2025届高三生物一轮复习课件第2讲微生物的培养技术及应用

第2讲 　 微生物的培养技术及应用 一、微生物 1.微生物的定义： 肉眼难以看清，需要借助光学显微镜或电子显微镜才能观察到的一切微小生物的总称。 Q：有没有可能不借助显微镜观察到微生物类群呢？ 2.微生物菌落 分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体，这就是菌落。 由单个微生物繁殖形成的纯培养物就是一个单菌落 不同菌落的大小、形状、颜色等不同。菌落是鉴定菌种的重要依据。 无细胞结构 原核细胞 真核细胞 真菌：酵母菌、霉菌（毛霉、根霉）、蘑菇等；原生生物：草履虫 微生物的类群 病毒：SARS病毒、新冠病毒等RNA病毒；噬菌体等DNA病毒 细菌、蓝细菌、大肠杆菌、乳酸菌等；放线菌:链霉菌等 本章提及的微生物主要指用于发酵的细菌和真菌。 一、微生物 3.微生物的类群： 在实验室培养微生物的要求？ 提供微生物生长繁殖所需营养和环境条件 ——培养基 确保其它微生物无法混入 ——无菌技术 并将需要的微生物分离出来 ——纯培养技术 微生物结构简单、形体微小，眼睛看不到，若想得到纯净的微生物，就必须对其进行培养和分离。 二、培养基 二、培养基 1.培养基的概念： 2.培养基的用途： 3.培养基的种类： 人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。 用以培养、分离、鉴定、保存微生物或积累其代谢物。 培养基种类 特点 用途 　液体　 培养基 不加凝固剂 扩大培养，工业生产 半固体培养基 加凝固剂(如琼脂)　  观察微生物的运动、分类鉴定 　固体　 培养基 加凝固剂(如琼脂) 微生物分离、鉴定,活菌计数 ,菌种保藏  ①按物理状态分类 二、培养基 3.培养基的种类： ②按功能分类 种类 制备方法 原理 用途 举例 选择培 养基 培养基中加入某些化学物质，促进目的微生物生长；抑制其他微生物生长 依据微生物对某些物质的特殊需求或抗性 从众多微生物中富集、分离出特定的微生物 加入　青霉素　分离得到酵母菌和霉菌　  鉴别培 养基 培养基中加入某种　指示剂或化学药品 产生特定的颜色或其他变化 鉴别不同种类的微生物 用 伊红—亚甲蓝　培养基鉴别大肠杆菌  二、培养基 3.培养基的种类： ③按化学成分分类 培养基种类 特点 用途 天然培养基 含　化学成分不明确　的天然物质  工业生产 合成培 养基 　培养基成分明确　(用化学成分已知的化学物质配成)  微生物的 分类、鉴定 【注意】病毒为非细胞结构生物，只能在活细胞中营寄生生活，目前不能利用人工培养基来培养 如果大肠杆菌培养基里不添加琼脂，大肠杆菌的生长情况是（ ） A．正常生长 B．无法存活 C．少数能存活 D．无法判断 琼脂不提供能量和营养 A （1）基本成分： ①碳源 无机碳源：CO2、CO32-、HCO3-等 有机碳源：葡萄糖、牛肉膏、蛋白胨等 自养微生物 异养微生物 碳源功能：①构成细胞的物质和一些代谢产物; ②有机碳既是碳源又是能源 碳源、氮源、水、无机盐 二、培养基 4.培养基的营养成分： 注：含C、H、O、N的有机物是异养型微生物的碳源、氮源、能源 ③无机盐： Ca、K 、Mg为大量元素；Zn、Mo、Cu、Mn等微量元素 氮源功能：主要用于合成蛋白质、核酸及含氮代谢产物等 二、培养基 4.培养基的营养成分： ②氮源 无机氮源：N2、NH3、NH4＋、NO3- 等 有机氮源：牛肉膏、蛋白胨、尿素、氨基酸等 功能：提供无机营养、调剂pH、维持渗透压 功能：水是极性分子，良好的溶剂；参与许多生物化学反应等 ④水： 注意(做题注意积累) 如自养型微生物利用CO2，只是将其作为合成(CH2O)的原料，并非从其中得到能量 如氨即NH3可为硝化细菌提供能量和氮源 蛋白胨既可以作为氮源也能提供能量 如牛肉膏、蛋白胨 (4)有些有机物既可以提供碳源，也可以提供氮源 (2)有机碳源可以提供能量(如糖类)，无机碳源不能提供能量 (3)有机氮源可以提供能量，有些无机氮源也能提供能量 (1)不是所有微生物的培养基都需要加入碳源、氮源 如自养型微生物可以直接利用空气中的CO2，故培养时可以不加碳源 固氮菌可以直接利用空气中的N2，故培养时可以不加氮源 表1-1 1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的营养组成 组分 含量 提供的主要营养 牛肉膏 5g 碳源、氮源、磷酸盐和维生素等 蛋白胨 10g 碳源、氮源和维生素等 NaCl 5g 无机盐 H2O 定容至1000ml 水 （2）特殊需求：还需满足微生物对 pH、特殊营养物质、氧气的需求 维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等 举例说明： 培养乳酸菌需要添加维生素 培养霉菌时需将pH调至酸性 培养细菌时将pH调至中性或微碱性 培养厌氧微生物时需要提供无氧条件 二、培养基 4.培养基的营养成分： 几种微生物的营养和能量来源 二、培养基 三、无菌技术 1.对象： ①实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。 ②培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。 注意：实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。为了避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在超净工作台并在酒精灯火焰附近进行。 2.关键： 获得纯净的微生物培养物的关键是防止杂菌污染。 3.目的： 纯净的微生物培养物 获得_________________________。 4.常用方法： ________和________。 消毒 灭菌 条件 结果 常用方法 应用范围 消毒 较为温和的物理、化学或者生物方法 仅杀死物体表面或内部的部分微生物，一般不能消灭芽孢和孢子 煮沸消毒法 日常用品，罐装食品、家庭餐具 巴氏消毒法 不耐高温的液体 化学药剂消毒法 用酒精擦拭双手，用氯气消毒水源 （石炭酸、碘酒涂抹）生物活体（皮肤、伤口）等 紫外线消毒法 用紫外灯照射接种室、接种箱、超净工作台。 灭菌 强烈的理化因素 杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子 灼烧灭菌法 接种工具(涂布器、接种环)、试管口或瓶口（可迅速彻底的灭菌） 干热灭菌法 玻璃器皿、金属用具 湿热灭菌法 培养基及容器(常用高压蒸汽灭菌法) 实质：让微生物的蛋白质或核酸变性 5.高压蒸汽灭菌问题分析： (1)高压蒸汽灭菌开始之前要将锅内的冷空气排尽。在使用高压蒸汽灭菌锅灭菌时，灭菌锅内冷空气的排出是否完全极为重要，因为空气的膨胀压大于水蒸气的膨胀压，所以，当水蒸气中含有空气时，在同一压力下，含空气蒸汽的温度低于饱和蒸汽的温度。 (2)灭菌完毕后，要待压力降到零时才能打开排气阀。否则锅内压力突然下降，使容器内的培养基由于内外压力不平衡而冲出试管口，造成棉塞沾染培养基而发生污染。 (3)在同一温度下，湿热的杀菌效力比干热大。 三、无菌技术 √ 1．(2024·荆荆宜三校高三联考)无菌技术是微生物培养及动、植物细胞工程的关键技术。下列关于无菌技术的操作的叙述，正确的是(　　) A．在超净工作台进行接种操作时可喷洒石炭酸以加强消毒效果 B．组培苗炼苗时所用的蛭石或珍珠岩通常不需要消毒 C．制备培养基的正确顺序是配制培养基→灭菌→倒平板 D．湿热灭菌就是高压蒸汽灭菌，可对实验中使用的微量离心管、细胞培养瓶等进行灭菌 √ 2．(2024·华中师大一附中高三模拟)某研究小组的两位同学为研究手机表面和马桶按钮上的微生物，分别取样并进行了微生物培养实验，其过程和结果如下图所示。下列相关说法正确的是(　　)   A.为了防止杂菌污染，在实验前需要对培养皿、试管和菌悬液等进行灭菌 B．若甲同学还分别检测了两物体表面的微生物数量，则检测值可能比实际值偏小 C．图中的特殊处理是指将无菌棉插入蒸馏水中，多次换水并振荡 D．