专题02 微生物的培养技术及应用（四川专用）-【好题汇编】备战2024-2025学年高二生物下学期期中真题分类汇编

专题2 微生物的培养技术及应用 考点概览 考点01微生物的基本培养技术 考点02 微生物的选择培养和计数 微生物的基本培养技术考点01 1．(24-25高二下·四川眉山东坡区四川眉山中学校·期中)下列说法错误的是（    ） A．当所需微生物在混合菌种中不是优势种时，可通过稀释涂布平板法将其分离 B．纤维素为唯一碳源的固体培养基中添加刚果红可以初步分离和鉴定纤维素分解菌 C．当所选质粒上标记基因为氨苄青霉素抗性基因时，作为受体大肠杆菌应不含氨苄青霉素抗性基因，以便于筛选 D．植物组织培养过程中将获得的外植体用75%的酒精和次氯酸钠溶液消毒 【答案】A 【来源】四川省眉山市东坡区四川省眉山中学校2024-2025学年高二上学期12月期中生物试题 【分析】实验室中筛选微生物的原理是：人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、pH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。选择培养的目的是增加目的菌的浓度，以确保能够从样品中分离得到所需要的微生物。刚果红可与纤维素形成红色复合物，但并不和纤维素水解后的纤维二糖和葡萄糖发生颜色反应；当纤维素被纤维素酶水解后，刚果红-纤维素复合物就无法形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，据此可筛选出纤维素分解菌。 【详解】A、稀释涂布平板法进行操作时，需要首先对菌液进行梯度稀释，当所需微生物在混合菌群中不是优势中，稀释会进一步降低其密度，经涂布后很可能无法得到所需微生物的单菌落，A错误； B、以纤维素为唯一碳源的固体培养基可以初步分离纤维素分解菌，培养基中添加刚果红可以鉴定纤维素分解菌，B正确； C、氨苄青霉素抗性基因是重组质粒上的标记基因，用于筛选重组质粒的表达状况，所以作为受体的大肠杆菌不应含有氨苄青霉素抗性基因，以排除干扰，C正确； D、外植体应先用75%的酒精消毒30s，然后用无菌水清洗2-3次，再用次氯酸钠溶液处理30min后，然后立即用无菌水清洗2-3次，D正确。 故选A。 2．(23-24高二下·四川自贡第一中学校·期中)微生物培养最基本的要求是无菌操作，下列对培养基、培养皿、接种环、双手、空气、牛奶所采用的灭菌或消毒方法的正确顺序依次是（    ） ①化学消毒②湿热灭菌③干热灭菌④紫外线灭菌⑤灼烧灭菌⑥巴氏消毒法 A．⑤③⑤①④⑥ B．③②⑤④①⑥ C．②③⑤①④⑥ D．②②⑤④①⑥ 【答案】C 【来源】 四川省自贡市第一中学校2023-2024学年高二下学期期中考试生物试题 【分析】消毒和灭菌是两个不同的概念，消毒是指使用较为温和的物理、化学或生物的方法杀死物体表面或内部的一部分微生物。灭菌则是指使用强烈的理化方法杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。消毒方法包括煮沸消毒法、巴氏消毒法、化学药剂消毒法、紫外线消毒法；常用的灭菌方法包括干热灭菌法、灼烧灭菌法、湿热灭菌法（如高压蒸汽灭菌法）。 【详解】为了保持培养基中的水分不被烘干，常采用②湿热灭菌法对培养基进行灭菌；培养皿等需要保持干燥的玻璃器皿可以采用③干热灭菌进行灭菌；接种过程中需要对接种环进行⑤灼烧灭菌；操作者双手可用酒精等化学药剂进行消毒，即①化学消毒法；为了杀死空气中微生物，常采用④紫外线消毒法；为防止牛奶中营养成分被破坏，常采用 ⑥巴氏消毒法处理牛奶，综上所述，对培养基、培养皿、接种环、双手、空气、牛奶所采用的灭菌或消毒方法的正确顺序依次是②③⑤①④⑥，ABD错误，C正确。 故选C。 3．(23-24高二下·四川广安友实学校、邻水正大实验学校·期中)抗生素I-IV均可治疗黄色葡萄球菌（Sau）引起的肺炎，为选出最佳疗效的抗生素，研究者将分别含等剂量抗生素的四张大小相同的滤纸片置于Sau均匀分布的平板培养基上，在适宜条件下培养48h，结果如图。下列相关叙述错误的是（    ） A．配制培养基时应将培养基的pH调至微酸性 B．测量菌落和抑菌圈直径时应直接在皿底上测量 C．抗生素IV治疗Sau感染引起的肺炎效果最好 D．抑菌圈中出现的菌落可能是Sau发生了基因突变 【答案】A 【来源】四川省广安市友实学校、邻水正大实验学校2023-2024学年高二下学期期中联考生物试题 【分析】培养基的概念及营养构成 ： （1）概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出的供其生长繁殖的营养基质； （2）营养构成：各种培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。例如，培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素，培养霉菌时需将培养基的pH调至酸性，培养细菌时需将pH调至中性或微碱性，培养厌氧微生物时则需要提供无氧的条件。 【详解】A、该培养基培养的是金黄色葡萄球菌，属于细菌，因此，在配制培养基时应将培养基的pH调至中性或微碱性，A错误； B、测量菌落和抑菌圈直径时应直接在皿底上测量，这样可以避免杂菌污染，B正确； C、结合图示可知，抗生素IV获得的抑菌圈最大，因而治疗Sau感染引起的肺炎效果最好，C正确； D、抑菌圈中出现的菌落可能是Sau发生了基因突变，因而具有了对抗生素的抗性，D正确。 故选A。 4．(23-24高二下·四川达州万源万源中学·期中)一次性口罩的主要成分为聚丙烯纤维（PP），某科研团队准备从土壤中筛选出高效降解一次性口罩的细菌，进行了如图所示的实验。下列说法错误的是（　　） A．图示所用培养基是以PP作为唯一碳源的选择培养基 B．图示所用接种方法分别为稀释涂布平板法，需要在酒精灯火焰旁进行 C．在三个平板滴加0.1ml的稀释液，经适当培养后平板上菌落数分别是75、76、77，则1g土壤中活菌数约为7.6×108 D．用稀释涂布平板法进行微生物数量统计一般比实际值偏低 【答案】C 【来源】四川省达州市万源市万源中学2023-2024学年高二下学期5月期中生物试题 【分析】1、稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基表面，进行培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个菌落。 2、计数时，为了保证结果准确，一般选择菌落数在30~300的平板进行计数。计算公式：每克样品中的菌株数＝(c÷V)×M，其中c代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL),M代表稀释倍数。 【详解】A、聚丙烯纤维(PP)是一种含碳有机物，为了从土壤中筛选出高效降解一次性口罩的细菌，因此图示所用培养基是以PP作为唯一碳源的选择培养基，A正确； B、图示有微生物的梯度稀释过程，故图示所用接种方法分别为稀释涂布平板法，为了防止杂菌污染，需要在酒精灯火焰旁进行，B正确； C、在三个平板滴加0.1ml的稀释液，稀释倍数为105，经适当培养后平板上菌落数分别是75、76、77，则1g土壤中活菌数[(75+76+77)÷3]÷0.1×105=7.6×107，则1g土壤中能高效降解聚丙烯纤维(PP)活菌数约为约为7.6×107，C错误； D、由于当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，因此用稀释涂布平板法进行微生物数量统计一般比实际值偏低，D正确。 故选C。 5．(23-24高二下·四川内江第六中学·)研究人员用无机盐、琼脂和石油配制的培养基从被石油污染的土壤中筛选出一种石油降解菌。对此，以下表述错误的是（　　） A．这种培养基是一种选择培养基 B．利用这种石油降解菌可以降解石油，修复土壤 C．相对于未被污染的土壤，从被石油污染的土壤中更容易分享到石油降解菌 D．利用平板划线法统计菌落数目时，统计的菌落数比接种活菌的实际数目更小 【答案】D 【来源】四川省内江市第六中学2023-2024学年高二下学期半期考试生物试卷 【分析】在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称为选择培养基。虽然各种培养基的具体配方不同，但一般都含有水、碳源（提供碳元素的物质）、氮源（提供氮元素的物质）和无机盐。 【详解】A、研究人员用无机盐、琼脂和石油配制的培养基从被石油污染的土壤中筛选出一种石油降解菌，说明该培养基能筛选出所需的菌种，属于选择培养基，A正确； B、被石油污染的土壤通气性极差，利用这种石油降解菌可以降解石油，修复土壤，B正确； C、根据生物与其生存环境相适应的特点，未被污染的土壤中几乎不含石油分解菌，从被石油污染的土壤中更容易分离到石油降解菌，C正确； D、平板划线法不能统计菌落数目，利用稀释涂布平板法统计菌落数目时，统计的菌落数比接种活菌的实际数目更小，因为当两个或者多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，D错误。 故选D。 6．(23-24高二下·四川内江第六中学·)微生物的纯培养既需要适宜的培养基，又要防止杂菌污染。下列相关表达正确的是（　　） A．培养基中的营养物质浓度越高，对微生物的生长越有利 B．消毒和灭菌是防止杂菌污染的常用手段，二者程度不存在差异 C．微生物的纯培养物就是不含有代谢废物的微生物培养物 D．配制培养基时，应先调节pH，然后再进行灭菌处理 【答案】D 【来源】四川省内江市第六中学2023-2024学年高二下学期半期考试生物试卷 【分析】培养基是人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质；根据物理性质分为固体培养基和液体培养基，培养基中一般含有水、碳源、氮源和无机盐，其中碳源和氮源常采用蛋白胨和牛肉膏，因为它们来源于动物原料，含有糖、维生素和有机氮等营养物质。另外，培养基还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质和氧气的要求。