专题5 生物技术与工程-【一本】高考生物真题分类

流动：在稻田里施无机肥，干预了农田生态系统 在林下自我更新困难，在天然红树林下也无法 的物质循环过程。(3)仅从群落垂直结构的角度 定居，目前没有表现出入侵性)(4)上层种植 审视，热带雨林“结构复杂”具体表现在植物在垂 无瓣海桑，中层种植秋茄，下层为老鼠筋形成多 直方向上分层较多，其下木层和灌木层还可以再 层结构群落 分2~3个层次：热带雨林动物种类丰富，但每种 【解析】(1)随着时间的推移，一个群落被另一个 动物个体数量不多，具体原因见答案。 群落代替的过程，叫作群落演替。生物多样性 4【答案】(1)群落演替间接(2)无瓣海桑的树 的间接价值主要体现在调节生态系统的功能等 冠层覆盖度较高，互花米草吸收的光能较少（或 方面，故题述红树林的作用体现了生物多样性 随着无瓣海桑树冠层郁闭度增加，互花米草光 的间接价值。(2)由题中表格可知，随无瓣海桑 合作用下降)(3)赞同，无瓣海桑幼苗在较高 群落林龄增加(316年)，群落高度增加，林冠 冠层郁闭度下可以生长，且生长速率快，可能会 层郁闭度逐渐增加，而林下互花米草密度逐渐 快速占领滩涂，影响天然红树林植物的定居和 降低，故互花米草因缺少光照使光合作用减弱 扩张，表现出潜在的人侵性（不赞同，无瓣海桑 而消退 专题五 生物技术与工程 基础卷 过程。 2【答案】(1)水稻胚乳中特异表达的基因的终 1【答案】(1)外植体过滤(2)扩大 DNA合 成抑制剂微生物侵害(3)丙将细胞培养 止转录过程HindⅢEcoR I(2)农杆菌 转化r2HN基因是否转录出了mRNA抗 至稳定期（即停止生长时期），一定时间后，通过 原一抗体杂交(3)14遗传性状稳定 分离提纯获得大量X(4)器官相关基因组 (4)体液细胞(5)成本低、生物安全性较高 成基因表达过程基因工程和发酵 【解析】(1)根据题意可知，若使r2HN仅在水稻 【解析】(1)植物体的器官和组织、细胞都可以作 胚乳表达，GP(启动子)应为水稻胚乳中特异表 为外植体，经脱分化形成愈伤组织，将愈伤组织 达的基因的启动子。NOs为终止子，其作用为 进行振荡培养，使其分散成小的细胞团或单细 终止转录过程。GtP内部含有KpnI的酶切位 胞，然后用造当孔径的筛网过滤，除去大的细胞 点，用KpnI酶切会破坏启动子，Nos下游含有 团和残渣，再离心除去小的残渣，得到单细胞悬 SacI的酶切位，点，用SacI酶切会使重组基因 浮液。(2)对分离获得的单细胞进行扩大培养， 表达载体缺失终止子，故构建基因表达载体时， 并通过添加DNA合成抑制剂或营养缺陷培养 可选择限制酶HindⅢ和EcoRI对r2HN基因 方法获取细胞周期同步、遗传和代谢稳定、来源 与戟体进行酶切。(2)水稻是单子叶植物，可用 单一的细胞群。将微生物菌体或其产物作为诱 农杆菌转化法将r2HN基因导入水稻愈伤组 导子加入培养基中，模拟了微生物侵害的胁迫。 织。为检测r2HN基因表达情况，可用PCR技 (3)若X只在细胞生长停止后才能合成，则图丙 术检测r2HN基因是否转录出mRNA,若要检 符合，根据该图所示的关系，要获得大量X可将 测r2HN基因是否翻译出r2HN蛋白，可用抗 细胞培养至稳定期（即停止生长时期），一定时 原一抗体杂交技术。(3)选择单一位点插入目 间后，通过分离提纯获得大量X。(4)由题意可 的基因的植株（用10表示）进行自交一代，根据 知，多种次生代谢产物在根部合成与积累，所以 分离定律，r2HN纯合子植株(11)占1/4，无 为方便进行次生代谢产物的收集，可以通过器 r2HN基因的纯合子植株(00)占14，杂合子植 官培养替代细胞悬浮培养生产次生代谢产物。 株(10)占1/2。由于纯合子自交后代不发生性 要大量获得次生代谢产物可以通过基因工程， 状分离，遗传性状稳定，所以选择纯合子进行后 将相关基因转入酵母菌体内，然后通过发酵工 续研究。(4)通过体液免疫，机体可产生较多相 程获得，基因工程的前提是要了解生物体合成 应抗体，通过细胞免疫，机体可产生较多细胞毒 某次生代谢产物的相关基因组成和基因表达 性T细胞。据题图可知，实验组的抗体和 489◆ CD8T细胞（细胞毒性T细胞）明显高于对照 两个或多个细菌连在一起时，平板上观察到的 组，因此获得的2HN疫苗能够成功激活鸡的 只是一个菌落(2)5×103(3)杀灭涂布器上 体液免疫和细胞免疫。(5)利用水稻作为生物 的杂菌，防止杂菌污染防止涂布器温度过高 反应器生产r2HN疫苗，有生产成本低、生物安 杀死平板上的目标菌(4)A相同处理时间 全性较高、提取和处理目标产物简易等优点。 内，活菌减少量最多：活菌减少量相同时，处理 3.【答案】(1)负反馈调节赖氨酸类似物 时间最短(5)紫黑 (2)①序列数据库②融合③受体细胞激 【解析】(1)显微镜直接计数法统计的结果一般 活④桑葚胚或囊胚⑤转基因牛胚胎成纤维 是活菌数和死菌数的总和，而菌落计数法中当 细胞DNA酶模板目的基因与含有乳腺 两个或多个细菌连在一起时，平板上观察到的 特异性启动子的相应载体连接，只能在乳腺细 只是一个菌落，故显微镜直接计数法测得的细 胞中特异表达 菌数量多于菌落计数法。(2)从细菌原液中取 【解析】(1)植物细胞合成的赖氨酸达到一定浓 1ml加入无菌水中得到10mL稀释菌液，相当 度时，能反过来抑制合成过程中两种关键酶的 于稀释10倍，再取200l即0.2mL涂布平板， 活性，这种导致赖氨酸含量维持在一定浓度水 生长出100个菌落，故1mL细菌原液中细菌数 平的调节方式为负反馈调节。在培养基中添加 为100÷0.2×10=5×103（个）。(3)菌落计数过 赖氨酸类似物，就能抑制普通植物细胞合成赖 程中，涂布器应先在酒精灯上灼烧，目的是杀灭 氨酸，进而导致细胞因缺乏赖氨酸而不能增殖， 涂布器上的杂菌，防止杂菌污染；然后，应待灼 而抗赖氨酸类似物的细胞突变体则能继续合成 烧后的涂布器冷却后再涂布，否则温度过高会 赖氨酸，从而正常生长。(2)①随着测序技术的 杀死菌种。(4)分析图示可知，A消毒液杀菌效 发展，人们构建了基因序列数据库，为获取富含 果最好，主要依据为相同处理时间内，活菌减少 赖氨酸的酪蛋白基因（目的基因），可通过检索 量最多；活菌减少量相同时，处理时间最短。 序列数据库获取其编码序列，用化学合成法制 (5)大肠杆菌在伊红美蓝培养基上生长的菌落 备得到。②将表达载体包襄到磷脂等构成的脂 呈紫黑色 质体内进行转化的方法利用了膜的流动性原 易混易错选择培养基与鉴别培养基的比较 理，故脂质体需与BEF膜发生融合。