造成甲、乙两同学的实验结果不同的原因可能是培养基不同或接种方法不同 四、微生物的纯培养 *单菌落一般是由单个微生物繁殖形成的纯培养物 常用方法： 法和 法。 微生物群 分散 单个细胞 单个菌落 繁殖 不同菌落的形状、大小、颜色等不同。 菌落是鉴定菌种的重要依据。 1.概念辨析： 2.纯培养的步骤： 制备培养基 灭菌 倒平板 接种和分离 培养 (先调pH，再灭菌) 四、微生物的纯培养 配制培养基原则：目的明确、营养协调、pH适宜 分离培养酵母菌时通常使用马铃薯蔗糖培养基 2.纯培养的步骤： 制备培养基 灭菌 倒平板 接种和分离 培养 四、微生物的纯培养 （1）倒平板的操作步骤 （1）倒平板的操作步骤 注意事项： ①培养基要冷却到50 ℃左右时开始倒平板。温度过高会烫手，过低培养基又会凝固。 ②要使锥形瓶的瓶口通过酒精灯火焰。通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。 ③倒平板时，要用左手的拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，不要完全打开，以免杂菌污染培养基。 ④平板冷凝后，要将平板倒置。因为平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，平板倒置后，既可避免培养基表面的水分过快地挥发，又可防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。　　　 制备培养基 灭菌 倒平板 接种和分离 培养 2.纯培养的步骤： 制备培养基 灭菌 倒平板 接种和分离 培养 2.纯培养的步骤： 四、微生物的纯培养 a.灼烧接种环，直至接种环金属丝烧红 f.将皿盖打开一条缝隙，将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划3-5条平行线，盖上皿盖。 e.试管口通过火焰，并塞上棉塞 b.在火焰旁冷却接种环，拔出酵母菌培养液试管的棉塞 c.试管口通过火焰 d.在火焰附近用接种环蘸取一环菌液 g.灼烧接种环，待其冷却后，从第一次划线的末端开始作第二次划线。重复以上操作，作第三、四、五次划线。 四、微生物的纯培养 （2）平板划线法分离菌落 2.纯培养的步骤： ①平板划线法步骤: 制备培养基 灭菌 倒平板 接种和分离 培养 以免接种环温度太高，杀死菌种。 接种环灭菌 接种环灭菌 第2区划线 接种环灭菌 第1区划线 1 2 3 4 5 a.接种环从始至终只蘸一次菌液,但要在培养基不同位置连续划线多次 b.每次划线前、后接种环均要进行灭菌 c.在作第二次以及其后的划线操作时，总是从上一次划线的末端开始划线。 目的：能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。 ②平板划线法注意事项: 四、微生物的纯培养 （2）平板划线法分离菌落 2.纯培养的步骤： 分区划线法（最常用） 接种环灭菌 接种环灭菌 第2区划线 接种环灭菌 第1区划线 1 2 3 4 5 d.划线时最后一区和第一区不能首尾相接。否则无法获得单一菌落。 e.划线结束后,培养皿倒置培养。 f.不能划破培养基 g.取菌种、划线操作均在酒精灯火焰旁的无菌区域进行。 h.划3个平板（重复实验）1个不划线（空白对照） ②平板划线法注意事项: 四、微生物的纯培养 （2）平板划线法分离菌落 2.纯培养的步骤： 分区划线法（最常用） ③平板划线法中几次灼烧接种环的目的 四、微生物的纯培养 （2）平板划线法分离菌落 2.纯培养的步骤： 连续划线法 制备培养基 灭菌 倒平板 接种和分离 培养 2.纯培养的步骤： 四、微生物的纯培养 五、微生物的选择培养和计数 PCR是一种在体外DNA复制的技术，此项技术要求使用耐高温（93℃）的DNA聚合酶。 1.科学实例——寻找耐高温的DNA聚合酶： （1）筛选原因： 水生栖热菌能在70-80℃高温条件下生存，而绝大多数微生物在此条件下不能生存。 