第2节 微生物的培养技术及应用-【创新教程】2021-2025五年高考真题生物分类特训

５．D　食用醋的酸味主要来自醋酸,醋 酸 学 名 乙 酸,A 正 确;醋酸菌是好氧型细菌,不适宜在无氧的条件下生存, B正确;制醋时,在缺失原料的情况下,醋酸菌将乙醇变 为乙醛,再将乙醛变为醋酸,因此醋酸菌体内含有催化 乙醇氧化成乙酸的酶,C正确;醋酸菌属于细菌,没有核 膜包 被 的 细 胞 核 和 众 多 细 胞 器,因 此 没 有 线 粒 体, D错误. ６．C　泡菜的制作原理:泡菜的制作离不开乳酸菌.在无 氧条件下,乳酸菌将葡萄糖分解成乳酸. (１)泡菜的制作流程是:选择原料、配置盐水、调味装坛、 密封发酵. (２)选用火候好、无裂纹、无砂眼、坛沿深、盖子吻合好的 泡菜坛. (３)原料加工:将新鲜蔬菜修整、洗涤、晾晒、切分成条状 或片状. (４)配制盐水:按照比例配制盐水,并煮沸冷却.原因是 为了杀灭杂菌,冷却之后使用是为了保证乳酸菌等微生 物的生命活动不受影响. (５)泡菜的制作:将经过预处理的新鲜蔬菜混合均匀,装 入泡菜坛内,装 至 半 坛 时,放 入 蒜 瓣、生 姜 及 其 他 香 辛 料,继续装至八成满,再徐徐注入配制好的盐水,使盐水 没过全部 菜 料,盖 好 坛 盖.在 坛 盖 边 沿 的 水 槽 中 注 满 水,以保证坛内乳酸菌发酵所需的无氧环境.在发酵过 程中要注意经常补充水槽中的水. A．①沸盐水冷却后再倒入坛中,是为了杀灭杂菌,冷却 之后使用是为了保证乳酸菌等微生物的生命活动不受 影响,A错误;B．②盐水需要浸没全部菜料,造成无氧环 境,有利于乳酸菌无氧呼吸,B错误;C．③盖好坛盖后, 向坛盖边沿的水槽中注满水,是排气减压、隔绝空气、防 止杂菌污染等,C 正确;D．④检测泡菜中亚硝酸盐的含 量,腌 制 泡 菜 过 程 中 亚 硝 酸 盐 的 含 量 先 增 多 后 减 少, D错误. ７．AB　果酒与啤酒的发酵原理均是酵母菌在无氧条件下 进行无氧呼吸产生酒精. A．二者均利用了酵母菌进行无氧呼吸产生酒精的原理, A正确;B．发酵前期,均需要一定的有氧环境,使酵母菌 大量繁殖,B正确;C．果酒的家庭制作不需对原料进行 灭菌,C 错 误;D．果 酒 的 家 庭 制 作 不 需 要 进 行 消 毒, D错误. ８．D　A．由于酿酒酵母不能直接利用淀粉发酵产生酒精 (乙醇),故糖化过程主要是利用霉菌分泌的淀粉酶将淀 粉分解为葡萄糖,以供发酵利用,A 正确;B．发酵液样品 的蒸馏产物有无酒精,可用酸性重铬酸钾溶液检测,若 存在酒精,则酒精与酸性的重铬酸钾反应呈灰绿色,B正 确;C．酿造过程中应在无氧条件下进行,若密封不严,会 导致醋酸 菌 在 有 氧 条 件 下 发 酵 产 生 醋 酸 而 使 酒 变 酸, C正确;D．蒸 熟 并 摊 晾 的 原 料 需 要 冷 却 后 才 可 加 入 糟 醅,以免杀死菌种,且需要在有氧条件下培养一段时间, 让酵母菌大量繁殖,此后再密封进行酒精发酵,D错误. ９．C　A．酒精发酵是利用酵母菌的无氧呼吸,随着果酒发 酵的进行,装置内会产生气体(二氧化碳),容器内压强 大于外界,所以空气不会回流,A 错误;B．果酒发酵时, 发酵液中的葡萄糖不断被消耗,因此用斐林试剂检测葡 萄汁中还原糖含量变化,砖红色沉淀逐日减少,B错误; C．以酒精为底物进行醋酸发酵,酒精与氧气发生反应产 生醋酸和水,几乎没有气泡产生,发酵液产生的气泡量 明显少于果酒发酵时,C 正确;D．重铬酸钾用于检测酒 精,不能用于测定醋酸含量,D错误. １０．B　A．泡菜制作过程中,主要是乳酸菌将葡萄糖分解形 成乳酸,A错误;B．做馒头或面包时,经常要用到酵母 菌,酵母菌可以进行有氧呼吸分解面粉中的葡萄糖,产 生二氧化碳和水,二氧化碳是气体,遇热膨胀而使得馒 头或面包暄软多孔,B正确;C．酵母菌在有氧条件下可 以大量繁殖,在密封也就是无氧条件下产生酒精,C错 误;D．酸奶制作过程中,后期低温处理时大部分乳酸杆 菌已死亡,不会大量繁殖,D错误. １１．B　A．当缺少糖源时,醋酸菌将乙醇变为乙醛,再将乙 醛变为醋酸,同时乙醇还可以抑制杂菌繁殖,A 正确; B．酵母菌一般以出芽的方式繁殖,醋酸杆菌以二分裂 的方式进行增殖,B错误;C．酵母菌发酵过程中先通气 使其大量繁 殖,再 密 闭 发 酵 产 乙 醇;醋 酸 杆 菌 为 好 氧 菌,需持续通入无菌氧气,C正确;D．酵母菌适宜温度 是１８~２５℃,醋酸杆菌最适温度为３０~３５℃,D正确. １２．解析:(１)大豆中含有丰富的蛋白质,可为微生物的生 长繁殖提供氮源.小麦中的淀粉可以为微生物的生长 繁殖提供碳源.(２)米曲霉在发酵过程中产生的蛋白 酶能将蛋白质分解为小分子的肽和氨基酸,产生的脂 肪酶能将脂肪分解为甘油和脂肪酸,使发酵的产物具 有独特的风味.米曲霉发酵时需要利用现有的有机物 和需要氧气,说明其代谢类型是异养好氧型.(３)乳酸 菌没有核膜包被的细胞核,属于原核生物.酵母菌属 于兼性厌氧型微生物,既可以进行有氧呼吸,也可以进 行无氧呼吸,无氧呼吸的产物是酒精和二氧化碳.在 发酵池中酵母菌产生的酒精能抑制杂菌的生长,乳酸 菌产生的乳酸使发酵液呈酸性也能抑制杂菌的生长, 同时往发酵池中添加的食盐也能抑制杂菌的生长. 答案:(１)蛋白质　碳源　(２)蛋白酶　脂肪酶　氨基 酸　异养好氧　(３)原核生物　酒精和二氧化碳 酒精、乳酸、食盐(答一个即可) １３．解析:本题考查酒精发酵和醋酸发酵的相关知识. (１)酿酒时人们利用的是果皮上天然的酵母菌进行发 酵,醋酸菌发酵果醋的条件为３０~３５℃、有氧.纯化菌 种采用平板划线法或稀释涂布平板法. (２)酿制果酒需要缺氧、呈酸性的环境,使大部分微生 物无法生长,可以提高产品的纯度和产率;果酒酿制过 程中表面形成的醋酸菌膜,是醋酸菌大量繁殖形成的, 醋酸菌增多,有利于提高果醋的产率;果酒有利于溶出 水果中的风味物质并保留在果醋中. (３)发酵液也相当于醋酸菌的培养基,要为醋酸菌的生 长提供碳源、氮源、水和无机盐,酒精可以作为碳源,还 需要有氮源、水和无机盐.从柱状图中可看出,当初始 酒精浓度为５％~７％(或６％)时醋酸含量较高,故最适 初始酒精浓度为５％~７％(或６％).酒精浓度为１０％ 时,可以根据醋酸菌的好氧性通入无菌空气或适当提 高温度等来加大产率. 