③转基因 种类 原理 用途 举例 的BEF是高度分化的细胞，不能发育成完整的 个体，需要借助去核卵母细胞作为受体细胞进 依据某些微 从众多微 加入青霉 行细胞核移植才能获得转基因动物。一般用电 生物对某些 选择 生物中分 素分离得 融合法将两细胞融合，电融合涂了促进细胞融 物质或环境 培养基 离出所需 到酵母菌 合，还能激活重组细胞发育。④为了提高移植 条件的嗜好 的微生物 和霉菌 后胚胎的发育率和妊娠率，在实践中通常用发 抗性而设计 育到桑葚胚或囊胚阶段的胚胎进行移植。⑤阳 依据微生物 性对照是指能检测到目的基因的对照，题中应 产生的某种 该利用转基因牛胚胎成纤雏细胞作为阳性对 代谢产物与 照。提取总RNA时为了避免DNA污染，需要 鉴别 用伊红美 培养基中的 鉴别不同 对总RNA进行DNA酶处理。提取的总RNA 蓝培养基 培养 特定试剂或 种类的微 经逆转录形成cDNA后需利用特定引物扩增目 鉴别大肠 基 化学药品反 生物 的基因片段，此过程中cDNA为PCR的模板。 杆菌 应，产生明显 由于目的基因是与含有乳腺特异性启动子的相 的特征变化 应载体连接的，因此目的基因只能在转基因牛 而设计 乳腺细胞中特异表达 基础卷2 2【答案】(1)石油蛋白质、核酸(2)N。·2 1【答案】(1)显微镜直接计数法统计的结果一般 (3)将等量的A、B菌株分别接种在平板I、Ⅱ的 是活菌数和死菌数的总和：而菌落计数法中当 甲、乙两孔中，置于相同且适宜的条件下培养一 4490 段时间后，观察并比较平板I和Ⅱ上A、B周围 各种细胞的潜能。(3)研究接种到试管苗上的 透明圈的大小(4)A与菌株B相比，菌株A 根瘤菌是否具有固氨能力，自变量是根瘤菌的 分解石油的能力强，并且能在无氮源的培养基 有无，因变量是甲、乙两组试管苗的生长状况。 上分解石油，菌株B无法在无氨源的培养基上 因此甲组中滴加根瘤菌首液，让试管苗长出根 分解石油 瘤后，可利用不含氨源的培养液分别培养甲、乙 【解析】(1)石油主要是碳氢化合物。根据培养 两组试管苗，观察其生长状况。若接种到试管 基I和Ⅱ的配方可知，其中的碳源为石油。生 苗上的根瘤菌具有固氮能力，则在不含氮源的 物大分子主要有三类：多糖、蛋白质、核酸，其中 培养液中，甲组试管苗因接种根瘤菌能够固氨 含有N元素的生物大分子为蛋白质、核酸。因 而生长状况好于乙组。(4)微生物肥料利用了 此，氨源提供的氨在生物体内主要参与合成蛋 微生物在代谢过程中产生的有机酸、生物活性 白质、核酸等生物大分子。(2)在资源和空间条 物质等来增进土壤肥力、改良土壤结构、促进植 件不受限制的阶段，种群呈现“」”形增长。因此 株生长，有的微生物肥料还可以抑制土壤中病 最初接种N。个A细菌，繁殖刀代后细菌数量 原微生物的生长，从而减少病害的发生等。 为N。·2。(3)石油本身呈现黑色或者褐红 4.【答案】(1)便于筛选重组DNA分子双分子层 色，在培养基上被分解后，形成透明圈，故可以 中(2)核酸和蛋白质(3)胰蛋白酶或胶原蛋 根据菌株周国产生透明圈的大小判断A、B菌株 白CO2培养箱(4)克隆化抗原一抗体杂交 分解石油能力的大小。根据题千信息，平板I 细胞培养液(5)抗体一药物偶联物(ADC) 和平板Ⅱ中均有甲、乙两孔，可以接种菌株A和 【解析】(1)重组质粒中的标记基因是用来筛选 菌株B,在写实验思路时，应写清楚自变量设置 重组DNA分子的。质粒(DNA)是水溶性的， 围变量的观测指标等信息。实验思路详见答 需包在脂质体双分子层中。(2)病泰没有细胞 案。(4)由题中表格信息可知，在有氨源的平板 结构，一般由核酸和蛋白质组成。(3)制备杂交 I中菌株A的透明圈大于菌株B的，说明菌株 瘤细胞时，需取已免疫的小鼠脾组织，并用胰蛋 A降解石油能力强；在无氮源的平板Ⅱ中菌株 白酶或胶原蛋白酶处理，制成细胞悬液，在含有 A有透明圈，说明其能在无氮源的条件下降解 混合气体的CO2培养箱中培养，离心收集B淋 石油，而菌株B无透明图，说明其在无氮源的条 巴细胞，再与骨髓瘤细胞进行融合。(4)用选择 件下不能降解石油，现有一贫氮且被石油污染 性培养基对融合后的细胞进行筛选，获得杂交 的土壤，说明其氨元素含量少，因此治理石油污 瘤细胞，将其接种到96孔板上进行克隆化培 染应该选择菌株A,而不选择菌株B。 养。用抗原一抗体杂交技术检测每孔中的抗 3【答案】(1)由一个根瘤菌繁殖所获得的根瘤菌 体，筛选既能产生N蛋白胞外段抗体，又能大量 群体(2)脱分化再分化细胞经分裂和分 增殖的单克隆杂交璃细胞株，经体外扩大培养， 化后，仍然具有产生完整生物体或分化成其他 从细胞培养液中提取单克隆抗体。(5)利用N 各种细胞的潜能(3)不含氨源分离得到的 蛋白胞外段抗体与药物结合，形成抗体一药物 根瘤菌具有周氮能力(4)增进土壤肥力，改良 偶联物(ADC),实现特异性治疗。 土壤结构 拔高卷] 【解析】(1)纯培养物是指由单一个体繁殖所获 1【答案】(1)菌T能够产生纤维索酶，纤维素酶可 得的微生物群体。(2)脱分化是指已经分化的 将纤维素分解(2)为酵母菌蛋白质、核酸、磷 细胞失去其特有的结构和功能，转变成未分化 脂等的合成提供原料把灭菌锅内原有的冷空 细胞，进而形成不定形的愈伤组织的过程：再分 气排出：灭菌时要在一定的温度和压力下维持 化是指愈伤组织重新分化成芽、根等器官的过 一定的时间(3)为酵母菌进行无氧呼吸产生 程，因此①表示的过程是脱分化，②表示的过程 乙醇创造无氧条件乙醇发酵有C)2产生，拧 是再分化。细胞的全能性是指细胞经分裂和分 松瓶盖可以放出C),避免因瓶内气压过大引 化后，仍然具有产生完整生物体或分化成其他 起危险酸性重铬酸钾(4)葡萄糖节约粮 4491 食，实现了废弃物再利用 ·审题指导 【解析】(1)菌T能将秸秆中的纤维素大量分解， (3)根据题目要求，需要将S基因插入启动子 说明菌T能产生分解纤维素的酶。酶具有高效 和终止子之间，为了定向插入，则需选用两种 性，可以在一段时间内将纤维素大量分解。 限制酶，Tⅰ质粒启动子和终止子之间具有 (2)蛋白质、核酸、磷脂等都含有氮元素，因此氮 XbaI、Bam H I、HindⅢ、EcoRI四种酶切 源可用于合成蛋白质、核酸、磷脂等化合物。高 位点，对照S基因两侧酶切位点，由于Bam H I 压蒸汽灭菌的注意事项：待灭菌的物品放置不 在S基因内部也存在酶切位点，因此不能选 宜过紧，否则影响灭菌效果：必须将冷空气充分 用：由于EcoR I在S基因两侧均有酶切位 排出，否则锅内温度达不到规定温度，影响灭菌 点，所以易出现S基因两侧均为EcoR I酶切 效果：灭菌时要在一定的温度和压力下维持一 末端的情况，不宜选用：所以选用XaI、 定的时间等。