专题14 发酵工程-【好题汇编】2025年高考生物二模试题分类汇编（新高考通用）

专题14 发酵工程 考点概览 考点01 传统发酵技术 考点02 微生物培养及计数 传统发酵技术考点01 一、单选题 1．（2025·甘肃金昌·二模）古人使用“六法”酿酒，一是“秫稻必齐”，就是说要准备好质量好的高粱和稻谷；二是“曲糵必时”，即制曲糵要选好时日；三是“湛炽必洁”，即浸泡和蒸煮都要清洁；四是“水泉必香”，就是说酿酒用的水要清冽，无异杂味；五是“陶器必良”，就是说盛装器具要精良不渗漏；六是“火齐必得”，就是说必须掌握好火候，使发酵能在合适的温度下进行。下列说法错误的是（　　） A．高粱和稻谷可为酒精发酵提供糖源 B．“湛炽必洁”，蒸煮可以起到灭菌作用 C．“陶器必良”，盛装器具要有良好的密封性 D．“火齐必得”，发酵的温度为18~30℃ 2．（2025·北京朝阳·二模）应用传统发酵技术可制作多种食品。下表相关叙述中，错误的是（　　） 选项 食品名称 操作 目的 A 馒头 加入前一次发酵保存的面团 接种酵母菌 B 果醋 将发酵液置于30～35℃环境中 为醋酸菌提供适宜的生长温度 C 果酒 每隔12h左右将瓶盖拧松一次 为酵母菌的有氧呼吸提供氧气 D 泡菜 使用的盐水需煮沸处理过 减少杂菌污染 A．A B．B C．C D．D 3．（2025·江苏扬州·二模）《齐民要术》记载了一种称为“动酒酢（“酢”同“醋”）法”的酿醋工艺，“大率酒一斗，用水三斗，合瓮盛，置日中曝之。七日后当臭，衣（指菌膜）生，勿得怪也，但停置，勿移动，挠搅之。数十日，醋成”。相关叙述错误的是（    ） A．此酿醋方法依据的原理是特定的微生物可将酒精转化为醋酸 B．加水稀释的目的是避免酒精浓度过高抑制微生物的生长繁殖 C．“衣（指菌膜）生”是由酵母菌在发酵液表面大量繁殖形成的 D．“挠搅”有利于酒精与微生物的充分接触，且可增加溶解氧 4．（2025·江苏·二模）某研究小组以软枣猕猴桃和苹果为原料制备复合果醋饮料，工艺流程如下图。下列叙述错误的是（    ）    A．发酵的原理主要是利用酵母菌的无氧呼吸和醋酸菌的有氧呼吸 B．步骤①中加入适量的纤维素酶和果胶酶以提高出汁率 C．步骤②中加入绵白糖能促进酵母菌的生长、繁殖和发酵 D．流程中两次杀菌处理的目的、方式及强度均相同 5．（2025·北京西城·二模）啤酒是以大麦为主要原料经酵母菌发酵制成的，下列叙述正确的是（　　） A．酵母菌为兼性厌氧微生物 B．淀粉分解形成糖浆后无需灭菌 C．发酵时发酵罐中pH恒定不变 D．发酵后直接消毒分装获得产品 6．（2025·广东·二模）酿酒主要借助酵母菌的发酵作用，可以在家庭进行，也可以实现工业化生产。科研人员进行了关于杂种酵母菌在不同基质中的发酵测试，结果见图，下列叙述错误的是（    ）    A．实验结果表明，酵母菌对蔗糖和淀粉的利用效率相近 B．为提高酒精产量，实验过程应该保持严格的无氧条件 C．家庭酿酒可在糯米中加入适量白砂糖以提高发酵效率 D．家庭酿酒难以严格灭菌，需要通过消毒抑制杂菌生长 7．（2025·河南许昌·二模）下列关于传统发酵技术应用的叙述正确的是（    ） A．传统发酵技术是利用不同原核生物产生不同代谢废物的原理，生产人们需要的产物 B．传统发酵技术制作果酒、果醋和腐乳通常都不是单一菌种发酵 C．在一段时间内，果醋制作过程中发酵液pH逐渐降低，果酒制作过程中pH升高 D．泡菜坛内有时会长一层白膜，这层白膜是产膜乳酸菌繁殖形成的 8．（2025·江西赣州·二模）我国古代著作《天工开物》中有关于酒曲的制作过程：“……造者将麦连皮，井水淘净，晒干，时宜盛暑天。磨碎，即以淘麦水和作块，用楮叶包扎，悬风处，或用稻秸罨黄（稻草覆盖使其变黄），经四十九日取用……”。下列叙述错误的是（　　） A．利用酒曲酿酒时，糖的分解与代谢物的生成主要在厌氧条件下完成 B．“将麦连皮，井水淘净”可避免麦皮破损，减少被杂菌污染的机会 C．“以淘麦水和作块”为酒曲的制作提供了天然野生菌种和少量营养 D．“稻秸罨黄”可保温保湿，是为了利于酵母菌、黄曲霉等微生物生长 9．（2025·山东菏泽·二模）可根据微生物发酵时对氧气的需求不同，将微生物发酵分为好氧发酵和厌氧发酵。下列相关说法正确的是（    ） A．果酒发酵时，应利用葡萄皮上的野生酵母菌直接进行厌氧发酵 B．果醋发酵时，当氧气和糖源都缺少时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸 C．泡菜制作时，应将泡菜盐水注满泡菜坛以利于乳酸菌进行厌氧发酵 D．生产单细胞蛋白时，酵母菌可利用纤维素水解液进行好氧发酵 10．（2025·山东日照·二模）用“麦汁酸化”法酿造的酸啤酒既有麦芽清香又酸甜适口。它是通过微生物发酵将麦汁中的麦芽糖等糖类转化为醋酸和乳酸，再结合酒精发酵制作而成。下列说法正确的是（　　） A．前期需在同一容器中同时进行醋酸和乳酸发酵 B．麦汁酸化后需经熬煮、冷却后才可接种酵母菌 C．酒精发酵时，发酵罐中温度应控制在30~35℃ D．可通过对啤酒进行高压蒸汽灭菌来延长保存期 11．（2025·江西萍乡·二模）莲花血鸭是江西萍乡的一道营养丰富、风味独特的名菜，其烹制的关键在于鸭血的处理。鸭血需先用莲花本地糯米酒进行调配，待鸭肉炒熟后再加入鸭血翻炒并使之均匀裹在鸭肉上。下列说法正确的是（    ） A．翻炒时的高温使鸭肉和鸭血中的蛋白质变性，肽键断裂 B．鸭血和猪血都适合作为提取DNA的材料 C．糯米酒的酿制过程中，酵母菌通过无氧呼吸将葡萄糖中的能量转变为热能和酒精 D．糯米酒可能通过溶解、挥发等过程去除腥味物质，提升香味，成就莲花血鸭的独特风味 12．（2025·安徽滁州·二模）在小镇集市上，摆满了各种传统发酵食品。色泽诱人的果酒散发着醉人的香气，果醋透着淡淡的果香与醋酸味。一旁的腐乳散发着独特的酱香，泡菜则有着清爽的酸辣口感。这些都是传统发酵技术的成果，下列相关叙述正确的是（　　） A．制作腐乳时，让豆腐长“毛”，这些毛状的微生物主要是毛霉 B．泡菜腌制过程中，随着发酵时间的延长，亚硝酸盐含量越来越高 C．传统发酵以混合菌种的液体发酵为主，通常是家庭式或作坊式的 D．将葡萄酒制作成果醋时，需要通入无菌空气，其他环境条件不变 13．（2025·山东青岛·二模）小曲白酒清香纯正，以大米、大麦、小麦等为原料，以小曲为发酵剂酿造而成，小曲中含多种微生物，传统酿造工艺流程如图所示。下列说法错误的是（　　）    A．泡粮的目的是让谷物吸水膨胀，打破休眠状态，唤醒胚芽中的酶系统 B．糖化的目的主要利用微生物将淀粉水解 C．蒸粮可以使淀粉糊化并且杀菌防腐，为了有良好的发酵效果，发酵温度控制在28℃左右 D．制酒后若要继续制醋，则可以利用白酒继续进行发酵，将密封的发酵罐打开即可 14．（2025·浙江宁波·二模）传统泡菜的制作是利用蔬菜表面的微生物来进行发酵。下列叙述错误的是（　　） A．盐水应煮沸冷却后再倒入泡菜坛中 B．用水密封泡菜坛以实现气体只出不进 C．添加陈泡菜水可缩短泡菜制作的时间 D．泡菜制作中的亚硝酸盐含量逐渐降低 15．（2025·江西上饶·二模）北魏农学巨著《齐民要术》记载了许多古人在实际生产中积累的经验，也蕴藏着众多生物学知识。请阅读下表中的古籍原文，判断以下相关叙述，正确的是（　　） 工艺名称 古籍原文 酿酒技术 浸曲发，如鱼眼汤，净淘米八斗，炊作饭，舒令极冷…… 制醋技术 大率酒一斗，用水三斗，合瓮盛，置日中曝之……七日后当臭，衣生，勿得怪也，但停置，勿移动，挠搅之。数十日，醋成。 A．实验室里培养制醋微生物时，一般需将温度设置在18℃～30℃ B．“鱼眼汤”是指液面冒出小泡的现象，主要是醋酸菌呼吸作用释放CO2形成 C．“衣生”指发酵液表面形成一层菌膜的现象，主要是由酵母菌大量繁殖形成 D．酿酒过程与制醋过程所用微生物的主要区别是有无以核膜为界限的细胞核 16．（2025·山东潍坊·二模）山葡萄酿酒发酵的工艺流程为：设备消毒和灭菌→原材料准备→酵母菌扩大培养→发酵罐发酵→压榨分离→贮酒陈酿等。贮酒陈酿时酒罐上层覆薄层95%的酒精。下列说法正确的是（　　） A．该酿造发酵技术与传统发酵酿酒均需要消毒和灭菌 B．去除山葡萄果梗应在冲洗前进行 C．酵母菌扩大培养要严格控制无氧条件 D．陈酿时覆薄层酒精可减少杂菌的污染 17．（2025·内蒙古包头·二模）传统发酵技术为我们提供了多种食品、饮料及调味品。下列叙述错误的是（    ） A．泡菜腌制利用了乳酸菌的乳酸发酵 B．用果酒发酵制作果醋的主要菌种是酵母菌 C．家庭酿制米酒的过程既有有氧呼吸又有无氧呼吸 D．传统发酵通常是利用多种微生物进行的混合发酵 18．（2025·甘肃庆阳·二模）江西有很多由传统发酵技术制作出的美食，比如南酸枣果醋、婺源酸菜、李渡烧酒、吉安霉鱼等。下列关于传统发酵技术的叙述，正确的是（　　） A．醋酸菌的最适生长温度在30 ~35 ℃，9—10月南酸枣开始收获，此时正是酿南酸枣果醋的好时候 B．婺源酸菜是将蔬菜揉搓、晾晒后配以佐料密封存储约60天后制成的，其酸味主要源于醋酸 C．李渡烧酒以大米和高粱为原料，经发酵、蒸馏等步骤制成，其制作全过程应严格隔绝空气，保证无氧 D．已知霉鱼的制作工艺和腐乳相同，可推测其中起发酵作用的菌种就是毛霉 19．（2025·云南红河·二模）红毛丹山楂复合醋的主要生产流程如下图所示。在酒精发酵阶段，初始糖度过高会使酒精度下降。下列相关叙述错误的是（    ）    A．与酒精发酵阶段相比，醋酸发酵阶段需提供氧气并适当升高温度 B．该流程中的醋酸发酵，利用了醋酸菌将糖直接分解成乙酸的原理 C．若要探究酒精发酵的最适初始糖度，各组的酵母菌接种量应相同 D．初始糖度过高使发酵液渗透压升高，进而抑制酵母菌的酒精发酵 20．（2025·河北·二模）马奶酒是蒙古族特有的一种饮品，以新鲜马奶为原料，经过过滤去除杂质，然后加热至80~90℃，再迅速冷却至20～30℃后，加入菌粉发酵使其达到一定酸度，再添加糖、水和菌粉，进行二次发酵，获得马奶酒。下列相关叙述错误的是（    ） A．添加糖主要是为酵母菌提供碳源和能源 B．新鲜马奶加热至80～90℃主要是为杀灭杂菌 C．两次加入的“菌粉”所属菌种不同，前者是乳酸菌 D．制作马奶酒过程中的两次发酵都属于纯种发酵 21．（2025·浙江金华·二模）某制醋工艺流程如下图所示。酒曲中含有霉菌、酵母菌、乳酸菌等菌种，霉菌能够产生糖化酶将淀粉水解。醋醅含有醋酸菌。下列叙述错误的是（　　） A．该发酵过程属于混菌发酵，可改善成品的风味 B．醋酸发酵过程中经常翻动发酵物，有利于改善通气状况 C．糖化和酒精发酵阶段的温度应高于醋酸发酵阶段的温度 D．装坛的成品中不含有醋酸菌等发酵菌种 22．（2025·安徽黄山·二模）我国具有悠久的酿酒文化和历史，白酒小窖酿造属于传统发酵技术，已选入非物质文化 遗产保护名录。窖池容积小，它的土壤和发酵酒醅的接触面大，从而能够产生更多的香 气成分带入酒中。下列叙述错误的是（　　） A．小窖酿造是以酿酒酵母为主的多种微生物共同作用下完成的 B．对分离出的酿酒酵母做扩大培养，需在无菌、无氧环境中进行 C．小窖酿造的原料多以优质谷物为主，发酵酒醅中可分离出产淀粉酶的微生物 D．窖池中形成的相对稳定的微生物体系不容易被杂菌污染，因此不需要严格灭菌 23．（2025·江西南昌·二模）与传统发酵食品制作有关的谚语充分体现了民间智慧，同时蕴含着微生物学原理。下列说法正确的是（    ） A．“无盐不成泡，老水养新菜”，制作泡菜时盐水抑制杂菌生长，“老水”中富含酵母菌 B．“白毛裹豆腐，方得腐乳香”，“白毛”主要是乳酸菌菌丝，将豆腐蛋白分解为肽和氨基酸 C．“酒败成醋，霉香变酱”，果酒发酵时若密封不良会产生醋，制酱油依赖黑曲霉等霉菌 D．“一菌一世界，百味出坛中”，传统发酵为单一菌种发酵，产品风味主要来自发酵产物 24．（2025·安徽马鞍山·二模）生物技术与工程学相结合在制备生物工程产品、医学研究等领域有广泛应用。下列叙述错误的有（    ） ①无氧条件下，在果酒发酵产物中加入醋酸菌进行果醋发酵 ②用根尖的成熟区细胞进行植物组织培养，可以获得脱毒幼苗 ③利用植物体细胞杂交技术可以打破生殖隔离，实现远缘杂交育种 ④蛋白质工程可以生产自然界中不存在的蛋白质以满足人们的需求 ⑤利用细胞工程进行治疗性克隆应受到有效监控和严格审查 A．1项 B．2项 C．3项 D．4项 25．（2025·山东·二模）随着发酵工程的不断发展，发酵技术在医药工业以及农牧业等许多领域得到了广泛应用，下列说法正确的是（　　） A．传统发酵技术没有对器具、原料等进行灭菌，因此无法完全保证其产品质量 B．家庭制作泡菜和果醋过程中，发酵液表层出现的白膜是由同种微生物形成 C．在啤酒工业化生产流程中，焙烤的目的是产生风味组分，并对糖浆灭菌 D．科研人员已成功通过发酵工程获得紫杉醇、青蒿素前体等物质 26．（2025·河北衡水·二模）家庭制作馒头时可以利用前一次发酵保存下来的“面团”，制作泡菜时可以向泡菜坛中加入一些“陈泡菜水”，而工业上大规模生产馒头或泡菜时往往需要添加单一菌种。下列叙述正确的是（　　） A．家庭制作馒头用老面发酵，属于传统发酵技术，传统发酵以混合菌种的液体及半固体发酵为主 B．添加“面团”和“陈泡菜水”可分别为发酵提供乳酸菌和酵母菌等菌种 C．馒头和泡菜的制作都需要创造无氧环境 D．传统发酵存在杂菌情况不明、过程控制缺乏标准等问题 27．（2025·河北衡水·二模）“葡萄美酿令人痴，一醉方休谁晓知。何日与君同畅饮，凝眸了却苦相思。”下面是果酒和果醋制作的实验流程和某同学设计的果酒和果醋的发酵装置。下列相关叙述中，正确的是（　　） A．在葡萄酒的发酵过程中，发酵液中的H+浓度会有所升高 B．利用葡萄制作果酒时，需要对葡萄和发酵瓶进行消毒处理 C．果酒发酵须每隔12h打开瓶盖防瓶中气压过大，醋酸菌在有氧条件下只可用乙醇进行发酵 D．果酒发酵的适宜温度为30~35℃，果醋发酵的适宜温度为18~30℃ 28．（2025·河南·二模）红糟具有一定的抗氧化、清除体内自由基的功能，还具有降血脂、降血压、提高免疫力等功效。在红曲酒制造的最后阶段，将发酵完成的衍生物，经过筛滤出酒后剩下的渣滓就是酒糟（即红糟）。将新鲜的红糟与蔬菜一同装坛并密封发酵，最终得到风味独特的佐餐佳品红糟酸。下列说法错误的是（    ） A．红糟可能具有延缓衰老、抑制肿瘤发生等作用 B．将红糟与蔬菜装坛后密封，主要目的是抑制细菌繁殖 C．红糟酸呈“酸味”是由乳酸菌进行无氧呼吸产生乳酸引起的 D．微生物发酵产生的代谢物赋予了红糟酸独特的风味 29．（2025·辽宁鞍山·二模）果醋中含有多种有机酸和人体所需的氨基酸，下列有关叙述正确的是（    ） A．利用酒精进行醋酸发酵，发酵液面会出现气泡 B．制作果醋的程序一定是先进行酒精发酵再进行醋酸发酵 C．在醋酸发酵液表面出现的白色菌膜是酵母菌繁殖的结果 D．制果醋不需要严格灭菌，发酵产物醋酸可以抑制杂菌繁殖 30．（2025·河南安阳·二模）下图为某实验小组利用粉碎的秸秆生产燃料——乙醇的过程图，清水淋洗不会导致菌T流失。下列叙述错误的是（　　）    A．菌T可能是纤维素分解菌，能分泌纤维素酶降解秸秆中的纤维素 B．高产酵母菌菌种可通过诱变育种或基因工程育种获得 C．对酵母菌进行扩大培养时，应用液体培养基并不断通入氧气 D．乙醇发酵装置始终需要密闭，以保证酵母菌无氧呼吸产生乙醇 31．（2025·江苏南通·二模）“红菌豆渣”是粤东地区特有的一种传统名肴，其生产过程是：焙烤新鲜豆腐渣→将豆腐渣捏成团放入铺有荷叶的筛子、压平、冷却→在渣面上撒上菌种→发酵一天，渣面长出红毛即得到成品。相关叙述错误的是（    ） A．焙烤可降低豆腐渣含水量，利于后期发酵 B．渣面上长出的红毛是酵母菌繁殖形成的 C．豆腐渣中的蛋白质被分解，可增加成品的营养和风味 D．适当增加菌种量、控制发酵温度，可提高发酵效率 32．（2025·安徽蚌埠·二模）制作泡菜时，由于乳酸菌的发酵作用，发酵产物乳酸不断积累，因此可以根据微生物的活动情况和乳酸积累量，将泡菜发酵过程分为三个阶段：发酵初期、发酵中期和发酵后期。下列叙述正确的是（    ） A．发酵初期会有气泡产生，原因是乳酸菌无氧呼吸产生了CO2 B．制作泡菜过程中，发酵初期先通气培养，发酵中期再密封发酵 C．发酵中期乳酸的产生使营养物质丰富，其他微生物的数量上升 D．发酵后期乳酸含量继续增加，发酵速度会逐渐变缓甚至停止 33．（2025·福建·二模）虾酱由小型低值虾经过加盐混合、捣碎、发酵而成。科研人员从虾酱中分离出若干菌株，发现耐盐菌株FELA1能高效产生蛋白酶和脂肪酶。下列叙述错误的是（    ） A．虾酱制作过程中需要对原料和器皿进行严格灭菌处理 B．菌株FELA1能将原料分解为多肽、氨基酸、脂肪酸等风味物质 C．制作时加入盐的目的是抑制杂菌生长，同时调整虾酱的口味 D．对分离出的耐盐菌株FELA1进行研究有利于提升虾酱的品质 34．（2025·宁夏银川·二模）陕西猕猴桃质地柔软、口感酸甜、风味独特，富含维生素C、胡萝卜素、氨基酸等营养物质，素有“维C之冠”、“水果之王”的美称。采用液体发酵法可酿制出醋香浓郁、酸味纯正的猕猴桃醋，其酿造工艺流程如图所示。下列叙述正确的是（    ）    A．酿醋过程中发酵液的PH逐渐降低，与酿酒过程相反 B．酒精发酵和醋酸发酵所需的温度不同，但通气条件完全相同 C．菌种b在发酵过程中产生的大量CO2导致发酵液pH不断降低 D．采用巴氏消毒法处理猕猴桃醋，基本不会破坏猕猴桃醋中的营养成分 35．（2025·湖南常德·二模）黄豆酱富含丰富的小分子肽和氨基酸，味道鲜美。研究人员探究了未添加鸡胸肉的纯黄豆酱(SP)和添加了40%鸡胸肉的黄豆酱(CSP)发酵过程中蛋白质含量、蛋白酶活力、氨基酸态氮含量的变化规律，结果如下图所示。下列叙述错误的是（　　） A．该实验的自变量为是否添加鸡胸肉，因变量为蛋白质含量、蛋白酶活力和氨基酸态氮含量 B．图1表明，发酵过程中，CSP组的蛋白质含量均高于SP组，且降解速率更快 C．由图2推测，发酵前期微生物产生了大量的蛋白酶使氨基酸态氮含量迅速增加 D．综合图1和图2结果，说明添加鸡胸肉有利于提高黄豆酱的品质 36．（2025·浙江温州·二模）泡菜是一类营养丰富且受大众喜爱的食品。下列属于泡菜制作中必需的操作是（    ） A．蔬菜经高压蒸汽灭菌 B．装坛时盐水没过蔬菜 C．发酵前添加陈泡菜汁 D．发酵中定期开盖排气 37．（2025·江苏盐城·二模）下列有关发酵技术的叙述，正确的是（    ） A．制作泡菜过程中，泡菜盐水浓度过高可能会导致泡菜咸而不酸 B．传统制作果酒时，葡萄要尽量清洗干净，以免杂菌污染使果酒变质 C．以大豆为主要原料制作酱油，应选择分泌脂肪酶能力强的黑曲霉 D．果酒和果醋发酵过程中均有pH值先升高后明显下降的现象 38．（2025·河南开封·二模）《齐民要术》中描述用酒糟（酿酒产生的副产品，主要由粮食经过酵母发酵后剩余的残渣组成）酿醋的过程：“春酒糟则酽（浓烈），颐酒糟亦中用。然欲作酢（醋）者，糟常湿下，压糟极燥者，酢味薄。作法：用石砲子辣（研磨）谷令破，以水拌而蒸之。熟便下，掸去热气，与糟相拌，必令其均调。…夏日作者，宜冷水淋；春秋作者，宜温卧，…。”下列叙述错误的是（　　） A．“压糟极燥（干燥）者”导致酒糟中酒精含量减少，使醋酸产量降低 B．“石铠子辣谷令破”的操作，有利于淀粉酶与淀粉接触而发生糖化 C．“掸去热气，与糟相拌”的操作可以防止高温杀死酒糟中的微生物 D．“夏日作者，宜冷水淋”的目的是使发酵温度保持在18~30℃之间 39．（2025·江苏盐城·二模）下列关于传统发酵技术的叙述，正确的是（    ） A．泡菜制作时放入香辛料可抑制杂菌生长和调节风味 B．果醋发酵时将温度控制在 18～30 ℃可避免杂菌污染 C．果酒发酵时须每隔 12 h 打开瓶盖防止瓶中气压过大 D．传统发酵以混合菌种的液体及半固体发酵为主 （2025·浙江·二模）阅读下列材料，完成下面小题。 以下所示为猕猴桃苹果复合果醋发酵工艺。猕猴桃、苹果→榨汁→混合→酶解→巴氏杀菌→加入酵母菌→酒精发酵→过滤→加入醋酸菌→醋酸发酵→离心→调配→灌装→巴氏杀菌→成品 40．下列关于发酵过程中细胞代谢的叙述，正确的是（    ） A．酵母菌加入到发酵液后只进行厌氧呼吸产生乙醇 B．酵母菌在发酵中持续增殖导致其数量不断增多 C．醋酸菌进行需氧发酵支持生命活动，主要在线粒体内进行 D．氧气能将乙醇氧化成醋酸是醋酸发酵不能密闭的原因之一 41．下列关于复合果醋发酵的叙述，正确的是（    ） A．果汁中加入纤维素酶和果胶酶有利于提高果汁产量 B．发酵后进行巴氏杀菌是为了将发酵液中的微生物完全杀死 C．加入醋酸菌前调整醋酸浓度以避免对醋酸菌造成影响 D．发酵菌种的类型与比例不会影响复合果醋的口感 42．（2025·湖北·二模）大豆发酵食品豆瓣酱是我国传统发酵美食，它能让麻婆豆腐热辣鲜香，也能让回锅肉滋味醇厚，好似舌尖上的时光胶囊，封存着先辈们代代相传的生活智慧。豆瓣酱的制作流程如下图所示，下列叙述错误的是（    ） A．保温发酵过程中，酱豆中有机物的种类增加，有机物含量减少 B．米曲霉发酵过程中，添加面粉主要是为米曲霉的生长提供氮源 C．米曲霉发酵时需不断翻酱，由此推测米曲霉属于需氧型微生物 D．后期发酵中乳酸菌产生乳酸，能抑制杂菌生长并赋予豆瓣酱独特酸味 43．（2025·福建厦门·二模）某同学设计了如图所示的装置，用于果酒发酵。    下列叙述错误的是（    ） A．制备装置中的苹果汁时，利用果胶酶处理，可使果汁变得澄清 B．装置1既可阻止外界空气进入，又可排出果酒发酵时产生的气体 C．若装置2中的X为溴麝香草酚蓝溶液，则可检测发酵产生的 D．用酸性重铬酸钾检测装置中的酒精时，颜色由灰绿色变为橙色 二、多选题 44．（2025·山东德州·二模）酱油的工厂化生产的主要过程在发酵罐中进行，制曲阶段需接种米曲霉孢子，发酵阶段需接种乳酸菌和酵母菌，流程如图所示。下列说法错误的是（    ） A．通气搅拌是为了提高米曲霉产生的蛋白酶和淀粉酶的活性 B．可用血细胞计数板对米曲霉菌液中的孢子进行计数 C．乳酸菌进行乳酸发酵时会产生CO2，发酵罐需定时排气 D．检测成品是否混有杂菌时，可用稀释涂布平板法接种并观察菌落特征 45．（2025·山东泰安·二模）小曲白酒香醇，以大米、大麦、小麦等为原料，以小曲为发酵剂酿造而成。小曲中所含的微生物主要有好氧型微生物霉菌、兼性厌氧型微生物酵母菌，还有乳酸菌、醋酸菌等细菌。关于小曲白酒的酿造过程，下列叙述正确的是（    ） A．传统白酒的酿造是在以酿酒酵母为主的多种微生物共同作用下完成的 B．各种微生物形成了相对稳定的体系，不需要消毒 C．小曲发酵剂起到糖化、赋予白酒特有的风味等作用 D．从谷物原料发酵形成的酒糟中，可分离出产淀粉酶的微生物 46．（2025·山东·二模）臭豆腐一般是以含蛋白质高的优质黄豆为原料，经过泡豆、磨浆、滤浆、点卤、前期发酵、腌制、灌汤、后期发酵等多道工序制成的。其加工制作流程如图所示。下列说法正确的是（　　） A．上图中卤水发酵的菌种可能来源于B，原因是B未采取灭菌措施 B．取样检测时，按上图所示发酵时间并注意取样时摇匀即可 C．在发酵过程中，由于不止有一种微生物，发酵液的pH前期可能会下降 D．若要对样品中某一菌种计数，适宜采取的方法是稀释涂布平板法 47．（2025·黑龙江哈尔滨·二模）桦树液可增强机体免疫力，沙棘主要分布在我国东北等地区，其果实具有抗衰老等作用。桦树液沙棘复合酒发酵工艺加工流程及优化结果如图所示，下列叙述正确的是（　　）       A．桦树液沙棘汁为菌种的生长提供了碳源等营养物质 B．可利用液体培养基对酵母菌进行扩大培养后接入发酵罐 C．生产时应选用酵母EC1118，接种量为0.06% D．本工艺最终还可从酵母菌中提取单细胞蛋白 微生物培养及计数考点02 一、单选题 1．（2025·山东日照·二模）有些细菌具有溶菌特性，能够破坏其他细菌的结构使细胞内容物释出。研究人员试图从某湖泊水样中分离出有溶菌特性的细菌。先将含有一定浓度α菌的少量培养基倾倒在固体培养平板上，凝固形成薄层。一段时间后，将1mL湖泊水样加入9mL无菌水中、继续重复该操作3次，取0.1mL涂布于薄层上，稳定后获得56个菌落，其中15个菌落周围出现溶菌圈。下列说法正确的是（　　） A．应选用由水、碳源、氮源和无机盐组成的培养基分离细菌 B．应使用灼烧灭菌后的涂布器将α菌均匀地接种到培养基上 C．溶菌细菌的接种需在含α菌的培养基变浑浊后才能进行 D．每毫升的湖泊水样中约有1.5×105个具溶菌特性的细菌 2．（2025·广东广州·二模）研究人员以YMA培养基(10g甘露醇(H)、0.4酵母粉、0.5gK2H2PO4、0.1gNaCl、0.2gMgSO47H2O,定容至1L)为基础，探究某种大豆根瘤菌的碳源利用情况，实验结果如图。下列叙述错误的是（    ）    A．添加酵母粉作为氮源，原因可能是根瘤菌在体外培养时固氮能力有所下降 B．实验组需将甘露醇替换为等量的其他碳源，其他条件保持一致 C．测定根瘤菌的数量可以使用显微镜直接计数法 D．实验结果直接证明大豆通过蔗糖的形式向根瘤菌供有机营养 3．（2025·山东·二模）玉米茎腐病的主要致病菌是禾谷镰孢菌。科学家通过实验筛选抑制禾谷镰孢菌的真菌用来防治玉米茎腐病，实验流程如下：①取土样配制成土壤悬浮液，分离纯化得到真菌菌落；②在距离培养皿边缘1cm处呈正三角形取3点，在三角形中心取1点，将禾谷镰孢菌接种在中心点上，分离纯化的真菌接种在另外3点上，培养观察；③选取菌落长势快的真菌菌株制备复筛发酵液；④过滤得到无菌发酵液；⑤将发酵液与基本培养基混合制成培养基M；⑥用打孔器打取直径为8mm的禾谷镰孢菌菌饼，接种在培养基M上；⑦培养一段时间后与对照组做对比，计算抑菌率。下列说法错误的是（    ） 真菌类型 菌落直径/mm 抑菌率/% 处理组 对照组 M-48 45 75 44.78 M-43 22 75 79.10 M-6 42 75 49.25 M-104 37 75 56.71 M-34 57 75 26.87 A．步骤①中可以用稀释涂布平板法分离纯化菌种 B．抑菌率计算公式为：（对照组菌落直径-处理组菌落直径）/对照组菌落直径 C．对照组是将直径为8mm的禾谷镰孢菌菌饼接种在不含真菌发酵液的基本培养基 D．由表可知M-43可以作为禾谷镰孢菌的优选抑制菌株 4．（2025·甘肃白银·二模）豆豉是一种微生物发酵制成的豆制品，发酵的机理主要是芽孢杆菌在蒸煮过的大豆中繁殖，分泌的相关酶系降解蛋白质、脂肪、糖类，赋予豆豉特有的鲜香滋味，促进人体肠道对营养的吸收。以下说法正确的是（　　） A．芽孢杆菌中编码蛋白酶的遗传信息由细胞核流向细胞质 B．芽孢杆菌接入发酵罐前需要扩大培养，该过程不影响豆豉产量 C．提高芽孢杆菌发酵培养基中营养物质的浓度，一定会提高豆豉的产量 D．芽孢杆菌分泌纤维素酶的能力可以通过刚果红培养基来鉴定 5．（2025·甘肃白银·二模）重金属镉是土壤中常见的污染物，而木霉菌是土壤中常见的真菌，耐受镉的能力较强。研究者将木霉菌Th02菌株分别接种于5种含不同氮源的培养基中，在28℃下培养48h，之后测量菌落直径，结果如下图所示。以下说法错误的是（　　）    A．本实验的目的是探究木霉菌培养时的最佳氮源，碳源的种类应该相同 B．配制培养木霉菌的培养基中需添加琼脂，并调至酸性 C．利用接种环接种时需完全打开培养皿盖，以避免造成污染 D．可提高培养基中镉离子浓度进一步探究木霉菌的耐镉能力 6．（2025·福建龙岩·二模）根据食品安全国家标准，每毫升合格的牛奶中细菌总数不能超过50000个。研究小组为检测某品牌牛奶是否合格，进行如下实验。    下列相关叙述正确的是（　　） A．步骤①中需用巴氏消毒法对加入的牛奶进行处理 B．步骤②配制培养基时需加入琼脂并将PH调至酸性 C．若步骤③中平均菌落数为45，说明该品牌牛奶不合格 D．图中所示计数方法统计结果比显微计数法计数结果大 7．（2025·山东泰安·二模）根据国家标准每毫升合格的巴氏杀菌乳中细菌总数不得超过50000个。某兴趣小组进行了新鲜牛奶最合适的消毒温度和时间的探究，相关实验操作合理的是（    ） A．统计培养基上全部菌落数，以菌落数最少组的处理温度作为最适消毒温度 B．将等量的新鲜牛奶分别置于60℃、80℃、100℃恒温水浴锅中处理相同的时间 C．对处理后的牛奶利用平板划线法进行接种后，在37℃下培养24h，然后计数 D．通常要用同一稀释度下的牛奶至少接种3个平板进行重复计数，然后求取平均值 8．（2025·广东汕头·二模）进行抑菌试验时，MIC通常表示肉眼看不见菌落生长的最低药物浓度。为测定植物甲提取液对金黄色葡萄球菌的MIC值，下列相关实验操作错误的是（　　） A．配制不同浓度的植物甲提取液 B．固体培养基加入植物甲提取液 C．接种金黄色葡萄球菌并均匀涂布 D．培养时间不影响MIC值的测定 9．（2025·山西晋城·二模）抑菌圈是菌体产生的某种物质抑制了培养基中原涂布菌株的生长，而在菌落周围形成的不长菌的区域。如图是将相同大小的含有不同抗生素的灭菌滤纸片A、B、C、D放在培养基甲上，用于判断抗生素的杀菌能力，乙为甲培养一段时间后的结果。下列叙述错误的是（　　） A．用湿热灭菌法对培养基灭菌后，待其冷却至室温再开始倒平板 B．实验时只需将用无菌水配制成的细菌悬液均匀涂布在甲培养基上 C．四个滤纸片大小保持一致可避免无关变量对实验结果造成的干扰 D．由乙培养基上的结果可知不同抗生素的抑菌能力大小为B＞A＞C＞D 10．（2025·北京海淀·二模）木霉菌可降解环境中的纤维素。为筛选纤维素酶高产菌株，用紫外线对木霉菌进行诱变处理。已知纤维素与刚果红结合形成红色复合物。下列叙述错误的是（　　） A．木霉菌属于生态系统中的分解者 B．筛选培养基中应添加纤维素和刚果红 C．用平板划线法将菌液接种于筛选培养基上 D．应筛选透明圈与菌落直径比值大的菌落 11．（2025·广东佛山·二模）为提高厨余垃圾分解效率，研究人员以厨余垃圾浸出液为培养基（CY），对目标菌株A1、A2、A7和A8进行驯化（通过人工措施使微生物逐步适应某一条件的方法），以制备高活性微生物菌剂。相关实验结果如图所示。下列分析错误的是（　　） A．CY碳源、氮源丰富，比LB更适合大多数菌株生长 B．可利用稀释涂布平板法对四种菌株进行筛选和计数 C．CY驯化培养可使四种菌株的基因频率发生定向改变 D．从活菌数上评价，A2菌株的驯化效果最显著 12．（2025·陕西汉中·二模）微生物平板划线和培养的具体操作如图所示，下列操作不正确的是（　　） A．②③⑦⑧ B．④⑥⑦⑧ C．①②⑥⑧ D．①③④⑤ 13．（2025·河北唐山·二模）红曲米利用红曲霉发酵，以大米为原料，主要经过蒸煮、接种、培养、筛选等流程获得，具有降血脂的功效。下列有关叙述错误的是（　　） A．培养红曲霉的培养基pH应调节为弱碱性 B．大米可为红曲霉发酵提供碳源、氮源等营养物质 C．大米蒸煮后需冷却再接种，避免高温杀死红曲霉 D．发酵过程中要严格控制温度、pH和溶解氧等条件 （2025·天津和平·二模）阅读下列材料，完成下面小题。 活性黑5是一种低毒性、难褪色的含氮染料。欲利用生物酶处理染料废水中的活性黑5，具体操作流程如图。从染料废水堆积池的污泥中获得优势菌群，采用浓度梯度驯化法，进一步培养获得具备强分解活性黑5能力的假单胞杆菌，并进行基因表达分析。 14．培养基Ⅰ中，除了活性黑5以外，还需添加的成分不包括（    ） A．抗生素 B．葡萄糖 C．水 D．琼脂 15．假单胞杆菌中，BVU5蛋白分解活性黑5的场所最可能为（    ） A．拟核 B．细胞质基质 C．溶酶体 D．核糖体 16．浓度梯度驯化过程中，培养液中可能出现的变化不包括（    ） A．假单胞杆菌的菌落数目 B．