答案:(１)酵母　３０~ ３５ ℃,好氧　稀释涂布平板法 (或平板划线法) (２)①②③ (３)氮源、无机盐、水(任写两种)　５％~７％(或６％)　 增加氧气供应,适当提高温度等(合理即可) 第二节　微生物的培养技术及应用 １．ACD　根据题目信息“隐甲藻是一种好氧的异养真核微 藻,多在海水中腐烂的植物叶片上生长繁殖”可知,隐甲 藻可从腐烂的叶片获得生长必需的碳源,A 正确;采集 海水中腐烂的叶片进行湿热灭菌后,会杀死所有的微生 物,此时接种到固体培养基上无法获得隐甲藻,B错误; 根据题目信息可知,隐甲藻为真核生物,抗生素可通过 抑制细菌细胞壁合成或影响代谢过程来抑制细菌生长, 不会影响真核生物的生命活动,因此在筛选或培养隐甲 藻时,加入抗生素可有效抑制细菌杂菌,提高隐甲藻的 纯度和生长效率,C正确;根据题目信息可知,隐甲藻为 好氧生物,因此利用隐甲藻进行 DHA 发酵生产时,适当 提高发酵时的通气量和搅拌速率均可增加溶氧量,以提 高 DHA产量,D正确. ２．C　淀粉水解形成的糖类可以作为黑曲霉生存所需的碳 源,氧化分解可以为黑曲霉提供能源,A 正确;通过液体 培养基的扩大培养,可以为后续的发酵罐内发酵提供足 量的黑曲霉菌种,B正确;空气一般用过滤除菌的方式, 培养基一般用高压蒸汽灭菌的方式,发酵罐可以用高温 灭菌的方式等,因此它们的灭菌方法不相同,C错误;已 知利用黑曲霉通过深层通气液体发酵技术生产柠檬酸, 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 ２３２ 最新真题分类特训􀅰生物学 说明通气、搅拌有利于溶解氧增加,有利于发酵产物柠 檬酸的积累,D正确. ３．B　制备的培养基需用高压蒸汽灭菌法灭菌,紫外线仅 用于表面或空气消毒,无法灭菌,A 错误;将土样加入无 菌水制成悬液,经梯度稀释后,取各稀释度菌液涂布于 培养基表面,分离并计数,B正确;连续划线时,每次应从 上次划线的末端开始,以逐步稀释菌体,若从起始端开 始无法有效分离单菌落,C错误;斜面培养基保存菌种需 置于４℃短期保存,长期保存应使用甘油管藏法(－２０℃), 室温下无法长期保存,D错误. ４．D　以金霉素为唯一碳源的选择培养基,仅允许能利用 金霉素的微生物生长(其他无法利用金霉素的微生物被 抑制),符合选择培养基的设计原理,A 正确;逐步提高 金霉素浓度可模拟环境胁迫,筛选出耐受性更强的菌株 (类似“驯化”过程),B正确;培养基的pH 需根据目标微 生物的生长需求调整(如细菌通常中性偏碱,真菌偏酸 性),是配制培养基的基本要求,C正确;稀释涂布平板法 需用涂布器将菌液均匀涂布在培养基表面,而接种环用 于平板划线法(分离单菌落).用接种环涂布无法保证 菌液均匀,D错误. ５．D　１．培养基是人们按照微生物对营养物质的不同需 求,配制出供其生长繁殖的营养基质,是进行微生物培 养的物质基础. ２．按照培养基的用途,可将培养基分为选择培养基和鉴 定培养基.选择培养基是指在培养基中加入某种化学 物质,以抑制不需要的微生物生长,促进所需要的微生 物的生长. ３．消毒和灭菌是两个不同的概念,消毒是指使用较为温 和的物理、化学或生物的方法杀死物体表面或内部的一 部分微生物.灭菌则是指使用强烈的理化方法杀死物 体内外所有的微生物,包括芽孢和孢子. A．不含氮源的平板可用于固氮菌的培养,A 错误;B．平 板涂布时涂布器使用前必须浸在酒精中,然后在火焰上 灼烧 灭 菌,这 种 操 作 属 于 灭 菌,不 属 于 消 毒,B 错 误; C．使用后的培养基即使未长出菌落也要在丢弃前进行 灭菌处理,不能直接丢弃,以免污染环境,C错误;D．脲 酶可以催化尿素分解,在以尿素为唯一氮源的平板上, 能合成脲酶的微生物可以分解尿素获得氮源而进行生 长繁殖,但是不能合成脲酶的微生物因缺乏氮源而无法 生长,因此以尿素为唯一氮源的平板能分离出合成脲酶 的微生物,D正确. ６．C　本题考查食品保存的方法等知识,意在考查考生的 识记能力.干制能降低食品中的含水量,使微生物不易 生长和繁殖,进而延长食品保存时间,A 叙述正确;腌制 通过添加食盐、糖等制造高渗环境,使微生物失水过多, 进而抑制微生物的生长和繁殖,B叙述正确;低温保存可 以抑制微生物的生命活动,但不是温度越低越好,一般 食品保存温度为零上低温,C叙述错误;高温处理可杀死 食品中绝大部分微生物,并通过破坏食品中的酶类,降 低酶类对食品有机物的分解,有利于食品保存,D 叙述 正确. ７．D　筛选能高效降解羽毛、蹄角等废弃物中角蛋白的嗜 热菌,要用角蛋白氮源培养基.研究目的是筛选能高效 降解羽毛、蹄角等废弃物中角蛋白的嗜热菌,因此既要 耐高温,又要能够高效降解角蛋白,所以在c点取样,并 且用 角 蛋 白 氮 源 培 养 基 进 行 选 择 培 养,所 以 D 正 确, ABC错误. ８．C　A．用免洗酒精凝胶擦手属于消毒,A 错误;B．制作 泡菜前用开水烫洗容器属于消毒过程,B错误;C．在火 焰上灼烧接种环能达到灭菌目的,C正确;D．防疫期间 用石炭酸喷洒教室,属于消毒,D错误. ９．B　A．根据题干信息“甲菌菌落周围呈现深蓝色”,说明 甲可以分泌脂肪酶将脂肪分解成甘油和脂肪酸,脂肪酸 会使醇溶青 琼 脂 平 板 变 为 深 蓝 色,因 此 甲 菌 属 于 解 脂 菌,A正确;B．乙菌菌落周围没有出现深蓝色,说明乙菌 落不能产生脂肪酶,不能利用脂肪为其供能,但乙菌菌 落也可以在培养基上生存,说明该培养基不是以脂肪为 唯一碳源,B错误;C．可将两种菌分别接种在同一平板 的不同区域进行对比,更加直观,C正确;D．可以利用该 平板来比较解脂菌分泌脂肪酶的能力,观察指标可以以 菌落周围深蓝色圈的大小,D正确. １０．B　图中是穿刺接种的方法,根据题干中的信息“硫化 氢可以与硫酸亚铁铵结合形成黑色沉淀”,所以根据黑 色沉淀的多少,比较两种菌产生硫化氢的能力.A．从 图中可以看出甲菌在试管中分布范围小于乙菌,说明 了乙菌的运动能力比甲菌强,A 正确;B．为不影响菌的 运动需选用半固体培养基,B错误;C．该实验可以根据 黑色沉淀的多少初步比较细菌产生硫化氢的能力,但 不能测定产生硫化氢的量,C正确;D．