3.2基因工程的基本操作程序课件-2024-2025学年高二下学期生物人教版选择性必修3

1944年艾弗里等人通过肺炎链球菌的转化实验，不仅证明了遗传物质是DNA，还证明了DNA可以在同种生物个体间转移。 1961年尼伦伯格和马太破译了第一个编码氨基酸的密码子。截至19666年，64个密码子均被破译成功。 1970年科学家在细菌中发现了第一个限制性核酸内切酶（简称限制酶） 1972年，伯格首先在体外进行了DNA的改造，成功构建了第一个体外重组DNA分子。 1982年，第一个基因工程药物-重组人胰岛素被批准上市。基因工程药物成为世界各国研究和投资开发的热点。 1953年沃森和克里克建立了DNA双螺旋结构模型并提出了遗传物质自我复制的假说。 1967年，科学家发现，在细菌拟核DNA之外的质粒有自我复制能力，并可以在细菌细胞间转移。 20世纪70年代初，多种限制酶、DNA连接酶和逆转录酶被相继发现。这些发现为DNA的切割、连接以及功能基因的获得创造了条件。 1973年，科学家证明了质粒可以作为基因工程的载体，构建重组DNA，导入受体细胞，使外源基因在原核细胞中成功表达，并实现了物种间的基因交流。至此，基因工程正式问世。 1985年，穆里斯等人发明PCR,为获取目的基因提供了有效手段。 基因工程的建立过程 S z L w h 第2节 基因工程的基本操作程序 S z L w h 珠珠的电脑 (珠) - 《一切成果都是为国分忧为民解难》节选 郭三堆 　　20世纪90年代初，我国棉铃虫连年大暴发，导致整个国家出现“棉荒”，纺织业几乎崩溃。此刻，美国孟山都公司已于1991年研制出Bt抗虫棉，我国相关部门与孟山都几经谈判，都因为对方条件苛刻，终至谈判破裂。为了我国农业的发展和安全，为了不受制于人，我们必须有自主知识产权的抗虫棉。 1991年，国家“863”计划正式启动了棉花抗虫基因工程育种研究，中国作为植棉大国无抗虫棉的历史从这一刻开始被改写。经过不懈努力，单价基因抗虫棉、双价基因抗虫棉、三系杂交抗虫棉相继研发成功。这些成果，不仅打破了美国的垄断，保护了民族利益，而且为我国农业高新技术在国际竞争中争得了一席之地。 2014年5月14日《农民日报》 问题∙探讨 S z L w h 1997年，我国政府首次批准商业化种植转基因抗虫棉。到2015年，我国已育成转基因抗虫棉新品种100多个，减少农药用量40万吨，增收节支社会经济效益450亿元。你知道转基因抗虫棉抗虫的机制是什么？培育转基因抗虫棉一般需要哪些步骤？ 问题∙探讨 S z L w h 苏云金杆菌 与载体拼接 普通棉花 （无抗虫特性） 棉花细胞 抗虫棉 提取 导入 抗虫基因 （Bt抗虫蛋白基因） 重组DNA分子 1.目的基因的筛选与获取 2.基因表达载体的构建 3.将目的基因导入受体细胞 4.目的基因的 检测与鉴定 (含抗虫基因） （含有并表达抗虫基因） 培育转基因抗虫棉的简要过程 实例： S z L w h 一、目的基因的筛选与获取 什么是目的基因？ 在基因工程的设计和操作中，用于改变受体细胞性状或获得预期表达产物等的基因，主要指编码蛋白质的基因。 概念 实例 根据不同的需要，目的基因不同，主要是指编码蛋白质的基因。 如：与生物抗逆性、优良品质、生产药物、毒物降解和工业用酶等相关的基因。 资料：苏云金杆菌通过产生苏云金杆菌伴胞晶体蛋白（Bt 抗虫蛋白），破坏鳞翅目昆虫的消化系统来杀死棉铃虫。 科学家将“杀虫基因”转入棉花中，棉花产生Bt 抗虫蛋白抵抗虫害。 目的基因 S z L w h 一、目的基因的筛选与获取 Bt抗虫蛋白被分解为多肽后，多肽与害虫肠上皮细胞的特异性受体结合，导致细胞膜穿孔，最后造成害虫死亡。Bt抗虫蛋白只有在某类昆虫肠道的碱性环境中才表现毒性，而人和牲畜的胃液呈酸性，肠道细胞也没有特异性受体，因此Bt抗虫蛋白对人畜不会产生不良影响。 苏云金杆菌制成的生物杀虫剂广泛用于防治棉花虫害已有多年。 