(3)适宜条件下，拧紧瓶盖是为了 HindⅢ可以满足实验要求。 制造无氧环境，让酵母菌进行无氧呼吸产生乙 醇。但是酵母菌无氧呼吸产生乙醇的同时还会 【解析】(1)假设不甜植株的基因型为AAbb和 产生C)2,所以要适时拧松瓶盖排出CO2,以防 Aabb,甲为纯合不甜品系，其基因型为AAbb, 止出现发酵瓶爆裂等情况。检测乙醇用酸性的 根据实验一结果可推得乙的基因型为aabb,丙 重铬酸钾溶液，若溶液由橙色变成灰绿色，则证 的基因型为AABB,乙、丙杂交，F2中基因型有 明有乙醇产生。(4)收集的淋洗液中的葡萄糖 3×3=9种，故F2中表现为甜的植株基因型有 可以为酵母菌生产乙醇提供原料。与以粮食为 7种。若用乙X丙中F2不甜的植株进行自交， 原料生产乙醇相比，利用作物秸秆生产乙醇能 F3中不甜的概率为13十23×3/4=5/6，故F 够节约粮食，降低生产成本，还可以实现对废弃 中甜：不甜比例为1：5。(2)不甜植株的基因 物的再利用，减少环境污染。 型为AAbb和Aabb,只有a存在或B存在时表 2.【答案】(1)7aabb1：5(2)①③ 现为甜，A与B同时存在时表现为甜，故选① (3)XbaI和HindⅢ(4)将目的基因转入受 ③。(3)为了成功构建重组表达载体，需要不破 体细胞(5)诱变育种、单倍体育种 坏载体关键结构和目的基因，同时确保目的基 ·审题指导 因插入载体中方向正确，因此最好选用XI、 (1)甲、乙、丙均为纯合子，根据乙和丙杂交产 HindⅢ酶切割S基因的cDNA和载体。(4)用 生的F2的表型及比例为甜：不甜=13：3， 农杆菌侵染品系甲叶片外植体，可以通过农杆 可推知该性状由两对等位基因决定，且F,基 菌的转化作用，使目的基因进入植物细胞。 因型为AaBh,假设不甜植株的基因型为 (5)除了题中所示的杂交育种和基因工程育种， AAbb和Aabb,F2中甜植株的基因型为 能获得高甜度品系，同时保持甲的其他优良性 AB或aa_-。则甲品系植株的基因型为 状的育种方法还有单倍体育种、诱变育种。 AAbb,结合前两组杂交实验结果，推知乙品 3.【答案】(1)低256 GTTT CAAT(2)卡那 系植株基因型为aabb,丙品系植株基因型为 霉素SacI④(3)1/4 AABB。若用乙X丙中F2不甜的植株进行自 【解析】(1)用PCR技术扩增目标基因时，所用 交，F:性状分离比计算过程如下图所示： 的引物越短，引物与非目标序列碱基互补配对 F,1/3AAbb 2/3 Aabb 的概率越高，引物特异性越低。若用BsaI酶 切大豆基因组DNA,产生的黏性末端及末端的 ⑧ ☒ 部分序列为 1/3AAbb 2/3(1/4 AAbb 1/2 Aabb 1/4 aabb) 5-GGTCTCN NNNN N-3 1/2 AAbb 1/3 Aabb 1/6aabb 不甜 甜 3CCAGAGNNNNN N-5 5 由于N代表任一碱基，故理论上可产生的黏性 492◆ 末端最多有4×4×4×4=256（种）。载体信息 肠杆菌不断进行细胞增殖，DNA复制过程中有 上BI酶切位，点如图所示： 可能发生碱基的缺失、增添或替换，导致相关序 列无法发挥作用，如淀粉酶编码基因M发生了 5'-ATTGTGAGACOTGAATTCAGGTCTCAGTTT -3 基因突变导致无法合成淀粉酶M,或者淀粉酶 3-TAACACTCTGGACTTAAGTCCAGAGTCAAA 编码基因M前的启动子结构异常，导致无法结 合RNA聚合酶，淀粉酶编码基因M无法表达 故载体上保留的黏性末端序列为5'-GTTT-3 (4)动物细胞培养的条件：适宜的营养条件，无 和5'CAAT-3'。(2)重组载体的T-DNA可整 菌、无毒的环境，适宜的温度、pH和渗透压，适 合到大豆细胞的DNA上，由图甲可知卡那霉素 宜的气体环境。肺类装配体形成过程中模拟的 抗性基因位于TDNA内，故使用卡那霉素可筛 是细胞增殖分化形成不同组织细胞并组装结合 选到具有该抗生素抗性的植株。由图乙可知， 的过程，没有发生细胞融合。(5)本题涉及的是 目标序列含有Bam H I、EcoR I的酶切位，点， 耐药菌MRSA,为了防止其严重危害人类健康 突变序列含有Bam H I、EoRI、SacI的酶切 探究解淀粉芽孢杆菌H抗菌肽是否对MRSA 位，点，图丙中植株②只有一种DNA片段，说明 引起的肺炎有治疗潜力。需要有构建好的 其DNA片段没有被限制酶切割（基因序列中不 MRSA感染的肺类装配体，另设置生理盐水组 含限制酶识别序列)，故可判断选用的限制酶是 作为空白对照组，万古霉素（抗MRSA的药物） SacI,植株②不含有突变序列，植株④只含有 作为药物处理对照组和用解淀粉芽孢杆菌H抗 突变序列，故纯合的突变植株是④。(3)假设突 菌肽处理作为实验组，三组对比即可得出结论。 变基因为a,则基因L成功突变的纯合植株的基 2【答案】(1)磷酸二酯键可以防止N基因上游 因型为aa,检测发现其体细胞中只有一条染色 的启动子和下游的终止子被破坏，保证V基因 体有TDNA插入，插入后具有抗生素杭性，设 能在菌株B2中表达(2)CG、A一T、U一A 相关基因用T,【表示，基因T表示具有抗性，则 (3)菌株B2基因组DNA无法扩增出目的 该植株的基因型为aaTt,其自交，子代中突变位 产物 (4)减少环境污染：实现废物利用（合理 ,点纯合且对抗生素敏感的植株(aatt)所占比例 即可) 为1/4。 【解析】(1)限制酶（限制性内切核酸酶）能识别 拔高卷2 双链DNA分子的特定核苷酸序列，并且使每一 1【答案】(1)淀粉、无机盐(2)金黄色葡萄球菌、 条链中特定部位的磷酸二酯键断开。N基因表 枯草芽孢杆菌1.73~3.45(3)淀粉酶编码基 达需要RNA聚合酶与启动子结合启动转录，还 因发生了基因突变：淀粉酶编码基因的相关启 需要终止子终止转录，在题述对应位置插入M1 动子结构异常(4)适宜的气体环境、无菌无毒 与M2片段，可以防止N基因上游的启动子和 否(5)②③④⑥ 下游的终止子在插入B1的基因组时被破坏，保 【解析】(1)培养基的基本成分应该包含水、无机 证N基因能在菌株B2中表达。(2)向导RNA 盐、碳源和氮源，若从植物根际土壤中筛选分解 中存在碱基A、G、C、U,而BI基因组DNA中存 淀粉的固氨细菌，就要选择不含氮源的培养基， 在碱基A、G、C,T,RNA与DNA互补配对时也 即只含有水、无机盐、淀粉，能够在此培养基上 遵循碱基互补配对原则，可以形成的碱基对有 生长的细菌即为能够分解淀粉的固氯细菌。 GC、CG、A一T和U一A。