCl2、NH4Cl、CaCl2、NaCl、微量元素复合液、维生素复合液等，他们还需要加入一定量的________。对培养基灭菌通常采用________法。灭菌结束后，应趁热将适量培养基分装于锥形瓶中，充入氮气，塞住胶塞并用铝帽固定，这样操作的目的是 ____________________________________________________________________。 (3)步骤③中，应将平板放入厌氧罐中，置于培养箱中恒温培养，对长出的菌落进行初步鉴定。菌落是初步区分微生物类型的重要特征，这些特征包括__________________________________________________(至少答出2点)等。 (4)步骤④中，从第二次划线操作起，每次总是要从上一次划线的末端开始划线，其原因是_________________________________________________________。 12.(不定项)北京冬奥会食堂让各国运动健儿爱上中国味道，其餐余垃圾在垃圾集中点采用生化＋雾化＋膜过滤技术处理后，可以达到无二次污染的标准。为筛选对抗生素有抗性、高效降解淀粉的微生物，提高“生化”处理的效率，研究人员将餐余垃圾机械化处理后加入装有无菌水的锥形瓶中制备餐余垃圾浸出液，然后进行如图所示操作，下列说法正确的是(　　) A.餐余垃圾浸出液在接种前通常需要进行高压蒸汽灭菌处理 B.可用稀释涂布平板法将餐余垃圾浸出液接种在X培养基上 C.X培养基含有淀粉和抗生素，Y培养基是不含琼脂的液体培养基 D.图中降解淀粉最高效的微生物是⑤，可根据菌落特征初步判断微生物类型 13.某纺织厂为使牛仔布呈现“穿旧”效果，准备用纤维素分解菌处理代替传统的浮石擦洗。工作人员拟从土壤样品中分离该类微生物，并进行扩大培养，相关工艺流程如下图。请回答下列问题： (1)进行土样中细菌数量的测定，常用稀释涂布平板法(选用104～106倍的稀释液)统计样品中活菌的数量。当第一次用稀释涂布平板法测定土样中纤维素分解菌的数量时，所进行实验的一般基本思路是___________________________________。 (2)在系列稀释操作前，选择培养的一般目的是___________________________。 (3)涂布接种时，转动培养皿的目的是_________________________________。 (4)在鉴别培养基上，菌落周围的透明圈大小可能与纤维素酶的________有关。 14.研究深海独特的生态环境对于开发海洋资源具有重要意义。近期在“科学号”考察船对中国南海科考中，中国科学家采集了某海域1 146米深海冷泉附近沉积物样品，分离、鉴定得到新的微生物菌株并进一步研究了其生物学特性。 回答下列问题： (1)研究者先制备富集培养基，然后采用________________法灭菌，冷却后再接入沉积物样品，28 ℃厌氧培养一段时间后，获得了含拟杆菌的混合培养物，为了获得纯种培养，除了稀释涂布平板法，还可采用________法。据图分析，拟杆菌新菌株在以________为碳源时生长状况最好。 (2)研究发现，将采集的样品置于各种培养基中培养，仍有很多微生物不能被分离筛选出来，推测其原因可能是___________________________________________(答一点即可)。 (3)藻类细胞解体后的难降解多糖物质，通常会聚集形成碎屑沉降到深海底部。从生态系统组成成分的角度考虑，拟杆菌对深海生态系统碳循环的作用可能是__________________________________________________________________。 (4)深海冷泉环境特殊，推测此环境下生存的拟杆菌所分泌的各种多糖降解酶，除具有酶的一般共性外，其特性可能还有________。 15.餐厨垃圾中具有高效降解能力的微生物，可用于餐厨垃圾高效无害化处理。科研人员取一定量的餐厨样品，制备不同浓度的样品稀释液，并将样品接种于利用蛋白胨、牛肉膏、氯化钠、琼脂配制的培养基表面进行培养并分离。下列分析正确的是(　　) A.牛肉膏主要为微生物提供氮源 B.接种时需用力将菌种接种到培养基内 C.稀释样品获得单个菌落以便判断菌种类型 D.经过培养可筛选出有高效降解能力的微生物 (不定项)16.某学习小组从富含纤维素分解菌土壤中获取纤维素分解菌并进行了下列操作：称取土样20 g，加入装有30 mL培养基的摇瓶中并完成稀释，在30 ℃下将摇瓶置于摇床上振荡培养；吸取一定的培养液，转移至另一瓶新鲜的选择培养基中，以同样的方法培养到培养液变浑浊时，吸取0.1 mL培养液进行梯度稀释和涂布平板，以达到分离纯化培养的目的。下列叙述错误的是(　　) A.取样土壤须在无菌条件下，用蒸馏水稀释 B.为确定所用的固体培养基是否灭菌严格，应选择未接种的牛肉膏蛋白胨培养基进行空白培养 C.摇床上振荡培养的目的是保证纤维素分解菌所需要的有氧环境及提高营养物质的利用率 D.在所用的固体培养基中添加刚果红，若存在纤维素分解菌，则其菌落周围会呈现红色的透明圈 17.污水中一般都会含有亚硝酸盐，科研人员从污水中分离了亚硝酸盐降解菌，该微生物能对污水中的亚硝酸盐进行有效的去除。从水体取样后置于含亚硝酸盐培养基中进行富集培养，取富集培养6代后的菌液依次等比稀释。稀释系列菌液浓度为10－4、10－5、10－6、10－7、10－8，分别取0.1 mL培养液涂平板，37 ℃倒置培养24 h，观察菌落形态并进行相关检测、纯化和保藏。下列说法错误的是(　　) A.该富集培养基是以亚硝酸盐作为唯一氮源的培养基 B.菌液加入装有新鲜富集培养基中反复培养6代的目的是淘汰不能利用亚硝酸盐的微生物并增加亚硝酸盐降解菌的数量 C.若稀释涂布平板上生长出不同形态的亚硝酸盐降解菌，可再进行平板划线检测、纯化 D.如果研究纯化后的降解菌的生长曲线，可取该菌落进行液体培养并用甲紫溶液染色后进行活菌计数 18.某生物活动小组为探究当地农田土壤中分解尿素的细菌的数量，进行了随机取样、系列梯度稀释、涂布平板、培养、计数等步骤，实验操作过程如下： 请分析并回答下列问题： (1)该实验中含有琼脂的培养基从物理性质来说，属于________培养基，培养基中只选择了________作为唯一氮源。 (2)分解尿素的细菌能产生________酶，将尿素分解为____________________________________________________________________。 (3)在采用稀释涂布平板法对微生物进行计数时，需要进行梯度稀释的原因是____________________________________________________________________。 (4)实验结果：6号试管涂布的三个平板的菌落数为550、501、688，7号试管涂布的三个平板的菌落数为58、73、97，8号试管涂布的三个平板的菌落数为8、15、28。该10 g土壤样品中含有分解尿素的细菌的估算数目是_______________________________________________________________个。 19.自生固氮菌是土壤中能独立固定空气中N2的细菌，将玉米种子用自生固氮菌拌种后播种，可显著提高产量并降低化肥的使用量。科研人员进行了土壤中自生固氮菌的分离和固氮能力测定的研究，部分实验流程如下图。回答下列问题： (1)步骤①土样应取自当地表层土壤的原因是_____________________________； 步骤②需充分振荡的主要目的是______________________________________。 (2)下表为两种培养基的配方，步骤④应选其中的________培养基，原因是___________________________________________________________________。 培养基类型 培养基组分 Ashby 培养基 甘露醇(C6H14O6)、KH2PO4、MgSO4·7H2O、NaCl、K2SO4、CaCO3、蒸馏水、琼脂 LB培养基 蛋白胨、酵母提取物、NaCl、蒸馏水、琼脂 (3)步骤④所用的接种工具是________，若在④的平板上统计的菌落的平均数量为126个，则每克土壤中含有的固氮菌为________个。 (4)将纯化的固氮菌置于完全培养液中扩大培养48小时，经离心后收集下层细胞并转移至特定培养基中进行固氮能力的测定，筛选出固氮能力最强的菌种CM12，为进一步鉴定其固氮能力，科研人员选用发芽一致的玉米种子进行3组盆栽实验，30天后测定土壤微生物有机氮含量，结果如图。 注：CK：对照处理组；N：尿素处理组(每盆土壤中50 mL有氮全营养液：成分为在1 000 mL无氮植物营养液中加入0.12 g尿素)；CM12：自生固氮菌CM12处理组(每盆土壤浇50 mL接种自生固氮菌的无氮植物营养液)。 ①对照组(CK)的处理为_____________________________________________。 ②实验结果表明：施用尿素处理和接种固氮菌CM12处理均能显著增加土壤微生物有机氮含量。与尿素处理组相比，CM12处理组土壤微生物有机氮含量增加了约________%(保留1位小数)。 ③自生固氮菌较共生固氮菌(如根瘤菌)的应用范围更广，原因是__________________________________________________________________ __________________________________________________________________。 20.植物秸秆中的纤维素可被某些微生物分解。分解秸秆中纤维素的微生物能分泌纤维素酶，该酶是由3种组分组成的复合酶，其中的葡萄糖苷酶可将纤维二糖分解成葡萄糖。回答下列问题： (1)微生物生长繁殖所需的主要营养物质有碳源、水、________四类，为从富含纤维素的土壤中分离获得纤维素分解菌的单菌落，某同学设计了甲、乙两种培养基(成分见下表)： 酵母膏 无机盐 淀粉 纤维素粉 琼脂 刚果红溶液 水 培养基甲 ＋ ＋ ＋ ＋ － ＋ ＋ 培养基乙 ＋ ＋ ＋ － ＋ ＋ ＋ 注：“＋”表示有，“－”表示无。 (2)据表判断，培养基甲________(填“能”或“不能”)用于分离和鉴别纤维素分解菌，原因是______________________________________________________。 (3)据表判断，培养基乙________(填“能”或“不能”)用于分离和鉴别纤维素分解菌，原因是___________________________________________________。 (4)在含纤维素的培养基中加入刚果红(CR)时，CR可与纤维素形成________色复合物。用含有CR的该种培养基培养纤维素分解菌时，培养基上会出现以该菌的菌落为中心的________。 (5)纯化菌株时，通常使用的划线工具是________。划线的某个平板培养后，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌，第二划线区域的第一条线上无菌落，其他划线上有菌落。造成划线无菌落可能的操作失误有________________________________________________________________。 1．某研究小组设计了一个利用作物秸秆生产燃料乙醇的小型实验。其主要步骤是：先将粉碎的作物秸秆堆放在底部有小孔的托盘中，喷水浸润、接种菌T，培养一段时间后，再用清水淋洗秸秆堆（清水淋洗时菌T不会流失），在装有淋洗液的瓶中接种酵母菌，进行乙醇发酵（酒精发酵）。实验流程如图所示。下列选项不正确的是（　　） A．菌T可能产生分解纤维素的酶，能够高效催化纤维素分解 B．