Bt抗虫蛋白对人和其他动物是否有害？ 在基因工程操作前应充分考虑目的基因的安全性等问题！ S z L w h 一、目的基因的筛选与获取 苏云金杆菌制成的生物杀虫剂已广泛使用多年； 研究表明苏云金杆菌杀虫与Bt基因有关； 科学家对Bt基因和Bt基因表达的蛋白有较深了解。 为什么要进行目的基因的筛选与获取？如何筛选？ 结合基因工程概念，有了目的基因我们才能赋予一种生物新的遗传特性，创造出更符合人们需要的生物类型或产品。 筛选方法 从已知结构和功能清晰的基因中进行筛选较为有效。 应用实例 S z L w h 一、目的基因的筛选与获取 目的基因获取方法 从基因文库中获取 人工合成目的基因 利用PCR获取和扩增目的基因 基因组文库 部分基因文库（cDNA文库） S z L w h 一、目的基因的筛选与获取 ①基因组文库的构建过程 某生物所有DNA 特定的限制酶 基因组所有基因 每个基因和载体结合重组DNA分子 导入受体菌 基因组文库 保存的是受体菌 （1）从基因文库中直接获取 S z L w h 一、目的基因的筛选与获取 ②cDNA文库的构建过程 某种生物的成熟mRNA 单链DNA 双链DNA片段（cDNA） 导入受体菌中储存 cDNA文库 逆转录酶 DNA聚合酶 与载体连接 保存的是受体菌 （1）从基因文库中直接获取 S z L w h 一、目的基因的筛选与获取 基因组文库和部分基因文库的比较 S z L w h 一、目的基因的筛选与获取 S z L w h 一、目的基因的筛选与获取 基因组文库和部分基因文库的比较 文库类型 cDNA文库 基因组文库 文库大小 基因中启动子 基因中内含子 基因多少 物种间基因交流 小 大 无 有 无 有 某种生物的部分基因 某种生物的全部基因 可以 部分基因可以 S z L w h 一、目的基因的筛选与获取 （2）人工合成目的基因 DNA合成仪 ①前提： ②方法： 化学合成法：依据某一蛋白质的氨基酸序列，推测出其基因序列，然后直接合成目的基因，其过程如下： 蛋白质的氨基酸序列 mRNA的核苷酸序列 推测 目的基因的核苷酸序列 推测 目的基因 化学 合成 基因比较小、核苷酸序列已知 通过DNA合成仪用化学方法直接合成目的基因 S z L w h 一、目的基因的筛选与获取 （3）利用PCR获取和扩增目的基因 1.从生物组织中提取DNA（见第一节中DNA的粗提取）； 2.对提取的DNA进行纯化； 3.根据目的基因序列设计引物，利用PCR技术扩增目的基因。 PCR技术是一种在DNA聚合酶作用下体外大量扩增特异DNA片段的技术。 该技术由穆里斯等人于1985年发明，穆里斯于1993年获得了诺贝尔化学奖。 S z L w h 一、目的基因的筛选与获取 聚合酶链式反应，缩写PCR。 名称 概念 回顾学习过的DNA复制的相关知识，思考PCR反应需要的条件有哪些？ DNA模板、解旋酶、DNA聚合酶、4种脱氧 核苷酸等。 PCR是一项根据 的原理，在 提供参与DNA复制的 与 ，对目的基因的核苷酸序列进行大量复制的技术。 DNA半保留复制 体外 各种组分 反应条件 PCR扩增仪 控制温度 S z L w h 一、目的基因的筛选与获取 解旋酶 DNA聚合酶 ▲子链的延伸方向： 模板： 原料： 能量： 酶： DNA的两条母链 4种游离的脱氧核苷酸 解旋酶、DNA聚合酶 复制特点: ①边解旋边复制 ②半保留复制 碱基互补配对原则 （保证复制的准确进行） 要点回顾:体内DNA复制 条件 5'端→3'端 复制原则: 因为 DNA聚合酶只能从5'端向3'端延伸子链。 