(3)根据题意，为 (2)从抑菌效果表可知，当抗菌肽的浓度达到 验证片段甲是否插入了细菌B1基因组，应该以 3.45g·mL1时，就能抑制金黄色葡萄球菌和 菌株B2的基因组DNA为模板进行PCR。该 枯草芽孢杆菌的繁殖，说明该抗菌肽对金黄色葡 模板没有引物P4的结合位置，若用该模板与引 萄球菌和枯草芽孢杆菌有较好的抑制效果，若要 物P3和P4进行PCR,实验结果是无法扩增出 确定其有抑菌效果的最低浓度，需在1.73 目的产物。(4)秸秆焚烧会产生浓烟和二氧化 3.45g·mL浓度区间进一步实验。(3)在成 碳等物质，造成环境污染，而利用高效降解纤雏 功构建基因工程菌A后，在传代培养过程中，大 素的细菌处理秸秆，可在一定程度上有效减少 4493 环境污染；无火灾隐患，更加安全：此外降解产 【解析】(1)细胞衰老的自由基学说认为：自由基 物中含有大量的葡萄糖，可以作为原料生产燃 产生后，即攻击和破坏细胞内各种执行正常功 料乙醇等，实现废弃物再利用。 能的生物分子。最为严重的是当自由基攻击生 3【答案】(1)降解蛋白质，使DNA与蛋白质分离 物膜的组成成分磷脂分子时，产物同样是自由 溶解某些蛋白质等杂质，析出DNA(2)PCR 基。因此放射刺激心肌细胞产生的自由基会攻 扩增人工合成(3)与RNA聚合酶识别结合 击生物膜的磷脂分子，导致放射性心肌损伤。 确保目的基因的转录（或提高目的基因的转 (2)前体mRNA是通过转录形成的，转录是在 录量)(4)HygBR(5)F3R2(6)D RNA聚合酶的催化下，以DNA的一条链为模 【解析】(1)从苏云金杆菌提取DNA时，加入蛋 白酶的作用是降解蛋白质，使DNA与蛋白质分 板合成RNA的过程。据图可知，P基因mRNA 离。预冷酒精能溶解某些蛋白质等杂质，不能 可通过翻译过程合成P蛋白，P蛋白可抑制细 溶解DNA,利用这一原理，可初步分离DNA与 胞调亡。miRNA可以和P基因mRNA结合， 蛋白质。(2)分析题图，可以发现获取目的基因 导致P基因mRNA的翻译过程受阻，P蛋白合 的方法有两个，一个是PCR扩增，另一个是人 成减少，从而促进细胞调亡。cireRNA可以和 工合成。(3)启动子是RNA聚合酶识别和结合 miRNA结合，使miRNA不能和P基因mRNA 的位点，RNA聚合酶与启动子结合后，驱动目 结合，导致P蛋白合成增多，从而抑制细胞调 的基因的转录。插入两个启动子可能是为了确 亡。可见，cireRNA和mRNA在细胞质中通过 保目的基因的转录或提高目的基因的转录量。 对miRNA的竞争性结合，调节基因表达。 (4)HygBR(潮霉素B抗性基因)在T-DNA片 (3)据图分析，miRNA表达量升高可使miRNA 段上，可与目的基因一同插入受体细胞的染色 和P基因mRNA结合增多，导致P基因mRNA 体上，故有潮雾素B抗性的棉花细胞可说明已 的翻译过程受阻，P蛋白合成减少，从而影响细 完成转化。(5)目的基因是由两段DNA序列拼 接在一起构成的，在鉴定时需选择对应目的基 胞调亡。(4)若要治疗放射性心脏损伤，需抑制 因两端序列的引物，即对应人工合成序列的引 细胞调亡。一方面，可以促进P蛋白的合成，以 物F3和对应1363一1848基因序列的引物 提高细胞中P蛋白的含量；另一方面，可以促进 R2。(6)通过改造目的基因来改造现有的抗虫 前体mRNA的合成或促进cireRNA的合成. 蛋白，属于蛋白质工程技术。 2【答案】(1)RNA聚合酶复制原点、标记基因 冲刺卷 (2)F1和R2或F2和R1a链(3)JV5融 1【答案】(1)自由基(2)RNA聚合miRNA 合蛋白不是 (3)miRNA表达量升高，导致其与P基因 【解析】(1)与启动子结合的酶是RNA聚合酶。 mRNA的结合量增加，P基因mRNA翻译合成 重组质粒中除图甲中标出的启动子、目的基因、 的P蛋白减少，从而影响细胞调亡(4)促进前 终止子之外，还需具备的结构有复制原点和标 体mRNA的合成：促进cireRNA的合成：促进 记基因等。(2)据图甲可知，引物F2和R1或 P蛋白的合成 F1和R2结合部位包含J基因的碱基序列，因 ·题图分析 此为了确定」基因是否连接到质粒中且插入方 抑制 向正确，PCR检测时所用的引物应选择F1和 X停止 跑 R2或F2和R1:J基因转录的模板链位于b链， miRNA P基因mRN△一→P蛋白一得亡 剪切 miRNA miRNA 米 启动子在左侧，即b链从左向右为3'→5'，而引 cireRNA 核1 cireRNA P基因mRNA {细胞核 物只能将子链从5'向3'方向延伸，则说明引物 P蛋白抑制细胞凋亡，miRNA与P基因 F1应与b链结合向3'方向延伸子链，引物F] mRNA结合后阻断P蛋白合成 与b链结合及引物延伸子链都遵循碱基互补配 对原则，链与b链的碱基间也遵循碱基互补配 494 对原则，因此引物F1与J基因的a链相应部分 酸序列替换缺失(2)32(3)子代全为 的序列相同。(3)条带1在抗J蛋白抗体和抗 野生型（或短毛）野生型：突变型（或短毛： V5抗体的检测结果中都出现了，说明其同时含 长毛)=1：1(4)基因突变丢失了启动子，导 有J蛋白和短肽V5,因此出现条带1证明细胞 致无法转录mRNA;逆转录没有产物，检测不出 中表达了JV5融合蛋白：重组质粒上的」基因 结果抑制毛发生长 与V5编码序列形成了融合基因，表达的只能是 【解析】(I)在F基因的编码区插入了一个DNA 融合蛋白，而抗】蛋白抗体的检测结果中出现 片段P,属于基因突变中增添碱基，故F基因产 了条带2，抗V5抗体的检测结果中未出现条带 生基因突变（或编码序列错位）。「基因转录而 2,说明条带2所检出的蛋白不是由重组质粒上 来的mRNA中提前出现终止密码子，使得翻译 的J基因表达的。 提前终止，多肽链中的氨基酸数目变少，即合成 3.【答案】(1)蔗糖将液体培养基中的蔗糖转化 的蛋白质因为缺失了氨基酸序列而丧失活性。 为葡萄糖单位时间内培养基中蔗糖的减少量 要达到此目的(mRNA提前出现终止密码子)， (或者单位时间内培养液中葡萄糖的生成量) 还可以对该基因的特定碱基进行替换和缺失。 (2)NV基因<T-DNA插人导致NV基因 (2)由题图甲可知，野生型基因和f基因都有2 部分序列缺失(3)突变体便于筛选和鉴定 个限制酶HindⅢ的识别序列，野生型基因经限 重组DNA 制酶HindⅢ酶切、电泳后能被DNA探针检测 【解析】(1)分析题表中野生型的两组实验数据 的DNA长度小于f基因经限制酶HimdⅢ酶 可知，蔗糖可以诱导NV基因的表达，产生NV 切、电泳后能被DNA探针检测的DNA长度。 酶，进而将蔗糖转化为葡萄糖。