淋洗液中还需要加入氮源等营养成分，氮源的主要作用是合成一些氨基酸、核苷酸等含氮物质 C．可采用高压蒸汽灭菌法对培养基进行灭菌，在使用该方法时需要注意必须将冷空气充分排除再开始加压 D．将酵母菌接种到灭菌后的培养基中，拧紧瓶盖，置于适宜温度下培养、发酵。发酵过程中，要始终保持密封状态 2.利用杨木生产燃料乙醇的基本流程主要包括原料粉碎、提高纤维素浓度的预处理、释放单糖的酶解糖化、产生乙醇的微生物发酵、乙醇脱水的蒸馏工艺等步骤（预处理过程所需的果胶酶常来自于黑曲霉等微生物）。下图为发酵阶段菌种接种量对发酵结果的影响。下列说法正确的是（    ） A．培养黑曲霉时一般需将培养基调至酸性，果胶酶是黑曲霉分泌的一种单细胞蛋白 B．在伊红—亚甲蓝培养基上可筛选出高产纤维素酶的菌株用于酶解糖化过程 C．接种的菌种为酵母菌，当接种量为12%左右时，发酵后的酒精含量与残糖含量相等 D．接种量超过15%时酒精产量反而有所降低的原因可能是菌种生长消耗大量的糖分 （不定项）3．鲁菜是中国八大菜系之首，十分讲究配料和调料的搭配，烹饪中常使用酱油、腐乳、味精、白酒、醋和泡菜进行调味，下列说法错误的是（    ） A．白酒、味精和醋的发酵生产所需要的微生物均为真核生物 B．酱油的发酵生产经过蛋白质分解为小分子肽和氨基酸 C．腐乳发酵过程中起主要作用的微生物是黑曲霉 D．泡菜发酵后期，尽管乳酸菌占优势，但仍有产气菌繁殖，需开盖放气 【答案】ACD 【解析】白酒酿造使用的菌种是酵母菌，为真核生物；生产味精用的菌种是谷氨酸棒状杆菌，为原核生物；酿醋使用的菌种是醋酸菌，为原核生物，A错误；酿造酱油以大豆为主要原料，利用产生蛋白酶的霉菌（如黑曲霉），将原料中的蛋白质水解成小分子的肽和氨基酸，然后经淋洗、调制成酱油产品，B正确；腐乳发酵过程中起主要作用的微生物是毛霉，C错误；乳酸菌属于厌氧菌，开盖放气会影响乳酸菌发酵，因此不能开盖放气，D错误。 4．原浆苹果醋的简要工艺流程为：苹果采摘→挑选清洗→破碎榨汁→酵母发酵→醋酸发酵→陈酿2年左右。下列叙述正确的是（    ） A．酵母发酵结束后，改变通气条件即可进行醋酸发酵 B．工艺流程中的“酵母发酵”发生在苹果细胞的细胞质基质中 C．酿醋过程中发酵液的pH逐渐降低，与酿酒制作过程中相反 D．醋酸发酵阶段中产生的气泡量少于酒精发酵阶段 5．从传统发酵技术到发酵工程，经历了漫长的过程。下列说法错误的是（    ） A．传统酿酒过程中需要将温度控制在18~30℃之间 B．酱油等传统发酵以混合菌种的液体发酵及半固体发酵为主 C．发酵工程生产的微生物农药，是生物防治的重要手段 D．利用发酵工程生产的根瘤菌肥作为微生物肥料可以促进植物的生长 6．苹果酒口感甘醇，深受广大消费者喜爱。选用新鲜、成熟、无病虫害的苹果作为原料，进行清洗、去皮并榨汁。将苹果汁加入适量的酵母菌和白砂糖，充分混合后装入发酵桶中，用气密塞封好，放置在适宜的温度下进行发酵，发酵过程中可摇动一次，一段时间后，苹果酒便酿制成功。结合所给材料，下列叙述正确的是（　　） A．酵母菌利用的氮源、无机盐均来自苹果汁 B．过度清洗和去皮将使发酵无法进行 C．“在适宜的温度下进行发酵”的温度为30~35℃ D．发酵过程中摇动一次是为了增加苹果汁中的溶解氧 7．稀释涂布平板法和稀释倒平板法是分离微生物的两种方法。稀释倒平板法是指将稀释的菌液和琼脂混合，然后将其倒入无菌培养皿中进行培养。下列说法正确的是（    ） A．培养过程中所用的培养基和培养皿均可采用湿热灭菌法 B．两种方法均可通过统计菌落数实现对活菌的准确计数 C．稀释倒平板法对好氧菌、热敏感菌的分离效果优于稀释涂布平板法 D．为了防止培养基温度过高杀死微生物，应将琼脂冷却至室温后再倒平板 8.稻瘟菌引起的水稻稻瘟病是危害最为严重的真菌病害之一。土壤中某些微生物能合成并分泌几丁质酶，能抑制稻瘟菌的生长，可用于稻瘟病的防治。科研人员试图从土壤中筛选出能高效降解几丁质的菌株，通过微生物培养获得几丁质酶。下列说法错误的是（    ） A．筛选土壤中目的微生物时需用以几丁质为唯一碳源的培养基 B．纯化培养时，可选择稀释涂布平板法或平板划线法接种 C．在以几丁质为唯一碳源的培养基上生长的菌落均能分泌几丁质酶 D．可依据单菌落周围“水解圈直径/菌落直径”的值来筛选目的菌株 9.烟草的多糖含量偏高是造成烟叶原料品质不高的重要因素，微生物在烟叶醇化阶段可有效降低烟草的多糖含量。为提高烟叶质量，科研人员筛选出S1～S5微生物菌株，并测定其相关酶活力，结果如图所示。下列说法正确的是（　　）    A．筛选获得S1～S5微生物菌株时，应以淀粉为唯一碳源 B．用平板划线法分离单菌落前需对培养液进行稀释 C．用S1单菌落培养获得的纯培养物对烟叶进行醇化效果最好 D．烟叶醇化发酵应在低温下进行，以抑制杂菌繁殖 10.细胞摇摆式间歇浸没生物反应器是通过摆动架的倾斜摆动，使培养液周期性间歇浸没组培苗，实现组培苗的快速生长。下列叙述正确的是（    ） A．获得组培苗的培养基含有水、无机盐、蔗糖、琼脂和激素等多种营养物质 B．间歇摆动提高培养液溶氧量，有利于组培苗进行有氧呼吸 C．获得组培苗的步骤：外植体→脱分化形成胚状体→再分化形成试管苗 D．经过间歇浸没培养获得的植株需要消毒后炼苗再移栽到经灭菌处理的土壤中 11.为从泡菜汁中分离出乳酸菌高产菌株，甲、乙两同学分别采用平板划线法和稀释涂布平板法获取单菌落。已知在培养基中添加碳酸钙可使培养基变浑浊，而乳酸等酸性物质可溶解培养基中的碳酸钙形成透明圈。下列说法错误的是（    ） A．利用泡菜汁进行平板划线操作前无需进行稀释 B．涂布用的菌浓度应控制在30~300个/mL C．接种后需将平板放置在无氧条件下培养 D．周围透明圈最大的菌株，产酸能力不一定最强 （不定项）12.白地霉侵染是导致柑橘酸腐病的主要原因，实验证明桔梅奇酵母对白地霉具有生物防治能力。已知铁是真菌生长的必需元素，是胞内重要酶活性中心的组成部分。普切明酸是桔梅奇酵母产生的一种水溶性铁螯合剂，能快速在培养基中扩散并与其中的Fe3+形成稳定红色复合物。研究配制的含有不同浓度FeCl3的培养基如下表所示。实验结果为桔梅奇酵母菌落周围出现红色抑菌圈，随FeCl3浓度增大，抑菌圈红色加深但变窄，如下图所示。相关叙述正确的是（    ） 成分 MgSO4 NaH2PO4 蛋白胨 FeCl3溶液 水 琼脂 用量 5g 7g 15g 500mL 7g 20g A．实验中使用的培养基pH呈弱碱性，其中琼脂不是营养物质 B．白地霉采用了平板划线法，桔梅奇酵母采用了涂布平板法 C．白地霉不能利用与普切明酸结合后的铁是出现红色抑菌圈的原因 D．补足Fe3+可以使桔梅奇酵母对白地霉的抑制效果逐渐减弱 （不定项）13.土壤中95%以上的磷为植物很难利用的无效磷。解磷菌能够将磷矿粉等无效磷转化为植物易利用的速效磷。为研究解磷菌的解磷机理，科研人员将磷矿粉制成培养液，培养从土壤中分离出的2种解磷菌（M-3-01、B3-5-6），测定培养液的上清液pH及其中的速效磷含量，结果如图，下列叙述正确的是（　　）      A．由图可知，168h以内M-3-01解磷能力较强 B．B3-5-6转化无效磷的能力与培养溶液pH显著相关 C．据图推测B3-5-6可能借助分泌酸性物质溶解磷矿粉 D．据图推测M-3-01不可以利用速效磷 （不定项）14.某种除草剂（一种含氮有机物，在水中溶解度低，含一定量该除草剂的培养基不透明）在土壤中不易降解，长期使用会污染土壤。为修复被该除草剂污染的土壤，按下图过程选育能降解该除草剂的细菌。下列叙述正确的是（    ） A．图中培养基在各种成分都溶化后且分装前进行灭菌 B．图中接种方法为平板划线法，该方法可以于细菌计数 C．实验过程中需要将培养皿中培养基调至中性或弱碱性 D．培养基上形成的两种菌落中的细菌所利用的氮源不同 （不定项）15.某研究小组用紫外线照射酵母菌，将其接种到甲培养基上，一段时间后将甲培养基的菌落影印接种（不改变菌落位置）到乙、丙两培养基上，进一步培养得到如图所示结果。下列相关叙述正确的是（    ） A．甲培养基的菌落均匀分布，接种方法应为稀释涂布平板法 B．乙培养基和丙培养基的组成成分相同，均为选择培养基 C．甲中某些菌种可能发生突变，失去了合成某种物质的能力 D．影印接种可以保证甲的菌落数和丙的菌落数一定相等 1．（2025·山东·高考真题）深海淤泥中含有某种能降解纤维素的细菌。探究不同压强下，该细菌在以纤维素或淀粉为唯一碳源的培养基上的生长情况。其他条件相同且适宜，实验处理及结果如表所示。下列说法正确的是（    ） 组别 压强 纤维素 淀粉 菌落 ① 常压 - + - ② 常压 + - - ③ 高压 - + - ④ 高压 + - + 注： “+”表示有；“一”表示无 A．可用平板划线法对该菌计数 B．制备培养基的过程中，应先倒平板再进行高压蒸汽灭菌 C．由②④组可知，在以纤维素为唯一碳源的培养基上，该菌可在常压下生长 D．由③④组可知，高压下该菌不能在以淀粉为唯一碳源的培养基上生长 2.(2024年山东省）在发酵过程中，多个黑曲霉菌体常聚集成团形成菌球体，菌球体大小仅由菌体数量决定。黑曲霉利用糖类发酵产生柠檬酸时需要充足的氧。菌体内铵离子浓度升高时，可解除柠檬酸对其合成途径的反馈抑制。下列说法错误的是（　　） A. 相同菌体密度下，菌球体越大柠檬酸产生速率越慢 B. 发酵中期添加一定量的硫酸铵可提高柠檬酸产量 C. 发酵过程中pH下降可抑制大部分细菌的生长 D. 发酵结束后，将过滤所得的固体物质进行干燥即可获得柠檬酸产品 3.(2024年山东省）酵母菌在合成色氨酸时需要3种酶X、Y和Z，trpX、trpY和trpZ分别为相应酶的编码基因突变的色氨酸依赖型突变体。已知3种酶均不能进出细胞，而色氨酸合成途径的中间产物积累到一定程度时可分泌到胞外。将这3种突变体均匀划线接种到含有少量色氨酸的培养基上，生长情况如图。据图分析，3种酶在该合成途径中的作用顺序为（　　） A. X→Y→Z B. Z→Y→X C. Y→X→Z D. Z→X→Y （不定项）5．（2025·山东·高考真题）酿造某大曲白酒的过程中，微生物的主要来源有大曲和窖泥。大曲主要提供白酒酿造过程中糖化所需的微生物，制曲过程需经堆积培养，培养时温度可达60℃左右；将大曲和酿酒原料混合，初步发酵后放入窖池；窖池发酵是白酒酿造过程中微生物发酵的最后阶段。下列说法正确的是（    ） A．堆积培养过程中的高温有利于筛选酿酒酵母 B．大曲中存在能分泌淀粉酶的微生物 C．窖池发酵过程中，酵母菌以无氧呼吸为主 D．窖池密封不严使酒变酸是因为乳酸含量增加 5.（2023山东高考） 以下是以泡菜坛为容器制作泡菜时的4个处理：①沸盐水冷却后再倒入坛中；②盐水需要浸没全部菜料；③盖好坛盖后，向坛盖边沿的水槽中注满水；④检测泡菜中亚硝酸盐的含量。下列说法正确的是（ ） A. ①主要是为了防止菜料表面的醋酸杆菌被杀死 B. ②的主要目的是用盐水杀死菜料表面的杂菌 C. ③是为了使气体只能从泡菜坛排出而不能进入 D. ④可检测到完整发酵过程中亚硝酸盐含量逐渐降低 6.（2023山东高考） 平板接种常用在微生物培养中。下列说法正确的是（ ） A. 不含氮源的平板不能用于微生物培养 B. 平板涂布时涂布器使用前必须进行消毒 C. 接种后未长出菌落的培养基可以直接丢弃 D. 利用以尿素为唯一氮源的平板能分离出合成脲酶的微生物 （不定项）7.（2023山东高考） 果酒的家庭制作与啤酒的工业化生产相比，共同点有（ ） A. 都利用了酵母菌无氧呼吸产生酒精的原理 B. 都需要一定的有氧环境供发酵菌种繁殖 C. 发酵前都需要对原料进行灭菌 D. 发酵结束后都必须进行消毒以延长保存期 8.（2022山东高考） 青霉菌处在葡萄糖浓度不足的环境中时，会通过分泌青霉素杀死细菌，以保证自身生存所需的能量供应。