例如，培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素，培养霉菌时需将培养基的pH调至酸性，培养细菌时需将pH调至中性或微碱性，培养厌氧微生物时则需要提供无氧的条件。 【详解】A、培养基中的营养物质浓度过高会导致微生物出现失水过多，甚至出现死亡的现象，对生长不利，A错误； B、消毒和灭菌利用的理化性质不同，前者利用的是温和的理化手段，后者利用的是强烈的理化手段，因此，消毒和灭菌的杀菌程度存在差异，B错误； C、微生物的纯培养物是不含杂菌的微生物，而不是不含有代谢废物，C错误； D、制培养基时，防止杂菌污染，应先调节pH，然后再进行灭菌处理，D正确。 故选D。 7．(23-24高二下·四川阆中中学校·期中)微生物培养时常利用无菌技术避免杂菌的污染。下列相关叙述错误的是（    ） A．配制好的培养基应放入干热灭菌箱中进行干热灭菌 B．实验中避免已灭菌处理的材料用具与周围物品接触 C．接种前后的接种环都要在酒精灯火焰上进行灼烧 D．实验结束后对实验室喷洒苯酚或煤酚皂溶液同时配合紫外线照射 【答案】A 【来源】四川省阆中中学校2023-2024学年高二下学期期中考试生物试题 【分析】无菌技术：（1）关键：防止外来杂菌的入侵。（2）具体操作：①对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒。②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。③为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品接触。 【详解】A、对培养基灭菌的方法是高压蒸汽灭菌法，A错误； B、为避免杂菌污染，实验中应避免已灭菌处理的材料用具与周围物品接触，B正确； C、为了防止杂菌污染，每次接种前后，接种环都要进行灼烧灭菌，C正确； D、紫外线能破坏DNA结构，密闭空间内的空气常采用紫外线照射消毒，喷洒石炭酸或煤酚皂溶液同时配合紫外线照射可提高对密闭空间的消毒效果，D正确。 故选A。 8．(23-24高二下·四川成都树德中学·期中)纤维素被纤维素分解菌分解后可以用来生产乙醇。实验室中常用刚果红培养基鉴别纤维素分解菌，其原理是在含纤维素的培养基中添加刚果红，刚果红会与纤维素形成红色复合物，若纤维素被分解，则不能形成该复合物，培养基中就会出现以这些菌落为中心的透明圈。下列相关叙述正确的是（    ） A．刚果红培养基中除了纤维素、刚果红，还必须添加足量碳源物质 B．实验中需要将富集培养后的待测菌液直接涂布在刚果红培养基中 C．应选择菌落直径与周围透明圈直径比值大的菌落进行纯化培养 D．在刚果红培养基上长出的有透明圈的菌落需要进一步确定其产纤维素酶的能力 【答案】D 【来源】四川省成都市树德中学2023-2024学年高二下学期期中考试 生物版含答案word 【分析】分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体，这就是菌落。采用平板划线法和稀释涂布平板法能将单个微生物分散在固体培养基上，之后经培养得到的单菌落一般是由单个微生物繁殖形成的纯培养物。 【详解】A、刚果红培养基是用于鉴别纤维素分解菌，该培养基中除了添加纤维素、刚果红，即纤维素作为唯一碳源，不需要添加其他碳源，A错误； B、实验中需要将富集培养后的待测菌液稀释后再涂布在刚果红培养基上，B错误； C、应选择菌落直径与周围透明圈直径比值小的菌落进行纯化培养，因为菌落直径与周围透明圈直径比值小说明该菌落分解能力强，C错误； D、在刚果红培养基上长出的有透明圈的菌落需要进一步确定其产纤维素酶的能力，以提高实验的准确性，D正确。 故选D。 9．(23-24高二下·四川德阳什邡什邡中学·期中)精氨酸依赖型菌株不能在缺少精氨酸的培养基上正常生长，但可作为鸟氨酸发酵的优良菌种。如图为野生型谷氨酸棒状杆菌经诱变获得精氨酸依赖型菌并进行筛选的过程示意图，其中乙获得的菌落是通过影印甲培养得来。下列相关叙述不正确的是（　　） A．野生型菌液的培养皿中不会出现菌落 B．乙培养基与甲相比可能缺少了精氨酸 C．紫外线照射可导致谷氨酸棒状杆菌发生可遗传变异 D．乙中的菌落A为鸟氨酸发酵的优良菌种 【答案】D 【来源】四川省德阳市什邡市什邡中学2023-2024学年高二下学期5月期中考试生物试题 【分析】由图分析可知，图中①表示将紫外线照射处理的菌液接种在完全培养基上，②表示在缺乏精氨酸的培养基上继续培养，甲中A表示野生型谷氨酸棒状杆菌，B为精氨酸依赖型菌株。 【详解】A、液体培养基的作用是让细菌快速大量繁殖，细菌在固体培养基上才能形成菌落，故野生型菌液的培养皿中不会出现菌落，A正确； B、图示为野生型谷氨酸棒状杆菌经诱变获得精氨酸依赖型菌并进行筛选的过程示意图，精氨酸依赖型菌株不能在缺少精氨酸的培养基上正常生长，因此A为野生型谷氨酸棒状杆菌，B为精氨酸依赖型菌株，乙培养基上没有B菌落，据此推测乙培养基与甲相比缺少了精氨酸，B正确； C、野生型谷氨酸棒状杆菌能在缺少精氨酸的培养基上正常生长，精氨酸依赖型菌株不能在缺少精氨酸的培养基上正常生长，紫外线照射可导致谷氨酸棒状杆菌发生基因突变，产生可遗传变异，经过筛选可获得精氨酸依赖型菌株，C正确； D、由图观察可知，乙中的菌落是通过影印法获得的，菌落A是野生型菌种，菌落B为精氨酸依赖型菌株，B可作为鸟氨酸发酵的优良菌种，D错误。 故选D。 10．(23-24高二下·安宁河联盟·期中)一次性口罩的主要成分为聚丙烯纤维(PP)，某科研团队准备从土壤中筛选出高效降解一次性口罩的细菌，进行了如图所示的实验。下列说法错误的是（    ） A．图示所用培养基是以PP作为唯一碳源的选择培养基 B．图示所用接种方法分别为稀释涂布平板法，需要在酒精灯火焰旁进行 C．在三个平板滴加0.1ml的稀释液，经适当培养后平板上菌落数分别是75、76、77，则1g土壤中活菌数约为7.6×107 D．用稀释涂布平板法进行微生物数量统计一般比实际值偏低 【答案】C 【来源】安宁河联盟2023-2024学年高二下学期4月期中联考生物试题 【分析】1、稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基表面，进行培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个菌落。 2、计数时，为了保证结果准确，一般选择菌落数在30~300的平板进行计数。计算公式：每克样品中的菌株数＝(c÷V)×M，其中c代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL),M代表稀释倍数。 【详解】A、聚丙烯纤维(PP)是一种含碳有机物，为了从土壤中筛选出高效降解一次性口罩的细菌，因此图示所用培养基是以PP作为唯一碳源的选择培养基，A正确； B、据图分析，微生物分离时需要梯度稀释，故图示所用接种方法分别为稀释涂布平板法，需要在酒精灯火焰旁进行，B正确； C、在三个平板滴加0.1ml的稀释液，经适当培养后平板上菌落数分别是75、76、77，则1g土壤中活菌数[(75+76+77)÷3]÷0.1×105=7.6×107，则1g土壤中能高效降解聚丙烯纤维(PP)活菌数约为约为7.6×107，C错误； D、由于一个菌落可能是由2个或多个细菌形成的，因此用稀释涂布平板法进行微生物数量统计一般比实际值偏低，D正确。 故选C。 11．(23-24高二下·安宁河联盟·期中)下列有关以CO2为唯一碳源的自养微生物营养的描述错误的是（    ） A．氮源物质为该微生物提供必要的氮素 B．碳源物质也是该微生物的能源物质 C．无机盐是该微生物不可缺少的营养物质 D．水是该微生物的营养要素之一 【答案】B 【来源】安宁河联盟2023-2024学年高二下学期4月期中联考生物试题 【分析】自养微生物与异养微生物类型的划分主要是依靠能否以CO2作为生长的主要或唯一的碳源； CO2不能为生物提供能量，不属于能源物质； 微生物的营养：水、无机盐、碳源、氮源、生长因子、其他条件。 【详解】A、氮源物质为该微生物提供必要的氮素，A正确； B、该碳源是二氧化碳，属于无机物，不能作为微生物的能源物质，B错误； C、无机盐是该微生物不可缺少的营养物质，C正确； D、微生物的营养元素包括碳源、氮源、水和无机盐，其中水是该微生物的营养要素之一，D正确。 故选B。 12．(23-24高二下·安宁河联盟·期中)关于微生物的选择培养与数量测定，叙述正确的是（　　） A．平板划线和稀释涂布平板均可计数微生物 B．筛选尿素分解菌可以蛋白胨作为唯一氮源 C．同一稀释度下以30～300范围内的平板计数 D．显微镜直接计数的统计结果比实际活菌数低 【答案】C 【来源】安宁河联盟2023-2024学年高二下学期4月期中联考生物试题 【分析】测定培养液中微生物的数目，可采用显微镜直接计数(或血细胞计数板计数)法对培养液中的微生物直接计数，也可用稀释涂布平板法将微生物接种于灭菌后的固体培养基上，培养一段时间后，通过计数菌落数目计算培养液中微生物的数目。由于采用第一种方法计数时不能剔除死菌，因此统计的结果往往偏大；而采用第二种方法计数时，当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，所以第一种方法统计的数目比实际活菌数目高，第二种方法统计的数目比实际活菌数目低。 【详解】A、平板划线不能计数微生物，稀释涂布平板可计数微生物，A错误； B、筛选尿素分解菌可以尿素作为唯一氮源，B错误； C、2个或2个以上平板上菌落数目在30～300的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数，C正确； D、显微镜直接计数计数时不能剔除死菌，所以统计结果比实际活菌数高，D错误。 故选C。 13．(23-24高二下·四川广元苍溪县四川苍溪中学校·期中)用稀释涂布平板法来统计样品中的活菌数时，通过统计平板上的菌落数就能推测出样品中的活菌数。下列与稀释涂平板法的相关说法，正确的是（    ） A．可以用涂布器蘸取菌液均匀涂抹在固体培养基表面 B．样品中活菌数往往大于稀释涂布平板法的统计的结果 C．统计菌落数目时只要菌落数目在 30～300 之间的平板即可 D．