假单胞杆菌中BVU5蛋白的含量 C．假单胞杆菌对活性黑5的分解速率 D．假单胞杆菌中BVU5蛋白的空间结构 17．（2025·贵州·二模）为调查某水库的水质状况，某研究小组测定了该河流水样中的细菌含量，将1mL水样稀释100倍，在3个平板上用稀释涂布平板法分别接入0.1mL稀释液；经适当培养后，统计出3个平板上的菌落数分别为39、38和37。下列叙述正确的是（　　） A．接种前可用紫外线对接种室和操作台灭菌 B．接种时可用涂布器蘸取菌液在平板上进行涂布 C．根据结果计算出每升水样中的活菌数为3.8×10⁷ D．实验后的培养基应该进行消毒处理后才能倒掉 18．（2025·黑龙江·二模）纤维素能与刚果红形成红色复合物，纤维素被水解后则不能与刚果红形成红色复合物。在固体培养基中添加刚果红可用于筛选纤维素分解菌。若想要从某动物肠道中筛选并分离出纤维素分解菌，下列分析错误的是（    ） A．纤维素分解菌分泌纤维素酶分解纤维素，在菌落周围产生红色圈 B．固体培养基以纤维素作为唯一碳源，经过湿热灭菌后进行倒平板 C．肠道提取物经过梯度稀释后涂布到培养基上，在恒温箱中厌氧培养 D．依据菌落直径与菌落周围透明圈直径的大小可比较菌株的产酶能力 19．（2025·天津·二模）为保障公共饮用水的安全，工作人员常用如图所示“滤膜法”对饮用水进行检测。大肠杆菌作为指示菌之一，国家标准为每升饮用水中大肠杆菌数量不能超过3个。下列相关叙述错误的是（    ） A．检测前一般需要对水样收集瓶、培养皿、镊子等进行干热灭菌 B．图中所示培养基上长出的大肠杆菌菌落属于一个种群 C．滤膜的孔径大小应该可以允许大肠杆菌通过 D．用滤膜法检测被动物粪便严重污染的水体，结果可能比实际值偏小 20．（2025·云南曲靖·二模）为筛选对梨黑斑霉菌具有抑制作用的真菌，科研人员从感染黑斑病的梨园中选取梨果实为实验材料，先分离得到一株内生真菌，然后将其和梨黑斑霉菌按下图1所示的方法接种培养，一段时间后，培养结果如图2所示。下列叙述错误的是（    ） A．可用稀释涂布平板法来分离得到内生真菌 B．本研究应选择果园中重度感染黑斑病的梨果实为实验材料 C．实验中在3个位置接种相同的内生真菌可提高实验的准确性 D．结果显示内生真菌对梨黑斑霉菌有一定的抑制作用 21．（2025·广东佛山·二模）某兴趣小组探究不同抗生素对金黄色葡萄球菌的选择作用，结果如下表所示。下列叙述错误的是（　　） 抗生素种类 抑菌圈大小 （cm） 对照组 第一代 第二代 第三代 四环素 0.60 4.00 3.53 3.07 罗红霉素 0.60 3.10 2.40 2.48 恩诺沙星 0.60 2.70 2.33 1.63 A．用接种环将金黄色葡萄球菌接种到固体培养基上 B．可使用浸润了无菌水的滤纸片作为对照组的处理 C．四环素的抑菌圈变小，说明其对菌体有选择作用 D．结果显示金黄色葡萄球菌对恩诺沙星的抗性最强 22．（2025·江西鹰潭·二模）合理使用消毒液有助于减少传染病的传播。某同学比较了3款消毒液A、B、C杀灭细菌的效果，结果如图所示。下列有关叙述正确的是（    ）    A．在酒精灯火焰旁倒平板后，再用湿热灭菌法对培养基进行灭菌 B．菌落计数过程中，涂布器应先在酒精灯火焰上灼烧，冷却后再涂布 C．采用显微镜直接计数法会把死菌和活菌一起计数，所以测得的活细菌的数量会偏小 D．用C消毒液处理，活菌数减少量最少，且杀菌时间较长，故C消毒液杀菌效果最好 23．（2025·辽宁·二模）玉米赤霉烯酮（ZEN）是一种由镰刀菌属真菌产生的真菌毒素，研究人员从连作玉米田的土壤样品中分离出了可高效降解ZEN的细菌菌株，实验流程如图。下列叙述错误的是（    ）    A．步骤②③④中所用的培养基均为以ZEN为唯一碳源的选择培养基 B．实验过程中，需要将培养皿、培养瓶和培养基进行干热灭菌 C．步骤③中培养基上长出的菌落数量可能约等于涂布到平板上的活菌数量 D．可衡量b瓶中菌株的ZEN降解能力 24．（2025·四川达州·二模）为筛选出能分解纤维素的细菌，生物兴趣小组的操作流程为“土壤菌液→等比稀释→接种到以纤维素为唯一碳源且派加刚果红的培养基—培养—观察”并获得了如图所示的平板。分别提取菌落I、Ⅱ、Ⅲ细菌中的物质，发现只有菌落Ⅱ中细菌不能合成纤维素酶。下列分析正确的是（　　） A．菌落II的细菌不能合成纤维素酶也能生长，说明菌落Ⅱ中细菌不需要碳源 B．菌落I中细菌分解纤维素的能力强于菌落Ⅲ，但两者菌落特征却完全相同 C．菌落II中的细菌所需碳源可能是空气中的CO2或菌落I分泌的含碳代谢产物 D．利用该平板和公式“C÷V×M”，可准确推算出每克土壤菌液中活菌数目 25．（2025·山西吕梁·二模）堆肥是一种对餐饮业产生的易腐垃圾处置的重要手段。为了研究高温预处理对堆肥的影响，研究人员将混合物料于室温下放置4h，作为常规堆肥（CC）组；混合物料在高温预处理装置中以85℃处理4h，取出后置于阴凉处冷却，作为高温预处理堆肥（HPC）组。实验结果如图所示，下列叙述错误的是（　　） A．微生物呼吸作用释放的热量积累，导致堆肥内部温度逐渐升高 B．高温预处理可促进堆肥过程中微生物的代谢活动，缩短易腐垃圾处置的时间 C．随处理时间的延长，有些种类的微生物数量逐渐增多，有些种类的微生物数量减少 D．筛选嗜热菌时，可在温度最高时取样，稀释后通过平板划线法接种 26．（2025·江苏南通·二模）研究人员用刚果红培养基从蔗渣堆肥中筛选、分离出4株具有降解纤维素能力的真菌（图示①-④）。下列说法正确的是（    ） A．不宜通过接种蒸馏水检测所配制的固体培养基是否被污染 B．图示结果为采用平板划线法接种后倒置于恒温箱中静置培养的结果 C．④号真菌的红色圈与菌落的直径比值最大，降解纤维素的能力最强 D．采用稀释涂布平板法对①～④菌株分离培养24h后进行计数 27．（2025·江苏南通·二模）下列有关教材实验的叙述，正确的是（    ） A．撕取菠菜叶下表皮观察叶绿体，原因是下表皮细胞中叶绿体较大且数量多，易观察 B．用层析液分离光合色素，滤纸条上出现的条带数只与色素的种类有关 C．“探究酵母菌细胞呼吸的方式”，两组均需取酵母菌滤液进行酒精检测 D．对酵母菌进行计数时，先将盖玻片放在计数室上，再沿凹槽边缘滴加培养液 28．（2025·辽宁沈阳·二模）利用绿色木霉和玉米秸秆发酵生产单细胞蛋白饲料，流程如下。下列叙述正确的是（    ） A．蒸料的主要目的是防止杂菌污染 B．玉米秸秆仅为绿色木霉的生长提供碳源 C．生产过程中两次粉碎的主要目的相同 D．生产成品时可从菌体中提取单细胞蛋白加入饲料中 29．（2025·广东茂名·二模）解钾菌能将土壤中难溶性含钾化合物分解，转变为可溶性化合物。下表是研究人员筛选解钾细菌的培养基配方，下列分析错误的是（    ） 成分 葡萄糖 硫酸铵 NaH2PO4 MgSO4·7H2O NaCl CaCO3 钾长石粉 琼脂 蒸馏水 含量（g/L） 10.0 0.5 0.5 0.2 0.1 0.1 5.0 15.0 定容至1L A．解钾菌属于自养微生物 B．CaCO3调节培养基的pH C．该培养基是固体培养基 D．解钾菌有增加肥力作用 30．（2025·四川雅安·二模）在牛、羊等反刍动物的瘤胃中生活着多种微生物，其中有能分解纤维素的微生物。实验室中常用刚果红培养基鉴别纤维素分解菌，其原理是刚果红可以与纤维素形成红色复合物，但并不与水解后的纤维二糖、葡萄糖等发生这种反应。在含有纤维素的培养基中加入刚果红，刚果红与纤维素形成红色复合物，而当纤维素被纤维素分解菌分解后，复合物就无法形成，培养基中会出现以这些菌为中心的透明圈（如图所示）。下列叙述正确的是（　　） A．可用平板划线法或稀释涂布平板法来对纤维素分解菌进行分离和计数 B．分离纤维素分解菌的选择培养基以纤维素为唯一氮源 C．为防止杂菌污染，在对瘤胃中的纤维素分解菌进行培养时应通入无菌空气 D．图中菌落3中的纤维素分解菌分解纤维素的能力最强 31．（2024·山东菏泽·二模）稻瘟菌引起的水稻稻瘟病是危害最为严重的真菌病害之一、土壤中某些微生物能合成并分泌几丁质酶，能抑制稻瘟菌的生长，可用于稻瘟病的防治。科研人员试图从土壤中筛选出能高效降解几丁质的菌株，通过微生物培养获得几丁质酶。下列说法错误的是（    ） A．纯化培养时，可选择稀释涂布平板法或平板划线法接种 B．筛选土壤中目的微生物时需用以几丁质为唯一碳源的培养基 C．在以几丁质为唯一碳源的培养基上生长的菌落均能分泌几丁质酶 D．可依据单菌落周围“水解圈直径/菌落直径”的值来筛选目的菌株 32．（2025·宁夏银川·二模）某种含氮有机物的除草剂，在水中溶解度低，含一定量该除草剂的培养基不透明。其在土壤中不易降解，长期使用会污染土壤破坏生态环境。为修复被破坏的生态环境，按下图选育能降解该除草剂的细菌。下列叙述正确的是（    ）    A．有透明圈的菌落能够利用除草剂中的氮源，应扩大培养 B．图中培养基在各种成分溶化后先湿热灭菌再调节PH值 C．实验过程中需要将培养基调至中性或弱酸性 D．图中接种方法为平板划线法，可对细菌进行计数 33．（2025·河北衡水·二模）生物兴趣小组成员以西瓜5天龄幼苗子叶（子叶尚未完全展开且颜色为淡绿色）为外植体进行相关研究，得到如图所示实验结果，相关叙述错误的是（　　） A．实验开始前应对外植体消毒，对人工配置的MS培养基进行灭菌处理 B．与胚状体细胞相比，愈伤组织细胞分化程度低 C．结果表明西瓜子叶诱导形成愈伤组织的最适暗处理时间（以周为单位）是1周 D．暗处理时间长短对细胞再分化率影响大于脱分化率 34．（2025·河北衡水·二模）土壤中有丰富的微生物，若要利用其中某种微生物，则需要进行菌种的分离和纯化，过程如图。下列相关叙述正确的是（　　）    A．若要筛选分解尿素［CO（NH2）2］的细菌，尿素可作为该菌的氮源和碳源 B．理论上每毫升菌液中2号试管的活菌数是4号试管的100倍 C．4号试管的结果表明每克土壤中的活菌数约为1.1×109个 D．接种用的培养皿可用干热灭菌，可杀死微生物的营养细胞和部分芽孢 35．（2025·河北衡水·二模）在微生物学中使用选择培养基让特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的过程称为选择培养。在选择培养基中添加一些特殊物质，则可配制成鉴别培养基。下列说法错误的是（　　） A．分离酵母菌、霉菌等真菌时，可在培养基中加入青霉素，调PH为酸性 B．以尿素为唯一氮源的培养基上可获得反刍动物瘤胃中的尿素分解菌 C．固氮菌能在不加氮源的培养基中生长，说明固氮菌为自养型生物 D．在以纤维素为唯一碳源的培养基中加入刚果红，可筛选纤维素分解菌 36．（2025·贵州贵阳·二模）某生物兴趣小组将从葡萄皮上成功分离来的野生酵母菌分别接种于3个盛有等量同种液体培养基的锥形瓶中，并放置在摇床上培养，摇床转速分别为210r/min、230r/min和250r/min。培养时间与酵母菌种群密度的关系如图所示。以下叙述正确的是（    ） A．该实验的自变量是摇床的转速多少 B．若用稀释涂布平板法统计酵母菌活菌数量，得到的数据会比实际值偏大 C．培养8h后，有2个锥形瓶中酵母菌的数量已达到了环境容纳量 D．根据图中数据可以得出，培养液中氧气含量越高，酵母菌种群密度越小 37．（2025·陕西汉中·二模）血红蛋白（Hb）能携带O2，透明颤菌含有Hb，将Hb基因转入青霉菌可提高青霉素的产量。研究人员制备了两种营养缺陷型（菌株不能在缺乏该营养物质的培养基上生长）菌株的原生质体，并诱导细胞融合，来获得杂种菌株，过程如图所示。下列分析正确的是（　　） A．处理①和处理②均需要选用纤维素酶和果胶酶 B．在全营养的高渗溶液中，进行处理③来诱导细胞融合 C．处理④是在缺乏甲硫氨酸和精氨酸的培养基中筛选 D．Hb基因使营养缺陷型青霉菌恢复合成青霉素的能力 38．（2025·天津河北·二模）某兴趣小组测定土壤中尿素分解菌的数量，对土样进行稀释的流程如图所示。摇匀C试管，从C试管中取0.1mL菌液进行接种，在适宜条件下培养一段时间，测得平板中的平均菌落数为38。 ①取土样的工具必须灭菌 ②培养用的培养基为选择培养基 ③可用牛肉膏蛋白胨培养基培养 ④接种时采用涂布平板法 ⑤接种时可采用平板划线法 ⑥每克土样中尿素分解菌的数量至少是3.8×106个 ⑦每克土样中尿素分解菌的数量是3.8×106个 关于本实验，以上说法正确的是 A．①③④⑤⑦ B．①②④⑥ C．②③⑤⑦ D．②④⑤⑥ 39．（2025·河南郑州·二模）土壤中的解磷细菌能够分泌磷酸酶溶解磷酸盐固体，提高土壤的肥力。科研工作者通过分离、培养解磷细菌制备菌肥，应用到农业生产中。下列关于解磷细菌的分离和培养的叙述正确的是（    ） A．解磷细菌合成和分泌磷酸酶时需要核糖体、内质网、高尔基体等细胞器的参与 B．分离解磷细菌时，需取少量土壤，在以磷酸盐固体为唯一磷源的培养基中培养 C．筛选解磷能力强的菌株时需在特定固体培养基上挑选降解圈最大的菌落 D．测定解磷菌肥活菌的数目时宜用平板划线法而不宜用显微镜直接计数法 40．（2025·河南·二模）安莎霉素是一类主要由海洋中的稀有放线菌产生的次生代谢产物，具有较高的抗菌活性。经人工诱变后，部分放线菌由于某种酶被破坏，其细胞中某些化学反应不能正常进行，就形成了氨基酸营养缺陷型菌株（不能在基本培养基上生长，只能在完全培养基上生长），这在工业生产上有较广阔的应用前景。利用影印法初检某种氨基酸营养缺陷型菌株的过程如下图，下列相关叙述错误的是（    ） A．基本培养基与完全培养基存在差异的成分是氨基酸 B．进行过程①培养时，待测培养皿中是完全培养基 C．进行过程②培养时，应先将丝绒布转印至基本培养基上 D．应挑取菌落B进行接种培养，并进一步鉴定 41．（2025·安徽安庆·二模）变色圈法是将潜在的目标微生物样本接种到含有特定底物的培养基上，随着微生物在培养基上生长和繁殖，它们会分泌相应的酶来分解这些底物，该过程中产生的可溶性小分子化学物扩散会引起特定区域指示剂的颜色变化。下列相关分析错误的是（    ） A．变色圈的大小可作为评估微生物体内相关酶活性的重要指标 B．与透明圈相比，变色圈法中指示剂的使用让反应结果更直观 C．利用变色圈法筛选得到的微生物能直接接种于发酵罐内发酵 D．基于微型化培养及多种检测技术可实现微生物的高通量筛选 42．（2025·广西南宁·二模）野生型菌株在突变后失去合成某种氨基酸的能力，只能在完全培养基或补充相应氨基酸的基本培养基中才能生存。如下图为获得谷氨酸营养缺陷菌株的过程(原位影印是指用无菌绒布将一个平板的菌落“复制”到另外的空白平板上)。下列叙述错误的是（　　）    A．①②④是完全培养基，野生型和营养缺陷型菌株都能在其中生长 B．采用影印法对③④进行接种，采用稀释涂布平板法对②进行接种 C．将甲菌株分别接种于有氮和无氮培养基进行培养，可验证其是否具有固氮能力 D．在发酵工程中，若要获得产物谷氨酸需要对发酵产品进行提取、分离和纯化 43．（2025·内蒙古赤峰·二模）下列是关于微生物培养和计数的正确叙述是（　　） A．稀释涂布平板法统计的菌落数和活菌实际数目相同 B．发酵排出的气体需进行二次清洁或灭菌处理 C．微生物进行扩大培养时可持续增加培养液中物质的浓度 D．以尿素为唯一氮源的培养基上生长的细菌都能分解尿素 44．（2025·福建·二模）伊红-亚甲蓝琼脂培养基(EMB)可用于检测自来水中大肠杆菌的数量。生长在此培养基上的大肠杆菌菌落呈深紫色，并带有金属光泽。操作时先用滤膜过滤待测水样，再将滤膜转移到EMB上培养，最终统计菌落数目。下列叙述正确的是（    ） A．以藻类制成的琼脂可为微生物提供碳源、氮源等营养物质 B．伊红-亚甲蓝琼脂培养基属于选择培养基，可用于分离微生物 C．用100ml样液培养出各种颜色的菌落5个，则1L样液中大肠杆菌数为50个 D．该方法统计得到的大肠杆菌菌落数目可能小于待测水样的大肠杆菌数目 45．（2025·江苏盐城·二模）我国科考船在南海采集到深海冷泉沉积物，从中分离培养微生物，过程如下图所示。将步骤I得到的菌液与步骤II所用的培养基混合注入充满N2的密闭试管中，培养一段时间后可在试管壁的薄层培养基上获得单菌落。下列叙述错误的是（    ） A．步骤I培养基添加DNA是为微生物生长提供碳源和氮源 B．与步骤I相比，步骤II所用的培养基中还需要添加琼脂 C．步骤II应将试管在冰水混合物中迅速滚动模拟冷泉环境 D．步骤III从群落、个体和分子水平对微生物种类进行鉴定 46．（2025·陕西渭南·二模）无菌技术是微生物培养获得纯净培养物的关键。为避免杂菌污染，常采用高压蒸汽灭菌法等对培养基进行灭菌。接种、倒平板等环节也都要防止杂菌的污染。下列相关叙述正确的是（    ） A．某些微生物能以无机物作为碳源，也能以无机物作为能源 B．消毒和灭菌都是指用强烈的理化方法杀死物体内外所有微生物 C．将要培养的微生物接种至培养基后，应立即放入高压蒸汽灭菌锅中 D．为保证超净工作台无菌，接种操作时应打开紫外灯 47．（2025·贵州毕节·二模）土壤中有丰富的微生物，若要利用其中某种微生物，则需要进行菌种的分离和纯化，过程如图。下列相关叙述错误的是（    ） A．若要筛选分解尿素[CO（NH2）2]的细菌，则尿素可以作为该菌的氮源 B．理论上每毫升菌液中2号试管的活菌数是4号试管的100倍 C．4号试管的结果表明每克土壤中的活菌数约为1.1×109个 D．该种方法统计的菌落数往往比活菌的实际数目少 48．（2025·四川成都·二模）西瓜枯萎病是由尖孢镰刀菌（一种真菌）引起的。研究人员从西瓜枯萎病多发的土壤中分离出多种单菌落进行扩大培养，然后将扩大培养的发酵液与未凝固的普通培养基混合后倒平板，冷却后再接种尖孢镰刀菌，培养并观察尖孢镰刀菌菌丝生长情况，以期筛选出尖孢镰刀菌的拮抗菌。下列叙述错误的是（    ） A．在西瓜枯萎病多发的土壤中取样更容易获得目的菌种 B．培养土壤多种菌的发酵液中可能含有拮抗菌的代谢产物 C．需要将尖孢镰刀菌接种在普通培养基上培养观察作为对照 D．尖孢镰刀菌菌丝生长最好组别对应的微生物为最高效拮抗菌 二、多选题 49．（2025·山东潍坊·二模）细菌P在与其他细菌的竞争中常常占据优势，推测与其产生的A蛋白和B蛋白有关，A蛋白为胞外蛋白。为探究其作用机理，科研人员以野生型菌和基因敲除菌为材料进行了相关实验：在固体培养基表面放置一张能隔离并吸附细菌的滤膜，将一种菌（下层菌）滴加在滤膜上后再放置第二张滤膜，滴加等量的另一种菌（上层菌），共同培养48h后，将两张滤膜上菌体刮下计数，上层菌与下层菌数量的比值为竞争指数，结果如表。下列说法错误的是（　　） 甲组 乙组 丙组 丁组 上层菌 野生型菌 野生型菌 野生型菌 A基因敲除菌 下层菌 野生型菌 A-B双基因敲除菌 A基因敲除菌 A-B双基因敲除菌 竞争指数 1.4 3.8 1.3 1.4 A．采用稀释涂布平板法对刮下的菌体进行计数，待菌落长出后即可进行计数 B．由甲组实验结果可推测细菌P为厌氧菌 C．通过乙、丁对比，可分析推理A蛋白对细菌的作用 D．推测B蛋白会增强A蛋白的毒性 50．（2025·江苏南京·二模）科研人员利用“影印培养法"研究大肠杆菌抗药性形成与环境的关系，实验过程如图所示。待3号培养基上长出菌落后，在2号培养基上找到对应的菌落，然后接种到不含链霉素的4号培养液中，培养后再接种到5号培养基上，并重复以上操作。下列叙述正确的有（　　） A．3号培养基中菌落数少于1号培养基中的菌落数，说明基因突变具有低频性 B．5号培养基中观察到的细菌数往往小于涂布时吸取的菌液中的活菌数量 C．上述操作中重复实验的目的是进一步纯化抗链霉素的菌株及增大目的菌株的浓度 D．12号培养基中需有水、无机盐、碳源、氮源及琼脂等，置于4℃冰箱中保存 51．（2025·山东菏泽·二模）金黄色葡萄球菌对青霉素的敏感度高且高度耐盐化。菌株可在血琼脂平板（完全培养基中添加适量血液）上生长，并能产生溶血毒素（可使红细胞及组成物质完全溶解）。下列说法错误的是（    ） A．在金黄色葡萄球菌分离培养过程中，需在选择培养基中加入10%—15%的NaCl、青霉素 B．培养在血琼脂平板上的金黄色葡萄球菌菌落周围会出现透明的溶血圈 C．可利用平板划线法在固体培养基表面获得均匀分布的金黄色葡萄球菌的单个菌落 D．用一定浓度的青霉素会诱导金黄色葡萄球菌产生耐药性的变异 52．（2025·山东·二模）臭豆腐一般是以含蛋白质高的优质黄豆为原料，经过泡豆、磨浆、滤浆、点卤、前期发酵、腌制、灌汤、后期发酵等多道工序制成的。其加工制作流程如图所示。下列说法正确的是（　　） A．上图中卤水发酵的菌种可能来源于B，原因是B未采取灭菌措施 B．取样检测时，按上图所示发酵时间并注意取样时摇匀即可 C．在发酵过程中，由于不止有一种微生物，发酵液的pH前期可能会下降 D．若要对样品中某一菌种计数，适宜采取的方法是稀释涂布平板法 53．（2025·河北邢台·二模）蛭弧菌能使污水中的嗜水气单胞菌（异养型）裂解，将其接种在长满嗜水气单胞菌的平板上会出现噬菌斑。某兴趣小组将嗜水气单胞菌接种到固体培养基上，培养形成薄层，再接种采集的污水用以分离蛭弧菌。下列叙述错误的是（　　） A．污水可为自然环境中的嗜水气单胞菌提供碳源 B．出现噬菌斑一定是蛭弧菌作用的结果 C．可用涂布平板法接种嗜水气单胞菌 D．可用干热灭菌法对平板进行灭菌 54．（2025·辽宁·二模）奶酪是通过微生物的作用，使牛奶的物理和化学性质发生改变后形成的具有独特风味和质地的乳制品；近似固体，营养价值丰富。如图是奶酪制作的部分过程，其中凝乳酶可以将牛奶凝固，探究凝乳酶活性的实验数据如表所示。下列与奶酪制作相关的说法，错误的是（    ） 组别 A B C D E F 水浴温度/℃ 10 20 30 40 50 60 凝乳时间/min 不凝 7.0 4.0 1.5 4.0 不凝 A．无菌处理的最佳温度为121℃ B．乳酸发酵应在无氧条件下进行 C．形成凝乳时温度要控制在20℃左右 D．为防止杂菌污染应在牛奶中加入一定量的抗生素 55．（2025·山东枣庄·二模）关于“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”实验，下列说法正确的是（    ） A．取样时用的铁铲、纸袋在使用前进行消毒处理，对培养基进行湿热灭菌，对培养皿要进行干热灭菌 B．实验中的培养基以尿素为唯一氮源，属于选择培养基，含酚红指示剂的培养基变红说明有尿素分解菌 C．用平板划线法和稀释涂布平板法都可以对尿素分解菌进行计数，但是统计结果往往比实际值偏低 D．若取稀释105倍的0.1mL菌液进行涂布，获得菌落数目的平均值为168，则每克土样中尿素分解菌的数量为1.68×108 56．（2025·黑龙江哈尔滨·二模）桦树液可增强机体免疫力，沙棘主要分布在我国东北等地区，其果实具有抗衰老等作用。桦树液沙棘复合酒发酵工艺加工流程及优化结果如图所示，下列叙述正确的是（　　）       A．桦树液沙棘汁为菌种的生长提供了碳源等营养物质 B．可利用液体培养基对酵母菌进行扩大培养后接入发酵罐 C．生产时应选用酵母EC1118，接种量为0.06% D．本工艺最终还可从酵母菌中提取单细胞蛋白 57．（2025·江苏南通·二模）动物肠道中的纤维素降解菌多样性高，但大多未被分离和培养。我国研究人员发明了一种全新的分离纤维素降解菌的方法，具体流程如下图。相关叙述正确的是（    ） A．实验前肠道细菌扩大培养时，应摇床培养以增加溶解氧和增大菌体与培养液的接触 B．过程③中纤维素对细菌有高亲和力，有利于纤维素化磁性纳米颗粒粘附细菌 C．过程④中纤维素降解菌合成的纤维素酶经高尔基体加工后，分泌到细胞外才具有降解功能 D．该方法分离菌体的效率与细菌的浓度和纤维素化磁性纳米颗粒的粒径、浓度有关 三、解答题 58．（2025·北京西城·二模）金黄色葡萄球菌（SA）是一种可导致人化脓感染的细菌。随着抗生素剂量的不断增加，出现了超级耐药型金黄色葡萄球菌（MRSA），研究人员对其耐药机制进行探索。 (1)SA细胞包括细胞壁、细胞膜、细胞质和 。SA分裂时，细胞内的关键酶P1和P2催化肽聚糖合成并交联成同心环结构，构建新细胞壁。抗生素甲氧西林可结合P1、P2并抑制其活性，导致SA分裂产生的新壁出现孔洞，在低渗环境中细胞会因 而死亡。 (2)检测发现，MRSA含有外源A+基因和突变的B+基因，A+表达产物P2a与P2作用相同。只获得A+基因的SA表现出对低浓度甲氧西林耐受，据此推测低浓度甲氧西林对P1几乎无影响，且P2a对甲氧西林亲和力较 。在高浓度甲氧西林培养基中，只获得A+基因的SA新细胞壁孔洞明显，而MRSA能正常分裂，新壁出现孔径较小的致密网状结构。 (3)为研究B+基因的功能，将SA突变为P1基因缺陷型菌株（P1-），进行系列实验。 ①将特定基因导入P1-菌株，各菌株繁殖速率如图1所示，结果表明，P1-菌株的分裂能力可通过B+基因弥补，而A+基因无此作用，依据是 。    ②构建图2所示表达载体导入P1-菌株，观察不同条件下菌株分裂产生新细胞壁形态，结果如图3，说明在P1缺乏时，B 。      (4)研究人员推测MRSA的B+发挥作用需依赖于A+，请从①～⑥选择合适的菌株、基因与培养条件，进行转基因实验，验证推测。写出相应组合并预期实验结果 。 ①SA菌株  ②P1-P2-菌株  ③A+基因  ④B+基因  ⑤高浓度甲氧西林  ⑥不用甲氧西林 59．（2025·安徽池州·二模）我国是酱油酿造大国，酱油的出现可追溯至周朝。乳酸菌是酱油酿造过程中常见的风味菌之一，要想获得品质上乘的酱油，加快选育耐高盐的风味菌是最主要的途径。某研究小组以发酵泡菜中筛选得到的耐盐植物乳杆菌X为菌种，通过紫外线诱变选育耐盐稳定、产酸性能良好的突变株用于相关发酵实验。请回答下列问题。 (1)植物乳杆菌 X 的代谢方式为 ，其在紫外线诱变选育过程中发生的变异类型是 。 (2)已知植物乳杆菌X代谢产物乳酸能够使高锰酸钾-溴化钾-MRS培养基褪色形成透明圈，透明圈直径（D）和菌落直径（d）比值（D/d值）可作为筛选指标。请简述该研究小组利用植物乳杆菌X诱变选育耐盐稳定、产酸性能良好的突变株的实验思路： 。 (3)实验发现，在高盐发酵酱醪中添加植物乳杆菌X后，相同时间内杂菌总数的增加量小于植物乳杆菌X的增加量，说明 ，分析可能的原因是 。 60．（2025·黑龙江哈尔滨·二模）番茄灰霉菌严重影响番茄生产，枯草芽孢杆菌可以产生对多种病原菌具有抑制作用的蛋白质。为了探究枯草芽孢杆菌能否用于番茄灰霉病的防治，研究者进行了相关实验。回答下列问题： (1)在实验室培养微生物时，需要对所用的培养基和玻璃器皿进行灭菌，可采用的方法分别是 。 (2)用液体培养基培养枯草芽孢杆菌需要摇床振荡，目的是 。培养过程中为快速检测枯草芽孢杆菌活菌数量时，需采用 计数。 (3)在检测枯草芽孢杆菌对番茄灰霉菌的 （化学或生物）防治作用时，首先取适量的番茄灰霉菌菌液涂布于 培养基表面，再将无菌滤纸片（直径5mm）在 菌液中浸泡，然后覆盖于番茄灰霉菌培养基中心，数秒后取出滤纸片，培养皿倒置培养一段时间，测量 的大小以判定枯草芽孢杆菌防治（抑菌）作用效果。 (4)为了筛选出更高效抑制番茄灰霉病的枯草芽孢杆菌，研究者进一步设计了如下实验：应从培养皿B中选择 号菌落继续进行纯化培养。 61．（2025·河北衡水·二模）图1表示苹果醋的简易制作装置和制作流程。发酵工程在医药上的应用非常广泛，其中青霉素的发现和产业化生产进一步推动了发酵工程在医药领域的应用和发展。产黄青霉菌是一种广泛存在于自然界中的霉菌，是生产青霉素的重要工业菌种。工业上生产青霉素的发酵工程流程如图2所示据图回答下列问题：                    图1                                                               图2 (1)用图1装置酿酒结束后，若要直接转入果醋发酵，改变的环境条件是 。该过程进行的反应简式是 。 (2)图2整个发酵过程的中心环节是 。在制备该培养基时，除了添加必要的营养成分外，还需要将pH在灭菌 （填“前”或“后”）调至酸性。在青霉素生产过程中 都必须经过严格的灭菌。如果污染了杂菌，某些杂菌会产生 将青霉素分解掉。 (3)欲从土壤中分离出能产生纤维素酶的纤维素分解菌，可用加入 作为唯一碳源制成的选择培养基进行分离。若将样品接种到分离纤维素分解菌的培养基上，在该培养基中需要加入的特殊染料是 ，通过观察是否产生 来筛选纤维素分解菌。 (4)对产黄青霉菌进行分离纯化并计数采用了 法，其可以用来计数的原理为 。为了避免混淆，本实验纯化菌种时使用的平板需要在培养皿的 （“皿盖”或“皿底”）做好标记。然后在恒温培养箱中需培养1—2d，每隔24h统计一次菌落数目，选择菌落数目稳定时的记录作为结果，其目的是 。 62．（2025·四川达州·二模）为了提升猪瘟病毒疫苗的效果，科研人员构建了猪瘟病毒p30蛋白基因（p30）与白喉毒素无毒突变基因（CRM197A）的融合基因表达质粒，以生产融合蛋白疫苗。图1为质粒构建、疫苗生产以及效果测试示意图。请回答下列问题： (1)完成图1的过程②需要向反应体系中加入 酶。利用PCR技术扩增p30-CRM197A融合基因时，需要向反应体系中添加的引物是 （选填图中的F1~F4）。 (2)选用大肠杆菌作为受体细胞时，一般先用 处理大肠杆菌，使其处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态。图1中培养导入重组质粒的大肠杆菌时，采用的接种方法是 。 (3)筛选时，科研人员挑选了5个菌落，提取质粒后加入BamHI、HindⅢ酶切、电泳，结果如图2： ①可初步判断 号菌落的质粒中含有p30-CRM197A融合基因。 ②p30基因和CRM197A基因 （填“含”或“不含”）BamHI和HindⅢ酶切位点，理由是 。 (4)科研人员在检测上述菌落时发现某个菌落同时含有空载质粒和融合基因表达质粒，出现此现象的可能原因有： ①有些大肠杆菌同时导入了空载质粒和融合基因表达质粒： ②导入空载质粒的大肠杆菌和导入触合基因表达质粒的大肠杆菌在接种时未分散开，导致 。 (5)为检测融合蛋白疫苗的效果，科研人员将p30蛋白、p30-CRM197A融合蛋白分别注入小鼠体内，一段时间后检测抗体含量，结果如图3所示。据此可判定融合蛋白疫苗效果更好，依据是 。 63．（2025·江西九江·二模）大肠杆菌常寄生于人和动物肠道内，一般情况下不会致病，但在具有某些特定毒力因子作用时具有致病性，能引起人和动物共同感染，影响畜牧业发展及人体的健康。回答下列问题。 (1)大肠杆菌在生物技术领域有着重要的应用价值。大肠杆菌细胞中的质粒可作为“分子运输车”将基因导入受体细胞，质粒适合作为载体，具有的特点有 （回答2点）；大肠杆菌因还具有 等优点（回答2点），故在发酵工程中常作为工程菌生产药物和疫苗。 (2)科研人员制备了浸泡有4种抗生素溶液的6mm圆形滤纸片，分别放置在接种有大肠杆菌培养基的不同区域，经培养后发现滤纸片附近都出现了抑菌圈，且抑菌圈直径 （填“越大”或“越小”）的抗生素，抑菌效果越明显。而在直径最大的抑菌圈边缘附近还出现了部分菌落，分析可能的原因是 （回答2点即可）。 (3)通过配置伊红—亚甲蓝琼脂培养基来鉴别大肠杆菌，生长在此培养基上的大肠杆菌菌落呈 色，并具有金属光泽。为检测某品牌的饮用矿泉水中大肠杆菌（活菌）数量是否超标，可抽取1mL矿泉水经10倍稀释后，利用 在显微镜下直接观察计数；显微镜下观察结果如图，则矿泉水中大肠杆菌的数量约为 个（注：仪器规格为1mm×1mm×0.1mm，，用图中加粗的中方格代表整个计数室内中方格大肠杆菌数的平均值）。 64．