课时分层作业55 重组DNA技术的基本工具-【高考DNA解码】2026年高考生物一轮总复习学生用书word（不定项版）

课时分层作业(五十五) 1．D　[该DNA分子经酶M和酶N两种限制酶切割后，产生了三个DNA片段且两个切口形成的黏性末端不同，说明该DNA分子含有酶M的一个切割位点和酶N的一个切割位点；质粒为环状DNA，其经酶M和酶N两种限制酶切割后，产生了两个DNA片段，观察两个切口形成的黏性末端，可推出质粒含有酶M的一个切割位点和酶N的一个切割位点，A正确。根据图中黏性末端可知，酶M和酶N识别的序列可能是或，但无法确定其对应关系，B正确。片段乙和片段丁黏性末端互补，用T4 DNA连接酶或E．coli DNA连接酶均可以将片段乙和片段丁连接起来，C正确。片段乙、片段丁、片段戊三个片段不能连接成环状DNA分子，D错误。] 2．B　[结合题意可知，Cre酶能将特定部位的两个脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键断开，A错误；题意显示，当一条 DNA 链上存在两个相同的 LoxP 序列且方向相同时，Cre酶能有效切除两个位点间的 DNA 序列，包括其中的一个LoxP，图中的STOP会被切除，若无 Cre酶存在，则图中STOP 的作用会导致荧光蛋白基因不能表达，进而无法发出荧光，B正确，C错误；启动子能启动绿色荧光基因的转录过程，D错误。] 3．D　[据题意可知突变型基因序列不能被限制酶PstⅠ酶切，由此推测，限制酶PstⅠ可能对甲基化敏感，A正确；据题图可知，野生型基因序列酶切产物是1.5 kb和0.7 kb，因此2.2 kb和0.9 kb条带是“过渡类型”的酶切产物，B正确；突变型基因序列不能够被限制酶PstⅠ酶切，图2中P的①②位点可能均发生了甲基化，C正确；根据题意无法判断该植株的表观遗传现象是可以稳定遗传的，D错误。] 4．C　[由图1可知，目的基因的内部有BclⅠ和EcoRⅠ这两种限制酶的切割位点，对于含有目的基因的DNA 片段最好用BamHⅠ和HindⅢ进行切割以获取目的基因，A正确；由表格可知，BamHⅠ和BclⅠ切割形成的黏性末端相同，BamHⅠ和BclⅠ是同尾酶，二者的切割位点不同，BamHⅠ识别的序列为-GGATCC-，切割位点在GG之间，BclⅠ识别的序列为-TGATCA-，切割位点在TG之间，B正确；启动子的作用是作为RNA 聚合酶识别和结合部位，是转录的起点，C错误；将重组质粒导入动物细胞常用的方法为显微注射法，D正确。] 5．D　[低温时DNA酶的活性较低，过滤液沉淀过程在4 ℃冰箱中进行是为了防止DNA降解，A正确；DNA既溶于2 mol/L NaCl溶液也溶于蒸馏水，且溶解度较高，B正确；粗提取的DNA中含有核蛋白、多糖等杂质，因此为了获得纯度较高的DNA需要进一步提纯，C正确；将粗提取的DNA溶于2 mol/L NaCl溶液中， 加入二苯胺试剂后经过水浴加热可发现DNA被染成蓝色，D错误。] 6．AC　[用限制酶ClaⅠ切割图甲两种基因后，会使A、D端产生相同的黏性末端，再用DNA连接酶可使A、D端相连，A正确；图乙的Ti质粒被限制酶切割一次后，会产生2个游离的磷酸基团，B错误；将目的基因插入图乙T-DNA中构建重组质粒，其可能在农杆菌中表达，C正确；将农杆菌接种在含四环素的固体平板上可得到单菌落，D错误。] 7．C　[若用HindⅢ酶切，由于形成的黏性末端相同，因此目的基因可正向连接到质粒中，也可反向连接到质粒中，即通过筛选可得到两种目的基因连入方向的重组质粒，A正确；若用PvuⅠ酶切，目的基因的插入会破坏氨苄青霉素抗性基因，因此在含氨苄青霉素的培养基上形成的菌落一定不含目的基因，B正确；SphⅠ的酶切位点位于四环素抗性基因中，若用SphⅠ酶切，重组质粒中含氨苄青霉素抗性基因(AmpR)，而导入空质粒的含有氨苄青霉素抗性基因和四环素抗性基因，因此携带目的基因的受体菌在含Amp(氨苄青霉素)的培养基中能形成菌落，在含Tet的培养基中不能形成菌落，故若用SphⅠ酶切，使用双抗生素平板筛选即可获得含有正确的重组质粒的菌体，而非获得正确的重组质粒，C错误；若用ScaⅠ酶切，目的基因可能正向插入，也可能反向插入，可通过琼脂糖凝胶电泳技术鉴定重组质粒构建成功与否，D正确。] 8．