3.2基因工程的基本操作程序期末复习知识清单-2024-2025学年高二下学期生物人教版选择性必修3

1. 培育转基因抗虫棉主要需要四个步骤：目的基因的筛选与获取、基因表达载体的构建、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定。 2. 目的基因是指用于改变受体细胞性状或获得预期表达产物等的基因。 3. 基因工程是定向变异。 4. 获取目的基因的方法主要是：基因文库法、PCR法、化学合成法。 5. 引物是一小段能与DNA母链的一段碱基序列互补配对的短单链核酸，用于PCR的引物长度通常为20-30个核苷酸。 6. 引物的作用是使DNA聚合酶能够从引物的3’端开始连接脱氧核苷酸。 7. 引物具有特异性，可以与模板链进行特异性结合，引物与待扩增靶DNA分子的其他序列存在多个碱基的同源序列会导致引物与靶基因配对不精确。 8. 引物过短，特异性不强；两条引物不能有连续4个碱基的互补配对，容易引物之间形成双链；一条引物自身不能有大于4bp的反向重复序列或者自身互补序列，容易自身配对形成发夹结构。 9. PRC的过程包含高温变性、低温复性、中温延伸。 10. PCR复性2个引物分别与2条链结合。 11. PCR反应体系需要：DNA母链（模板）、dNTPs（原料+供能）、耐高温的DNA聚合酶、人工合成的引物、高温、Mg2+（激活耐高温聚合酶的活性）、缓冲液（维持反应体系的PH）。 12. 变性温度一般是超过90℃（80℃-100℃），需要30s，G+C越多，变性温度越高；复性温度通常50℃左右，氢键越多，复性温度越高，复兴需要30s； 13. PCR如何尽可能让引物与模板DNA结合？①引物需要过量 ②引物不易过长 14. 延伸温度为72℃（Taq DNA聚合酶最适温度），延伸时间1min。 15. 退火温度高，特异性强；退火温度低，扩增效率高。 16. 引物修饰部位应该设计在5’端，比如在5’端插入酶切位点、引入启动子序列、插入突变、缺失突变序列等。 17. 基因文库适合基因序列未知、PCR使用需要已知目的基因的完整序列或至少已知目的基因两端的部分序列。化学合成法需已知目的基因的完整序列，这种方法一般成本高、有出错的概率、适合于序列较短的基因。 18. 基因文库包括基因组文库、cDNA文库，cDNA文库不包含内含子、启动子和终止子，cDNA文库包含着细胞或组织在特定发育阶段所表达蛋白质的编码基因。 19. cDNA文库提取的目的基因可以在原核中表达，基因组文库提取的目的基因有内含子无法直接在原核中表达，因为原核生物DNA中不含有内含子。 20. 基因表达载体构建的原因：直接将生物DNA导入受体细胞，针对性差，无法确定目的基因是否导入；导入后容易被分解；游离的DNA片段无法随着细胞分裂进行复制，导致子代不含目的基因；目的基因缺少表达元件，如启动子、终止子等，无法直接表达。 21. 表达载体由哪些元件组成：复制原点、标记基因、多个酶切位点、启动子、终止子。 22. 标记基因便于重组DNA分子的筛选，类型一般有：抗生素的抗性基因、荧光蛋白基因、生化标记基因、营养缺陷型基因。 23. 目的基因和表达载体需要用相同限制酶（也可以用同尾酶）进行酶切，能产生相同的末端，相同的末端互补配对。 24. 双酶切优点：利于载体与目的基因正确结合，避免反向连接和自身环化。 25. 载体的类型：表达载体（复制原点、表达元件、酶切位点、标记基因）和克隆载体（复制原点、酶切位点、标记基因）。 26. 动物细胞可以将重组载体通过显微注射方式导入受精卵。 27. 农杆菌转化法是目前植物转基因技术中常用的方法。 28. 我国科学家创建了花粉管通道法，将含有目的基因的溶液通过花粉管注入到子房内。 29. 目的基因导入原核细胞处理方法Ca2+处理法，Ca2+处理增加细菌细胞膜的通透性，吸收周围环境中的DNA分子。 30. 目的基因的检测包括分子水平的PCR技术、DNA分子杂交、RT-PCR(检测目的基因表达的mRNA)、抗原-抗体杂交；个体水平是否产生新性状。 31. 电泳的原理：DNA分子具有可解离的基团，在一定的PH下，这些基团可以带上正电荷或负电荷，在电场的作用下，这些带电分子会向着与它所带电荷相反的电极移动。 32. PCR的产物一般通过琼脂糖凝胶电泳来鉴定，DNA分子的迁移速率与凝胶的浓度、DNA分子的大小和构象等有关；DNA分子越小迁移的速率越快，离加样孔越远。 学科网（北京）股份有限公司 $$