耐高温的酶 耐高温生物体 高温环境（热泉、火山口） 寻找 寻找 （2）筛选思路： 五、微生物的选择培养和计数 2.选择培养基： (1)概念：在微生物学中，将允许__________的微生物生长，同时_____________其他种类微生物生长的培养基。 (2)原理：人为提供有利于__________生长的条件(包括营养、温度和pH等)，同时____________其他微生物的生长。 特定种类 抑制或阻止 目的菌 抑制或阻止　 (3)类型： 在培养基中加入某种化学物质 改变培养基中的营养成分 改变微生物的培养条件 目的是培养、分离出特定微生物 五、微生物的选择培养和计数 2.选择培养基： (3)类型： 类型 条件 分离得到的菌种 ①改变培养条件 ②利用某种化学物质进行选择培养 ③营养缺陷 70～80℃的高温 水生栖热菌 加入青霉素 酵母菌、霉菌等真菌 高浓度食盐 金黄色葡萄球菌 不加含碳有机物 不加氮源 自养型微生物 固氮菌 五、微生物的选择培养和计数 2.选择培养基： (4)实例： 分离分解尿素的细菌的选择培养基 ①设计原理：分解尿素的细菌能合成________，催化尿素分解产生________，为其生长提供氮源。 ②配方设计：以________为唯一________。 脲酶　 NH3　 尿素 氮源 [易错提醒]　能在选择培养基上生长的不一定是所需要的目的菌。原则上选择培养基只能允许特定种类的微生物生长，但实际上，微生物的培养是一个非常复杂的问题，有些微生物可以利用其他微生物的代谢物进行生长繁殖，因此能在选择培养基上生长的微生物不一定都是所需的微生物，还需进一步的鉴定。 用于鉴别大肠杆菌 →菌落呈深紫色，并有金属光泽 伊红-亚甲蓝琼脂培养基 拓展延伸——鉴别培养基 可以观察菌落周围是否出现降解圈，降解圈直径与菌落直径比值越大，说明分解能力越强。 液体培养基： 可以直接看液体的变色情况。 固体培养基： （2）方法 （1）概念：在培养基中加入某种指示剂或化学药品(不影响微生物正常生长)，使微生物的某种代谢产物与培养基中的特定指示剂或化学药品发生反应。从而达到鉴定的作用。 （3）实例 CO(NH2)2 + H2O 2NH3 + CO2 脲酶 呈碱性，遇酚红指示剂呈 色。 红 在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂。培养某种细菌后，如果PH升高，指示剂将变红，说明该细菌能够分解尿素。 ②鉴别尿素分解菌 （3）实例 拓展延伸——鉴别培养基 （3）实例 ③淀粉培养基鉴别产淀粉酶菌株 现象：淀粉被分解后出现淀粉水解圈 拓展延伸——鉴别培养基 拓展延伸——分解纤维素的微生物的分离 (1)分离方法与原理 (2)纤维素分解菌的培养基成分及鉴定原理 刚果红培养基 刚果红培养基用于鉴别纤维素分解菌 透明圈的大小与纤维素酶的___________________ 数量和活性（多少和活性） 微生物的鉴别方法： 菌落特征鉴别法 根据微生物在固体培养基表面形成的菌落的形状、大小、隆起程度和颜色等特征进行鉴别 指示剂鉴别法 如以尿素为氮源的培养基中加入酚红指示剂,培养某种微生物后,培养基变红,说明该种微生物能够分解尿素 染色鉴别法 如利用刚果红染色法,根据培养基中出现以纤维素分解菌为中心的透明圈来筛选分解纤维素的微生物 稿定PPT 稿定PPT，海量素材持续更新，上千款模板选择总有一款适合你 02 归纳总结 五、微生物的选择培养和计数 3.微生物的选择培养——分离并计数分解尿素的细菌： （2）步骤： 细菌宜在酸碱度接近中性的潮湿土壤中生长，绝大部分分布在距地表3~8cm的土壤层。铲去表层土3cm左右，取样，将样品装入事先准备好的信封中。 取土样时用的铁铲和取样袋在使用前都需要灭菌。操作完成后，一定要洗手。 II.土壤取样 I.制备培养基：制备以尿素为唯一氮源的选择培养基 稀释涂布平板法 （1）方法： 五、微生物的选择培养和计数 将10g土样加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀。取1mL上清液加入盛有9mL无菌水的试管中，依次等比稀释。 