精品解析：广东省肇庆市衡立高级中学2024-2025学年高二下学期期中考试生物试题

肇庆市衡立高级中学2024-2025学年第二学期高二年级期中考试生物试题 本卷满分：100 分 考试时间：75 分钟 一、单选题（本题共 18 小题，共 48 分。第 1—12 题，每小题 2 分，第 13—18 题，每小题 4 分。） 1. 传统美食制作过程体现了发酵技术。下列说法正确的是（　　） A. 酵母菌、曲酶、毛霉参与腐乳发酵，起主要作用的是曲霉 B. 制作果酒利用了酵母菌在无氧条件下产生酒精 C. 制作泡菜时泡菜坛中加料加满，每天及时排气 D. 卤汁中乳酸菌和芽孢杆菌不存在竞争关系 2. 已知固体培养基会因碳酸钙的存在而呈乳白色，且乳酸能分解培养基中碳酸钙。某同学用新鲜的泡菜滤液为材料进行了分离纯化乳酸菌的实验，下列叙述错误的是（　　） A. 分离纯化所用的培养基中加入碳酸钙的作用是鉴别乳酸菌 B. 分离纯化所用的培养基加入锥形瓶后一般还要进行灭菌处理 C. 分离纯化乳酸菌时，应挑选出不具有透明圈的菌落作为候选菌 D. 分离纯化乳酸菌时，需要用无菌水对泡菜滤液进行梯度稀释 3. 下图为酵母菌纯培养过程中的部分操作步骤，下列说法正确的是（　　） A. 调节培养基的pH可以在①步骤（倒平板）之后进行 B. ②步骤操作前需要将接种环灼烧灭菌并冷却 C. 图示实验过程中，接种环共灼烧了5次 D. 图中培养基倒置培养后可以用于统计酵母菌的菌落数 4. 有机磷农药是用于防治植物害虫的含磷有机化合物，广泛应用于农业生产中，有时会造成瓜果蔬菜等食品农药残留超标，不少种类对人、畜的毒性很强。某班同学欲从土壤中分离高效降解有机磷农药的微生物，下列做法正确的是（ ） A. 在被有机磷农药污染的土壤中取样，并在添加有机磷农药的培养基上培养以获取相应的微生物 B. 在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先培养一段时间，以检测培养基平板灭菌是否合格 C. 若要测定培养液中选定菌种的菌体数，既可在显微镜下用血细胞计数板直接计数，也可选用稀释涂布平板法统计 D. 制备固体培养基时加入的常用凝固剂是琼脂；若培养基需要调节pH，则应在灭菌之后调节。 5. 烟薯­25是一种甜度大、抗病力强、产量高的红薯。是无性繁殖的作物，多代繁殖后病毒会在体内积累，导致含糖量不足，产量下降。大面积栽培时，一般都用脱毒苗。下列有关脱毒苗培育过程的叙述，错误的是（　　） A. 脱毒苗培育过程需经历脱分化和再分化两个阶段 B. 脱毒苗培育过程的原理是高度分化的植物细胞一般具有全能性 C. 脱分化和再分化的培养基成分是相同的，但两个阶段光照条件不同 D. 培育脱毒苗应将茎尖进行消毒处理，接种过程应进行无菌操作 6. 某研究人员设计了下列技术路线,以期获得甘蓝和萝卜体细胞杂交植株。下列说法错误的是（ ） A. 细胞融合过程涉及膜的流动性，常用聚乙二醇融合法、电融合法等诱导原生质体融合 B. 原生质体融合成功的标志是细胞核相融合 C. 为诱导融合原生质体产生不定芽，通常会在培养基中加入两类植物激素 D. 植物体细胞杂交可以实现远缘杂交育种 7. 下图表示利用植物组织培养技术培育耐盐石楠植株的流程。下列相关叙述不正确的是（　　） A. 用γ射线照射愈伤组织的目的是获得突变体 B. 在培养基中加入的物质X可能是NaCl C. 经过γ射线照射处理后，所挑选的生长的愈伤组织的遗传物质没有发生改变 D. 由植物茎段培育成愈伤组织需要激素的诱导 8. 某研究小组对某种动物的肝肿瘤细胞（甲）和正常肝细胞（乙）进行动物细胞培养。下列有关叙述正确的是（　　） A. 细胞培养应在含5%CO2和95%空气的混合气体的恒温培养箱中进行 B. 在利用两种肝组织块制备肝细胞悬液时，也可用胃蛋白酶处理 C. 为了防止细胞培养过程中细菌的污染，可向培养液中加入适量的干扰素 D. 在相同适宜条件下培养等量的甲、乙细胞，一段时间后，乙细胞数量比甲多 9. 第三次全国大熊猫野外种群调查显示，全国野生大熊猫不足1 600只，为保护和繁殖大熊猫，科研人员进行了下图实验，相关叙述正确的是（　　） A. 克隆熊猫培育成功的部分原因是卵细胞细胞质具有调控细胞核发育的作用 B. 图中用激素处理可使供体超数排卵，代孕受体在移植前不需要进行同期发情处理 C. 图中的熊猫甲与亲代雌性大熊猫的性状基本相同 D. 熊猫乙和熊猫丙的基因型和表型一定都相同 10. 以下关于桑葚胚、囊胚、原肠胚的叙述，不正确的是（　　） A. 胚胎发育的顺序是桑葚胚→囊胚→原肠胚 B. 囊胚期的细胞出现了分化，其原因是细胞中的遗传物质发生了变化 C. 桑葚胚期之前的细胞均未出现分化 D. 原肠胚表面的细胞层为外胚层 11. 下列关于基因工程工具酶的说法，正确的是（　　） A. E.coli DNA连接酶既能连接平末端，也可以连接黏性末端 B. 限制酶、DNA连接酶和质粒是基因工程常用的工具酶 C. DNA连接酶连接的是碱基间的氢键 D. 每种限制酶只能识别双链DNA分子的特定核苷酸序列，并在特定位点进行切割，体现了酶的专一性 12. 下列有关基因工程诞生的说法，不正确的是（ ） A. 基因工程是在生物化学、分子生物学和微生物学等学科的基础上发展起来的 B. 工具酶和载体的发现使基因工程的实施成为可能 C. 遗传密码的破译为基因的分离和合成提供了理论依据 D. 基因工程必须在同物种间进行 13. 我国科学家独创的花粉管通道法，可以使目的基因借助花粉管通道进入受体细胞，是一种十分简便经济的方法，对此认识正确的是（　　） A. 不必构建表达载体就可以直接导入 B. 此方法可用于转基因动物 C. 受体细胞只能是植物的卵细胞 D. 有时可以取代农杆菌转化法 14. 下表为几种限制性核酸内切酶识别的序列和切割的位点。如图，已知某DNA在目的基因的两端1、2、3、4四处有BamHⅠ或EcoRⅠ或PstⅠ的酶切位点。现用bamHⅠ和EcoRⅠ两种酶同时切割该DNA片段（假设所用的酶均可将识别位点完全切开），下列各种酶切位点情况中，可以防止酶切后单个含目的基因的DNA片段自身连接成环状的是（ ） 限制酶 BamHⅠ EcoRⅠ PstⅠ 识别序列和切割位点 G↓GATCC CCTAG↑G G↓AATTC CTTAA↑G CTGCA↓G G↑ACGTC A. 1为BamHⅠ，2为EcoRⅠ，3为BamHⅠ，4为PstⅠ B. 1为EcoRⅠ，2为BamHⅠ，3为BamHⅠ，4为PstⅠ C. 1为PstⅠ，2为EcoRⅠ，3为EcoRⅠ，4为BamHⅠ D. 1为BamHⅠ，2为EcoRⅠ，3为PstⅠ，4为EcoRⅠ 15. 