2.2.2动物细胞融合技术与单克隆抗体课件-2024-2025学年高二下学期生物人教版选择性必修3

导（5min） 知识回顾： 1.动物细胞培养的原理、选材(及其原因)、目的、条件分别是什么？ 2.如何创造无菌、无毒的环境？ 3.动物细胞培养的温度、PH分别是多少？O2、CO2的作用分别是什么？ 4.说出动物细胞培养的过程。 5.两次胰蛋白酶处理的目的分别是什么？ 6.悬浮细胞和贴壁细胞分裂受阻的原因分别是什么？ 7.传代培养时悬浮细胞和贴壁细胞收集的方法分别是什么？ 8.胚胎干细胞和成体干细胞的特点分别是什么？ 浚县一中博奥级部2022级 细胞工程 第 2 章 第 2 节 动物细胞工程　 第二课时 动物细胞融合技术与单克隆抗体 课 型：新授课 导（5min） 植物体细胞杂交技术跨越不同种植物之间生殖隔离的屏障，克服远缘杂交不亲和的障碍，培育出新的作物类型。　　　　　 回顾—植物体细胞杂交技术 导（5min） 那么，有没有技术能让不同种动物的体细胞进行杂交，培育出集不同细胞的优势于一身的动物细胞呢？ 动物细胞融合技术 思 浚县一中博奥级部2022级 1.完成导学案的【基础感知】部分，并将重点知识在课本上进行标注。（7min） 2.完成【深入学习】中的实验步骤，思考相关问题。（6min） 议 在合作中解决问题 讨论重点： 导学案上的【深入学习】 要求： 拿起资料，全员参与， 求同解疑，注重效率。 浚县一中博奥级部2022级 规范用语：我提问、我回答、我质疑、 我纠错、我补充 展（8min） 浚县一中博奥级部2022级 评（6min） 浚县一中博奥级部2022级 1.概念： 2.结果： 形成的具有原来 的 细胞，称为 。 单核 两个或多个细胞遗传信息 杂交细胞 3.原理： 细胞膜的流动性 一、动物细胞融合技术 4.融合方法： 与植物原生质体融合的方法相同 物理方法： 动物细胞没有细胞壁，可以直接诱导融合。 电融合法、离心法 化学方法： 聚乙二醇（PEG）法 生物方法： 灭活病毒诱导法 ——动物细胞融合特有 原理 ? 评（6min） 浚县一中博奥级部2022级 5.构建动物细胞融合模型： ①融合过程:细胞膜融合→细胞质融合→ ________融合。 ②融合后的杂交细胞经过__________后仍能形成两个完整的杂交细胞。 动物细胞A 动物细胞B 膜融合、质融合、核融合 动物细胞培养 杂交细胞（单核） 物理、化学、生物法诱导 细胞核 有丝分裂 动物细胞融合的实质及完成的标志 一、动物细胞融合技术 评（6min） 浚县一中博奥级部2022级 6. 意义： 7. 应用： 突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交（种间、属间、科间、动植物之间）成为可能。 成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段。特别是利用杂交瘤技术制造单克隆抗体。 一、动物细胞融合技术 评（6min） 浚县一中博奥级部2022级 植物体细胞杂交 动物细胞融合 原理 细胞融合前的处理方法 诱导细胞融合的方法 细胞融合成功的标志 主要用途 意义 细胞膜的流动性、 植物细胞的全能性 用果胶酶和纤维素酶去除细胞壁 用胰蛋白酶或胶原蛋白酶使细胞分散成单个细胞 电融合法、离心法；聚乙二醇（PEG）融合法、高Ca2+-高pH融合法 PEG融合法、电融合法、 灭活病毒诱导法 再生出细胞壁 细胞核的融合 获得完整的杂种植株 主要用于制备单克隆抗体 打破生殖隔离，实现远缘杂交育种，培育植物新品种 突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能 一、动物细胞融合技术 细胞膜的流动性 评（6min） 浚县一中博奥级部2022级 二、单克隆抗体及其应用 早期获得抗体的方法： 制备的抗体产量低，纯度低，特异性差 反复 注射 动物体内 抗原 多种浆细胞 多种抗体（血清） 每一个浆细胞只能产生一种特异性抗体 体内产生的特异性抗体多达百万种 缺点 但每一个淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。因此，要想获得大量的单一抗体，必须克隆单一的B淋巴细胞，形成细胞群。 一个B淋巴细胞 B淋巴细胞群 单克隆抗体 克隆 产生 评（6min） 浚县一中博奥级部2022级 基本思路 一种B淋巴细胞 （只产生一种特定抗体） 能在体外大量增殖的骨髓瘤细胞 融合 杂交瘤细胞 产生足够数量的特定抗体 大量 增殖 单克隆抗体 单克隆抗体：由单个B淋巴细胞经过克隆（无限增殖），形成基因型相同的细胞群，这一细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体。 