1×10 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL 1×102 1×103 1×104 1×105 1×106 1×107 9 mL 无菌水 90mL无菌水 10g III.等比稀释样品 3.微生物的选择培养——分离并计数分解尿素的细菌： （2）步骤： 五、微生物的选择培养和计数 将10g土样加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀。取1mL上清液加入盛有9mL无菌水的试管中，依次等比稀释。 III.等比稀释样品 充分摇匀：目的是提高培养液的溶解氧的含量、使菌体充分接触培养液，提高营养物质的利用率 3.微生物的选择培养——分离并计数分解尿素的细菌： （2）步骤： 酒精 培养基表面 五、微生物的选择培养和计数 IV.涂布平板 3.微生物的选择培养——分离并计数分解尿素的细菌： （2）步骤： 消毒 灭菌 注意：过程中所有操作都应在酒精灯火焰旁进行。避免周围环境中的微生物污染培养基。 五、微生物的选择培养和计数 V.菌落培养 3.微生物的选择培养——分离并计数分解尿素的细菌： （2）步骤： 恒温培养箱 稀释103倍 稀释104倍 稀释105倍 空白对照 待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板倒置，放入30-37℃的恒温培养箱中，培养1-2d。在涂布有合适浓度菌液的平板上就可以观察到分离的单菌落。 1．(选择性必修3 P18 探究·实践)测定土壤中细菌的数量，一般选用1×104、1×105和1×106倍稀释的稀释液进行平板培养。测定土壤中不同的微生物(如真菌、放线菌)使用的稀释度一样吗？举例说明。____________________________________________________________________________________________________________________。 不一样。测定真菌一般用1×102、1×103和1×104倍稀释；测定放线菌一般用1×103、1×104和1×105 倍稀释 2．(选择性必修3 P20 练习与应用)在富含纤维素的环境中寻找纤维素分解菌的原因是______________________________________________________ _____________________________________________________________________________________。 由于生物与环境的相互依存关系，在富含纤维素的环境中纤维素分解菌的含量相对较高，从这种土样中获得目的微生物的概率高于普通环境 应设置牛肉膏蛋白胨培养基进行接种后培养作为对照，观察牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基上的菌落数目，若牛肉膏蛋白胨培养基生长的菌落数菌多于该选择培养基，则该选择培养基具有选择性。 基础培养基 选择培养基 Q：怎么证明一个选择培养基具有选择性呢？ 五、微生物的选择培养和计数 3.微生物的选择培养——分离并计数分解尿素的细菌： 需将未接种的培养基同时进行培养——即空白对照。如不接种的选择培养基和牛肉膏蛋白胨培养基 Q：怎么验证培养基中是否有杂菌污染？ 五、微生物的选择培养和计数 3.微生物的选择培养——分离并计数分解尿素的细菌： （3）微生物的数量测定： I.方法 ②显微镜直接计数法 ①稀释涂布平板法计数法 （间接计数法） （直接计数法） ①稀释涂布平板法计数法 a.原理 当样品的稀释度足够 时，培养基表面生长的一个 ，来源于 中的一个 。通过计数平板上的 数，就能推测出样品中大约含有多少 。 高 菌落 样品稀释液 活菌 菌落 活菌 样品的稀释度将直接影响平板上的菌落数目 五、微生物的选择培养和计数 3.微生物的选择培养——分离并计数分解尿素的细菌： （3）微生物的数量测定： ①稀释涂布平板法计数法 b.