（2025·天津河西·二模）酿酒酵母是重要的发酵菌种，广泛应用于酿酒、食品加工及生物燃料生产等，研究人员对酿酒酵母菌株的生活条件进行分析研究，以提高发酵产物的产量。 (1)对于酵母菌的培养，比较适合它的培养基为 （A．马铃薯蔗糖培养基B．MS培养基C．LB培养基D．牛肉汤培养基），除了要选择合适的培养基成分外，还要考虑培养基中营养物质的 。 (2)发酵过程中要测定酵母菌的繁殖速度，可用 平板法对酵母菌进行计数。将培养到某一时期的培养液制备成1×105倍稀释的稀释液，每次取0.1mL进行涂布分离，三个培养皿生长的菌落数依次为35个、32个、29个，则培养液中的酵母菌数量为个 /mL。在恒温培养箱培养时，培养皿的放置方式如图 （填“a”或“b”）。    (3)该酵母菌的发酵食品也会因为发酵时间的长短、条件和底物不同，而形成不同的代谢产物，使发酵食品的风味发生变化。酿酒时会因为发酵液放置过久等原因，导致出现酸味，可能是因为产生了 （填物质）。 (4)某研究小组从葡萄皮上成功分离出某品种的酵母菌后，取等量菌液分别接种于3个盛有等量液体培养基的锥形瓶中，并分别置于转速为150r/min、200r/min、250r/min的摇床上培养，检测结果如图甲所示，摇床转速为250r/min的酵母菌种群密度最大的原因是摇床转速越高， ，酵母菌代谢旺盛，增殖快。小组同学继续用分离出的酵母菌进行果酒的发酵，发酵产物酒精可用 溶液检验。    65．（2025·山西太原·二模）厚壳贻贝新型抗菌肽具有广谱抗菌性和独特的杀菌机制，使细菌难以产生耐药性。科研人员通过构建高效表达新型抗菌肽的枯草芽孢杆菌，并优化发酵工艺等来提高抗菌肽的产量，部分过程如下图所示。请回答下列问题：    (1)要想得到活性强、结构稳定的新型抗菌肽，需要依据其功能设计结构，最终完成过程①。该思路运用了 工程的基本原理。 (2)为提高抗菌肽的产量，在过程②中使用不同碳源的培养基培养枯草芽孢杆菌，筛选出最优碳源葡萄糖，该碳源的作用是 （答出两点）。 (3)过程③用Ca2＋处理枯草芽孢杆菌，目的是 。 (4)过程④中要监测发酵罐中枯草芽孢杆菌的数量，并绘制其生长曲线，可采用的计数方法有 。发酵罐中枯草芽孢杆菌繁殖多代后，抗菌肽的产量大大下降，从菌种角度分析可能的原因是 （答出两点）。 66．（2025·贵州铜仁·二模）豆豉作为贵州传统调味品“老干妈辣酱”的核心原料之一，其味道鲜美，是因为含有谷氨酸。传统工艺制备豆豉需要将大豆通过米曲霉发酵，但是谷氨酸的产量较低；而现代生产中通过基因工程改良米曲霉菌株（如菌株JMR1），使其谷氨酸合成酶基因表达量提升3.2倍，显著提高了谷氨酸的含量。请回答以下有关问题： (1)与醋酸菌相比，米曲霉在细胞结构上的主要区别是 。 (2)菌种扩大培养时，培养基需通过 法灭菌；待培养基冷却到！50℃左右时开始倒平板，待培养基冷却凝固后，将培养皿倒过来放置，原因是 。接种前需随机选取灭菌后的平板置于恒温培养箱中培养一段时间，目的是 。 (3)若生产中需要通过基因工程获得改良的米曲霉菌株，通常需要完成4个步骤：目的基因的筛选与获取→ →将目的基因导入受体细胞→目的基因的检测与鉴定。 (4)请你设计一个实验验证改良后的米曲霉菌株是否具有高产谷氨酸的能力，写出简要的实验思路 。 试卷第1页，共3页 2 / 2 学科网（北京）股份有限公司 学科网（北京）股份有限公司 学科网（北京）股份有限公司 $$ 专题14 发酵工程 考点概览 考点01 传统发酵技术 考点02 微生物培养及计数 传统发酵技术考点01 一、单选题 1．（2025·甘肃金昌·二模）古人使用“六法”酿酒，一是“秫稻必齐”，就是说要准备好质量好的高粱和稻谷；二是“曲糵必时”，即制曲糵要选好时日；三是“湛炽必洁”，即浸泡和蒸煮都要清洁；四是“水泉必香”，就是说酿酒用的水要清冽，无异杂味；五是“陶器必良”，就是说盛装器具要精良不渗漏；六是“火齐必得”，就是说必须掌握好火候，使发酵能在合适的温度下进行。下列说法错误的是（　　） A．高粱和稻谷可为酒精发酵提供糖源 B．“湛炽必洁”，蒸煮可以起到灭菌作用 C．“陶器必良”，盛装器具要有良好的密封性 D．“火齐必得”，发酵的温度为18~30℃ 【答案】B 【分析】酒的制作离不开酵母菌，酵母菌是兼性厌氧微生物，在有氧条件下，酵母菌进行有氧呼吸，大量繁殖，把糖分解成二氧化碳和水；在无氧条件下，酵母菌能进行酒精发酵。故酒的制作原理是酵母菌无氧呼吸产生酒精，酵母菌最适宜生长繁殖的温度范围是18～30℃；生产中是否有酒精的产生，可用酸性重铬酸钾来检验，该物质与酒精反应呈现灰绿色。 【详解】A、高粱和稻谷含有糖类，可为酒精发酵提供糖源，A正确； B、蒸煮可以起到消毒作用，不能起到灭菌作用，B错误； C、酒精发酵属于厌氧发酵，盛装器具要有良好的密封性，C正确； D、酒精发酵的温度为18~30℃，D正确。 故选B。 2．（2025·北京朝阳·二模）应用传统发酵技术可制作多种食品。下表相关叙述中，错误的是（　　） 选项 食品名称 操作 目的 A 馒头 加入前一次发酵保存的面团 接种酵母菌 B 果醋 将发酵液置于30～35℃环境中 为醋酸菌提供适宜的生长温度 C 果酒 每隔12h左右将瓶盖拧松一次 为酵母菌的有氧呼吸提供氧气 D 泡菜 使用的盐水需煮沸处理过 减少杂菌污染 A．A B．B C．C D．D 【答案】C 【分析】参与果酒制作的微生物是酵母菌，其新陈代谢类型为异养兼性厌氧型。参与果醋制作的微生物是醋酸菌，其新陈代谢类型是异养需氧型。果醋制作的原理：当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的葡萄糖分解成醋酸；当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。 【详解】A、传统制作馒头时，加入前一次发酵的面团（老面）是为了接种酵母菌。酵母菌在发酵过程中产生CO₂，使面团膨胀松软，A正确； B、醋酸菌的最适生长温度为30～35℃，制作果醋时需保持此温度以促进其代谢活动，B正确； C、果酒发酵的主阶段需无氧环境（酵母菌无氧呼吸产酒精），每隔12小时拧松瓶盖的主要目的是排出CO₂（防止容器压力过大），而非提供氧气，C错误； D、泡菜制作中，煮沸盐水可杀菌并减少杂菌污染，同时高浓度盐水抑制多数微生物生长，而乳酸菌可在此环境中繁殖，D正确。 故选C。 3．（2025·江苏扬州·二模）《齐民要术》记载了一种称为“动酒酢（“酢”同“醋”）法”的酿醋工艺，“大率酒一斗，用水三斗，合瓮盛，置日中曝之。七日后当臭，衣（指菌膜）生，勿得怪也，但停置，勿移动，挠搅之。数十日，醋成”。相关叙述错误的是（    ） A．此酿醋方法依据的原理是特定的微生物可将酒精转化为醋酸 B．加水稀释的目的是避免酒精浓度过高抑制微生物的生长繁殖 C．“衣（指菌膜）生”是由酵母菌在发酵液表面大量繁殖形成的 D．“挠搅”有利于酒精与微生物的充分接触，且可增加溶解氧 【答案】C 【分析】果醋制作中起到主要作用的微生物是醋酸菌，醋酸菌是—种好氧细菌，只有当氧气充足时，才能进行旺盛的生理活动，其代谢类型属于异养需氧型。当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的葡萄糖分解为醋酸; 当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。醋酸菌的最适生长温度为30-35℃。 【详解】A、该方法的原理是醋酸菌在氧气充足、缺少糖源时可将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸，A正确； B、加水的目的是对"酒"进行稀释，避免酒精浓度过高杀死醋酸菌（失水过多），B正确； C、醋酸菌对氧气的含量特别敏感，"衣" 位于变酸的酒表面，是由原酒中的醋酸菌大量繁殖形成的，C错误； D、醋酸菌是一种好氧菌，"挠搅"有利于酒精与醋酸菌充分接触，还可以增加溶液中的溶解氧，D正确。 故选C。 4．（2025·江苏·二模）某研究小组以软枣猕猴桃和苹果为原料制备复合果醋饮料，工艺流程如下图。下列叙述错误的是（    ）    A．发酵的原理主要是利用酵母菌的无氧呼吸和醋酸菌的有氧呼吸 B．步骤①中加入适量的纤维素酶和果胶酶以提高出汁率 C．步骤②中加入绵白糖能促进酵母菌的生长、繁殖和发酵 D．流程中两次杀菌处理的目的、方式及强度均相同 【答案】D 【分析】果酒制作菌种是酵母菌，代谢类型是异养兼性厌氧型真菌，属于真核细胞，条件是18～30℃、前期需氧，后期不需氧；果醋制作菌种是醋酸菌，属于原核细胞，适宜温度为30～35℃，需要持续通入氧气。 【详解】A、酒精发酵阶段（酵母菌）需无氧条件，酵母菌通过无氧呼吸将糖转化为乙醇和CO2；醋酸发酵是醋酸菌在氧气参与下将乙醇氧化为醋酸，A正确； B、软枣猕猴桃和苹果的细胞壁主要成分为纤维素和果胶。步骤①中加入纤维素酶和果胶酶可水解细胞壁，破坏细胞结构，释放细胞内的汁液，显著提高出汁率，B正确； C、绵白糖（蔗糖）可被酵母菌分泌的蔗糖酶分解为葡萄糖和果糖，为酵母菌的生长、繁殖及酒精发酵提供碳源和能量。因此，步骤②中添加绵白糖对酵母菌的代谢活动具有促进作用，C正确； D、流程中两次杀菌处理的目的、方式及强度均不同：第一次杀菌（发酵前）：目的：杀灭原料中的杂菌，避免其与酵母菌竞争营养或干扰发酵。方式：可能采用巴氏消毒（60～70℃处理一定时间），既能灭菌又减少对原料营养的破坏。强度：温和杀菌。第二次杀菌（醋酸发酵后、产品灌装前）：目的：彻底杀灭果醋中的微生物（包括醋酸菌），防止产品腐败变质，延长保质期。方式：通常采用高温高压灭菌或超高温瞬时灭菌（是把加热温度设为135-150℃、加热时间为2-8s、加热后产品达到商业无菌要求的杀菌过程。）。强度：彻底灭菌。综上，两次杀菌在目的（阶段性灭菌vs终产品灭菌）、方式（巴氏消毒vs高温灭菌）及强度（温和vs彻底）上均不同，D错误。 故选D。 5．（2025·北京西城·二模）啤酒是以大麦为主要原料经酵母菌发酵制成的，下列叙述正确的是（　　） A．酵母菌为兼性厌氧微生物 B．淀粉分解形成糖浆后无需灭菌 C．发酵时发酵罐中pH恒定不变 D．发酵后直接消毒分装获得产品 【答案】A 【分析】发酵工程是指采用现代工程技术手段，利用微生物的某些特定功能，为人类生产有用的产品，或直接把微生物应用于工业生产过程的一种技术。发酵工程的内容包括菌种选育、培养基的配制、灭菌、种子扩大培养和接种、发酵过程和产品的分离提纯（生物分离工程）等方面。 【详解】A、酵母菌为兼性厌氧微生物，既能进行有氧呼吸，也能进行无氧呼吸，A正确； B、淀粉分解形成糖浆后需灭菌，B错误； C、发酵时产生CO2，会使发酵罐中pH下降，C错误； D、消毒后还需要进行过滤，D错误。 故选A。 6．（2025·广东·二模）酿酒主要借助酵母菌的发酵作用，可以在家庭进行，也可以实现工业化生产。科研人员进行了关于杂种酵母菌在不同基质中的发酵测试，结果见图，下列叙述错误的是（    ）    A．实验结果表明，酵母菌对蔗糖和淀粉的利用效率相近 B．为提高酒精产量，实验过程应该保持严格的无氧条件 C．家庭酿酒可在糯米中加入适量白砂糖以提高发酵效率 D．家庭酿酒难以严格灭菌，需要通过消毒抑制杂菌生长 【答案】B 【分析】果酒的制作离不开酵母菌，酵母菌是兼性厌氧微生物，在有氧条件下，酵母菌进行有氧呼吸，大量繁殖，把糖分解成二氧化碳和水；在无氧条件下，酵母菌能进行酒精发酵。 【详解】A、观察曲线图可知，甲组（5%蔗糖溶液 + 蒸煮过的糯米）和乙组（蒸煮过的糯米）在相同时间内酒精相对含量变化趋势相近，说明酵母菌对蔗糖和淀粉的利用效率相近，A正确； B、酵母菌在有氧条件下进行有氧呼吸大量繁殖，在无氧条件下进行无氧呼吸产生酒精，在发酵前期适当通入氧气让酵母菌大量繁殖，后期保持无氧条件可提高酒精产量，并非整个实验过程都要保持严格无氧条件，B错误； C、从图中可以看出甲组（含蔗糖）的发酵效果较好，所以家庭酿酒在糯米中加入适量白砂糖（主要成分是蔗糖）能为酵母菌提供更多易利用的碳源，可提高发酵效率，C正确； D、家庭酿酒难以做到严格灭菌，通过消毒（如对器具清洗、用开水烫等 ）可抑制杂菌生长，保证酿酒顺利进行，D正确。 故选B。 7．（2025·河南许昌·二模）下列关于传统发酵技术应用的叙述正确的是（    ） A．传统发酵技术是利用不同原核生物产生不同代谢废物的原理，生产人们需要的产物 B．传统发酵技术制作果酒、果醋和腐乳通常都不是单一菌种发酵 C．在一段时间内，果醋制作过程中发酵液pH逐渐降低，果酒制作过程中pH升高 D．泡菜坛内有时会长一层白膜，这层白膜是产膜乳酸菌繁殖形成的 【答案】B 【分析】传统发酵是指直接利用原材料中天然存在的微生物，或利用前一次发酵保存下来的发酵物中的微生物进行发酵、制作食品的技术。 【详解】A、传统发酵技术利用的微生物有原核生物（如乳酸菌），也有真核生物（如酵母菌、毛霉），A错误； B、家庭制作果酒、果醋和腐乳利用的都是自然界的菌种，通常都不是单一菌种发酵，B正确； C、果醋制作利用的是醋酸菌，醋酸菌能够产生醋酸，使溶液的pH逐渐降低；果酒制作过程中，酵母菌无氧呼吸产生二氧化碳与酒精，二氧化碳溶于水形成碳酸，随着二氧化碳浓度的增加，溶液的pH逐渐降低，因此果酒、果醋制作过程中溶液的pH都是逐渐降低，C错误； D、泡菜坛内有时会长一层白膜，这层白膜是由于产膜酵母的繁殖形成的，D错误。 故选B。 8．（2025·江西赣州·二模）我国古代著作《天工开物》中有关于酒曲的制作过程：“……造者将麦连皮，井水淘净，晒干，时宜盛暑天。磨碎，即以淘麦水和作块，用楮叶包扎，悬风处，或用稻秸罨黄（稻草覆盖使其变黄），经四十九日取用……”。下列叙述错误的是（　　） A．利用酒曲酿酒时，糖的分解与代谢物的生成主要在厌氧条件下完成 B．“将麦连皮，井水淘净”可避免麦皮破损，减少被杂菌污染的机会 C．“以淘麦水和作块”为酒曲的制作提供了天然野生菌种和少量营养 D．“稻秸罨黄”可保温保湿，是为了利于酵母菌、黄曲霉等微生物生长 【答案】D 【分析】醋酸菌好氧型细菌，当缺少糖源时和有氧条件下，可将乙醇（酒精）氧化成醋酸；当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的葡萄糖分解成醋酸；醋酸菌生长的最佳温度是在30℃～35℃。 【详解】A、酿酒过程中，前期酵母菌在有氧条件下大量繁殖，后期在无氧条件下将糖分解为酒精和二氧化碳，同时生成代谢物，所以糖的分解与代谢物的生成主要在厌氧条件下完成，A正确； B、“将麦连皮，井水淘净”，淘净可以去除麦皮表面的杂质等，避免麦皮破损能减少杂菌进入麦内部的机会，从而减少被杂菌污染的可能性，B正确； C、“以淘米水和作块”，淘米水中含有一些微生物，能为酒曲的制作提供天然野生菌种，同时淘米水中也含有一定的营养物质，可为微生物生长提供少量营养，C正确； D、“稻秸罨黄”（稻草覆盖使其变黄）主要是为了营造一个相对温暖、潮湿且封闭的环境，有利于米曲霉等微生物生长繁殖，而不是酵母菌、黄曲霉等，且黄曲霉是一种有害菌，会产生黄曲霉毒素，对人体有害，不是酒曲制作中需要的有益微生物，D错误。 故选D。 9．（2025·山东菏泽·二模）可根据微生物发酵时对氧气的需求不同，将微生物发酵分为好氧发酵和厌氧发酵。下列相关说法正确的是（    ） A．果酒发酵时，应利用葡萄皮上的野生酵母菌直接进行厌氧发酵 B．果醋发酵时，当氧气和糖源都缺少时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸 C．泡菜制作时，应将泡菜盐水注满泡菜坛以利于乳酸菌进行厌氧发酵 D．生产单细胞蛋白时，酵母菌可利用纤维素水解液进行好氧发酵 【答案】D 【分析】参与果酒制作的微生物是酵母菌，其新陈代谢类型为异养兼性厌氧型。参与果醋制作的微生物是醋酸菌，其新陈代谢类型是异养需氧型。果醋制作的原理：当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的葡萄糖分解成醋酸；当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。 【详解】A、自然发酵中的菌种来自于附着在葡萄皮上的野生酵母菌，但通常在前期通入氧气使其大量繁殖，后期再隔绝氧气进行厌氧发酵，A错误； B、醋酸菌是好氧生物，氧气缺少时不能存活，B错误； C、泡菜制作过程中，将经过预处理的新鲜蔬菜混合均匀，装入泡菜坛内，装至半坛时，放入蒜瓣、生姜及其他香辛料，继续装至八成满，再徐徐注入配制好的盐水，使盐水没过全部菜料，盖好坛盖，在坛盖边沿的水槽中注满水，以保证坛内乳酸菌发酵所需的无氧环境，C错误； D、微生物含有丰富的蛋白质，以淀粉或纤维素的水解液，制糖工业的废液等为原料，通过发酵获得了大量的微生物菌体，单细胞蛋白就是微生物菌体本身，所以以淀粉或纤维素的水解液、制糖工业的废液等为原料，通过发酵可获得单细胞蛋白，D正确。 故选D。 10．（2025·山东日照·二模）用“麦汁酸化”法酿造的酸啤酒既有麦芽清香又酸甜适口。它是通过微生物发酵将麦汁中的麦芽糖等糖类转化为醋酸和乳酸，再结合酒精发酵制作而成。下列说法正确的是（　　） A．前期需在同一容器中同时进行醋酸和乳酸发酵 B．麦汁酸化后需经熬煮、冷却后才可接种酵母菌 C．酒精发酵时，发酵罐中温度应控制在30~35℃ D．可通过对啤酒进行高压蒸汽灭菌来延长保存期 【答案】B 【分析】果酒的制作离不开酵母菌，酵母菌是兼性厌氧微生物，在有氧条件下，酵母菌进行有氧呼吸，大量繁殖，把糖分解成二氧化碳和水；在无氧条件下，酵母菌能进行酒精发酵。 【详解】A、醋酸菌是好氧菌，在无氧条件下不能存活，而乳酸菌是厌氧菌，在有氧条件下不能存活，所以醋酸菌与乳酸菌不能在同一容器中发酵，A错误； B、抗酸性高的酵母菌适应于酸性环境，麦汁酸化后经熬煮和冷却创造了酵母菌适宜的生活环境‌，再接种酵母菌进行发酵，B正确； C、酒精发酵需要酵母菌，酵母菌最适宜生长繁殖的温度范围是18～30℃，所以后期发酵产生酒精时，应将发酵温度控制在18～30℃范围内，C错误； D、为延长啤酒的保存期，常用消毒法杀死啤酒中的大多数微生物，高压蒸汽灭菌法是灭菌方法，不是消毒方法，D错误。 故选B。 11．（2025·江西萍乡·二模）莲花血鸭是江西萍乡的一道营养丰富、风味独特的名菜，其烹制的关键在于鸭血的处理。鸭血需先用莲花本地糯米酒进行调配，待鸭肉炒熟后再加入鸭血翻炒并使之均匀裹在鸭肉上。下列说法正确的是（    ） A．翻炒时的高温使鸭肉和鸭血中的蛋白质变性，肽键断裂 B．鸭血和猪血都适合作为提取DNA的材料 C．糯米酒的酿制过程中，酵母菌通过无氧呼吸将葡萄糖中的能量转变为热能和酒精 D．糯米酒可能通过溶解、挥发等过程去除腥味物质，提升香味，成就莲花血鸭的独特风味 【答案】D 【分析】1、蛋白质变性是指蛋白质在某些物理和化学因素作用下其特定的空间构象被破坏，从而导致其理化性质的改变和生物活性丧失的现象，但肽键一般不断裂； 2、提取DNA时，通常选择含有细胞核的细胞，哺乳动物成熟的红细胞没有细胞核，不适合作为提取DNA的材料； 3、酵母菌在无氧条件下进行无氧呼吸，将葡萄糖分解为酒精和二氧化碳，并释放出少量能量。 【详解】A、翻炒时的高温使鸭肉和鸭血中的蛋白质变性，蛋白质的空间结构被破坏，但肽键不断裂，A错误； B、猪血中的红细胞没有细胞核，不适合作为提取DNA的材料，而鸭血中的红细胞有细胞核，可以作为提取DNA的材料，B错误； C、糯米酒的酿制过程中，酵母菌通过无氧呼吸将葡萄糖中的能量转变为热能、酒精中的化学能以及少量ATP中的化学能，C错误； D、糯米酒可能通过溶解、挥发等过程去除腥味物质，提升香味，成就莲花血鸭的独特风味，D正确。 故选D。 12．（2025·安徽滁州·二模）在小镇集市上，摆满了各种传统发酵食品。色泽诱人的果酒散发着醉人的香气，果醋透着淡淡的果香与醋酸味。一旁的腐乳散发着独特的酱香，泡菜则有着清爽的酸辣口感。这些都是传统发酵技术的成果，下列相关叙述正确的是（　　） A．制作腐乳时，让豆腐长“毛”，这些毛状的微生物主要是毛霉 B．泡菜腌制过程中，随着发酵时间的延长，亚硝酸盐含量越来越高 C．传统发酵以混合菌种的液体发酵为主，通常是家庭式或作坊式的 D．将葡萄酒制作成果醋时，需要通入无菌空气，其他环境条件不变 【答案】A 【分析】传统发酵是指直接利用原材料中天然存在的微生物，或利用前一次发酵保存下来的发酵物中的微生物进行发酵、制作食品的技术。 【详解】A、制作腐乳时，让豆腐长“毛”，这些毛状的微生物主要是毛霉，毛霉是真核生物，A正确； B、泡菜腌制过程中，随着发酵时间的延长，亚硝酸盐含量先升高后降低，B错误； C、传统发酵以混合菌种的固体或半固体发酵为主，通常是家庭式或作坊式的，C错误； D、将葡萄酒制作成果醋时，需要通入无菌空气，而且还需要适当升高温度，因为醋酸菌发酵的适宜温度高于酵母菌，D错误。 故选A。 13．（2025·山东青岛·二模）小曲白酒清香纯正，以大米、大麦、小麦等为原料，以小曲为发酵剂酿造而成，小曲中含多种微生物，传统酿造工艺流程如图所示。下列说法错误的是（　　）    A．泡粮的目的是让谷物吸水膨胀，打破休眠状态，唤醒胚芽中的酶系统 B．糖化的目的主要利用微生物将淀粉水解 C．蒸粮可以使淀粉糊化并且杀菌防腐，为了有良好的发酵效果，发酵温度控制在28℃左右 D．制酒后若要继续制醋，则可以利用白酒继续进行发酵，将密封的发酵罐打开即可 【答案】D 【分析】1、果酒的制作离不开酵母菌，酵母菌是兼性厌氧微生物，在有氧条件下，酵母菌进行有氧呼吸，大量繁殖，把糖分解成二氧化碳和水；在无氧条件下，酵母菌能进行酒精发酵。故果酒的制作原理是酵母菌无氧呼吸产生酒精，酵母菌最适宜生长繁殖的温度范围是18～30℃；生产中是否有酒精的产生，可用酸性重铬酸钾来检验，该物质与酒精反应呈现灰绿色。 2、果醋制作中起到主要作用的微生物是醋酸菌，醋酸菌是一种好氧细菌，只有当氧气充足时，才能进行旺盛的生理活动，其代谢类型属于异养需氧型。当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解为醋酸；当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。醋酸菌的最适生长温度为30～35℃。 【详解】A、泡粮是酿造白酒的第一步，其目的是让谷物充分吸水膨胀，打破休眠状态，同时唤醒胚芽中的酶系统，为后续的糖化等过程做准备，A正确； B、糖化过程中，利用小曲中含有的多种微生物，将谷物中的淀粉水解为可发酵性糖，为发酵提供底物，B正确； C、蒸粮一方面可以使淀粉糊化，使其更易于被微生物利用；另一方面能够杀菌防腐，减少杂菌对发酵的影响。而酒精发酵时，适宜的温度一般控制在18 - 30℃，在这个温度范围内，酵母菌等微生物的活性较高，发酵效果较好，所以发酵温度控制在28℃左右是合理的，C正确； D、制酒过程主要是酵母菌在无氧条件下将糖转化为酒精，而制醋过程需要醋酸菌在有氧条件下将酒精转化为醋酸。若要利用白酒继续制醋，不仅需要打开密封的发酵罐提供氧气，还需要接种醋酸菌等条件，仅打开发酵罐是不能实现的，D错误。 故选D。 14．（2025·浙江宁波·二模）传统泡菜的制作是利用蔬菜表面的微生物来进行发酵。下列叙述错误的是（　　） A．盐水应煮沸冷却后再倒入泡菜坛中 B．用水密封泡菜坛以实现气体只出不进 C．添加陈泡菜水可缩短泡菜制作的时间 D．泡菜制作中的亚硝酸盐含量逐渐降低 【答案】D 【分析】1.泡菜的制作原理：泡菜的制作离不开乳酸菌．在无氧条件下，乳酸菌将葡萄糖分解成乳酸。 2.泡菜的制作过程：按照清水与盐的质量比为4：1的比例配制盐水，将盐、水煮沸冷却。将经过预处理的新鲜蔬菜混合均匀，装入泡莱坛内，装至半坛时，放入蒜瓣、生姜及其他香辛料，继续装至八成满，再徐徐注入配制好的盐水，使盐水没过全部菜料，盖好坛盖。向坛盖边沿的水槽中注满水，以保证坛内乳酸菌发酵所需的无氧环境。在发酵过程中要注意经常向水槽中补充水。发酵时间长短受室内温度的影响。 【详解】A、盐水煮沸可以杀死盐水中的杂菌，冷却后再倒入泡菜坛中，能避免高温杀死蔬菜表面的乳酸菌等发酵菌种，A正确； B、用水密封泡菜坛，创造无氧环境，在发酵过程中产生的气体可以排出，而外界空气不易进入，实现气体只出不进，B正确； C、陈泡菜水中含有乳酸菌等发酵菌种，添加陈泡菜水相当于接种了菌种，可缩短泡菜制作的时间，C正确； D、在泡菜制作过程中，亚硝酸盐含量先逐渐增加，在发酵到一定时间后，亚硝酸盐含量会逐渐降低，并非一直逐渐降低，D错误。 故选D。 15．（2025·江西上饶·二模）北魏农学巨著《齐民要术》记载了许多古人在实际生产中积累的经验，也蕴藏着众多生物学知识。请阅读下表中的古籍原文，判断以下相关叙述，正确的是（　　） 工艺名称 古籍原文 酿酒技术 浸曲发，如鱼眼汤，净淘米八斗，炊作饭，舒令极冷…… 制醋技术 大率酒一斗，用水三斗，合瓮盛，置日中曝之……七日后当臭，衣生，勿得怪也，但停置，勿移动，挠搅之。数十日，醋成。 A．实验室里培养制醋微生物时，一般需将温度设置在18℃～30℃ B．“鱼眼汤”是指液面冒出小泡的现象，主要是醋酸菌呼吸作用释放CO2形成 C．“衣生”指发酵液表面形成一层菌膜的现象，主要是由酵母菌大量繁殖形成 D．酿酒过程与制醋过程所用微生物的主要区别是有无以核膜为界限的细胞核 【答案】D 【分析】1、参与酒精的制作的微生物是酵母菌，酵母菌是兼性厌氧型微生物，在有氧条件下进行有氧呼吸将葡萄糖分解为二氧化碳和水，在无氧条件下生成酒精和二氧化碳。 2、果醋制作的原理：当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的果糖分解成醋酸。当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。 3、泡菜制作的原理是利用乳酸菌在无氧条件下发酵形成乳酸。 【详解】A、制醋主要利用醋酸菌，醋酸菌的最适生长温度一般为30～35℃，A错误； B、“鱼眼汤”是指液面冒出小泡的现象，主要是酵母菌呼吸作用释放CO₂形成，B错误； C、“衣生”指发酵液表面形成一层菌膜的现象，主要是由醋酸菌大量繁殖形成，C错误； D、酿酒主要利用酵母菌，是真核生物，制醋主要利用醋酸菌，是原核生物，真核生物有以核膜为界限的细胞核，而原核细胞没有，D正确。 故选D。 16．（2025·山东潍坊·二模）山葡萄酿酒发酵的工艺流程为：设备消毒和灭菌→原材料准备→酵母菌扩大培养→发酵罐发酵→压榨分离→贮酒陈酿等。贮酒陈酿时酒罐上层覆薄层95%的酒精。下列说法正确的是（　　） A．该酿造发酵技术与传统发酵酿酒均需要消毒和灭菌 B．去除山葡萄果梗应在冲洗前进行 C．酵母菌扩大培养要严格控制无氧条件 D．陈酿时覆薄层酒精可减少杂菌的污染 【答案】D 【分析】果酒的制作离不开酵母菌。酵母菌是兼性厌氧型微生物。在有氧条件下，酵母菌进行有氧呼吸，大量繁殖；在无氧条件下，酵母菌进行酒精发酵。 【详解】A、由题意可知：该酿造发酵技术对使用的设备进行了消毒和灭菌处理，但传统发酵酿酒时只进行了消毒处理，没有进行灭菌处理，A错误； B、用山葡萄酿酒时，去除山葡萄果梗应在冲洗后进行，这可以避免除去枝梗时因引起葡萄破损而增加被杂菌污染的机会，B错误； C、在酵母菌扩大培养过程中，通常会采取措施促进有氧呼吸，以提高酵母的生长和繁殖效率，因此酵母菌扩大培养不需要严格控制无氧条件，C错误； D、陈酿时覆薄层酒精可减少杂菌的污染，因为酒精具有杀菌作用，能够抑制杂菌的生长，D正确。 故选D。 17．（2025·内蒙古包头·二模）传统发酵技术为我们提供了多种食品、饮料及调味品。下列叙述错误的是（    ） A．泡菜腌制利用了乳酸菌的乳酸发酵 B．用果酒发酵制作果醋的主要菌种是酵母菌 C．家庭酿制米酒的过程既有有氧呼吸又有无氧呼吸 D．传统发酵通常是利用多种微生物进行的混合发酵 【答案】B 【分析】参与果酒制作的微生物是酵母菌，其新陈代谢类型为异养兼性厌氧型。参与果醋制作的微生物是醋酸菌，其新陈代谢类型是异养需氧型。果醋制作的原理：当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的葡萄糖分解成醋酸；当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。 【详解】A、乳酸菌是泡菜制作的主要菌种，泡菜腌制利用了乳酸菌的乳酸发酵，A正确； B、用果酒发酵制作果醋的主要菌种是醋酸菌，醋酸菌是好氧型微生物，B错误； C、家庭酿制米酒主要用的是酵母菌，在酿制米酒的过程中，首先让酵母菌在有氧的环境进行增殖，然后在无氧的环境中进行发酵，C正确； D、传统发酵食品所用的是自然菌种，没有进行严格的灭菌，以混合菌种的固体发酵及半固体发酵为主，D正确。 故选B。 18．（2025·甘肃庆阳·二模）江西有很多由传统发酵技术制作出的美食，比如南酸枣果醋、婺源酸菜、李渡烧酒、吉安霉鱼等。下列关于传统发酵技术的叙述，正确的是（　　） A．醋酸菌的最适生长温度在30 ~35 ℃，9—10月南酸枣开始收获，此时正是酿南酸枣果醋的好时候 B．婺源酸菜是将蔬菜揉搓、晾晒后配以佐料密封存储约60天后制成的，其酸味主要源于醋酸 C．李渡烧酒以大米和高粱为原料，经发酵、蒸馏等步骤制成，其制作全过程应严格隔绝空气，保证无氧 D．已知霉鱼的制作工艺和腐乳相同，可推测其中起发酵作用的菌种就是毛霉 【答案】A 【分析】醋酸菌为异养好氧菌，其呼吸产物为醋酸，在进行醋酸的生成时，适宜温度为30℃~35℃。 【详解】A、醋酸菌的最适生长温度为30 - 35℃ ，9 - 10月南酸枣开始收获，此时温度适宜醋酸菌生长，正是酿制南酸枣果醋的时候，A正确； B、婺源酸菜的酸味主要源于乳酸菌发酵产生的乳酸，而不是醋酸，B错误； C、李渡烧酒制作时，前期糖化阶段需要有一定氧气，让酵母菌进行有氧呼吸大量繁殖，后期酒精发酵阶段需要严格无氧条件，所以不是全过程都要严格隔绝空气、保证无氧，C错误； D、霉鱼的制作可能有多种微生物参与，不能仅因为制作工艺和腐乳相同就确定其中起发酵作用的菌种就是毛霉，D错误。 故选A。 19．（2025·云南红河·二模）红毛丹山楂复合醋的主要生产流程如下图所示。在酒精发酵阶段，初始糖度过高会使酒精度下降。下列相关叙述错误的是（    ）    A．与酒精发酵阶段相比，醋酸发酵阶段需提供氧气并适当升高温度 B．该流程中的醋酸发酵，利用了醋酸菌将糖直接分解成乙酸的原理 C．若要探究酒精发酵的最适初始糖度，各组的酵母菌接种量应相同 D．初始糖度过高使发酵液渗透压升高，进而抑制酵母菌的酒精发酵 【答案】B 【分析】醋酸菌是一种好氧细菌，只有当氧气充足时，才能进行旺盛的生理活动。醋酸菌对氧气的含量特别敏感，当进行深层发酵时，即使只是短时间中断通入氧气，也会引起醋酸菌死亡。当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将分解成醋酸，当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。醋酸菌的最适生长温度为30~35℃。 【详解】A、酒精发酵是利用酵母菌无氧呼吸产生酒精，醋酸发酵是利用醋酸菌有氧条件产生醋酸，且醋酸菌适宜的温度是30~35℃，酵母菌适宜的温度是18~30℃，因此，与酒精发酵阶段相比，醋酸发酵阶段需提供氧气并适当升高温度，A正确； B、当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸，当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸，该流程中的醋酸发酵，利用了醋酸菌将乙醇转变成乙酸，B错误； C、若要探究酒精发酵的最适初始糖度，各组的酵母菌接种量为无关变量，应相同，C正确； D、初始糖度过高使发酵液渗透压升高，会使酵母菌失水，进而抑制酵母菌的酒精发酵，D正确。 