微生物接种技术 的核心是防止杂菌的污染,D正确. １１．解析:(１)显微镜直接计数法把死菌和活菌一起计数. 菌落计数法计数只计活菌数,还可能存在多个活菌形 成一个菌落的情况,故前者的数量多于后者. (２)从１００mL细菌原液中取１mL加入无菌水中得到 １０mL稀释菌液,即稀释了１０倍,１mL细菌原液中细菌 浓度＝ (菌 落 数 ÷ 菌 液 体 积)× 稀 释 倍 数 ＝ (１００÷ ２００μL)×１０个＝５０００个/mL. (３)菌落计数过程中,涂布器应先在酒精灯上灼烧,冷 却后再涂布.灼烧的目的是杀死涂布器上可能存在的 微生物,防止涂布器上可能存在的微生物污染,冷却的 目的是防止温度过高杀死菌种. (４)A消毒液活菌数减少量最多,且杀菌时间较短,效 率最高,因此 A消毒液杀菌效果最好. (５)大肠杆菌在伊红美蓝培养基上生长的菌落呈黑色. 答案:(１)前者微生物分散的活菌和死菌一起计数,后 者存在多个活菌形成一个菌落的情况且只计数活菌 (２)５０００ (３)杀死涂布器上可能存在微生物,防止涂布器上可能 存在的微生物污染　防止温度过高杀死菌种 (４)A　A消毒液活菌数减少量最多,且杀菌时间较短, 效率最高 (５)黑 １２．解析:围绕微生物的培养和酒精发酵展开,同时强调社 会责任感,解决实际问题. (１)菌 T能够将纤维素变成酵母菌发酵所需的葡萄糖, 利用的是具有高效性的酶. (２)氮元素是构成体内一些物质的必需元素,氮源就是 给微生物提供合成该物质的原材料.高压蒸汽灭菌的 注意事项包括①待灭菌的物品放置不宜过紧;②必须 将冷空气充分排除再开始加压;③装入的等灭菌物品 不要过多;④锥形瓶与试管口不要与桶壁接触􀆺􀆺,合 理即可. (３)密闭环境一方面不接触空气杂菌,另一方面保证无 氧环境用以酒精发酵.酵母菌无氧呼吸产生乙醇的同 时还会产生二氧化碳,拧松瓶盖可以释放二氧化碳,防 止容器压力过大爆炸,酸性条件下重铬酸钾溶液可以 用来鉴定酒精. (４)纤维素分解产生的是葡萄糖可以用来作为发酵原 材料,从社会责任感角度和实际生产角度出发分析即 可,如减少粮食消耗,生产成本低,能同时处理秸秆,保 护环境等. 答案:(１)菌 T能够产生分解纤维素的酶,能够高效催 化纤维素分解 (２)用于合成氨基酸、核苷酸等含氮物质 ①待灭菌的物品放置不宜过紧;②必须将冷空气充分 排除再开始加压 (３)保证密闭环境,防止杂菌进入,同时营造无氧条件 　释放酵母菌无氧呼吸产生的二氧化碳,防止瓶内压 力过大　酸性条件下重铬酸钾 (４)葡萄糖　减少粮食消耗,生产成本低,能同时处理 秸秆,保护环境 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 ３３２ 详解详析 １３．解析:(１)在微生物学中将接种于培养基内,在合适条 件下形成的含特定种类微生物的群体称为纯培养物. 由单一个体繁殖所获得的微生物群体,对于本实验来 说就是根瘤菌繁殖得到的单菌落. 答案:(１)由根瘤菌繁殖形成的单菌落 １４．解析:本题考查微生物的筛选、动物细胞培养等知识, 意在考查考生的实验探究能力与分析能力.(１)由题 意可知,根际促生菌具有固氮作用,因此用于筛选能分 解淀粉的 根 际 促 生 菌 的 培 养 基 的 主 要 营 养 物 质 包 括 水、无机盐和淀粉.(２)由题表可知,在抗菌肽浓度为 ３．４５~５５．２０mg􀅰mL－１范围内,金黄色葡萄球菌和枯 草芽孢杆菌均不能生长,表明该抗菌肽对它们的抑菌 效果较好.因为抗菌肽的浓度为１．７３mg􀅰mL－１时, 它们均能生长,所以要确定抗菌肽抑菌效果的最低浓 度,应 在 １．７３~３．４５μg􀅰mL －１ 的 浓 度 区 间 进 一 步 实验. (３)在利用 A 菌株发酵生产淀粉酶 M 过程中,传代多 次后,生产条 件 未 变,但 某 子 代 菌 株 不 再 产 生 淀 粉 酶 M,可能的原因是淀粉酶编码基因 M 发生突变;或者是 能产生淀粉酶 M 的个体在产生后代时发生性状分离. (４)肺类装配体培养需要满足适宜的营养、温度、渗透 压、pH 以及无菌、无毒环境,含９５％ 空气和５％ CO２ 的气体环境等基本条件;由图示可知,肺类装配体形成 的过程中没有运用动物细胞融合技术,只涉及了细胞 的分裂和分化等内容.(５)科研人员拟用 MRSA 感染 肺类装配体建立感染模型,来探究解淀粉芽孢杆菌 H 抗菌肽是否对 MRSA 引起的肺炎有治疗潜力,必备实 验材料为:②MRSA感染的肺类装配体、③解淀粉芽孢 杆菌 H 抗菌肽、④生理盐水(设置对照实验使用)、⑥万 古霉素(抗 MRSA的药物),故选②③④⑥. 答案:(１)无机盐、淀粉　(２)金黄色葡萄球菌和枯草芽 孢杆菌　１．７３~３．４５　(３)淀粉酶编码基因 M 发生突 变;能产生淀粉酶 M 的个体产生后代时发生性状分离 (４)无菌、无毒环境,含９５％空气和５％CO２ 的气体环境 　否 (５)②③④⑥ １５．解析:第(１)问,培养基的成分有碳源、氮源、无机盐和 水,从组成培养基的物质所含化学元素可知,作为碳源 的成分是石油.生物大分子 DNA、RNA、蛋白质都含 有 N元素,故氮源在菌体 内 可 以 参 与 合 成 这 些 物 质. 第(２)问,由题意“资源和空间不受限制”可知,细菌的 增殖呈“J”型曲线增长,由于 DNA 的半保留复制,细菌 每繁殖一代就是上一代的２倍,根据公式 Nt＝N０•λt, λ＝２,繁殖 n代后细菌的数量是N０•２n.第(３)问,分 析表格数据可知,实验的结果是:在平板Ⅰ上,A 菌株 降解石油的能力高于B菌株;在平板Ⅱ上,A 菌株仍然 能降解石油,而B菌株不能降解,根据实验的单一变量 和对照原则,推测该同学的思路是:在无菌条件下,将 等量等浓度的 A菌液和B菌液分别接种到平板Ⅰ的甲 和乙两孔处,平板Ⅱ也进行同样的操作,在相同且适宜 条件下培养一段时间,比较两个平板的两孔处的透明 圈大小并作记录.第(４)问,由表格数据可知,在平板 Ⅱ(无氮源的培养基)上,A 菌株仍然能降解石油,而 B 菌株不能降解,所以要治理贫氮且被石油污染的土壤, 应该选用 A菌株,因为 A 菌株降解石油的能力高于 B 菌株,并且不需要在培养基中添加氮源也能生长. 