S z L w h 一、目的基因的筛选与获取 DNA复制所需的基本条件: 参与的组分 在DNA复制中的作用 解旋酶 DNA母链 4种脱氧核苷酸 DNA聚合酶 引物 提供DNA复制的模板 合成DNA子链的原料 打开DNA双链 催化合成DNA子链 使DNA聚合酶能够从引物的3’端开始连接脱氧核苷酸 （PCR用耐高温的DNA聚合酶） （PCR用高温代替） （PCR的引物2种） 引物是一小段能与 的一段碱基序列__________的____________ DNA母链 互补配对 短单链核酸 3’ 5’ DNA母链 3’ 5’ 引物 3’ 5’ 引物 3’ 5’ DNA母链 （通常20-30个核苷酸） S z L w h 一、目的基因的筛选与获取 耐高温的DNA聚合酶 DNA模板 引物 缓冲溶液 四种脱氧核苷酸 PCR扩增仪（PCR仪） 条件: 微量离心管 ——控制温度 （dNTP） （2种） 一般添加Mg2+ （激活真核细胞和细菌的DNA聚合酶） S z L w h 一、目的基因的筛选与获取 基本过程: 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ A.变性 当温度上升到90℃以上时，双链DNA解聚为单链 B.复性 （退火） 当温度下降到50℃左右时，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合 C.延伸 当温度上升到72℃左右时，溶液中的4种脱氧核苷酸在耐高温的DNA聚合酶的作用下，根据碱基互补配对原则合成新的DNA链 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 变性 复性 延伸 S z L w h 一、目的基因的筛选与获取 第一轮循环的产物作为第二轮反应的模板，经过变性、复性和延伸三步产生第二轮循环的产物； 第二轮循环的产物作为第三轮反应的模板，经过变性、复性和延伸三步产生第三轮的产物； 第二轮循环的产物 第三轮循环的产物 完成后，常采用 来鉴定PCR的产物。 琼脂糖凝胶电泳 S z L w h S z L w h 一、目的基因的筛选与获取 1.PCR过程中为什么需要引物？ 引物是一小段单链DNA或RNA，作为DNA复制的起始序列，它能与DNA母链的一段碱基序列互补配对。自然界中生物DNA复制和人工PCR之所以需要引物，是因为DNA聚合酶不能从起点直接连接单个脱氧核苷酸，只能从已有的一段单链的3’端连接脱氧核苷酸。 2.PCR可以扩增mRNA吗？ 不能，需要把mRNA逆转录成cDNA再进行扩增。 S z L w h 一、目的基因的筛选与获取 3.在利用PCR获取和扩增目的基因时，经过N轮循环，会获得多少个DNA分子，需要多少个引物？ 经过第1次循环，1个DNA分子→2个DNA分子； 除了模板2条链外，每个DNA分子上有2条引物，N次循环一共 2N个DNA分子，需要引物2•2N-2，即2N+1-2。 经过第2次循环，2个DNA分子→22个DNA分子； 经过第3次循环，4个DNA分子→23个DNA分子； 经过第N次循环，2N-1个DNA分子→2N个DNA分子。 S z L w h 一、目的基因的筛选与获取 4.在利用PCR获取和扩增目的基因时，从第几轮循环才能产生完整的目的基因？ 第1次循环： 第2次循环： 第3次循环： 出现了完整的目的基因 S z L w h 练习∙反馈 （1）引物是一小段能与 的 短单链核酸，通常为20-30个核苷酸（自身不能环化长度不宜过短，防止引物随机结合 ）。 DNA母链的一段碱基序列互补配对 （2）在DNA聚合酶的作用下，两条子链的延伸方向都是 。 引物与目的基因模板链的 端结合。 