故选B。 20．（2025·河北·二模）马奶酒是蒙古族特有的一种饮品，以新鲜马奶为原料，经过过滤去除杂质，然后加热至80~90℃，再迅速冷却至20～30℃后，加入菌粉发酵使其达到一定酸度，再添加糖、水和菌粉，进行二次发酵，获得马奶酒。下列相关叙述错误的是（    ） A．添加糖主要是为酵母菌提供碳源和能源 B．新鲜马奶加热至80～90℃主要是为杀灭杂菌 C．两次加入的“菌粉”所属菌种不同，前者是乳酸菌 D．制作马奶酒过程中的两次发酵都属于纯种发酵 【答案】D 【分析】果酒制作的原理是酵母菌无氧呼吸产生酒精和二氧化碳，酵母菌是兼性厌氧微生物，在缺氧 条件下进行无氧呼吸，在氧气充足的条件下进行有氧呼吸，酵母菌具有核膜包被的细胞核， 属于真核生物，适宜酵母菌生长的温度范围是18~30°C。 【详解】A、马奶酒酿制的主要微生物之一是酵母菌，添加糖主要是为酵母菌提供碳源和能源，A正确； B、新鲜马奶加热至80～90℃主要是消灭各种杂菌，B正确； C、两次加入的“菌粉”所属菌种不同，前者是乳酸菌，后者是酵母菌，C正确； D、制作马奶酒过程中的两次发酵，都没有经过严格灭菌，每一次发酵都不属于纯种发酵，D错误。 故选D。 21．（2025·浙江金华·二模）某制醋工艺流程如下图所示。酒曲中含有霉菌、酵母菌、乳酸菌等菌种，霉菌能够产生糖化酶将淀粉水解。醋醅含有醋酸菌。下列叙述错误的是（　　） A．该发酵过程属于混菌发酵，可改善成品的风味 B．醋酸发酵过程中经常翻动发酵物，有利于改善通气状况 C．糖化和酒精发酵阶段的温度应高于醋酸发酵阶段的温度 D．装坛的成品中不含有醋酸菌等发酵菌种 【答案】C 【分析】酵母菌是兼性厌氧型真菌，在无氧条件下，酵母菌进行酒精发酵，可用于酿酒等。醋酸菌是一种好氧细菌，当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将糖分解成醋酸；当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸，可用于制作各种风味的醋。 【详解】A、该发酵为传统发酵，属于混菌发酵，可改善成品的风味，A正确； B、醋酸菌为好氧菌，醋酸发酵过程中经常翻动发酵物，有利于改善通气状况，B正确； C、糖化和酒精发酵阶段的温度应低于醋酸发酵阶段的温度，C错误； D、装坛的成品中不含有醋酸菌等发酵菌种，以免成品受杂菌污染而腐败变质，D正确。 故选C。 22．（2025·安徽黄山·二模）我国具有悠久的酿酒文化和历史，白酒小窖酿造属于传统发酵技术，已选入非物质文化 遗产保护名录。窖池容积小，它的土壤和发酵酒醅的接触面大，从而能够产生更多的香 气成分带入酒中。下列叙述错误的是（　　） A．小窖酿造是以酿酒酵母为主的多种微生物共同作用下完成的 B．对分离出的酿酒酵母做扩大培养，需在无菌、无氧环境中进行 C．小窖酿造的原料多以优质谷物为主，发酵酒醅中可分离出产淀粉酶的微生物 D．窖池中形成的相对稳定的微生物体系不容易被杂菌污染，因此不需要严格灭菌 【答案】B 【分析】果酒的制作离不开酵母菌，酵母菌是兼性厌氧微生物，在有氧条件下，酵母菌进行有氧呼吸，大量繁殖，把糖分解成二氧化碳和水；在无氧条件下，酵母菌能进行酒精发酵。故果酒的制作原理是酵母菌无氧呼吸产生酒精。 【详解】A、小窖酿造过程中，酿酒酵母是主要菌种，但其他微生物也参与其中，共同形成香气成分，A正确； B、酵母菌在有氧时大量繁殖，无氧时主要发酵产酒精，对分离出的酿酒酵母做扩大培养需要在有氧条件下进行，B错误； C、谷物中的淀粉需经糖化（分解为葡萄糖）才能被酵母利用，发酵酒醅中可能含有产淀粉酶的微生物，C正确； D、传统发酵中，窖池内酸性环境会抑制杂菌生长，已形成稳定的微生物群落，无需严格灭菌，D正确。 故选B。 23．（2025·江西南昌·二模）与传统发酵食品制作有关的谚语充分体现了民间智慧，同时蕴含着微生物学原理。下列说法正确的是（    ） A．“无盐不成泡，老水养新菜”，制作泡菜时盐水抑制杂菌生长，“老水”中富含酵母菌 B．“白毛裹豆腐，方得腐乳香”，“白毛”主要是乳酸菌菌丝，将豆腐蛋白分解为肽和氨基酸 C．“酒败成醋，霉香变酱”，果酒发酵时若密封不良会产生醋，制酱油依赖黑曲霉等霉菌 D．“一菌一世界，百味出坛中”，传统发酵为单一菌种发酵，产品风味主要来自发酵产物 【答案】C 【分析】发酵是指人们利用微生物，在适宜的条件下，将原料通过微生物的代谢转化为人类所需要的产物的过程。 【详解】A、制作泡菜使用的微生物是乳酸菌，“老水”中富含乳酸菌，A错误； B、腐乳制作时使用的微生物主要是毛霉，故豆腐块上长的“白毛”主要是毛霉，B错误； C、果酒发酵时若密封不良，会有氧气进入发酵液，有氧条件下醋酸菌会将乙醇转化为乙醛，再将乙醛变为乙酸；以大豆为主要原料，利用产生蛋白酶的霉菌（如黑曲霉），将原料中的蛋白质水解成小分子的肽和氨基酸，然后经淋洗、调制成的酱油产品，C正确； D、传统发酵以混合菌种的固体发酵及半固体发酵为主，D错误。 故选C。 24．（2025·安徽马鞍山·二模）生物技术与工程学相结合在制备生物工程产品、医学研究等领域有广泛应用。下列叙述错误的有（    ） ①无氧条件下，在果酒发酵产物中加入醋酸菌进行果醋发酵 ②用根尖的成熟区细胞进行植物组织培养，可以获得脱毒幼苗 ③利用植物体细胞杂交技术可以打破生殖隔离，实现远缘杂交育种 ④蛋白质工程可以生产自然界中不存在的蛋白质以满足人们的需求 ⑤利用细胞工程进行治疗性克隆应受到有效监控和严格审查 A．1项 B．2项 C．3项 D．4项 【答案】B 【分析】1、植物细胞工程技术的应用：植物繁殖的新途径（包括微型繁殖，作物脱毒、人工种子等）、作物新品种的培育（单倍体育种、突变体的利用）、细胞产物的工厂化生产。 2、植物体细胞杂交技术：就是将不同种的植物体细胞原生质体在一定条件下融合成杂种细胞，并把杂种细胞培育成完整植物体的技术。 【详解】①醋酸菌是需氧型菌，①错误； ②植物的分生区病毒极少甚至无病毒，因此利用其进行植物组织培养，可以获得脱毒幼苗，②错误； ③植物体细胞杂交技术最大的优点就是克服生物远缘杂交不亲和的障碍，③正确； ④蛋白质工程是指以蛋白质分子的结构规律及其生物功能的关系作为基础，通过基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行改造，或制造一种新的蛋白质，以满足人类的生产和生活的需求。因此，蛋白质工程需通过基因修饰或基因合成来改造原有蛋白质，生产出自然界中不存在的新型蛋白质分子，④正确； ⑤生殖性克隆人的技术尚未完全成熟，我国政府不赞成、不允许、不支持、不接受任何生殖性克隆人的实验，主张对治疗性克隆进行有效监控和严格审查，⑤正确。 故选B。 25．（2025·山东·二模）随着发酵工程的不断发展，发酵技术在医药工业以及农牧业等许多领域得到了广泛应用，下列说法正确的是（　　） A．传统发酵技术没有对器具、原料等进行灭菌，因此无法完全保证其产品质量 B．家庭制作泡菜和果醋过程中，发酵液表层出现的白膜是由同种微生物形成 C．在啤酒工业化生产流程中，焙烤的目的是产生风味组分，并对糖浆灭菌 D．科研人员已成功通过发酵工程获得紫杉醇、青蒿素前体等物质 【答案】A 【分析】1、果酒的制作离不开酵母菌，酵母菌是兼性厌氧微生物，在有氧条件下，酵母菌进行有氧呼吸，大量繁殖，把糖分解成二氧化碳和水；在无氧条件下，酵母菌能进行酒精发酵。故果酒的制作原理是酵母菌无氧呼吸产生酒精，酵母菌最适宜生长繁殖的温度范围是18～30℃，生产中是否有酒精的产生，可用重铬酸钾来检验，该物质与酒精反应呈现灰绿色。 2、啤酒发酵过程分为主发酵和后发酵两个阶段。酵母菌的繁殖、大部分糖的分解和代谢物的生成都在主发酵阶段完成。主发酵结束后，发酵液还不适合饮用，要在低温、密闭的环境下储存一段时间进行后发酵，这样才能形成澄清、成熟的啤酒。 【详解】A、传统发酵技术没有进行严格的灭菌，无法完全保证其产品质量，A正确； B、家庭制作泡菜时，发酵液表层出现的白膜是产膜酵母形成的；而制作果醋过程中，发酵液表层出现的白膜是醋酸菌形成的，它们不是同种微生物，B错误； C、在啤酒工业化生产流程中，焙烤可以杀死大麦种子的胚，防止种子发芽，但不使淀粉酶失活，而对糖浆灭菌在后面的煮沸阶段进行，C错误； D、现阶段还是只能在植物中分离出紫杉醇、青蒿素前体等物质，还不能利用微生物进行发酵，不属于发酵工程的应用，D错误。 故选A。 26．（2025·河北衡水·二模）家庭制作馒头时可以利用前一次发酵保存下来的“面团”，制作泡菜时可以向泡菜坛中加入一些“陈泡菜水”，而工业上大规模生产馒头或泡菜时往往需要添加单一菌种。下列叙述正确的是（　　） A．家庭制作馒头用老面发酵，属于传统发酵技术，传统发酵以混合菌种的液体及半固体发酵为主 B．添加“面团”和“陈泡菜水”可分别为发酵提供乳酸菌和酵母菌等菌种 C．馒头和泡菜的制作都需要创造无氧环境 D．传统发酵存在杂菌情况不明、过程控制缺乏标准等问题 【答案】D 【分析】制作泡菜的实验原理： （1）乳酸菌在无氧条件下，将糖分解为乳酸； （2）利用乳酸菌制作泡菜的过程中会引起亚硝酸盐的含量的变化；温度过高，食盐用量不足10%、腌制时间过短容易造成细菌大量繁殖，亚硝酸盐含量增加。一般在腌制10天后，亚硝酸盐的含量开始下降。 【详解】A、老面中留有酵母菌，家庭制作馒头时采用老面发酵，属于传统发酵技术，传统发酵以混合菌种的固体及半固体发酵为主，A错误； B、“面团”中有酵母菌，“陈泡菜水”中有乳酸菌，添加“面团”和“陈泡菜水”可分别为发酵提供酵母菌和乳酸菌等菌种，B错误； C、泡菜的制作需要创造无氧环境，有利于乳酸菌繁殖和发酵，馒头的制作中需要先创造有氧环境，C错误； D、传统发酵依赖自然环境中的微生物，菌种复杂且杂菌较多，过程控制缺乏标准化，而工业生产通过添加单一菌种可提高品质和一致性，D正确。 故选D。 27．（2025·河北衡水·二模）“葡萄美酿令人痴，一醉方休谁晓知。何日与君同畅饮，凝眸了却苦相思。”下面是果酒和果醋制作的实验流程和某同学设计的果酒和果醋的发酵装置。下列相关叙述中，正确的是（　　） A．在葡萄酒的发酵过程中，发酵液中的H+浓度会有所升高 B．利用葡萄制作果酒时，需要对葡萄和发酵瓶进行消毒处理 C．果酒发酵须每隔12h打开瓶盖防瓶中气压过大，醋酸菌在有氧条件下只可用乙醇进行发酵 D．果酒发酵的适宜温度为30~35℃，果醋发酵的适宜温度为18~30℃ 【答案】A 【分析】果酒制备的菌种是酵母菌，发酵前期酵母菌先进性有氧呼吸，促进酵母菌的繁殖，后期进行无氧呼吸产生酒精。果酒制作的原理是酵母菌在无氧的条件下进行无氧呼吸产生酒精和二氧化碳。参与果醋制作的微生物是醋酸菌，其新陈代谢类型是异养需氧型。果醋制作的原理：当氧气、糖原都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的果糖分解成醋酸。 【详解】A、在葡萄酒的发酵过程中，二氧化碳溶于发酵液生成碳酸，碳酸解离为H+和HCO3-,故发酵液中的H+浓度会有所升高，A正确； B、利用葡萄制作果酒时，需要对榨汁机和发酵瓶等器具进行消毒处理，不能对葡萄消毒，会杀死葡萄皮表面的酵母菌，B错误； C、果酒发酵须每隔12h拧松瓶盖，不能打开；醋酸菌在有氧条件下也可用葡萄糖进行发酵，C错误； D、果酒发酵的适宜温度为18~30℃，果醋发酵的适宜温度为30~35℃，D错误。 故选A。 28．（2025·河南·二模）红糟具有一定的抗氧化、清除体内自由基的功能，还具有降血脂、降血压、提高免疫力等功效。在红曲酒制造的最后阶段，将发酵完成的衍生物，经过筛滤出酒后剩下的渣滓就是酒糟（即红糟）。将新鲜的红糟与蔬菜一同装坛并密封发酵，最终得到风味独特的佐餐佳品红糟酸。下列说法错误的是（    ） A．红糟可能具有延缓衰老、抑制肿瘤发生等作用 B．将红糟与蔬菜装坛后密封，主要目的是抑制细菌繁殖 C．红糟酸呈“酸味”是由乳酸菌进行无氧呼吸产生乳酸引起的 D．微生物发酵产生的代谢物赋予了红糟酸独特的风味 【答案】B 【分析】参与果酒制作的微生物是酵母菌，其新陈代谢类型为异养兼性厌氧型。参与果醋制作的微生物是醋酸菌，其新陈代谢类型是异养需氧型。果醋制作的原理：当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的葡萄糖分解成醋酸；当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。 【详解】A、红糟具有一定的抗氧化、清除体内自由基的功能，还具有提高免疫力等功效，因 此红糟可能具有延缓衰老、抑制肿瘤发生等作用，A正确； B、将红糟与蔬菜装坛后密封，主要目 的是隔绝空气，促进酒精发酵和乳酸发酵，使酒味和酸味经无氧发酵产生，B错误； C、乳酸是酸性物质，红糟酸呈 “酸味”是由乳酸菌进行无氧呼吸产生较多的乳酸引起的，C正确； D、新鲜的红糟与蔬菜一同装 坛并密封发酵，最终得到风味独特的红糟酸，独特的风味是微生物发酵产生的代谢物引起的， D正确。 故选B。 29．（2025·辽宁鞍山·二模）果醋中含有多种有机酸和人体所需的氨基酸，下列有关叙述正确的是（    ） A．利用酒精进行醋酸发酵，发酵液面会出现气泡 B．制作果醋的程序一定是先进行酒精发酵再进行醋酸发酵 C．在醋酸发酵液表面出现的白色菌膜是酵母菌繁殖的结果 D．制果醋不需要严格灭菌，发酵产物醋酸可以抑制杂菌繁殖 【答案】D 【分析】醋酸菌好氧型细菌，当缺少糖源时和有氧条件下，可将乙醇（酒精）氧化成醋酸；当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的葡萄糖分解成醋酸；醋酸菌生长的最佳温度是在30℃～35℃。 【详解】A、醋酸菌好氧型细菌，当缺少糖源时和有氧条件下，可将乙醇（酒精）氧化成醋酸，利用酒精进行醋酸发酵，发酵液面不会出现气泡，A错误； B、制作果醋在糖源和氧气充足的情况下，醋酸菌可以利用葡萄糖直接进行醋酸发酵，B错误； C、醋酸发酵后的发酵液颜色浑浊，发酵液表面有白色菌膜，白膜主要是醋酸菌在有氧条件下大量繁殖生长而成的代谢产物，C错误； D、醋酸呈酸性，可以抑制杂菌繁殖，因此制果醋不需要严格灭菌，D正确。 故选D。 30．（2025·河南安阳·二模）下图为某实验小组利用粉碎的秸秆生产燃料——乙醇的过程图，清水淋洗不会导致菌T流失。下列叙述错误的是（　　）    A．菌T可能是纤维素分解菌，能分泌纤维素酶降解秸秆中的纤维素 B．高产酵母菌菌种可通过诱变育种或基因工程育种获得 C．对酵母菌进行扩大培养时，应用液体培养基并不断通入氧气 D．乙醇发酵装置始终需要密闭，以保证酵母菌无氧呼吸产生乙醇 【答案】D 【分析】果酒的制作离不开酵母菌，酵母菌是兼性厌氧微生物，在有氧条件下，酵母菌进行有氧呼吸，大量繁殖，把糖分解成二氧化碳和水；在无氧条件下，酵母菌能进行酒精发酵。故果酒的制作原理是酵母菌无氧呼吸产生酒精，酵母菌最适宜生长繁殖的温度范围是18～30℃；生产中是否有酒精的产生，可用酸性重铬酸钾来检验，该物质与酒精反应呈现灰绿色。 【详解】A、粉碎的秸秆中含有大量的纤维素，菌T能分解秸秆中的纤维素，可能是由于它能分泌纤维素酶，故菌T可能是纤维素分解菌，A正确； B、性状优良的菌种可以从自然界中筛选，也可通过诱变育种或基因工程育种获得，B正确； C、用液体培养基培养酵母菌可实现酵母菌的扩大培养，通入氧气可促进酵母菌代谢和繁殖，提高酵母菌数量，C正确； D、酵母菌进行乙醇发酵需要无氧条件，装置密封的主要目的是制造无氧环境，但酵母菌无氧呼吸会产生CO2，所以需根据发酵进程适时排放CO2，D错误。 故选D。 31．（2025·江苏南通·二模）“红菌豆渣”是粤东地区特有的一种传统名肴，其生产过程是：焙烤新鲜豆腐渣→将豆腐渣捏成团放入铺有荷叶的筛子、压平、冷却→在渣面上撒上菌种→发酵一天，渣面长出红毛即得到成品。相关叙述错误的是（    ） A．焙烤可降低豆腐渣含水量，利于后期发酵 B．渣面上长出的红毛是酵母菌繁殖形成的 C．豆腐渣中的蛋白质被分解，可增加成品的营养和风味 D．适当增加菌种量、控制发酵温度，可提高发酵效率 【答案】B 【分析】腐乳在制作过程中，经过微生物的发酵，豆腐中是蛋白质被分解成小分子的肽和氨基酸，味道鲜美，易于消化吸收，多种微生物参与豆腐的发酵，如酵母、曲霉和毛霉等，其中起主要作用的是毛霉；传统发酵中，通常会加入前一次发酵保存下来的面团、卤汁等发酵物，来增加菌种量。 【详解】A、过多的水分可能导致腐败菌滋生，而适当的干燥有利于目标菌种的生长，焙烤可以降低豆腐渣的含水量，同时可以杀死部分微生物，有利于后期发酵，A正确； B、渣面上长出的红毛是霉菌的菌丝，酵母菌为单细胞生物，无法产生菌丝，B错误； C、豆腐中的蛋白质可以被分解成小分子的肽和氨基酸，味道鲜美，易于消化吸收，可增加成品的营养和风味，C正确； D、适当增加菌种量可加快发酵速度，缩短发酵时间，适宜温度能优化微生物代谢活性，有利于菌种生长，提高发酵效率，D正确。 故选B。 32．（2025·安徽蚌埠·二模）制作泡菜时，由于乳酸菌的发酵作用，发酵产物乳酸不断积累，因此可以根据微生物的活动情况和乳酸积累量，将泡菜发酵过程分为三个阶段：发酵初期、发酵中期和发酵后期。下列叙述正确的是（    ） A．发酵初期会有气泡产生，原因是乳酸菌无氧呼吸产生了CO2 B．制作泡菜过程中，发酵初期先通气培养，发酵中期再密封发酵 C．发酵中期乳酸的产生使营养物质丰富，其他微生物的数量上升 D．发酵后期乳酸含量继续增加，发酵速度会逐渐变缓甚至停止 【答案】D 【分析】在泡菜发酵过程初期，由于发酵坛内有少量氧气，所以酵母菌会进行有氧呼吸，并产生CO2气体；当氧气耗尽时，开始进行无氧呼吸，该过程也会产生CO2气体，且此时产生的气体会增大坛内气压，使产生的气体和剩余空气从坛沿水槽内溢出。随着发酵过程的进行，乳酸不断积累，当积累到一定程度时，会抑制其他微生物的生长，甚至杀死微生物。到发酵后期，乳酸含量过高，pH过低会抑制乳酸菌的生长。在整个过程中，亚硝酸盐含量的变化是先升高后降低。 【详解】A、发酵初期会有气泡产生，原因是初期还有氧气，酵母菌等微生物进行细胞呼吸产生了CO2，A错误； B、制作泡菜过程中，始终是无氧发酵，不能通气，B错误； C、发酵中期，无氧状态形成，乳酸菌开始活跃，并产生大量乳酸，pH下降，大肠杆菌、酵母菌等杂菌的活动受到抑制，且由于氧气耗尽，需氧型微生物的活动也受到抑制，因此其他微生物的数量下降，C错误； D、发酵后期乳酸含量继续增加，也会抑制乳酸菌的生命活动，导致发酵速度会逐渐变缓甚至停止，D正确。 故选D。 33．（2025·福建·二模）虾酱由小型低值虾经过加盐混合、捣碎、发酵而成。科研人员从虾酱中分离出若干菌株，发现耐盐菌株FELA1能高效产生蛋白酶和脂肪酶。下列叙述错误的是（    ） A．虾酱制作过程中需要对原料和器皿进行严格灭菌处理 B．菌株FELA1能将原料分解为多肽、氨基酸、脂肪酸等风味物质 C．制作时加入盐的目的是抑制杂菌生长，同时调整虾酱的口味 D．对分离出的耐盐菌株FELA1进行研究有利于提升虾酱的品质 【答案】A 【分析】参与腐乳制作的微生物主要是毛霉，其新陈代谢类型是异养需氧型。腐乳制作的原理：毛霉等微生物产生的蛋白酶能将豆腐中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸；脂肪酶可将脂肪分解成甘油和脂肪酸。 【详解】A、虾酱制作利用的是天然存在的微生物进行发酵，若对原料和器皿进行严格灭菌处理，会杀死这些天然微生物，导致无法正常发酵，所以虾酱制作过程中不能对原料和器皿进行严格灭菌处理，A错误； B、因为菌株FELA1能高效产生蛋白酶和脂肪酶，蛋白酶可将蛋白质分解为多肽、氨基酸，脂肪酶能将脂肪分解为脂肪酸等，所以菌株FELA1能将原料分解为多肽、氨基酸、脂肪酸等风味物质，B正确； C、盐具有抑制杂菌生长的作用，同时也能调整虾酱的口味，在制作虾酱时加入盐可达到这两个目的，C正确； D、耐盐菌株FELA1能高效产生蛋白酶和脂肪酶，对其进行研究有利于更好地发挥其作用，从而提升虾酱的品质，D正确。 故选A。 34．（2025·宁夏银川·二模）陕西猕猴桃质地柔软、口感酸甜、风味独特，富含维生素C、胡萝卜素、氨基酸等营养物质，素有“维C之冠”、“水果之王”的美称。采用液体发酵法可酿制出醋香浓郁、酸味纯正的猕猴桃醋，其酿造工艺流程如图所示。下列叙述正确的是（    ）    A．酿醋过程中发酵液的PH逐渐降低，与酿酒过程相反 B．酒精发酵和醋酸发酵所需的温度不同，但通气条件完全相同 C．菌种b在发酵过程中产生的大量CO2导致发酵液pH不断降低 D．采用巴氏消毒法处理猕猴桃醋，基本不会破坏猕猴桃醋中的营养成分 【答案】D 【分析】题图分析，酒精发酵的微生物是菌种a酵母菌，醋酸发酵的微生物是菌种b醋酸菌。 【详解】A、在酿醋过程中，醋酸菌将酒精氧化成醋酸，导致发酵液的pH逐渐降低。而在酿酒过程中，酵母将糖发酵成酒精，发酵液的pH也会逐渐降低。因此，酿醋和酿酒过程中发酵液的pH变化趋势是相同的，而不是相反的，A错误； B、酒精发酵的温度约25~30℃，发酵过程需要先通气后保持无氧条件，醋酸发酵的温度约30~35℃，发酵需要氧气，通气条件不相同，B错误； C、菌种b是醋酸菌，将乙醇氧化为醋酸的过程中不产生二氧化碳，C错误； D、巴氏消毒法杀菌的温度较为温和，采用巴氏消毒法对猕猴桃醋杀菌，可以确保果醋中营养成分基本不被破坏，D正确。 故选D。 35．（2025·湖南常德·二模）黄豆酱富含丰富的小分子肽和氨基酸，味道鲜美。研究人员探究了未添加鸡胸肉的纯黄豆酱(SP)和添加了40%鸡胸肉的黄豆酱(CSP)发酵过程中蛋白质含量、蛋白酶活力、氨基酸态氮含量的变化规律，结果如下图所示。下列叙述错误的是（　　） A．该实验的自变量为是否添加鸡胸肉，因变量为蛋白质含量、蛋白酶活力和氨基酸态氮含量 B．图1表明，发酵过程中，CSP组的蛋白质含量均高于SP组，且降解速率更快 C．由图2推测，发酵前期微生物产生了大量的蛋白酶使氨基酸态氮含量迅速增加 D．综合图1和图2结果，说明添加鸡胸肉有利于提高黄豆酱的品质 【答案】A 【分析】蚕豆瓣酱制作的原理：在多种微生物的协同作用下进行，其中起主要作用的是毛霉，毛霉等微生物产生的蛋白酶可以将蚕豆中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸，脂肪酶可以将脂肪分解成甘油和脂肪酸，淀粉酶将原料中的淀粉分解为葡萄糖。 【详解】A、从实验描述可知，自变量是是否添加鸡胸肉，还有图示横坐标所致的发酵时间，因变量为蛋白质含量、蛋白酶活力和氨基酸态氮含量，A错误； B、图1显示，在发酵前期，CSP组的蛋白质含量均高于SP组，且整个发酵时期内CSP组的蛋白质含量下降幅度要大，单位时间内下降更多，因而降解速率要快，B正确； C、图2中发酵前期氨基酸态氮含量迅速增加，可推测是发酵前期微生物产生大量蛋白酶促进蛋白质降解产生了更多氨基酸态氮，C正确； D、综合图1和图2结果，添加鸡胸肉在一些方面对黄豆酱的品质提升有帮助，如蛋白质降解等，说明添加鸡胸肉有利于提高黄豆酱的品质，D正确。 故选A。 36．（2025·浙江温州·二模）泡菜是一类营养丰富且受大众喜爱的食品。下列属于泡菜制作中必需的操作是（    ） A．蔬菜经高压蒸汽灭菌 B．装坛时盐水没过蔬菜 C．发酵前添加陈泡菜汁 D．发酵中定期开盖排气 【答案】B 【分析】发酵是指人们利用微生物，在适宜的条件下，将原料通过微生物的代谢转化为人类所需的产物的过程，泡菜发酵所需菌种是乳酸菌。 【详解】A、蔬菜经高压蒸汽灭菌会杀灭原材料上的菌种（乳酸菌），导致泡菜制作失败，A错误； B、盐水的作用是提供适宜的环境促进乳酸菌的生长，同时防止其他有害微生物的繁殖。盐水没过蔬菜可以确保蔬菜均匀发酵，并防止蔬菜暴露在空气中导致腐败，B正确； C、陈泡菜汁中含有大量的乳酸菌，添加它可以加速发酵过程，但不是必需过程，C错误； D、泡菜发酵的菌种是乳酸菌，乳酸菌无氧呼吸产物是乳酸，无气体产生，故不需要定期开盖排气，D错误。 故选B。 37．（2025·江苏盐城·二模）下列有关发酵技术的叙述，正确的是（    ） A．制作泡菜过程中，泡菜盐水浓度过高可能会导致泡菜咸而不酸 B．传统制作果酒时，葡萄要尽量清洗干净，以免杂菌污染使果酒变质 C．以大豆为主要原料制作酱油，应选择分泌脂肪酶能力强的黑曲霉 D．果酒和果醋发酵过程中均有pH值先升高后明显下降的现象 【答案】A 【分析】1、果酒制作菌种是酵母菌，代谢类型是兼性厌氧型真菌，属于真核细胞，前期需氧，后期不需氧。 2、果醋制作的菌种是醋酸菌，代谢类型是需氧型细菌，属于原核细胞，条件是30~35℃，一直需氧，当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的果糖分解成醋酸，当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。 3、泡菜的制作的菌种是乳酸菌，代谢类型为异养厌氧型，乳酸菌在无氧条件下，将糖分解为乳酸。 【详解】A、泡菜制作过程中，盐水浓度过高会抑制乳酸菌的发酵活动，导致乳酸产生减少，从而泡菜会显得咸而不酸，A正确； B、传统制作果酒时，葡萄不能过度清洗，因为葡萄表面的野生酵母菌是果酒发酵的关键微生物，过度清洗会将这些酵母菌冲掉，导致发酵失败或杂菌污染，B错误； C、制作酱油主要依赖黑曲霉分泌的蛋白酶，而不是脂肪酶，C错误； D、果酒发酵过程中，酵母菌分解糖产生酒精和二氧化碳，同时会产生有机酸，导致pH值逐渐下降，果醋发酵过程中，醋酸菌将酒精转化为醋酸，pH值也会持续下降，D错误。 故选A。 38．（2025·河南开封·二模）《齐民要术》中描述用酒糟（酿酒产生的副产品，主要由粮食经过酵母发酵后剩余的残渣组成）酿醋的过程：“春酒糟则酽（浓烈），颐酒糟亦中用。然欲作酢（醋）者，糟常湿下，压糟极燥者，酢味薄。作法：用石砲子辣（研磨）谷令破，以水拌而蒸之。熟便下，掸去热气，与糟相拌，必令其均调。…夏日作者，宜冷水淋；春秋作者，宜温卧，…。”下列叙述错误的是（　　） A．“压糟极燥（干燥）者”导致酒糟中酒精含量减少，使醋酸产量降低 B．“石铠子辣谷令破”的操作，有利于淀粉酶与淀粉接触而发生糖化 C．“掸去热气，与糟相拌”的操作可以防止高温杀死酒糟中的微生物 D．“夏日作者，宜冷水淋”的目的是使发酵温度保持在18~30℃之间 【答案】D 【分析】1、参与果酒制作的微生物是酵母菌，其新陈代谢类型为异养兼性厌氧型，在有氧条件下，酵母菌大量繁殖，在无氧条件下，产生酒精； 2、参与果醋制作的微生物是醋酸菌，其新陈代谢类型是异养需氧型，果醋制作的原理：当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸，当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸； 【详解】A 、当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸，所以“压糟极燥（干燥）者”会导致酒糟中酒精含量减少，进而使醋酸产量降低，A正确； B、“石铠子辣谷令破”的操作能使细胞内的物质流出，有利于淀粉酶与淀粉接触而发生糖化，B正确； C、“掸去热气，与糟相拌”的操作可以降低温度，进而防止高温杀死酒糟中的微生物，C正确； D、多数醋酸菌的最适生长温度为30~35℃，“夏日作者，宜冷水淋”的目的是使发酵温度保持在30~35℃之间，D错误。 故选D。 39．（2025·江苏盐城·二模）下列关于传统发酵技术的叙述，正确的是（    ） A．泡菜制作时放入香辛料可抑制杂菌生长和调节风味 B．果醋发酵时将温度控制在 18～30 ℃可避免杂菌污染 C．果酒发酵时须每隔 12 h 打开瓶盖防止瓶中气压过大 D．传统发酵以混合菌种的液体及半固体发酵为主 【答案】A 【分析】１、制作果酒的酵母菌的代谢类型是异养兼性厌氧型，有氧条件下酵母菌有氧呼吸，大量繁殖，无氧条件下发酵产生酒精。 ２、制作果醋的醋酸菌的代谢类型是异养需养型，发酵过程一直要通入无菌空气。 【详解】A、泡菜制作时放入香辛料，一方面香辛料中的某些成分具有抑菌作用，可以抑制杂菌的生长，防止泡菜腐败变质；另一方面，香辛料能赋予泡菜独特的风味，起到调节风味的作用，A正确； B、果醋发酵是利用醋酸菌在有氧条件下将酒精氧化为醋酸，醋酸菌生长的最适温度是30～35℃，而不是18～30℃，B错误； C、果酒发酵是利用酵母菌在无氧条件下将葡萄糖分解为酒精和二氧化碳。在发酵过程中会产生二氧化碳气体，使瓶内气压增大，但不能每隔12h打开瓶盖，因为打开瓶盖会使外界空气进入，导致氧气含量增加，酵母菌会进行有氧呼吸大量繁殖，同时杂菌也容易进入瓶内污染发酵液，影响果酒的品质，C错误； D、传统发酵食品所用到的微生物一般为天然存在的混合菌种，但传统发酵多以固体发酵和半固体发酵为主，而非液体及半固体发酵为主，例如制作泡菜、腐乳等通常采用固体发酵的方式，D错误。 故选A。 （2025·浙江·二模）阅读下列材料，完成下面小题。 以下所示为猕猴桃苹果复合果醋发酵工艺。猕猴桃、苹果→榨汁→混合→酶解→巴氏杀菌→加入酵母菌→酒精发酵→过滤→加入醋酸菌→醋酸发酵→离心→调配→灌装→巴氏杀菌→成品 40．下列关于发酵过程中细胞代谢的叙述，正确的是（    ） A．酵母菌加入到发酵液后只进行厌氧呼吸产生乙醇 B．酵母菌在发酵中持续增殖导致其数量不断增多 C．醋酸菌进行需氧发酵支持生命活动，主要在线粒体内进行 D．氧气能将乙醇氧化成醋酸是醋酸发酵不能密闭的原因之一 41．下列关于复合果醋发酵的叙述，正确的是（    ） A．果汁中加入纤维素酶和果胶酶有利于提高果汁产量 B．发酵后进行巴氏杀菌是为了将发酵液中的微生物完全杀死 C．加入醋酸菌前调整醋酸浓度以避免对醋酸菌造成影响 D．发酵菌种的类型与比例不会影响复合果醋的口感 【答案】40．D 41．A 【分析】1、果酒的制作离不开酵母菌，酵母菌是异养兼性厌氧型生物，在有氧条件下，酵母菌进行有氧呼吸，大量繁殖，在无氧条件下，酵母菌进行酒精发酵。 2、醋酸菌是一种好氧细菌，当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将糖分解成醋酸；当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。 40．A、酵母菌加入到发酵液后，初期氧气充足时进行有氧呼吸大量繁殖，氧气减少后才进行厌氧呼吸产生乙醇，并非只进行厌氧呼吸，A错误； B、在发酵后期，由于营养物质减少、酒精浓度升高、pH 变化等因素，酵母菌的繁殖会受到抑制，数量不会持续增多，B错误； C、醋酸菌是原核生物，没有线粒体，其需氧发酵是在细胞质中进行的，C错误； D、醋酸菌是好氧菌，且醋酸发酵时，氧气能将乙醇氧化成醋酸，所以醋酸发酵不能密闭，D正确。 故选D。 41．A、果汁中加入纤维素酶和果胶酶，可以分解植物细胞壁和胞间层，使果汁更容易释放出来，有利于提高果汁产量，A正确； B、巴氏杀菌是采用较低温度在规定的时间内对食品进行加热处理，达到杀死微生物营养体的目的，不能将发酵液中的微生物完全杀死，B错误； C、在加入醋酸菌前还未产生醋酸，不存在调整醋酸浓度的操作，C错误； D、不同的发酵菌种以及它们的比例不同，发酵产生的代谢产物不同，会影响复合果醋的口感，D错误。 故选A。 42．