答案:(１)石油　DNA、RNA、蛋白质 (２)N０􀅰２n　 (３)在无菌条件下,将等量等浓度的 A菌液和B菌液分 别接种到平板Ⅰ的甲和乙两孔处,平板Ⅱ也进行同样 的操作,在相同且适宜条件下培养一段时间,比较两个 平板的两孔处的透明圈大小并作记录,根据透明圈大 降解能力强、透明圈小降解能力弱来比较 A、B降解石 油的能力 (４)A　A菌株降解石油的能力高于 B菌株,并且在没 有添加氮源的培养基中也能生长 １６．解析:第(１)问,通常在实验室培养微生物时,为防止实 验用的玻璃器皿等物品中原有的微生物污染培养物, 需要使用强烈的理化因素杀死物体内外一切微生物的 细胞、芽孢和孢子,即对所需的玻璃器皿进行灭菌,玻 璃器皿常用的灭菌的方法有干热灭菌、高压蒸汽灭菌 等.第(２)问,由实验结果可知,与以制糖废液为碳源 相比,以葡萄糖为碳源时菌株 C的细胞干重最大,说明 最适于菌株 C生长的碳源是葡萄糖;而以制糖废液为 碳源时,菌株 C生产 S的产量高于以葡萄糖为碳源时 的产量,说明最适于生产 S的碳源是制糖废液.微生 物的生长一般都需要水、碳源、氮源和无机盐,还需要 满足微生物 生 长 对 pH、氧 气 以 及 特 殊 营 养 物 质 的 要 求,故菌株 C的生长除需要碳源外,还需要氮源、无机 盐、生长因子等营养物质.第(３)问,分析题图表格可 以看出在以淀粉为碳源的培养基中,菌株 C不能生长, 原因可能是菌株 C中缺少分解淀粉的酶,不能利用淀 粉.第(４)问,要测定生产 S的最适制糖废液为碳源的 浓度,实验自变量为制糖废液的浓度,可分别配制一系 列不同浓度梯度的制糖废液,再制备以制糖废液为唯 一碳源的培养基培养菌株 C,其他条件相同且适宜,一 段时间后,测定并比较不同浓度制糖废液中的 S的产 量,S产量最高时对应的制糖废液浓度,即为生产 S的 最适碳源浓度.第(５)问,利用制糖废液生产 S可以实 现废物利用,既有利于减少污染、节省原料,又能降低 生产成本. 答案:(１)高压蒸汽灭菌、干热灭菌 (２)葡萄糖　制糖废液　氮源、无机盐、生长因子 (３)缺少淀粉酶 (４)分别配制一系列不同浓度梯度的制糖废液,再制备 以制糖废液为唯一碳源的培养基培养菌株C,其他条件 相同且适宜,一段时间后,测定并比较不同浓度制糖废 液中的S的产量,S产量最高时对应的制糖废液浓度即 为生产S的最适碳源浓度 (５)减少污染、节省原料、降低生产成本 １７．解析:第(１)问,培养基通常采用高压蒸汽灭菌法进行 灭菌.可以采用稀释涂布平板法或平板划线法,将单 个微生物分散在固体培养基上,经过培养得到单菌落, 从而获得纯净培养物.分析题图可知,在以纤维素为 碳源的培养基中,细胞数量最多,可推知拟杆菌新菌株 在以纤维素为碳源时生长状况最好.第(２)问,深海冷 泉中可能存在某些微生物,只有利用冷泉中的特有物 质才能生存(或需要在深海冷泉的特定环境中才能存 活),故将采集的样品置于各种培养基中培养,仍可能 有很多微生物不能被分离筛选出来. 第(３)问,拟杆菌为异养生物,作为该生态系统的分解 者,能将沉降到深海底部的难降解多糖物质分解为无 机物,归还到无机环境中,有利于碳循环的顺利进行. 第(４)问,深海冷泉温度较低,故生活在其中的拟杆菌 所分泌的各种多糖降解酶,应具有耐低温的特性,才能 高效降解多糖,保证拟杆菌的正常生命活动所需. 答案:(１)高压蒸汽灭菌　平板划线　纤维素 (２)某些微生物只有利用深海冷泉中的特有物质才能 生存(或需要在深海冷泉的特定环境中才能存活) (３)拟杆菌作为分解者,将沉降到深海底部的难降解多 糖物质分解为无机物,归还到无机环境中,有利于碳循 环的顺利进行　(４)耐低温 １８．解析:(１)纤维素酶是一种复合酶,一般认为它至少包 括三种组分,即 C１ 酶、Cx 酶和葡萄糖苷酶,前两种酶使 纤维素分解成纤维二糖,第三种酶将纤维二糖分解成 葡萄糖.在用纤维素作为唯一碳源的培养基中,纤维 素分解菌能 够 很 好 地 生 长,其 他 微 生 物 则 不 能 生 长. 为筛选纤维素分解菌,将大熊猫新鲜粪便样品稀释液 接种至以 纤 维 素 为 唯 一 碳 源 的 固 体 培 养 基 上 进 行 培 养;培养基从功能上分类可分为选择培养基和鉴别培 养基,故该培养基从功能上分类属于选择培养基. (２)配制培养基的常用高压蒸汽灭菌,即将培养基置于 压力１００kPa、温度１２１℃条件下维持１５~３０分钟,目 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 ４３２ 最新真题分类特训􀅰生物学 的是为了杀死培养基中的所有微生物(微生物和芽孢、 孢子).为检测灭菌效果可对培养基进行空白培养,即 将未接种的培养基在适宜条件下培养一段时间,若在 适宜条件下培养无菌落出现,说明培养基灭菌彻底,否 则说明培养基灭菌不彻底.(３)为测定大熊猫新鲜粪 便中纤维素分解菌活菌数,常采用稀释涂布平板法,在 适宜的条件下对大熊猫新鲜粪便中纤维素分解菌进行 纯化并计数,对照组应该涂布等量的无菌水.将大熊 猫新鲜粪便样液稀释适当倍数后,取０．１mL涂布到若 干个平板(每个稀释度至少涂布三个平板),对菌落数 在３０~３００的平板进行计数,则可根据公式推测大熊猫 新鲜粪便中纤维素分解菌活菌数.(４)测定酶活力时 可以用单位时间内、单位体积中反应物的减少量或产 物的增 加 量 来 表 示.由 表 格 可 知,在 适 宜 的 条 件 下, C菌株在相同的温度和时间下,秸秆失重最多,纤维素 降解率最大,说明该菌株的纤维素分解菌产生的纤维 素酶活力最大. 答案:(１)C１ 酶、Cx 酶和葡萄糖苷酶　纤维素　选择　 (２)为了杀死培养基中的所有微生物(微生物和芽孢、 孢子)　不接种培养(或空白培养 )　(３)将大熊猫新鲜 粪便样液稀释适当倍数后,取０．１mL涂布到若干个平 板(每个稀释度至少涂布三个平板),对菌落数在３０~ ３００的平板进行计数,则可根据公式推测大熊猫新鲜粪 便中纤维素分解菌活菌数　(４)C　接种 C菌株后秸秆 失重最多,纤维素降解率最大 １９．