既能大量增殖，又能产生专一的抗体 二、单克隆抗体及其应用 评（6min） 浚县一中博奥级部2022级 二、单克隆抗体及其应用 第一次筛选 杂交瘤细胞 (既能大量增殖，又能产生专一的抗体) 多种杂交细胞 在培养液中加入氨基嘌呤，收集杂交瘤细胞！ 小资料：细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基嘌呤阻断。 ①人淋巴细胞中有这两种DNA的合成途径，但一般不分裂增殖。 ②鼠骨髓瘤细胞中只有D途径，没有S途径，可是能不断分裂增殖。 目的：筛选杂交瘤细胞 方法：用特定的选择培养基进行培养 评（6min） 浚县一中博奥级部2022级 对上述经选择培养的杂交瘤细胞进行克隆化培养和抗体检测，经多次筛选，就可获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞。 抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞 杂交瘤细胞 筛选原理：抗原抗体的特异性结合 二、单克隆抗体及其应用 第二次筛选 目的：筛选能产生所需抗体的杂交瘤细胞 评（6min） 浚县一中博奥级部2022级 将杂交瘤细胞群稀释， 约每孔1个进行培养（克隆化培养） 一段时间后，用标记的抗原检测每个小孔上清液里是否含有我们需要的特异性的抗体（抗原抗体能结合即为阳性孔） 经过多次克隆化培养和筛选， 就能选出抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞（AB3） AB1、AB2、AB3 …… 二、单克隆抗体及其应用 第二次筛选 方法：克隆化培养和抗体检测 评（6min） 浚县一中博奥级部2022级 抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞 体外培养 注射到小鼠腹腔内 将抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞在体外条件下大规模培养，或注射到小鼠腹腔内增殖。 单克隆抗体 从细胞培养液或小鼠腹水中获取大量的单克隆抗体。 细胞培养液提取 小鼠腹水中提取 二、单克隆抗体及其应用 特点: 特异性强、灵敏度高、可大量制备 评（6min） 浚县一中博奥级部2022级 项目 第一次筛选 第二次筛选（需要多次筛选） 筛选原因 方法 筛选结果 诱导融合后得到多种杂交细胞，还有未融合细胞等 用特定的选择培养基进行筛选：未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡，只有融合的杂种细胞才能生长。 筛选出融合的杂种细胞 选择培养获得的杂交瘤细胞中有能产生其他抗体的细胞。 用96孔板培养，在每个孔中尽量接种一个杂交瘤细胞的情况下进行克隆化培养和抗体检测，经过多次筛选得到足够数量的能产生所需抗体的杂交瘤细胞。 筛选出产生所需抗体的杂交瘤细胞 二、单克隆抗体及其应用 评（6min） 浚县一中博奥级部2022级 项目 腹腔培养 体外培养 优点 缺点 易于控制培养条件（如无需提供无菌环境等），操作简单，成本较低 规模小，产量少 可大规模培养，大量生产 需要人为控制培养条件，成本相对较高 二、单克隆抗体及其应用 评（6min） 单克隆抗体的制备过程 诱导融合 选择培养基 克隆化培养，专一抗体检验 体外培养或小鼠腹腔内增殖 动物细胞融合 动物细胞培养 给小鼠注射特定的抗原蛋白 B淋巴细胞（免疫） 骨髓瘤细胞 杂交细胞 杂交瘤细胞 单克隆抗体 能分泌所需抗体 的杂交瘤细胞 第一次筛选 第二次筛选 细胞增殖 细胞膜的流动性 评（6min） 浚县一中博奥级部2022级 1、诊断试剂——最广泛应用 抗原-抗体杂交法 抗人绒毛促性腺激素单克隆抗体 单克隆抗体的应用 具有准确、高效、简易、快速特点. 诊断优点： 原因：单克隆抗体能准确识别抗原的细微差异，与特定抗原发生特异性结合，并且可以大量制备。 女性怀孕后会分泌一种糖蛋白——人绒毛膜促性腺激素（HCG），尿液中会检出HCG的存在。用抗HCG单克隆抗体制备的试纸可以测试女性是否怀孕。 评（6min） 乙肝测定试剂 艾滋病检测试剂 评（6min） 浚县一中博奥级部2022级 2、用于治疗疾病和运载药物 (主要用于癌症的治疗) 单克隆抗体： (1)特异性强、灵敏度高 生物导弹 单抗 抗癌药物 (2)疗效高、毒副作用小 ： 不损伤正常细胞，减少剂量 靶向运输作用，即通过特异性结合靶细胞表面的抗原，将连接的药物输送到靶细胞。 抗癌药物： 发挥治疗效应，如杀伤靶细胞 单克隆抗体的应用 结（3min） 浚县一中博奥级部2022级 遗传信息 课堂检测：导学案判断题 Lavf58.20.100 Bilibili VXCode Swarm Transcoder v0.6.37 Lavf58.20.100 Bilibili VXCode Swarm Transcoder v0.7.6 $$