ACD　[DNA粗提取与鉴定的实验中，应选择富含DNA的材料，猪肝、菜花、草莓均可作为提取DNA的材料，A正确；离心研磨液的目的是加速沉淀，离心能够加速细胞膜、细胞器、一些较大杂质的沉淀，离心法可以获得更高纯度的DNA，B错误，C正确；据表可知，离心时DNA浓度是81.5 ng·μL-1，4 ℃冰箱静置时是336.4 ng·μL-1，说明静置时蛋白质含量较多，沉淀质量离心时是0.068 g，4 ℃冰箱静置时是0.1028 g，比较可知DNA的沉淀质量小，故析出时的离心转速明显高于去杂质时，D正确。] 9．解析：(1)由图1可知，获取目的基因(sfp)的方法是PCR技术，DNA复制延伸的方向是从5′→3′，目的基因(sfp)上面的一条链复制的方向是由右向左，下面的一条链复制的方向是由左向右，所以选引物②和引物③。(2)由图可知，基因sfp表达的方向由右向左，基因idgS表达的方向由左向右，基因表达的方向需要经过启动子到终止子，因此基因表达的方向应与Ti质粒表达的方向一致。(3)通过图1获取目的基因后再选用BamHⅠ限制酶切割，因为BamHⅠ酶切位点位于启动子和终止子之间。(4)由图2和图3可知，构建基因表达载体时应选用限制酶BcLⅠ和SacⅠ，这样获取的目的基因避免环化，同时保证目的基因与质粒连接的方向一致。(5)将目的基因导入受体白玫瑰细胞后，待细胞再生成植株，开出的花朵却不变蓝，可能原因是sfp和idgS基因未成功导入细胞或导入后没有表达。 答案：(每空1分，共10分)(1)PCR技术　引物②和引物③　(2)左侧　右侧　基因sfp表达的方向由右向左，基因idgS表达的方向由左向右，确保基因的表达方向与Ti质粒表达的方向一致　(3)BamHⅠ　BamHⅠ酶切位点位于启动子和终止子之间　(4)BcLⅠ和SacⅠ　避免获取的目的基因环化，同时保证目的基因与质粒连接的方向一致　(5)sfp和idgS基因未成功导入细胞或导入后没有表达 1 / 3 学科网（北京）股份有限公司 $$ 课时分层作业(五十五)　重组DNA技术的基本工具 (建议用时：40分钟；本套共9小题，共30分。第1～6小题，每小题2分；第7～8小题，每小题4分；第9小题10分。) 1．(2024·山东模拟)研究人员用酶M和酶N两种限制酶同时处理某DNA分子和质粒，得到的DNA片段如图所示。图中DNA片段只注明了黏性末端处的碱基种类，其他碱基的种类未注明。下列叙述错误的是(　　) A．该DNA分子和质粒上均含有酶M的一个切割位点和酶N的一个切割位点 B．根据图示信息不能确定图中形成的不同黏性末端与这两种限制酶的对应关系 C．用T4 DNA连接酶或E．coli DNA连接酶均可以将片段乙和片段丁连接起来 D．片段乙、片段丁、片段戊可依次连接形成一个环状DNA分子 2．(2024·重庆高三联考)Cre酶是一种重组酶，LoxP 是能被 Cre酶识别的特异DNA 序列。Cre/LoxP重组酶系统能够实现特异位点的基因敲除、基因插入等操作。一般而言，当一条 DNA 链上存在两个相同的 LoxP 序列且方向相同时，Cre酶能有效切除两个位点间的 DNA 序列，如图所示。下列说法正确的是(　　) A．Cre酶能将两个核糖核苷酸之间的磷酸二酯键断开 B．无 Cre酶存在的细胞因 STOP 的作用而无法发出荧光 C．当有两个相同的 LoxP 序列时 Cre酶就能有效切除一个 D．启动子能启动绿色荧光基因翻译荧光蛋白的过程 3．(2024·湖北武汉期末)某植物的野生型和突变型植株杂交，F1均为野生型，F1自交所得F2中绝大部分植株与野生型相似(包括野生型、介于野生型与突变型之间的“过渡类型”)，以＋表示，少部分植株与突变型相似，以P表示。研究发现，两表型相关基因的碱基序列一致，长度均为2.4 kb，将此片段用限制酶PstⅠ完全酶切结果如下图。下列叙述错误的是(　　) A．据题意推测，限制酶PstⅠ可能对甲基化敏感 B．2.2 kb和0.9 kb条带是“过渡类型”的酶切产物 C．图2中P的①②位点可能均发生了甲基化 D．该植株的表观遗传现象是可以稳定遗传的 4．(2024·辽宁部分学校模拟)为了提高构建基因表达载体的效率，通常会运用两种限制酶切割质粒和含有目的基因的DNA片段，图1、图2表示含有目的基因的DNA片段和质粒上限制酶的识别位点，表中为各种限制酶的识别序列和切割位点。