（2025·湖北·二模）大豆发酵食品豆瓣酱是我国传统发酵美食，它能让麻婆豆腐热辣鲜香，也能让回锅肉滋味醇厚，好似舌尖上的时光胶囊，封存着先辈们代代相传的生活智慧。豆瓣酱的制作流程如下图所示，下列叙述错误的是（    ） A．保温发酵过程中，酱豆中有机物的种类增加，有机物含量减少 B．米曲霉发酵过程中，添加面粉主要是为米曲霉的生长提供氮源 C．米曲霉发酵时需不断翻酱，由此推测米曲霉属于需氧型微生物 D．后期发酵中乳酸菌产生乳酸，能抑制杂菌生长并赋予豆瓣酱独特酸味 【答案】B 【分析】蚕豆中含有大量蛋白质，主要为微生物的生长提供碳源（提供碳元素）和氮源（提供氮元素）类营养物质；加入的蚕豆经蒸熟、冷却后使用，这样既可以对蚕豆进行消毒，消灭蚕豆表面的杂菌，又能防止蚕豆温度过高导致接种的微生物死亡。 【详解】A、在保温发酵过程中，米曲霉等微生物会分泌多种酶来分解有机物。在分解过程中，复杂的有机物会被逐步分解成小分子有机物，所以有机物的种类会增加。同时，微生物的呼吸作用会消耗有机物来获取能量，导致有机物含量减少，A正确； B、在米曲霉发酵过程中，添加面粉主要是为米曲霉的生长提供碳源，而不是氮源，B错误； C、米曲霉发酵时需不断翻酱的目的是为了让米曲霉接触到充足的氧气,由此推断米曲霉是需氧型微生物，C正确； D、后期发酵中乳酸菌会进行发酵产生乳酸，乳酸可以降低环境的pH值，很多杂菌在酸性环境中生长会受到抑制，同时乳酸也能赋予豆瓣酱独特的酸味，D正确。 故选B。 43．（2025·福建厦门·二模）某同学设计了如图所示的装置，用于果酒发酵。    下列叙述错误的是（    ） A．制备装置中的苹果汁时，利用果胶酶处理，可使果汁变得澄清 B．装置1既可阻止外界空气进入，又可排出果酒发酵时产生的气体 C．若装置2中的X为溴麝香草酚蓝溶液，则可检测发酵产生的 D．用酸性重铬酸钾检测装置中的酒精时，颜色由灰绿色变为橙色 【答案】D 【分析】酵母菌的新陈代谢类型是异养兼性厌氧型，其有氧呼吸的产物是CO2和水，无氧呼吸的产物是CO2和酒精细胞呼吸产生的CO2可以用澄清石灰水检测，也能用溴麝香草酚蓝溶液检测；酒精可以用重铬酸钾检测。 【详解】A、果胶酶可以破坏植物细胞壁，瓦解胞间层，所以在果汁加工过程中可以提高出汁率和澄清 度，A正确； B、在进行果酒的发酵的时候，应留存1/3的空间，防止发酵液溢出，上方导管中放置的水可以防止外界空气进入，同时产生的二氧化碳可以由此排除，B正确； C、溴麝香草酚蓝溶液与二氧化碳反应可发生颜色变化，由蓝变绿再变黄，C正确； D、用酸性重铬酸钾检测装置中的酒精时，颜色由橙色变为灰绿色，D错误； 故选D。 二、多选题 44．（2025·山东德州·二模）酱油的工厂化生产的主要过程在发酵罐中进行，制曲阶段需接种米曲霉孢子，发酵阶段需接种乳酸菌和酵母菌，流程如图所示。下列说法错误的是（    ） A．通气搅拌是为了提高米曲霉产生的蛋白酶和淀粉酶的活性 B．可用血细胞计数板对米曲霉菌液中的孢子进行计数 C．乳酸菌进行乳酸发酵时会产生CO2，发酵罐需定时排气 D．检测成品是否混有杂菌时，可用稀释涂布平板法接种并观察菌落特征 【答案】AC 【分析】微生物常见的接种的方法：①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落；②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。 【详解】A、通气搅拌的主要目的是为了提供充足的氧气，促进米曲霉的生长和代谢，而不是直接提高蛋白酶和淀粉酶的活性，A错误； B、米曲霉菌属于真菌，血细胞计数板是一种常用的微生物计数工具，适用于对米曲霉菌液中的孢子进行计数，B正确； C、乳酸菌进行乳酸发酵时主要产生乳酸，不能产生CO2，C错误； D、稀释涂布平板法是一种常用的微生物检测方法，可以通过观察菌落特征来判断成品中是否混有杂菌，D正确。 故选AC。 45．（2025·山东泰安·二模）小曲白酒香醇，以大米、大麦、小麦等为原料，以小曲为发酵剂酿造而成。小曲中所含的微生物主要有好氧型微生物霉菌、兼性厌氧型微生物酵母菌，还有乳酸菌、醋酸菌等细菌。关于小曲白酒的酿造过程，下列叙述正确的是（    ） A．传统白酒的酿造是在以酿酒酵母为主的多种微生物共同作用下完成的 B．各种微生物形成了相对稳定的体系，不需要消毒 C．小曲发酵剂起到糖化、赋予白酒特有的风味等作用 D．从谷物原料发酵形成的酒糟中，可分离出产淀粉酶的微生物 【答案】ACD 【分析】果酒的制作离不开酵母菌，酵母菌是兼性厌氧微生物，在有氧条件下，酵母菌进行有氧呼吸，大量繁殖，把糖分解成二氧化碳和水；在无氧条件下，酵母菌能进行酒精发酵。故果酒的制作原理是酵母菌无氧呼吸产生酒精，酵母菌最适宜生长繁殖的温度范围是18～30℃；生产中是否有酒精的产生，可用酸性重铬酸钾来检验，该物质与酒精反应呈现灰绿色。 【详解】A、传统白酒酿造依赖多种微生物协同作用。霉菌（如根霉）负责糖化（将淀粉转化为葡萄糖），酿酒酵母主导酒精发酵，乳酸菌、醋酸菌等贡献风味物质，因此是多种微生物共同作用的结果，A正确； B、虽然微生物在发酵过程中形成相对稳定的群落，但传统酿造仍需通过蒸煮原料（灭菌）或控制环境条件（如温度、pH）抑制杂菌，并非完全“不需要消毒”，B错误； C、小曲中的霉菌（如根霉）分泌淀粉酶实现糖化，酵母菌进行酒精发酵，其他细菌（如乳酸菌）产生有机酸等风味物质，共同赋予白酒独特风味，C正确； D、酒糟中可能残留未完全分解的淀粉，且霉菌（如根霉）在发酵过程中持续产淀粉酶，因此可从酒糟中分离出产淀粉酶的微生物，D正确。 故选ACD。 46．（2025·山东·二模）臭豆腐一般是以含蛋白质高的优质黄豆为原料，经过泡豆、磨浆、滤浆、点卤、前期发酵、腌制、灌汤、后期发酵等多道工序制成的。其加工制作流程如图所示。下列说法正确的是（　　） A．上图中卤水发酵的菌种可能来源于B，原因是B未采取灭菌措施 B．取样检测时，按上图所示发酵时间并注意取样时摇匀即可 C．在发酵过程中，由于不止有一种微生物，发酵液的pH前期可能会下降 D．若要对样品中某一菌种计数，适宜采取的方法是稀释涂布平板法 【答案】ACD 【分析】微生物常见的接种的方法：①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落；②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。用稀释涂布平板法进行微生物计数时，统计的菌落数往往比活菌的实际数目少，这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。 【详解】A、A 中原料经过高温灭菌，而 B是现做熟豆腐片或豆腐脑等，仍含有微生物，因此发酵所需的微生物有可能主要来自 B，A正确； B、微生物发酵过程的取样检测需采取无菌操作，而不仅是摇匀，B错误； C、发酵中常有多种微生物共同作用，前期易因产酸菌的活动导致 pH 下降，C正确； D、微生物接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法，若要对样品中某一菌种计数，适宜采取的方法是稀释涂布平板法，D正确。 故选ACD。 47．（2025·黑龙江哈尔滨·二模）桦树液可增强机体免疫力，沙棘主要分布在我国东北等地区，其果实具有抗衰老等作用。桦树液沙棘复合酒发酵工艺加工流程及优化结果如图所示，下列叙述正确的是（　　）       A．桦树液沙棘汁为菌种的生长提供了碳源等营养物质 B．可利用液体培养基对酵母菌进行扩大培养后接入发酵罐 C．生产时应选用酵母EC1118，接种量为0.06% D．本工艺最终还可从酵母菌中提取单细胞蛋白 【答案】ABC 【分析】1、发酵工程一般包括菌种的选育、扩大培养、培养基的配制、灭菌、接种、发酵、产品的分离、提纯等方面。性状优良的菌种可以从自然界中筛选出来，也可以通过诱变育种或基因工程育种获得； 2、果酒制备的菌种是酵母菌，最适温度在20℃左右最好，一般控制在18～30℃，属于兼性厌氧型细菌，发酵前期酵母菌先进性有氧呼吸，促进酵母菌的繁殖，后期进行无氧呼吸产生酒精。果酒制作的原理是酵母菌在无氧的条件下进行无氧呼吸产生酒精和二氧化碳。 【详解】A、桦树液和沙棘汁中含有糖类等物质，糖类可以作为碳源，同时还可能含有氮源、无机盐等其他营养物质，能够为菌种（酵母菌等）的生长提供碳源等营养物质，A正确； B、液体培养基中营养物质分布均匀，有利于微生物与营养物质充分接触，可利用液体培养基对酵母菌进行扩大培养，然后接入发酵罐进行发酵，B正确； C、从图2可以看出，酵母EC1118在发酵过程中能使酒精度较高；从图3可以看出，接种量为0.06%时酒品质较好（如残糖量、酒精度等指标较优），所以生产时应选用酵母EC1118，接种量为0.06%，C正确； D、单细胞蛋白是指通过发酵获得的大量的微生物菌体，但由题意无法得知本工艺最终可从酵母菌中提取单细胞蛋白，D错误。 故选ABC。 微生物培养及计数考点02 一、单选题 1．（2025·山东日照·二模）有些细菌具有溶菌特性，能够破坏其他细菌的结构使细胞内容物释出。研究人员试图从某湖泊水样中分离出有溶菌特性的细菌。先将含有一定浓度α菌的少量培养基倾倒在固体培养平板上，凝固形成薄层。一段时间后，将1mL湖泊水样加入9mL无菌水中、继续重复该操作3次，取0.1mL涂布于薄层上，稳定后获得56个菌落，其中15个菌落周围出现溶菌圈。下列说法正确的是（　　） A．应选用由水、碳源、氮源和无机盐组成的培养基分离细菌 B．应使用灼烧灭菌后的涂布器将α菌均匀地接种到培养基上 C．溶菌细菌的接种需在含α菌的培养基变浑浊后才能进行 D．每毫升的湖泊水样中约有1.5×105个具溶菌特性的细菌 【答案】C 【分析】微生物接种的两种常见的方法：①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在划线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。 【详解】A、分离细菌需要固体培养基，因此培养基中不仅需要水、碳源、氮源和无机盐，还需要凝固剂琼脂，A错误； B、根据题干信息，将含有一定浓度α菌的少量培养基倾倒在固体培养平板上，凝固形成薄层，然后使用灼烧灭菌后的涂布器将0.1mL稀释过的湖泊水样均匀地接种到培养基上，B错误； C、含α菌的培养基变浑浊说明α菌已经生长繁殖，此时接种溶菌细菌才能观察到溶菌现象，C正确； D、0.1ml稀释液含有溶菌细菌15个，稀释倍数为10000倍，因此每毫升的湖泊水样中约有15×10×10000=1.5×106个具溶菌特性的细菌，D错误。 故选C。 2．（2025·广东广州·二模）研究人员以YMA培养基(10g甘露醇(H)、0.4酵母粉、0.5gK2H2PO4、0.1gNaCl、0.2gMgSO47H2O,定容至1L)为基础，探究某种大豆根瘤菌的碳源利用情况，实验结果如图。下列叙述错误的是（    ）    A．添加酵母粉作为氮源，原因可能是根瘤菌在体外培养时固氮能力有所下降 B．实验组需将甘露醇替换为等量的其他碳源，其他条件保持一致 C．测定根瘤菌的数量可以使用显微镜直接计数法 D．实验结果直接证明大豆通过蔗糖的形式向根瘤菌供有机营养 【答案】D 【分析】统计菌落数目的方法：（1）显微镜直接计数法：①原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量；②方法：用计数板计数； ③缺点：不能区分死菌与活菌。（2）间接计数法（活菌计数法）原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。 【详解】A、根瘤菌在自然界中与豆科植物共生时，才能发挥固氮作用，因为根瘤菌都依赖豆科植物为其提供有机物，所以在体外培养时，其固氮能力可能受到抑制或下降，因此需要额外添加酵母粉作为氮源，A正确； B、本实验为探究大豆根瘤菌对不同碳源的利用情况，实验自变量为碳源的种类，为控制无关变量，保证实验为单一变量，故实验组需将甘露醇替换为等量的其他碳源，其他条件保持一致，B正确； C、显微镜直接计数法计数是测定培养液中微生物数量的方法之一，故该实验中测定根瘤菌的数量可以使用显微镜直接计数法，C正确； D、据题干信息和实验结果分析可知，当甘露醇被蔗糖替换后，根瘤菌其相对数量与甘露醇的对照组相当，故实验结果只能说明大豆根瘤菌能利用蔗糖作为碳源进行生长繁殖，不能直接证明大豆在自然条件下通过蔗糖的形式向根瘤菌提供有机营养，D错误。 故选D。 3．（2025·山东·二模）玉米茎腐病的主要致病菌是禾谷镰孢菌。科学家通过实验筛选抑制禾谷镰孢菌的真菌用来防治玉米茎腐病，实验流程如下：①取土样配制成土壤悬浮液，分离纯化得到真菌菌落；②在距离培养皿边缘1cm处呈正三角形取3点，在三角形中心取1点，将禾谷镰孢菌接种在中心点上，分离纯化的真菌接种在另外3点上，培养观察；③选取菌落长势快的真菌菌株制备复筛发酵液；④过滤得到无菌发酵液；⑤将发酵液与基本培养基混合制成培养基M；⑥用打孔器打取直径为8mm的禾谷镰孢菌菌饼，接种在培养基M上；⑦培养一段时间后与对照组做对比，计算抑菌率。下列说法错误的是（    ） 真菌类型 菌落直径/mm 抑菌率/% 处理组 对照组 M-48 45 75 44.78 M-43 22 75 79.10 M-6 42 75 49.25 M-104 37 75 56.71 M-34 57 75 26.87 A．步骤①中可以用稀释涂布平板法分离纯化菌种 B．抑菌率计算公式为：（对照组菌落直径-处理组菌落直径）/对照组菌落直径 C．对照组是将直径为8mm的禾谷镰孢菌菌饼接种在不含真菌发酵液的基本培养基 D．由表可知M-43可以作为禾谷镰孢菌的优选抑制菌株 【答案】B 【分析】选择培养基是根据某种微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性而设计的培养基使混合菌样中的劣势菌变成优势菌，从而提高该菌的筛选率。 【详解】A、稀释涂布平板法可用于分离和纯化菌种，步骤①中采用该方法分离纯化从土壤悬浮液得到的真菌菌落，在实验操作上是合理的，A正确； B、按公式（对照组菌落直径 - 处理组菌落直径）/ 对照组菌落直径计算，如 M - 43：(75−22)÷75≈70.67%，与表格中 79.10% 不符，说明公式错误，B错误； C、为了准确对比实验组中真菌发酵液对禾谷镰孢菌的抑制效果，对照组应将直径为8mm的禾谷镰孢菌菌饼接种在不含真菌发酵液的基本培养基上，这样能排除其他因素干扰，C正确； D、从表中数据能看出，M - 43的抑菌率为79.10%，在各菌株中抑菌率最高，也就意味着它对禾谷镰孢菌的抑制效果最好，可以作为优先选择的抑制菌株，D正确。 故选B。 4．（2025·甘肃白银·二模）豆豉是一种微生物发酵制成的豆制品，发酵的机理主要是芽孢杆菌在蒸煮过的大豆中繁殖，分泌的相关酶系降解蛋白质、脂肪、糖类，赋予豆豉特有的鲜香滋味，促进人体肠道对营养的吸收。以下说法正确的是（　　） A．芽孢杆菌中编码蛋白酶的遗传信息由细胞核流向细胞质 B．芽孢杆菌接入发酵罐前需要扩大培养，该过程不影响豆豉产量 C．提高芽孢杆菌发酵培养基中营养物质的浓度，一定会提高豆豉的产量 D．芽孢杆菌分泌纤维素酶的能力可以通过刚果红培养基来鉴定 【答案】D 【分析】刚果红培养基可以用来鉴别纤维素分解菌：向含有纤维素的培养基中加入刚果红，刚果红能和纤维素形成红色复合物，而纤维素被纤维素分解菌分解后，复合物无法形成，培养基会出现透明圈，纤维素酶分泌越多透明圈越大。 【详解】A、芽孢杆菌是细菌，属于原核生物，没有细胞核，A错误； B、微生物接种数量会影响发酵产品的产量，B错误； C、在一定范围内提高发酵培养基中营养物质的浓度，会提高豆豉的产量，但浓度过大会导致菌体失水，反而会降低豆豉的产量，C错误； D、向含有纤维素的培养基中加入刚果红，刚果红能和纤维素形成红色复合物，而纤维素被纤维素分解菌分解后，复合物无法形成，培养基会出现透明圈，纤维素酶分泌越多透明圈越大，D正确。 故选D。 5．（2025·甘肃白银·二模）重金属镉是土壤中常见的污染物，而木霉菌是土壤中常见的真菌，耐受镉的能力较强。研究者将木霉菌Th02菌株分别接种于5种含不同氮源的培养基中，在28℃下培养48h，之后测量菌落直径，结果如下图所示。以下说法错误的是（　　）    A．本实验的目的是探究木霉菌培养时的最佳氮源，碳源的种类应该相同 B．配制培养木霉菌的培养基中需添加琼脂，并调至酸性 C．利用接种环接种时需完全打开培养皿盖，以避免造成污染 D．可提高培养基中镉离子浓度进一步探究木霉菌的耐镉能力 【答案】C 【分析】培养基：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质，是进行微生物培养的物质基础。微生物培养基需要为微生物繁殖提供碳源、氮源、水、无机盐等营养物质，此外还要满足微生物对特殊营养物质，pH和O2的需求。筛选目的微生物最好应该到目的微生物含量丰富的地方取样，如果没有这样的环境，应该人为创造适宜其生长的环境。 【详解】A、根据实验结果的曲线，其X轴为不同的氮源，而Y轴是菌落直径，可以判断本实验的目的是探究木霉菌培养时的最佳氮源，碳源的种类是本实验的无关变量，应该相同，A正确； B、由于本实验需观察菌落，所以培养基为固体培养基，需添加琼脂，培养霉菌的培养基应调至酸性，B正确； C、利用接种环接种时不能完全打开培养皿盖，以避免造成污染，本实验需测菌落直径，最好采用稀释涂布平板法进行接种，C错误； D、由图可知，本题是在2mmol/L镉离子浓度下探究木霉菌的最佳氮源，可提高培养基中镉离子浓度，进一步探究木霉菌的耐镉能力，D正确。 故选C。 6．（2025·福建龙岩·二模）根据食品安全国家标准，每毫升合格的牛奶中细菌总数不能超过50000个。研究小组为检测某品牌牛奶是否合格，进行如下实验。    下列相关叙述正确的是（　　） A．步骤①中需用巴氏消毒法对加入的牛奶进行处理 B．步骤②配制培养基时需加入琼脂并将PH调至酸性 C．若步骤③中平均菌落数为45，说明该品牌牛奶不合格 D．图中所示计数方法统计结果比显微计数法计数结果大 【答案】C 【分析】消毒是指使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物（不包芽孢和孢子）的手段，常用的方法有煮沸消毒法、巴氏消毒法、化学药剂消毒法、紫外线消毒法；灭菌是使用强烈的理化因素杀死物体内外所用的微生物（包括芽孢和孢子），常用的灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌。 【详解】A、本实验的目的是检测某品牌牛奶是否合格，因而步骤①中不需用巴氏消毒法对加入的牛奶进行处理，A错误； B、步骤②配制培养基时需加入琼脂并将PH调至中性或微碱性，B错误； C、图示操作中稀释了104倍，若步骤③中平均菌落数为45，则每毫升牛奶中细菌数目为45÷0.1×104=4.5×106/毫升，根据食品安全国家标准，每毫升合格的牛奶中细菌总数不能超过50000个，可见该品牌牛奶不合格，C正确； D、图中所示计数方法统计结果比显微计数法计数结果小，因为图示方法统计的是活菌数，且统计的结果往往偏小，而显微计数法统计的结果中包括活菌和死菌数，D错误。 故选C。 7．（2025·山东泰安·二模）根据国家标准每毫升合格的巴氏杀菌乳中细菌总数不得超过50000个。某兴趣小组进行了新鲜牛奶最合适的消毒温度和时间的探究，相关实验操作合理的是（    ） A．统计培养基上全部菌落数，以菌落数最少组的处理温度作为最适消毒温度 B．将等量的新鲜牛奶分别置于60℃、80℃、100℃恒温水浴锅中处理相同的时间 C．对处理后的牛奶利用平板划线法进行接种后，在37℃下培养24h，然后计数 D．通常要用同一稀释度下的牛奶至少接种3个平板进行重复计数，然后求取平均值 【答案】D 【分析】该实验中自变量是温度，因变量是消毒效果，可通过平板上的菌落数表示。 【详解】A、考虑消毒效果的同时，还应考虑牛奶的营养物质流失，故统计培养基上全部菌落数，不一定以菌落数最少组的处理温度作为最适消毒温度，A错误； B、探究新鲜牛奶最合适的消毒温度和时间，应设置一系列温度梯度，仅设置60℃、80℃、100℃温度范围较窄，可能无法准确找到最合适的消毒温度，B错误； C、平板划线法不能用于计数，应该用稀释涂布平板法对处理后的牛奶进行接种计数，C错误； D、通常要用同一稀释度下的牛奶至少接种 3 个平板进行重复计数，然后求取平均值，这样可以减小误差，使实验结果更准确，D正确。 故选D。 8．（2025·广东汕头·二模）进行抑菌试验时，MIC通常表示肉眼看不见菌落生长的最低药物浓度。为测定植物甲提取液对金黄色葡萄球菌的MIC值，下列相关实验操作错误的是（　　） A．配制不同浓度的植物甲提取液 B．固体培养基加入植物甲提取液 C．接种金黄色葡萄球菌并均匀涂布 D．培养时间不影响MIC值的测定 【答案】D 【分析】微生物常见的接种的方法：①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。 【详解】A、要测定植物甲提取液对金黄色葡萄球菌的MIC值，即肉眼看不见菌落生长的最低药物浓度，首先需要配制不同浓度的植物甲提取液，这样才能去探究哪个浓度是最低抑菌浓度，A正确； B、将植物甲提取液加入固体培养基中，后续接种金黄色葡萄球菌后，提取液可在培养基中发挥作用，去抑制金黄色葡萄球菌的生长，以此来测定MIC值，B正确； C、接种金黄色葡萄球菌并均匀涂布，这样可以保证金黄色葡萄球菌在培养基上分布均匀，使植物甲提取液对其作用相对一致，便于观察和测定MIC值，C正确； D、培养时间过短，细菌可能还未开始大量繁殖或者还未受到提取液的充分抑制，培养时间过长，可能一些原本被抑制生长的细菌又会出现生长现象等，所以培养时间会影响对是否有肉眼可见菌落生长的判断，进而影响MIC值的测定，D错误。 故选D。 9．（2025·山西晋城·二模）抑菌圈是菌体产生的某种物质抑制了培养基中原涂布菌株的生长，而在菌落周围形成的不长菌的区域。如图是将相同大小的含有不同抗生素的灭菌滤纸片A、B、C、D放在培养基甲上，用于判断抗生素的杀菌能力，乙为甲培养一段时间后的结果。下列叙述错误的是（　　） A．用湿热灭菌法对培养基灭菌后，待其冷却至室温再开始倒平板 B．实验时只需将用无菌水配制成的细菌悬液均匀涂布在甲培养基上 C．四个滤纸片大小保持一致可避免无关变量对实验结果造成的干扰 D．由乙培养基上的结果可知不同抗生素的抑菌能力大小为B＞A＞C＞D 【答案】A 【分析】对照实验：在探究某种条件对研究对象的影响时，对研究对象进行的除了该条件不同以外，其他条件都相同的实验。根据变量设置一组对照实验，使实验结果具有说服力。一般来说，对实验变量进行处理的，就是实验组。没有处理是的就是对照组。 【详解】A、用湿热灭菌法对培养基灭菌后，待其冷却至50℃左右开始倒平板，若待其冷却至室温，培养基早已凝固，无法再倒平板，A错误； B、依题意可知，实验时只需将用无菌水配制成的细菌悬液均匀涂布在甲培养基上，并放置相应的含有不同抗生素的大小相同的滤纸片，培养一段时间后即可获得培养基上的实验结果，B正确； C、滤纸片的大小为实验的无关变量，四个滤纸片大小保持一致可避免无关变量对实验结果的干扰，C正确； D、通过计算抑菌圈的直径与滤纸直径的比值可以辨别抑菌能力的强弱，比值越大，抗生素的抑菌能力越强，分析图乙中的培养结果可知，不同抗生素的抑菌能力大小为B＞A＞C＞D，D正确。 故选A。 10．（2025·北京海淀·二模）木霉菌可降解环境中的纤维素。为筛选纤维素酶高产菌株，用紫外线对木霉菌进行诱变处理。已知纤维素与刚果红结合形成红色复合物。下列叙述错误的是（　　） A．木霉菌属于生态系统中的分解者 B．筛选培养基中应添加纤维素和刚果红 C．用平板划线法将菌液接种于筛选培养基上 D．应筛选透明圈与菌落直径比值大的菌落 【答案】C 【分析】刚果红可以与纤维素形成红色复合物，当纤维素被纤维素酶分解后，红色复合物无法形成，出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，我们可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。 【详解】A、木霉菌可降解环境中的纤维素，属于分解者，A正确； B、刚果红和纤维素反应生成红色，但不会和纤维素的分解产物发生反应，所以为筛选纤维素酶高产菌株，培养基中应添加纤维素和刚果红，挑选透明圈大的菌落，B正确； C、木霉菌数量较少，需要经过富集培养后，用涂布平板的方法涂布于筛选培养基上，C错误； D、应筛选透明圈与菌落直径比值大的菌落，比值越大，说明分解纤维素的能力越强，D正确。 故选C。 11．（2025·广东佛山·二模）为提高厨余垃圾分解效率，研究人员以厨余垃圾浸出液为培养基（CY），对目标菌株A1、A2、A7和A8进行驯化（通过人工措施使微生物逐步适应某一条件的方法），以制备高活性微生物菌剂。相关实验结果如图所示。下列分析错误的是（　　） A．CY碳源、氮源丰富，比LB更适合大多数菌株生长 B．可利用稀释涂布平板法对四种菌株进行筛选和计数 C．CY驯化培养可使四种菌株的基因频率发生定向改变 D．从活菌数上评价，A2菌株的驯化效果最显著 【答案】A 【分析】微生物常见的接种的方法： （1）平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。 （2）稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。 【详解】A、结合图示可以看出，驯化前，LB培养基中活菌数目更多，因而该培养基更适合大多数菌株生长，A错误； B、稀释涂布平板法可获得单菌落，且能用于计数，因此，可利用稀释涂布平板法对四种菌株进行筛选和计数，B正确； C、CY驯化培养（人工进行选择）可使四种菌株的基因频率发生定向改变，使得菌株更适应CY培养液，C正确； D、根据图示结果可以看出，A2菌株在驯化后活菌数增加最多，因此，从活菌数上评价，A2菌株的驯化效果最显著，D正确。 故选A。 12．（2025·陕西汉中·二模）微生物平板划线和培养的具体操作如图所示，下列操作不正确的是（　　） A．②③⑦⑧ B．④⑥⑦⑧ C．①②⑥⑧ D．①③④⑤ 【答案】A 【分析】稀释涂布平板法分离纯化土壤中微生物的正确操作步骤是：倒平板→制备梯度稀释液→涂布(或划线法)→培养→挑单菌落→保存。 【详解】②不能完全握住棉塞，③试管口不能通过火焰，会杀死目的菌，⑦接种环划线时首尾不能相连，⑧在恒温培养箱中培养时应将平板倒置，其余操作均正确，A符合题意，BCD不符合题意。 故选A。 13．（2025·河北唐山·二模）红曲米利用红曲霉发酵，以大米为原料，主要经过蒸煮、接种、培养、筛选等流程获得，具有降血脂的功效。下列有关叙述错误的是（　　） A．培养红曲霉的培养基pH应调节为弱碱性 B．大米可为红曲霉发酵提供碳源、氮源等营养物质 C．大米蒸煮后需冷却再接种，避免高温杀死红曲霉 D．发酵过程中要严格控制温度、pH和溶解氧等条件 【答案】A 【分析】酵母菌是兼性厌氧型生物，可以进行有氧呼吸和无氧呼吸，无氧呼吸产生酒精和CO2，可以利用此原理进行酿酒。 【详解】A、红曲霉是一种真菌，培养霉菌时需将培养基的pH调至酸性，A错误； B、大米中主要含蛋白质和糖类，大米可为红曲霉的生长提供碳源和氮源等营养物质，B正确； C、高温蒸煮可以达到杀菌的目的，大米蒸煮后需冷却再接种，以避免高温杀死红曲霉，C正确； D、微生物的生长繁殖需要适宜的温度、pH和溶解氧等培养条件，因此在发酵过程需严格控制温度、pH和溶解氧等培养条件，D正确。 故选A。 （2025·天津和平·二模）阅读下列材料，完成下面小题。 活性黑5是一种低毒性、难褪色的含氮染料。欲利用生物酶处理染料废水中的活性黑5，具体操作流程如图。从染料废水堆积池的污泥中获得优势菌群，采用浓度梯度驯化法，进一步培养获得具备强分解活性黑5能力的假单胞杆菌，并进行基因表达分析。 14．培养基Ⅰ中，除了活性黑5以外，还需添加的成分不包括（    ） A．抗生素 B．葡萄糖 C．水 D．琼脂 15．假单胞杆菌中，BVU5蛋白分解活性黑5的场所最可能为（    ） A．拟核 B．细胞质基质 C．溶酶体 D．核糖体 16．浓度梯度驯化过程中，培养液中可能出现的变化不包括（    ） A．假单胞杆菌的菌落数目 B．假单胞杆菌中BVU5蛋白的含量 C．假单胞杆菌对活性黑5的分解速率 D．假单胞杆菌中BVU5蛋白的空间结构 【答案】14．A 15．B 16．A 【分析】培养基是人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质；分为固体培养基和液体培养基，培养基中一般含有水、碳源、氮源和无机盐，其中碳源和氮源常采用蛋白胨和牛肉膏，因为它们来源于动物原料，含有糖、维生素和有机氮等营养物质。在提供上述几种主要营养物质的基础上，培养基还需要满足微生物生长对特殊营养物质和氧气的要求。 14．根据题干信息“活性黑5是一种低毒性、难褪色的含氮染料”可知活性黑在培养基中作为氮源；虽然各种培养基的配方不同，但一般都含有水、碳源（提供碳元素的物质）、氮源（提供氮元素的物质）和无机盐等营养物质。故培养基中还应该含有的成分有碳源（如葡萄糖）、无机盐和水。且该培养基为固体培养基，需要加入琼脂，因此该培养基的配制过程中不需要的成分是抗生素，A错误，BCD正确。 故选A。 15．假单胞杆菌为原核生物，没有溶酶体，核糖体是合成蛋白质的场所，没有分解蛋白质的功能，细胞质基质中由于存在多种酶，因此最可能为BVU5蛋白分解活性黑5的场所，B正确，ACD错误。 故选B。 16．A、在液体培养基中不能形成菌落，A错误； BCD、浓度梯度驯化的目的是获得高表达的分解活性黑5的氧化还原酶BVU5，所以浓度梯度驯化过程中，培养液中可能出现的变化有假单胞杆菌中BVU5蛋白的含量、对活性黑5的分解速率、BVU5蛋白的空间结构，BCD正确。 故选A。 17．（2025·贵州·二模）为调查某水库的水质状况，某研究小组测定了该河流水样中的细菌含量，将1mL水样稀释100倍，在3个平板上用稀释涂布平板法分别接入0.1mL稀释液；经适当培养后，统计出3个平板上的菌落数分别为39、38和37。下列叙述正确的是（　　） A．接种前可用紫外线对接种室和操作台灭菌 B．接种时可用涂布器蘸取菌液在平板上进行涂布 C．根据结果计算出每升水样中的活菌数为3.8×10⁷ D．实验后的培养基应该进行消毒处理后才能倒掉 【答案】C 【分析】实验室常用的灭菌方法： （1）灼烧灭菌：将微生物的接种工具，如接种环、接种针或其他金属工具，直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧，可以迅速彻底地灭菌。此外，在接种过程中，试管口或瓶口等容易被污染的部位，也可以通过火焰燃烧来灭菌； （2）干热灭菌：能耐高温的，需要保持干燥的物品，如玻璃器皿（吸管、培养皿）和金属用具等，可以采用这种方法灭菌； （3）高压蒸汽灭菌：将灭菌物品放置在盛有适量水的高压蒸汽灭菌锅内，为达到良好的灭菌效果，一般在压力为100kPa，温度为121℃的条件下，维持15～30min。 【详解】A、接种前可用紫外线对接种室和操作台进行消毒，A错误； B、接种时应将菌液滴加到平板上，然后用涂布器将菌液均匀地涂布在平板上，B错误； C、将1mL水样稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为39、38和37。