酶催化特定化 在电泳时，DNA分子越长，分子质量越大，迁移 学反应的能力称为酶活性，酶活性可用在一定 速度越慢，因此推测第1泳道中只有野生型基 条件下酶所催化某一化学反应的速率表示。 因，第2泳道中既有野生型基因，又有「基因，第 (2)从题目中可知，突变体是由TDNA随机插 3泳道中只有「基因，因此「小鼠和「杂合子对 入野生型菌株基因组DNA筛选获得的。在进 应的DNA片段分别位于第3泳道和第2泳道。 行PCR扩增时，使用的引物需要与特定的DNA (3)由题意可知，不考虑交叉互换、野生型基因 序列配对结合，才能启动DNA的扩增。野生型 用十十表示、g杂合子基因型用十g表示。若g 菌株的基因组DNA中没有T-DNA的插入，所 和f是非等位基因，f杂合子小鼠（十f十十）与 以用与VV基因配对的引物进行扩增时，可以 g小鼠（十十/gg)杂交，则子代基因型为十十十 扩增出完整的NV基因片段。而突变体由于 g和十「/十g,即子代全为野生型（或短毛）：若g TDNA的随机插入，导致VV基因的部分序列 和「是等位基因，f杂合子小鼠（十）与g小鼠 发生了缺失，使用同样的引物进行扩增时，突变 (gg)杂交，则子代基因型及比例为十g:g 体扩增片段长度就会小于野生型扩增片段长 1:1,即野生型：突变型（或短毛：长毛）=1： 度。因此若突变体扩增片段长度<野生型扩增 1。(4)RNA聚合酶和基因中的启动子结合，转 片段长度，则表明突变体构建成功。从基因序 录，加工后形成mRNA。由题图丙可知，野生型 列分析其原因是T-DNA插入导致VV基因部 基因突变成g基因后，启动子丢失，g基因无法 分序列缺失。(3)为验证NV基因的功能，应将 转录出mRNA,也无法形成cDNA,因此g小鼠 VV基因导入突变体细胞，获得转基因菌株。 泳道没有条带。由题意可知，野生型和g杂合 在构建VV基因表达载体时，需要添加新的标 子表达F蛋白，g小鼠不表达F蛋白且表现为 记基因，便于筛选和鉴定重组DNA。 长毛，因此推测F蛋白具有抑制毛发生长的 4【答案】(1)基因突变（或编码序列错位） 氨基 作用。 4495◆+习东可风肤好领生我特 2国·角度如断(2024河花卷，14分)新规疫病毒可引起家高急 3(223新江6月春，14分)赖氨腋是人体不能合成的必需氮基酸， 专题五生物技术与工程 5年D0 性败直性传染病，我国科学家将该病春相关基因改造为2HN,使 而人凳主要食物中的懒氨酸含量很低，利用生物技术可是高食物 其在水屑压乳转异表达，制备获得2HN度首，并对其免度效果进 中装氢酸含量。国答下列问题： 基础卷1限时3mn满分：的女团时n得，分馨案：P面 行了检测 ()植物闺图合成的粮氢酸达到一定浓度时，能抑解合或过程中两 可答下列问题： 种关键德的活性，导致规氯酸含量单持在一定漆度水平，这种到竹 1.(2024所江6月基，12分》植物体在干界，虫害成微生 (1)实验所用载体的部分结物及其限刻偏识别位点如 方式属于 。根据这种调节方式，在培养基申添加 物侵害等物追过程中会产生防朝物质，这类物质属于 图1所示。其中GP为自动子，若使r2HN仅在本 ,用于箱选场人工诱变的植物慧得细跑，可得到抗 次生代谢产物。次生代测产物在植物抗虫，抗树等方 稻轻乳表达，GP应为 启动子。Ns为终止子，其作 懒氨酸类似物的闲脑炎变体，通过境养获得再生植核 面发挥作用，也是药物.香料和色累等的重要来源。次生代谢产物 用为 ◆2HN基圆 (2)随着钟基因技术与动物无園工程结合和发展，2011年我国首 X的研发撞程如下： 内军不含霞体的限制酶识别位点。因此，可达择限制酶 次利用转基因和体组胞核移植找术域功培育了高产物氨酸转基因 筛达高产雁意*相程生长和产物X合成关系的痛定·发醇生产X 和 对2HN基因与载体进行脚切，用于表达载体的 隆奶牛。兆基本流程为： 问答下列闻题： 构建。 ①构建乳黎专一表达霞体。随着测序战术的发展，为获取富含额 (1》获得高产细图时，以X合量高的植物品种的普官和组织作为 Gtp Soc I I Nos 氨整的路蛋自某因《目的基因)，可通过校案 获取 ,经教分化形成意伤组织然后通过线体振荡和用一定孔 其编到序列，用化学合成法制备得到。再将获得的日的基因与含 径的莲网进行获得分散的单相型。 有乳黎特异性启动子的相应程体连接，构健出乳服专一表达载体 (2)对分离获得的单组®迹行培养，并通过数加 ②表达载体转人牛还胎成纤雄细整(BE)。将表达载体包典到磷 或苷养锌路塔养方法线取相鞋圆期同步，进传和代谢稳 图 酯等构成的翻质体内，与正F膜发生 ,表达载体最终进 定，来源单一的细围醉，为进一提高目标细胞的X含量，将微生 (2)利用 方达将2HN某因导人水届途伤闲组。为检测 人用胞核，发生转化 物菌体或其产物作为诱导子加人培养基中，该过程模教了 2HN表达情况，可通过PCR技术检测 ③核移植。将转基因的BEF作为核供体细整，从牛刚是铁取明母 的物追。 通过 技术检测是否翻详出2N蛋白， 细胞，经体外培养及去核后作为 ,将两种红胞进行电融 (3)在大现极培养高产闭监前，需了解椎物相电生长和产物合成的 《3》获得转基因植棕后，通常运择单一位点橘人用的基因的植株进 合，电融合的作用除了促进相面融合，同时尽罚了 重组细 关系，培养细胞生产次生代谢产物的慎型分为3种，如图所常 行纤究。此类植株白交一代后，2HN纯合子植妹的占比为 粒发育的作用 若X只在缃围生长停止后才雀合成，则X的合成符合图 ,选择摊合子进行后续研究的原因是 ④重组细的体外培养及轻怡移植。重饥红感体外培养至 (真甲一乙“丙”)，据该阁斯示的关系，从培养阶段及其日标角 ,植人代章毒年千宫内，直至小牛出生 度，是由我得大量X的方法： (4》制备r2HN疫西后，为研究其免校效果，对实验超鼻注行接种， ③检测。DNA水平检测：利用PCR技术，以非转基因牛耳组织潮 朝型生物候反晚相艇生长 化生代谢产物产显 对照组在射胶面溶剂。检测两组鸡体内抗新城疫病寿杭体水平和 值作为阴性对题，以 为阳性对凰，检测到转某因牛耳 特并应答的CD6T细陶（细密毒性T细能）水平，结果如图2所 组织细园中存在日的基因。RNA水平检测，从丰转基因牛乳汁中 示。拓此分析，我得的2HN烧苗能够成功藏话鹤的 免 的脱落潮电，转基因牛乳汁中的胶落潮店和转基因牛耳组织拥图 疫和 免疫。 园取总RNA,对总RNA进行 处理，以去除DNA污荣， 寻荷 博养利。 ■对明相 轻递转录形成cDNA,并以民为 一，科用特定引物扩增 口实羚烟 的基因片段。结果显示日的基因在转基因牛乳汁中的咸落闲胞内 (4)多种次生代谢产物在根军合成与积累，如人参，三叶青等药用 表达，而不在牛耳组织细鞋内表达，原因是什么？ 植物，可通过 培养替代锥是浮培养生产次生代谢产物。 