某线性DNA分子含有5000个碱基对（bp），先用限制酶a切割，再把得到的产物用限制酶b切割，得到的DNA片段大小如下表。限制酶a和b的识别序列和切割位点如下图所示。下列叙述错误的是 a酶切割产物（bp） b酶再次切割产物（bp） 2100；1400；1000；500 1900；200；800；600；1000；500 A. a酶与b酶切断的化学键相同 B. a酶与b酶切出的黏性末端能相互连接 C. a酶与b酶切割该DNA分子位点分别有3个和5个 D. 限制酶将一个DNA分子片段切成两个片段需消耗两个水分子 16. 构建重组质粒T的部分过程及质粒S上的酶切位点如图所示。各种限制酶的识别序列和切割位点如表所示。现在需要切割目的基因和质粒S然后构建重组质粒T，下列关于限制酶的选择最合适的是（ ） 限制酶 BamHI BglⅡ HindⅢ XbaI 识别序列和切割位点 G↓GATCC A↓GATCT A↓AGCTT T↓CTAGA A. BamHI和XbaI B. BglⅡ和BamHI C. BamHI和HindⅢ D. BglⅡ和XbaI 17. 图甲、图乙分别表示质粒和外源DNA，其中箭头表示相关限制酶的酶切位点，下列叙述正确的是（　　） A. 用质粒和外源DNA构建重组质粒过程中，不能使用SmaⅠ切割 B. 用EcoRⅠ、Hind Ⅲ和BamHⅠ中的任意一种酶切割质粒和外源基因都可以 C. 为获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入DNA聚合酶 D. 图甲所示的质粒分子在经SmaⅠ切割后含有4个游离的磷酸基团 18. 用PCR方法检测转基因植株是否成功导入目的基因时，得到以下电泳图谱，其中1号为DNA标准样液（Marker），10号为蒸馏水。PCR时加入的模板DNA如图所示。据此做出分析不合理的是（　　） A. PCR产物的分子大小在250至500 bp之间 B. 3号样品为不含目的基因的载体DNA C. 9号样品对应植株不是所需的转基因植株 D. 10号的电泳结果能确定反应体系等对实验结果没有干扰 二、非选择题（共52分） 19. 某生物小组的同学用如图所示的装置培养乳酸菌。请回答下列问题： （1）实验室中可用番茄汁来培养微生物。将番茄汁过滤并进行______处理，冷却后接种乳酸菌。番茄汁为乳酸菌提供的基本营养物质有______。向培养基中加入的琼脂的作用是______。 （2）密封玻璃罐前先将蜡烛点燃，原因是______。 （3）研究小组筛选了2种可在pH=3．0条件下生长的乳酸菌菌株进行产酸能力研究，并提取发酵液研究了这2种乳酸菌对金黄色葡萄球菌的抑制作用。实验结果见表： 编号 pH 酸度（ °T） 抑菌圈直径（ mm） 菌株 DJ3 3．69 179．1 21．33 菌株 DJ4 4．30 109．7 17．72 乳酸溶液 3．70 176．4 17．92 乳酸溶液 4．31 109．5 15．69 空白对照 6．60 15．4 8．64 产酸能力较强的菌株是______，原因是_________________。根据实验数据分析，乳酸菌发酵液的抑菌机制可能是______。 20. 通过细胞工程技术，利用甲、乙两种植物的各自优势（甲耐盐、乙高产），培育高产耐盐的杂种植株。请完善下列实验流程并回答下列问题： （1）A是________酶和________酶，D是具有________优良性状的幼芽。D长成的幼苗需要选择的原因是_______。 （2）由C形成植株的过程利用了________技术，形成愈伤组织需要经过________过程，愈伤组织形成D需要经过_____过程。整个培养过程要在________的条件下进行。 （3）植物体细胞融合成功的标志是_________。 （4）已知甲、乙植物分别为四倍体、二倍体，则“甲—乙植株”属于________倍体植株。 21. 下表所示为几种限制酶的识别序列及其切割位点，请回答下列问题： 限制酶 BamHⅠ HindⅢ EcoRⅠ SmaⅠ 识别序列和切割位点 -G↓GATCC-CCTAG↓G- -A↓AGCTT-TTCGA↑A- -G↓AATTC-CTTAA↑G- -CCC↓GGG-GGG↑CCC- （1）从表中四种酶的切割位点看，可以切出平末端的酶是________。 （2）将目的基因与质粒DNA“缝合”依靠的是________酶，它的作用是形成磷酸二酯键；两条链间的碱基对通过________连接起来。 （3）图1中的质粒分子可被表中哪种限制酶________切割，切割后的质粒含有个游离的磷酸基团。 （4）在相关酶的作用下，图1中的甲与图2中的乙___（填“能”或“不能”）拼接起来。理由是__。 22. 下图是某基因工程中构建重组质粒的过程示意图，载体质粒P0具有四环素抗性基因（TetR）和氨苄青霉素抗性基因（AmpR）。请回答下列问题： （1）EcoR Ⅴ酶切位点为 ，EcoR Ⅴ酶切出来的线性载体P1为__________末端。 （2）用Taq DNA聚合酶进行PCR扩增获得的目的基因片段，其两端各自带有一个腺嘌呤脱氧核苷酸。载体P1用酶处理，在两端各添加了一个碱基为________的脱氧核苷酸，形成P2；P2和目的基因片段在______酶作用下，形成重组质粒P3。 （3）为筛出含有重组质粒P3的菌落，采用含有不同抗生素的平板进行筛选，得到A、B、C三类菌落，生长情况如表（“＋”代表生长，“－”代表不生长）。根据表中结果判断，应选择的菌落是_______ （填表中字母）类。 　　　　菌落类型/平板类型　　　　　 A B C 无抗生素 ＋ ＋ ＋ 氨苄青霉素 ＋ ＋ － 四环素 ＋ － － 氨苄青霉素＋四环素 ＋ － － （2022·北京丰台区高二期末） 23. 棉花种植过程中常因棉铃虫啃食叶片而减产。苏云金芽孢杆菌能产生具有杀虫能力的Bt 毒蛋白。科研人员将Bt 毒蛋白基因作为目的基因导入普通棉株细胞内， 培育出了能抗棉铃虫的转基因抗虫棉。下图为制备抗虫棉的基本流程，①～⑤表示相关的操作。