计数原则 一般选择菌落数为30~300的平板计数。 同一稀释度下，应至少对3个平板进行重复计数，然后求出平均值。 [易错提醒]　关于“选择菌落数在30～300的平板”的两个理解误区：只得到1个菌落数在30～300的平板不符合实验的重复原则，易受到偶然因素的影响；得到3个或3个以上菌落数在30～300的平板也不一定正确，如得到3个平板，菌落数分别为230、34、240，虽然菌落数均在30～300之间，但由于34与另外两个平板上的菌落数差异较大，应找出原因并重新实验。 五、微生物的选择培养和计数 3.微生物的选择培养——分离并计数分解尿素的细菌： （3）微生物的数量测定： ①稀释涂布平板法计数法 c.统计结果 统计的菌落往往比活菌的实际数目低 统计的结果一般用菌落数而不是活菌数。 原因：当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落 注：恰当的稀释度、涂布是否均匀是成功统计菌落数目的关键。 五、微生物的选择培养和计数 3.微生物的选择培养——分离并计数分解尿素的细菌： （3）微生物的数量测定： ①稀释涂布平板法计数法 d.计算公式 M代表稀释倍数 C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数 V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL) 每g样品中的菌落数＝ (C÷V)×M 　实战训练　 1.甲同学在稀释倍数为106的培养基中测得平板上菌落数的平均值是234个，涂布平板时所用稀释液的体积为0.1ml，那么稀释倍数为106的试管中细菌的浓度是_________个/ml,稀释倍数为10的锥形瓶的浓度为________个/ml，所以每克样品中的细菌数目是 _______________ 234 0.1 × 105 234/0.1 234 0.1 × 106 √ 3．尿素容易保存，是目前使用量较大的一种化学氮肥，尿素分子并不能直接被农作物吸收，只有被尿素分解菌分解成氨之后才能被植物利用。下图是从土壤中分离、计数尿素分解菌的过程，下列有关分析正确的是(　　) A．若②过程稀释了10倍，则乙锥形瓶里盛有9 mL 无菌水 B．③的接种方法可用平板划线法或稀释涂布平板法 C.a、b、c培养基可以用牛肉膏蛋白胨培养基 D．若①②过程分别稀释了10倍，a、b、c培养基上的菌落数依次为57、58、56个，则10 g土样中的尿素分解菌数量约为5.7×109个 返回导航 五、微生物的选择培养和计数 3.微生物的选择培养——分离并计数分解尿素的细菌： （3）微生物的数量测定： ②显微镜直接计数法 a.统计工具： 细菌计数板或血细胞计数板 b.具体方法： 利用细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。 血细胞计数板 常用于相对较大的酵母菌细胞、霉菌孢子等的计数。 细菌计数板 对细菌等较小的细胞进行观察和计数。 五、微生物的选择培养和计数 3.微生物的选择培养——分离并计数分解尿素的细菌： （3）微生物的数量测定： ②显微镜直接计数法 c.统计结果： 统计的结果使活菌落数和死菌数的总和。 缺点：不适于对运动细菌的计数。 ——导致显微镜计数法计数的结果比实际值偏大 d.方法特点： 优点：是一种常用的、快速直观的测定微生物数量的方法。 e.计算公式： 每毫升原液所含细菌数＝每小格平均细菌数×400×10000×稀释倍数 两种纯化细菌的方法的比较 项目 平板划线法 稀释涂布平板法 纯化原理 通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面 将菌液进行一系列的梯度稀释，稀释度足够高时，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞 主要步骤 平板划线操作 系列稀释操作和涂布平板操作 接种工具 接种环 涂布器 项目 平板划线法 稀释涂布平板法 平板示意图     关键操作 接种环在固体培养基表面连续划线 ①一系列的梯度稀释；②涂布平板操作 优点 可以观察菌落特征，对混合菌进行分离 可以计数，可以观察菌落特征 缺点 不能计数 操作复杂，需要涂布多个平板 共同点 都要用到固体培养基；都需进行无菌操作；都会在培养基表面形成单菌落；都可用于观察菌落特征 平板划线法最开始的划线很可能菌类会长成一片，导致无法计数，此外灼烧接种环的时候也会杀死一部分菌类。 