据此可得出每升水样中的活菌数为（39+38+37）÷3÷0.1×100×1000=3.8×107，C正确； D、实验后的培养基应该进行灭菌处理后才能倒掉，以防止杂菌污染环境，D错误。 故选C。 18．（2025·黑龙江·二模）纤维素能与刚果红形成红色复合物，纤维素被水解后则不能与刚果红形成红色复合物。在固体培养基中添加刚果红可用于筛选纤维素分解菌。若想要从某动物肠道中筛选并分离出纤维素分解菌，下列分析错误的是（    ） A．纤维素分解菌分泌纤维素酶分解纤维素，在菌落周围产生红色圈 B．固体培养基以纤维素作为唯一碳源，经过湿热灭菌后进行倒平板 C．肠道提取物经过梯度稀释后涂布到培养基上，在恒温箱中厌氧培养 D．依据菌落直径与菌落周围透明圈直径的大小可比较菌株的产酶能力 【答案】A 【分析】分解纤维素的微生物分离的实验原理： （1）土壤中存在着大量纤维素分解酶，包括真菌、细菌和放线菌等，它们可以产生纤维素酶。纤维素酶是一种复合酶，可以把纤维素分解为纤维二糖，进一步分解为葡萄糖使微生物加以利用，故在用纤维素作为唯一碳源的培养基中，纤维素分解菌能够很好地生长，其他微生物则不能生长。 （2）在培养基中加入刚果红，可与培养基中的纤维素形成红色复合物，当纤维素被分解后，红色复合物不能形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，从而可筛选纤维素分解菌。 【详解】A、纤维素能与刚果红形成红色复合物，纤维素被水解后则不能与刚果红形成红色复合物，纤维素分解菌可以分泌纤维素酶分解纤维素，在菌落周围产生透明圈，A错误； B、筛选纤维素分解菌时，固体培养基以纤维素作为唯一碳源，培养基经过湿热灭菌（高压蒸汽灭菌）后进行倒平板，B正确； C、由于动物肠道中氧气含量很少，肠道提取物经过梯度稀释后涂布到培养基上，应在恒温箱中厌氧培养，C正确； D、依据菌落直径与菌落周围透明圈直径的大小比较菌株的产酶能力，D正确。 故选A。 19．（2025·天津·二模）为保障公共饮用水的安全，工作人员常用如图所示“滤膜法”对饮用水进行检测。大肠杆菌作为指示菌之一，国家标准为每升饮用水中大肠杆菌数量不能超过3个。下列相关叙述错误的是（    ） A．检测前一般需要对水样收集瓶、培养皿、镊子等进行干热灭菌 B．图中所示培养基上长出的大肠杆菌菌落属于一个种群 C．滤膜的孔径大小应该可以允许大肠杆菌通过 D．用滤膜法检测被动物粪便严重污染的水体，结果可能比实际值偏小 【答案】C 【分析】细菌的数目可以通过滤膜法来测定。将已知体积的水过滤后，将滤膜放在伊红美蓝培养基上培养。在该培养基上，大肠杆菌的菌落呈黑色，根据黑色菌落的数目，计算水样中大肠杆菌的数量。 微生物接种时，为了避免其它杂菌的污染，接种过程要进行无菌操作。灼烧灭菌常适用于接种环、接种针；干热灭菌常适用于玻璃器皿（吸管、培养皿）和金属用具；高压蒸汽灭菌常适用于无菌水、培养基。 【详解】A、检测前一般需要对水样收集瓶、培养皿、镊子等进行干热灭菌，防止杂菌干扰，A正确； B、在一定的自然区域内，同种生物的所有个体是一个种群，图中所示培养基上长出的大肠杆菌菌落属于一个种群，B正确； C、滤膜的孔径大小应该不允许大肠杆菌通过，否则无法检测大肠杆菌的数量，C错误； D、用滤膜法检测被动物粪便严重污染的水体，由于大肠杆菌的数量过多，从而使一个或多个细菌长到一起，进而导致大肠杆菌数量可能比实际值偏小，D正确。 故选C。 20．（2025·云南曲靖·二模）为筛选对梨黑斑霉菌具有抑制作用的真菌，科研人员从感染黑斑病的梨园中选取梨果实为实验材料，先分离得到一株内生真菌，然后将其和梨黑斑霉菌按下图1所示的方法接种培养，一段时间后，培养结果如图2所示。下列叙述错误的是（    ） A．可用稀释涂布平板法来分离得到内生真菌 B．本研究应选择果园中重度感染黑斑病的梨果实为实验材料 C．实验中在3个位置接种相同的内生真菌可提高实验的准确性 D．结果显示内生真菌对梨黑斑霉菌有一定的抑制作用 【答案】B 【分析】微生物常见的接种的方法：①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落；②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。用稀释涂布平板法进行微生物计数时，统计的菌落数往往比活菌的实际数目少，这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。 【详解】A、稀释涂布平板法是一种常用的微生物分离方法，适用于从混合样品中分离单一菌株，A正确； B、由题干信息可知，本实验目的是筛选对梨黑斑霉菌具有抑制作用的真菌，故应从未感病植株上采集样品，B错误； C、在多个位置接种相同的内生真菌可以减少实验误差，提高结果的可靠性和准确性，C正确； D、据图可知，内生真菌区域无梨黑斑霉菌生长，且抑菌带明显，说明内生真菌对梨黑斑霉菌有一定的抑制作用，D正确。 故选B。 21．（2025·广东佛山·二模）某兴趣小组探究不同抗生素对金黄色葡萄球菌的选择作用，结果如下表所示。下列叙述错误的是（　　） 抗生素种类 抑菌圈大小 （cm） 对照组 第一代 第二代 第三代 四环素 0.60 4.00 3.53 3.07 罗红霉素 0.60 3.10 2.40 2.48 恩诺沙星 0.60 2.70 2.33 1.63 A．用接种环将金黄色葡萄球菌接种到固体培养基上 B．可使用浸润了无菌水的滤纸片作为对照组的处理 C．四环素的抑菌圈变小，说明其对菌体有选择作用 D．结果显示金黄色葡萄球菌对恩诺沙星的抗性最强 【答案】A 【分析】图示分析，本实验的自变量是抗生素的种类，检测指标是抑菌圈的大小，抑菌圈越小，说明金黄色葡萄球菌对该种抗生素的抗性越强。 【详解】A、用涂布器将金黄色葡萄球菌接种到固体培养基上，有利于观察抑菌圈的大小，A错误； B、探究不同抗生素对金黄色葡萄球菌的选择作用，自变量是抗生素的种类，对照组用浸润了无菌水的滤纸片，实验组为浸润了不同种类抗生素的滤纸片，这些滤纸片分别粘贴在培养基的表面，B正确； C、结合图中数据可知，四环素的抑菌圈变小，说明四环素对菌体有选择作用，菌体的抗四环素能力增强，因此抑菌圈减小，C正确； D、对比四种抗生素的抑菌圈，恩诺沙星的抑菌圈最小，说明金黄色葡萄球菌对恩诺沙星的抗性最强，D正确。 故选A。 22．（2025·江西鹰潭·二模）合理使用消毒液有助于减少传染病的传播。某同学比较了3款消毒液A、B、C杀灭细菌的效果，结果如图所示。下列有关叙述正确的是（    ）    A．在酒精灯火焰旁倒平板后，再用湿热灭菌法对培养基进行灭菌 B．菌落计数过程中，涂布器应先在酒精灯火焰上灼烧，冷却后再涂布 C．采用显微镜直接计数法会把死菌和活菌一起计数，所以测得的活细菌的数量会偏小 D．用C消毒液处理，活菌数减少量最少，且杀菌时间较长，故C消毒液杀菌效果最好 【答案】B 【分析】稀释涂布平板计数是根据微生物在固体培养基上所形成的单个菌落，即是由一个单细胞繁殖而成这一培养特征设计的计数方法，即一个菌落代表一个单细胞。 计数时，首先将待测样品制成均匀的系列稀释液，尽量使样品中的微生物细胞分散开，使成单个细胞存在(否则一个菌落就不只是代表一个细胞)，再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的培养基内。经培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可计算出样品中的含菌数。 【详解】A、先用湿热灭菌法对培养基进行灭菌，再在酒精灯火焰旁倒平板，A错误； B、菌落计数过程中，涂布器应先在酒精灯上灼烧，杀死涂布器上可能存在的微生物，防止涂布器上可能存在的微生物污染，冷却后再涂布，防止温度过高杀死菌种，B正确； C、采用显微镜直接计数法会把死菌和活菌一起计数，所以测得的活细菌的数量会偏大，C错误； D、用C消毒液处理，活菌数减少量最少，且杀菌时间较长，杀菌效果最差， A消毒液活菌数减少量最多，且杀菌时间较短，效率最高，因此A消毒液杀菌效果最好，D错误。 故选B。 23．（2025·辽宁·二模）玉米赤霉烯酮（ZEN）是一种由镰刀菌属真菌产生的真菌毒素，研究人员从连作玉米田的土壤样品中分离出了可高效降解ZEN的细菌菌株，实验流程如图。下列叙述错误的是（    ）    A．步骤②③④中所用的培养基均为以ZEN为唯一碳源的选择培养基 B．实验过程中，需要将培养皿、培养瓶和培养基进行干热灭菌 C．步骤③中培养基上长出的菌落数量可能约等于涂布到平板上的活菌数量 D．可衡量b瓶中菌株的ZEN降解能力 【答案】B 【分析】1、培养基一般使用高压蒸汽灭菌法灭菌，培养皿使用干热灭菌法灭菌，接种环、涂布器使用灼烧灭菌法灭菌。 2、在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称为选择培养基。虽然各种培养基的具体配方不同，但一般都含有水、碳源（提供碳元素的物质）、氮源（提供氮元素的物质）和无机盐。 【详解】A、为分离出可高效降解ZEN的细菌菌株，因此培养基中应以ZEN为唯一碳源，A正确； B、培养基通常采用的是高压蒸汽灭菌，涂布器一般使用灼烧灭菌，B错误； C、理论上，当接种的菌液稀释度足够高时，一个活菌会形成一个菌落。 所以步骤③中培养基上长出的菌落数量理论上可能等于涂布到平板上的活菌数量，C正确； D、a瓶ZEN浓度代表初始ZEN浓度，“a瓶ZEN浓度-b瓶ZEN浓度”代表菌株降解的ZEN浓度，因此“（a瓶ZEN浓度-b瓶ZEN浓度）/a瓶ZEN浓度”代表菌株的ZEN降解率，可衡量b瓶中菌株的ZEN降解能力，D正确。 故选B。 24．（2025·四川达州·二模）为筛选出能分解纤维素的细菌，生物兴趣小组的操作流程为“土壤菌液→等比稀释→接种到以纤维素为唯一碳源且派加刚果红的培养基—培养—观察”并获得了如图所示的平板。分别提取菌落I、Ⅱ、Ⅲ细菌中的物质，发现只有菌落Ⅱ中细菌不能合成纤维素酶。下列分析正确的是（　　） A．菌落II的细菌不能合成纤维素酶也能生长，说明菌落Ⅱ中细菌不需要碳源 B．菌落I中细菌分解纤维素的能力强于菌落Ⅲ，但两者菌落特征却完全相同 C．菌落II中的细菌所需碳源可能是空气中的CO2或菌落I分泌的含碳代谢产物 D．利用该平板和公式“C÷V×M”，可准确推算出每克土壤菌液中活菌数目 【答案】C 【分析】微生物常见的接种的方法：①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落；②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。用稀释涂布平板法进行微生物计数时，统计的菌落数往往比活菌的实际数目少，这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。 【详解】A、菌落Ⅱ的细菌不能合成纤维素酶，但依然能够生长，说明它们可能通过其他途径获取碳源，而不是不需要碳源，A错误； B、菌落I的透明圈直径/菌落直径大于菌落III，说明菌落I中细菌分解纤维素的能力强于菌落Ⅲ，但菌落特征通常与细菌的代谢能力和生长特性相关，菌落I和Ⅲ的分解能力不同，它们的菌落特征可能会有所不同，B错误； C、菌落Ⅱ的细菌不能合成纤维素酶，但它们仍然能够生长，说明它们可能通过其他途径获取碳源，如空气中的CO₂或其他菌落分泌的含碳代谢产物，C正确； D、利用该平板和公式“C÷V×M”，只能估算每克土壤菌液中活菌数目而不能准确计算，D错误。 故选C。 25．（2025·山西吕梁·二模）堆肥是一种对餐饮业产生的易腐垃圾处置的重要手段。为了研究高温预处理对堆肥的影响，研究人员将混合物料于室温下放置4h，作为常规堆肥（CC）组；混合物料在高温预处理装置中以85℃处理4h，取出后置于阴凉处冷却，作为高温预处理堆肥（HPC）组。实验结果如图所示，下列叙述错误的是（　　） A．微生物呼吸作用释放的热量积累，导致堆肥内部温度逐渐升高 B．高温预处理可促进堆肥过程中微生物的代谢活动，缩短易腐垃圾处置的时间 C．随处理时间的延长，有些种类的微生物数量逐渐增多，有些种类的微生物数量减少 D．筛选嗜热菌时，可在温度最高时取样，稀释后通过平板划线法接种 【答案】D 【分析】微生物常见的接种的方法：（1）平板划线法：把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞用接种环在平板培养基，通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞，经培养后生长繁殖成单菌落，通常把这种单菌落当作待分离微生物的纯种。（2）稀释涂布平板法：将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落。 【详解】A、在堆肥过程中，微生物呼吸作用释放的能量大部分以热能的形式释放出来，热量积累会导致堆肥内部温度逐渐升高，A正确； B、高温预处理可使堆肥温度提前达到最大温度，说明高温预处理可促进堆肥过程中微生物的代谢活动，缩短易腐垃圾处置的时间，B正确； C、温度较低时微生物的分解作用刚刚开始，此时堆肥材料中微生物的数量相对较少，经过一段时间的代谢和增殖，微生物的数量逐渐增多，并使堆肥温度逐渐升高，该过程中不耐热的微生物大量死亡，而耐高温的微生物数量逐渐增多，C正确； D、筛选嗜热菌时，可在温度最高时取样，但平板划线法不需要对微生物菌液进行稀释，D错误。 故选D。 26．（2025·江苏南通·二模）研究人员用刚果红培养基从蔗渣堆肥中筛选、分离出4株具有降解纤维素能力的真菌（图示①-④）。下列说法正确的是（    ） A．不宜通过接种蒸馏水检测所配制的固体培养基是否被污染 B．图示结果为采用平板划线法接种后倒置于恒温箱中静置培养的结果 C．④号真菌的红色圈与菌落的直径比值最大，降解纤维素的能力最强 D．采用稀释涂布平板法对①～④菌株分离培养24h后进行计数 【答案】A 【分析】微生物常见的接种的方法①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落；②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。 【详解】A、检测所配制的固体培养基是否被污染，应接种无菌水，而不是蒸馏水，A正确； B、图示结果中菌落分布均匀，应为采用稀释涂布平板法接种后倒置于恒温箱中静置培养的结果，而平板划线法接种后，菌落会沿着划线的路径分布，不会如此均匀，B错误； C、刚果红可以与纤维素形成红色复合物，当纤维素被纤维素酶分解后，在菌落周围会出现透明圈（即红色圈消失），透明圈与菌落的直径比值越大，说明该菌降解纤维素的能力越强，而不是红色圈与菌落的直径比值，C错误； D、一般采用稀释涂布平板法对微生物进行分离培养后，需要培养较长时间（如48h），等菌落充分生长后再进行计数，24h可能时间过短，菌落生长不充分，导致计数不准确，D错误。 故选A。 27．（2025·江苏南通·二模）下列有关教材实验的叙述，正确的是（    ） A．撕取菠菜叶下表皮观察叶绿体，原因是下表皮细胞中叶绿体较大且数量多，易观察 B．用层析液分离光合色素，滤纸条上出现的条带数只与色素的种类有关 C．“探究酵母菌细胞呼吸的方式”，两组均需取酵母菌滤液进行酒精检测 D．对酵母菌进行计数时，先将盖玻片放在计数室上，再沿凹槽边缘滴加培养液 【答案】C 【分析】光合色素提取的原理：色素可以溶解在有机溶剂中。 分离的原理：不同色素在有机溶剂中的溶解度不同。 因为不同色素在有机溶剂中的溶解度不同，所以在层析液中溶解度大的，随层析液上升快，所以四种色素会分开。 【详解】A、撕取菠菜叶下表皮观察叶绿体，原因是下表皮叶肉细胞中叶绿体较大且数量多，易观察，下表皮细胞中无叶绿体，A错误； B、用层析液分离光合色素，滤纸条上出现的条带数是扩散速率不同所致，与色素的种类、色素的分子大小、层析液的种类、滤纸的扩散速率等都有关，B错误； C、“探究酵母菌细胞呼吸的方式”，了解酵母菌在有氧和无氧条件下的呼吸方式，两组均需取酵母菌滤液进行酒精检测，C正确； D、对酵母菌进行计数时，先将盖玻片放在计数室上，再在盖玻片边缘滴加培养液，D错误。 故选C。 28．（2025·辽宁沈阳·二模）利用绿色木霉和玉米秸秆发酵生产单细胞蛋白饲料，流程如下。下列叙述正确的是（    ） A．蒸料的主要目的是防止杂菌污染 B．玉米秸秆仅为绿色木霉的生长提供碳源 C．生产过程中两次粉碎的主要目的相同 D．生产成品时可从菌体中提取单细胞蛋白加入饲料中 【答案】A 【分析】发酵工程是指采用现代工程技术手段，利用微生物的某些特定功能，为人类生产有用的产品，或直接把微生物应用于工业生产过程的一种技术。发酵工程的内容包括菌种选育、培养基的配制、灭菌、种子扩大培养和接种、发酵过程和产品的分离提纯（生物分离工程）等方面。 【详解】A、蒸料是在接种绿色木霉之前的操作，通过高温处理可以杀死玉米秸秆及环境中的杂菌，防止杂菌在后续发酵过程中与绿色木霉竞争营养物质等，从而保证绿色木霉的正常生长和发酵过程的顺利进行，所以蒸料的主要目的是防止杂菌污染，A正确； B、玉米秸秆不仅能为绿色木霉的生长提供碳源，还含有氮源等其他营养成分，能为绿色木霉的生长提供多种营养物质，并非仅提供碳源，B错误； C、第一次粗粉碎是为了将玉米秸秆处理成较大颗粒，便于后续蒸料等操作，使物料受热更均匀等；第二次粉碎是将烘干后的产物粉碎成成品饲料的合适粒度，两次粉碎的主要目的不同，C错误； D、单细胞蛋白本身就是指通过发酵获得的大量微生物菌体，生产成品时，菌体本身就是单细胞蛋白饲料的主要成分，而不是从菌体中提取单细胞蛋白加入饲料中，D错误。 故选A。 29．（2025·广东茂名·二模）解钾菌能将土壤中难溶性含钾化合物分解，转变为可溶性化合物。下表是研究人员筛选解钾细菌的培养基配方，下列分析错误的是（    ） 成分 葡萄糖 硫酸铵 NaH2PO4 MgSO4·7H2O NaCl CaCO3 钾长石粉 琼脂 蒸馏水 含量（g/L） 10.0 0.5 0.5 0.2 0.1 0.1 5.0 15.0 定容至1L A．解钾菌属于自养微生物 B．CaCO3调节培养基的pH C．该培养基是固体培养基 D．解钾菌有增加肥力作用 【答案】A 【分析】培养基的营养构成：各种培养基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐，筛选和分离微生物需要使用选择培养基，微生物接种的方法很多，最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法，微生物培养的关键是无菌操作。 【详解】A、自养微生物是能利用无机物合成自身有机物的微生物。从培养基配方看，含有葡萄糖这种有机碳源，说明解钾菌需要利用现成的有机物，属于异养微生物，A错误； B、在培养基中，CaCO3可以起到调节培养基pH的作用，B正确； C、培养基中含有琼脂，琼脂是凝固剂，因此该培养基是固体培养基，C正确； D、解钾菌能将土壤中难溶性含钾化合物分解转变为可溶性化合物，从而增加了土壤中可被植物吸收的钾元素，有增加肥力的作用，D正确。 故选A。 30．（2025·四川雅安·二模）在牛、羊等反刍动物的瘤胃中生活着多种微生物，其中有能分解纤维素的微生物。实验室中常用刚果红培养基鉴别纤维素分解菌，其原理是刚果红可以与纤维素形成红色复合物，但并不与水解后的纤维二糖、葡萄糖等发生这种反应。在含有纤维素的培养基中加入刚果红，刚果红与纤维素形成红色复合物，而当纤维素被纤维素分解菌分解后，复合物就无法形成，培养基中会出现以这些菌为中心的透明圈（如图所示）。下列叙述正确的是（　　） A．可用平板划线法或稀释涂布平板法来对纤维素分解菌进行分离和计数 B．分离纤维素分解菌的选择培养基以纤维素为唯一氮源 C．为防止杂菌污染，在对瘤胃中的纤维素分解菌进行培养时应通入无菌空气 D．图中菌落3中的纤维素分解菌分解纤维素的能力最强 【答案】D 【分析】选择培养基允许特定种类的微生物生长，同时抑制其他种类微生物生长的培养基。在分离纤维素分解菌时，应选择以纤维素作为唯一碳源的培养。 【详解】A、微生物接种方法是平板划线法或稀释涂布平板法，它们都能对纤维素分解菌进行分离，但平板划线法不能用于计数，A错误； B、纤维素中不含氮元素，不能作为氮源，分离纤维素分解菌的选择培养基以纤维素为唯一碳源，B错误； C、瘤胃中不含有氧气，因此在此生活着的能分解纤维素的微生物，属于厌氧型，进行培养时不应通入空气，C错误； D、据图可知，菌落3的菌落直径小（纤维素分解菌数目少），但是降解圈大（分解的纤维素较多，说明纤维素酶活性较强），说明菌落3的菌株分解纤维素的能力最强，D正确。 故选D。 31．（2024·山东菏泽·二模）稻瘟菌引起的水稻稻瘟病是危害最为严重的真菌病害之一、土壤中某些微生物能合成并分泌几丁质酶，能抑制稻瘟菌的生长，可用于稻瘟病的防治。科研人员试图从土壤中筛选出能高效降解几丁质的菌株，通过微生物培养获得几丁质酶。下列说法错误的是（    ） A．纯化培养时，可选择稀释涂布平板法或平板划线法接种 B．筛选土壤中目的微生物时需用以几丁质为唯一碳源的培养基 C．在以几丁质为唯一碳源的培养基上生长的菌落均能分泌几丁质酶 D．可依据单菌落周围“水解圈直径/菌落直径”的值来筛选目的菌株 【答案】C 【分析】1、要从土壤中分离出能合成几丁质酶的微生物，应以几丁质为唯一碳源，以淘汰不能产生几丁质酶的真菌达到筛选效果。 2、水解圈是产生几丁质酶的微生物产生相关酶水解几丁质产生的，水解圈直径/菌落直径越大，说明该菌降解能力越强。 【详解】A、纯化培养时，可选择稀释涂布平板法或平板划线法接种，因为两种方法均可得到单菌落，A正确； B、筛选土壤中目的微生物时需用以几丁质为唯一碳源的培养基，因为在该培养基上能生长的微生物是能利用几丁质或能利用几丁质分解产物的微生物，B正确； C、在以几丁质为唯一碳源的培养基上生长的菌落不一定能分泌几丁质酶，可能部分是以几丁质的分解产物为碳源的微生物，C错误； D、水解圈是产生几丁质酶的微生物产生相关酶水解几丁质产生的，水解圈直径/菌落直径越大，说明该菌降解能力越强，故可依据单菌落周围“水解圈直径/菌落直径”的值来筛选目的菌株，D正确。 故选C。 32．（2025·宁夏银川·二模）某种含氮有机物的除草剂，在水中溶解度低，含一定量该除草剂的培养基不透明。其在土壤中不易降解，长期使用会污染土壤破坏生态环境。为修复被破坏的生态环境，按下图选育能降解该除草剂的细菌。下列叙述正确的是（    ）    A．有透明圈的菌落能够利用除草剂中的氮源，应扩大培养 B．图中培养基在各种成分溶化后先湿热灭菌再调节PH值 C．实验过程中需要将培养基调至中性或弱酸性 D．图中接种方法为平板划线法，可对细菌进行计数 【答案】A 【分析】该实验是从土壤中筛选分离能降解除草剂的微生物的过程。这样的实验要将土壤稀释处理，以除草剂为唯一的氮源进行处理筛选土壤微生物，以菌落计数法进行统计计数。 【详解】A、题目中提到，含除草剂的培养基是不透明的。如果某个菌落周围出现透明圈，说明该菌落能够降解除草剂，从而使培养基中的除草剂被分解，形成透明圈，这表明这些细菌能够利用除草剂中的氮源进行生长。因此，这些菌落是目标菌株，应该被扩大培养用于后续的降解实验或应用，A正确； B、在微生物实验中，培养基的灭菌通常是在调pH后进行的，调pH前灭菌可能导致培养基再次被污染，B错误； C、实验筛选的是细菌，需要将培养基调至中性或弱碱性，C错误； D、平板划线法的主要目的是分离单个菌落，而不是计数。细菌计数通常采用稀释涂布平板法。因此，平板划线法不能用于计数，D错误。 故选A。 33．（2025·河北衡水·二模）生物兴趣小组成员以西瓜5天龄幼苗子叶（子叶尚未完全展开且颜色为淡绿色）为外植体进行相关研究，得到如图所示实验结果，相关叙述错误的是（　　） A．实验开始前应对外植体消毒，对人工配置的MS培养基进行灭菌处理 B．与胚状体细胞相比，愈伤组织细胞分化程度低 C．结果表明西瓜子叶诱导形成愈伤组织的最适暗处理时间（以周为单位）是1周 D．暗处理时间长短对细胞再分化率影响大于脱分化率 【答案】C 【分析】植物组织培养过程是：离体的植物器官、组织或细胞脱分化形成愈伤组织，然后再分化生成根、芽，最终形成植物体。植物组织培养依据的原理是植物细胞的全能性。 【详解】A、该实验的外植体需要消毒处理，人工配置的MS培养基进行灭菌处理，A正确； B、愈伤组织是由已分化的细胞变为未分化的细胞，胚状体是由愈伤组织分化而来，因此愈伤组织细胞分化程度低，B正确； C、从图中数据可以看出，暗处理1周时愈伤组织的诱导率并不是最高，所以西瓜子叶诱导形成愈伤组织的最适暗处理时间并不是是1周，C错误； D、从图中可以看出，不同暗处理时间下愈伤组织诱导率（代表脱分化率）差异不大，说明暗处理时间长短对细胞脱分化率影响不大；而胚状体诱导率（代表再分化率）在不同暗处理时间下有明显差异，说明暗处理时间长短影响再分化率，暗处理时间长短对细胞再分化率影响大于脱分化率，D正确。 故选C。 34．（2025·河北衡水·二模）土壤中有丰富的微生物，若要利用其中某种微生物，则需要进行菌种的分离和纯化，过程如图。下列相关叙述正确的是（　　）    A．若要筛选分解尿素［CO（NH2）2］的细菌，尿素可作为该菌的氮源和碳源 B．理论上每毫升菌液中2号试管的活菌数是4号试管的100倍 C．4号试管的结果表明每克土壤中的活菌数约为1.1×109个 D．接种用的培养皿可用干热灭菌，可杀死微生物的营养细胞和部分芽孢 【答案】B 【分析】1、微生物常用的接种方法：①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。 2、配制以尿素为唯一氮源的培养基，能够生长的细菌就是能分解尿素的细菌；分解尿素的细菌能合成脲酶将尿素分解成氨，氨会使培养基的碱性增强，在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，若指示剂变红，可确定该种细菌能够分解尿素。为了保证稀释涂布平板法统计菌落数目的结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数。 【详解】A、若目的是筛选分解尿素[CO（NH2）2]的细菌，则尿素可以作为该菌的氮源，A错误； B、由样品稀释示意图分析可知，2号试管的稀释倍数为103倍，应是4号试管的100倍，B正确； C、4号试管进行稀释涂布平板法计数的结果表明每克土壤中的菌株数为（113+106+111）÷3×10×105=1.1×108个，C错误； D、接种用的培养皿可用干热灭菌，可杀死微生物的营养细胞和全部芽孢，D错误。 故选B。 35．（2025·河北衡水·二模）在微生物学中使用选择培养基让特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的过程称为选择培养。在选择培养基中添加一些特殊物质，则可配制成鉴别培养基。下列说法错误的是（　　） A．分离酵母菌、霉菌等真菌时，可在培养基中加入青霉素，调PH为酸性 B．以尿素为唯一氮源的培养基上可获得反刍动物瘤胃中的尿素分解菌 C．固氮菌能在不加氮源的培养基中生长，说明固氮菌为自养型生物 D．在以纤维素为唯一碳源的培养基中加入刚果红，可筛选纤维素分解菌 【答案】C 【分析】选择培养基的原理是：不同微生物在代谢过程中所需要的营养物质和环境不同。有的适于酸性环境，有的适于碱性环境；例如从土壤中分离放线菌时，可在培养基中加入10%的酚数滴，抑制细菌和真菌的生长；如培养酵母菌和霉菌，可在培养基中加入青霉素；培养金黄色葡萄球菌，可在培养基中加入高浓度的食盐。 【详解】A、酵母菌和霉菌都是真菌，而青霉素可抑制细菌的生长，故分离酵母菌、霉菌等真菌时，可在培养基中加入青霉素，调PH为酸性，A正确； B、以尿素为唯一氮源的培养基上可获得尿素分解菌，B正确； C、固氮菌能在不加氮源的培养基中生长，说明固氮菌可以固氮；自养型微生物可自己制造有机物，固氮菌不能自己制造有机物，为异养型微生物，C错误； D、在以纤维素为唯一碳源的培养基中加入刚果红，当纤维素被分解后，其与纤维素形成的红色复合物就无法形成，出现透明圈，故可筛选纤维素分解菌，D正确。 故选C。 36．（2025·贵州贵阳·二模）某生物兴趣小组将从葡萄皮上成功分离来的野生酵母菌分别接种于3个盛有等量同种液体培养基的锥形瓶中，并放置在摇床上培养，摇床转速分别为210r/min、230r/min和250r/min。培养时间与酵母菌种群密度的关系如图所示。以下叙述正确的是（    ） A．该实验的自变量是摇床的转速多少 B．若用稀释涂布平板法统计酵母菌活菌数量，得到的数据会比实际值偏大 C．培养8h后，有2个锥形瓶中酵母菌的数量已达到了环境容纳量 D．根据图中数据可以得出，培养液中氧气含量越高，酵母菌种群密度越小 【答案】C 【分析】酵母菌是兼性厌氧型的单细胞真菌，在有氧条件下可以迅速增殖。本实验的目的是探究培养液的溶氧量对酵母菌种群密度的影响。 【详解】A、据图可知，该实验的自变量是摇床的转速多少与培养时间，A错误； B、若用稀释涂布平板法统计酵母菌活菌数量，当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的仅仅是一个菌落，所以得到的数据会比实际值偏小，B错误； C、培养8h后，由于营养物质逐渐被消耗，酵母菌种群密度达到K值，培养液中的溶氧量和营养物质都有限，使种群密度达到稳定，C正确； D、在一定转速范围内，摇床转速越高，酵母菌繁殖的速度和总量越高，其原因是摇床转速越高，培养基中的O2越充足，酵母菌种群密度越大，D错误。 故选C。 37．（2025·陕西汉中·二模）血红蛋白（Hb）能携带O2，透明颤菌含有Hb，将Hb基因转入青霉菌可提高青霉素的产量。研究人员制备了两种营养缺陷型（菌株不能在缺乏该营养物质的培养基上生长）菌株的原生质体，并诱导细胞融合，来获得杂种菌株，过程如图所示。下列分析正确的是（　　） A．处理①和处理②均需要选用纤维素酶和果胶酶 B．在全营养的高渗溶液中，进行处理③来诱导细胞融合 C．处理④是在缺乏甲硫氨酸和精氨酸的培养基中筛选 D．Hb基因使营养缺陷型青霉菌恢复合成青霉素的能力 【答案】C 【分析】植物体细胞杂交是指将不同种的植物体细胞，在一定条件下融合成杂种细胞，并把杂种细胞培育成新的植物体的技术。诱导原生质体融合的方法：物理法（离心、振动、电激等）和化学法（聚乙二醇等）。植物体细胞杂交的意义：克服远缘杂交不亲和的障碍，扩大亲本范围，培育作物新品种。 【详解】A、酶具有专一性，纤维素酶和果胶酶可去除植物细胞的细胞壁，但透明颤菌属于细菌，细胞壁的成分主要是肽聚糖，青霉菌是真菌，细胞壁成分主要是几丁质，A错误； B、③过程不能在过高渗透压的溶液中进行融合，B错误； C、融合细胞兼有两个细胞的特点，可利用缺乏甲硫氨酸和精氨酸的基本培养基筛选出融合细胞，C正确； D、营养缺陷型青霉菌并不是不能合成青霉素，而是不能在缺乏该营养物质的培养基上生长，D错误。 故选C。 38．（2025·天津河北·二模）某兴趣小组测定土壤中尿素分解菌的数量，对土样进行稀释的流程如图所示。摇匀C试管，从C试管中取0.1mL菌液进行接种，在适宜条件下培养一段时间，测得平板中的平均菌落数为38。 ①取土样的工具必须灭菌 ②培养用的培养基为选择培养基 ③可用牛肉膏蛋白胨培养基培养 ④接种时采用涂布平板法 ⑤接种时可采用平板划线法 ⑥每克土样中尿素分解菌的数量至少是3.8×106个 ⑦每克土样中尿素分解菌的数量是3.8×106个 关于本实验，以上说法正确的是 A．①③④⑤⑦ B．①②④⑥ C．②③⑤⑦ D．②④⑤⑥ 【答案】B 【分析】微生物常见的接种的方法： 平板划线法：将已经饹化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养，在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。 稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。 【详解】①取土样用的铁铲和取样袋在使用前都需要进行灭菌，①正确； ②所用的培养基是以尿素为唯一氮源的选择培养基， 成分中除了琼脂、水和尿素外还应该有碳源和无机盐，②正确， ③该培养基应以尿素为唯一氮源，不可用牛肉膏蛋白胨培养基培养，因为其中含有N，③错误； ④⑤该实验需要进行计数，平板划线法不能计数，涂布平板法可以计数，④正确，⑤错误； ⑥⑦据图可知，菌液在接种前到C试管，被稀释了104倍，因此每克土样中纤维素分解菌的数量，应该为38÷0.1×104=3.8×106个，由于稀释涂布平板法获得的菌落数可能是两个或两个以上的细胞聚集在一起形成的，因此这里计算所得的数据为至少，⑥正确，⑦错误。 综上，①②④⑥正确，B正确，ACD错误。 故选B。 39．（2025·河南郑州·二模）土壤中的解磷细菌能够分泌磷酸酶溶解磷酸盐固体，提高土壤的肥力。科研工作者通过分离、培养解磷细菌制备菌肥，应用到农业生产中。下列关于解磷细菌的分离和培养的叙述正确的是（    ） A．解磷细菌合成和分泌磷酸酶时需要核糖体、内质网、高尔基体等细胞器的参与 B．分离解磷细菌时，需取少量土壤，在以磷酸盐固体为唯一磷源的培养基中培养 C．筛选解磷能力强的菌株时需在特定固体培养基上挑选降解圈最大的菌落 D．测定解磷菌肥活菌的数目时宜用平板划线法而不宜用显微镜直接计数法 【答案】B 【分析】微生物常见的接种的方法： ①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。 ②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。 【详解】A、解磷细菌属于原核生物，其细胞结构中不含内质网和高尔基体，A错误； B、分离解磷细菌时，需取少量土壤，在以磷酸盐固体为唯一磷源的培养基上分离单菌落，B正确； C、筛选解磷能力强的菌株时需在特定固体培养基上挑选降解圈直径与菌落直径比值最大的菌落，C错误； D、平板划线法用于分离纯化菌种，无法直接计数活菌数目，应为稀释涂布平板法，D错误。 故选B。 40．（2025·河南·二模）安莎霉素是一类主要由海洋中的稀有放线菌产生的次生代谢产物，具有较高的抗菌活性。经人工诱变后，部分放线菌由于某种酶被破坏，其细胞中某些化学反应不能正常进行，就形成了氨基酸营养缺陷型菌株（不能在基本培养基上生长，只能在完全培养基上生长），这在工业生产上有较广阔的应用前景。利用影印法初检某种氨基酸营养缺陷型菌株的过程如下图，下列相关叙述错误的是（    ） A．基本培养基与完全培养基存在差异的成分是氨基酸 B．进行过程①培养时，待测培养皿中是完全培养基 C．进行过程②培养时，应先将丝绒布转印至基本培养基上 D．应挑取菌落B进行接种培养，并进一步鉴定 【答案】D 【分析】分析题图，图中首先利用稀释涂布平板法分离细菌，然后运用“影印法”将菌种接种到两种培养基中：基本培养基、完全培养基，则在基本培养基中，氨基酸缺陷型菌株不能生长，而在完全培养基中能够生长，因此可以选择出氨基酸缺陷型菌株。 【详解】A、产安莎霉素的放线菌具有一个普遍的共性——氨基酸营养缺陷型，从培养基成分上看，基本培养基与完全培养基存在差异的成分是氨基酸，A正确； B、进行过程①培养是为了获得产安莎霉素的放线菌，待测培养皿中是完全培养基，B正确； C、进行过程②培养时，为防止特定氨基酸混入基本培养基中，应先将丝绒布转印至基本培养基上，再转接至完全培养基上，C正确； D、氨基酸缺陷型菌株不能在基本培养基上生长，只能在完全培养基上生长，所以为了完成对初检的营养缺陷型菌株的鉴定，实验人员应挑取完全培养基上的菌落A进行接种培养，并进一步鉴定，D错误。 故选D。 41．（2025·安徽安庆·二模）变色圈法是将潜在的目标微生物样本接种到含有特定底物的培养基上，随着微生物在培养基上生长和繁殖，它们会分泌相应的酶来分解这些底物，该过程中产生的可溶性小分子化学物扩散会引起特定区域指示剂的颜色变化。下列相关分析错误的是（    ） A．变色圈的大小可作为评估微生物体内相关酶活性的重要指标 B．与透明圈相比，变色圈法中指示剂的使用让反应结果更直观 C．利用变色圈法筛选得到的微生物能直接接种于发酵罐内发酵 D．基于微型化培养及多种检测技术可实现微生物的高通量筛选 【答案】C 【分析】微生物常见的接种的方法：（1）平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养．在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。（2）稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。 【详解】A、微生物产生的相关酶活性越高，分解底物产生的可溶性小分子化学物越多，扩散后引起的变色圈越大。所以变色圈的大小可作为评估微生物体内相关酶活性的重要指标，A正确； B、透明圈是通过底物被分解后形成的透明区域来判断，而变色圈法中指示剂的使用，能让反应结果以颜色变化的形式呈现，相比透明圈更直观，B正确； C、利用变色圈法筛选得到的微生物，需要先进行扩大培养、菌种鉴定等一系列操作，确保菌种的纯度、活性等符合要求后，才能接种于发酵罐内发酵，不能直接接种，C错误； D、基于微型化培养及多种检测技术，能够在较小的空间和较短的时间内对大量微生物样本进行检测和筛选，可实现微生物的高通量筛选，D正确。 故选C。 42．（2025·广西南宁·二模）野生型菌株在突变后失去合成某种氨基酸的能力，只能在完全培养基或补充相应氨基酸的基本培养基中才能生存。如下图为获得谷氨酸营养缺陷菌株的过程(原位影印是指用无菌绒布将一个平板的菌落“复制”到另外的空白平板上)。下列叙述错误的是（　　）    A．①②④是完全培养基，野生型和营养缺陷型菌株都能在其中生长 B．采用影印法对③④进行接种，采用稀释涂布平板法对②进行接种 C．将甲菌株分别接种于有氮和无氮培养基进行培养，可验证其是否具有固氮能力 D．在发酵工程中，若要获得产物谷氨酸需要对发酵产品进行提取、分离和纯化 【答案】C 【分析】由题图信息分析可知，图中首先利用稀释涂布平板法分离细菌，然后运用影印法将菌种接种到两种培养基中，分别是基本培养基、完全培养基；野生型大肠杆菌菌株能在基本培养基上生长，而氨基酸营养缺陷型菌株由于发生基因突变无法合成某种氨基酸只能在完全培养基上生长，据此利用培养基的种类便可以选择出氨基酸突变株。 【详解】A、由题图信息分析可知，野生型菌株能在基本培养基上生长，氨基酸营养缺陷型菌株无法合成某种氨基酸，只能在完全培养基上生长，图中①②④为完全培养基，③是基本培养基，A正确； B、图示②培养基是经过液体培养基稀释后的接种，应为稀释涂布平板法，对③④进行接种采用影印法培养，B正确； C、实验目的是验证该菌株是否具有固氮能力，则可通过在无氮培养基中进行观察，将甲菌株接种于无氮培养基，适宜条件下培养一段时间，观察菌落生长情况，C错误； D、如果发酵产品是微生物细胞本身，可在发酵结束后，采用过滤、沉淀等方法将菌体分离和干燥。如果产品是代谢物(如由谷氨酸棒状杆菌发酵得到的谷氨酸)可根据产物的性质采取适当的提取、分离和纯化措施来获得产品，D正确。 故选C。 43．（2025·内蒙古赤峰·二模）下列是关于微生物培养和计数的正确叙述是（　　） A．稀释涂布平板法统计的菌落数和活菌实际数目相同 B．发酵排出的气体需进行二次清洁或灭菌处理 C．微生物进行扩大培养时可持续增加培养液中物质的浓度 D．以尿素为唯一氮源的培养基上生长的细菌都能分解尿素 【答案】B 【分析】微生物接种的方法中最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法，前者是指通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种，逐步稀释分散到培养基的表面；后者是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。 【详解】A、稀释涂布平板法能获得单菌落，根据菌落数目可计数活菌数目，由于两个或多个菌体繁殖产生的是一个菌落，故用稀释涂布平板法统计的菌落数往往比活菌数少，A错误； B、为了减少或避免污染物的产生和排放，实现清洁生产，应该对排出的气体和废弃培养液进行二次清洁或灭菌处理，B正确； C、微生物进行扩大培养时，若持续增加培养液中物质的浓度，可能会导致培养液浓度过高，微生物失水，不利于微生物的生长和繁殖，C错误； D、能在以尿素为唯一氮源的培养基上生存的微生物还可能是固氮菌，D错误。 故选B。 44．（2025·福建·二模）伊红-亚甲蓝琼脂培养基(EMB)可用于检测自来水中大肠杆菌的数量。生长在此培养基上的大肠杆菌菌落呈深紫色，并带有金属光泽。操作时先用滤膜过滤待测水样，再将滤膜转移到EMB上培养，最终统计菌落数目。下列叙述正确的是（    ） A．以藻类制成的琼脂可为微生物提供碳源、氮源等营养物质 B．伊红-亚甲蓝琼脂培养基属于选择培养基，可用于分离微生物 C．用100ml样液培养出各种颜色的菌落5个，则1L样液中大肠杆菌数为50个 D．该方法统计得到的大肠杆菌菌落数目可能小于待测水样的大肠杆菌数目 【答案】D 【分析】滤膜法是检测水样中大肠细菌群的方法，将一定量水样注入已灭菌的微孔薄膜的滤器中，经过抽滤，细菌被截留在滤膜上，将滤膜贴于伊红美蓝培养基上，经培养后计数和鉴定滤膜上生长的大肠菌群菌落即可推测计算出水样中的大肠杆菌数；伊红为酸性染料，亚甲蓝为碱性染料，大肠杆菌在伊红-亚甲蓝培养基的菌落呈深紫色，并有金属光泽。 【详解】A、琼脂作为凝固剂，不能为微生物提供碳源、氮源等营养物质，A错误； B、伊红亚甲蓝培养基能够鉴别大肠杆菌，属于鉴别培养基，B错误； C、只有深紫色才是大肠杆菌，用100ml样液培养出各种颜色的菌落5个，则1L样液中对应的细菌数为1L÷100mL×5=50个，大肠杆菌数小于50个，C错误； D、该方法是利用菌落数来反映细菌数，可能多个细菌形成一个菌落导致统计数据偏小，D正确。 故选D。 45．（2025·江苏盐城·二模）我国科考船在南海采集到深海冷泉沉积物，从中分离培养微生物，过程如下图所示。将步骤I得到的菌液与步骤II所用的培养基混合注入充满N2的密闭试管中，培养一段时间后可在试管壁的薄层培养基上获得单菌落。下列叙述错误的是（    ） A．步骤I培养基添加DNA是为微生物生长提供碳源和氮源 B．与步骤I相比，步骤II所用的培养基中还需要添加琼脂 C．步骤II应将试管在冰水混合物中迅速滚动模拟冷泉环境 D．步骤III从群落、个体和分子水平对微生物种类进行鉴定 【答案】D 【分析】1、微生物培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。2、选择培养基是在培养基中加入相应的特殊营养物质或化学物质，抑制不需要的微生物的生长，有利于所需微生物的生长。 【详解】A、微生物培养所需的培养基成分通常有水、碳源、氮源和无机盐，而DNA的元素组成为C、H、O、N、P，深海沉积物中富含胞外DNA，推测这些DNA可以作为微生物生存所需的碳源和氮源，故在培养基中添加了DNA，A正确； B、据图可知，在II培养基上培养后的菌落需要进行菌落特征观察，故应为固体培养基，故与I相比，Ⅱ所用培养基中还需要添加的是凝固剂琼脂，B正确； C、该微生物采集与深海冷泉，所以步骤II应将试管在冰水混合物中迅速滚动模拟冷泉环境，C正确； D、据图可知，III鉴定是从菌落特征、电子显微镜、基因鉴定等方面进行的分析和鉴定，分别是种群、细胞和分子水平，D错误。 故选D。 46．（2025·陕西渭南·二模）无菌技术是微生物培养获得纯净培养物的关键。为避免杂菌污染，常采用高压蒸汽灭菌法等对培养基进行灭菌。接种、倒平板等环节也都要防止杂菌的污染。下列相关叙述正确的是（    ） A．某些微生物能以无机物作为碳源，也能以无机物作为能源 B．消毒和灭菌都是指用强烈的理化方法杀死物体内外所有微生物 C．将要培养的微生物接种至培养基后，应立即放入高压蒸汽灭菌锅中 D．为保证超净工作台无菌，接种操作时应打开紫外灯 【答案】A 【分析】1、无菌技术的主要内容:①对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒;②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌;③为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行;④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。 2、消毒是使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物(不包芽孢和孢子)。常用方法有煮沸消毒法、巴氏消毒法、化学药剂消毒法、紫外线消毒法。 3、灭菌是使用强烈的理化因素杀死物体内外所用的微生物(包括芽孢和孢子)。常用方法有灼烧灭菌、干热灭菌、湿热灭菌法。 【详解】A、硝化细菌可以利用氨或铵盐作为合成有机物的能量，也可以以CO2为碳源，A正确； B、消毒是使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物(不包芽孢和孢子)，B错误； C、培养基要先进行高压蒸汽灭菌再接种，C错误； D、 紫外线对人体有伤害，接种操作时不能打开紫外灯，D错误。 故选A。 47．（2025·贵州毕节·二模）土壤中有丰富的微生物，若要利用其中某种微生物，则需要进行菌种的分离和纯化，过程如图。下列相关叙述错误的是（    ） A．若要筛选分解尿素[CO（NH2）2]的细菌，则尿素可以作为该菌的氮源 B．理论上每毫升菌液中2号试管的活菌数是4号试管的100倍 C．4号试管的结果表明每克土壤中的活菌数约为1.1×109个 D．该种方法统计的菌落数往往比活菌的实际数目少 【答案】C 【分析】1、微生物常用的接种方法：①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。 2、配制以尿素为唯一氮源的培养基，能够生长的细菌就是能分解尿素的细菌；分解尿素的细菌能合成脲酶将尿素分解成氨，氨会使培养基的碱性增强，在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，若指示剂变红，可确定该种细菌能够分解尿素。为了保证稀释涂布平板法统计菌落数目的结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数。 【详解】A、若目的是筛选分解尿素[CO（NH2）2]的细菌，则尿素可以作为该菌的氮源，A正确； B、由样品稀释示意图分析可知，2号试管的稀释倍数为103倍，应是4号试管的100倍，B正确； C、4号试管进行稀释涂布平板法计数的结果表明每克土壤中的菌株数为（113+106+111）÷3×10×105=1.1×108个，C错误； D、稀释涂布平板得到的菌落可能存在两个或多个细菌细胞长成一个菌落，使该实验方法统计得到的结果往往会比实际活菌数目要低，D正确。 故选C。 48．（2025·四川成都·二模）西瓜枯萎病是由尖孢镰刀菌（一种真菌）引起的。研究人员从西瓜枯萎病多发的土壤中分离出多种单菌落进行扩大培养，然后将扩大培养的发酵液与未凝固的普通培养基混合后倒平板，冷却后再接种尖孢镰刀菌，培养并观察尖孢镰刀菌菌丝生长情况，以期筛选出尖孢镰刀菌的拮抗菌。下列叙述错误的是（    ） A．在西瓜枯萎病多发的土壤中取样更容易获得目的菌种 B．培养土壤多种菌的发酵液中可能含有拮抗菌的代谢产物 C．需要将尖孢镰刀菌接种在普通培养基上培养观察作为对照 D．尖孢镰刀菌菌丝生长最好组别对应的微生物为最高效拮抗菌 【答案】D 【分析】稀释涂布平板法是根据微生物在固体培养基上所形成的单个菌落，即是由一个单细胞繁殖而成这一培养特征设计的计数方法，即一个菌落代表一个单细胞。 【详解】A、由题意可知，西瓜枯萎病是由尖孢镰刀菌（一种真菌）引起的，因此在西瓜枯萎病多发的土壤取样，比普通土壤更有可能获得尖孢镰刀菌的拮抗菌，A正确； B、培养土壤多种菌的发酵液中由于存在尖孢镰刀菌的拮抗菌，可能含有拮抗菌的代谢产物，从而抑制尖孢镰刀菌的生长，B正确； C、将尖孢镰刀菌接种在普通培养基上培养观察作为对照，以确定提取的发酵液对尖孢镰刀菌的抑制作用，C正确； D、尖孢镰刀菌菌丝生长最缓慢、稀疏的组别对应的微生物为最高效拮抗菌，D错误。 故选D。 二、多选题 49．（2025·山东潍坊·二模）细菌P在与其他细菌的竞争中常常占据优势，推测与其产生的A蛋白和B蛋白有关，A蛋白为胞外蛋白。为探究其作用机理，科研人员以野生型菌和基因敲除菌为材料进行了相关实验：在固体培养基表面放置一张能隔离并吸附细菌的滤膜，将一种菌（下层菌）滴加在滤膜上后再放置第二张滤膜，滴加等量的另一种菌（上层菌），共同培养48h后，将两张滤膜上菌体刮下计数，上层菌与下层菌数量的比值为竞争指数，结果如表。下列说法错误的是（　　） 甲组 乙组 丙组 丁组 上层菌 野生型菌 野生型菌 野生型菌 A基因敲除菌 下层菌 野生型菌 A-B双基因敲除菌 A基因敲除菌 A-B双基因敲除菌 竞争指数 1.4 3.8 1.3 1.4 A．采用稀释涂布平板法对刮下的菌体进行计数，待菌落长出后即可进行计数 B．由甲组实验结果可推测细菌P为厌氧菌 C．通过乙、丁对比，可分析推理A蛋白对细菌的作用 D．推测B蛋白会增强A蛋白的毒性 【答案】ABD 【分析】稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。分为系列稀释操作和涂布平板操作两步。稀释涂布平板计数法的原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。统计平板上的菌落数，就能推测样品中大约含有多少活菌。其计算公式：每克样品中的菌株数=（C÷V）×M（C代表某一稀释度下平板生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积，M代表稀释倍数）。培养基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐。 【详解】A、稀释涂布平板法可以用于细菌计数，但需要菌落数量在30-300之间才能保证准确性，且需要培养至菌落稳定后才能计数，A错误； B、甲组实验是野生型菌（上层）和野生型菌（下层），竞争指数为1.4，仅说明野生型菌在上下层竞争中有轻微优势，无法直接推断其是否为厌氧菌，B错误； C、乙组：野生型菌（上层，含A和B蛋白）、 A-B双基因敲除菌（下层，无A和B蛋白），竞争指数为3.8。丁组：A基因敲除菌（上层，无A蛋白）、 A-B双基因敲除菌（下层，无A和B蛋白），竞争指数为1.4。对比乙组和丁组，上层菌的唯一区别是A蛋白的存在，且乙组竞争指数显著更高，说明A蛋白增强了野生型菌的竞争优势，C正确； D、乙组和丙组对比，自变量为下层菌体是否含B蛋白，丙组下层菌体含有B蛋白，竞争指数小，说明B蛋白可以抵抗野生型菌体产生的蛋白A的毒性，D错误。 故选ABD。 50．（2025·江苏南京·二模）科研人员利用“影印培养法"研究大肠杆菌抗药性形成与环境的关系，实验过程如图所示。待3号培养基上长出菌落后，在2号培养基上找到对应的菌落，然后接种到不含链霉素的4号培养液中，培养后再接种到5号培养基上，并重复以上操作。下列叙述正确的有（　　） A．3号培养基中菌落数少于1号培养基中的菌落数，说明基因突变具有低频性 B．5号培养基中观察到的细菌数往往小于涂布时吸取的菌液中的活菌数量 C．上述操作中重复实验的目的是进一步纯化抗链霉素的菌株及增大目的菌株的浓度 D．12号培养基中需有水、无机盐、碳源、氮源及琼脂等，置于4℃冰箱中保存 【答案】ACD 【分析】影印培养法实质上是使在一系列培养皿的相同位置上能出现相同菌落的一种接种培养方法。通过影印培养法，可以从在非选择性条件下生长的细菌群体中，分离出各种类型的突变种。 【详解】A、1号培养基中有大量的菌落，而3号培养基只有极少数菌落，说明绝大部分菌株不具有抗链霉素的能力，少量菌株发生了突变，产生了具有抗链霉素的能力，从而也说明了基因突变具有低频性，A正确； B、采用稀释涂布平板法将菌种接种在5号培养基上，由于细菌在培养基中会不断的增殖，因此5号培养基中观察到的细菌数往往大于涂布时吸取的菌液中的活菌数量，B错误； C、结合图示可知，11号培养基中菌落数远多于3号和7号，说明通过上述操作中重复实验的目的是进一步纯化抗链霉素的菌株及增大目的菌株的浓度，C正确； D、12号培养基为固体斜面培养基，大肠杆菌培养基通常需要水、无机盐、碳源、氮源，添加琼脂可以形成固体培养基，斜面培养基的作用是保存菌种，菌种可以在4℃冰箱中保存，D正确。 故选ACD。 51．（2025·山东菏泽·二模）金黄色葡萄球菌对青霉素的敏感度高且高度耐盐化。菌株可在血琼脂平板（完全培养基中添加适量血液）上生长，并能产生溶血毒素（可使红细胞及组成物质完全溶解）。下列说法错误的是（    ） A．在金黄色葡萄球菌分离培养过程中，需在选择培养基中加入10%—15%的NaCl、青霉素 B．培养在血琼脂平板上的金黄色葡萄球菌菌落周围会出现透明的溶血圈 C．可利用平板划线法在固体培养基表面获得均匀分布的金黄色葡萄球菌的单个菌落 D．用一定浓度的青霉素会诱导金黄色葡萄球菌产生耐药性的变异 【答案】ACD 【分析】培养基按功能分为选择培养基和鉴别培养基：选择培养基：培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的不需要的微生物的生长，促进所需要的微生物生长，培养、分离出特定的微生物(如培养酵母菌和霉菌，可在培养基中加入青霉素;培养金黄色葡萄球菌，可在培养基中加入高浓度的食)；鉴别培养基：根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品，鉴别不同种类的微生物，如可用伊红—美蓝培养基鉴别饮用水或乳制品中是否有大肠杆菌(若有，菌落呈深紫色，并带有金属光泽)。 【详解】A、金黄色葡萄球菌具有对青霉素敏感度高和高度耐盐化等特性，故在金黄色葡萄球菌的分离培养过程中，须在选择培养基中加入10%-15%的NaC1，且不能加青霉素等药物，A错误； B、金黄色葡萄球菌能产生溶血毒素，培养在血琼脂平板上的金黄色葡萄球菌菌落周围会出现透明的溶血圈，B正确； C、可利用稀释涂布平板法在固体培养基表面获得均匀分布的金黄色葡萄球菌的单个菌落，C错误； D、变异是不定向的，青霉素不能诱导金黄色葡萄球菌产生耐药性的变异，D错误。 故选ACD。 52．（2025·山东·二模）臭豆腐一般是以含蛋白质高的优质黄豆为原料，经过泡豆、磨浆、滤浆、点卤、前期发酵、腌制、灌汤、后期发酵等多道工序制成的。其加工制作流程如图所示。下列说法正确的是（　　） A．上图中卤水发酵的菌种可能来源于B，原因是B未采取灭菌措施 B．取样检测时，按上图所示发酵时间并注意取样时摇匀即可 C．在发酵过程中，由于不止有一种微生物，发酵液的pH前期可能会下降 D．若要对样品中某一菌种计数，适宜采取的方法是稀释涂布平板法 【答案】ACD 【分析】微生物常见的接种的方法：①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落；②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。用稀释涂布平板法进行微生物计数时，统计的菌落数往往比活菌的实际数目少，这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。 【详解】A、A 中原料经过高温灭菌，而 B是现做熟豆腐片或豆腐脑等，仍含有微生物，因此发酵所需的微生物有可能主要来自 B，A正确； B、微生物发酵过程的取样检测需采取无菌操作，而不仅是摇匀，B错误； C、发酵中常有多种微生物共同作用，前期易因产酸菌的活动导致 pH 下降，C正确； D、微生物接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法，若要对样品中某一菌种计数，适宜采取的方法是稀释涂布平板法，D正确。 故选ACD。 53．（2025·河北邢台·二模）蛭弧菌能使污水中的嗜水气单胞菌（异养型）裂解，将其接种在长满嗜水气单胞菌的平板上会出现噬菌斑。某兴趣小组将嗜水气单胞菌接种到固体培养基上，培养形成薄层，再接种采集的污水用以分离蛭弧菌。下列叙述错误的是（　　） A．污水可为自然环境中的嗜水气单胞菌提供碳源 B．出现噬菌斑一定是蛭弧菌作用的结果 C．可用涂布平板法接种嗜水气单胞菌 D．可用干热灭菌法对平板进行灭菌 【答案】BD 【分析】微生物常见的接种的方法:（1）平板划线法:将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板,接种,划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分,微生物往往连在一起生长， 随着线的延伸，菌数逐渐减少,最后可能形成单个菌落。（2）稀释涂布平板法:将待分离的菌液经过大量稀释后,均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。 【详解】A、嗜水气单胞菌为异养型，污水中含有机物，可以为微生物提供碳源，A正确； B、出现噬菌斑说明有能分解嗜水气单胞菌的微生物，不一定是蛭弧菌作用的结果，B错误； C、接种方法有稀释涂布平板法和平板划线法，可用涂布平板法接种嗜水气单胞菌，C正确； D、平板指的是凝固后的培养基，不能用干热灭菌，应用湿热灭菌法进行灭菌处理，D错误。 故选BD。 54．（2025·辽宁·二模）奶酪是通过微生物的作用，使牛奶的物理和化学性质发生改变后形成的具有独特风味和质地的乳制品；近似固体，营养价值丰富。如图是奶酪制作的部分过程，其中凝乳酶可以将牛奶凝固，探究凝乳酶活性的实验数据如表所示。下列与奶酪制作相关的说法，错误的是（    ） 组别 A B C D E F 水浴温度/℃ 10 20 30 40 50 60 凝乳时间/min 不凝 7.0 4.0 1.5 4.0 不凝 A．无菌处理的最佳温度为121℃ B．乳酸发酵应在无氧条件下进行 C．形成凝乳时温度要控制在20℃左右 D．为防止杂菌污染应在牛奶中加入一定量的抗生素 【答案】ACD 【分析】消毒和灭菌是两个不同的概念，消毒是指使用较为温和的物理、化学或生物的方法杀死物体表面或内部的一部分微生物。灭菌则是指使用强烈的理化方法杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。 【详解】A、湿热灭菌是在压力100kPa、温度121℃ 的条件下进行，对牛奶的无菌处理采用的是巴氏消毒 法，62~65℃消毒 30min或 80~90℃ 处理 30 s～ 1min，A错误； B、乳酸发酵的菌种为厌氧菌，应在无氧 条件下进行发酵，B正确； C、凝乳的最适温度下凝乳时 间应最短，实验温度内40℃较好，但仍需缩小梯度进一步确定，C错误； D、加入抗生素会杀死菌种，导致实验失败，D错误。 故选ACD。 55．（2025·山东枣庄·二模）关于“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”实验，下列说法正确的是（    ） A．取样时用的铁铲、纸袋在使用前进行消毒处理，对培养基进行湿热灭菌，对培养皿要进行干热灭菌 B．实验中的培养基以尿素为唯一氮源，属于选择培养基，含酚红指示剂的培养基变红说明有尿素分解菌 C．用平板划线法和稀释涂布平板法都可以对尿素分解菌进行计数，但是统计结果往往比实际值偏低 D．若取稀释105倍的0.1mL菌液进行涂布，获得菌落数目的平均值为168，则每克土样中尿素分解菌的数量为1.68×108 【答案】BD 【分析】稀释涂布平板法：稀释涂布平板法除了可以用于分离微生物外，也常用来统计样品中活菌的数目。当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测样品大约含有多少活菌。 平板划线法：①将接种环放到火焰上灼烧，直到接种环的金属丝烧红。②在火焰旁冷却接种环。同时，拔出试管的棉塞。③将试管口通过火焰。④在火焰附近用接种环蘸取一环菌液。⑤将试管口通过火焰，并塞上棉塞。⑥在火焰附近将皿盖打开一条缝隙，用接种环在培养基表面迅速划三至五条平行线，盖上皿盖。⑦灼烧接种环，待其冷却后，从第一次划线的末端开始作第二次划线。重复以上操作，作第三、四、五次划线，注意不要将最后一次划线与第一次的相连。 【详解】A、取样时用的铁铲要进行灭菌处理，湿热灭菌是在饱和蒸汽、沸水或流通蒸汽中进行灭菌的方法，适用于培养基灭菌，干热灭菌法是指在干燥环境（如火焰或干热空气）进行灭菌的技术，适用于玻璃器皿，A错误； B、在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂培养细菌，若指示剂变红，可确定该种细菌能够分解尿素，B正确； C、对微生物计数可以使用稀释涂布平板法接种微生物，平板划线法无法计数，C错误； D、若取稀释105倍的0.1mL菌液进行涂布，获得菌落数目的平均值为168，则1mL菌液中所含的细菌数目为168×106=1.68×108个，D正确。 故选BD。 56．（2025·黑龙江哈尔滨·二模）桦树液可增强机体免疫力，沙棘主要分布在我国东北等地区，其果实具有抗衰老等作用。桦树液沙棘复合酒发酵工艺加工流程及优化结果如图所示，下列叙述正确的是（　　）       A．桦树液沙棘汁为菌种的生长提供了碳源等营养物质 B．可利用液体培养基对酵母菌进行扩大培养后接入发酵罐 C．生产时应选用酵母EC1118，接种量为0.06% D．本工艺最终还可从酵母菌中提取单细胞蛋白 【答案】ABC 【分析】1、发酵工程一般包括菌种的选育、扩大培养、培养基的配制、灭菌、接种、发酵、产品的分离、提纯等方面。性状优良的菌种可以从自然界中筛选出来，也可以通过诱变育种或基因工程育种获得； 2、果酒制备的菌种是酵母菌，最适温度在20℃左右最好，一般控制在18～30℃，属于兼性厌氧型细菌，发酵前期酵母菌先进性有氧呼吸，促进酵母菌的繁殖，后期进行无氧呼吸产生酒精。果酒制作的原理是酵母菌在无氧的条件下进行无氧呼吸产生酒精和二氧化碳。 