解析:(１)常用高压蒸汽灭菌法处理盛有水或培养基的 摇瓶,乙为固体培养基,故需要加入 Y 琼脂;甲和乙培 养基可以用于筛选能降解 S的菌株,故均属于选择培 养基. (２)若要在每个平板上涂布１００μL稀释后的菌液,且每 个平板上长出的菌落数不超过２００个,则摇瓶 M 中的 菌液稀释的倍数至少为２×１０７÷１０００×１００÷２００＝ １×１０４ 倍. (３)当培养基中的S超过某一浓度后,可能会抑制菌株 的生长,从而造成其对S的降解量下降. (４)要测定淤泥中能降解 S的细菌的细胞数,可以取淤 泥加无菌水制成菌悬液,稀释涂布到乙培养基上,培养 后进行计数. (５)甲和乙培养基均含有水、无机盐、碳源、氮源. 答案:(１)高压蒸汽灭菌　琼脂　选择　(２)１０４ (３)S的浓度超过某一值时会抑制菌株的生长 (４)取淤泥加入无菌水中,涂布(或稀释涂布)到乙培养 基上,培养后计数 (５)水、碳源、氮源和无机盐 第十九章　细胞工程 第一节　植物细胞工程 １．B　从图中看出,黄酮产量随着细胞干重增加而增加,减 少而减少,所以黄酮产量与细胞干重呈正相关,A 正确; 黄酮属于次生代谢产物,并非细胞生存和生长所必需,B 错误;氧气参与有氧呼吸,为细胞生长、分裂和代谢提供 能量,所以氧气供给对于水母雪莲细胞生长、分裂和代 谢是必需的,C正确;７５r/min时相对生长速率、细胞干 重和黄酮产量均最高,所以转速为７５r/min时既利于细 胞分裂,又利于黄酮的积累,D正确. ２．B　流程①中,消毒效果不仅取决于消毒剂浓度,还取决 于消毒时间和消毒剂种类,A 错误;流程②不需要经过 脱分化形成 愈 伤 组 织 的 阶 段,经 腋 芽 直 接 分 化 为 丛 生 苗,B正确;流程②与流程③都是分化长出芽,故两者培 养基中细胞分裂素类与生长素类物质的比值相同,C错 误;与流程③相比,提高流程④培养基的IBA 浓度有利 于从生苗的生根,D错误. ３．C　过程①形成了愈伤组织,发生了细胞的脱分化,此时 细胞还进行有丝分裂,A 正确;过程②是愈伤组织经再 分化形成胚状体的过程,故经过再分化形成不同种类的 细胞,B正确;过程②③所有培养基的成分、浓度不完全 相同,如细胞分裂素和生长素的浓度不同,C错误;培养 基中常加入蔗糖,既能作为碳源,又与维持渗透压有关, D正确. ４．A　在植物组织培养中,生长素和细胞分裂素的比例直 接影响细胞的分化方向.当二者比例适中时,促进愈伤 组织的形成;比例过高时促进生根,比例过低时促进生 芽,A正确;培养基含大量水分,需用高压蒸汽灭菌法灭 菌(１２１ ℃,１５－２０分钟);干热灭菌法适用于耐高温且 干燥的物品(如玻璃器皿),不能用于培养基灭菌,B错 误;外植体可以是植物的任何活细胞、组织或器官,只要 具有全能性.芽原基细胞是分生组织的一部分,全能性 高,可作为 外 植 体.基 因 选 择 性 表 达 是 细 胞 分 化 的 基 础,不影响其作为外植体的能力,C错误;细胞产物的工 厂化生产正是通过植物组织培养技术实现的,如大量培 养红豆杉细胞,从培养液中提取紫杉醇.因此,紫杉醇 可通过此方法获取,植物组织培养的优势(如快速增殖、 大量生产细胞产物)在此体现,D错误. ５．BD　植物细胞壁的主要成分是纤维素和果胶,故用果胶 酶和纤维素酶去除愈伤组织的细胞壁获得原生质体,A 错误;用纤维素酶和果胶酶分别处理不同的植物细胞, 得到原生质体,运用物理方法或化学方法诱导融合,形 成杂种细胞,再利用植物组织培养技术将杂种细胞培养 成杂种植株,故融合的原生质体需再生出细胞壁后才能 形成愈伤组织,B正确;体细胞杂交获得的杂种植株细胞 中具有来自亲本的遗传物质,只有１个细胞核,C错误; 通过愈伤组织再生出多个完整植株的过程属于植物的 组织培养,从繁殖看属于无性繁殖,D正确. ６．B　酶解是为了去除植物细胞的细胞壁,过程①中酶处 理的时间不同,说明两种亲本的细胞壁结 构 有 差 异,A 正确;过程②为原生质体的融合,常用 PEG 诱导原生质 体融合,灭活的仙台病毒可诱导动物细胞融合,不能用 于植物,B错误;过程④脱分化和⑤再分化的培养基中均 需要添加生长素和细胞分裂素,但在两个过程中比例不 同,C正确;植物丙是植物甲和植物乙体细胞杂交形成的 个体,应具备两者的遗传物质,因此可通过分析植物丙 的染色体,来鉴定其是否为杂种植株,D正确. ７．B　迷迭香顶端幼嫩的茎段适合用作外植体,生长旺盛, 分裂能力较强,A正确;诱导愈伤组织时需加入 NAA 和 细胞分裂素,B错误;悬浮培养时需将愈伤组织打散成单 个细胞或较小的细胞团,获得更多的营养物质和氧气, 使得其可以进一步分裂,C正确;加入诱导剂茉莉酸甲酯 可大幅提高产量,推测茉莉酸甲酯改变了迷迭香次生代 谢产物(不是植物生长所必需的)的合成速率,D正确. ８．A　A．有些产物不能或难以通过化学合成途径得到,故 可利用该技术获得某些无法通过化学合成途径得到的 产物,A正确;B．利用植物细胞培养技术在离体条件下 对单个细胞或细胞团进行培养使其增殖,可获得植物细 胞的某些次生代谢物,故可通过该技术进行植物细胞产 物的工厂化生产,B错误;C．次生代谢产物不是植物生 长所必需的,其含量少,可以通过增加细胞的数量来增 加次生代谢产物的产量,C 错误;D．细胞产物的工厂化 生产主要是利用促进细胞分裂的培养条件,提高了多个 细胞中次生代谢物的含量,不能提高单个细胞中次生代 谢物的含量,D错误. ９．C　植物体细胞杂交技术:就是将不同种的植物体细胞 原生质体在一定条件下融合成杂种细胞,并把杂种细胞 培育成完整植物体的技术.A．在细胞融合前,必须先用 纤维素酶和果胶酶去除细胞壁,再诱导原生质体融合, A正确;B．人工诱导原生质体融合有物理法和化学法, 用高 Ca２＋ —高 pH 溶液可促进细胞融合,B正确;C．融 合的细胞中有人参根－人参根细胞、人参根－胡萝卜根 细胞、胡萝卜根－胡萝卜根细胞,只有人参根－胡萝卜 根细胞才是杂交细胞,C 错误;D．杂交细胞含两种细胞 的遗传物质,可能具有生长快速的优势,D正确. １０．D　A．植物组织培养过程中应注意无菌操作,为获得无 菌培养物,外植体要经过表面消毒处理后,才能进行培 养,所用的培养基必须彻底灭菌,A 正确;B．组织培养 过程中也可无明显愈伤组织形成,直接形成胚状体等 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 ５３２ 详解详析 １３．