2 随着基因妇测序和功能基因组学的发展，在全面了解生物体合皮 CT相 某次生代谢产物的 和 的基留上，可利 用2 出锋理月 用合成生物学的方法改造得母篱等量生物，利用 《5)利用水暂作为生物反应辈生2HN胶面的优点是 由特原调 题 工程生产植物的改生代德产物 (答出两点即可D 爱视布周整公项生物 A商，紧殖：代后辑离的数量是 (容出2点即可》， (3)为了比较AB降解石油的能力，某同学利用步骤②乐得到的 4断图·形成侧期《2如2辽中卷，10分)某抗膜蛋白治疗性抗体药 1(224全国甲载，15分)合拜使 平版1、Ⅱ进行实验，结果如表所示(“十表示有透明圈，”十”越 物研发过程中，需要表达N蛋白自外段，制餐相控的 用清寿孩有助于观少传染病的 多表示透明圈越大，·一”表示无透明图)，推测该同学的实验思 单文隆抗体，增加其对N蛋白鞋外段特异柱结合的 传播。某同学比较了3款消毒 路是 能力 藏A,B,C茶灭组菌的效果，站 1,N蛋白鬼外段抗原制备，城程如图1 透明里大小 果知图所示。国答下列问题。 差时0 黄候 草板1 卓板Ⅱ (1)该同学采用暴微镜直接计数法和菌落计数法分别测定月一样 段基内香 鞋质体病容红组装收果地染海 +++ +十 发库插拉中人整强配释我脑南增 化 品的细菌数量，发观测得的细菌数量前者大于后者，其斯因是 ++ 博1 (2)该同学从100mL细菌氟液中取1mL如人无菌水中得到 ()现有一贫氢且被石治污染的土壤，根据上表所示实验结果，治 (1)构建重组慢例毒霞粒副，益用氢卡青需素抗性基因作为标记基 10mL.稀师菌藏，再从稀释菌液中取3.涂布平板，菌落计数 理石泊污染放选用的菌殊是 ,理山是 因，日的是 。用脂爱体将 重组慢刺壶质粒与菊曲质粒导人病诗包装细胞，质粒被包在胸质 的结果为100，据比推算细葡原液中缸菌浓度为 个/ml 3,(2如3新深林喜，12分)根榴蔺与显科植物之同是互利共生关系， 体 〔填“双分子层中“或两层璃蜜分子之何”)。 (3)蒂落计数过程中，涂卷器应先在酒精灯上灼烧，冷却后再涂布。 製增菌侵人豆科植物根内可引起根容的形成，根增中的根密菌具 (2)康粒在包装润图内组装出由 组成的 均烧的目的是 ,冷却的目的是 有圆氯能力。为了寻找抗逆性强的根耀菌，某研究小组做了如下 候病毒，用慢病毒移染南枚细胞患而表达并分离，吨化、蛋白前 实验：从盐碱地生长的野生章本夏科植物中分离根密菌：选和该植 外段 (4)据图可知杀岗效果最好的清庵液是 ,判新依暴是 物的室尖为材料，酒过组饥络养获得试管苗（生根试管苗）：在实验 .N蛋白围外段单克隆杭体料备，流程如图？ (答出两点即可)。 案中樱究试管苗根收中所含显信阔的闭氯能力，何答下列同题， N街自免度鼠淋巴妇骨的植组数多种染 (5》鉴别培养基可用于反典消毒液杀火大斯杆菌的效果。大斯杆 ()从夏科植物的根嗜中分离根菌进行瑞养，可以获得苑培养 脑外佳取韩组阙飞绿清 酸合 菌在伊红美蓝培养基上生长的南落星 色， 物，此实验中的饨培养物是 起择在生 2(2022全国甲卷，15分)某同学从被石泊污染的土壤中分离得钱A (2)取豆科植物的装尖作为外植体，通过植物组织培养可以获得豆 N置白型 和书两抹可以降解石泊的能菌，在此基略上采用平板培养法比较 外反伟 科恤物的试管苗。外植体经诱导形成试脊苗的速程必外植体巴 后酸株 二者降解石油的能力，并分析两个装株的其他生理功能。 图2 实拉所用的培养基成分如下。 象伤组积巴试管苗，其中①表示的过程是 .②表 (3)用N蛋白胞外段作为抗源对小鼠进行免度后，取小眼麻组织 培养基I:K:HPO,MSO,NHNO,右油。 用 制处理，制成领煦县液，置于含有涩合气体的 示的过程是 由外植体量终获得完整的植蛛，这一 培养基Ⅱ：K:HPO,MSO,石油 中塔界，离心收集小鼠的B淋巴附粒，与骨髓宿组临进行融合。 过程说明植物细南其有全能性。细图的余能性是指 操作步骤： (4)用透择性角养基对服合后的辑胞进行第遗，疾得杂交留相胞。 ①将A,B蒂株分别接种在两瓶藏体培界嘉I中 将其接种到$孔板，进行培养。用技术检测每 (3)研究小组用上送铁得的地培养物和试管苗为材料，研究接种到 培养，得到A.B菌液： 孔中的杭体，第选疑能产生N蛋白鞋外段杭体，义能大量增殖的 试管首上的根智菌是吾具有围氨能力，其做法是将生长在培养液 ②藏体培养基1，Ⅱ中蒸加琅酯，分别制成平板1，Ⅱ， 单克隆款交情御图株，经休外扩大培养，收果 ,提取单克 中的试管苗分或甲，乙两组，甲组中滴如根墙菌菌藏，让试管苗长 修就体。 并按图中所示在早板上打甲、乙两孔 出根。然后将甲，乙两组的试管苗分别转入 的增 (5)科用N蛋白围外殿抗体与药物结合，形成 ,实现特异 口答下列问题。 秀液中培养，观察两组甘管苗的生长秋况，若甲组的生长状况好于 生治疗。 (1)实验所用培养基中作为碳蒙的成分是 培养甚中 乙组.划说明 NHO的作用是为南株的生长提供氮源，氮源在W体内可以参 (4)若实验获得一种具有良好周氨能力的根常嘴，可道过发酵工程 出传想性， 与合成 (答出2种围可)等生物大分子， 民得大量根耀菌，用于生产积帽菌配。根物商尾是一种微生物 由楼是图 (2》少骤①中，在资源和空间不受限制的阶段，若最初接种N。个 料，在农业生产中使用凝生物肥料的作用是 习东可风肤好铁生我特 货宽栏红厚时西nn清分：5分周时，n的样分，二分系家P到 杂交相合 F,表型 F:表税 3.(2D24山东卷，12分)研究发觅国L能修通过税落酸信号定径 不甜 控大豆的逆境响应。利用基因工程技术解辑基因【，可培育耐盐 甲×乙 1/4程.8/4不甜 1.(2023全国乙喜，15分)某街究小组设计了一个利用作物精杆生产 城大豆品系。在镜体上的限制刷B知1切点处桶入大豆林因L的 燃料乙醇的小型实验。其主要步豫是先将赖碎的作物粘纤堆改在 甲×再 都 a/4甜，1/A不用 向导DNA序川，将载体是入大豆担粗后，其转录产物 可引导核酸牌特并性结合基因组上的目标序列并发挥 底部有小九的托整中，境水浸湘，接种西T,培养一段时可后，再用 乙×丙 即 11/16甜，316不码 作用。载体信息，目标基两1部分序列及相关结果等 清水淋洗萄开堆清水淋选时菌T不会流失)，在装有淋洗液的丽 【实验二】别度相关基因的障选 如阁所示 中接种醇静商，进行乙醇发酵（情精发胖），实验流程如图所常。 通过对甲，乙，丙三个品系转录的mRNA分析，发凭基因S与作物 据甲：载体值县 M的附度相关 【实验三】转S基因新品系的堵育 提煮品系乙的mRNA,簿过基因重组技术，以T质粒为表达线 体，以品系甲的叶片外植体为受体，培育出转S某因的新品系 T-TAACACICIGGKTTAAGICCAGAGICAAA 养发乙 限据研究组的实验研究，可答下列问题： -X的边界序列：听华零有蔬其性从国：时的氢下有写素优件从国 (1)假设不别植棕的基因型为AA山和Ab,则乙.