统计土壤中细菌数量时一般选用的稀释倍数为 103、104、105 【答案】B 【来源】四川省广元市苍溪县四川省苍溪中学校2023-2024学年高二下学期4月期中生物试题 【分析】稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。 【详解】A、涂布器不能用于蘸取菌液，稀释涂布平板法操作时，应先用微量移液器吸取一定量菌液滴在平板上，再使用涂布器均匀涂抹开，A错误； B、当样品中两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，导致统计的活菌数往往比实实际数目偏少，B正确； C、统计菌落数目时需要菌落数目在30～300之间，且同一稀释倍数下平板上菌落数量接近，C错误； D、统计土壤中细菌数量时一般选用的稀释倍数为104、105、106，D错误。 故选B。 14．(23-24高二下·四川广元苍溪县四川苍溪中学校·期中)下表是某公司研发的一种微生物培养基配方。下列有关微生物培养的叙述，正确的是（    ） 成分 蛋白胨 乳糖 蔗糖 K2HPO4 显色剂 琼脂 含量 10.0g 5.0g 5.0g 2.0g 0.2g 12.0g 将上述物质溶解后，用蒸馏水定容至 1000 mL A．该培养基属于固体培养基，能提供碳源的物质有乳糖和蔗糖 B．为防止杂菌污染，需在接种前对培养基和培养皿进行消毒处理 C．接种环蘸取菌液在该培养基上连续划线培养后，可分离大肠杆菌 D．在该培养基中添加尿素即为选择培养基，用于筛选产生脲酶的细菌 【答案】C 【来源】四川省广元市苍溪县四川省苍溪中学校2023-2024学年高二下学期4月期中生物试题 【分析】培养基按其特殊用途可分为选择性培养基和鉴别培养基，常用的接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法。 【详解】A、该培养基能提供碳源的物质有乳糖、蔗糖、蛋白胨，A错误； B、培养基和培养皿进行灭菌处理，B错误； C、该培养基添加了琼脂，是固体培养基，可以用接种环蘸取菌液在其表面进行连续划线，将菌液稀释分散后获得单菌落，用于分离大肠杆菌，即平板划线法，C正确； D、若要用该培养基筛选产生脲酶的细菌，应去除蛋白胨，添加尿素为唯一氮源，D错误。 故选C。 15．(23-24高二下·四川凉山州西昌·期中)在生产生活实践中人们经常需要用到消毒或杀菌的方法以避免微生物大量繁殖，下列关于培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、空气、牛奶适宜采用的消毒或杀菌方法依次是（    ） ①化学药物消毒②灼烧灭菌③干热灭菌④紫外线消毒⑤湿热灭菌⑥巴氏消毒 A．⑤③②④①⑥ B．③⑤②①④⑥ C．⑤③②①④⑥ D．③⑤④②①⑥ 【答案】C 【来源】四川省凉山州西昌市2023-2024学年高二下学期期中检测生物试题 【分析】1、实验室常用的灭菌方法：①灼烧灭菌：将微生物的接种工具，如接种环、接种针或其他金属工具，直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧，可以迅速彻底地灭菌，此外，在接种过程中，试管口或瓶口等容易被污染的部位，也可以通过火焰燃烧来灭菌。②干热灭菌：能耐高温的，需要保持干燥的物品，如玻璃器皿（吸管、培养皿）和金属用具等，可以采用这种方法灭菌。③高压蒸汽灭菌（湿热灭菌）：将灭菌物品放置在盛有适量水的高压蒸汽灭菌锅内，为达到良好的灭菌效果，一般在压力为100kPa,温度为121℃的条件下，维持15～30min。 2、消毒是指使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物（不包括芽孢和孢子），灭菌则是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。 【详解】培养基宜用湿热灭菌法灭菌；培养皿能耐高温，需用干热灭菌法灭菌；接种环可用灼烧灭菌法灭菌，以达到迅速彻底的灭菌效果；实验操作者的双手可用化学药物进行消毒，如用酒精擦拭双手；对于空气，可用紫外线消毒法；为了不破坏牛奶的营养成分，可采用巴氏消毒法对其进行消毒，C正确，ABD错误。 故选C。 16．(23-24高二下·四川泸州泸县普通高中共同体·期中)消毒、灭菌、无菌操作是生物学实验中常见的操作。相关叙述正确的是（    ） A．对菊花外植体消毒，要用无水酒精配合使用一定浓度的次氯酸钠溶液 B．可用干热灭菌法对实验中所使用的培养皿、金属用具等进行灭菌 C．为防止蛋白质变性，不能用湿热灭菌法对牛肉膏蛋白胨培养基进行灭菌 D．对操作者的双手、衣着以及操作空间等，采用紫外线进行消毒 【答案】B 【来源】四川省泸州市泸县普通高中共同体2023-2024学年高二下学期4月期中联考生物试题 【分析】使用强烈的理化因素杀死物体内外一切微生物的细胞、芽孢和孢子的过程称为灭菌，常用的方法有灼烧灭菌、干热灭菌和湿热灭菌。消毒是指用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体体表或内部的一部分微生物的过程。 【详解】A、对菊花外植体消毒，要用70%的酒精配合使用一定浓度的次氯酸钠溶液，A错误； B、微生物操作应注意无菌操作，可用干热灭菌法对实验中所使用的培养皿、金属用具等进行灭菌，B正确； C、对牛肉膏蛋白胨培养基进行灭菌的方法是湿热灭菌法，常用的是高压蒸汽灭菌法，C错误； D、对操作者的双手采用酒精进行消毒，紫外线会对人体造成伤害，衣着和操作空间可采用紫外线进行消毒， D错误。 故选B。 17．(23-24高二下·四川阆中中学校·期中)下图是研究人员从石油污染的土壤中筛选高效降解石油的细菌（目的菌）流程图。下列叙述不正确的是（    ）    A．应选择②中培养瓶内石油含量显著降低的培养液继续③操作 B．④中可采用平板划线法对筛选得到的目的菌进行纯化 C．培养皿等用具在使用前后均需进行消毒处理 D．若要研究目的菌生长规律，可用培养液培养目的菌并用细菌计数板计数 【答案】C 【来源】四川省阆中中学校2023-2024学年高二下学期期中考试生物试题 【分析】题意分析，为了从石油污染的土壤中筛选高效降解石油的细菌，在以石油为唯一碳源和氮源的培养基中，只有能降解石油的目的菌才能生长繁殖，而其它不能利用石油为碳源和氮源的一般就不能生长和繁殖，因此可以通过该种选择培养基筛选目的菌。 【详解】A、培养瓶内石油含量显著降低说明培养液中的菌降解石油能力强，因此选择该②中培养瓶内石油含量显著降低的培养液继续③操作，A正确； B、分离纯化目的菌的方法可以是平板划线法，也可以是稀释涂布平板法，即④中可采用平板划线法对筛选得到的目的菌进行纯化，B正确； C、为了避免杂菌污染，培养皿等用具在使用前后均需进行灭菌处理，C错误； D、若要研究目的菌生长规律，可借助用细菌计数板计数来研究目的菌生长规律，D正确。 故选C。 18．(23-24高二下·四川阆中中学校·期中)某生物小组在初步筛选产耐高温淀粉酶分解菌时，将土壤样液接种在平板上，培养结果如图(D/d＝透明圈直径/菌落直径)。下列叙述错误的是（    ）    A．土壤可取自高温热泉环境 B．接种方法为稀释涂布平板法 C．培养温度应控制在37 ℃左右 D．菌落丙的淀粉酶活性较高 【答案】C 【来源】四川省阆中中学校2023-2024学年高二下学期期中考试生物试题 【分析】分析题意可知，“透明圈直径（D）与菌落直径（d）的比值（D/d）代表微生物分解淀粉的能力大小”，结合表格可知，菌株丙的比值（D/d）最大，说明菌株丙产生的淀粉酶活性较高。 【详解】A、生物与环境具有适应性，耐高温淀粉酶分解菌更可能存在于高温环境的土壤中，故土壤可取自高温热泉环境，A正确； B、从图中菌落分布均匀可看出，土壤样液的接种方法为稀释涂布平板法，B正确； C、初步筛选产耐高温淀粉酶分解菌时，培养温度应控制在较高温度而不是37℃左右，C错误； D、D/d代表微生物产生的淀粉酶分解淀粉的能力大小，丙菌落的D/d值最大，淀粉酶的活性较高，D正确。 故选C。 19．(23-24高二下·四川成都蓉城名校联盟·期中)下图为实验室酵母菌的纯培养过程中的部分操作步骤，下列说法正确的是（    ） A．步骤①操作时，需待培养基冷却至50℃左右时倒入，然后立即将培养皿倒置 B．步骤②灼烧接种环后，立即在酒精灯火焰附近用接种环蘸取菌液 C．步骤③每次划线前都需对接种环灼烧灭菌，划线结束后不用再灼烧 D．完成平板划线后，待菌液被培养基吸收后，再倒置放入恒温培养箱中培养 【答案】D 【来源】四川省成都市蓉城名校联盟2023-2024学年高二下学期4月期中生物试题 【分析】分析图可知：①是倒平板，②是用接种环沾取菌液，③是进行平板划线，④是培养。 【详解】A、步骤①操作时，需待培养基冷却至50℃左右时倒入，应待培养基冷却凝固后，再倒置培养皿，A错误； B、接种环灼烧后应在火焰旁冷却后再蘸取菌液，以防高温杀死酵母菌，B错误； C、划线结束后也应灼烧接种环，以免污染环境和感染操作者，C错误； D、完成平板划线后，待菌液被培养基吸收后，再将培养基倒置（防止培养基中水分过快挥发等）放入恒温培养箱中进行培养，D正确。 故选D。 20．(23-24高二下·四川成都蓉城名校联盟·期中)无菌技术在微生物培养中非常重要，下列叙述正确的是（    ） A．消毒可杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子 B．耐高温且需要保持干燥的物品，可采用湿热灭菌法灭菌 C．无菌技术可以用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染 D．巴氏消毒法可杀死牛奶中全部微生物，且只破坏小部分营养成分 【答案】C 【来源】四川省成都市蓉城名校联盟2023-2024学年高二下学期4月期中生物试题 【分析】1、消毒是指使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物(不包括芽孢和孢子)，灭菌则是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。 2、无菌技术的主要内容：①对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。