从子链的5′端向3′端延伸 3′ S z L w h 练习∙反馈 若想获得以下已知序列的DNA片段，设计了一些PCR引物，应选用的PCR引物是 (从引物①②③④中选) DNA序列(虚线处省略了部分核苷酸序列) 已知序列 PCR引物 ①5′AACTATGCGCTCATGA3′ ②5′GCAATGCGTAGCCTCT3′ ③5′AGAGGCTACGCATTGC3′ ④5′TCATGAGCGCATAGTT3′ ①③ 拟南芥数据库https://www.arabidopsis.org/ S z L w h 一、目的基因的筛选与获取 DNA复制 PCR技术 场所 遵循原则 条件 解旋方式 酶 特点 结果 碱基互补配对原则 碱基互补配对原则 模板、4种脱氧核苷酸、酶、能量、RNA引物 模板、4种脱氧核苷酸、酶、能量、DNA引物(2种） DNA在高温下热变性解旋 解旋酶催化 半保留复制、边解旋边复制 半保留复制、全解旋再复制 体外复制 细胞内（主要在细胞核内） 大量的DNA片段 形成整个DNA分子 耐高温的DNA聚合酶 解旋酶、DNA聚合酶等 S z L w h 二、基因表达载体的构建 能否将获得的目的基因直接导入受体细胞？为什么？ 不能，因为单独的DNA片段——目的基因是不能稳定遗传的。构建基因的表达载体使为了使目的基因在受体细胞中稳定存在，并能够稳定遗传给下一代，同时使目的基因能够表达和发挥作用。 这就需要构建基因表达载体，这一步是培育转基因抗虫棉的核心工作。 构建基因表达载体是基因工程的核心步骤！ S z L w h 二、基因表达载体的构建 是目的基因与载体结合形成的重组DNA分子。 目的基因：人们所需要的基因 组成要件 概念 启动子 有时候为了满足应用需要，会在载体中人工构建诱导型启动子，当诱导物存在时，可以激活或抑制基因的表达。 位置：目的基因上游 功能： RNA聚合酶识别和结合的位点 驱动基因的转录 终止子 位置：目的基因下游 功能：终止转录 标记基因：用于目的基因的检测与筛选 场所 体外进行 S z L w h 二、基因表达载体的构建 1. 用一定的限制酶切割载体，使它出现一个切口； 2. 用相同的限制酶或产生相同黏性末端的限制酶切割含有目的基因的DNA片段； S z L w h 二、基因表达载体的构建 3. 利用DNA连接酶将目的基因片段拼接到载体的切口处，这样形成了一个重组DNA分子。 + DNA连接酶 S z L w h 二、基因表达载体的构建 培育抗虫棉的简要过程 载体 自身环化 片段间 的连接 目的基因自身环化 质粒自身环化 目的基因与质粒连接 目的基因与目的基因连接 质粒与质粒连接 正向连接 反向连接 目的基因 1 1’ 2 2’ 1 2 2’ 1’ 2 2’ 1’ 1 单酶切缺点： 思考：如果用同一种限制酶分别切割目的基因和质粒，再用DNA连接酶处理后会出现几种产物？(只考虑两两结合) ①质粒、目的基因自身环化；②质粒与目的基因反向连接 3 种 S z L w h 三、将目的基因导入受体细胞 导入植物细胞 导入动物细胞 导入微生物细胞 农杆菌转化法（常用） 基因枪法（单子叶植物常用） 花粉管通道法 2.将目的基因导入受体细胞的方法： ——显微注射法 —— Ca2+转化法 （我国科学家独创） 1. 转化的概念： 目的基因进入 内，并且在受体细胞内 和 的过程。 受体细胞 维持稳定 表达 S z L w h 三、将目的基因导入受体细胞 花粉管通道法（我国独创）（植物细胞） ②在植物授粉后一定时间内，剪去柱头，将DNA溶液(含目的基因）滴在花柱切面，使目的基因通过花粉管通道进入胚囊。 ①用微量注射器将含目的基因的DNA溶液直接注入子房中； 简便经济，但要求花朵较大 方法： 实例： 优缺点： 我国“转基因抗虫棉” 子房 植物花粉在柱头上萌发后，花粉管要穿过花柱直通胚囊。 S z L w h 三、将目的基因导入受体细胞 农杆菌转化法（常用）（植物细胞） 能在自然条件下感染双子叶植物和裸子植物，对大多数单子叶植物没有感染能力。随着转化方法的突破，用农杆菌侵染水稻、玉米等多种 植物也取得了成功。 农杆菌细胞内含有 ，当它侵染植物细胞时，Ti质粒的 可转移至被侵染的细胞，并整合到该细胞的 。 2.转化原理： 1.农杆菌的特点： T-DNA Ti质粒 大型环状DNA 农杆菌 T-DNA 染色体DNA上 单子叶 Ti质粒 构建基因表达载体时，目的基因该插到Ti质粒哪里？ T—DNA上 S z L w h T-DNA 目的基因 构建表达载体 含目的基因的重组Ti质粒 转入农杆菌 含重组Ti质粒的农杆菌 导入植物细胞 表现出新性状的植物 植物细胞 将目的基因插入染色体DNA中 植物组织培养 据图可知，目的基因发生了几次拼接和导入？ 三、将目的基因导入受体细胞 S z L w h 三、将目的基因导入受体细胞 3.过程： 农杆菌转化法中的两次拼接和两次导入 ① 两次拼接：第一次拼接是将目的基因拼接到Ti质粒的T-DNA上。 第二次拼接(非人工操作)是指含目的基因的T-DNA被拼接到受体细胞的染色体DNA上。 ②两次导入：第一次导入是将含目的基因的Ti质粒重新导入农杆菌。 第二次导入(非人工操作)是指含目的基因的T-DNA导入受体细胞。 S z L w h 三、将目的基因导入受体细胞 显微注射法（动物细胞） 科学家用病毒DNA与目的基因一起构建的载体，去感染受体动物细胞，也能使目的基因导入动物细胞内，如腺病毒载体等。 病毒侵染法 将含目的基因的表达载体提纯 受精卵 显微注射 含目的基因的受精卵 具有新性状的动物 雌性动物输卵管或子宫 胚胎移植 早期胚胎 S z L w h 三、将目的基因导入受体细胞 细胞 处理大肠杆细胞 Ca2+ 感受态 与感受态细胞混合 细胞吸收DNA分子 基因表达载体 使细胞处于一种能够吸收周围环境中的DNA分子的生理状态。 注：原核生物作为受体细胞产生的真核生物的蛋白质通常没有生物活性，需要在体外进行再加工。 Ca2+转化法（微生物细胞） 增加细菌细胞膜的通透性 因为没有内质网、高尔基体 对蛋白质进一步加工。 S z L w h 四、目的基因的检测与鉴定 （一）分子水平检测 1. 通过PCR技术或分子杂交技术检测受体细胞染色体DNA上是否插入了目的基因； 2. 通过PCR技术或分子杂交技术检测目的基因是否转录出mRNA； mRNA 逆转录酶 cDNA DNA聚合酶 DNA PCR扩增检测 3.检测目的基因是否表达出蛋白质：提取蛋白质，用相应的抗体进行抗原—抗体杂交反应。 （二）个体生物学水平鉴定 抗性检测： 功能活性比较： 抗虫、抗病接种实验； 基因工程产品与天然产品的功能活性比较 ——检测是否具有抗性以及抗性强度等 S z L w h 四、目的基因的检测与鉴定 1. 检测转基因生物染色体DNA上是否插入了目的基因 方法1：PCR扩增 转基因生物 提取DNA DNA作为模板 PCR操作 M：marker；1-阳性质粒； 2：原始品系；3-9转Bt品系； 转Bt基因品系PCR琼脂糖凝胶电泳检测结果 DNA半保留复制 原理： 是否扩增出目的基因 电泳操作 引物如何设定？ S z L w h 四、目的基因的检测与鉴定 1. 检测转基因生物染色体DNA上是否插入了目的基因 酶切 转膜 标记的DNA/RNA探针 DNA分子杂交（Southern-blot)流程图 方法2： DNA分子杂交技术 碱基互补配对 原理： S z L w h 四、目的基因的检测与鉴定 2. 检测目的基因是否转录出了mRNA 方法：PCR扩增或分子杂交技术 转基因生物 提取RNA RNA作为模板 PCR操作 电泳 是否扩增出目的基因 逆转录 cDNA 提取RNA 转膜 标记的DNA/RNA探针 RNA RNA分子杂交(Northern Blot)流程图 S z L w h 四、目的基因的检测与鉴定 3.