请回答下列问题： （1）步骤①中，利用 PCR技术扩增 Bt毒蛋白基因时，需要根据 Bt 毒蛋白基因两端的部分核苷酸序列设计___________。 （2）步骤②构建基因表达载体时需要用到 ECoR I 和 BamH I 两种_________酶对目的基因和质粒进行切割，酶切后形成的目的基因两端的黏性末端_____（填“相同”或“不相同”），以防止自身环化。切割后的产物还需要用____酶进行连接。 （3）步骤③中需先用____处理农杆菌以便将基因表达载体导入其中。 （4）步骤④中，可通过____技术检测愈伤组织细胞中是否含有 Bt毒蛋白，若未检测出 Bt 毒蛋白，则可能的原因是________。 （5）分别用普通棉花植株和转基因棉花植株的叶片饲喂棉铃虫，若出现_____结果，说明抗虫棉对棉铃虫表现出一定的抗性。 第1页/共1页 学科网（北京）股份有限公司 $ 肇庆市衡立高级中学2024-2025学年第二学期高二年级期中考试生物试题 本卷满分：100 分 考试时间：75 分钟 一、单选题（本题共 18 小题，共 48 分。第 1—12 题，每小题 2 分，第 13—18 题，每小题 4 分。） 1. 传统美食制作过程体现了发酵技术。下列说法正确的是（　　） A. 酵母菌、曲酶、毛霉参与腐乳发酵，起主要作用的是曲霉 B. 制作果酒利用了酵母菌在无氧条件下产生酒精 C. 制作泡菜时泡菜坛中加料加满，每天及时排气 D. 卤汁中乳酸菌和芽孢杆菌不存在竞争关系 【答案】B 【解析】 【分析】1.参与果酒制作的微生物是酵母菌，其新陈代谢类型为异养兼性厌氧型。 2.参与果醋制作的微生物是醋酸菌，其新陈代谢类型是异养需氧型。果醋制作的原理：当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸；当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。 3.参与腐乳制作的微生物主要是毛霉，其新陈代谢类型是异养需氧型。腐乳制作的原理：毛霉等微生物产生的蛋白酶能将豆腐中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸；脂肪酶可将脂肪分解成甘油和脂肪酸。 4.泡菜的制作原理：泡菜的制作离不开乳酸菌．在无氧条件下，乳酸菌将葡萄糖分解成乳酸。 【详解】A、在腐乳发酵中，酵母菌、曲霉、毛霉等多种微生物参与，起主要作用的是毛霉，A错误； B、酵母菌是兼性厌氧微生物，在无氧条件下，酵母菌能进行酒精发酵产生酒精，B正确； C、制作泡菜时，泡菜坛中不能加料加满，因为乳酸菌是厌氧菌，发酵过程中不需要排气，C错误； D、卤汁中乳酸菌和芽孢杆菌会竞争营养物质等资源，存在竞争关系，D错误。 故选B。 2. 已知固体培养基会因碳酸钙的存在而呈乳白色，且乳酸能分解培养基中碳酸钙。某同学用新鲜的泡菜滤液为材料进行了分离纯化乳酸菌的实验，下列叙述错误的是（　　） A. 分离纯化所用的培养基中加入碳酸钙的作用是鉴别乳酸菌 B. 分离纯化所用的培养基加入锥形瓶后一般还要进行灭菌处理 C. 分离纯化乳酸菌时，应挑选出不具有透明圈的菌落作为候选菌 D. 分离纯化乳酸菌时，需要用无菌水对泡菜滤液进行梯度稀释 【答案】C 【解析】 【分析】根据题意可知，固体培养基会因碳酸钙的存在而呈乳白色，且乳酸能分解培养基中碳酸钙形成透明圈，因此培养基中加入碳酸钙可以起到鉴别乳酸菌的作用。泡菜主要是乳酸菌发酵的产物，因此新鲜的泡菜滤液中含有丰富的乳酸菌，可以利用新鲜的泡菜滤液作为材料分离纯化乳酸菌。菌种分离和纯化的方法包括平板划线法和稀释涂布平板法。 【详解】A、分离纯化所用的培养基中加入碳酸钙的作用是鉴别乳酸菌，即可中和乳酸菌代谢过程中产生的乳酸，进而能对乳酸菌进行鉴别和分离，A正确； B、微生物培养时，为避免杂菌污染，分离纯化所用的培养基加入锥形瓶后一般还要进行灭菌处理，B正确； C、根据题意，固体培养基会因碳酸钙的存在而呈乳白色，且乳酸能分解培养基中碳酸钙形成透明圈，因此分离纯化时应挑选出具有透明圈的菌落作为候选菌，C错误； D、分离纯化乳酸菌时，需要用无菌水对泡菜滤液进行梯度稀释，这样做的目的是使聚集在一起的乳酸菌分散成单个细胞，有利于在培养基表面形成单个菌落，D正确。 故选C。 3. 下图为酵母菌纯培养过程中的部分操作步骤，下列说法正确的是（　　） A. 调节培养基的pH可以在①步骤（倒平板）之后进行 B. ②步骤操作前需要将接种环灼烧灭菌并冷却 C. 图示实验过程中，接种环共灼烧了5次 D. 图中培养基倒置培养后可以用于统计酵母菌的菌落数 【答案】B 【解析】 【分析】观察题图可知，步骤①为倒平板，步骤②为蘸取菌液，步骤③为划线接种，步骤④为培养。 【详解】 A、①步骤为倒平板操作，为实现无菌操作，应先调pH再灭菌，A错误； B、步骤②为蘸取菌液，为保证无菌操作，防止杂菌污染，操作前要将接种环灼烧灭菌并冷却，B正确； C、③到④的过程中，观察图④发现培养皿上有5道划线，每次划线操作前都需要进行灼烧灭菌，接种结束后还需要灼烧灭菌1次，由此可知接种环共需要灼烧6次，C错误； D、图示为平板划线法，该接种方法不能用于微生物计数，D错误。 故选B。 4. 有机磷农药是用于防治植物害虫的含磷有机化合物，广泛应用于农业生产中，有时会造成瓜果蔬菜等食品农药残留超标，不少种类对人、畜的毒性很强。某班同学欲从土壤中分离高效降解有机磷农药的微生物，下列做法正确的是（ ） A. 在被有机磷农药污染的土壤中取样，并在添加有机磷农药的培养基上培养以获取相应的微生物 B. 在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先培养一段时间，以检测培养基平板灭菌是否合格 C. 若要测定培养液中选定菌种的菌体数，既可在显微镜下用血细胞计数板直接计数，也可选用稀释涂布平板法统计 D. 制备固体培养基时加入的常用凝固剂是琼脂；若培养基需要调节pH，则应在灭菌之后调节。 【答案】ABC 【解析】 【分析】1、筛选菌株： （1）实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、pH等），同时抑制或阻止，其他微生物的生长。 （2）选择培养基：在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基称做选择培养基。 