目前已实现青霉素的工业化生产，关于该生产过程，下列说法错误的是（ ） A. 发酵液中的碳源不宜使用葡萄糖 B 可用深层通气液体发酵技术提高产量 C. 选育出的高产菌株经扩大培养后才可接种到发酵罐中 D. 青霉素具有杀菌作用，因此发酵罐不需严格灭菌 （不定项）9.（2022山东高考） 啤酒的工业化生产中，大麦经发芽、焙烤、碾磨、糖化、蒸煮、发酵、消毒等工序后，最终过滤、调节、分装。下列说法正确的是（ ） A. 用赤霉素处理大麦，可使大麦种子无须发芽就能产生α-淀粉酶 B. 焙烤是为了利用高温杀死大麦种子胚并进行灭菌 C. 糖浆经蒸煮、冷却后需接种酵母菌进行发酵 D. 通过转基因技术可减少啤酒酵母双乙酰的生成，缩短啤酒的发酵周期 10.（2020山东高考） 在实验室中可利用酵母菌发酵的方式制作葡萄酒，下列说法正确的是 A. 葡萄糖在酵母菌细胞的线粒体内被分解 B. 制作葡萄酒时酵母菌先在有氧条件下大量增殖 C. 制作过程中酵母菌始终处于碱性环境 D. 酵母菌的发酵产物不会抑制自身的代谢活动 （不定项）11.（2020山东高考） 生长图形法是一种测定微生物营养需求的简便方法。为探究某嗜热菌所需生长因子的种类，研究小组把该菌的悬浮液与不含任何生长因子但含有其他必需营养物质的培养基混合后倒成平板，然后在平板上划分数区，将甲、乙、丙三种生长因子分别添加到不同区域，培养结果如图所示，下列说法正确的是（　　） A. 倒成平板后直接培养可判断有无污染 B. 倒成平板后需要进行灭菌处理 C. 图示结果表明该菌需要生长因子乙或丙 D. 生长图形法还可用于某些菌种的筛选 12.（2021山东高考） 葡萄酒的制作离不开酵母菌。下列说法错误的是（ ） A. 无氧条件下酵母菌能存活但不能大量繁殖 B. 自然发酵制作葡萄酒时起主要作用的菌是野生型酵母菌 C. 葡萄酒的颜色是葡萄皮中的色素进入发酵液形成的 D. 制作过程中随着发酵的进行发酵液中糖含量增加 13.（2021山东高考） 解脂菌能利用分泌的脂肪酶将脂肪分解成甘油和脂肪酸并吸收利用。脂肪酸会使醇溶青琼脂平板变为深蓝色。将不能直接吸收脂肪的甲，乙两种菌分别等量接种在醇溶青琼脂平板上培养。甲菌菌落周围呈现深蓝色，乙菌菌落周围不变色，下列说法错误的是（ ） A. 甲菌属于解脂菌 B. 实验中所用培养基以脂肪为唯一碳源 C. 可将两种菌分别接种在同一平板的不同区域进行对比 D. 该平板可用来比较解脂菌分泌脂肪酶的能力 14.（2021山东高考） 含硫蛋白质在某些微生物的作用下产生硫化氢导致生活污水发臭。硫化氢可以与硫酸亚铁铵结合形成黑色沉淀。为探究发臭水体中甲、乙菌是否产生硫化氢及两种菌的运动能力，用穿刺接种的方法，分别将两种菌接种在含有硫酸亚铁铵的培养基上进行培养，如图所示。若两种菌繁殖速度相等，下列说法错误的是（ ） A. 乙菌的运动能力比甲菌强 B. 为不影响菌的运动需选用液体培养基 C. 该实验不能比较出两种菌产生硫化氢的量 D. 穿刺接种等接种技术的核心是防止杂菌的污染 15.（2025·四川·高考真题）微塑料由塑料废弃物风化形成，难以降解，会危害生态环境和人体健康。有人分离到X和Y两种微塑料降解菌，将总菌量相同的X、Y、X+Y（X:Y=1:1）分别接种于含有等量微塑料的蛋白胨液体培养基中，培养一段时间后测定微塑料的残留率（残留率=剩余量/添加量×100%），结果如下图。下列叙述正确的是（    ） A．用平板划线法能测定X菌组中的活菌数 B．Y菌组微塑料残留率较高，故菌浓度也高 C．混合菌种对微塑料的降解能力高于单一菌种 D．能在该培养基中生长繁殖的微生物都能降解微塑料 16.（2025·湖南·高考真题）采集果园土壤进行微生物分离或计数。下列叙述正确的是（　　） A．稀释涂布平板法和平板划线法都能用于尿素分解菌的分离和计数 B．完成平板划线后，培养时需增加一个未接种的平板作为对照 C．土壤中分离得到的醋酸菌能在无氧条件下将葡萄糖分离成乙酸 D．用于筛选尿素分解菌的培养基含有蛋白胨、尿素和无机盐等营养物质 17.（2025·黑吉辽蒙卷·高考真题）科研人员通过稀释涂布平板法筛选出高耐受且降解金霉素（C22H23ClN2O8）能力强的菌株，旨在解决金霉素过量使用所导致的环境污染问题。下列叙述错误的是（    ） A．以金霉素为唯一碳源可制备选择培养基 B．逐步提高培养基中金霉素的浓度有助于获得高耐受的菌株 C．配制选择培养基时，需确保pH满足实验要求 D．用接种环将菌液均匀地涂布在培养基表面 学科网（北京）股份有限公司1 学科网（北京）股份有限公司 学科网（北京）股份有限公司 学科网（北京）股份有限公司 $ 第38讲 微生物的培养技术和应用 目录 01 课标达标练 【题型一】微生物的基本培养技术 【题型二】微生物的选择培养和计数 02 能力突破练（新考法+新情景+新思维） 03 高考溯源练（含2025高考真题） 【题型一】微生物的基本培养技术 1.微生物培养过程中，要重视无菌操作，现代生物学实验中的许多方面也要进行无菌操作，防止杂菌污染，请分析下列操作，正确的是(　　) A.煮沸消毒法中100 ℃煮沸5～6 min可以杀死全部微生物的细胞和芽孢、孢子 B.将接种环直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧，可以迅速彻底地灭菌 C.加入培养基中的指示剂和染料不需要灭菌 D.家庭制作葡萄酒时要将容器和葡萄进行灭菌 【答案】　B 【解析】煮沸消毒可以杀死微生物的营养细胞和部分芽孢，而灭菌能杀灭环境中一切微生物，包括孢子和芽孢，A错误；指示剂和染料可能混有微生物，因此加入培养基中的指示剂和染料也需要灭菌，C错误；家庭制作葡萄酒时，要将容器进行灭菌或消毒，但是葡萄不能灭菌，因为发酵用的酵母菌来自葡萄，D错误。 2.(2023·湖南名校联盟)“掌心对掌心，手心压手背，十指交叉摩，手握关节搓，拇指围轴转，指尖掌心揉，手腕别放过。”七步洗手法可以清除手部的污物和微生物，是预防新冠病毒感染的有效措施之一。某生物实验小组设计了“比较洗手前后手上细菌分布情况”的探究活动：各小组成员分别将拇指在甲组培养基上轻轻按一下，然后用肥皂将该手洗干净，再将洗净后的拇指在乙组培养基上轻轻按一下。将这两组培养基放入恒温培养箱中，在适宜温度下培养24小时后，统计两组培养基中菌落数目，请回答下列问题： (1)该实验中用到的培养基中加入了牛肉膏、蛋白胨、NaCl和水，蛋白胨可以为微生物的生长提供________________________________________________ 等营养物质，为了使配制的溶液呈固体状态，还需要加入________。为了防止外来杂菌的入侵，可以将培养基放入盛有适量________的高压蒸汽灭菌锅内灭菌15～30 min。 (2)实验中“将拇指在培养基上轻轻按一下”相当于微生物培养操作中的________，该操作应该在酒精灯火焰附近进行，原因是________________________________________________。 (3)统计甲、乙两组培养皿中的菌落，乙组中菌落数比甲少得多，实验结果说明肥皂洗手不能彻底清除手上的微生物。为避免手上微生物在无菌操作中污染培养基，洗过的手还应进行____________________________________________________ 等方法处理(答出1种即可)。 (4)有同学认为乙中也有菌落产生，是因为培养过程受到杂菌污染，请你在本实验的基础上设计一个简单的方案验证他的猜想是否正确，并预期结果和结论。____________________________________________________________________。 【答案】　(1)氮源和维生素　琼脂　水　 (2)接种　避免周围环境中的微生物污染培养基 (3)酒精棉球擦拭双手、戴消毒手套 (4)再加一个不接种的相同培养基(空白培养基)，与甲、乙在相同条件下培养，若该培养基上没有生长菌落，说明培养过程未被杂菌污染，猜想错误；若该培养基上生长菌落，说明培养过程中被杂菌污染，猜想正确。 3.灭菌、消毒、无菌操作是生物学实验中常见的操作。下列叙述正确的是(　　) A.动、植物细胞DNA的提取必须在无菌条件下进行 B.微生物、动物细胞培养基中需添加一定量的抗生素以防止污染 C.为防止蛋白质变性，不能用湿热灭菌法对牛肉膏蛋白胨培养基进行灭菌 D.可用湿热灭菌法对实验中所使用的微量离心管、细胞培养瓶等进行灭菌 【答案】　D 【解析】动、植物细胞DNA的提取不需要在无菌条件下进行，A错误；动物细胞培养基中需添加一定量的抗生素以防止污染，保证无菌环境，而微生物的培养一般不能加入抗生素，B错误；一般用湿热灭菌法对牛肉膏蛋白胨培养基进行灭菌，以防止杂菌污染，C错误；可用湿热灭菌法对实验中所使用的微量离心管、细胞培养瓶等进行灭菌，以防止杂菌污染，D正确。 4.解脂菌能利用分泌的脂肪酶将脂肪分解成脂肪酸和甘油并吸收利用。脂肪酸会使醇溶青琼脂平板变为深蓝色。将不能直接吸收脂肪的甲、乙两种菌分别等量接种在醇溶青琼脂平板上培养。甲菌菌落周围呈现深蓝色，乙菌菌落周围不变色。下列说法错误的是(　　) A.甲菌属于解脂菌 B.实验中所用培养基以脂肪为唯一碳源 C.可将两种菌分别接种在同一平板的不同区域进行对比 D.该平板可用来比较解脂菌分泌脂肪酶的能力 【答案】　B 【解析】根据题意，甲、乙两种菌分别接种在醇溶青琼脂平板上，二者都能生存，甲周围呈现深蓝色，说明培养基的脂肪被分解为脂肪酸，使平板呈现深蓝色，脂肪的分解需要脂肪酶的催化，说明甲能够分泌脂肪酶，属于解脂菌，A正确；乙周围不变色，说明乙不能分泌脂肪酶分解脂肪，没有脂肪酸的产生，不能利用脂肪，但由于乙能在该培养基上生存，说明该培养基中除了脂肪作为碳源外，还存在别的碳源，否则乙不能在该培养基上生存，B错误；为了便于比较结果，可以将两种菌接种到同一平板的不同区域，C正确；菌落周围深蓝色的直径越大，说明解脂菌分泌脂肪酶的能力越强，D正确。 5.青霉菌处在葡萄糖浓度不足的环境中时，会通过分泌青霉素杀死细菌，以保证自身生存所需的能量供应。目前已实现青霉素的工业化生产，关于该生产过程，下列说法错误的是(　　) A.发酵液中的碳源不宜使用葡萄糖 B.可用深层通气液体发酵技术提高产量 C.选育出的高产菌株经扩大培养后才可接种到发酵罐中 D.青霉素具有杀菌作用，因此发酵罐不需严格灭菌 【答案】　D 【解析】青霉菌处于葡萄糖浓度不足的环境中会通过分泌青霉素杀死细菌；发酵液中的碳源不宜使用葡萄糖，A正确；青霉菌的代谢类型为异养需氧型，可用深层通气液体发酵技术提高产量，B正确；选育出的高产青霉素菌株经扩大培养纯化后，才可接种到发酵罐中进行工业化生产，C正确；为了防止细菌、其他真菌等微生物的污染，获得纯净的青霉素，发酵罐仍需严格灭菌，D错误。 6.某同学从被石油污染的土壤中分离得到A和B两株可以降解石油的细菌，在此基础上采用平板培养法比较二者降解石油的能力，并分析两个菌株的其他生理功能。 实验所用的培养基成分如下： 培养基Ⅰ：K2HPO4、MgSO4、NH4NO3、石油。 培养基Ⅱ：K2HPO4、MgSO4、石油。 操作步骤： ①将A、B菌株分别接种在两瓶液体培养基Ⅰ中培养，得到A、B菌液； ②液体培养基Ⅰ、Ⅱ中添加琼脂，分别制成平板Ⅰ、Ⅱ，并按图中所示在平板上打甲、乙两孔。 回答下列问题： (1)实验所用培养基中作为碳源的成分是__________。培养基中NH4NO3的作用是为菌株的生长提供氮源，氮源在菌体内可以参与合成__________(答出2种即可)等生物大分子。 (2)步骤①中，在资源和空间不受限制的阶段，若最初接种N0个A细菌，繁殖n代后细菌的数量是__________。 (3)为了比较A、B降解石油的能力，某同学利用步骤②所得到的平板Ⅰ、Ⅱ进行实验，结果如表所示(“＋”表示有透明圈，“＋”越多表示透明圈越大，“－”表示无透明圈)，推测该同学的实验思路是_________________________________________________________________。 (4)现有一贫氮且被石油污染的土壤，根据上表所示实验结果，治理石油污染应选用的菌株是__________，理由是_____________________________________。 【答案】　(1)石油　DNA、RNA、蛋白质 (2)N0·2n　(3)在无菌条件下，将等量等浓度的A菌液和B菌液分别接种到平板Ⅰ的甲和乙两孔处，平板Ⅱ也进行同样的操作，在相同且适宜条件下培养一段时间，比较两个平板的两孔处的透明圈大小并作记录，根据透明圈大降解能力强，透明圈小降解能力弱，进而比较A、B降解石油的能力　(4)A　A菌株降解石油的能力高于B菌株，并且在没有添加氮源的培养基中也能生长 【解析】(1)培养基的成分有碳源、氮源、无机盐和水等，从组成培养基的物质所含化学元素可知，作为碳源的成分是石油。生物大分子DNA、RNA、蛋白质都含有N元素，故氮源在菌体内可以参与合成这些物质。 (2)由题意“资源和空间不受限制”可知，细菌数量的增长呈“J”形曲线，细菌每繁殖一代就是上一代的2倍，根据公式Nt＝N0·λt，λ＝2，繁殖n代后细菌的数量是N0·2n。 (3)分析表格数据可知，实验的结果是：在平板Ⅰ上，A菌株降解石油的能力高于B菌株；在平板Ⅱ上，A菌株仍然能降解石油，而B菌株不能降解，根据实验的单一变量和对照原则，推测该同学的思路是：在无菌条件下，将等量等浓度的A菌液和B菌液分别接种到平板Ⅰ的甲和乙两孔处，平板Ⅱ也进行同样的操作，在相同且适宜条件下培养一段时间，比较两个平板的两孔处的透明圈大小并作记录，根据透明圈大降解能力强，透明圈小降解能力弱，进而比较A、B降解石油的能力。 (4)由表格数据可知，在平板Ⅱ(无氮源的培养基)上，A菌株仍然能降解石油，而B菌株不能降解，所以要治理贫氮且被石油污染的土壤，应该选用A菌株，因为A菌株降解石油的能力高于B菌株，并且在没有添加氮源的培养基中也能生长。 7.培养基是人们按照培养对象对营养物质的不同需求配制的营养基质。下列有关培养基的配制和使用的叙述，正确的是(　　) A.微生物培养基的组成成分必需含有碳源、氮源、水和无机盐 B.用动、植物的体细胞进行细胞培养，均可用固体培养基 C.接种前要了解固体培养基是否被污染可接种蒸馏水来培养检测 D.使用过的微生物培养基应进行高压蒸汽灭菌处理后再丢弃 【答案】　D 【解析】微生物培养基不一定都含有碳源、氮源，如培养自养型微生物的培养基中不需加入碳源，分离自生固氮菌的培养基中不需加入氮源，A错误；动物的体细胞进行细胞培养用液体培养基，而植物的体细胞进行细胞培养用固体培养基，B错误；检测培养基是否被污染的方法是：将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生，C错误；使用过的微生物培养基应进行高压蒸汽灭菌处理后再丢弃，以防止微生物污染环境和感染操作者，D正确。 8.为探究校内植物园土壤中的细菌种类，某兴趣小组采集园内土壤样本并开展相关实验。下列有关叙述错误的是(　　) A.采样时应随机采集植物园中多个不同地点的土壤样本 B.培养细菌时，可选有牛肉膏蛋白胨固体培养基 C.土壤溶液稀释倍数越低，越容易得到单菌落 D.鉴定细菌种类时，除形态学鉴定外，还可借助生物化学的方法 【答案】　C 【解析】采集植物园中土壤样本的原则之一是要随机采样，A正确；牛肉膏蛋白胨固体培养基中含有细菌生长所需的碳源、氮源、水、无机盐等，可用于细菌的培养，B正确；土壤溶液稀释倍数足够高时，才能将聚集的细菌分散开，有助于在培养基表面形成单菌落，C错误；不同种类细菌的理化特性一般不同，鉴定细菌种类时，除根据菌落特征进行形态学鉴定外，还可以借助生物化学的方法进行鉴定，D正确。 9.在生产、生活和科研实践中，经常通过消毒和灭菌来避免杂菌的污染。下列相关叙述，错误的是(　　) A.玻璃和金属材质的实验器具可放入干热灭菌箱中干热灭菌 B.接种前后的接种环都要在酒精灯的火焰上进行灼烧消毒 C.没有将高压蒸汽灭菌锅内的冷空气排尽将影响培养基的灭菌效果 D.喷洒石炭酸同时配合紫外线照射可提高对接种室的消毒效果 【答案】　B 【解析】在实验室中，玻璃和金属材质的实验器具可以放入干热灭菌箱中进行干热灭菌，一些金属材质的实验器具也可以灼烧灭菌，A正确；为了防止杂菌污染和感染操作者，每次接种前后，接种环都要进行灼烧灭菌，B错误；若未将高压蒸汽灭菌锅内的冷空气排尽，会因达不到规定温度而影响灭菌的效果，C正确；紫外线能破坏DNA结构，密闭空间常采用紫外线照射消毒，喷洒石炭酸同时配合紫外线照射可提高对接种室的消毒效果，D正确。 【题型二】微生物的选择培养和计数 10.下图为实验室培养和纯化大肠杆菌过程中的部分操作步骤，下列说法正确的是(　　) A.步骤①后需将培养基灭菌并调节pH B.步骤①②③操作时需要在酒精灯火焰附近进行 C.步骤③到④的过程中，接种环共灼烧处理了5次 D.图中步骤①结束后需倒置平板，④结束后不需要 【答案】　B 【解析】步骤①表示倒平板，培养基需要先调节pH后灭菌，冷却后倒平板，A错误；接种环在每次接种前和接种结束后都要通过灼烧来灭菌，所以完成步骤③到步骤④的过程中5次划线操作前都要灼烧灭菌，接种结束后还需灼烧灭菌1次，防止造成污染，由此可见，步骤③到步骤④的过程中共需灼烧接种环6次，C错误；步骤④操作结束后需在培养皿的底上做好标记并倒置后放入培养箱中进行培养，D错误。 11.丁草胺是一种有机除草剂，主要用于水稻田杂草的防除，具有潜在的致畸变和致突变性。而在水稻种植过程中农田有一段很长的淹水期，淹水会导致水稻田深层土壤处于厌氧状态。因此研究丁草胺厌氧降解菌对于水稻田土壤中丁草胺的降解具有重要意义。研究人员要对丁草胺厌氧降解菌进行分离、鉴定和扩大培养(如图)，请回答下列问题： (1)你认为研究小组应该在哪里取样？_________________________________。 (2)配制选择培养基时，研究人员先加入了K2HPO4、KH2PO4、FeSO4、MgCl2、NH4Cl、CaCl2、NaCl、微量元素复合液、维生素复合液等，他们还需要加入一定量的________。对培养基灭菌通常采用________法。灭菌结束后，应趁热将适量培养基分装于锥形瓶中，充入氮气，塞住胶塞并用铝帽固定，这样操作的目的是 ____________________________________________________________________。 (3)步骤③中，应将平板放入厌氧罐中，置于培养箱中恒温培养，对长出的菌落进行初步鉴定。菌落是初步区分微生物类型的重要特征，这些特征包括__________________________________________________(至少答出2点)等。 (4)步骤④中，从第二次划线操作起，每次总是要从上一次划线的末端开始划线，其原因是_________________________________________________________。 【答案】　(1)频繁使用丁草胺的水稻田深层土壤 (2)丁草胺　高压蒸汽灭菌　创造无氧的培养环境 (3)菌落的形状、大小、颜色、隆起程度、边缘特征　(4)划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随划线次数的增加逐步减少，最终得到由单个细菌繁殖而来的菌落 【解析】(1)施用过丁草胺的稻田中能够分解丁草胺的菌株数量多，易获得目的菌株，同时由于目的菌株是厌氧型微生物，故获取分离目的菌的土壤样品应从频繁使用丁草胺的水稻田深层土壤获取。 (2)配制培养基时除微生物生长所必需的营养物质外，还需加入一定量的丁草胺。培养基灭菌一般采用高压蒸汽灭菌法。灭菌后的培养基趁热充入氮气的目的是去除培养基中的氧气，创造无氧环境。 (3)菌落的特征包括菌落的形状、大小、隆起程度、颜色、边缘特征、光泽等。 (4)划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随划线次数的增加逐步减少，最终得到由单个细菌繁殖而来的菌落。 12.(不定项)北京冬奥会食堂让各国运动健儿爱上中国味道，其餐余垃圾在垃圾集中点采用生化＋雾化＋膜过滤技术处理后，可以达到无二次污染的标准。为筛选对抗生素有抗性、高效降解淀粉的微生物，提高“生化”处理的效率，研究人员将餐余垃圾机械化处理后加入装有无菌水的锥形瓶中制备餐余垃圾浸出液，然后进行如图所示操作，下列说法正确的是(　　) A.餐余垃圾浸出液在接种前通常需要进行高压蒸汽灭菌处理 B.可用稀释涂布平板法将餐余垃圾浸出液接种在X培养基上 C.X培养基含有淀粉和抗生素，Y培养基是不含琼脂的液体培养基 D.图中降解淀粉最高效的微生物是⑤，可根据菌落特征初步判断微生物类型 【答案】　BCD 【解析】餐余垃圾浸出液中含有要筛选出的目的微生物，在接种前进行高压蒸汽灭菌处理，会将所有的微生物都处理掉，包括我们想要的目的微生物，A错误；微生物常见的接种方法有2种：平板划线法和稀释涂布平板法，两种方法都能得到单个菌落，后者还能计数统计微生物的数目。所以可用稀释涂布平板法接种，B正确；目的菌是对抗生素有抗性、能高效降解淀粉的微生物，则X培养基应含有淀粉和抗生素；Y培养基应是液体培养基，用来增加菌种的数量，不应含凝固剂琼脂，C正确；淀粉遇碘变蓝，加入碘液后能分解淀粉的菌落周围会出现清晰的透明圈，所以降解能力越强，透明圈越大，图中降解淀粉最高效的是⑤，D正确。 13.某纺织厂为使牛仔布呈现“穿旧”效果，准备用纤维素分解菌处理代替传统的浮石擦洗。工作人员拟从土壤样品中分离该类微生物，并进行扩大培养，相关工艺流程如下图。请回答下列问题： (1)进行土样中细菌数量的测定，常用稀释涂布平板法(选用104～106倍的稀释液)统计样品中活菌的数量。当第一次用稀释涂布平板法测定土样中纤维素分解菌的数量时，所进行实验的一般基本思路是___________________________________。 (2)在系列稀释操作前，选择培养的一般目的是___________________________。 (3)涂布接种时，转动培养皿的目的是_________________________________。 (4)在鉴别培养基上，菌落周围的透明圈大小可能与纤维素酶的________有关。 【答案】　(1)将稀释范围适当放宽的稀释液，采用稀释涂布平板法分别接种到鉴别培养基(用刚果红染色)，以保证从中选择出菌落数在30～300的平板进行计数　(2)以确保能够从样品中分离得到所需要的微生物，增加纤维素分解菌的数量　(3)使菌液分布均匀　(4)量和活性 【解析】(1)第一次用稀释涂布平板法测定土样中纤维素分解菌的数量时，需要将稀释范围适当放宽的稀释液，采用稀释涂布平板法分别接种到鉴别培养基(用刚果红染色)，以保证从中选择出菌落数在30～300的平板进行计数。(2)选择培养的目的是确保能够从样品中分离得到所需要的纤维素分解菌，增加纤维素分解菌的数量。(3)涂布接种时，转动培养皿的目的是使菌液分布均匀。(4)该实验中的透明圈的大小与纤维素酶的量和活性有关。 14.研究深海独特的生态环境对于开发海洋资源具有重要意义。近期在“科学号”考察船对中国南海科考中，中国科学家采集了某海域1 146米深海冷泉附近沉积物样品，分离、鉴定得到新的微生物菌株并进一步研究了其生物学特性。 回答下列问题： (1)研究者先制备富集培养基，然后采用________________法灭菌，冷却后再接入沉积物样品，28 ℃厌氧培养一段时间后，获得了含拟杆菌的混合培养物，为了获得纯种培养，除了稀释涂布平板法，还可采用________法。据图分析，拟杆菌新菌株在以________为碳源时生长状况最好。 (2)研究发现，将采集的样品置于各种培养基中培养，仍有很多微生物不能被分离筛选出来，推测其原因可能是___________________________________________(答一点即可)。 (3)藻类细胞解体后的难降解多糖物质，通常会聚集形成碎屑沉降到深海底部。从生态系统组成成分的角度考虑，拟杆菌对深海生态系统碳循环的作用可能是__________________________________________________________________。 (4)深海冷泉环境特殊，推测此环境下生存的拟杆菌所分泌的各种多糖降解酶，除具有酶的一般共性外，其特性可能还有________。 【答案】　(1)高压蒸汽灭菌　平板划线　纤维素 (2)某些微生物只有利用深海冷泉中的特有物质才能生存(或需要在深海冷泉的特定环境中才能存活) (3)拟杆菌作为分解者，将沉降到深海底部的难降解多糖物质分解为无机物，归还到无机环境中，有利于碳循环的顺利进行　 (4)耐低温 【解析】(1)培养基通常采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌。可以采用稀释涂布平板法或平板划线法，将单个微生物分散在固体培养基上，经过培养得到单菌落，从而获得纯种培养。分析题图可知，在以纤维素为碳源的培养基中，细胞数量最多，可推知拟杆菌新菌株在以纤维素为碳源时生长状况最好。 (2)深海冷泉中可能存在某些微生物，只有利用冷泉中的特有物质才能生存(或需要在深海冷泉的特定环境中才能存活)，故将采集的样品置于各种培养基中培养，仍可能有很多微生物不能被分离筛选出来。 (3)拟杆菌为异养生物，作为该生态系统的分解者，能将沉降到深海底部的难降解多糖物质分解为无机物，归还到无机环境中，有利于碳循环的顺利进行。 (4)深海冷泉温度较低，故生活在其中的拟杆菌所分泌的各种多糖降解酶，应具有耐低温的特性，才能高效降解多糖，保证拟杆菌的正常生命活动所需。 15.餐厨垃圾中具有高效降解能力的微生物，可用于餐厨垃圾高效无害化处理。科研人员取一定量的餐厨样品，制备不同浓度的样品稀释液，并将样品接种于利用蛋白胨、牛肉膏、氯化钠、琼脂配制的培养基表面进行培养并分离。下列分析正确的是(　　) A.牛肉膏主要为微生物提供氮源 B.接种时需用力将菌种接种到培养基内 C.稀释样品获得单个菌落以便判断菌种类型 D.经过培养可筛选出有高效降解能力的微生物 【答案】　C 【解析】牛肉膏主要为微生物提供碳源、磷酸盐和维生素等，A错误；在培养基接种菌种时，应将菌种接入培养基表面，有利于其生长，如果用力接种会划破培养基，从而会影响菌株的生长，不能形成正常的特征形态，影响对菌落形态的观察及特征鉴别，B错误；该培养基为基本培养基，不能选出有高效降解能力的微生物，经过培养、筛选后还需要进行鉴定，才能选出有高效降解能力的微生物，D错误。 (不定项)16.某学习小组从富含纤维素分解菌土壤中获取纤维素分解菌并进行了下列操作：称取土样20 g，加入装有30 mL培养基的摇瓶中并完成稀释，在30 ℃下将摇瓶置于摇床上振荡培养；吸取一定的培养液，转移至另一瓶新鲜的选择培养基中，以同样的方法培养到培养液变浑浊时，吸取0.1 mL培养液进行梯度稀释和涂布平板，以达到分离纯化培养的目的。下列叙述错误的是(　　) A.取样土壤须在无菌条件下，用蒸馏水稀释 B.为确定所用的固体培养基是否灭菌严格，应选择未接种的牛肉膏蛋白胨培养基进行空白培养 C.摇床上振荡培养的目的是保证纤维素分解菌所需要的有氧环境及提高营养物质的利用率 D.在所用的固体培养基中添加刚果红，若存在纤维素分解菌，则其菌落周围会呈现红色的透明圈 【答案】　ABD 【解析】取样土壤须在无菌条件下，用无菌水稀释，这样可以避免杂菌污染，A错误；为检测所用的固体培养基是否灭菌严格，应选择未接种的上述培养基进行空白培养，若无菌落出现，则说明配制的固体培养基合格，B错误；摇床上振荡培养不仅能保证纤维素分解菌所需要的有氧环境，而且还可以使菌体和营养液充分接触，进而提高营养物质的利用率，C正确；在所用的固体培养基中添加刚果红，随着纤维素被分解利用，若存在纤维素分解菌，则其菌落出现透明圈，D错误。 17.污水中一般都会含有亚硝酸盐，科研人员从污水中分离了亚硝酸盐降解菌，该微生物能对污水中的亚硝酸盐进行有效的去除。从水体取样后置于含亚硝酸盐培养基中进行富集培养，取富集培养6代后的菌液依次等比稀释。稀释系列菌液浓度为10－4、10－5、10－6、10－7、10－8，分别取0.1 mL培养液涂平板，37 ℃倒置培养24 h，观察菌落形态并进行相关检测、纯化和保藏。下列说法错误的是(　　) A.该富集培养基是以亚硝酸盐作为唯一氮源的培养基 B.菌液加入装有新鲜富集培养基中反复培养6代的目的是淘汰不能利用亚硝酸盐的微生物并增加亚硝酸盐降解菌的数量 C.若稀释涂布平板上生长出不同形态的亚硝酸盐降解菌，可再进行平板划线检测、纯化 D.如果研究纯化后的降解菌的生长曲线，可取该菌落进行液体培养并用甲紫溶液染色后进行活菌计数 【答案】　D 【解析】该富集培养基是以亚硝酸盐作为唯一氮源的培养基，这样可以使利用亚硝酸盐的细菌大量繁殖，而不能利用亚硝酸盐的细菌不能生长，A正确；菌液加入装有新鲜富集培养基中反复培养6代的目的是使能利用亚硝酸盐的微生物大量繁殖，从而将不能利用亚硝酸盐的微生物淘汰掉，B正确；若稀释涂布平板上生长出不同形态的亚硝酸盐降解菌，说明利用亚硝酸盐的微生物有多种，因此需要再进行平板划线检测、纯化，C正确；进行活菌计数应该用台盼蓝染色，被染色的细胞为死亡细胞，不着色的为活细胞，D错误。 18.某生物活动小组为探究当地农田土壤中分解尿素的细菌的数量，进行了随机取样、系列梯度稀释、涂布平板、培养、计数等步骤，实验操作过程如下： 请分析并回答下列问题： (1)该实验中含有琼脂的培养基从物理性质来说，属于________培养基，培养基中只选择了________作为唯一氮源。 (2)分解尿素的细菌能产生________酶，将尿素分解为____________________________________________________________________。 (3)在采用稀释涂布平板法对微生物进行计数时，需要进行梯度稀释的原因是____________________________________________________________________。 (4)实验结果：6号试管涂布的三个平板的菌落数为550、501、688，7号试管涂布的三个平板的菌落数为58、73、97，8号试管涂布的三个平板的菌落数为8、15、28。该10 g土壤样品中含有分解尿素的细菌的估算数目是_______________________________________________________________个。 【答案】　(1)固体　尿素　(2)脲　NH3和CO2 (3)只有在稀释度足够高时，聚集在一起的微生物才被分散成单个细胞，并形成单个菌落；但稀释度过高时，得到的平板菌落数太少，实验的偶然性太大。进行梯度稀释时，取菌落数为30～300个的平板进行计数，所得的实验结果最准确(合理即可) (4)7.6×1011 【解析】(1)琼脂可作为凝固剂，故从物理性质来说，含琼脂的培养基属于固体培养基。筛选分解尿素的细菌的选择培养基应以尿素为唯一氮源。 (2)分解尿素的细菌产生的脲酶能将尿素分解为NH3和CO2。 (3)在采用稀释涂布平板法对微生物进行计数时，只有在稀释度足够高时，聚集在一起的微生物才被分散成单个细胞，并形成单个菌落；但稀释度过高时，得到的平板菌落数太少，实验的偶然性太大，所以需进行梯度稀释，取菌落数为30～300个的平板进行计数，实验结果最准确。 (4)由于平板计数的适宜值在30～300之间，所以应选择7号试管涂布的平板进行计数，其平均菌落数为(58＋73＋97)/3＝76个，据图可知，10 g土壤样品经梯度稀释至7号试管，稀释度为108倍，而不是107倍，因为在锥形瓶处已经稀释10倍，所以利用公式计算每克土壤样品中的菌落数：(C÷V)×M＝(76÷0.1)×108＝7.6×1010个，但要特别注意，此时求出的是1 g土壤中的微生物数量，所以该10 g土壤样品中含有分解尿素的细菌的数目是7.6×1010×10＝7.6×1011个。 19.自生固氮菌是土壤中能独立固定空气中N2的细菌，将玉米种子用自生固氮菌拌种后播种，可显著提高产量并降低化肥的使用量。科研人员进行了土壤中自生固氮菌的分离和固氮能力测定的研究，部分实验流程如下图。回答下列问题： (1)步骤①土样应取自当地表层土壤的原因是_____________________________； 步骤②需充分振荡的主要目的是______________________________________。 (2)下表为两种培养基的配方，步骤④应选其中的________培养基，原因是___________________________________________________________________。 培养基类型 培养基组分 Ashby 培养基 甘露醇(C6H14O6)、KH2PO4、MgSO4·7H2O、NaCl、K2SO4、CaCO3、蒸馏水、琼脂 LB培养基 蛋白胨、酵母提取物、NaCl、蒸馏水、琼脂 (3)步骤④所用的接种工具是________，若在④的平板上统计的菌落的平均数量为126个，则每克土壤中含有的固氮菌为________个。 (4)将纯化的固氮菌置于完全培养液中扩大培养48小时，经离心后收集下层细胞并转移至特定培养基中进行固氮能力的测定，筛选出固氮能力最强的菌种CM12，为进一步鉴定其固氮能力，科研人员选用发芽一致的玉米种子进行3组盆栽实验，30天后测定土壤微生物有机氮含量，结果如图。 注：CK：对照处理组；N：尿素处理组(每盆土壤中50 mL有氮全营养液：成分为在1 000 mL无氮植物营养液中加入0.12 g尿素)；CM12：自生固氮菌CM12处理组(每盆土壤浇50 mL接种自生固氮菌的无氮植物营养液)。 ①对照组(CK)的处理为_____________________________________________。 ②实验结果表明：施用尿素处理和接种固氮菌CM12处理均能显著增加土壤微生物有机氮含量。与尿素处理组相比，CM12处理组土壤微生物有机氮含量增加了约________%(保留1位小数)。 ③自生固氮菌较共生固氮菌(如根瘤菌)的应用范围更广，原因是__________________________________________________________________ __________________________________________________________________。 【答案】　(1)在富含有机质的土壤表层，有更多的固氮菌生长　使土壤中的微生物充分释放到无菌水中　(2)Ashby　该培养基不含氮源，具有选择作用，自生固氮菌可以利用空气中的氮气作为氮源，LB培养基中的蛋白胨可以提供氮源，不具有选择作用　(3)涂布器　1.26×107　(4)①每盆土壤浇50 mL无氮植物营养液 ②83.3　③自生固氮菌能在土壤中独立固氮，不受宿主的限制 20.植物秸秆中的纤维素可被某些微生物分解。分解秸秆中纤维素的微生物能分泌纤维素酶，该酶是由3种组分组成的复合酶，其中的葡萄糖苷酶可将纤维二糖分解成葡萄糖。回答下列问题： (1)微生物生长繁殖所需的主要营养物质有碳源、水、________四类，为从富含纤维素的土壤中分离获得纤维素分解菌的单菌落，某同学设计了甲、乙两种培养基(成分见下表)： 酵母膏 无机盐 淀粉 纤维素粉 琼脂 刚果红溶液 水 培养基甲 ＋ ＋ ＋ ＋ － ＋ ＋ 培养基乙 ＋ ＋ ＋ － ＋ ＋ ＋ 注：“＋”表示有，“－”表示无。 (2)据表判断，培养基甲________(填“能”或“不能”)用于分离和鉴别纤维素分解菌，原因是______________________________________________________。 (3)据表判断，培养基乙________(填“能”或“不能”)用于分离和鉴别纤维素分解菌，原因是___________________________________________________。 (4)在含纤维素的培养基中加入刚果红(CR)时，CR可与纤维素形成________色复合物。用含有CR的该种培养基培养纤维素分解菌时，培养基上会出现以该菌的菌落为中心的________。 (5)纯化菌株时，通常使用的划线工具是________。划线的某个平板培养后，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌，第二划线区域的第一条线上无菌落，其他划线上有菌落。造成划线无菌落可能的操作失误有________________________________________________________________。 【答案】　(1)氮源和无机盐　(2)不能　纤维素分解菌选择培养基属于液体培养基，纤维素分解菌鉴别培养基属于固体培养基(培养基中没有琼脂)　(3)不能　培养基中没有纤维素粉 (4)红　透明圈　(5)接种环　①接种环灼烧后未冷却；②划线未从第一区域末端开始 【解析】(1)实验室培养微生物需要配制培养基，培养基中一般都含有水、碳源、氮源和无机盐。 (2)分析表格可知，培养基甲的配方中无琼脂，为液体培养基，不能用于分离和鉴别纤维素分解菌，纤维素分解菌鉴别培养基属于固体培养基。 (3)培养基乙没有纤维素粉，因此也不能用于分离和鉴别纤维素分解菌。 (4)在含纤维素的培养基中加入刚果红(CR)时，CR可与纤维素形成红色复合物。用含有CR的该种培养基培养纤维素分解菌时，培养基上会出现以该菌的菌落为中心的透明圈。 (5)接种时常用接种环，平板划线法操作时要求将灼烧后的接种环冷却后再划线，否则会灼伤菌株甚至导致菌株死亡，划线时要从上一次划线的末端开始，这样接种环上才有菌株，因此若第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌，而第二划线区域的第一条线上无菌落，其他划线上有菌落，可能的原因有接种环灼烧后未冷却或划线未从第一区域末端开始。 1．某研究小组设计了一个利用作物秸秆生产燃料乙醇的小型实验。其主要步骤是：先将粉碎的作物秸秆堆放在底部有小孔的托盘中，喷水浸润、接种菌T，培养一段时间后，再用清水淋洗秸秆堆（清水淋洗时菌T不会流失），在装有淋洗液的瓶中接种酵母菌，进行乙醇发酵（酒精发酵）。实验流程如图所示。下列选项不正确的是（　　） A．菌T可能产生分解纤维素的酶，能够高效催化纤维素分解 B．淋洗液中还需要加入氮源等营养成分，氮源的主要作用是合成一些氨基酸、核苷酸等含氮物质 C．可采用高压蒸汽灭菌法对培养基进行灭菌，在使用该方法时需要注意必须将冷空气充分排除再开始加压 D．将酵母菌接种到灭菌后的培养基中，拧紧瓶盖，置于适宜温度下培养、发酵。发酵过程中，要始终保持密封状态 【答案】D 【解析】菌T能够分泌纤维素酶，纤维素酶能将纤维素最终分解为葡萄糖，因此在粉碎的秸秆中接种菌T，培养一段时间后发现菌T能够将秸秆中的纤维素大量分解，A正确；培养基的主要成分：水、碳源、氮源、无机盐，其中氮源主要为合成微生物的细胞结构提供原料（微生物细胞中的含氮物质，如核酸、蛋白质、磷脂），B正确；高压蒸汽灭菌法的注意要把锅内的水加热煮沸，将其中原有的冷空气彻底排除后，将锅密闭，如果高压锅内的空气未排除或未完全排除，则蒸汽不能达到饱和，蒸汽的温度未达到要求的高度，结果导致灭菌的失败，C正确；果酒的制作原理是酵母菌无氧呼吸产生酒精，将酵母菌接种到灭菌后的培养基中进行酒精发酵，酒精发酵需要在无氧的条件下进行，此时拧紧瓶盖的主要目的是制造无氧环境。酵母菌进行无氧呼吸产生酒精和二氧化碳，在发酵过程中密闭，所以需要根据发酵进程适时拧松瓶盖放出二氧化碳，D错误。 2.利用杨木生产燃料乙醇的基本流程主要包括原料粉碎、提高纤维素浓度的预处理、释放单糖的酶解糖化、产生乙醇的微生物发酵、乙醇脱水的蒸馏工艺等步骤（预处理过程所需的果胶酶常来自于黑曲霉等微生物）。下图为发酵阶段菌种接种量对发酵结果的影响。下列说法正确的是（    ） A．培养黑曲霉时一般需将培养基调至酸性，果胶酶是黑曲霉分泌的一种单细胞蛋白 B．在伊红—亚甲蓝培养基上可筛选出高产纤维素酶的菌株用于酶解糖化过程 C．接种的菌种为酵母菌，当接种量为12%左右时，发酵后的酒精含量与残糖含量相等 D．接种量超过15%时酒精产量反而有所降低的原因可能是菌种生长消耗大量的糖分 【答案】D 【解析】培养黑曲霉时一般需将培养基调至酸性，但单细胞蛋白指微生物菌体，果胶酶不属于单细胞蛋白，A错误；伊红—亚甲蓝培养基是鉴定大肠杆菌的培养基，本实验应该用刚果红培养基筛选高产纤维素酶菌株，B错误；酒精发酵的菌种为酵母菌，当接种量为12%左右时，发酵后的酒精含量与残糖含量曲线有交点，但两者的纵坐标数值及单位均不同，故发酵后二者含量不同，C错误；由图可知，菌种接种量为15%时对应的酒精含量达到最大值，接种量超过15%，菌种数量大，自身的生长会大量消耗反应物，导致酒精产量降低，D正确。 （不定项）3．鲁菜是中国八大菜系之首，十分讲究配料和调料的搭配，烹饪中常使用酱油、腐乳、味精、白酒、醋和泡菜进行调味，下列说法错误的是（    ） A．白酒、味精和醋的发酵生产所需要的微生物均为真核生物 B．酱油的发酵生产经过蛋白质分解为小分子肽和氨基酸 C．腐乳发酵过程中起主要作用的微生物是黑曲霉 D．泡菜发酵后期，尽管乳酸菌占优势，但仍有产气菌繁殖，需开盖放气 【答案】ACD 【解析】白酒酿造使用的菌种是酵母菌，为真核生物；生产味精用的菌种是谷氨酸棒状杆菌，为原核生物；酿醋使用的菌种是醋酸菌，为原核生物，A错误；酿造酱油以大豆为主要原料，利用产生蛋白酶的霉菌（如黑曲霉），将原料中的蛋白质水解成小分子的肽和氨基酸，然后经淋洗、调制成酱油产品，B正确；腐乳发酵过程中起主要作用的微生物是毛霉，C错误；乳酸菌属于厌氧菌，开盖放气会影响乳酸菌发酵，因此不能开盖放气，D错误。 4．原浆苹果醋的简要工艺流程为：苹果采摘→挑选清洗→破碎榨汁→酵母发酵→醋酸发酵→陈酿2年左右。下列叙述正确的是（    ） A．酵母发酵结束后，改变通气条件即可进行醋酸发酵 B．工艺流程中的“酵母发酵”发生在苹果细胞的细胞质基质中 C．酿醋过程中发酵液的pH逐渐降低，与酿酒制作过程中相反 D．醋酸发酵阶段中产生的气泡量少于酒精发酵阶段 【答案】D 【解析】醋酸发酵需要通入氧气，且温度比果酒发酵温度高，所以酵母发酵结束后，改变通气条件和升高温度有利于醋酸发酵，A错误；果酒的制作原理是酵母菌无氧呼吸产生酒精，其场所是细胞质基质，因此工艺流程中的“酵母发酵”发生在酵母菌的细胞质基质中，B错误；果醋制作过程中发酵液pH逐渐降低，果酒制作过程中产生二氧化碳，发酵液pH也逐渐降低，C错误；“醋酸发酵”时，当糖源充足，糖将分解成醋酸且产生二氧化碳，即有气泡产生，但当缺少糖源时，酒精将转变成醋酸且不产生二氧化碳，即不产生气泡，因此醋酸发酵阶段中产生的气泡量少于酒精发酵阶段，D正确。 5．从传统发酵技术到发酵工程，经历了漫长的过程。下列说法错误的是（    ） A．传统酿酒过程中需要将温度控制在18~30℃之间 B．酱油等传统发酵以混合菌种的液体发酵及半固体发酵为主 C．发酵工程生产的微生物农药，是生物防治的重要手段 D．利用发酵工程生产的根瘤菌肥作为微生物肥料可以促进植物的生长 【答案】B 【解析】传统酿酒用到的菌种是酵母菌，酵母菌发酵的适宜温度是18~30℃，A正确；酱油等传统发酵以混合菌种的固体发酵和半固体发酵为主，B错误；发酵工程生产的微生物农药，是利用微生物或其代谢产物来防治病虫害，是生物防治的重要手段，C正确；利用发酵工程生产的根瘤菌肥作为微生物肥料能通过固氮提高土壤肥力从而促进植物的生长，D正确。 6．苹果酒口感甘醇，深受广大消费者喜爱。选用新鲜、成熟、无病虫害的苹果作为原料，进行清洗、去皮并榨汁。将苹果汁加入适量的酵母菌和白砂糖，充分混合后装入发酵桶中，用气密塞封好，放置在适宜的温度下进行发酵，发酵过程中可摇动一次，一段时间后，苹果酒便酿制成功。结合所给材料，下列叙述正确的是（　　） A．酵母菌利用的氮源、无机盐均来自苹果汁 B．过度清洗和去皮将使发酵无法进行 C．“在适宜的温度下进行发酵”的温度为30~35℃ D．发酵过程中摇动一次是为了增加苹果汁中的溶解氧 【答案】A 【解析】白砂糖可为酵母菌提供碳源，但酵母菌利用的氮源、无机盐均来自苹果汁，A正确；过度清洗和去皮后苹果上可能不再有酵母菌，但由于苹果汁中加入了适量的酵母菌，故过度清洗和去皮后，发酵仍能进行，B错误；酿酒时，适宜的发酵温度是18~30℃，30~35℃是酿醋的适宜温度，C错误；酵母菌制酒时为无氧发酵，摇动一次是为了使菌体与苹果汁能充分接触，D错误。 7．稀释涂布平板法和稀释倒平板法是分离微生物的两种方法。稀释倒平板法是指将稀释的菌液和琼脂混合，然后将其倒入无菌培养皿中进行培养。下列说法正确的是（    ） A．培养过程中所用的培养基和培养皿均可采用湿热灭菌法 B．两种方法均可通过统计菌落数实现对活菌的准确计数 C．稀释倒平板法对好氧菌、热敏感菌的分离效果优于稀释涂布平板法 D．为了防止培养基温度过高杀死微生物，应将琼脂冷却至室温后再倒平板 【答案】A 【详解】为了防止杂菌污染，培养过程中所用的培养基和培养皿均可采用湿热灭菌法，A正确；稀释涂布平板法和稀释倒平板法都不能通过统计菌落数实现对活菌的准确计数，B错误；稀释倒平板法是指将稀释的菌液和琼脂混合，然后将其倒入无菌培养皿中进行培养，琼脂可以隔绝空气、但不能及时散热，因此稀释涂布平板法对好氧菌、热敏感菌的分离效果优于稀释倒平板法，C错误；倒平板操作中需要将培养基冷却到50℃左右时进行，D错误。 8.稻瘟菌引起的水稻稻瘟病是危害最为严重的真菌病害之一。土壤中某些微生物能合成并分泌几丁质酶，能抑制稻瘟菌的生长，可用于稻瘟病的防治。科研人员试图从土壤中筛选出能高效降解几丁质的菌株，通过微生物培养获得几丁质酶。下列说法错误的是（    ） A．筛选土壤中目的微生物时需用以几丁质为唯一碳源的培养基 B．纯化培养时，可选择稀释涂布平板法或平板划线法接种 C．在以几丁质为唯一碳源的培养基上生长的菌落均能分泌几丁质酶 D．可依据单菌落周围“水解圈直径/菌落直径”的值来筛选目的菌株 【答案】C 【解析】筛选土壤中目的微生物即降解几丁质的微生物时，应用以几丁质为唯一碳源的培养基进行筛选，A正确；纯化培养时，可选择稀释涂布平板法或平板划线法接种，两种方法均可得到单菌落，B正确；在以几丁质为唯一碳源的培养基上生长的菌落不一定能分泌几丁质酶，可能部分是以几丁质的分解产物为碳源的微生物，C错误；水解圈是产生几丁质酶的微生物产生相关酶水解几丁质产生的，水解圈直径/菌落直径越大，说明该菌降解能力越强，故可依据单菌落周围“水解圈直径/菌落直径”的值来筛选目的菌株，D正确。 9.烟草的多糖含量偏高是造成烟叶原料品质不高的重要因素，微生物在烟叶醇化阶段可有效降低烟草的多糖含量。为提高烟叶质量，科研人员筛选出S1～S5微生物菌株，并测定其相关酶活力，结果如图所示。下列说法正确的是（　　）    A．筛选获得S1～S5微生物菌株时，应以淀粉为唯一碳源 B．用平板划线法分离单菌落前需对培养液进行稀释 C．用S1单菌落培养获得的纯培养物对烟叶进行醇化效果最好 D．