检测目的基因是否翻译成蛋白质 方法： 抗原与抗体的特异性结合 原理： 苏云金芽孢杆菌 提取 Bt抗虫蛋白 注射小鼠体内 抗体 标记抗体 提取蛋白 电泳分离 抗原 抗体 杂交 转基因生物 放射性检测 （杂交带） 过程：提取转基因植物的蛋白质+相应抗体 → 是否出现杂交带 抗原— 抗体杂交技术 S z L w h 四、目的基因的检测与鉴定 （二）个体生物学水平鉴定 没有抗虫基因的棉花植株 有抗虫基因的棉花植株 棉铃虫没有死亡 棉铃虫死亡 接种 棉铃虫 转Bt基因 非转基因 S z L w h 课堂小结 基因工程的基本操作步骤 获取质粒、噬菌体等载体 筛选和获取目的基因 用限制酶切割载体和含有目的基因的DNA片段，然后用DNA连接酶连接，构建基因表达载体 将含有目的基因的表达载体导入受体细胞 检测和鉴定目的基因是否稳定维持和表达其遗传特性 S z L w h 目的基因的筛选与获取 目的基因的筛选：从已知结构与功能清晰的基因中筛选 目的基因的获取：基因文库法、PCR技术、生物组织获取 将目的基因导入受体细胞 植物：花粉管通道法、农杆菌转化法； 动物：显微注射法；微生物：Ca2+处理法 PCR技术所需条件 PCR技术的操作过程 基因表达载体的构建 构建基因表达载体的过程 基因表达载体的组成要件 目的基因的检测与鉴定 分子水平的检测与鉴定 个体水平的检测与鉴定 课堂小结 S z L w h 2018年11月26日，南方科技大学副教授贺建奎在第二届国际人类基因组编辑峰会召开前一天宣布，一对名为露露和娜娜的基因编辑婴儿本月在中国健康出生。这对双胞胎的一个基因经过修改，使他们出生后能够天然抵抗艾滋病。 消息一出便震惊社会，引发了科学界的同声斥责以及对科学伦理与研究安全性的担忧。 安全？ 伦理？ 社会公平？ 对待基因工程：应严格规范操作流程，科学客观评估风险！ 基因工程评估与发展 S z L w h 练习∙反馈 1.某植物的A基因是一个受低温等因素 诱导表达的基因，其表达产物A蛋白是 该种植物获得耐寒性不可或缺的一种 防冷冻蛋白。科研小组欲利用A基因 培育转基因抗冻番茄新品种。A基因 上的两个限制酶切割位点及载体结构如图所示，回答下列问题： (1)研究人员用限制酶EcoRⅠ切出的末端Ⅰ为 ，用限制酶SmaⅠ切出的末端Ⅱ为 ，请依次写出这两种限制酶的识别序列，并用箭头标出切割位点： S z L w h 练习∙反馈 (2)利用PCR扩增目的基因时，需向反应体系中加入两种引物，引物的作用 是 。图中启动子的作用是 。 (3)A基因转录时以图一中α链为模板链，mRNA自身的延伸方向为（5'—3'。A基因应插入图二中 （填“启动子甲”或“启动子乙”）的下游，并且酶切位点 （填“1”或“2”）离该启动子更近些。 (4)基因工程育种与杂交育种相比具有 的 优势，与诱变育种相比具有 的 优势。 使DNA聚合酶能够从引物的3’端开始连接脱氧核苷酸 RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动基因转录 启动子乙 2 克服远缘杂交不亲和的障碍 可以定向改造生物的遗传性状 S z L w h 练习∙反馈 (5)为使甘蓝具有抗除草剂能力，科研人员将除草剂草甘膦抗性基因转入甘蓝植株，获得抗草甘膦转基因甘蓝。回答下列问题： a.草甘膦抗性基因一条链的两端序列如图1所示，采用PCR技术获取和扩增草甘膦抗性基因时应选用的2种引物序列是 （标出5'端和3'端）。若初始加入1个草甘膦抗性基因，则历经4次PCR循环需要消耗引物数量为 个。 5′-CTTGGATGAT-3'和5'-TCTGTTAAT-3' 30 S z L w h 练习∙反馈 b.图2中步骤③将农杆菌与甘蓝愈伤组织共培养后，在步骤④的培养基中添加 以便筛选出含目的基因的甘蓝植株。添加此抗生素而不选用添加另一种抗生素筛选的原因 。 c.若要检测转基因甘蓝植株是否产生抗除草剂蛋白，所用的方法是 。 抗原—抗体杂交 潮霉素 由图可知潮霉素抗性基因在T-DNA片段中，卡那霉素抗性基因不在T-DNA片段中，所以潮霉素抗性基因可随T-DNA转移到被侵染的细胞，并且随其整合到该细胞的染色体DNA上，从而使含目的基因的甘蓝植株有抗潮霉素的抗性，所以能在含潮霉素的培养基上筛选含目的基因的甘蓝植株 S z L w h 谢谢观看! 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