3.1重组 DNA 技术的基本工具期末复习知识清单-2024-2025学年高二下学期生物人教版选择性必修3

1. 基因工程是按照人们的意愿，通过转基因等技术，赋予生物新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。从技术操作层面看，由于基因工程是在DNA分子水平上基因设计和施工的因此又叫做重组DNA技术。 2. 1944年艾弗里等人通过肺炎链球菌的转化实验，不仅证明了遗传物质是DNA,还证明了DNA可以在同种生物的不同个体之间转移。 3. 切割DNA分子的工具是限制性内切核酸酶，又称限制酶，这类酶主要是从原核生物中分离纯化出来的。它们能识别双链DNA分子的特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。 4. 大多数限制酶的识别序列由6个核苷酸组成，也有少数限制酶的识别序列由4个、8个或其它数量的核苷酸组成。 5. 同种限制酶切割后产生的黏性末端相同，通过DNA连接酶能够连接。 6. 不同的限制酶切割也可能产生相同的黏性末端。 7. DNA分子经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式--黏性末端和平末端，当限制酶在它识别序列的中心轴线两侧将DNA分子的两条链分别切开时，产生的是黏性末端；当限制酶在它识别序列的中心轴线处切时，产生的是平末端。 8. 质粒是一种裸露的、结构简单、独立于真核细胞核或原核细胞拟核DNA之外，并具有自我复制能力的环状双链DNA分子，质粒DNA分子上有一个至多个限制酶切位点，供外源DNA片段插入其中，通常作为载体的质粒需要进行人工改造，这些质粒上常有特殊的标记基因，便于重组DNA分子的筛选。 9. 基因工程种使用的载体除了质粒外，还有噬菌体、动植物病毒等。它们的来源不同，在大小、结构、复制方式以及可以插入外源DNA片段的大小上也有很大差别。 10. 载体必须具备的条件：①能够在受体细胞中保存下来并能自我复制；②具有1个或多个限制酶切割位点，以便与外源基因连接。③具有标记基因。 11. 携带外源DNA片段的质粒进入受体细胞后，能在细胞中进行自我复制，或整合到受体DNA上，随受体DNA同步复制。 12. 常见的标记基因有四环素抗性基因、氨苄青霉素抗性基因等，标记基因便于对重组DNA分子的筛选。 13. DNA提取原理：DNA不溶于酒精，某些蛋白质溶于酒精；DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同，它能溶于2mol/L的NaCl溶液，在一定温度下，DNA遇二苯胺试剂会呈现蓝色，因此二苯胺试剂可以作为鉴定DNA的试剂。 14. 哺乳动物的成熟红细胞无细胞核，不适合作为实验材料。 15. 用洋葱做材料，充分研磨可以破坏细胞壁，裂解细胞，释放DNA；研磨过滤上清液中可能含有DNA、蛋白质、多糖、脂质等杂质。获上清液放置在4℃冰箱中，低温抑制核酸水解酶的活性，抑制DNA降解或1500r/min离心再取上清液放入烧杯中。 16. 95%酒精（预冷），静置2-3min，使DNA的溶解度降低，溶液中出现的白色丝状物就是粗提取的DNA，滤纸吸去上面的水分；或者将溶液倒入塑料离心管中，在1000r/min的转速下离心5min，弃掉上清液，将管底的沉淀物（粗体取的DNA）晾干。 17. 取两只20ml的试管，个加入2mol/L的NaCl溶液5ml。将丝状物或沉淀物溶于其中一支试管的NaCl溶液中。然后，向两支试管中各加入4ml的二苯胺试剂。 18. DNA鉴定原理：沸水浴条件下，DNA遇二苯胺试剂会呈现蓝色。 学科网（北京）股份有限公司 $$