②将用干微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌。③为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。 【详解】A、消毒只能杀死物体表面或内部的一部分微生物，不包括芽孢和孢子，A错误； B、耐高温且需保持干燥的物品，可用干热灭菌法进行灭菌，B错误； C、无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还能有效避免操作者自身被微生物感染，C正确； D、巴氏消毒法可杀死牛奶中的绝大多数微生物，并且基本不会破坏牛奶的营养成分，D错误。 故选C。 21．(23-24高二下·四川绵阳南山中学·期中)下列关于“酵母菌的纯培养"实验的叙述，正确的是（    ） A．酵母菌的纯培养物就是不含有代谢废物的酵母菌培养物 B．接种前后，接种环都要在酒精灯火焰上进行灼烧 C．平板划线时，涂布器应在固体培养基表面轻轻地连续划线 D．完成平板划线后，应将平板立刻倒置培养以免污染培养基 【答案】B 【来源】四川省绵阳南山中学2023-2024学年高二下学期期中考试生物试题 【分析】在微生物学中，将接种于培养基内，在合适条件下形 成的含特定种类微生物的群体称为培养物。由单一个体繁 殖所获得的微生物群体称为纯培养物，获得纯培养物的过 程就是纯培养。 微生物的纯培养包括配制培养基、灭菌、接种、分离 和培养等步骤。 【详解】A、由单一个体繁殖所获得的微生物群体称为纯培养物，可见，酵母菌的纯培养物不是不含有代谢废物的酵母菌培养物，A错误； B、接种前需要杀死接种环上的微生物，避免污染培养基；接种后需要杀死残留菌种，避免环境污染和感染操作者，可见接种前后，接种环都要在酒精灯火焰上进行灼烧，B正确； C、平板划线时，接种环应在固体培养基表面轻轻地连续划线，C错误； D、完成平板划线后，待菌液被培养基吸收，再将平板倒置培养，D错误。 故选B。 22．(23-24高二下·安宁河联盟·期中)微生物培养过程中，要十分重视无菌操作，下列相关操作叙述错误的是（    ） A．涂布器可以采用酒精引燃方式灭菌 B．煮沸消毒可以杀死物体部分微生物 C．接种环在使用前后都需要灼烧灭菌 D．接种前需对实验者的双手进行灭菌 【答案】D 【来源】安宁河联盟2023-2024学年高二下学期4月期中联考生物试题 【分析】1、无菌技术的主要内容：对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒；②特用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌；③为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行；④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。2、实验室常用的消毒方法：煮沸消毒：化学药物消毒：紫外线消毒；实验室常用的灭菌方法：灼烧灭菌，干热灭菌，高压蒸汽灭菌。 【详解】A、涂布器使用前放置在70%酒精中，可以采用酒精引燃方式进行灼烧灭菌，A正确； B、煮沸消毒是利用高温杀死一部分微生物，B正确； C、接种环在使用前后都需要灼烧灭菌，防止杂菌污染，也易获得单菌落，C正确； D、接种前需要对培养基、培养皿进行灭菌，对实验操作者的双手进行消毒，D错误。 故选D。 23．下列有关稀释涂布平板法计数和显微镜直接计数法计数的描述，正确的是（    ） A．为确保结果准确，每个平板的菌落都要计数并取平均值 B．可以用细菌计数板直接计数法检测大肠杆菌菌落的数量 C．两种方法均能在计数时观察到所研究微生物的形态特征 D．使用显微计数时，活菌数的实际值比稀释涂布平板法计数所得的结果偏大 【答案】D 【来源】四川省成都市第七中学2023—2024学年高二下学期期中考试生物试题 【分析】微生物的计数方法主要有稀释涂布平板法和显微镜直接计数法。用稀释涂布平板法统计时，由于两个或多个细胞连在一起可以形成一个菌落，所以统计的结果比实际值往往偏小。由于显微镜下统计的微生物细胞包括死亡的细胞在内，所以用该方法测定的微生物数量大于实际的活菌数。 【详解】A、对微生物进行分离、计数常用的接种方法是稀释涂布平板法，估算每毫升样品中的微生物数目时，往往选取菌落数为30～300的平板进行计数，A错误； B、可以用细菌计数板对细菌直接进行观察和计数，大肠杆菌菌落的数量可通过肉眼直接计数，B错误； C、稀释涂布平板法观察到的是菌落的形态特征，而不是微生物的形态特征，显微镜直接计数法观察到的是微生物的形态特征，C错误； D、稀释涂布平板法计数时，当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察的往往是一个菌落，故而统计值比实际值小，显微计数时不能区分死菌和活菌，故测定的微生物数量往往大于实际的活菌数，因此使用显微计数时，活菌数的实际值比稀释涂布平板法计数所得的结果偏大，D正确。 故选D。 24．在牛、羊等反刍动物的瘤胃中生活着多种微生物，其中有能分解纤维素的微生物。某科研团队按照如图所示的流程分离瘤胃中的纤维素分解菌，实验中需要甲、乙两种培养基，并在刚果红培养基平板上筛选到有透明降解圈的菌落。下列叙述错误的是（    ）    A．培养基表面均加入一层无菌的石蜡主要是为防止杂菌的污染 B．甲培养基中唯一的碳源是纤维素，则该培养基是选择培养基 C．制备乙培养基时，待灭菌的培养基冷却至50℃左右再倒平板 D．图中降解圈的大小与纤维素酶活性有关，菌落a降解能力最强 【答案】A 【来源】四川省成都市第七中学2023—2024学年高二下学期期中考试生物试题 【分析】刚果红可以与像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物，但与纤维二糖和葡萄糖无法发生这种反应。在含有纤维素的培养基中添加刚果红，刚果红与纤维素形成红色复合物，当纤维素被纤维素分解菌分解后，复合物无法形成，培养基中就会出现以这些菌为中心的透明圈。 【详解】A、反刍动物的瘤胃中不含氧气，其中存在的纤维素分解菌适宜在无氧条件下生存和繁殖，因此培养基表面覆盖无菌的石蜡主要是为了保证培养的无氧环境，A错误； B、为了筛选纤维素分解菌，需要以纤维素为唯一碳源，能够分解纤维素的微生物能够生存，不能分解纤维素的微生物因无法获得碳源而死亡，因此甲培养基中唯一的碳源是纤维素，该培养基是选择培养基，B正确。 C、制备乙培养基时，待灭菌的培养基冷却至50℃左右再倒平板，此时的培养基呈液体状态，且不烫手，因而适宜倒平板操作，C正确； D、纤维素分解菌能分解纤维素是因为其可以产生纤维素酶，纤维素酶的活性越高，对纤维素的分解效果越好，以这些菌为中心的透明圈的直径与菌落直径的比值越大，据图可知菌落a的降解能力最强，D正确。 故选A。 25．自生固氮菌是土壤中能独立固定空气中氮气的细菌，科研人员进行了土壤中自生固氮菌的分离和固氮能力测定的研究，部分实验流程如图所示。下列叙述错误的是（    ） A．步骤①土样应取自当地表层土壤；步骤③将土壤悬浮液稀释了1000倍 B．步骤②需振荡20min，主要目的是使土壤中的微生物充分释放到无菌水中 C．步骤④所用培养基的特点是不添加氮源，需要将培养基调至中性或微碱性 D．图中纯化培养采用了稀释涂布平板法，需用灭菌后的涂布器蘸取菌液进行涂布 【答案】D 【来源】四川省成都市第七中学2023—2024学年高二下学期期中考试生物试题 【分析】用稀释涂布平板法测定菌落数时，在每一个梯度浓度内，至少要涂布3个平板，选择菌落数在30～300的进行记数，求平均值，再通过计算得出总数。稀释涂布平板法计数比实际值偏低的原因：由于两个或多个细菌连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，因此该数值与活菌的实际数目相比偏低。 【详解】A、由于自生固氮菌利用的是空气中的氮气，因此为了获得自生固氮菌，步骤①土样应取自当地表层土壤，步骤③中的稀释梯度依次为10，100，1000 倍，所以步骤③将土壤悬浮液稀释了1000倍，A正确； B、步骤②需充分振荡20 min，其目的是使土壤中的微生物充分释放到无菌水中，以保证获得需要的微生物，B正确； C、步骤④所用培养基的特点是不添加氮源，由于获得的是细菌，因此，需要将培养基调至中性或微碱性，C正确； D、图中纯化培养采用了稀释涂布平板法，其操作过程是用灭菌后的涂布器将移入的菌液进行均匀涂布，D错误。 故选D。 26．为了观察手掌上附着的微生物，某小组成员将自己的手掌在配制的牛肉膏蛋白胨固体培养基上轻轻按压后，盖上培养皿盖，将平板倒置放在恒温培养箱中培养48h，结果如图所示。下列相关说法错误的是（    ） A．牛肉膏、蛋白胨均可为微生物生长提供碳源、氮源、维生素 B．为防止蛋白质变性，牛肉膏蛋白胨培养基不能用湿热灭菌法 C．倒置培养可以避免皿盖上凝结的水珠落入培养基造成污染 D．手掌上的某些微生物可能不能在该培养基上生长繁殖 【答案】B 【来源】四川省成都市第七中学2023—2024学年高二下学期期中考试生物试题 【分析】1、制备牛肉膏蛋白胨培养基：计算、称量、溶化、灭菌、倒平板。 2、培养基除了含有主要营养物质之外，培养基还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的需求。例如培养细菌时需将pH调至中性或微碱性，且培养基一般先调节pH后进行灭菌。 【详解】A、牛肉膏、蛋白胨取自动物，均可为微生物生长提供碳源、氮源、维生素等物质，A正确； B、微生物培养的关键是无菌操作，为防止蛋白质变性，牛肉膏蛋白胨培养基需要用湿热灭菌，通常是高压蒸汽灭菌法进行灭菌，B错误； C、倒置培养可以避免皿盖上凝结的水珠落入培养基造成污染，同时也可避免水分过快蒸发，C正确； D、该实验采用的培养基是牛肉膏蛋白胨固体培养基，并不适用于所有的微生物培养，故手掌上的某些微生物可能没有在该培养基上生长繁殖，D正确。 故选B。 27．下图表示用马铃薯琼脂培养基对酵母菌纯培养的部分操作步骤。下列相关叙述正确的是（    ） A．配制马铃薯琼脂培养基时，可不在酒精灯火焰旁 B．配制的培养基经高压蒸汽灭菌后，一般要调节pH再用于接种 C．平板划线法在每次划线前后都灼烧接种环的目的是防止杂菌污染 D．