2、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基：其基本过程为计算、称量、溶化、调pH、灭菌、倒平板五个步骤。 3、统计菌落数目： （1）活菌计数法：常用稀释涂布平板法 （2）显微镜直接计数法：在显微镜下直接观察和计数微生物的数量。 【详解】A、根据以上筛选微生物的原则可知，为了获得能降解有机磷农药的微生物菌种，可在被有机磷农药污染的土壤中取样，在选择培养基上添加有机磷农药进行选择培养，A正确； B、在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先培养一段时间，以检测培养基平板灭菌是否合格，B正确； C、根据以上分析可知，若要测定培养液中选定菌种的菌体数，既可在显微镜下用血细胞计数板直接计数，也可选用稀释涂布平板法统计活菌数目，C正确； D、制备固体培养基的基本步骤是计算→称量→溶化→分装→加棉塞→包扎→倒平板，因此培养基在灭菌前需要调节pH，D错误。 故选ABC。 5. 烟薯­25是一种甜度大、抗病力强、产量高的红薯。是无性繁殖的作物，多代繁殖后病毒会在体内积累，导致含糖量不足，产量下降。大面积栽培时，一般都用脱毒苗。下列有关脱毒苗培育过程的叙述，错误的是（　　） A. 脱毒苗培育过程需经历脱分化和再分化两个阶段 B. 脱毒苗培育过程的原理是高度分化的植物细胞一般具有全能性 C. 脱分化和再分化的培养基成分是相同的，但两个阶段光照条件不同 D. 培育脱毒苗应将茎尖进行消毒处理，接种过程应进行无菌操作 【答案】C 【解析】 【分析】植物组织培养过程是：离体的植物器官、组织或细胞脱分化形成愈伤组织，然后再分化生成根、芽，最终形成植物体。植物组织培养依据的原理是植物细胞的全能性。 【详解】A、脱毒苗培育经过脱分化和再分化两个阶段，且需要添加植物生长素、细胞分裂素等植物生长调节物质，A正确； B、脱毒苗的培育采用了植物组织技术，而该技术的原理是植物细胞具有全能性，B正确； C、植物组织培养中脱分化和再分化的培养基中激素的含量不同，脱分化不需要光照，C错误； D、培育脱毒苗应将茎尖进行消毒处理，接种过程应进行无菌操作，避免微生物污染，D正确。 故选C。 6. 某研究人员设计了下列技术路线,以期获得甘蓝和萝卜体细胞杂交植株。下列说法错误的是（ ） A. 细胞融合过程涉及膜的流动性，常用聚乙二醇融合法、电融合法等诱导原生质体融合 B. 原生质体融合成功的标志是细胞核相融合 C. 为诱导融合原生质体产生不定芽，通常会在培养基中加入两类植物激素 D. 植物体细胞杂交可以实现远缘杂交育种 【答案】B 【解析】 【分析】植物体细胞杂交技术：就是将不同种的植物体细胞原生质体在一定条件下融合成杂种细胞，并把杂种细胞培育成完整植物体的技术。 【详解】A、细胞融合的原理是细胞膜具有流动性，诱导原生质体融合的方法有聚乙二醇融合法、电融合法等，A正确； B、原生质体融合成功的标志是新的细胞壁形成，B错误； C、植物激素中生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键激素，它们的浓度、用量的比例等都会影响植物细胞的发育方向，当生长素和细胞分裂素的比值低时，有利于芽的形成，C正确； D、植物体细胞杂交可以打破生殖隔离，实现远缘杂交育种，D正确。 故选B。 7. 下图表示利用植物组织培养技术培育耐盐石楠植株的流程。下列相关叙述不正确的是（　　） A. 用γ射线照射愈伤组织的目的是获得突变体 B. 在培养基中加入的物质X可能是NaCl C. 经过γ射线照射处理后，所挑选的生长的愈伤组织的遗传物质没有发生改变 D. 由植物茎段培育成愈伤组织需要激素的诱导 【答案】C 【解析】 【分析】植物组织培养是指利用特定的培养基将离体的植物细胞、组织或器官培养成完整植株，其过程为外植体通过脱分化形成愈伤组织，愈伤组织通过再分化形成胚状体或丛芽，进而发育成新个体。 【详解】A、处理1中用γ射线照射是为了诱导基因突变，获得突变体，A正确； B、在培养基中加入的物质是NaCl，具有选择作用：具有能适应一定盐浓度的愈伤组织才能生长，不适应的愈伤组织死亡，从而培育耐盐石楠植株，B正确； C、处理1中的用γ射线照射是为了诱导基因突变，获得突变体，遗传物质发生改变，C错误； D、植物茎段培育出愈伤组织需要进行脱分化处理，脱分化是需要激素诱导的，D正确。 故选C。 8. 某研究小组对某种动物的肝肿瘤细胞（甲）和正常肝细胞（乙）进行动物细胞培养。下列有关叙述正确的是（　　） A. 细胞培养应在含5%CO2和95%空气的混合气体的恒温培养箱中进行 B. 在利用两种肝组织块制备肝细胞悬液时，也可用胃蛋白酶处理 C. 为了防止细胞培养过程中细菌的污染，可向培养液中加入适量的干扰素 D. 在相同适宜条件下培养等量的甲、乙细胞，一段时间后，乙细胞数量比甲多 【答案】A 【解析】 【分析】动物细胞培养的流程：取动物组织块（动物胚胎或幼龄动物的器官或组织）→剪碎→用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养瓶中进行原代培养→贴满瓶壁的细胞重新用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞继续传代培养。 【详解】A、细胞培养应在含5%CO2和95%空气的混合气体的恒温培养箱中进行，其中CO2的主要作用是维持培养液的pH，A正确； B、动物细胞培养的适宜pH为7.2-7.4，而在这样的环境中胃蛋白酶会变性失活，因此在利用两种肝组织块制备肝细胞悬液时，不可用胃蛋白酶处理，应用胰蛋白酶处理，B错误； C、为了防止培养过程中杂菌的污染，可向培养液中加入适量的抗生素，C错误； D、在适宜环境中，肿瘤细胞的增殖速率大于肝细胞，因此将数量相等的甲、乙细胞分别置于相同适宜培养条件下培养，一段时间后，会观察到甲细胞数量比乙细胞数量多，D错误。 故选A。 9. 第三次全国大熊猫野外种群调查显示，全国野生大熊猫不足1 600只，为保护和繁殖大熊猫，科研人员进行了下图实验，相关叙述正确的是（　　） A. 克隆熊猫培育成功的部分原因是卵细胞细胞质具有调控细胞核发育的作用 B. 图中用激素处理可使供体超数排卵，代孕受体在移植前不需要进行同期发情处理 C. 图中的熊猫甲与亲代雌性大熊猫的性状基本相同 D. 