丙会交的月 国乙：目标华解分序州 中表现为程的植橡因置有种。品系乙基园四为 日4I序g-GICGACICT1iA1 COGAATICTIE1 DOGACXTRCACK·G 国答下列问题 若用乙X丙中F:不甜的植株进行自交，F中甜·不甜比倒 文变序网S-ICGACICIGATCCGAATICTTETCO0K元5 《1)在粉牌的粘杆中接种菌T,培养一段时同后发观菌T能够将桔 为 图丙：周时序到、W在及电体结里 杆中的纤峰素大量分解，其原因是 2》下图中，能解释(1)中杂交实验结果的代谢逢径有 00四041 BH13dA1cc3I∴ATe 6 (2》采用液体培养某培养能母菌，可以用淋洗液为原料科备培养 sel GmccET 基，培养基中还端要知人氨源等官养成分，氨的主要作月是 时物 先N气表任辅林 (容出1燕即可》。县常，可果 (1)用PCR技术从大豆基因组DNA中扩增目标基因L时，所用 用高压蒸汽灭菌法对培养基进行灭菌。在使用该方法时，为了送 的引物越短，引物特异性越 (填“高”或“低)。限制腐在 到良好的灭效果，需要柱意的事项有 切开DNA双链封，形成的单链义出末端为黏性末端，若用B￥I (答出2点即可)： 打制 特制 切大豆基因组DA,理论上可产生的愁性末痛最多有 《3)将酵每菌接种到灭莆后的培养基中，拧繁瓶盟，置于适宜雪度 种。载体信息如图甲所示，经BmI韵切后，载体上保留的整生末 下培养，发醇。粉紧原盖的主要日的是 露序列应为5 -3和5- -3. 。国是在德母菌发酵过醒中，还需适时拧松重：原 《3》如图是S琴因的dDNA和我体的限制性内切核酸两隔语。为 (2)重组发体通过农杆菌钟人大豆细胞，使用杭生常 蜂造 因是 了或功构建重组表达载体，确绿日的基国插人我体中方向正确，量 到具有该抗生素扰性的植株①④。为了整定基因编辑是否或 发能液中的乙醇可用 溶液检测 好透用 南切期S基因的DNA和载体 功，以上述抗性植株的DNA为模板，适过R扩增目标基因L, (4)本实验收第的淋洗液中的可以作为席持菌生产乙醇 溶分序列信息及可选用的附划位点如图乙所示，C食产物完全侧 的原料。与以粮食为原料发醇生产乙醇相比，本实验中乙丽生产 切后的电欲结果如图丙所示。据图可判康选用的限制南是 动于 止予 方式的优点是 ,其中吨合的突变梳株是 (填序号)， 2所+渡问距(2022潮北参，18分》“端樟中国魔，装油中国 ()实验中获得1棕基四1成功突变的纯合植橡，该植抹具有拉生 稹”，为了育好中国种，科研人员在索交育种与基因工程育种等领 素抗性，检测发现其体相能中只有1条染色体有TNA桶人 用抗生素第选这个植株的自交子代，其中突变位点纯合且对抗生 城开展了大盛的研究。二倍体作物M的品系甲有抗虫，高产等多 S因的：%A 标记精因发明原结 素敏够的植株所占比例为 ,峰违出的敏盛植楼可用于后 种优具性状，但甜度不高，为了敛良局系甲，增加其甜度，育种工 Ti语酸 续的品种达育。 作者敏了如下实验： (“)用装杆菌侵染品慕甲叶片外植体，其目的是 【实验一】遗传将性及杂交育种的研究 (5》除了题中所示的杂交育种和某因工程育种，传获得高智度品 出骨号目上 在种面货徽库中选取乙，内两个高甜度的品系，用三个纯合品系进 系，同时保持甲的其他优良性状的育种方法还有 出错原因 行杂交实险，结果如下表 (答出2点即可) 更规卡具啦公为生物 质高卷2限时：5等g:识令周对：m得9：争茶室P阳 (5)耐甲氧四林金黄色葡萄球菌RSA)是一种时药菌，严重危害 丝棉花杭病虫害能力，进行如下操件。国容下列问题 人类健康。科研人员报用MRSA感桑种类装配体建立整染模里， 苏云金杆请 1清+形式到断(225海南卷，13分)某找植物根际 来探究解淀粉芽孢杆菌H抗高其是否对MRSA引起的体炎有苗 除花恤体 促生蘭具有生物国氯，分解淀粉和邦制病第第等作用 疗潜力。以下实验材料中必备的是 (算序号)。 组阴暗养 回答下列问题： ①金黄色葡萄球菌感染的韩类装配体 分博对州血某国 (1)若从植物根尿土撑中简选分解淀粉的固氮钮黄，培养某的主要 。今徒叶制明 ②MR84盛染的韩类装配体 1与毒性有关】14与客作无美354相 誉养物质包括水和 解淀粉界孢杆葡H抗商就 农杆菌 共销春，转化 (2)现从植物製麻土填中第选出一林解淀粉芽袍杆菌1，其产生的 阁期 同 ④生理垫水 抗菌肽抑薰效果见表。据表推测孩抗菌肽对 的神刚 效果校好，若要确定其有抑南效果的最低浓度，需在 ⊙青香素（抗金黄色葡醇球茵的药物） 3540 ®万古霉素（抗RSA的药物） RI R3 感·ml.一浓度区可进一步实验。 抗南融策度（网· 2(224新课称春，12分)某研究小组将纤组素酶基因(N)辅入某种 13314赵以怀列 驱菌团》的基因组中，构建高效降解奸维素的百株(B奖)。减小组 s 人了合成序列 新试菌 5 552027.6013,06,9345138 在含有N基因的质粒中插人B1基因里的由与M2片段：再经限 E-DNA-LI 天然序列 穿根质粒 全置色黄萄保面 制南切制获得含N基因的片段甲，片段甲两餐分蛛为1与2： 联 重 枯草零名杆菌 利用CR]SPR/C9基国组编期技术将片段甲插人B1的基因组， T-NA- 禾容整形面 得到商株现.酶切位点(I一W).引物(P1一4》的结合位置.片 生：F-F3,RI一R3表家引物：T-DNA-LB表承左边界：T-DNA-RE表 段甲督换区如图所示，+表示引物+好”方向。可答下判问题。 示右边界，O表示复制原点：Kan表示卡幕霉素抗性精因：H%B表 假线脖绿 动子 示澜霉素B抗性基因 性：+“表示长菌，”一“表示末长街 (1)从苏云金杆菌提取DNA时，雷如人蛋白南，其作用是 (?》矸究人员利用解淀粉意杆菌日的淀粉南码基因M构建 N某同 厘随B1某肉 提数过程中加人体积分数为药%的衡冷 高效表达质粒载体，转人大稀杆嘴或功构建基国工程菌A。在利 月入葡株发醇生产淀粉青M过程中，传代多次后，生产条件未变， 四片物甲替换区一 诉精，其用的是 但某子代菌株不再产生淀粉爵M。分析可能的顺因是 (2)本操作中我夏日的基因的方法是 MI 〔答出两点即可)。 (3)等使质教中5为启动子，式作用是 ,影动目的基 (4》研究人员通计菲上皮干组图诱导生成韩类器官，可白组装或与 标记四 围转录：插人两个35x白动子，其目的呵能是 成熟帽围虹装成脚类装配体，如图所示。