通过接种环连续蘸取菌液在固体培养基表面划线的操作，将菌种逐步稀释 【答案】A 【来源】四川省成都市第七中学2023—2024学年高二下学期期中考试生物试题 【分析】微生物常见的接种的方法 ①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落； ②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。 【详解】A、配制马铃薯琼脂培养基时，可不在酒精灯火焰旁，而在培养基灭菌后进行的倒平板操作需要再酒精灯火焰旁，A正确； B、配制的培养基经高压蒸汽灭菌后，可直接用于接种，而调节pH操作需要在培养基灭菌前进行，B错误； C、平板划线法在每次划线前后都灼烧接种环的目的是是有差别的，在第一次划线前灼烧的目的是防止杂菌污染，在第二次以及以后的划线操作前灼烧接种环的目的是保证划线的菌种来自上一次划线的末端，而最后一次灼烧接种环的目的是避免污染环境，C错误； D、通过接种环在固体培养基表面 连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面，该过程中只蘸取一次菌液，D错误。 故选A。 28．进行土壤中尿素分解菌的选择培养时，利用的培养基组分及含量如表所示。下列分析错误的是（    ） 组分 KH2PO4 Na2HPO4 MgSO4·H2O 尿素 尿素 琼脂 H2O 含量 1.4g 2.1g 0.2g 10.0g 1.0g 15.0g 定容1000mL A．KH2PO4和Na2HPO4既可为微生物提供无机盐，又可调节培养基的pH B．葡萄糖、琼脂既可为尿素分解菌提供碳源，又可以提供能源 C．尿素既可为尿素分解菌提供氮源，又可对培养基中微生物起选择作用 D．上述培养基中生长的有些菌落可能没有利用培养基中唯一的氮源尿素 【答案】B 【来源】四川省成都市第七中学2023—2024学年高二下学期期中考试生物试题 【分析】进行土壤中尿素分解菌的选择培养的原理：培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源，缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。 【详解】A、KH2PO4和Na2HPO4这两种无机盐既可为细菌生长提供无机营养，又可作为缓冲剂保持细胞生长过程中pH相对稳定，A正确； B、琼脂不能被微生物利用，只能充当凝固剂，而葡萄糖可以为微生物提供碳源，B错误； C、培养基中除了尿素无其他含氮物质，只有尿素分解菌能通过分解尿素进行生长繁殖，故尿素既能为尿素分解菌提供氮源又可对培养基中的微生物起选择作用，C正确； D、上述培养基中生长的有些菌落可能没有利用培养基中唯一的氮源尿素，也可可能是利用空气中含有的N2，D正确。 故选B。 29．(23-24高二下·四川成都蓉城名校联盟·期中)利用纤维素废弃物代替粮食生产酒精的研究工作前景广阔，其流程如图所示。下列说法错误的是（    ）    A．筛选纤维素分解菌需用到以纤维素为唯一碳源的培养基 B．纤维素分解菌和酵母菌都是真核生物，代谢类型都是异养需氧型 C．图中发酵阶段常用的菌种是酵母菌，发酵产物可以用酸性重铬酸钾来检验 D．筛选纤维素分解菌的过程中，用到的铁铲和纸袋等在使用前都需要灭菌 【答案】B 【来源】四川省成都市蓉城名校联盟2023-2024学年高二下学期4月期中生物试题 【分析】纤维素分解菌可以分解纤维素，而其他细菌不可以，因此其培养基应该以纤维素为唯一碳源；在培养基中加入刚果红，可与培养基中的纤维素形成红色复合物，当纤维素被分解后，红色复合物不能形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，从而可筛选纤维素分解菌； 【详解】A、筛选纤维素分解菌需用到以纤维素为唯一碳源的培养基，在该培养基上生长的应该是能分解纤维素的微生物，A正确； B、酵母菌的代谢类型是兼性厌氧型，纤维素分解菌是原核生物，代谢类型是异养需氧型，B错误； C、图中发酵阶段的产物是酒精，因此，常用的菌种是酵母菌，发酵产物可以用酸性重铬酸钾来检验，通常表现为灰绿色说明有酒精出现，C正确； D、筛选纤维素分解菌的过程中，用到的铁铲和纸袋等在使用前都需要灭菌，这样可以保证筛选的微生物来自土壤，D正确。 故选B。 30．(23-24高二下·四川绵阳南山中学·期中)下表是某公司研发的一种培养大肠杆菌菌群的培养基配方，下列相关叙述正确的是（    ） 成分 蛋白胨 乳糖 蔗糖 K2HPO4 指示剂 琼脂 含量(g) 10.0 5.0 5.0 2.0 0.2 12.0 将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000 mL A．根据用途划分，该培养基属于选择培养基 B．该培养基也可用来筛选土壤中的尿素分解菌 C．该培养基的制备流程为灭菌→加入琼脂→倒平板 D．该培养基中蛋白胨提供的主要营养有碳源、氮源和维生素等 【答案】D 【来源】四川省绵阳南山中学2023-2024学年高二下学期期中考试生物试题 【分析】选择培养基是将允许特定种类的微生物生长、同时抑制或阻止其他微生物生长的培养基；鉴别培养基是在培养基中加入某种试剂或化学药品，使培养后会发生某种变化，从而区别不同类型的微生物的培养基。 【详解】A、从配方表中可看出，该培养基中含有指示剂，可以用来鉴别微生物；根据培养基的用途，该培养基属于鉴别培养基，A错误； B、若要筛选出土壤中的尿素分解菌，需要以尿素作为唯一氮源，需要将蛋白胨改为尿素才能用来筛选土壤中的尿素分解菌，B错误； C、该培养基的制备流程为加入琼脂→灭菌→倒平板，C错误； D、蛋白胨含有蛋白质成分等，该培养基中蛋白胨提供的主要营养有碳源、氮源和维生素等，D正确。 故选D。 31．(23-24高二·四川雅安四校联考·期中)稻瘟菌引起的水稻稻瘟病是危害最为严重的真菌病害之一，每年都给水稻生产带来重大的经济损失。土壤中某些微生物能合成并分泌几丁质酶，能抑制稻瘟菌的生长，可用于水稻稻瘟病的防治。科研人员试图从土壤中筛选出能高效降解几丁质的菌株，通过微生物培养获得几丁质酶。下列相关叙述错误的是（    ） A．筛选土壤中目的微生物时需用以几丁质为唯一碳源的培养基 B．纯化培养时，可选择稀释涂布平板法或平板划线法接种 C．在以几丁质为唯一碳源的培养基上生长的菌落均能分泌几丁质酶 D．利用能分泌几丁质酶的微生物对水稻稻瘟病进行的防治属于生物防治 【答案】C 【来源】四川省雅安市四校联考2023-2024学年高二下期期中考试生物试题 【分析】1、要从土壤中分离出能合成几丁质酶的微生物，应以几丁质为唯一碳源，以淘汰不能产生几丁质酶的真菌达到筛选效果。 2、水解圈是产生几丁质酶的微生物产生相关酶水解几丁质产生的，水解圈直径/菌落直径越大，说明该菌降解能力越强。 【详解】A、筛选土壤中目的微生物即降解几丁质的微生物时，应用以几丁质为唯一碳源的培养基进行筛选，A正确； B、纯化培养时，可选择稀释涂布平板法或平板划线法接种，两种方法均可得到单菌落，B正确； C、在以几丁质为唯一碳源的培养基上生长的菌落不一定能分泌几丁质酶，可能部分是以几丁质的分解产物为碳源的微生物，C错误； D、生物防治是利用生物间信息传递，如捕食、竞争、寄生等关系来达到控制害虫数量的办法，利用能分泌几丁质酶的微生物对水稻稻瘟病进行的防治属于生物防治，D正确。 故选C。 32．(23-24高二·四川雅安四校联考·期中)鲜牛奶容易被金黄色葡萄球菌污染，该菌高度耐盐，可引起人类肺炎等疾病。该菌在血平板（培养基中添加适量血液）上生长时，会破坏菌落周围的红细胞而出现溶血圈。某小组检测鲜牛奶被金黄色葡萄球菌污染情况的操作流程如图所示。下列有关叙述错误的是（    ） A．鲜牛奶在饮用前可以用高压蒸汽灭菌法进行灭菌 B．肉汤培养基中加入NaCl可能会使某些菌渗透失水 C．振荡培养可使细菌与营养物质充分接触，利于其生长 D．该实验采用的是平板划线法 【答案】A 【来源】四川省雅安市四校联考2023-2024学年高二下期期中考试生物试题 【分析】培养基的概念及营养构成 ： （1）概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出的供其生长繁殖的营养基质； （2）营养构成：各种培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求．例如，培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素，培养霉菌时需将培养基的pH调至酸性，培养细菌时需将pH调至中性或微碱性，培养厌氧微生物时则需要提供无氧的条件。 【详解】A、鲜牛奶在饮用前使用用巴氏消毒法进行消毒，既可以杀死牛奶中的绝大多数微生物，也不会破坏牛奶中的营养成分，A错误； B、当肉汤中的NaCl溶液浓度大于菌体中的浓度时，就会导致菌体渗透失水，B正确； C、振荡培养可使细菌与营养物质充分接触，同时可以增大培养液中的氧气含量，有利于细菌生长，C正确； D、依据图示信息，使用的是接种环接种，可判断使用的方法是平板划线法，D正确。 故选A。 微生物的选择培养和计数考点02 1．(23-24高二下·四川自贡第一中学校·期中)某污水处理厂欲处理一批含As3+和硝酸盐浓度较高的污水，研究人员通过对肠道微生物的分离与筛选，得到了耐砷的反硝化细菌，它在厌氧条件下能够将硝酸盐还原为N2O和N2。分离耐砷的反硝化细菌具体步骤如下： 采集健康人体的新鲜粪便样本。 (1)配制培养基以筛选 ：该培养基中含有适宜浓度的 ，从而有利于该菌的生长，抑制其他微生物的生长。此种培养基属于 培养基。 接种：取采集的人体新鲜粪便样品0.3g，接种至该培养基上。 (2)耐砷反硝化细菌的分离与纯化：取200～300μL上述培养液，均匀地涂布在已经添加了5mmol/Las3+和10mmol/LNO3-的细菌固体培养基上。在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，这样做的目的是 ；涂布完成后，将平板置于温度为37℃的恒温培养箱中培养24h。挑取长势比较良好、形态大小不同的菌落利用平板划线法进行分离纯化，用该种方法进行接种时，接种工具是 ，该接种工具的灭菌方法是 。