同尾酶是指它们切割不同的DNA片段但产生相同的黏性末端的一类限制酶。下列叙述错误的是(　　) 限制酶种类 BamHⅠ BclⅠ HindⅢ EcoRⅠ 识别序列及切割位点 A．对于含有目的基因的DNA 片段最好用BamHⅠ和HindⅢ进行切割以获取目的基因 B．BamHⅠ和BclⅠ是同尾酶，二者的切割位点不同 C．图中启动子的作用是作为DNA 聚合酶识别和结合部位 D．将该重组质粒导入动物细胞常用显微注射法 5．(2024·山东淄博一模)关于“DNA的粗提取与鉴定”实验， 下列说法错误的是(　　) A．过滤液沉淀过程在4 ℃冰箱中进行是为了防止 DNA降解 B．DNA 既溶于2 mol/L NaCl 溶液也溶于蒸馏水 C．粗提取的DNA中含有核蛋白、多糖等杂质 D．将粗提取的DNA溶于2 mol/L NaCl溶液中， 加入二苯胺试剂DNA被染成蓝色 6．(不定项)(2024·黑龙江齐齐哈尔二模)图甲为某种棉花的酶D基因及拟南芥叶绿体膜上的转运肽基因，图乙为Ti质粒。为增加油菜种子的含油量，可将酶D基因与转运肽基因相连，导入油菜叶片细胞并获得高产转基因油菜品种。下列叙述正确的是(　　) A．用限制酶ClaⅠ和DNA连接酶处理图甲两种基因后，可使A、D端相连 B．图乙的Ti质粒被限制酶切割一次后，会产生4个游离的磷酸基团 C．将目的基因插入图乙T-DNA中构建重组质粒，其可能在农杆菌中表达 D．将农杆菌接种在含四环素的固体平板上培养得到的即为高产转基因油菜 7．(2024·北京模拟)用氨苄青霉素抗性基因(AmpR)、四环素抗性基因(TetR)作为标记基因构建的质粒如图所示。用含有目的基因的DNA片段和用不同限制酶酶切后的质粒，构建重组质粒，并转化到受体菌中。下列叙述不正确的是(　　) A．若用HindⅢ酶切，通过筛选可得到两种目的基因连入方向的重组质粒 B．若用PvuⅠ酶切，在含氨苄青霉素的培养基上形成的菌落一定不含目的基因 C．若用SphⅠ酶切，使用双抗生素平板筛选即可获得正确的重组质粒 D．若用ScaⅠ酶切，可通过琼脂糖凝胶电泳技术鉴定重组质粒构建是否成功 8．(不定项)(2024·吉林长春模拟)“DNA粗提取与鉴定”的操作步骤为研磨→去杂→析出→鉴定。某研究组欲探究不同去杂方法对实验结果的影响(如下表)。下列叙述正确的是(　　) 去杂质 方式 沉淀质 量(g) DNA浓度 (ng·μL-1) OD260/ OD280 二苯胺 鉴定 离心 0.0680 81.50 1.53 蓝色 4 ℃冰箱静置 0.1028 336.4 1.41 蓝色 注：OD260与OD280的比值可检查DNA纯度；纯DNA的OD260/OD280为1.8，当存在蛋白质污染时，这一比值会明显降低。 A．猪肝、菜花、草莓均可作为提取DNA的材料 B．对研磨液进行离心的目的是加速DNA的沉淀 C．离心法可以获得更高纯度的DNA D．析出时的离心转速明显高于去杂质时 1 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0 ＋0.5 9．(10分)(2024·黑龙江模拟)蓝色妖姬属于最名贵的玫瑰，天然蓝色花产生的主要原因是花瓣细胞液泡中的花青素在碱性条件下显蓝色。我国科学家通过图1从链霉菌中获取激活基因(sfp)，其中①、②、③、④为引物，获取的sfp基因经限制酶PmeⅠ、BamHⅠ切割后能与Ti质粒形成重组质粒；通过图2在限制酶SpeⅠ、SacⅠ、BcLⅠ、BamHⅠ的切割下获取靛蓝合成酶基因(idgS)、并能与Ti质粒形成重组质粒；通过农杆菌转化法导入白玫瑰中，在细胞质基质中形成稳定显色的靛蓝。(提示：基因sfp和idgS表达的方向如图)结合相关知识回答下列问题： (1)通过图1获取目的基因(sfp)的方法是__________，选用的引物是_____________________________________________________________________ _____________________________________________________________________ _____________________________________________________________________ _____________________________________________________________________。 (2)基因sfp和基因idgS应分别导入Ti质粒的________和________位置，并说明原因：______________________________________________________________ _____________________________________________________________________ _____________________________________________________________________ _____________________________________________________________________ _____________________________________________________________________ _____________________________________________________________________ _____________________________________________________________________。 (3)通过图1获取的目的基因能被限制酶SacⅠ、BeLⅠ、BamHⅠ识别和切割，结合图3应选用______________限制酶切割，并说明选用的原因：_____________________________________________________________________ _____________________________________________________________________ _____________________________________________________________________ _____________________________________________________________________ _____________________________________________________________________ _____________________________________________________________________。 (4)通过图2和图3构建基因表达载体时应选用_______________限制酶切割，并说明选用的原因： _____________________________________________________________________ _____________________________________________________________________ _____________________________________________________________________。 (5)将目的基因导入受体白玫瑰细胞，待细胞再生成植株，开出的花朵却不变蓝，可能的原因是_________________________________________________________ _____________________________________________________________________ _____________________________________________________________________ _____________________________________________________________________ _____________________________________________________________________ _____________________________________________________________________。 1 / 6 学科网（北京）股份有限公司 $$