肺类装配体培养需要演 ()限制制切割的化学健是 为保证N基因能在幽 是话宜的营养，型度、溶透压、日以及 楼记中表达，在构建片段甲时，应将M1与2片段分别播人质 (4)鼠然图中穿极质貌上的Ka*和HyB两个标记基因的位 (答出两点) 粒的【和Ⅱ，Ⅲ和N麻如位点之问，原因是 登，用 基因对应的抗生素初步第选转化的棉花愈伤 等基本条件。韩类装配体形成过程中是杏运用了动物细胞聪合技 组饥。 术 (填是或“否”. (2)R15F究C9技术可以切割细菌B初基因组中与向导RNA结 (5)为检测棉花植株是否分人日的基国，提取相花植快桌色体 8 合的DNA向导RNA与B]某因里DNA互补配对可以形成的 DNA作模板，进行CR,成迷用的写引物晶和 ◆ (6)本研究果用的部分生物技术属于蛋白质工程，理由是 韩上夜千短脑 体相题 碱基对有G一C和 (3)用引物P列程P2进行PCR可险证片段甲桶人了菌1基图 (单进) 蜡植分化 简本 相，所用的模板是 :若用减模板与引物路和P4进 A,通过含有双霞粒的农杆圈转化棉花细图 行CR,实验结果是 B将苏云金杆菌：基因导人榨花细胞中表达 C将1一132基因序列改变为帆花细脑偏好帝码子的基圆序列 精药落宜A精类然B (4)与粘样装烧相比，利用高羞降解纤维素的细菌处理桔秆的优点 (答出2点即可) D用1一162合成基因序列和1363一1848天然基因序列获得 L北超养」儿北养 3.(2如24黑吉辽卷，12分)将天然丁质程改造载含有V 改流的抗虫蛋白 基因的箱用质粒（相段TDNA转移）和不含有r基 出接想！ A 因，含有TDNA的穿校质粒，其同韩入农杆商，可提 由桶每国： 染类装配体 神类装配体扫 高转化效率。组菌和帆花对密野子偏好不同，为提高圆译效率，增 题 于数两具肤出说生取 神列卷原防：的nn清分：4分时，nn保：分系家：P利 确，需法行PCR检测，若仅用一对引物，度选择图甲中的引物 口容下列问题， 。已知基同转录的模板链位于鞋，山党可知引物F1 h园目时目 牙生裂 四湖可区 .(2025广志春，10分)放射性心正相伤是由电离辐射诉导的大量C心 口自动子( 与图甲中了基因的 《填”a健”成“b链”)相应军分的序列 NA探I 口HK 肌组旅亡产生的心蓝疾病。一项新的研究表明，RNA可以 图可 /we I 时国 退过mRNA到挖P基因表达进面影响细能亡，测控机耐如图。 (3》重组质粒在受信细围内正确表达后，用抗」蛋白抗体和抗V5 DNA iRNA是细型内一种单随小分子RNA,可与mRNA肥向结合并 抗体分别检测相应蛋白是否表达以及表透水平，结果如图乙所示。 使其降解，dRNA是雅园内一种闭合环秋RNA,可见向站合 其中，出我条替！证明细形内表达了 ,条潜2所检出 I miRNA使其不能与mRNA结合，从而提高mRNN的题译水平。 的蛋自 (填“是“或“不是)由重组质粒上的」基因表 野生鞋 DNA家计wd重口白区 韩制 达的。 ×特止 3(2如24膏州客，12分)团究着用以诉肝为学一碳源的液体培养基， d鞋先的%A片段 成NA 蓝成NA一P蛋白一集验白 培养真菌A的野生图（含NV基因），突变体(VY基因突变)和转 训 切 miRNA DN银智 BiRNA cireRNA HRN 基因雀株（转入NV甚因），检调三种紫株NV解的生成与培养液 P基imgNA 中的葡装糖含量结果如表断示（表中+表示有，”一”表示无）。 (1)F基因除方案如图甲。在F抹因的篇码区插人了一个DNA 问答下列月题： 检测用菌株 改塘 NV南 菌装候（培满液中） 片段P,引屈F基因生 ,导致mRNA提前出 (1)放射数心机缃型产生的 会攻击生物赖的璃指分子， 野生壁 现蜂止密药，使得合成的蛋白凝因为领尖了 面丧失 导致放射性心服损伤。 野生整 活性。要达到此月的，还可以对该基因的特定碱基进行 (2)前体mRNA是酒过 牌以DNA的一杀時为模板 和 突变体 合成的，可被剪切成cireRNA等多种RNA,eireRNA和mRNA (2)从野生型，「秦合子和（小鼠组织中分群是取NA,用限制刷 转蒸因嫩株 在饵愿质中通过对的克争性结合，测节基因表达 HdⅢ酶切，进行琼脂精电袜，用DNA深针检测。探针的结合 同答下列问题 (3)素图分析，RNA表达量升高可影响闲园南亡，其可衡的原因 位置如图甲，检测结果如图乙，期t小鼠和f杂合子对应的DNA 《1)据表可排测 诱导了NV基因表达。V酶的作用是 片段分别位予于第袜道和第袜道。 检测NV腐 (3)g小氟是长毛隐性突变体(g),表里与小鼠相间，【基因和g (4)鼠据以上信息，除了减少mRNA的表达之外，试提出一个治 活性时，香陶定的指标是 林因位于同一条常染色体上。杂合子小限与：小鼠杂交，若杂交 (答指1点即可) 结果是 ,期和是非等位基因：若然交结果 疗做射性心驻相伤的新思路： (2)表中突变体由TDNA随机辅人野生型菌株基因组DNA裤意 ,题g和是等位某因。《生： 获得。从导生西与突变体中分判提取基因组DNA作为模服，用 不考虑交又互换：野生型基因用十十表示：g杂合子基因显用+g 2,角厘国所(2023山煮春，10分)释研人员构建了可表达 (填TDNA“或“NV基因)配对的引物进行FCR扩 表示) V5融合蛋白的重组质乾并进行了检测，该质粒的部分 增。若突度体扩增片段长度 (填>”=”或<”)野生型 (4)确定g和为等位基因后，为进一步鉴定g基因，分别是取野 结构如甲所示，其中刊序列表达标签短散V5。 扩增片段长度，则表明突变体构建成功，从基因序列分析其原似是 里型（十+）人，g杂合子(+g)和g小泉(g》的回RNA,道转录为 白动子基四5编的学判件生子 cDNA后，用(2)小题同样的DNA探针和方法检测，结暴加图丙 F2 FI 美 《3》为进一步验证VV甚因的功能，表中的共基因第接是将NV 需小佩袜道没有条带的原因是 头电2 基因导人 用色获得的。在构建NV基因表达我体时，需 仕上F们，2，或1，R2表术引物 U白航体V我体 数举知新的标记基因，原因是 组湖学检查发现野生出和g染合子表达下蛋白：？小鼠不表达F 甲 4(2024新红1月表，12分)小显毛囊中表达F蛋白。为研究下蛋白 蛋白，因此推测F蛋白具有 的作用 (1)与图甲中启功子结合的爵是 除图甲中际出韵结 在毛爱生长中的作用，利用基因工程技术我得了F基因敲除的突 相外，作为镜体，质粒还需具备的结构有 (答出 变显纯合子小鼠，简称小鼠，突变基因用「表示。「小鼠皮毛比野 出特局目 2个结构得可) 生型小鼠长50%，表观出毛尊年的样子，其他表醒正常，（挂：写 出错承围 (2)建重组质较后，为了确定J某因连接到规粒中且能人方向王 生型基因型用十十表示杂合子基因型用十表示)