操作时，在第二次及其以后的划线时，总是从上一次划线的 开始划线，目的是 。 【答案】(1) 耐砷的反硝化细菌 .As3＋和NO3-（或硝酸盐） 选择 (2) 检测培养基平板灭菌是否合格 接种环 灼烧灭菌 末端 将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落 【来源】 四川省自贡市第一中学校2023-2024学年高二下学期期中考试生物试题 【分析】选择培养基：在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称做选择培养基。平板划线法通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。 【详解】（1）配制选择培养基的目的是筛选目的菌株，本题中是筛选耐砷的反硝化细菌；该选择培养基中应含有适宜浓度的As3＋和NO3-（或硝酸盐），从而有利于耐砷的反硝化细菌的生长，抑制其他微生物的生长。在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称做选择培养基，故此种培养基属于选择培养基。 （2）在耐砷反硝化细菌的分离与纯化过程中，为检测培养基平板灭菌是否合格需要在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养一段时间；由于是从人体新鲜粪便中取样，故涂布完成后，将平板置于温度为37℃的恒温培养箱中培养24h。挑取长势比较良好、形态大小不同的菌落利用接种环进行平板划线法进行分离纯化，接种环在使用时需要进行灼烧灭菌。操作时，在第二次及其以后的划线时，为将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落，总是从上一次划线的末端开始划线。 2．(23-24高二下·四川南充白塔中学·期中)扩展青霉是腐烂苹果中常见的微生物之一，其次级代谢产物棒曲霉素（Pat）是一种具有致突变作用的毒素。为研究腐烂苹果中Pat的分布，研究人员进行了如图所示的实验，其中“病健交界处”为腐烂部位与 未腐烂部位的交界处，取样分离的 5 个部位分别为①号、②号、③号、④号、⑤号。请回答下列问题： (1)苹果腐烂部位的微生物除扩展青霉外，还有枯草杆菌。两种微生物在结构上的本质区别是 。 (2)活化扩展青霉菌种使用的培养基成分如下表，根据物理性质划分该培养基属于 培养基，NaNO3的作用是 （答两点） 蔗糖 NaNO3 MgSO4 KCl FeSO4 KH2PO4 蒸馏水 30g 2g 0.5g 0.5g 0.01g 1g 1000mL (3)用平板划线法分离扩展青霉时，划线的某个平板培养后第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌落，其他区域的划线上却均无菌落。操作失误的原因可能是 。 (4)研究人员测定了病斑直径为1、2、3cm 的苹果中①～⑤号部位的 Pat 含量，请推测最可能的结果： 。 【答案】(1)扩展青霉有以核膜为界限的细胞核，枯草杆菌无 (2) 液体 为扩展青霉的生长提供氮源和无机盐、维持培养液一定的渗透压 (3)第一区域划线结束，接种环灼烧后未冷却或划线未从第一区域末端开始 (4)病斑越大，相同部位的Pat含量越高 ；相同病斑情况下，离病斑越远的部位，Pat含量越低 【来源】四川省南充市白塔中学2023-2024学年高二下学期期中考试生物试题 【分析】1、按物理性质培养基分为固体培养基、液体培养基。固体培养基中加入凝固剂，主要用于微生物的分离、鉴定；液体培养基中不加任何凝固剂，主要用于工业生产。 2、平板划线操作的注意事项：第一次划线及每次划线之前都需要灼烧接种环灭菌；灼烧接种环之后，要冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种；划线时最后一区域不要与第一区域相连；划线用力大小要适当，防止用力过大将培养基划破。 3、消毒是指使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物（不包括芽孢和孢子），灭菌则是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。 【详解】（1）苹果腐烂部位的微生物除扩展青霉外，还有枯草杆菌。青霉属于真核生物，而枯草杆菌属于原核生物，故这两种微生物在结构上的主要区别是扩展青霉有以核膜为界限的细胞核，枯草杆菌无。 （2）活化扩展青霉菌种使用的培养基成分中没有凝固剂，故根据物理性质属于液体培养基，NaNO3的作用是为扩展青霉的生长提供氮源和无机盐、维持培养液一定的渗透压。 （3）划线时需要从上一次划线的末端开始划线。用平板划线法分离扩展青霉时，划线的某个平板培养后第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌落，其他区域的划线上却均无菌落。导致失误的原因可能是：第一区域划线结束，接种环灼烧后未冷却或划线未从第一区域末端开始，从而导致这种情况的出现。 （4）由图分析可知，①号为腐烂部位，②③④⑤依次距离腐烂部位越来越远，推测①号部位的Pat含量最高，离腐烂部位越远的果肉中Pat含量越低。 3．(23-24高二下·四川成华区某校·期中)近年来，水环境中发现的不同程度的抗生素残留，不仅威胁水生生物的生存，还会损害微生物的生态平衡。氧氟沙星（OFL）（C18H2OFN3O4）是一种人工合成的广谱抗菌的氟喹诺酮类药物，某实验小组成功地从废水环境样品中分离得到能降解OFL的菌株A．筛选分离的操作过程如图所示。回答下列问题： (1)利用细菌处理去除废水中的抗生素，这种方法的不足之处是 ，因此需要筛选抗生素优势降解菌株。 (2)筛选能够降解OFL的菌株时，富集培养基中需要加入 作为唯一碳源或氮源。用于培养菌株A的固体培养基含有水、蛋白胨、酵母提取物和琼脂等成分，其中蛋白胨主要为菌株A提供碳源、氮源和 。 (3)过程Ⅱ中的总稀释次数为8次，在过程Ⅲ中，可以每隔24h统计一次菌落的数目，选取 时的记录作为结果，三个培养基中长出的菌落数量分别是145、163、154，故推测A中1mL培养液中细菌的数量为 个/mL。 (4)该实验小组欲进一步探究初始OFL浓度对菌株A降解OFL能力的影响，请帮助其设计实验并写出实验思路 。 【答案】(1)抗生素会抑制细菌的生长繁殖 (2) OFL 维生素 (3) 菌落数目稳定 1.54×1011 (4)设置含一系列的OFL浓度的培养基，分别接种等量的菌株A，检测OFL的降解程度 【来源】四川成华区某校2023-2024学年高二下学期期中考试生物试题 【分析】1、稀释涂布平板法：将待测样品制成均匀的系列稀释液，尽量使样品中的微生物细胞分散开，使成单个细胞存在，再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的培养基内。 2、平板划线法：把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞，用接种环在平板表面上作多次由点到线的划线稀释而获得较多独立分布的单个细胞，并让其成长为单菌落的方法。 【详解】（1）抗生素会抑制细菌的生长繁殖，需要筛选抗生素优势降解菌株来处理废水中的抗生素。 （2）筛选能够降解OFL的菌株时，富集培养基中需要加入OFL来作为唯一碳源或氮源；蛋白胨是将肉、酪素或明胶用酸或蛋白酶水解后干燥而成的外观呈淡黄色的粉剂，主要为菌株A提供碳源、氮源和维生素。 （3）据图可知，培养皿中菌落均匀分布，可知利用的接种方法是稀释涂布平板法，此方法用于统计样品中活菌的数目，选取菌落数目稳定时的记录作为结果；A中细菌的数量为（145+163+154）÷3×108÷0.1=1.54×1011个·mL⁻¹。 （4）欲进一步探究初始OFL浓度对菌株A降解OFL能力的影响，自变量是初始OFL浓度，因变量是菌株A的降解效果，因此可设置含一系列的OFL浓度的培养基，分别接种等量的菌株A，检测OFL的降解程度。 4．(23-24高二下·四川内江第六中学·)某同学将5个手指尖在贴有“洗手前”标签的培养基（甲组）上轻轻按一下。然后用肥皂将该手洗干净，再将5个指尖在贴有“洗手后”标签的同种培养基（乙组）上轻轻按一下。将这两个培养皿放入37℃恒温培养箱中培养24h后，发现贴有“洗手后”标签的培养皿中菌落较少。请分析回答下列问题。 (1)这个实验中需要进行灭菌处理的材料用具有 。。 (2)“ 将指尖在培养基上轻轻按一下”相当于微生物培养中的 操作。 (3)实验结果说明肥皂洗手不能彻底清除手上的微生物，为避免手上微生物污染培养基，洗过的手还应当使用 等方法处理。 (4)有同学认为乙组培养基上有菌落产生，可能是因为培养基制作时灭菌不彻底。请你在本实验的基础上设计一个简单的实验来探究他的猜想是否正确。 实验思路及预测结果： 。 【答案】(1)培养皿、培养基 (2)接种 (3)酒精或消毒液擦拭、配戴已灭菌的手套等 (4)倒平板后，将一个未接种的培养基置于相同条件下培养24小时；若培养基上出现菌落，则猜想正确；若其上没有出现菌落，则猜想错误。 【来源】四川省内江市第六中学2023-2024学年高二下学期半期考试生物试卷 【分析】微生物在实验室培养时需要无菌技术要点有： ①杀死规定作业系统（如试管、三角瓶和培养皿）中的一切微生物，使作业系统变成无菌； ②在作业系统与外界的联系之间隔绝一切微生物穿过（如用火焰封闭三角瓶和试管等的开口，用棉花过滤空气、用滤器过滤水等）； ③在无菌室、超净操作台或空气流动较小的清洁环境中，进行接种或其他不可避免的敞开作业，防止不需要的微生物侵入作业系统。 【详解】（1）微生物在实验室培养时需要无菌技术，接种用的培养基、培养皿都需要灭菌，对培养基需要采用高压蒸汽灭菌法灭菌，对培养皿通常采用干热灭菌法进行灭菌。 （2）“将指尖在培养基上轻轻按一下”，手上的微生物会沾在培养基上，相当于微生物培养中的接种操作。 （3）操作时对手部消毒可以用酒精或消毒液擦拭、配戴已灭菌的手套等。 （4）为判断培养基制作时灭菌是否彻底，可以将一个未接种的培养基置于相同条件下培养24小时；若培养基上出现菌落，则灭菌不彻底；若其上没有出现菌落，则灭菌彻底。 5．