【详解】A、桦树液和沙棘汁中含有糖类等物质，糖类可以作为碳源，同时还可能含有氮源、无机盐等其他营养物质，能够为菌种（酵母菌等）的生长提供碳源等营养物质，A正确； B、液体培养基中营养物质分布均匀，有利于微生物与营养物质充分接触，可利用液体培养基对酵母菌进行扩大培养，然后接入发酵罐进行发酵，B正确； C、从图2可以看出，酵母EC1118在发酵过程中能使酒精度较高；从图3可以看出，接种量为0.06%时酒品质较好（如残糖量、酒精度等指标较优），所以生产时应选用酵母EC1118，接种量为0.06%，C正确； D、单细胞蛋白是指通过发酵获得的大量的微生物菌体，但由题意无法得知本工艺最终可从酵母菌中提取单细胞蛋白，D错误。 故选ABC。 57．（2025·江苏南通·二模）动物肠道中的纤维素降解菌多样性高，但大多未被分离和培养。我国研究人员发明了一种全新的分离纤维素降解菌的方法，具体流程如下图。相关叙述正确的是（    ） A．实验前肠道细菌扩大培养时，应摇床培养以增加溶解氧和增大菌体与培养液的接触 B．过程③中纤维素对细菌有高亲和力，有利于纤维素化磁性纳米颗粒粘附细菌 C．过程④中纤维素降解菌合成的纤维素酶经高尔基体加工后，分泌到细胞外才具有降解功能 D．该方法分离菌体的效率与细菌的浓度和纤维素化磁性纳米颗粒的粒径、浓度有关 【答案】BD 【分析】分解纤维素的微生物的分离： （1）实验原理：①土壤中存在着大量纤维素分解菌，包括真菌、细菌和放线菌等，它们可以产生纤维素酶。纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶，前两种酶使纤维素分解成纤维二糖，第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。故在用纤维素作为唯一碳源的培养基中，纤维素分解菌能够很好地生长，其他微生物则不能生长。②在培养基中加入刚果红，可与培养基中的纤维素形成红色复合物，当纤维素被分解后，红色复合物不能形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，从而可筛选纤维素分解菌。 （2）实验过程：土壤取样：采集土样时，应选择富含纤维素的环境。梯度稀释：用选择培养基培养，以增加纤维素分解菌的浓度。涂布平板：将样品涂布于含刚果红的鉴别纤维素分解菌的固体培养基上。挑选产生透明圈的菌落：产生纤维素酶的菌落周围出现透明圈，从产生明显的透明圈的菌落上挑取部分细菌，并接种到纤维素分解菌的选择培养基上，在30～37℃条件下培养，可获得较纯的菌种。 【详解】A、肠道细菌一般为厌氧菌，扩大培养时不需要增加培养液中的溶解氧，A错误； B、过程③是纤维素化磁性纳米颗粒粘附细菌的过程，要求纤维素对细菌有较高亲和力，B正确； C、原核细胞不存在高尔基体，C错误； D、根据流程图可知该方法分离菌体的效率与细菌的浓度和纤维素化磁性纳米颗粒的粒径、浓度有关，D正确。 故选BD。 三、解答题 58．（2025·北京西城·二模）金黄色葡萄球菌（SA）是一种可导致人化脓感染的细菌。随着抗生素剂量的不断增加，出现了超级耐药型金黄色葡萄球菌（MRSA），研究人员对其耐药机制进行探索。 (1)SA细胞包括细胞壁、细胞膜、细胞质和 。SA分裂时，细胞内的关键酶P1和P2催化肽聚糖合成并交联成同心环结构，构建新细胞壁。抗生素甲氧西林可结合P1、P2并抑制其活性，导致SA分裂产生的新壁出现孔洞，在低渗环境中细胞会因 而死亡。 (2)检测发现，MRSA含有外源A+基因和突变的B+基因，A+表达产物P2a与P2作用相同。只获得A+基因的SA表现出对低浓度甲氧西林耐受，据此推测低浓度甲氧西林对P1几乎无影响，且P2a对甲氧西林亲和力较 。在高浓度甲氧西林培养基中，只获得A+基因的SA新细胞壁孔洞明显，而MRSA能正常分裂，新壁出现孔径较小的致密网状结构。 (3)为研究B+基因的功能，将SA突变为P1基因缺陷型菌株（P1-），进行系列实验。 ①将特定基因导入P1-菌株，各菌株繁殖速率如图1所示，结果表明，P1-菌株的分裂能力可通过B+基因弥补，而A+基因无此作用，依据是 。    ②构建图2所示表达载体导入P1-菌株，观察不同条件下菌株分裂产生新细胞壁形态，结果如图3，说明在P1缺乏时，B 。      (4)研究人员推测MRSA的B+发挥作用需依赖于A+，请从①～⑥选择合适的菌株、基因与培养条件，进行转基因实验，验证推测。写出相应组合并预期实验结果 。 ①SA菌株  ②P1-P2-菌株  ③A+基因  ④B+基因  ⑤高浓度甲氧西林  ⑥不用甲氧西林 【答案】(1) 拟核 吸水涨破 (2)低 (3) 相对繁殖速率：甲与对照组无差异，乙远大于对照组；丙远大于甲，和乙差异不大 可促进肽聚糖交联成致密网状结构形成新细胞壁 (4)甲组：①③④⑤（或②③④⑥） 乙组：①④⑤（或②④⑥） 预期结果：甲组正常分裂并形成致密网状结构，乙组无法分裂 【分析】1、真核细胞和原核细胞的最重要区别在于有无核膜。 2、甲氧西林能阻断无耐药性金黄色葡萄球菌细胞壁的形成，进而杀灭细菌。如长期使用甲氧西林，则金黄色葡萄球菌种群中的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌甲氧西林金黄色葡萄球菌频率将不断增加。 【详解】（1）细菌为原核生物，细胞结构包括细胞壁、细胞膜、细胞质和 拟核原核生物无成形细胞核，拟核是遗传物质储存的主要区域）。P1、P2 抑制相关活性，新壁出现孔洞，低渗环境中细胞会因 吸水涨破（细胞内渗透压高于外界，水分大量进入细胞导致破裂）而死亡。 （2）检测发现 MRSA 有额外 A+基因，实验表明 P2a 对甲氧西林 亲和力低（若亲和力高，含 A+基因的 SA 新壁不会出现对甲氧西林耐受的情况）。在高浓度甲氧西林培养基中，只有含 A’基因的 SA 新壁有 致密网状结构（A’基因使肽聚糖交联方式改变，形成抗甲氧西林的结构）。 （3）分析相对繁殖速率数据：导入B+基因的乙组P-相对繁殖速率显著高于对照组P-和只导入A+的甲组，和丙组没有明显差异，说明P1-菌株的分裂能力可通过B+基因弥补，而A+基因无此作用。由图3可知，有诱导物时，即P1基因表达，新细胞壁会形成同心环结构；无诱导物时，P1基因不表达，缺乏P1，新细胞壁呈致密网状结构。可以说明，P1缺乏时，B+可促进肽聚糖交联成致密网状结构形成新细胞壁。 （4）研究人员推测MRSA的B*发挥作用需依赖于A+。则实验的自变量为是否有A+基因，因变量为细胞是否正常分裂，无关变量保持相同且适宜。本实验为验证实验，则含有A+基因，则细胞分裂，则实验设计和预期结果如下： 甲组：①③④⑤（或②③④⑥） 乙组：①④⑤（或②④⑥） 预期结果：甲组正常分裂并形成致密网状结构，乙组无法分裂。 59．（2025·安徽池州·二模）我国是酱油酿造大国，酱油的出现可追溯至周朝。乳酸菌是酱油酿造过程中常见的风味菌之一，要想获得品质上乘的酱油，加快选育耐高盐的风味菌是最主要的途径。某研究小组以发酵泡菜中筛选得到的耐盐植物乳杆菌X为菌种，通过紫外线诱变选育耐盐稳定、产酸性能良好的突变株用于相关发酵实验。请回答下列问题。 (1)植物乳杆菌 X 的代谢方式为 ，其在紫外线诱变选育过程中发生的变异类型是 。 (2)已知植物乳杆菌X代谢产物乳酸能够使高锰酸钾-溴化钾-MRS培养基褪色形成透明圈，透明圈直径（D）和菌落直径（d）比值（D/d值）可作为筛选指标。请简述该研究小组利用植物乳杆菌X诱变选育耐盐稳定、产酸性能良好的突变株的实验思路： 。 (3)实验发现，在高盐发酵酱醪中添加植物乳杆菌X后，相同时间内杂菌总数的增加量小于植物乳杆菌X的增加量，说明 ，分析可能的原因是 。 【答案】(1) 异养厌氧型 基因突变 (2)配制适宜浓度含植物乳酸杆菌X的培养液，置于紫外线下照射一段时间后，将培养液均匀涂布在高盐的高锰酸钾-溴化钾-MRS培养基上，并置于适宜条件的恒温箱中培养，测量并计算培养基上细菌菌落D/d值的大小 (3) 植物乳杆菌X的加入抑制了酱醪中其他细菌的生长 植物乳杆菌X代谢产物乳酸可降低酱醪中的pH，抑制了其他菌的生长繁殖 【分析】诱变育种中常用的方法有物理因素和化学因素等。该育种过程使用紫外线作为一种物理因素，可以诱发基因突变，由于紫外诱导可显著提高突变频率，从而实现在短时间内获得更多的植物乳杆菌优良变异类型。 【详解】（1）乳酸菌是厌氧菌，且植物乳杆菌X作为乳酸菌的一种，自身不能利用无机物合成有机物，需从外界摄取，所以其代谢方式为异养厌氧型。紫外线诱变为物理诱变因素，在紫外线诱变选育过程中，其原理是使基因结构发生改变，故发生的变异类型是基因突变。 （2）实验目的是利用植物乳杆菌X诱变选育耐盐稳定、产酸性能良好的突变株。  首先，要配制适宜浓度含植物乳杆菌X的培养液，这是提供实验材料的基础。 然后，用紫外线照射一段时间，目的是诱导植物乳杆菌X发生基因突变，获得可能具有目标性状的突变体。 接着，将培养液均匀涂布在高盐的高锰酸钾 - 溴化钾 - MRS培养基上。高盐环境可筛选出耐盐的菌株，而植物乳杆菌X代谢产物乳酸能使高锰酸钾 - 溴化钾 - MRS培养基褪色形成透明圈，可据此筛选产酸性能良好的菌株。 最后，置于适宜条件的恒温箱中培养，测量并计算培养基上细菌菌落D/d值。D/d值可作为筛选指标，比值越大，说明产酸性能越好，从而筛选出耐盐稳定、产酸性能良好的突变株。 （3）在高盐发酵酱醪中添加植物乳杆菌X后，相同时间内杂菌总数的增加量小于植物乳杆菌X的增加量，这说明植物乳杆菌X的加入抑制了酱醪中其他细菌的生长。因为植物乳杆菌X代谢产物乳酸可降低酱醪中的pH，而大多数细菌在酸性环境下生长繁殖会受到抑制，所以可能是植物乳杆菌X代谢产物乳酸降低酱醪中的PH，抑制了其他菌的生长繁殖。 60．（2025·黑龙江哈尔滨·二模）番茄灰霉菌严重影响番茄生产，枯草芽孢杆菌可以产生对多种病原菌具有抑制作用的蛋白质。为了探究枯草芽孢杆菌能否用于番茄灰霉病的防治，研究者进行了相关实验。回答下列问题： (1)在实验室培养微生物时，需要对所用的培养基和玻璃器皿进行灭菌，可采用的方法分别是 。 (2)用液体培养基培养枯草芽孢杆菌需要摇床振荡，目的是 。培养过程中为快速检测枯草芽孢杆菌活菌数量时，需采用 计数。 (3)在检测枯草芽孢杆菌对番茄灰霉菌的 （化学或生物）防治作用时，首先取适量的番茄灰霉菌菌液涂布于 培养基表面，再将无菌滤纸片（直径5mm）在 菌液中浸泡，然后覆盖于番茄灰霉菌培养基中心，数秒后取出滤纸片，培养皿倒置培养一段时间，测量 的大小以判定枯草芽孢杆菌防治（抑菌）作用效果。 (4)为了筛选出更高效抑制番茄灰霉病的枯草芽孢杆菌，研究者进一步设计了如下实验：应从培养皿B中选择 号菌落继续进行纯化培养。 【答案】(1)高温蒸汽灭菌、干热灭菌 (2) 增大培养液的溶氧量，使菌体与营养物质充分接触 稀释涂布平板法 (3) 生物 固体 枯草芽孢杆(菌) 抑菌圈 (4)② 【分析】统计菌落数目的方法：（1）显微镜直接计数法原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量。（2）间接计数法（活菌计数法）原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌．通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。 【详解】（1）防止杂菌污染是获得纯净的微生物培养物的关键，对制备的培养基采用高压蒸汽灭菌，对所用的玻璃器皿进行干热灭菌。 （2）枯草芽孢杆菌为好氧微生物，采用摇床震荡培养可增大培养液的溶氧量，使菌体与营养物质充分接触，有利于枯草芽孢杆菌的生长繁殖。培养过程中要抽样检测活菌数量，应该采用稀释涂布平板法，用稀释涂布平板法在培养基上看到的每一个菌落都来自一个活细胞，而显微镜直接计数法会将死亡的枯草芽孢杆菌也计算在内。 （3）利用枯草芽孢杆菌对抑制多种病原菌，属于生物防治，要检测枯草芽孢杆菌对番茄灰霉菌的抑制作用，先把适量的番茄灰霉菌菌液涂布于固体培养基上，将无菌滤纸片在培养过枯草芽孢杆菌菌液中浸泡后覆盖于固体培养基中心，若对番茄灰霉病菌有抑制作用，被覆盖的位置的番茄灰霉病菌就会被杀死，培养皿倒置培养后会出现抑菌圈，测量抑菌圈大小以判定抑菌效果强弱。 （4）B培养皿中②号的透明圈最大，而菌落直径很小，故该菌对番茄灰霉病菌的抑制作用最强，即应从培养皿B中选择②号菌落继续进行纯化培养。 61．（2025·河北衡水·二模）图1表示苹果醋的简易制作装置和制作流程。发酵工程在医药上的应用非常广泛，其中青霉素的发现和产业化生产进一步推动了发酵工程在医药领域的应用和发展。产黄青霉菌是一种广泛存在于自然界中的霉菌，是生产青霉素的重要工业菌种。工业上生产青霉素的发酵工程流程如图2所示据图回答下列问题：                    图1                                                               图2 (1)用图1装置酿酒结束后，若要直接转入果醋发酵，改变的环境条件是 。该过程进行的反应简式是 。 (2)图2整个发酵过程的中心环节是 。在制备该培养基时，除了添加必要的营养成分外，还需要将pH在灭菌 （填“前”或“后”）调至酸性。在青霉素生产过程中 都必须经过严格的灭菌。如果污染了杂菌，某些杂菌会产生 将青霉素分解掉。 (3)欲从土壤中分离出能产生纤维素酶的纤维素分解菌，可用加入 作为唯一碳源制成的选择培养基进行分离。若将样品接种到分离纤维素分解菌的培养基上，在该培养基中需要加入的特殊染料是 ，通过观察是否产生 来筛选纤维素分解菌。 (4)对产黄青霉菌进行分离纯化并计数采用了 法，其可以用来计数的原理为 。为了避免混淆，本实验纯化菌种时使用的平板需要在培养皿的 （“皿盖”或“皿底”）做好标记。然后在恒温培养箱中需培养1—2d，每隔24h统计一次菌落数目，选择菌落数目稳定时的记录作为结果，其目的是 。 【答案】(1) 通入无菌空气（氧气）、升高温度 (2) 发酵罐中发酵 前 培养基、发酵设备 分解青霉素的酶 (3) 纤维素 刚果红 透明圈 (4) 稀释涂布平板 当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌 皿底 为了防止培养时间不足导致菌落遗漏 【分析】1、人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质—培养基，用以培养、分离、鉴定、保存微生物或积累其代谢物。虽然各种培养基的配方不同，但一般都含有水、碳源（提供碳元素的物质）、氮源（提供氮元素的物质）和无机盐等营养物质。在提供上述几种主要营养物质的基础上，培养基还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及O2的需求。例如，在培养乳酸杆菌时，需要在培养基中添加维生素；在培养霉菌时，一般需要将培养基调至酸性；在培养细菌时，一般需要将培养基调至中性或弱碱性；在培养厌氧微生物时，需要提供无氧的条件。 2、发酵工程一般包括菌种的选育，扩大培养，培养基的配制、灭菌，接种，发酵，产品的分离、提纯等方面。发酵罐中发酵是发酵工程的中心环节。 【详解】（1）酿酒过程需要在无氧条件下进行，果醋发酵需要在有氧条件下发生，酿酒的适宜温度大约在25~30℃，而果醋酿造的适宜温度大约是30~35℃，因此用图1装置酿酒结束后，若要直接转入果醋发酵，改变的环境条件是通入无菌空气（氧气）、升高温度。果醋发酵过程进行的反应简式是： （2）图2整个发酵过程的中心环节是发酵罐中发酵。在制备该培养基时，除了添加必要的营养成分外，还需要将pH在灭菌前调至酸性。在青霉素生产过程中培养基、发酵设备都必须经过严格的灭菌。如果污染了杂菌，某些杂菌会产生分解青霉素的酶将青霉素分解掉。 （3）欲从土壤中分离出能产生纤维素酶的纤维素分解菌，可用加入纤维素作为唯一碳源制成的选择培养基进行分离，这样只有能分解利用纤维素的细菌才能在该培养基上生长。在分离纤维素分解菌的培养基中需要加入的特殊染料是刚果红。刚果红能与纤维素形成红色复合物，当纤维素被纤维素酶分解后，刚果红 - 纤维素的复合物就无法形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，所以通过观察是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。 （4）产黄青霉菌进行分离纯化并计数采用了稀释涂布平板法，其可以用来计数的原理为当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。为了避免混淆，本实验纯化菌种时使用的平板需要在培养皿的皿底做好标记，原因是若在皿盖上做标记影响微生物的观察。然后在恒温培养箱中需培养1—2d，每隔24h统计一次菌落数目，选择菌落数目稳定时的记录作为结果，其目的是为了防止培养时间不足导致菌落遗漏，影响数据的准确性。 62．（2025·四川达州·二模）为了提升猪瘟病毒疫苗的效果，科研人员构建了猪瘟病毒p30蛋白基因（p30）与白喉毒素无毒突变基因（CRM197A）的融合基因表达质粒，以生产融合蛋白疫苗。图1为质粒构建、疫苗生产以及效果测试示意图。请回答下列问题： (1)完成图1的过程②需要向反应体系中加入 酶。利用PCR技术扩增p30-CRM197A融合基因时，需要向反应体系中添加的引物是 （选填图中的F1~F4）。 (2)选用大肠杆菌作为受体细胞时，一般先用 处理大肠杆菌，使其处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态。图1中培养导入重组质粒的大肠杆菌时，采用的接种方法是 。 (3)筛选时，科研人员挑选了5个菌落，提取质粒后加入BamHI、HindⅢ酶切、电泳，结果如图2： ①可初步判断 号菌落的质粒中含有p30-CRM197A融合基因。 ②p30基因和CRM197A基因 （填“含”或“不含”）BamHI和HindⅢ酶切位点，理由是 。 (4)科研人员在检测上述菌落时发现某个菌落同时含有空载质粒和融合基因表达质粒，出现此现象的可能原因有： ①有些大肠杆菌同时导入了空载质粒和融合基因表达质粒： ②导入空载质粒的大肠杆菌和导入触合基因表达质粒的大肠杆菌在接种时未分散开，导致 。 (5)为检测融合蛋白疫苗的效果，科研人员将p30蛋白、p30-CRM197A融合蛋白分别注入小鼠体内，一段时间后检测抗体含量，结果如图3所示。据此可判定融合蛋白疫苗效果更好，依据是 。 【答案】(1) DNA聚合酶 F1、F4 (2) Ca2+ 稀释涂布平板法 (3) 2、4 不含 2和4中只有两个条带（或若含有酶切位点，2和4中条带数应多于两条） (4)某个菌落中同时含有空载质粒和融合基因表达质粒 (5)（诱发机体）短时间内产生更多抗体（或作用效果快），长时间维持较高水平抗体（或持续时间长） 【分析】基因工程技术的基本步骤： （1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。 （2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。 （3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。 （4）目的基因的检测与鉴定。 【详解】（1）由图可知，图1中②过程，为DNA分子子链延伸过程，所需酶为DNA聚合酶。利用PCR技术扩增p30-CRM197A融合基因时，需选用的引物是F1和F4。 （2）选用大肠杆菌作为受体细胞时，一般先用Ca2+处理大肠杆菌，使其处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态。由图可知，图1中培养导入重组质粒的大肠杆菌时的接种方法是稀释涂布平板法。 （3）①由图1可知，构建成功的融合基因表达质粒经BamHI、Hind Ⅲ酶切含600+500+25=1125个碱基对，结合图2可知，2、4号菌落含有构建成功的融合基因表达质粒。 ②由于2和4中只有两个条带（大的一个条带为志林5900个碱基对的条带，小的一个条带为目的基因的1125个碱基对的条带），所以p30和CRM197A基因不含 BamHI、Hind Ⅲ酶切位点，若含有酶切位点，2和4中条带数应多于两条。 （4）某由图1可知，上述菌落是经稀释涂布平板法获得的，可能在涂布平板时含有不同质粒的细菌未分开，形成一个菌落，导致某个菌落中同时含有空载质粒和融合基因表达质粒。 （5）由图3可知，p30-CRM197A融合蛋白注入小鼠体内后，产生抗体快，维持高抗体量时间长，说明其作为疫苗效果较p30蛋白更好。 63．（2025·江西九江·二模）大肠杆菌常寄生于人和动物肠道内，一般情况下不会致病，但在具有某些特定毒力因子作用时具有致病性，能引起人和动物共同感染，影响畜牧业发展及人体的健康。回答下列问题。 (1)大肠杆菌在生物技术领域有着重要的应用价值。大肠杆菌细胞中的质粒可作为“分子运输车”将基因导入受体细胞，质粒适合作为载体，具有的特点有 （回答2点）；大肠杆菌因还具有 等优点（回答2点），故在发酵工程中常作为工程菌生产药物和疫苗。 (2)科研人员制备了浸泡有4种抗生素溶液的6mm圆形滤纸片，分别放置在接种有大肠杆菌培养基的不同区域，经培养后发现滤纸片附近都出现了抑菌圈，且抑菌圈直径 （填“越大”或“越小”）的抗生素，抑菌效果越明显。而在直径最大的抑菌圈边缘附近还出现了部分菌落，分析可能的原因是 （回答2点即可）。 (3)通过配置伊红—亚甲蓝琼脂培养基来鉴别大肠杆菌，生长在此培养基上的大肠杆菌菌落呈 色，并具有金属光泽。为检测某品牌的饮用矿泉水中大肠杆菌（活菌）数量是否超标，可抽取1mL矿泉水经10倍稀释后，利用 在显微镜下直接观察计数；显微镜下观察结果如图，则矿泉水中大肠杆菌的数量约为 个（注：仪器规格为1mm×1mm×0.1mm，，用图中加粗的中方格代表整个计数室内中方格大肠杆菌数的平均值）。 【答案】(1) 具有自我复制能力、有一到多个限制酶酶切位点、常具有特殊的标记基因 代谢快、繁殖快、易培养、培养成本低 (2) 越大 6mm圆形纸片上的抗生素溶液扩散范围有限；抑菌圈边缘的菌落为耐药性的大肠杆菌（其他答案合理即可） (3) 深紫 细菌计数板 3.5×1010 【分析】将含抗生素的滤纸片放到接种了大肠杆菌的平板培养基上，滤纸片周围会出现抑菌圈，在抑菌圈边缘生长的细菌可能是耐药菌。 【详解】（1）质粒具有自我复制能力、有一到多个限制酶酶切位点、常具有特殊的标记基因等特点，常作为载体，由于大肠杆菌含有质粒，且大肠杆菌具有代谢快、繁殖快、易培养、培养成本低等优点，故在发酵工程中常作为工程菌生产药物和疫苗。 （2）抑菌圈越大，说明其抑菌效果越明显，由于部分菌体出现了基因突变，导致其耐药性的出现，同时可能抗生素扩散范围有限，导致抑菌圈边缘附近出现了部分菌落。 （3）利用红—亚甲蓝培养基鉴定大肠杆菌，出现深紫色菌落，且菌落具有金属光泽。利用显微镜直接计数时，可在细菌计数板上在显微镜下直接计数。图示计数板为25×16规格，中格中又14个菌，所以1L培养液含有14×25×10×103÷0.1×103=3.5×1010个菌体。 64．（2025·天津河西·二模）酿酒酵母是重要的发酵菌种，广泛应用于酿酒、食品加工及生物燃料生产等，研究人员对酿酒酵母菌株的生活条件进行分析研究，以提高发酵产物的产量。 (1)对于酵母菌的培养，比较适合它的培养基为 （A．马铃薯蔗糖培养基B．MS培养基C．LB培养基D．牛肉汤培养基），除了要选择合适的培养基成分外，还要考虑培养基中营养物质的 。 (2)发酵过程中要测定酵母菌的繁殖速度，可用 平板法对酵母菌进行计数。将培养到某一时期的培养液制备成1×105倍稀释的稀释液，每次取0.1mL进行涂布分离，三个培养皿生长的菌落数依次为35个、32个、29个，则培养液中的酵母菌数量为个 /mL。在恒温培养箱培养时，培养皿的放置方式如图 （填“a”或“b”）。    (3)该酵母菌的发酵食品也会因为发酵时间的长短、条件和底物不同，而形成不同的代谢产物，使发酵食品的风味发生变化。酿酒时会因为发酵液放置过久等原因，导致出现酸味，可能是因为产生了 （填物质）。 (4)某研究小组从葡萄皮上成功分离出某品种的酵母菌后，取等量菌液分别接种于3个盛有等量液体培养基的锥形瓶中，并分别置于转速为150r/min、200r/min、250r/min的摇床上培养，检测结果如图甲所示，摇床转速为250r/min的酵母菌种群密度最大的原因是摇床转速越高， ，酵母菌代谢旺盛，增殖快。小组同学继续用分离出的酵母菌进行果酒的发酵，发酵产物酒精可用 溶液检验。    【答案】(1) A 浓度和比例(配比) (2) 稀释涂布 3.2×107 a (3)醋酸 (4) 提供的氧气越多 重铬酸钾 【分析】微生物培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养物质。不同的微生物需要不同的培养基成分，因此培养基的种类繁多，可以根据不同的需求进行配制。一般来说，培养基的成分应该能够满足微生物的基本营养需求，并且不会对微生物造成伤害。在配制培养基时，需要注意成分的比例和浓度，以及培养基的pH值和灭菌处理等细节。 【详解】（1）酵母菌主要以糖类作为底物进行呼吸作用产生酒精，因此比较适合的培养为以糖类为碳源的培养基，即A马铃薯蔗糖培养基。除了要选择合适的培养基成分外，还要考虑培养基中营养物质的浓度和比例，以确保微生物能正常生存和发酵产品的品质。 （2）对酵母菌进行计数，可用稀释涂布平板法接种，统计培养基上的菌落数来进行计数。将培养到某一时期的培养液制备成1×105倍稀释的稀释液，每次取0.1mL进行涂布分离，三个培养皿生长的菌落数依次为35个、32个、29个，则培养液中的酵母菌数量为（35+32+29）÷3÷0.1×105=3.2×107个/mL。利用培养皿培养微生物时，需要将培养皿倒置培养，即a所示状况。 （3）酿酒时会因为发酵液放置过久等原因，导致出现酸味，可能是因为混入了醋酸菌将酒精分解产生了醋酸。 （4）摇床转速越高，提供的氧气越充足，酵母菌繁殖的速度和总量越高。酒精与酸性重铬酸钾反应形成灰绿色，因此发酵产物酒精可用重铬酸钾溶液检验。 65．（2025·山西太原·二模）厚壳贻贝新型抗菌肽具有广谱抗菌性和独特的杀菌机制，使细菌难以产生耐药性。科研人员通过构建高效表达新型抗菌肽的枯草芽孢杆菌，并优化发酵工艺等来提高抗菌肽的产量，部分过程如下图所示。请回答下列问题：    (1)要想得到活性强、结构稳定的新型抗菌肽，需要依据其功能设计结构，最终完成过程①。该思路运用了 工程的基本原理。 (2)为提高抗菌肽的产量，在过程②中使用不同碳源的培养基培养枯草芽孢杆菌，筛选出最优碳源葡萄糖，该碳源的作用是 （答出两点）。 (3)过程③用Ca2＋处理枯草芽孢杆菌，目的是 。 (4)过程④中要监测发酵罐中枯草芽孢杆菌的数量，并绘制其生长曲线，可采用的计数方法有 。发酵罐中枯草芽孢杆菌繁殖多代后，抗菌肽的产量大大下降，从菌种角度分析可能的原因是 （答出两点）。 【答案】(1)蛋白质 (2)为细菌的生命活动提供能量、构成细胞结构 (3)使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态 (4) 稀释涂布平板法（显微镜直接计数） 抗菌肽基因发生突变；杂菌污染等 【分析】1、可通过平板划线法或稀释涂布平板法分离相关菌株，获得纯培养物。 2、微生物培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。 【详解】（1）题目中提到依据抗菌肽功能设计结构，最终完成基因改造。 蛋白质工程的基本思路就是从预期的蛋白质功能出发，设计预期的蛋白质结构，推测应有的氨基酸序列，找到相对应的脱氧核苷酸序列（基因），所以这里运用了蛋白质工程的基本原理。 （2）碳源在微生物培养中有重要作用。 一方面，糖类等碳源物质通过细胞呼吸等代谢过程为细菌的生命活动提供能量；另一方面，碳源也是构成细胞结构物质的重要原料，比如参与合成细胞膜、细胞壁等成分。 （3）用Ca²⁺处理枯草芽孢杆菌是基因工程中导入目的基因前的常见操作。 其目的是使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态，即感受态，便于重组表达载体DNA分子进入细胞。 （4）计数微生物数量的方法有稀释涂布平板法（通过统计平板上的菌落数来推算菌液中的活菌数）和显微镜直接计数（利用特定的计数板在显微镜下直接数细胞数目）等。从菌种角度分析，抗菌肽产量大大下降可能是因为抗菌肽基因发生突变，导致基因表达的产物抗菌肽出现异常；也可能是在繁殖多代过程中出现了杂菌污染，杂菌与枯草芽孢杆菌竞争营养物质等资源，影响了枯草芽孢杆菌的生长和抗菌肽的合成与分泌。 66．（2025·贵州铜仁·二模）豆豉作为贵州传统调味品“老干妈辣酱”的核心原料之一，其味道鲜美，是因为含有谷氨酸。传统工艺制备豆豉需要将大豆通过米曲霉发酵，但是谷氨酸的产量较低；而现代生产中通过基因工程改良米曲霉菌株（如菌株JMR1），使其谷氨酸合成酶基因表达量提升3.2倍，显著提高了谷氨酸的含量。请回答以下有关问题： (1)与醋酸菌相比，米曲霉在细胞结构上的主要区别是 。 (2)菌种扩大培养时，培养基需通过 法灭菌；待培养基冷却到！50℃左右时开始倒平板，待培养基冷却凝固后，将培养皿倒过来放置，原因是 。接种前需随机选取灭菌后的平板置于恒温培养箱中培养一段时间，目的是 。 (3)若生产中需要通过基因工程获得改良的米曲霉菌株，通常需要完成4个步骤：目的基因的筛选与获取→ →将目的基因导入受体细胞→目的基因的检测与鉴定。 (4)请你设计一个实验验证改良后的米曲霉菌株是否具有高产谷氨酸的能力，写出简要的实验思路 。 【答案】(1)米曲霉有以核膜为界限的细胞核 (2) 高压蒸汽灭菌/湿热灭菌 防止培养基的水分过快地蒸发/防止皿盖上的水珠滴落到培养基表面造成污染 检测培养基灭菌是否合格 (3)基因表达载体的构建 (4)将改良过的米曲霉菌株和未改良的米曲霉菌株分别接种到相同的培养液中，在相同且适宜的环境条件下培养一段时间后，检测培养液中的谷氨酸含量 【分析】制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的操作顺序为计算、称量、溶化（注意：要不断用玻璃棒搅拌，防止琼脂糊底而导致烧杯破裂）、灭菌、倒平板。 【详解】（1）醋酸菌是原核生物，米曲霉是真核生物。真核生物与原核生物在细胞结构上的主要区别是米曲霉有以核膜为界限的细胞核； （2）培养基常用高压蒸汽灭菌法灭菌；待培养基冷却凝固后，将培养皿倒过来放置，目的是防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染、防止培养基的水分过快地蒸发；接种前需随机选取灭菌后的平板置于恒温培养箱中培养一段时间，目的是检测培养基是否被污染或检测培养基灭菌是否合格。若培养基上有菌落出现，说明培养基被污染，不能用于接种实验； （3）基因工程的基本操作程序主要包括四个步骤：目的基因的筛选与获取→基因表达载体的构建→将目的基因导入受体细胞→目的基因的检测与鉴定； （4）实验目的：验证改良后的米曲霉菌株是否具有高产谷氨酸的能力。自变量：米曲霉菌株是否改良。因变量：产谷氨酸的能力。实验思路：将改良过的米曲霉菌株和未改良的米曲霉菌株分别接种到相同的培养液中，在相同且适宜的环境条件下培养一段时间后，检测培养液中的谷氨酸含量。改良后的米曲霉菌株发酵液中谷氨酸含量明显高于未改良的米曲霉菌株发酵液中谷氨酸的含量，则说明改良后的米曲霉菌株具有高产谷氨酸的能力。 试卷第1页，共3页 2 / 2 学科网（北京）股份有限公司 学科网（北京）股份有限公司 学科网（北京）股份有限公司 $$