(２０２１􀅰重庆,２５,１５分)人类很早就能制作 果酒,并用果酒进一步发酵生产果醋. (１)人们利用水果及附着在果皮上的　　　　 菌,在１８~２５℃、无氧条件下酿造果酒;利用 醋酸菌在　　　　　　　　　条件下,将酒 精转化成醋酸酿得果醋.酿造果醋时,得到 了醋酸产率较高的醋酸菌群,为进一步纯化 获得优良醋酸菌菌种,采用的接种方法是 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　. (２)先酿制果酒再生产果醋的优势有　　　　 (多选,填编号). ①先酿制果酒,发酵液能抑制杂菌的生长,有 利于提高果醋的产率 ②酿制果酒时形成的醋酸菌膜,有利于提高 果醋的产率 ③果酒有利于溶出水果中的风味物质并保留 在果醋中 (３)果酒中的酒精含量对果醋的醋酸产率会产 生一定的影响.某技术组配制发酵液研究了初 始酒精浓度对醋酸含量的影响,结果见图. 该技术组使用的发酵液中,除酒精外还包括 的基本营养物质有　　　　　　　　　　　　 (填写两种).据图可知,醋酸发酵的最适初 始酒精浓度是　　　　　　;酒精浓度为 １０％时醋酸含量最低,此时,若要尽快提高醋 酸含量,可采取的措施有 　 　(填写两个方面). 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 第二节　微生物的培养技术及应用 １．(不定项)(２０２５􀅰河北卷,１８,３分)隐甲藻是 一种好氧的异养真核微藻,多在海水中腐烂的 植物叶片上生长繁殖,是工业生产DHA(一种 功能性脂肪酸)的藻类之一.从海洋中筛选获 得的高产油脂隐甲藻,可用于DHA的发酵生 产.下列叙述正确的是 (　　) A．隐甲藻可从腐烂的叶片获得生长必需的 碳源 B．采集海水中腐烂的叶片,湿热灭菌后接种到 固体培养基,以获得隐甲藻 C．选择培养基中可加入抑制细菌生长的抗生 素,以减少杂菌生长 D．适当提高发酵时的通气量和搅拌速率均可 增加溶氧量,以提高DHA产量 ２．(２０２５􀅰陕晋青宁卷,３,３分)我国是世界上最 大的柠檬酸生产国.利用黑曲霉通过深层通 气液体发酵技术生产柠檬酸,流程如图.下列 叙述错误的是 (　　) 选育 菌种 扩大 培养→ 接种→ 发酵罐 内发酵→ 分离、提 纯产物→ ↓ 灭菌淀粉水解糖 → ↑ 无菌空气 A．淀粉水解糖为发酵提供碳源和能源 B．扩大培养可提供足量的黑曲霉菌种 C．培养基、发酵罐和空气的灭菌方法相同 D．通气、搅拌有利于溶 解 氧 增 加 和 柠 檬 酸 积累 ３．(２０２５􀅰江苏卷,１１,２分)从种植草莓的土壤 中分离致病菌,简易流程如下:制备土壤悬液、 分离、纯化、鉴定.下列相关叙述正确的是 (　　) A．制备的培养基可用紫外线照射进行灭菌 B．将土样加入无菌水混匀,梯度稀释后取悬液 加入平板并涂布 C．连续划线时,接上次划线的起始端开始划线 D．鉴定后的致病菌,可接种在斜面培养基上, 并在室温下长期保存 ４．(２０２５􀅰黑吉辽蒙卷,４,２分)科研人员通过稀 释涂布平板法筛选出高耐受且降解金霉素 (C２２H２３ClN２O８)能力强的菌株,旨在解决金 霉素过量使用所导致的环境污染问题.下列 叙述错误的是 (　　) A．以金霉素为唯一碳源可制备选择培养基 B．逐步提高培养基中金霉素的浓度有助于获 得高耐受的菌株 C．配制选择培养基时,需确保pH 满足实验 要求 D．用接种环将菌液均匀地涂布在培养基表面 ５．(２０２３􀅰山东,１５,２分)平板接种常用在微生 物培养中.下列说法正确的是 (　　) A．不含氮源的平板不能用于微生物培养 B．平板涂布时涂布器使用前必须进行消毒 C．接种后未长出菌落的培养基可以直接丢弃 D．利用以尿素为唯一氮源的平板能分离出合 成脲酶的微生物 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 １４１ 第十八章　发酵工程 ６．(２０２３􀅰湖南,５,２分)食品保存有干制、腌制、 低温保存和高温处理等多种方法.下列叙述 错误的是 (　　) A．干制降低食品的含水量,使微生物不易生 长和繁殖,食品保存时间延长 B．腌制通过添加食盐、糖等制造高渗环境,从 而抑制微生物的生长和繁殖 C．低温保存可抑制微生物的生命活动,温度越 低对食品保存越有利 D．高温处理可杀死食品中绝大部分微生物, 并可破坏食品中的酶类 ７．(２０２３􀅰广东,１０,２分)研究者拟从堆肥中取 样并筛选能高效降解羽毛、 蹄角等废弃物中角蛋白的 嗜热菌.根据堆肥温度变 化曲线(如图)和选择培养 基筛选原理来判断,下列最 可能筛选到目标菌的条件组合是 (　　) A．a点时取样、尿素氮源培养基 B．b点时取样、角蛋白氮源培养基 C．b点时取样、蛋白胨氮源培养基 D．c点时取样、角蛋白氮源培养基 ８．(２０２１􀅰天津,１,４分)下列操作能达到灭菌目 的的是 (　　) A用免洗酒精凝胶擦手 B．制作泡菜前用开水烫洗容器 C．在火焰上灼烧接种环 D．防疫期间用石炭酸喷洒教室 ９．(２０２１􀅰山东,１４,２分)解脂菌能利用分泌的 脂肪酶将脂肪分解成甘油和脂肪酸并吸收利 用.脂肪酸会使醇溶青琼脂平板变为深蓝色. 将不能直接吸收脂肪的甲,乙两种菌分别等量 接种在醇溶青琼脂平板上培养.甲菌菌落周 围呈现深蓝色,乙菌菌落周围不变色,下列说 法错误的是 (　　) A．甲菌属于解脂菌 B．实验中所用培养基以脂肪为唯一碳源 C．可将两种菌分别接种在同一平板的不同区 域进行对比 D．该平板可用来比较解脂菌分泌脂肪酶的 能力 １０．(２０２１􀅰山东,２０,３分)含硫蛋白质在某些微 生物的作用下产生硫化氢导致生活污水发 臭.硫化氢可以与硫酸亚铁铵结合形成黑色 沉淀.为探究发臭水体中甲、乙菌是否产生 硫化氢及两种菌的运动能力,用穿刺接种的 方法,分别将两种菌接种在含有硫酸亚铁铵 的培养基上进行培养,如图所示.若两种菌 繁殖速度相等,下列说法错误的是 (　　) A．乙菌的运动能力比甲菌强 B．为不影响菌的运动需选用液体培养基 C．该实验不能比较出两种菌产生硫化氢的量 D．穿刺接种等接种技术的核心是防止杂菌 的污染 １１．(２０２４􀅰全国甲卷,３７)合理使用消毒液有助 于减少传染病的传播.某同学比较了３款消 毒液 A、B、C杀灭细菌的效果,结果如图所 示.