(23-24高二下·四川德阳什邡什邡中学·期中)如图为实验室培养和纯化醋酸菌的部分操作步骤，请回答下列问题： (1)该实验中纯化醋酸菌的接种方法是 ；完成步骤④的操作，接种环共需要 次灼烧处理，其中最后一次灼烧的目的是 。 (2)划线的某个平板经培养后，第一次划线区域的划线上都不间断地长满了菌落，第二次划线区域的第一条线上无菌落，其他划线上有菌落，造成划线上无菌落可能的操作失误有 （回答2个即可）。 (3)配制的培养基必须进行灭菌处理，目的是 。检测固体培养基灭菌效果的常用方法是 。 (4)为高效降解农业秸秆废弃物，研究人员利用从土壤中筛选获得的3株纤维素分解菌，在37℃条件下进行玉米秸秆降解实验，结果如表所示。在该条件下纤维素酶活力最高的是菌株 ，理由是 。 菌株 秸秆总重/g 秸秆残重/g 秸秆失重/% 纤维素降解率/% A 2.00 1.51 24.50 16.14 B 2.00 1.53 23.50 14.92 C 2.00 1.42 29.00 23.32 【答案】(1) 平板划线法 6 杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者 (2)接种环灼烧后未冷却；划线未从第一次划线末端开始 (3) 为了杀死培养基中的所有微生物（或防止杂菌污染） 不接种培养（或空白培养） (4) C 在相同条件下，C组纤维素降解率最高，秸秆失重最多 【来源】四川省德阳市什邡市什邡中学2023-2024学年高二下学期5月期中考试生物试题 【分析】1、平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。 2、平板划线操作的注意事项：①第一次划线及每次划线之前都需要灼烧接种环灭菌。②灼烧接种环之后，要冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种。③划线时最后一区域不要与第一区域相连。④划线用力大小要适当，防止用力过大将培养基划破。 【详解】（1）根据步骤④可知，该实验中纯化醋酸菌的接种方法是平板划线法；由图观察可知，图中进行了5次划线，第一次划线及每次划线之前都需要灼烧接种环灭菌，故完成步骤④的操作，接种共需要6次灼烧处理，最后一次灼烧的目的是杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。 （2）划线的某个平板经培养后，第一次划线区域的划线上都不间断地长满了菌落，第二次划线区域的第一条线上无菌落，其他划线上有菌落，造成划线上无菌落可能的操作失误是接种环灼烧后未冷却或者划线未从第一区域末端开始。 （3）配制培养基灭菌的目的是为了杀死培养基中的所有微生物（微生物和芽孢、孢子）。为检测灭菌效果可对培养基进行空白培养，即将未接种的培养基在适宜条件下培养一段时间，若在适宜条件下培养无菌落出现，说明培养基灭菌彻底，否则说明培养基灭菌不彻底。 （4）测定酶活力时可以用单位时间内、单位体积中反应物的减少量或产物的增加量来表示。由表格可知，在适宜的条件下，C菌株在相同的温度和时间下，秸秆失重最多，纤维素降解6．(23-24高二下·四川凉山州西昌·期中)自然界中不同微生物之间存在着复杂的相互作用。有些细菌具有溶菌特性，能够破坏其他细菌的结构使细胞内容物释出。科学家试图从某湖泊水样中分离出有溶菌特性的细菌。 (1)用于分离细菌的固体培养基包含水、葡萄糖、蛋白胨和琼脂等成分，其中蛋白胨主要为细菌提供 和维生素等。 (2)按照要求配制培养基后，需要立即进行灭菌，常用的灭菌方法为 ，在制备固体培养基的倒平板操作时，平板冷凝后，应将平板倒置，目的是 。 (3)下面的图1和图2是纯化培养该细菌菌种的结果图，其中图1对应的接种方法是 ，用该方法计算得到活菌数，往往比实际值 （填“偏低”或“偏高”），原因是 。 (4)不同种类的微生物，往往需要不同的培养温度和培养时间。同时，为了保证结果准确，一般选择菌落数为30～300的平板计数，本实验中，我们可以每隔24h统计一次菌落数目，选取菌落数目 时的记录作为结果。 (5)A菌通常被用做溶菌对象。研究者将含有一定浓度A菌的少量培养基倾倒在固体培养平板上，凝固形成薄层。培养一段时间后，薄层变浑浊（如图），表明 。 (6)制作果酒和果醋利用的微生物分别是 和 ，后者可在O2充足、缺少糖源时，直接将 转化为乙醛，再将乙醛变为乙酸。 【答案】(1)氮源、碳源 (2) 湿热灭菌 防止培养皿盖上冷凝的水滴入培养基造成污染，避免培养基水分过快蒸发 (3) 稀释涂布平板法 偏低 当2个或以上细胞集聚在一起发育时，在平板上观察到的是一个菌落 (4)稳定 (5)A菌能在培养平板中生长繁殖 (6) 酵母菌 醋酸菌 乙醇 【来源】四川省凉山州西昌市2023-2024学年高二下学期期中检测生物试题 【分析】微生物的营养成分主要有碳源、氮源、水和无机盐等。微生物的培养基按其特殊用途可分为选择性培养基和鉴别培养基，培养基按其物理状态可分为固体培养基、液体培养基和半固体培养基三类。 【详解】（1）蛋白胨主要为细菌提供氮源、碳源和维生素等。 （2）培养基常采用湿热灭菌进行灭菌，在制备固体培养基的倒平板操作时，平板冷凝后，应将平板倒置，目的是防止培养皿盖上冷凝的水滴入培养基造成污染，避免培养基水分过快蒸发。 （3）图1中菌落均匀分布，说明该接种方法为稀释涂布平板法，由于该过程中可能2个或以上的细胞集聚在一起统计为一个菌落，导致其计算得到的活菌数偏低。 （4）为了防止统计时部分菌落被遗漏，选择在菌落数目稳定时的记录作为统计结果。 （5）将含有一定浓度A菌的少量培养基倾倒在固体培养平板上，凝固形成薄层。培养一段时间后，薄层变浑浊，表明A菌能在培养平板中生长繁殖。 （6）果酒的发酵菌种是酵母菌，果醋的发酵菌种是醋酸菌，醋酸菌可在O2充足、缺少糖源时，直接将乙醇转化为乙醛，再将乙醛变为乙酸。 7．(23-24高二下·四川成都树德中学·期中)研究发现，感染毛霉能诱导脐橙产生具有抗病活性的红色物质（CPRE）。为探究CPRE能否替代化学杀菌剂保护采收后的脐橙，科研人员进行了研究： (1)据下表配方配制培养基，溶解后分装到锥形瓶中，用 法灭菌后冷却至50℃左右。分别加入浓度为25、50、100、200μg/mL的CPRE无菌溶液，摇匀备用。以无菌水作为对照。本培养基的氮源来自于 。 马铃薯培养基配方 成分 马铃薯 葡萄糖 琼脂 蒸馏水 含量 200g 20g 15-20g 定容至1000mL (2)将含不同浓度CPRE的培养基分别涂于载玻片上凝固后，接种20μL指状青霉孢子悬浮液，在适宜条件下培养一段时间后，用显微镜观察孢子萌发情况。各组萌发率的计算公式为：视野内萌发孢子数/视野内孢子总数×100%；根据萌发率计算实验组的萌发抑制率，计算公式为 。 统计结果表明CPRE能抑制指状青霉孢子萌发，且随浓度的增加抑制效果增强。 (3)进一步研究发现，CPRE可抑制指状青霉的生长，且一定范围内随CPRE浓度的增加抑制效果增强。为了探究CPRE抑制指状青霉的机理，研究者进行了如下检测。 ①检测不同浓度CPRE处理，菌丝几丁质（真菌细胞壁的主要成分）含量和胞外AKP酶活性，结果如下图。图1和图2的结果表明，CPRE改变了细胞壁的结构和功能，判断依据是 。 注：AKP酶（碱性磷酸酶）由细胞合成后分泌到细胞壁与细胞膜的间隙。 ②再取对照组和实验组的指状青霉菌丝，用碘化丙啶进行染色（与DNA结合产生红色荧光的染料，碘化丙啶不能通过活细胞膜，但却能穿过破损的细胞膜而对核染色）。结果出现 ，证明CPRE破坏了细胞膜的完整性。 (4)请结合以上研究分析说明CPRE抵御指状青霉感染的作用机制： 。 【答案】(1) 高压蒸汽灭菌（湿热灭菌） 马铃薯 (2)（对照组萌发率−实验组萌发率）÷对照组萌发率 (3) CPRE使青霉菌细胞壁中几丁质的含量下降；随CPRE浓度和时间的增加，胞外APK酶活性升高 对照组菌内无荧光；实验组菌内出现红色荧光，并随CRPE浓度增加荧光强度增强 (4)CPRE破坏指状青霉细胞壁和细胞膜，从而抑制指状青霉孢子的萌发和菌体的生长，减少了指状青霉的感染。 【来源】四川省成都市树德中学2023-2024学年高二下学期期中考试 生物版含答案word 【分析】培养基是人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质；分为固体培养基和液体培养基，培养基中一般含有水、碳源、氮源和无机盐。在提供上述几种主要营养物质的基础上，培养基还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质和氧气的要求。在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称做选择培养基。 【详解】（1）可用高压蒸汽灭菌法对培养基进行灭菌，培养基中的葡萄糖和马铃薯都可以为微生物提供碳源，马铃薯还可以提供氮源。 （2）各组萌发率的计算公式为：视野内萌发孢子数/视野内孢子总数×100%，则根据萌发率计算实验组的萌发抑制率的公式为（对照组萌发率−实验组萌发率）÷对照组萌发率。 （3）①据图可知，CPRE使青霉菌细胞壁中几丁质的含量下降，随CPRE浓度和时间的增加，胞外APK酶活性升高，说明CPRE改变了细胞壁的结构和功能。 ②由于只有活细胞的细胞膜具有选择透过性，则对照组菌内无荧光：实验组菌内出现红色荧光，并随CRPE浓度增加荧光强度增强，则说明CPRE破坏了细胞膜的完整性。 （4）CPRE破坏指状青霉细胞壁和细胞膜，从而抑制指状青霉孢子的萌发和菌体的生长，减少了指状青霉的感染，因此脐橙受到“伤害”会启动防御机制。 8．(23-24高二下·四川泸州泸县普通高中共同体·期中)填充型淀粉塑料又称生物破坏性塑料，其制造工艺是在通用塑料中加入一定量的淀粉和其他少量添加剂，然后加工成型，淀粉含量不超过30%。填充型淀粉塑料技术成熟，因此目前国内可降解淀粉塑料产品大多为此类型。某垃圾处理中心工作人员从堆放填充型淀粉塑料的土壤中分离得到A和B两株可以降解填充型淀粉塑料的细菌，在此基础上采用平板培养法比较二者降解填充型淀粉塑料的能力。 实验所用的培养基成分如下。 培养基I：K2HPO4，MgSO4，NH4NO3，填充型淀粉塑料粉末，水。 操作步骤： ①将A、B菌株分别接种在两瓶液体培养基I中培养，得到A、B菌液； ②液体培养基I中添加物质X，分别制成平板I、平板Ⅱ、平板Ⅲ，并按图中所示在平板上打甲、乙两孔 ③在无菌条件下，将等量等浓度的A菌液和B菌液分别接种到三个平板的甲和乙两孔处，在相同且适宜条件下培养一段时间，比较两孔处的透明圈大小并作记录。