烟叶醇化发酵应在低温下进行，以抑制杂菌繁殖 【答案】C 【解析】根据题图信息可知，科研人员筛选出的S1∼S5微生物菌株均能降低烟草中的多糖含量，但不能确定该微生物是否利用淀粉为碳源，A错误；用平板划线法分离单菌落直接使用未经稀释的微生物样本进行划线操作即可达到分离目的，B错误；据图分析可知，科研人员筛选出的S1∼S5微生物菌株均能降低烟草中的多糖含量，S1微生物对降低烟草的多糖酶活力比其他四种都强，故用S1单菌落培养获得的纯培养物对烟叶进行醇化效果最好，C正确。酶催化化学反应需要适宜的温度，烟叶醇化发酵应在适宜的温度下进行，D错误。 10.细胞摇摆式间歇浸没生物反应器是通过摆动架的倾斜摆动，使培养液周期性间歇浸没组培苗，实现组培苗的快速生长。下列叙述正确的是（    ） A．获得组培苗的培养基含有水、无机盐、蔗糖、琼脂和激素等多种营养物质 B．间歇摆动提高培养液溶氧量，有利于组培苗进行有氧呼吸 C．获得组培苗的步骤：外植体→脱分化形成胚状体→再分化形成试管苗 D．经过间歇浸没培养获得的植株需要消毒后炼苗再移栽到经灭菌处理的土壤中 【答案】B 【解析】琼脂是凝固剂，不提供营养，A错误；间歇摆动提高培养液溶氧量，有利于组培苗进行有氧呼吸，有氧呼吸能为组培苗的生长发育提供能量，因此可以提高生长速度，B正确；外植体脱分化可以形成愈伤组织，愈伤组织再分化形成胚状体，C错误；植物组织培养是在无菌条件下进行的，经过间歇浸没培养获得的植株不需要消毒处理，D错误。 11.为从泡菜汁中分离出乳酸菌高产菌株，甲、乙两同学分别采用平板划线法和稀释涂布平板法获取单菌落。已知在培养基中添加碳酸钙可使培养基变浑浊，而乳酸等酸性物质可溶解培养基中的碳酸钙形成透明圈。下列说法错误的是（    ） A．利用泡菜汁进行平板划线操作前无需进行稀释 B．涂布用的菌浓度应控制在30~300个/mL C．接种后需将平板放置在无氧条件下培养 D．周围透明圈最大的菌株，产酸能力不一定最强 【答案】B 【解析】平板划线操作中在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落，该方法接种时不需要稀释，A正确；涂布时所用菌液通常不超过0.1mL，平板上的菌落数应介于30～300个，则涂布用的菌浓度应控制在300-3000个/mL，B错误；乳酸菌是厌氧菌，接种后需将平板放置在无氧条件下培养，C正确；周围透明圈最大的菌株，产酸能力不一定最强，应选择透明圈与菌落直径比例最大的类型，D正确。 （不定项）12.白地霉侵染是导致柑橘酸腐病的主要原因，实验证明桔梅奇酵母对白地霉具有生物防治能力。已知铁是真菌生长的必需元素，是胞内重要酶活性中心的组成部分。普切明酸是桔梅奇酵母产生的一种水溶性铁螯合剂，能快速在培养基中扩散并与其中的Fe3+形成稳定红色复合物。研究配制的含有不同浓度FeCl3的培养基如下表所示。实验结果为桔梅奇酵母菌落周围出现红色抑菌圈，随FeCl3浓度增大，抑菌圈红色加深但变窄，如下图所示。相关叙述正确的是（    ） 成分 MgSO4 NaH2PO4 蛋白胨 FeCl3溶液 水 琼脂 用量 5g 7g 15g 500mL 7g 20g A．实验中使用的培养基pH呈弱碱性，其中琼脂不是营养物质 B．白地霉采用了平板划线法，桔梅奇酵母采用了涂布平板法 C．白地霉不能利用与普切明酸结合后的铁是出现红色抑菌圈的原因 D．补足Fe3+可以使桔梅奇酵母对白地霉的抑制效果逐渐减弱 【答案】CD 【解析】白地霉属于霉菌，实验中使用的培养基pH呈弱酸性，其中琼脂是凝固剂的一种，不是营养物质，在培养液中加入琼脂可以使液体培养基成为琼脂固体培养基，A错误；白地霉的接种采用了涂布平板法，桔梅奇酵母应使用了平板划线法，B错误；由题意可知，随培养基中FeCl3浓度的增加，普切明酸与Fe3+的结合增强，抑菌圈的红色加深，说明白地霉不能利用与普切明酸结合后的铁是出现红色抑菌圈的原因，C正确；普切明酸与Fe3+形成红色复合物，随培养基中FeCl3浓度的增加，抑菌圈变窄，是由于白地霉从培养基中获得了较多的铁离子，FeCl3能降低桔梅奇酵母对白地霉的防治效果，D正确。 （不定项）13.土壤中95%以上的磷为植物很难利用的无效磷。解磷菌能够将磷矿粉等无效磷转化为植物易利用的速效磷。为研究解磷菌的解磷机理，科研人员将磷矿粉制成培养液，培养从土壤中分离出的2种解磷菌（M-3-01、B3-5-6），测定培养液的上清液pH及其中的速效磷含量，结果如图，下列叙述正确的是（　　）      A．由图可知，168h以内M-3-01解磷能力较强 B．B3-5-6转化无效磷的能力与培养溶液pH显著相关 C．据图推测B3-5-6可能借助分泌酸性物质溶解磷矿粉 D．据图推测M-3-01不可以利用速效磷 【答案】ABC 【解析】据图可知，168h以内M-3-01解磷菌的速效磷含量高于B3-5-6解磷菌，说明168h以内M-3-01解磷能力较强，A正确；在培养72h以后B3-5-6解磷菌中的pH下降，速效磷含量也迅速上升，则说明B3-5-6转化无效磷的能力与培养溶液pH显著相关，B正确；当pH下降时B3-5-6培养液上清液中速效磷含量也迅速上升，当pH上升到7.0以上时，速效磷的含量不再上升，推测B3-5-6可能借助分泌酸性物质溶解磷矿粉，C正确；据图可知，培养168h以后，M-3-01组的培养液中速效磷含量下降，说明M-3-01可以利用速效磷，D错误。 （不定项）14.某种除草剂（一种含氮有机物，在水中溶解度低，含一定量该除草剂的培养基不透明）在土壤中不易降解，长期使用会污染土壤。为修复被该除草剂污染的土壤，按下图过程选育能降解该除草剂的细菌。下列叙述正确的是（    ） A．图中培养基在各种成分都溶化后且分装前进行灭菌 B．图中接种方法为平板划线法，该方法可以于细菌计数 C．实验过程中需要将培养皿中培养基调至中性或弱碱性 D．培养基上形成的两种菌落中的细菌所利用的氮源不同 【答案】CD 【解析】培养基在各种成分都溶化后，在分装到锥形瓶后进行灭菌，A错误；平板划线法不能记数，B错误；一般培养细菌时需要培养基调至中性或弱碱性，C正确；培养基上形成的两种菌落中的细菌所利用的氮源不同，有透明圈的，是能够利用除草剂中的氮源，没有透明圈的，不能利用除草剂中的氮源，D正确。 （不定项）15.某研究小组用紫外线照射酵母菌，将其接种到甲培养基上，一段时间后将甲培养基的菌落影印接种（不改变菌落位置）到乙、丙两培养基上，进一步培养得到如图所示结果。下列相关叙述正确的是（    ） A．甲培养基的菌落均匀分布，接种方法应为稀释涂布平板法 B．乙培养基和丙培养基的组成成分相同，均为选择培养基 C．甲中某些菌种可能发生突变，失去了合成某种物质的能力 D．影印接种可以保证甲的菌落数和丙的菌落数一定相等 【答案】AC 【解析】甲培养皿的菌落均匀分布，接种方法应为稀释涂布平板法，A正确；甲、丙培养基菌落数目多，包括野生型酵母菌菌株和某种营养缺陷型酵母菌菌株，乙培养皿菌株未生长的是某种营养缺陷型酵母菌菌株，乙培养皿的培养基是基本培养基，甲和丙是加入了同种营养成分的培养基，B错误；甲培养基菌落数目多，包括野生型酵母菌菌株和某种营养缺陷型酵母菌菌株，影印接种到乙培养基上，部分菌落未生长，说明甲中某些菌种可能发生突变，失去了合成某种物质的能力，C正确；影印培养试验主要是一个为了在一系列培养皿的相同位置上能培养出相同的菌落的试验，不一定保证甲的菌落数和丙的菌落数一定相等，D错误。 1．（2025·山东·高考真题）深海淤泥中含有某种能降解纤维素的细菌。探究不同压强下，该细菌在以纤维素或淀粉为唯一碳源的培养基上的生长情况。其他条件相同且适宜，实验处理及结果如表所示。下列说法正确的是（    ） 组别 压强 纤维素 淀粉 菌落 ① 常压 - + - ② 常压 + - - ③ 高压 - + - ④ 高压 + - + 注： “+”表示有；“一”表示无 A．可用平板划线法对该菌计数 B．制备培养基的过程中，应先倒平板再进行高压蒸汽灭菌 C．由②④组可知，在以纤维素为唯一碳源的培养基上，该菌可在常压下生长 D．由③④组可知，高压下该菌不能在以淀粉为唯一碳源的培养基上生长 【答案】D 【解析】平板划线法是用来分离和纯化微生物，获得单个菌落的技术，其主要目的是分离而不是计数。用于活菌计数的方法通常是稀释涂布平板法，A错误；制备固体培养基（琼脂平板）的正确流程是：先将培养基成分溶解、调整pH值后，分装到三角瓶中，然后进行高压蒸汽灭菌。待培养基冷却至50℃左右时，再在无菌条件下（如超净工作台）倒入无菌的培养皿中（即“倒平板”），B错误；组②为常压 + 纤维素，结果无菌落，而组④为高压 + 纤维素，结果是有菌落。 这个对比恰好说明，在以纤维素为碳源的条件下，该菌不能在常压下生长，而能在高压下生长，C错误；③④组形成了一个对照实验，变量是碳源。实验结果表明，在高压条件下，该细菌可以利用纤维素生长（组④），但不能利用淀粉生长（组③），D正确。 2.(2024年山东省）在发酵过程中，多个黑曲霉菌体常聚集成团形成菌球体，菌球体大小仅由菌体数量决定。黑曲霉利用糖类发酵产生柠檬酸时需要充足的氧。菌体内铵离子浓度升高时，可解除柠檬酸对其合成途径的反馈抑制。下列说法错误的是（　　） A. 相同菌体密度下，菌球体越大柠檬酸产生速率越慢 B. 发酵中期添加一定量的硫酸铵可提高柠檬酸产量 C. 发酵过程中pH下降可抑制大部分细菌的生长 D. 发酵结束后，将过滤所得的固体物质进行干燥即可获得柠檬酸产品 【答案】D 【解析】黑曲霉利用糖类发酵产生柠檬酸时需要充足的氧，相同菌体密度下，菌球体越大越不利于菌体与氧气接触，柠檬酸产生速率越慢，A正确；菌体内铵离子浓度升高时，可解除柠檬酸对其合成途径反馈抑制，发酵中期添加一定量的硫酸铵，提高铵离子浓度，菌体内可提高柠檬酸产量，B正确；发酵过程中pH下降导致细菌生命活动所必须的酶失活，可抑制大部分细菌的生长，C正确；发酵结束后，将过滤所得的固体物质进行分离、纯化、浓缩、干燥等一系列操作后才能获得柠檬酸产品，D错误。 3.(2024年山东省）酵母菌在合成色氨酸时需要3种酶X、Y和Z，trpX、trpY和trpZ分别为相应酶的编码基因突变的色氨酸依赖型突变体。已知3种酶均不能进出细胞，而色氨酸合成途径的中间产物积累到一定程度时可分泌到胞外。将这3种突变体均匀划线接种到含有少量色氨酸的培养基上，生长情况如图。据图分析，3种酶在该合成途径中的作用顺序为（　　） A. X→Y→Z B. Z→Y→X C. Y→X→Z D. Z→X→Y 【答案】A 【解析】添加少量色氨酸，突变体菌株可以生长，色氨酸合成途径的中间产物积累后可排出胞外，进入培养基后，通过扩散，从而给其他突变型提供代谢原料，帮助其长出明显的菌落。trpX、trpY和trpZ分别为相应酶的编码基因突变的色氨酸依赖型突变体，据图可知，trpX不能为trpY和trpZ提供原料，trpY不能为trpZ提供原料，trpZ可以为trpX、trpY的生长提供原料，推测3种酶在该合成途径中的作用顺序为X→Y→Z。 （不定项）5．（2025·山东·高考真题）酿造某大曲白酒的过程中，微生物的主要来源有大曲和窖泥。大曲主要提供白酒酿造过程中糖化所需的微生物，制曲过程需经堆积培养，培养时温度可达60℃左右；将大曲和酿酒原料混合，初步发酵后放入窖池；窖池发酵是白酒酿造过程中微生物发酵的最后阶段。下列说法正确的是（    ） A．堆积培养过程中的高温有利于筛选酿酒酵母 B．大曲中存在能分泌淀粉酶的微生物 C．窖池发酵过程中，酵母菌以无氧呼吸为主 D．窖池密封不严使酒变酸是因为乳酸含量增加 【答案】BC 【解析】酵母菌最适宜生长繁殖的温度范围是18～30℃，堆积培养过程中温度可以达到60℃左右，高温不利于筛选酿酒酵母，A错误；大曲主要提供白酒酿造过程中糖化所需的微生物，糖化是将淀粉水解形成糖浆的过程，故大曲中应存在能分泌淀粉酶的微生物，B正确；窖池发酵开始会有氧气进行有氧呼吸，不是只进行无氧呼吸，C正确；窖池密封不严使酒变酸是因为乙醇被氧化为醋酸，D错误。 5.