熊猫乙和熊猫丙的基因型和表型一定都相同 【答案】A 【解析】 【分析】图示为克隆熊猫和试管熊猫的形成过程，为了得到更多的早期胚胎，可以对供体使用超数排卵法处理，使供体排出更多的卵子。卵母细胞核与早期胚胎细胞细胞质融合形成重组细胞，经过早期胚胎培养形成早期胚胎，并通过胚胎移植移到代孕母体中，产生克隆熊猫。 【详解】A、克隆熊猫培育技术为细胞核移植技术，培育成功的部分原因是卵细胞质具有调控 细胞核发育的作用，A正确； B、图中激素处理供体，会促进其超数排卵，受精后产生更多胚胎；为了给移植胚胎创造良好的孕育条件，应对代孕母畜进行同期发情处理，B错误； C、据图可知，熊猫甲的细胞核中的遗传物质来自雌性和雄性大熊猫，细胞质遗传物质来自雌性大熊猫，故其性状不一定与亲代雌性大熊猫相同，C错误； D、熊猫乙和熊猫丙是利用胚胎分割获得的胚胎，经胚胎移植获得的，其遗传物质相同，但是其生存环境不一定相同，且发生的变异类型也不一定相同，所以熊猫乙和熊猫丙的基因型相同，但是表型不一定相同，D错误。 故选A。 10. 以下关于桑葚胚、囊胚、原肠胚的叙述，不正确的是（　　） A. 胚胎发育的顺序是桑葚胚→囊胚→原肠胚 B. 囊胚期的细胞出现了分化，其原因是细胞中的遗传物质发生了变化 C. 桑葚胚期之前的细胞均未出现分化 D. 原肠胚表面的细胞层为外胚层 【答案】B 【解析】 【分析】受精卵是个体发育的起点： 卵裂是指受精卵进行的有丝分裂；囊胚期的特点是具有内细胞团和囊胚腔； 在原肠胚期出现三个胚层的分化，三个胚层逐渐分裂分化形成动物的组织器官，继而形成个体。 【详解】A、胚胎发育的顺序是受精卵→桑椹胚→囊胚→原肠胚→组织器官的分化，A正确； B、囊胚期的细胞出现了分化，形成滋养层和内细胞团，其原因是细胞中基因的选择性表达，遗传物质并未发生改变，B错误； C、桑葚胚期之前的细胞均未出现分化，细胞分化开始于囊胚，C正确； D、原肠胚表面的细胞层为外胚层，向内凹陷形成的细胞层为内胚层，D正确。 故选B。 11. 下列关于基因工程工具酶的说法，正确的是（　　） A. E.coli DNA连接酶既能连接平末端，也可以连接黏性末端 B. 限制酶、DNA连接酶和质粒是基因工程常用的工具酶 C. DNA连接酶连接的是碱基间的氢键 D. 每种限制酶只能识别双链DNA分子的特定核苷酸序列，并在特定位点进行切割，体现了酶的专一性 【答案】D 【解析】 【分析】1、限制酶：能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂； 2、DNA连接酶：连接的是两个核苷酸之间的磷酸二酯键。根据酶的来源不同分为两类：E．coliDNA连接酶、T4DNA连接酶。这二者都能连接黏性末端，此外T4DNA连接酶还可以连接平末端，但连接平末端时的效率比较低。 【详解】A、E．coliDNA连接酶只能连接黏性末端，A错误； B、限制酶、DNA连接酶和质粒是基因工程常用的工具，其中限制酶和DNA连接酶是基因工程的工具酶，质粒是运载体，B错误； C、DNA连接酶可以连接DNA片段之间的磷酸二酯键，不能连接DNA分子中的氢键，C错误； D、酶具有专一性，每种限制酶只能识别双链 DNA 分子的特定核苷酸序列，并在特定位点进行切割，D正确。 故选D。 12. 下列有关基因工程诞生的说法，不正确的是（ ） A. 基因工程是在生物化学、分子生物学和微生物学等学科的基础上发展起来的 B. 工具酶和载体的发现使基因工程的实施成为可能 C. 遗传密码的破译为基因的分离和合成提供了理论依据 D. 基因工程必须在同物种间进行 【答案】D 【解析】 【分析】 【详解】A、基因工程又叫DNA重组技术，是在生物化学、分子生物学和微生物学等学科的基础上发展起来的，A正确； B、工具酶（限制酶和DNA连接酶）和载体的发现使基因工程的实施成为可能，B正确； C、尼伦伯格和马太破译编码氨基酸的遗传密码为基因的分离和合成提供了理论依据，与基因工程直接相关，C正确； D、基因工程可以在不同物种间进行，D错误。 故选D。 13. 我国科学家独创的花粉管通道法，可以使目的基因借助花粉管通道进入受体细胞，是一种十分简便经济的方法，对此认识正确的是（　　） A. 不必构建表达载体就可以直接导入 B. 此方法可用于转基因动物 C. 受体细胞只能是植物的卵细胞 D. 有时可以取代农杆菌转化法 【答案】D 【解析】 【分析】将目的基因导入受体细胞的方法： （1）将目的基因导入植物细胞 ①农杆菌转化法（约80%的转基因植物都是用这种方法获得的） ②基因枪法：是单子叶植物中常用的一种基因转化方法，但是成本较高 ③花粉管通道法：这是我国科学家独创的一种方法，是一种十分简便经济的方法。（我国的转基因抗虫棉就是用此种方法获得的） （2）将目的基因导入动物细胞方法：显微注射技术。（最有效一种方法） （3）将目的基因导人微生物细胞 ①原核生物特点：繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少等。（也是常用原核生物作为受体的原因） ②方法：Ca2+处理法（感受态细胞法） 【详解】A、要让目的基因进入受体细胞后能稳定存在并得到复制和表达，不管采用什么导入方法，都需要构建表达载体才能实现，A错误； B、花粉管通道法只适用于转基因植物的培育，B错误； C、采用花粉管通道法时，植物受体细胞一般是植物体细胞或受精卵，通常不选卵细胞，C错误； D、花粉管通道法有时可以取代农杆菌转化法，D正确。 故选D。 14. 下表为几种限制性核酸内切酶识别的序列和切割的位点。如图，已知某DNA在目的基因的两端1、2、3、4四处有BamHⅠ或EcoRⅠ或PstⅠ的酶切位点。现用bamHⅠ和EcoRⅠ两种酶同时切割该DNA片段（假设所用的酶均可将识别位点完全切开），下列各种酶切位点情况中，可以防止酶切后单个含目的基因的DNA片段自身连接成环状的是（ ） 限制酶 BamHⅠ EcoRⅠ PstⅠ 识别序列和切割位点 G↓GATCC CCTAG↑G G↓AATTC CTTAA↑G CTGCA↓G G↑ACGTC A. 1为BamHⅠ，2为EcoRⅠ，3为BamHⅠ，4为PstⅠ B. 1为EcoRⅠ，2为BamHⅠ，3为BamHⅠ，4为PstⅠ C. 1为PstⅠ，2为EcoRⅠ，3为EcoRⅠ，4为BamHⅠ D. 1为BamHⅠ，2为EcoRⅠ，3为PstⅠ，4为EcoRⅠ 【答案】A 【解析】 【分析】由于限制酶具有特异性，一种限制酶只能识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并形成特定的黏性末端。