2.2.2动物细胞融合技术与单克隆抗体课件-2024-2025学年高二下学期生物人教版（2019）选择性必修3

课前提问： 1.动物细胞工程有哪些技术？ 2.动物细胞融合的原理及完成的标志？ 3.诱导动物细胞融合的方法？ 4.什么是杂交瘤细胞？ 5.杂交瘤细胞的特点？ 6.什么是单克隆抗体？ A细胞 B细胞 A原生质体 B原生质体 正在融合的原生质体 杂种细胞 愈伤组织 杂种植株 去壁 去壁 融合 再生出细胞壁 脱分化 再分化 植物体细胞杂交技术 马的细胞A 天鹅的细胞B 飞马？ A细胞 B细胞 杂交细胞 一 动物细胞融合技术 实例：1970年，人—鼠细胞荧光标记融合实验 实验表明：细胞膜具有流动性 一.动物细胞融合技术 4 使两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的技术。 1、概念： 3、原理： 细胞膜具有一定的流动性 4、诱导方法 物理法：电融合法 化学法：聚乙二醇融合法 一、动物细胞融合技术 生物法：灭活病毒诱导法 2、结果： 融合后的细胞具有原来两个或多个细胞的遗传信息 灭活病毒诱导细胞融合的原理是 动物细胞融合实质及完成的标志： 细胞核的融合 4. 意义： （1）研究遗传、细胞免疫、肿瘤和培育生物 新品种等重要手段 （2）为制造单克隆抗体开辟了新途径 5. 应用： 一、动物细胞融合技术 突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能 第2章 第2节 人教版 选择性必修3 8 第2课时 动物细胞融合与单克隆抗体 1 2 阐明动物细胞融合技术的概念，举例说出诱导动物细胞融合的方法。 概述单克隆抗体的制备过程。 学习目标 使两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的技术。 1、概念： 3、原理： 细胞膜具有一定的流动性 4、诱导方法 物理法：电融合法 化学法：聚乙二醇融合法 一、动物细胞融合技术 生物法：灭活病毒诱导法 2、结果： 融合后的细胞具有原来两个或多个细胞的遗传信息 二、单克隆抗体 1.定义： 体液免疫 抗体 抗体 2.抗体的分布： 机体产生的，专门应对抗原的蛋白质。 ①血清（主要） ②组织液及外分泌液（如乳汁中） 早期获得抗体的方法 动物体内 特定 抗原 浆细胞 抗体（血清） 反复 注射 缺点：制备的抗体产量低，纯度低，特异性差。 抗体不纯 多种 二、单克隆抗体及其应用 单 克隆 抗体 遗憾：体外培养时，一个B淋巴细胞不能无限增殖 一个B淋巴细胞 B淋巴细胞群 克隆 获得大量的单一抗体 单一抗体 二 B淋巴细胞 抗体 产生 能产生抗体， 但不能大量增殖 骨髓瘤细胞 能大量增殖，但不能产生抗体 二 B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 特点：既能大量增殖， 又能产生抗体 杂交瘤细胞 单克隆抗体的制备过程 获得多种B淋巴细胞 培养骨髓瘤细胞 诱导融合 注射特定抗原 培养骨髓瘤细胞 骨髓瘤细胞 诱导融合 单克隆抗体的制备过程 目的：获得能产生特定抗体的B淋巴细胞 1 2 3 4 诱导融合后会出现哪些不同细胞？ 多种B淋巴细胞 二 单克隆抗体及其应用 用特定的抗原对小鼠进行免疫，并从该小鼠的脾中得到能产生特定抗体的 B 淋巴细胞。 抗原1 从小鼠脾脏中获取B淋巴细胞 B细胞1 B细胞2 B细胞3 B细胞4 …… 等多种B细胞 培养骨髓瘤细胞 诱导融合 融合后会出现哪些不同细胞？ B细胞1 骨髓瘤细胞 杂交瘤细胞1 B细胞2 B细胞3 B细胞4 骨髓瘤细胞 骨髓瘤细胞 骨髓瘤细胞 杂交瘤细胞2 杂交瘤细胞3 杂交瘤细胞4 B细胞 B细胞 骨髓瘤细胞 骨髓瘤细胞 B细胞 骨髓瘤细胞 融合的杂交瘤细胞 融合的具有同种核的细胞 未融合的细胞 第一次筛选的目的：筛选出杂交瘤细胞 方法：用特定的选择培养基 知识拓展：第一次筛选获得杂交瘤细胞的原理 ①细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基蝶呤阻断。 ②人淋巴细胞中有这两种DNA的合成途径，但不能分裂增殖。 ③鼠骨髓瘤细胞中只有D途径，没有S途径，但能不断分裂增殖。 筛选出杂交瘤细胞方法？ B淋巴细胞及同型融合细胞： 不能无限增殖，死亡 骨髓瘤细胞及同型融合细胞： 不能无限增殖，死亡 杂交瘤细胞： 能无限增殖，生长 培养基中加入氨基蝶呤（HAT培养基） 单克隆抗体的制备过程 特定培养基 抗原抗体杂交 获得多种B淋巴细胞 第一次筛选：筛选杂交瘤细胞 培养＋第二次筛选：筛选产生目的抗体的杂交瘤细胞 培养骨髓瘤细胞 诱导融合 第二次筛选 第一次筛选得到的 杂交瘤细胞（多种） 多孔板 单克隆抗体的制备过程 方法：克隆化培养和 抗体检测 二 单克隆抗体及其应用 将第一次筛选后得到的杂交瘤细胞进行培养并稀释 每一个孔中尽量只接种一个杂交瘤细胞。 二 单克隆抗体及其应用 二 单克隆抗体及其应用 二 单克隆抗体及其应用 抗原1 二 单克隆抗体及其应用 抗体检测呈阳性 第二次筛选 第一次筛选得到的 杂交瘤细胞（多种） 多孔板 单克隆抗体的制备过程 方法：克隆化培养和 抗体检测 原理：抗体与抗原特异性结合 目的：获得足够数量的能分 泌特定抗体的杂交瘤 细胞 抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞特点： 既能迅速大量增殖又能产生特定的抗体 单克隆抗体的制备过程 特定培养基 抗原抗体杂交 获得多种B淋巴细胞 大量培养杂交瘤细胞 第一次筛选：筛选杂交瘤细胞 培养＋第二次筛选：筛选产生目的抗体的杂交瘤细胞 培养骨髓瘤细胞 诱导融合 抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞 单克隆抗体 注射到小鼠腹腔内增殖 腹水 培养液 单克隆抗体的制备过程 体外培养 注射抗原 多种B淋巴细胞 培养骨髓瘤细胞 骨髓瘤细胞 细胞融合 诱导融合 多种细胞 杂交瘤细胞 多轮次的克隆化培养和抗体检测 抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞 体外培养 注射到腹腔 单克隆抗体 从培养液或小鼠腹水中获得大量的单克隆抗体 第一次筛选 第二次筛选 单克隆抗体的制备过程 动物细胞融合、动物细胞培养 1.应用到的细胞工程技术: 单克隆抗体的制备过程 2.单克隆抗体的优点 （1）能准确地识别抗原的细微差异 （3）可以大量制备。 （2）与特定抗原发生特异性结合 三.单克隆抗体的应用 在受精后不久，胎盘滋养层细胞就会分泌人绒毛膜促性腺激素（HCG），在孕妇的尿液中大量存在。而在非妊娠妇女尿液中几乎不含有。 1.诊断试剂 抗人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体 二 单克隆抗体及其应用 抗体-药物偶联物（ADC） 细胞凋亡 ① ADC被细胞吞噬 ② ⑤ ADC 抗体 药物 接头 实现了对肿瘤细胞的选择性杀伤。 三.单克隆抗体的应用 2.运载药物 将细胞毒素与能特异性识别肿瘤抗原的单克隆抗体结合 思考 • 讨论 讨论1：ADC的抗体和药物各具有什么作用？ 抗体主要发挥靶向运输作用，即通过特异性结合靶细胞表面的抗原，将连接的药物输送到靶细胞； 抗体-药物偶联物（ADC） 三.单克隆抗体的应用 2.运载药物 药物发挥治疗效应，如杀伤靶细胞。 36 思考 • 讨论 抗体-药物偶联物（ADC） 三.单克隆抗体的应用 2.运载药物 讨论3：单克隆抗体诊断试剂盒和ADC在临床应用上各具有什么优势？ ① 单克隆抗体诊断试剂盒中的单克隆抗体只与特定的抗原反应，因此检测的特异性强，灵敏度高 ② ADC具有靶点清楚、毒副作用小等优点。 37 $$