（2023山东高考） 以下是以泡菜坛为容器制作泡菜时的4个处理：①沸盐水冷却后再倒入坛中；②盐水需要浸没全部菜料；③盖好坛盖后，向坛盖边沿的水槽中注满水；④检测泡菜中亚硝酸盐的含量。下列说法正确的是（ ） A. ①主要是为了防止菜料表面的醋酸杆菌被杀死 B. ②的主要目的是用盐水杀死菜料表面的杂菌 C. ③是为了使气体只能从泡菜坛排出而不能进入 D. ④可检测到完整发酵过程中亚硝酸盐含量逐渐降低 【答案】C 【解析】盐水煮沸是为了杀灭杂菌，沸盐水冷却后再倒入坛中主要是为了防止菜料表面的乳酸菌被杀死，A错误；②盐水需要浸没全部菜料，造成无氧环境，有利于乳酸菌无氧呼吸，B错误；③盖好坛盖后，向坛盖边沿的水槽中注满水，为了制造无氧环境，同时可排出初期酵母菌等发酵产生的气体，C正确；④检测泡菜中亚硝酸盐的含量，腌制泡菜过程中亚硝酸盐的含量先增多后减少，D错误。 6.（2023山东高考） 平板接种常用在微生物培养中。下列说法正确的是（ ） A. 不含氮源的平板不能用于微生物培养 B. 平板涂布时涂布器使用前必须进行消毒 C. 接种后未长出菌落的培养基可以直接丢弃 D. 利用以尿素为唯一氮源的平板能分离出合成脲酶的微生物 【答案】D 【解析】不含氮源的平板可用于固氮菌的培养，A错误；平板涂布时涂布器使用前必须浸在酒精中，然后在火焰上灼烧灭菌，这种操作属于灭菌，不属于消毒，B错误；使用后的培养基即使未长出菌落也要在丢弃前进行灭菌处理，不能直接丢弃，以免污染环境，C错误；脲酶可以催化尿素分解，在以尿素为唯一氮源的平板上，能合成脲酶的微生物可以分解尿素获得氮源而进行生长繁殖，但是不能合成脲酶的微生物因缺乏氮源而无法生长，因此以尿素为唯一氮源的平板能分离出合成脲酶的微生物，D正确。 （不定项）7.（2023山东高考） 果酒的家庭制作与啤酒的工业化生产相比，共同点有（ ） A. 都利用了酵母菌无氧呼吸产生酒精的原理 B. 都需要一定的有氧环境供发酵菌种繁殖 C. 发酵前都需要对原料进行灭菌 D. 发酵结束后都必须进行消毒以延长保存期 【答案】AB 【解析】二者均利用了酵母菌进行无氧呼吸产生酒精的原理，A正确；发酵前期，均需要一定的有氧环境，使酵母菌大量繁殖，B正确；果酒的家庭制作不需对原料进行灭菌，C错误；果酒的家庭制作不需要进行消毒，D错误。 8.（2022山东高考） 青霉菌处在葡萄糖浓度不足的环境中时，会通过分泌青霉素杀死细菌，以保证自身生存所需的能量供应。目前已实现青霉素的工业化生产，关于该生产过程，下列说法错误的是（ ） A. 发酵液中的碳源不宜使用葡萄糖 B 可用深层通气液体发酵技术提高产量 C. 选育出的高产菌株经扩大培养后才可接种到发酵罐中 D. 青霉素具有杀菌作用，因此发酵罐不需严格灭菌 【答案】D 【解析】青霉菌处于葡萄糖浓度不足的环境中会通过分泌青霉素杀死细菌；提供相同含量的碳源，葡萄糖溶液单位体积中溶质微粒较多，会导致细胞失水，发酵液中的碳源不宜使用葡萄糖，乳糖是二糖，可被水解为半乳糖和葡萄糖，是青霉菌生长的最佳碳源，可以被青霉菌缓慢利用而维持青霉素分泌的有利条件，A正确；青霉菌的代谢类型为异养需氧型，可用深层通气液体发酵技术提高产量，B正确；选育出的高产青霉素菌株经扩大培养纯化后，才可接种到发酵罐中进行工业化生产，C正确；为了防止细菌、其他真菌等微生物的污染，获得纯净的青霉素，发酵罐仍需严格灭菌，D错误。 （不定项）9.（2022山东高考） 啤酒的工业化生产中，大麦经发芽、焙烤、碾磨、糖化、蒸煮、发酵、消毒等工序后，最终过滤、调节、分装。下列说法正确的是（ ） A. 用赤霉素处理大麦，可使大麦种子无须发芽就能产生α-淀粉酶 B. 焙烤是为了利用高温杀死大麦种子胚并进行灭菌 C. 糖浆经蒸煮、冷却后需接种酵母菌进行发酵 D. 通过转基因技术可减少啤酒酵母双乙酰的生成，缩短啤酒的发酵周期 【答案】ACD 【解析】赤霉素能促进种子的萌发，据此可推测若用赤霉素处理大麦，可诱导α-淀粉酶相关基因的表达，促进α-淀粉酶的合成，进而使大麦种子无须发芽就能产生α-淀粉酶，A正确；焙烤可以杀死大麦种子的胚，但不使淀粉酶失活，没有进行灭菌，B错误；糖浆经蒸煮（产生风味组分、终止酶的进一步作用，并对糖浆灭菌）、冷却后再接种酵母菌进行发酵，防止高温杀死菌种，C正确；转基因技术已被用来减少啤酒酵母双乙酰的生成，缩短啤酒的发酵周期，属于转基因技术在微生物领域的应用，D正确。 10.（2020山东高考） 在实验室中可利用酵母菌发酵的方式制作葡萄酒，下列说法正确的是 A. 葡萄糖在酵母菌细胞的线粒体内被分解 B. 制作葡萄酒时酵母菌先在有氧条件下大量增殖 C. 制作过程中酵母菌始终处于碱性环境 D. 酵母菌的发酵产物不会抑制自身的代谢活动 【答案】B 【解析】利用酵母菌发酵的方式制作葡萄酒时，酵母菌进行无氧呼吸，葡萄糖在酵母菌细胞质基质内被分解，A错误；酵母菌繁殖需要空气，在完全隔绝空气的情况下，酵母菌繁殖几代就停止了，要维持酵母菌长时间发酵，必须供给一定的氧气，故制作葡萄酒时酵母菌先在有氧条件下大量增殖，B正确；酵母菌发酵的后期，由于产生的CO2和其他代谢产物的积累，发酵液呈酸性，C错误； 酵母菌发酵产生的酒精会对酵母菌的生长产生抑制作用，D错误。 （不定项）11.（2020山东高考） 生长图形法是一种测定微生物营养需求的简便方法。为探究某嗜热菌所需生长因子的种类，研究小组把该菌的悬浮液与不含任何生长因子但含有其他必需营养物质的培养基混合后倒成平板，然后在平板上划分数区，将甲、乙、丙三种生长因子分别添加到不同区域，培养结果如图所示，下列说法正确的是（　　） A. 倒成平板后直接培养可判断有无污染 B. 倒成平板后需要进行灭菌处理 C. 图示结果表明该菌需要生长因子乙或丙 D. 生长图形法还可用于某些菌种的筛选 【答案】AD 【解析】平板上不含任何生长因子，若倒成平板后直接培养，出现菌落说明已被杂菌感染，因为该嗜热菌不能在缺乏生长因子的培养基中生长，A正确；制备平板时，先灭菌再倒平板，B错误；图中菌落生活在乙丙区域之间，说明同时需要乙和丙，C错误；不同菌种所需生长因子不同，可利用生长图形法筛选菌种，D正确 12.（2021山东高考） 葡萄酒的制作离不开酵母菌。下列说法错误的是（ ） A. 无氧条件下酵母菌能存活但不能大量繁殖 B. 自然发酵制作葡萄酒时起主要作用的菌是野生型酵母菌 C. 葡萄酒的颜色是葡萄皮中的色素进入发酵液形成的 D. 制作过程中随着发酵的进行发酵液中糖含量增加 【答案】D 【解析】酵母菌进行有氧呼吸获得能量大量繁殖，无氧条件下，发酵产生酒精，故无氧条件下酵母菌能进行无氧呼吸存活但不能大量繁殖，A正确；自然发酵制作葡萄酒时起主要作用的菌是葡萄皮上的野生型酵母菌，B正确；葡萄皮中的色素进入发酵液使葡萄酒呈现颜色，C正确；制作过程中随着发酵的进行发酵液中糖含量减少，D错误。 13.（2021山东高考） 解脂菌能利用分泌的脂肪酶将脂肪分解成甘油和脂肪酸并吸收利用。脂肪酸会使醇溶青琼脂平板变为深蓝色。将不能直接吸收脂肪的甲，乙两种菌分别等量接种在醇溶青琼脂平板上培养。甲菌菌落周围呈现深蓝色，乙菌菌落周围不变色，下列说法错误的是（ ） A. 甲菌属于解脂菌 B. 实验中所用培养基以脂肪为唯一碳源 C. 可将两种菌分别接种在同一平板的不同区域进行对比 D. 该平板可用来比较解脂菌分泌脂肪酶的能力 【答案】B 【解析】根据题干信息“甲菌菌落周围呈现深蓝色”，说明甲可以分泌脂肪酶将脂肪分解成甘油和脂肪酸，脂肪酸会使醇溶青琼脂平板变为深蓝色，因此甲菌属于解脂菌，A正确；乙菌落周围没有出现深蓝色，说明乙菌落不能产生脂肪酶，不能利用脂肪为其供能，但乙菌落也可以在培养基上生存，说明该培养基不是以脂肪为唯一碳源，B错误；可将两种菌分别接种在同一平板的不同区域进行对比，更加直观，C正确；可以利用该平板可用来比较解脂菌分泌脂肪酶的能力，观察指标可以以菌落周围深蓝色圈的大小，D正确。 14.（2021山东高考） 含硫蛋白质在某些微生物的作用下产生硫化氢导致生活污水发臭。硫化氢可以与硫酸亚铁铵结合形成黑色沉淀。为探究发臭水体中甲、乙菌是否产生硫化氢及两种菌的运动能力，用穿刺接种的方法，分别将两种菌接种在含有硫酸亚铁铵的培养基上进行培养，如图所示。若两种菌繁殖速度相等，下列说法错误的是（ ） A. 乙菌的运动能力比甲菌强 B. 为不影响菌的运动需选用液体培养基 C. 该实验不能比较出两种菌产生硫化氢的量 D. 穿刺接种等接种技术的核心是防止杂菌的污染 【答案】B 【解析】从图中可以看出甲菌在试管中分布范围小于乙菌，说明了乙菌的运动能力比甲菌强，A正确；为不影响菌的运动需选用半固体培养基，B错误；根据题意，黑色区域的面积大小反映两种菌运动能力的大小，而不能表示二者产生硫化氢的能力大小，C正确；微生物接种技术的核心是防止杂菌的污染，D正确。 15.（2025·四川·高考真题）微塑料由塑料废弃物风化形成，难以降解，会危害生态环境和人体健康。有人分离到X和Y两种微塑料降解菌，将总菌量相同的X、Y、X+Y（X:Y=1:1）分别接种于含有等量微塑料的蛋白胨液体培养基中，培养一段时间后测定微塑料的残留率（残留率=剩余量/添加量×100%），结果如下图。下列叙述正确的是（    ） A．用平板划线法能测定X菌组中的活菌数 B．Y菌组微塑料残留率较高，故菌浓度也高 C．混合菌种对微塑料的降解能力高于单一菌种 D．能在该培养基中生长繁殖的微生物都能降解微塑料 【答案】C 【解析】平板划线法主要用于微生物的分离和纯化，不能用于测定活菌数，测定活菌数常用稀释涂布平板法，A错误；Y菌组微塑料残留率较高，说明Y菌对微塑料的降解能力相对较弱，而不是菌浓度高，微塑料残留率与菌对微塑料的降解能力有关，而非直接与菌浓度相关，B错误；由图可知，X+Y混合菌种组的微塑料残留率低于X菌组和Y菌组，说明混合菌种对微塑料的降解能力高于单一菌种，C正确；该培养基中含有蛋白胨，能在该培养基中生长繁殖的微生物可能利用蛋白胨作为碳源和氮源等，但不一定都能降解微塑料，D错误。 16.（2025·湖南·高考真题）采集果园土壤进行微生物分离或计数。下列叙述正确的是（　　） A．稀释涂布平板法和平板划线法都能用于尿素分解菌的分离和计数 B．完成平板划线后，培养时需增加一个未接种的平板作为对照 C．土壤中分离得到的醋酸菌能在无氧条件下将葡萄糖分离成乙酸 D．用于筛选尿素分解菌的培养基含有蛋白胨、尿素和无机盐等营养物质 【答案】B 【解析】稀释涂布平板法可通过菌落数进行计数，而平板划线法仅用于分离纯化菌种，无法计数，A错误；平板划线法操作后需设置未接种的平板作为空白对照，以验证培养基灭菌是否彻底，B正确；醋酸菌为严格好氧菌，其代谢需氧气，无氧条件下无法将葡萄糖转化为乙酸，C错误；筛选尿素分解菌的培养基应以尿素为唯一氮源，若含蛋白胨（含其他氮源），则无法筛选目标菌，D错误。 17.（2025·黑吉辽蒙卷·高考真题）科研人员通过稀释涂布平板法筛选出高耐受且降解金霉素（C22H23ClN2O8）能力强的菌株，旨在解决金霉素过量使用所导致的环境污染问题。下列叙述错误的是（    ） A．以金霉素为唯一碳源可制备选择培养基 B．逐步提高培养基中金霉素的浓度有助于获得高耐受的菌株 C．配制选择培养基时，需确保pH满足实验要求 D．用接种环将菌液均匀地涂布在培养基表面 【答案】D 【解析】以金霉素为唯一碳源的选择培养基，仅允许能利用金霉素的微生物生长（其他无法利用金霉素的微生物被抑制），符合选择培养基的设计原理，A正确；逐步提高金霉素浓度可模拟环境胁迫，筛选出耐受性更强的菌株（类似“驯化”过程），B正确；培养基的pH需根据目标微生物的生长需求调整（如细菌通常中性偏碱，真菌偏酸性），是配制培养基的基本要求，C正确；稀释涂布平板法需用​​涂布器​​将菌液均匀涂布在培养基表面，而接种环用于平板划线法（分离单菌落）。用接种环涂布无法保证菌液均匀，D错误。 学科网（北京）股份有限公司1 学科网（北京）股份有限公司 学科网（北京）股份有限公司 学科网（北京）股份有限公司 $