与平板划线法相比，为什么稀释涂布平板法可以用于细菌的计数？ 稀释涂布平板法会进行等比稀释，在合适的稀释倍数下，均匀涂布得到的菌落互不接触，可以确定菌类的密度，再通过计算可以得知原液的菌落数。 平板划线法为什么不能达到对细菌进行计数的目的？ 4．(2024·广东茂名一模)研究人员欲筛选出能高效降解一次性口罩(主要是由C、H两种元素组成的聚丙烯纤维)的细菌，设计了下图所示的流程。回答下列问题：   (1)土壤是微生物的天然培养基，该培养基能为微生物的生长提供的四大营养物质分别是碳源、________________________。 解析：培养基能为微生物的生长提供的四大必需营养物质分别是碳源、氮源、水和无机盐，土壤是微生物的天然培养基，也能为微生物的生长提供这些营养物质。 氮源、水和无机盐　 (2)通过相关实验来选择较合适的土壤样品，该实验的自变量是_____________，最适合作为选择土壤样品的指标是____________________。 解析：该实验的目的是筛选出能高效降解一次性口罩的细菌，通过实验选择较合适的土壤样品时，实验的自变量是土壤样品的种类，因变量是一次性口罩的腐烂程度，其可以作为选择合适土壤样品的指标。 土壤样品的种类 一次性口罩的腐烂程度　 (3)图中“甲”指的是________，使用的是液体培养基，目的是____________________________________。 解析：分析题图可知，题图中“甲”指的是选择培养，可获得能够降解聚丙烯纤维的细菌；利用液体培养基可增大菌体与培养液的接触面积，提高聚丙烯纤维降解菌的比例和密度。 选择培养　 提高聚丙烯纤维降解菌的比例和密度　 (4)将分离纯化得到的不同菌种分别接种到鉴别培养基上，鉴别培养基应以______________为唯一碳源，并加入了能与之结合的显色剂。设不同菌种的菌落面积为s，菌落周围透明圈的面积为S，选择S/s的值________的菌落，就是能高效降解一次性口罩的目的菌群。 解析：一次性口罩的主要成分是聚丙烯纤维，要分离出能高效降解一次性口罩的菌种，鉴别培养基应以聚丙烯纤维为唯一碳源，并加入能与之结合的显色剂。设不同菌种的菌落面积为s，菌落周围透明圈的面积为S，S/s的值大的菌落就是能高效降解一次性口罩的目的菌群，因为透明圈面积与菌落面积的比值越大，说明降解聚丙烯纤维的效果越好。 聚丙烯纤维　 　大 5．(2024·湖北高三模拟)垃圾分类是对垃圾收集处置传统方式的改革，是对垃圾进行有效处置的一种科学管理方法。去掉可回收的、不易降解的物质，可以减少的垃圾数量达60%以上，从而减少污染。处理生活垃圾的有效方法之一是用微生物对其进行降解，下图表示筛选高效降解淀粉菌种的过程。下列相关叙述正确的是(　　) A．乳制品厂废水中含有大量淀粉，该废水是分离高效降解淀粉菌种的首选样品 B．该实验中菌液接种到培养基上所用的接种工具只能选择火焰灼烧过的接种环 C．稀释涂布平板法除可以用于分离微生物外，也常用来统计样品中活菌的数目 D.由于菌种对碘的分解能力不同，所以菌落①与菌落②产生透明圈的大小不同 √ √ 6．(2021·山东等级考)解脂菌能利用分泌的脂肪酶将脂肪分解成甘油和脂肪酸并吸收利用。脂肪酸会使醇溶青琼脂平板变为深蓝色。将不能直接吸收脂肪的甲、乙两种菌分别等量接种在醇溶青琼脂平板上培养。甲菌菌落周围呈现深蓝色，乙菌菌落周围不变色。下列说法错误的是(　　) A．甲菌属于解脂菌 B．实验中所用培养基以脂肪为唯一碳源 C．可将两种菌分别接种在同一平板的不同区域进行对比 D．该平板可用来比较解脂菌分泌脂肪酶的能力 平板划线 稀释涂布平板 $$