回答下列问题. (１)该同学采用显微镜直接计数法和菌落计数 法分别测定同一样品的细菌数量,发现测得的 细菌数量前者大于后者,其原因是　　　　　 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　. (２)该同学从１００mL细菌原液中取１mL加 入无菌水中得到１０mL稀释菌液,再从稀释 菌液中取２００μL涂布平板,菌落计数的结果 为１００,据此推算细菌原液中细菌浓度为　 　　　个/mL. (３)菌落计数过程中,涂布器应先在酒精灯上 灼烧,冷却后再涂布.灼烧的目的是　　　 　,冷却的目的是　　　　　　　　　　　 　　　　　. (４)据图可知杀菌效果最好的消毒液是　　　 　,判断依据是　　　　　　　　　　　　 　　　　.(答出两点即可) (５)鉴别培养基可用于反映消毒液杀灭大肠 杆菌的效果.大肠杆菌在伊红美蓝培养基上 生长的菌落呈　　　　色. １２．(２０２３􀅰全国乙,３７,１５分)某研究小组设计 了一个利用作物秸秆生产燃料乙醇的小型实 验.其主要步骤是:先将粉碎的作物秸秆堆 放在底部有小孔的托盘中,喷水浸润、接种菌 T,培养一段时间后,再用清水淋洗秸秆堆 (清水淋洗时菌T不会流失),在装有淋洗液 的瓶中接种酵母菌,进行乙醇发酵(酒精发 酵).实验流程如图所示. 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 ２４１ 最新真题分类特训􀅰生物学 回答下列问题. (１)在粉碎的秸秆中接种菌T,培养一段时间 后发现菌 T能够将秸秆中的纤维素大量分 解,其原因是 　 　. (２)采用液体培养基培养酵母菌,可以用淋洗 液为原料制备培养基,培养基中还需要加入 氮源等营养成分,氮源的主要作用是　　　 　(答出１点即可).通常,可采用高压蒸汽 灭菌法对培养基进行灭菌.在使用该方法 时,为了达到良好的灭菌效果,需要注意的事 项有 　 　 (答出２点即可). (３)将酵母菌接种到灭菌后的培养基中,拧紧 瓶盖,置于适宜温度下培养、发酵.拧紧瓶盖 的主要目的是　　　　　　　　　　　　　 　　　.但是在酵母菌发酵过程中,还需适 时拧松瓶盖,原因是　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　.发酵液中的乙醇可 用　　　　溶液检测. (４)本实验收集的淋洗液中的　　　　可以 作为酵母菌生产乙醇的原料.与以粮食为原 料发酵生产乙醇相比,本实验中乙醇生产方 式的优点是 　 　. １３．(２０２３􀅰新课标,３５(１),２分)根瘤菌与豆科植 物之间是互利共生关系,根瘤菌侵入豆科植物 根内可引起根瘤的形成,根瘤中的根瘤菌具有 固氮能力.为了寻找抗逆性强的根瘤菌,某研 究小组做了如下实验:从盐碱地生长的野生草 本豆科植物中分离根瘤菌;选取该植物的茎尖 为材料,通过组织培养获得试管苗(生根试管 苗);在实验室中探究试管苗根瘤中所含根瘤菌 的固氮能力.回答下列问题. (１)从豆科植物的根瘤中分离根瘤菌进行培 养,可以获得纯培养物,此实验中的纯培养物 是　　　　　　　　. １４．(２０２３􀅰湖南,２１,１３分)某些植物根际促生 菌具有生物固氮、分解淀粉和抑制病原菌等 作用.回答下列问题: (１)若从植物根际土壤中筛选分解淀粉的固 氮细菌,培养基的主要营养物质包括水和 　　　　　　　　. (２)现从植物根际土壤中筛选出一株解淀粉 芽孢杆菌 H,其产生的抗菌肽抑菌效果见表. 据表推测该抗菌肽对　　　　的抑制效果较 好,若要确定其有抑菌效果的最低浓度,需在 　　　　μg􀅰mL－１浓度区间进一步实验. 测试菌 抗菌肽浓度/(μg􀅰mL－１) ５５．２０２７．６０１３．８０ ６．９０ ３．４５ １．７３ ０．８６ 金黄色 葡萄 球菌 － － － － － ＋ ＋ 枯草芽 孢杆菌 － － － － － ＋ ＋ 禾谷镰 孢菌 － ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ 假丝 酵母 － ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ 注:“＋”表示长菌,“－”表示未长菌. (３)研究人员利用解淀粉芽孢杆菌 H的淀粉 酶编码基因 M 构建高效表达质粒载体,转入 大肠杆菌成功构建基因工程菌A.在利用A 菌株发酵生产淀粉酶 M 过程中,传代多次 后,生产条件未变,但某子代菌株不再产生淀 粉酶 M.分析可能的原因是　　　　　　　 　　　　　　　　　　　　　(答出两点即 可). (４)研究人员通过 肺上皮干细胞诱 导生成肺类器官, 可自组装或与成 熟细胞组装成肺 类装配体,如图所 示.肺类装配体 培养需要满足适 宜的营养、温度、 渗透压、pH以及　　　　　　　　　　　　 (答出两点)等基本条件.肺类装配体形成过 程中是否运用了动物细胞融合技术? 　　　　 (填“是”或“否”). (５)耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)是 一种耐药菌,严重危害人类健康.科研人员 拟用 MRSA感染肺类装配体建立感染模型, 来探究解淀粉芽孢杆菌 H 抗菌肽是否对 MRSA引起的肺炎有治疗潜力.以下实验 材料中必备的是　　　　. ①金黄 色 葡 萄 球 菌 感 染 的 肺 类 装 配 体　 ②MRSA感染的肺类装配体　③解淀粉芽孢 杆菌 H抗菌肽　④生理盐水　⑤青霉素(抗 金黄色葡萄球菌的药物)　⑥万古霉素(抗 MRSA的药物) 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 ３４１ 第十八章　发酵工程 １５．(２０２２􀅰全国甲,３７,１５分)某同学从被石油 污染的土壤中分离得到 A和B两株可以降 解石油的细菌,在此基础上采用平板培养法 比较二者降解石油的能力,并分析两个菌株 的其他生理功能. 实验所用的培养基成分如下. 培 养 基 Ⅰ:K２HPO４,MgSO４,NH４NO３, 石油. 培养基Ⅱ:K２HPO４,MgSO４,石油. 操作步骤: ①将A、B菌株分别接种在两瓶液体培养基 Ⅰ中培养,得到A、B菌液; ②液体培养基Ⅰ、Ⅱ中添加琼脂,分别制成平 板Ⅰ、Ⅱ,并 按 图 中 所 示 在 平 板 上 打 甲、 乙两孔. 