题干中提出“为防止酶切后单个含目的基因的DNA片段自身连接成环状”，即要求目的基因两侧的黏性末端不同，因此一般选择不同的限制酶进行切割。 【详解】A、如果1为BamHⅠ，2为EcoRⅠ，3为BamHⅠ，4为PstⅠ，则用BamHⅠ和EcoRⅠ两种酶同时切割该DNA片段，将会在2处和3处将目的基因切割，并且形成了不同的黏性末端，可以防止目的基因的自身环化，A正确； B、如果1为EcoRⅠ，2为BamHⅠ，3为BamHⅠ，4为PstⅠ，则用BamHⅠ和EcoRⅠ两种酶同时切割该DNA片段，将会在2处和3处将目的基因切割，并且2处和3处形成了相同的黏性末端，不符合题意，B错误； C、若2处和3处均被EcoRⅠ酶切割，因此2处和3处形成了相同的黏性末端，不符合题意，C错误； D、如果1为BamHⅠ，2为EcoRⅠ，3为PstⅠ，4为EcoRⅠ，则用BamHⅠ和EcoRⅠ两种酶同时切割该DNA片段，将会在2处和4处将目的基因切割，并且黏性末端相同，不符合题意，D错误。 故选A。 【点睛】 15. 某线性DNA分子含有5000个碱基对（bp），先用限制酶a切割，再把得到的产物用限制酶b切割，得到的DNA片段大小如下表。限制酶a和b的识别序列和切割位点如下图所示。下列叙述错误的是 a酶切割产物（bp） b酶再次切割产物（bp） 2100；1400；1000；500 1900；200；800；600；1000；500 A. a酶与b酶切断的化学键相同 B. a酶与b酶切出的黏性末端能相互连接 C. a酶与b酶切割该DNA分子位点分别有3个和5个 D. 限制酶将一个DNA分子片段切成两个片段需消耗两个水分子 【答案】C 【解析】 【分析】 分析题图：a酶和b酶识别的脱氧核苷酸序列不同，但切割后产生的黏性末端相同。 分析表格：a酶可以把原有DNA切成4段，说明有该DNA分子上有3个切口，即a酶的识别序列有3个；b酶把大小是2100的DNA切成大小分别为1900和200两个片段，把大小是1400的DNA切成大小分别为800和600两个片段，且a酶和b酶的识别位点不同，说明b酶的识别序列有2个。 【详解】A、限制酶作用的化学键都是磷酸二酯键，A正确； B、由图可以看出a酶和b酶切割后产生的黏性末端相同，它们之间能相互连接，B正确； C、由表格中可以看出，a酶可以把原有DNA切成4段，说明有该DNA分子上有3个切口，即a酶的识别序列有3个；b酶把大小是2100的DNA切成大小分别为1900和200两个片段，再把大小是1400的DNA切成大小分别为800和600两个片段，说明b酶在该DNA分子上有2个切口，即b酶的识别序列有2个，C错误； D、限制酶将一个DNA分子片段切成两个片段需消耗两个水分子，D正确。 故选C。 【点睛】解答本题的关键是分析表格中产物的片段的多少，确定两种酶的切割位点的数目，易错点是b酶是再次切割，是两种酶的切割总数。 16. 构建重组质粒T的部分过程及质粒S上的酶切位点如图所示。各种限制酶的识别序列和切割位点如表所示。现在需要切割目的基因和质粒S然后构建重组质粒T，下列关于限制酶的选择最合适的是（ ） 限制酶 BamHI BglⅡ HindⅢ XbaI 识别序列和切割位点 G↓GATCC A↓GATCT A↓AGCTT T↓CTAGA A. BamHI和XbaI B. BglⅡ和BamHI C. BamHI和HindⅢ D. BglⅡ和XbaI 【答案】C 【解析】 【分析】构建重组质粒时，选择的限制酶既要保证在目的基因和质粒上都有，保证能切出相同的黏性末端，由不能破坏目的基因，一般选择两种酶切割，以避免自身环化和反向连接。 【详解】根据图中目的基因被限制酶切割后产生的黏性末端可知，应用BamHI和HindⅢ切割目的基因。为了使质粒S具有和目的基因两端相同的黏性末端，也应用BamHI和HindⅢ切割质粒S，C正确，ABD错误。 故选C。 17. 图甲、图乙分别表示质粒和外源DNA，其中箭头表示相关限制酶的酶切位点，下列叙述正确的是（　　） A. 用质粒和外源DNA构建重组质粒过程中，不能使用SmaⅠ切割 B. 用EcoRⅠ、Hind Ⅲ和BamHⅠ中的任意一种酶切割质粒和外源基因都可以 C. 为获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入DNA聚合酶 D. 图甲所示的质粒分子在经SmaⅠ切割后含有4个游离的磷酸基团 【答案】A 【解析】 【分析】分析图解：在质粒上存在Sma I、EcoR I、HindⅢ和BamH I等四个酶切位点，但是Sma I的切割位点就在抗生素抗性基因上，该基因为载体的标记基因，因此不可用。在目的基因上，Sma I、EcoR I、HindⅢ和BamH I四种酶也存在酶切位点，若单独使用一种酶的情况下，只有EcoR I具有两个酶切位点，能切割完整的基因。 【详解】A、据图分析，质粒中，SmaI的切割位点位于标记基因（抗生素抗性基因）上，在外源DNA分子中，SmaⅠ的切割位点位于目的基因上，因此用质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用SmaⅠ切割，A正确； B、只使用EcoRⅠ，则质粒和目的基因两端的黏性末端相同，用连接酶连接时，会产生质粒和目的基因自身连接物，而利用BamHⅠ或HindⅢ剪切时，在目的基因上只有一个酶切位点，因此不能切割目的基因，B错误； C、为获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入DNA连接酶，C错误； D、图甲所示的质粒分子只有一个SmaⅠ切割位点，所以在经SmaⅠ酶切割后含有2个游离的磷酸基团，D错误。 故选A。 18. 用PCR方法检测转基因植株是否成功导入目的基因时，得到以下电泳图谱，其中1号为DNA标准样液（Marker），10号为蒸馏水。PCR时加入的模板DNA如图所示。据此做出分析不合理的是（　　） A. PCR产物的分子大小在250至500 bp之间 B. 3号样品为不含目的基因的载体DNA C. 9号样品对应植株不是所需的转基因植株 D. 10号的电泳结果能确定反应体系等对实验结果没有干扰 【答案】B 【解析】 【分析】j题图分析：PCR过程中，可以通过设计特定的引物来扩增特定的DNA片段。