回答下列问题. (１)实验所用培养基中作 为碳源的成分是　　　　 　 　 　 　. 培 养 基 中 NH４NO３ 的 作 用 是 为 菌 株的生长提供氮源,氮源 在菌体内可以参与合成　 　　　　　　　(答出２种即可)等生物大 分子. (２)步骤①中,在资源和空间不受限制的阶 段,若最初接种N０个A细菌,繁殖n代后细 菌的数量是　　　　　　　　. (３)为了比较 A、B降解石油的能力,某同学 利用步骤②所得到的平板Ⅰ、Ⅱ进行实验,结 果如表所示(“＋”表示有透明圈,“＋”越多表 示透明圈越大,“－”表示无透明圈),推测该 同学的实验思路是 　 　 　 　. 菌株 透明圈大小 平板Ⅰ 平板Ⅱ A ＋＋＋ ＋＋ B ＋＋ － (４)现有一贫氮且被石油污染的土壤,根据上 表所示实验结果,治理石油污染应选用的菌 株是　　　　　　　　,理由是 　 　 　. １６．(２０２２􀅰全国乙,３７,１５分)化合物S被广泛 应用于医药、食品和化工工业.用菌株C可 生产S,S的产量与菌株C培养所利用的碳源 关系密切.为此,某小组通过实验比较不同 碳源对菌体生长和S产量的影响,结果见表. 碳源 细胞干重(g/L) S产量(g/L) 葡萄糖 ３􀆰１２ ０􀆰１５ 淀粉 ０􀆰０１ ０􀆰００ 制糖废液 ２􀆰３０ ０􀆰１８ 回答下列问题. (１)通常在实验室培养微生物时,需要对所需 的玻璃器皿进行灭菌,灭菌的方法有　　　 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 　　　(答出２点即可). (２)由实验结果可知,菌株C生长的最适碳源 是　　　　;用菌株C生产S的最适碳源是 　　　　　　.菌株C的生长除需要碳源 外,还需要　　　　　　　　　(答出２点即 可)等营养物质. (３)由实验结果可知,碳源为淀粉时菌株C不 能生长,其原因是 　 　. (４)若以制糖废液作为碳源,为进一步确定生 产S的最适碳源浓度,某同学进行了相关实 验.请简要写出实验思路: 　 　 　 　. (５)利用制糖废液生产S可以实现废物利用, 其意义是　　　　　　　　　　　　　　　 　　　(答出１点即可). １７．(２０２２􀅰广东,２１,１２分)研究深海独特的生 态环境对于开发海洋资源具有重要意义.近 期在“科学号”考察船对中国南海科考中,中 国科学家采集了某海域１１４６米深海冷泉附 近沉积物样品,分离、鉴定得到新的微生物菌 株并进一步研究了其生物学特性. 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 ４４１ 最新真题分类特训􀅰生物学 回答下列问题: (１)研究者先制备富集培养基,然后采用　　 　　　　　　法灭菌,冷却后再接入沉积物 样品,２８℃厌氧培养一段时间后,获得了含 拟杆菌的混合培养物,为了获得纯种培养,除 了稀释涂布平板法,还可采用　　　　　　 　　法.据如图分析,拟杆菌新菌株在以　 　　　　　　　为碳源时生长状况最好. (２)研究发现,将采集的样品置于各种培养基 中培养,仍有很多微生物不能被分离筛选出 来,推测其原因可能是 　 　(答一点即可). (３)藻类细胞解体后的难降解多糖物质,通常 会聚集形成碎屑沉降到深海底部.从生态系 统组成成分的角度考虑,拟杆菌对深海生态 系统碳循环的作用可能是 　 　. (４)深海冷泉环境特殊,推测此环境下生存的 拟杆菌所分泌的各种多糖降解酶,除具有酶 的一般共性外,其特性可能还有　　　　　 　　　. １８．(２０２１􀅰湖南,２１,１５分)大熊猫是我国特有 的珍稀野生动物,每只成年大熊猫每日进食 竹子量可达１２~３８kg.大熊猫可利用竹子 中８％的纤维素和２７％的半纤维素.研究人 员从大熊猫粪便和土壤中筛选纤维素分解 菌.回答下列问题: (１)纤维素酶是一种复合酶,一般认为它至少 包括三种组分,即　　　　　　　　　　　 　.为筛选纤维素分解菌,将大熊猫新鲜粪 便样品稀释液接种至以　　　　为唯一碳源 的固体培养基上进行培养,该培养基从功能 上分类属于　　　　培养基. (２)配制的培养基必须进行灭菌处理,目的是 　　　　　　　　　　　　.检测固体培养 基灭菌效果的常用方法是 　 　 　. (３)简要写出测定大熊猫新鲜粪便中纤维素 分解菌活菌数的实验思路 　 　 　 　 　. (４)为高效降解农业秸秆废弃物,研究人员利 用从土壤中筛选获得的３株纤维素分解菌. 在３７℃条件下进行玉米秸秆降解实验,结果 如表所示.在该条件下纤维素酶活力最高的 是菌株　　　　,理由是　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　　　　　　　. 菌株 秸秆总 重(g) 秸秆残 重(g) 秸秆失 重(％) 纤维素降 解率(％) A ２．００ １．５１ ２４．５０ １６．１４ B ２．００ １．５３ ２３．５０ １４．９２ C ２．００ １．４２ ２９．００ ２３．３２ １９．(２０２０􀅰全国Ⅰ,３７,１５分)某种物质S(一种 含有C、H、N的有机物)难以降解,会对环境 造成污染,只有某些细菌能降解S.研究人 员按照下图所示流程从淤泥中分离得到能高 效降解S的细菌菌株.实验过程中需要甲、 乙两种培养基,甲的组分为无机盐、水和S, 乙的组分为无机盐、水、S和Y. 回答下列问题: (１)实验时,盛有水或培养基的摇瓶通常采用 　　　　的方法进行灭菌.乙培养基中的Y 物质是　　　　.甲、乙培养基均属于　　　 　培养基. (２)实验中初步估测摇瓶 M 中细菌细胞数为 ２×１０７个/mL,若要在每个平板上涂布１００μL 稀释后的菌液,且保证每个平板上长出的菌 落数不超过２００个,则至少应将摇瓶 M 中的 菌液稀释　　　　倍. (３)在步骤⑤的筛选过程中,发现当培养基中 的S超过某一浓度时,某菌株对S的降解量 反而下降,其原因可能是　　　　　　　　 　　　　　　(答出１点即可). (４)若要测定淤泥中能降解S的细菌细胞数, 请写出主要实验步骤: 　 　 　. (５)上述实验中,甲、乙两种培养基所含有的 组分虽然不同,但都能为细菌的生长提供４ 类营养物质,即 　 　. 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 􀪋 ５４１ 第十八章　发酵工程