4～9号是转基因植株，理论上应包含目的基因。9号PCR结果不包含250～500bp片段，所以不是所需转基因植株。 【详解】A、PCR过程中，可以通过设计特定的引物来扩增特定的DNA片段。4～9号是转基因植株，理论上应包含目的基因，结合2号野生型和10号蒸馏水组的结果，推测包含目的基因的片段大小应为250～500bp，A符合题意； B、3号PCR结果包含250～500bp片段，应包含目的基因，B不符合题意； C、9号PCR结果不包含250～500bp片段，所以不是所需转基因植株，C符合题意； D、10号放入蒸馏水，可排除反应体系等对结果的干扰，由图可知，10号的电泳结果能确定反应体系等对实验结果没有干扰，D符合题意。 故选B。 二、非选择题（共52分） 19. 某生物小组的同学用如图所示的装置培养乳酸菌。请回答下列问题： （1）实验室中可用番茄汁来培养微生物。将番茄汁过滤并进行______处理，冷却后接种乳酸菌。番茄汁为乳酸菌提供的基本营养物质有______。向培养基中加入的琼脂的作用是______。 （2）密封玻璃罐前先将蜡烛点燃，原因是______。 （3）研究小组筛选了2种可在pH=3．0条件下生长的乳酸菌菌株进行产酸能力研究，并提取发酵液研究了这2种乳酸菌对金黄色葡萄球菌的抑制作用。实验结果见表： 编号 pH 酸度（ °T） 抑菌圈直径（ mm） 菌株 DJ3 3．69 179．1 21．33 菌株 DJ4 4．30 109．7 17．72 乳酸溶液 3．70 176．4 17．92 乳酸溶液 4．31 109．5 15．69 空白对照 6．60 15．4 8．64 产酸能力较强的菌株是______，原因是_________________。根据实验数据分析，乳酸菌发酵液的抑菌机制可能是______。 【答案】 ①. 高压蒸汽灭菌 ②. 碳源、氮源、水和无机盐 ③. 作为凝固剂 ④. 乳酸菌是厌氧菌，蜡烛燃烧可以消耗罐内的氧气形成厌氧环境，有利于乳酸菌的培养 ⑤. DJ3 ⑥. DJ3组pH较DJ4组低，且酸度大于DJ4组 ⑦. 乳酸菌发酵产生的乳酸抑制金黄色葡萄球菌的繁殖，除乳酸外，乳酸菌还产生了其他抑菌物质，并且这些抑菌物质在酸性条件下具有抑菌活性 【解析】 【分析】1、乳酸菌是厌氧菌，其无氧呼吸能产生乳酸。 2、培养基的营养构成：各种培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。 【详解】（1）实验室中可用番茄汁来培养微生物，番茄汁相当于培养基，对培养基进行灭菌应该采用高压蒸汽灭菌法；培养基为微生物提供的基本营养物质有碳源、氮源、水和无机盐；琼脂作为凝固剂。 （2）乳酸菌是厌氧菌，蜡烛燃烧可以消耗罐内的氧气形成厌氧环境，有利于乳酸菌的培养，因此密封玻璃罐前先将蜡烛点燃。 （3）根据表中数据可知，菌株DJ3的pH较DJ4组低，且酸度大于DJ4组，说明其产酸能力最强；与仅有乳酸溶液的组进行对照可推知乳酸菌发酵液的抑菌机制可能是：乳酸菌发酵产生的乳酸抑制金黄色葡萄球菌的繁殖，除乳酸外，乳酸菌还产生了其他抑菌物质，并且这些抑菌物质在酸性条件下具有抑菌活性。 【点睛】本题结合表格数据，考查微生物的分离和培养，要求考生识记培养基的营养构成及种类，能正确分析表格数据，并从中提取有效信息准确答题。 20. 通过细胞工程技术，利用甲、乙两种植物的各自优势（甲耐盐、乙高产），培育高产耐盐的杂种植株。请完善下列实验流程并回答下列问题： （1）A是________酶和________酶，D是具有________优良性状的幼芽。D长成的幼苗需要选择的原因是_______。 （2）由C形成植株的过程利用了________技术，形成愈伤组织需要经过________过程，愈伤组织形成D需要经过_____过程。整个培养过程要在________的条件下进行。 （3）植物体细胞融合成功的标志是_________。 （4）已知甲、乙植物分别为四倍体、二倍体，则“甲—乙植株”属于________倍体植株。 【答案】（1） ①. 纤维素酶    ②. 果胶 ③. 耐盐  ④. 有耐盐高产和耐盐不高产两种幼苗 （2） ①. 植物组织培养 ②. 脱分化 ③. 再分化 ④. 无菌 （3）杂种细胞再生出新的细胞壁 （4）异源六##六 【解析】 【分析】分析题图：图示为培育高产耐盐的杂种植株的培育过程，其中A表示酶解法去除细胞壁，B表示诱导原生质体融合，C为杂种细胞，D为筛选获得的耐盐幼芽。 【小问1详解】 由植物细胞变成原生质体，需要去掉细胞壁，细胞壁的主要成分是纤维素和果胶，酶具有专一性，所以应用纤维素酶和果胶酶处理细胞壁；两个原生质体经PEG诱导后融合，再生出细胞壁后变成杂种细胞；利用植物组织培养技术可得到愈伤组织、丛芽结构和试管苗，并非每个细胞都能表达出耐盐性状，需要利用含盐培养基进行选择，D是具有耐盐优良性状的幼芽，D长成的幼苗有耐盐高产和耐盐不高产两种，故需要进行选择。 【小问2详解】 C细胞是杂种细胞，形成植株需要利用植物组织培养技术，形成愈伤组织需要经过脱分化过程，愈伤组织形成D（具有耐盐优良性状的幼芽）需要经过再分化过程，过程中涉及培养基培养过程，故整个培养过程要在无菌的条件下进行。 【小问3详解】 杂种细胞再生出新的细胞壁的形成标志着细胞融合的成功，这意味着两个融合的原生质体重新构成了一个植物细胞。 【小问4详解】 已知甲、乙植物分别为不同种植物的四倍体、二倍体，则融合后的“甲—乙植株”属于异源多倍体里面的异源六倍体。 21. 下表所示为几种限制酶的识别序列及其切割位点，请回答下列问题： 限制酶 BamHⅠ HindⅢ EcoRⅠ SmaⅠ 识别序列和切割位点 -G↓GATCC-CCTAG↓G- -A↓AGCTT-TTCGA↑A- -G↓AATTC-CTTAA↑G- -CCC↓GGG-GGG↑CCC- （1）从表中四种酶的切割位点看，可以切出平末端的酶是________。 （2）将目的基因与质粒DNA“缝合”依靠的是________酶，它的作用是形成磷酸二酯键；两条链间的碱基对通过________连接起来。 （3）图1中的质粒分子可被表中哪种限制酶________切割，切割后的质粒含有个游离的磷酸基团。 （4）在相关酶的作用下，图1中的甲与图2中的乙___（填“能”或“不能”）拼接起来。理由是__。 【答案】（1）SmaⅠ （2） ①. DNA连接 ②. 氢键 （3）EcoRⅠ （4） ①. 能 ②. 二者具有相同的黏性末端 【解析】 【分析】基因工程的工具：①限制酶：识别双链DNA分子的特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的磷酸二酯键断开。②DNA连接酶：将双链DNA片段“缝合”起来，恢复限制酶切开的磷酸二酯键。③载体：最常用的载体是质粒，除此之外还有噬菌体、动植物病毒等。 【小问1详解】 由表中四种限制酶的切割点可知，SmaI可切出平末端。 【小问2详解】 将目的基因与质粒DNA“缝合”依靠的是DNA连接酶，形成磷酸二酯键；两条链之间的碱基依据碱基互补配对原则形成氢键。 【小问3详解】 根据质粒的碱基序列可知，质粒分子可被限制酶EcoRⅠ切割，切割后形成链状DNA。 【小问4详解】 由图可知，甲和乙的黏性末端相同，在DNA连接酶的作用下可以拼接起来。 22. 下图是某基因工程中构建重组质粒的过程示意图，载体质粒P0具有四环素抗性基因（TetR）和氨苄青霉素抗性基因（AmpR）。请回答下列问题： （1）EcoR Ⅴ酶切位点为 ，EcoR Ⅴ酶切出来的线性载体P1为__________末端。 （2）用Taq DNA聚合酶进行PCR扩增获得的目的基因片段，其两端各自带有一个腺嘌呤脱氧核苷酸。载体P1用酶处理，在两端各添加了一个碱基为________的脱氧核苷酸，形成P2；P2和目的基因片段在______酶作用下，形成重组质粒P3。 （3）为筛出含有重组质粒P3的菌落，采用含有不同抗生素的平板进行筛选，得到A、B、C三类菌落，生长情况如表（“＋”代表生长，“－”代表不生长）。根据表中结果判断，应选择的菌落是_______ （填表中字母）类。 　　　　菌落类型/平板类型　　　　　 A B C 无抗生素 ＋ ＋ ＋ 氨苄青霉素 ＋ ＋ － 四环素 ＋ － － 氨苄青霉素＋四环素 ＋ － － 【答案】（1）平 （2） ①. T＃＃胸腺嘧啶 ②. DNA连接 （3）B 【解析】 【分析】分析题图：P0是载体质粒，其含有的氨苄青霉素抗性基因和四环素抗性基因都属于标记基因，可以用来检测目的基因是否导入受体细胞；EcoRV酶为限制酶，其切割质粒后会破坏了四环素抗性基因。 【小问1详解】 根据题意分析，EcoRV酶识别的序列是-GATATC-，并且两条链都在识别序列的碱基的中轴线T与A之间进行切割，因此其切出来的线性载体P1为平末端。 【小问2详解】 据图分析，目的基因两侧为黏性末端，而进行PCR扩增获得的目的基因片段，其两端各自带有一个腺嘌呤脱氧核苷酸，即目的基因的黏性末端漏出的碱基为A，根据碱基互补配对原则可知，在载体P1的两端需要个加一个碱基T的脱氧核苷酸形成具有黏性末端的载体P2，再用DNA连接酶将P2与目的基因连接起来形成重组质粒P3。 【小问3详解】 根据题图，限制酶切割后破坏了四环素抗性基因（TetR），但是没有破坏氨苄青霉素抗性基因（AmpR），因此含有重组质粒P3的菌落在四环素中应该不能生长，而在氨苄青霉素的培养基中能生长，结合表格分析可知，应该选择B类菌落。 （2022·北京丰台区高二期末） 23. 棉花种植过程中常因棉铃虫啃食叶片而减产。苏云金芽孢杆菌能产生具有杀虫能力的Bt 毒蛋白。科研人员将Bt 毒蛋白基因作为目的基因导入普通棉株细胞内， 培育出了能抗棉铃虫的转基因抗虫棉。下图为制备抗虫棉的基本流程，①～⑤表示相关的操作。请回答下列问题： （1）步骤①中，利用 PCR技术扩增 Bt毒蛋白基因时，需要根据 Bt 毒蛋白基因两端的部分核苷酸序列设计___________。 （2）步骤②构建基因表达载体时需要用到 ECoR I 和 BamH I 两种_________酶对目的基因和质粒进行切割，酶切后形成的目的基因两端的黏性末端_____（填“相同”或“不相同”），以防止自身环化。切割后的产物还需要用____酶进行连接。 （3）步骤③中需先用____处理农杆菌以便将基因表达载体导入其中。 （4）步骤④中，可通过____技术检测愈伤组织细胞中是否含有 Bt毒蛋白，若未检测出 Bt 毒蛋白，则可能的原因是________。 （5）分别用普通棉花植株和转基因棉花植株的叶片饲喂棉铃虫，若出现_____结果，说明抗虫棉对棉铃虫表现出一定的抗性。 【答案】 ①. 引物 ②. 限制 ③. 不相同 ④. DNA连接 ⑤. Ca2+ ⑥. 抗原抗体杂交 ⑦. Bt毒蛋白基因未能导入棉花愈伤组织细胞（或在棉花愈伤组织细胞中未表达或未转录或未翻译） ⑧. 转基因棉花叶片被啃食的程度比普通棉花轻，或啃食转基因棉花的棉铃虫死亡率更高或生长更缓慢 【解析】 【分析】分析题图：题图表示抗虫棉的培育过程，其中①获取目的基因，②表示基因表达载体的构建过程，是基因工程的核心步骤；③表示将目的基因导入受体细胞；④表示采用植物组织培养技术将转基因受体细胞培育成转基因抗虫棉。 【详解】（1）步骤①为获取目的基因，利用PCR技术扩增Bt毒蛋白基因时，需要根据Bt毒蛋白基因两端的部分核苷酸序列设计引物。 （2）步骤②构建基因表达载体时需要用到ECoRI和BamHI两种限制酶对目的基因和质粒进行切割，酶切后形成的目的基因两端的黏性末端不相同，以防止自身环化。切割后的产物还需要用DNA连接酶将磷酸二酯键连接起来。 （3）步骤中，微生物细胞作为受体细胞时，需要钙离子处理使其变为感受态细胞，因此过程③中需先用Ca2+（或CaCl2）处理农杆菌以便将基因表达载体导入细胞。 （4）步骤④中，可通过抗原-抗体杂交技术检测愈伤组织细胞中是否含有Bt毒蛋白，若未检测出Bt毒蛋白，则可能是由于Bt毒蛋白基因未能导入棉花愈伤组织细胞（或在棉花愈伤组织细胞中未表达或未转录或未翻译）。 （5）分别用普通棉花植株和转基因棉花植株的叶片饲喂棉铃虫，若出现转基因棉花叶片被啃食的程度比普通棉花轻，或啃食转基因棉花的棉铃虫死亡率更高或生长更缓慢结果，说明抗虫棉对棉铃虫表现出一定的抗性。 【点睛】本题结合图解，考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的概念、原理、操作步骤，掌握各操作步骤中需要注意的细节，能结合图中信息准确答题。 第1页/共1页 学科网（北京）股份有限公司 $