（“+”表示有透明圈，“+”越多表示透明圈越大）    菌株 透明圈大小 平板I 平板Ⅱ 平板Ⅲ A +++ +++ ++ B ++ + ++ (1)培养基I能为菌株A、B提供的基本营养物质有 。从功能上划分，实验所用的培养基属于 培养基。 (2)要制成平板I、平板Ⅱ和平板Ⅲ，液体培养基I中添加物质X一般是 ，根据实验结果，分解填充型淀粉塑料应选用的菌株是 。 (3)在平板上打孔的过程可能会污染平板，为了减少这个情况的发生，请你换一种办法使菌株在平板上产生透明圈，请写出实验思路 。 (4)如果在5个平板上各接种稀释倍数为103的菌液样品0.1mL，培养一段时间后，平板上的菌落数分别为48、50、54、56、430，则每升原菌液样品中细菌数为 个。这种方法所统计的细菌数通常会比实际数目偏低，原因是 。 【答案】(1) 碳源、氮源、水、无机盐 选择 (2) 琼脂（凝固剂） 菌株A (3)采用稀释涂布平板法将A菌液和B菌液均匀涂布在平板上，培养后记录透明圈大小 (4) 5.2×108 当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落 【来源】四川省泸州市泸县普通高中共同体2023-2024学年高二下学期4月期中联考生物试题 【分析】培养基的概念及营养构成 （1）概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出的供其生长繁殖的营养基质。（2）营养构成：各种培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。例如，培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素，培养霉菌时需将培养基的pH调至酸性，培养细菌时需将pH调至中性或微碱性，培养厌氧微生物时则需要提供无氧的条件。 【详解】（1）培养基在制备的过程中需要灭菌，最常用的灭菌方式是高压蒸汽灭菌法，培养基Ⅰ能为菌株A、B提供的基本营养物质有 碳源、氮源、水、无机盐。培养基还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质及O2的需求，本实验中所用的培养基中以填充型淀粉塑料粉末为唯一的碳源，因而，从功能上划分，该实验所用的培养基属于选择培养基，目的是选择出能高效降解填充型淀粉塑料粉末的微生物。 （2） 要制成平板Ⅰ、平板Ⅱ和平板Ⅲ，液体培养基Ⅰ中添加物质X一般是琼脂（凝固剂），根据实验结果，菌株A产生的透明圈更大，所以分解填充型淀粉塑料应选用的菌株是菌株A。 （3） 在平板上打孔的过程可能会污染平板，为了减少这个情况的发生，可以采用稀释涂布平板法将A菌液和B 菌液均匀涂布在平板上，培养后记录透明圈大小。 （4） 如果在5个平板上各接种稀释倍数为103的菌液样品0.1mL，培养一段时间后，平板上的菌落数分别为48、50、54、56、430，其中430不在30~300范围内，因而不作统计，则每升原菌液样品中细菌数为（48+50+54+56）÷4÷0.1×103×103=5．2×108个。这种方法所统计的细菌数通常会比实际数目偏小，这是因为在涂布时，当两个或多个细胞连在一起时，经过培养在平板上观察到的只是一个菌落。因而统计的数目偏低。 9．(23-24高二下·安宁河联盟·期中)淀粉酶在大规模工业生产中有重要作用，但淀粉酶高温下易失活。科学家在热泉中的某嗜热菌中提取了高温淀粉酶。据此回答问题： (1)淀粉酶在高温下 遭到破坏，使酶失活。 (2)筛选能产生高温淀粉酶的嗜热菌需要使用 （功能）培养基。该培养基应该以 为唯一碳源。接种后，细菌若能分解淀粉，培养平板经碘液处理，会出现以菌落为中心的透明圈(如图)，实验结果见下表。 菌种 菌落直C(mm) 透明圈直径H(mm) H/C 细菌Ⅰ 5.1 11.2 2.2 细菌Ⅱ 8.1 13.0 1.6 在接种和纯化产高温淀粉酶的嗜热菌时，采用的方法是 。推测，两种细菌中产高温淀粉酶能力更强的是 ，理由是 。 【答案】(1)空间结构 (2) 选择 淀粉 稀释涂布平板法 细菌Ⅰ 细菌Ⅰ的H/C更大，说明每个细菌分解的淀粉越多，可说明该菌产生淀粉酶的能力越强 【来源】安宁河联盟2023-2024学年高二下学期4月期中联考生物试题 【分析】1、培养基的营养构成：①各种培养基的具体配方不同，但一般都含有水、碳源、氮源和无机盐；②不同培养基还要满足不同微生物对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。 2、据图示及表格数据分析：图示接种方法为稀释涂布平板法，H/C值越大，分解淀粉能力越强，该值的大小反映了两种细菌分解淀粉能力的差异，细菌Ⅰ分解淀粉的能力更强。 【详解】（1）淀粉酶的化学本质是蛋白质，蛋白质在高温下空间结构遭到破坏，使酶失活。 （2）为了筛选能产生高温淀粉酶的嗜热菌需要使用选择培养基。该培养基应该以淀粉为唯一碳源，不能以淀粉为碳源的微生物无法在培养基上生存。据图分析，单菌落在培养基上随机均匀分布，推测采用的方法是稀释涂布平板法。H/C值越大，说明每个细菌分解的淀粉越多，可说明该菌产生淀粉酶的能力越强，细菌Ⅰ分解淀粉的能力更强。 10．(23-24高二下·四川广安华蓥华蓥中学·期中)某研究小组设计了一个利用作物秸秆生产燃料乙醇的小型实验。其主要步骤是：先将粉碎的作物秸秆堆放在底部有小孔的托盘中，喷水浸润、接种菌T，培养一段时间后，再用清水淋洗秸秆堆（清水淋洗时菌T不会流失），在装有淋洗液的瓶中接种酵母菌，进行乙醇发酵（酒精发酵）。实验流程如图所示。 回答下列问题。 (1)在粉碎的秸秆中接种菌T，培养一段时间后发现菌T能够将秸秆中的纤维素大量分解，其原因是 。 (2)采用液体培养基培养酵母菌，可以用淋洗液为原料制备培养基，培养基中还需要加入氮源等营养成分，氮源的主要作用是 （答出1点即可）。稀释涂布平板法的原理是 ，活菌的实际数目比统计的菌落数 ，原因 。 (3)在酵母菌发酵过程中，还需适时拧松瓶能，原因是 。发酵液中的乙醇可用 溶液检测。 (4)本实验收集的淋洗液中的葡萄糖可以作为酵母菌生产乙醇的原料，与以粮食为原料发酵生产乙醇相比，本实验中乙醇生产方式的优点是 。 【答案】(1)菌T能够分泌纤维素酶 (2) 为合成微生物细胞结构提供原料（微生物细胞中的含氮物质，如核酸、蛋白质、磷脂） 当样品稀释度足够高时，培养基表面生在的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌 多 当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落 (3) 排出二氧化碳 酸性的重铬酸钾溶液 (4)节约粮食、废物利用、清洁环保、不污染环境、生产成本低、原料来源广 【来源】四川省广安市华蓥市华蓥中学2023-2024学年高二下学期4月期中生物试题 【分析】果酒的制作离不开酵母菌，酵母菌是兼性厌氧微生物，在有氧条件下，酵母菌进行有氧呼吸，大量繁殖，把糖分解成二氧化碳和水；在无氧条件下，酵母菌能进行酒精发酵。故果酒的制作原理是酵母菌无氧呼吸产生酒精，酵母菌最适宜生长繁殖的温度范围是18～30℃；生产中是否有酒精的产生，可用酸性重铬酸钾来检验，该物质与酒精反应呈现灰绿色。 【详解】（1）菌T能够分泌纤维素酶，纤维素酶能将纤维素最终分解为葡萄糖，因此在粉碎的秸秆中接种菌T，培养一段时间后发现菌T能够将秸秆中的纤维素大量分解。 （2）培养基的主要成分：水、碳源、氮源、无机盐，其中氮源主要为合成微生物的细胞结构提供原料（微生物细胞中的含氮物质，如核酸、蛋白质、磷脂）。稀释涂布平板法的原理是当样品稀释度足够高时，培养基表面生在的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。由于两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，故活菌的实际数目比统计的菌落数多。 （3）酵母菌进行无氧呼吸产生酒精和二氧化碳，在发酵过程中密闭，所以需要根据发酵进程适时拧松瓶盖放出二氧化碳，酒精可用酸性重铬酸钾溶液来检测，该物质与酒精反应呈现灰绿色。 （4）纤维素分解产生的葡萄糖可以作为酵母菌生产乙醇的原料。与以粮食为原料发酵生产乙醇相比，利用纤维素为原料生产乙醇具有节约粮食、废物利用、清洁环保、不污染环境、生产成本低、原料来源广等优点。 11．(23-24高二下·四川广元苍溪县四川苍溪中学校·期中)难以降解的塑料（主要成分为聚氯乙烯）垃圾被分解形成的长度小于 5 毫米的塑料颗粒称为微塑料，可被植物、土壤动物吸收，但在体内很难被分解。研究发现，土壤中分离的某些微生物能够降解微塑料，研究人员试图从这些微生物中筛选出对微塑料耐受能力高，分解能力强的菌株，其流程如下。回答下列问题。 (1)步骤②用甲培养基进行扩大培养时发现，在摇床上振荡培养比不振荡所得到的菌落数更多，可能的原因是 。对培养基甲和乙应用 法进行灭菌，研究者可以通过观察乙上形成的菌落的 等菌落特征，来初步判断培养基上生长的细菌种类。 (2)为了选育对聚氯乙烯的耐受能力高和分解效率的菌株，可在培养液中将聚氯乙烯作为 ，不断提高其浓度并检测分解效率，经多次培养后获得目标菌株。除此之外培养基上还应添加一定量的 NH4NO3 作为氮源，氮源在菌体内可以参与合成 （答出2 种即可）等生物大分子。 (3)在培养过程中，定期采用稀释涂布平板法法接种微生物并对菌落进行计数。实验发现，当培养液中菌体数量为 4×1011个/L 时对某一浓度微塑料的分解效率最高，假设接种时所用的体积为 0.1mL，则选取 107 稀释倍数 （填“是”或“不”）合适，理由是 。 (4)研究过程中科学家还在土壤中发现一种嗜盐、耐酸碱能力强的菌株 B，能以植物秸秆为原料，发酵生产一种新型可降解塑料。实验时研究人员为其设计了一种盐浓度为 60g/L，pH 为 10 的培养基构成的发酵系统，该发酵系统不需要灭菌，菌株 B 也能正常发酵 60 天以上，该发酵系统不需要灭菌的原因是 （答出 2 种即可）。 【答案】(1) 分解聚氯乙烯的微生物为好氧型微生物 湿热灭菌（高压蒸汽灭菌） 形状、大小、颜色 (2) 唯一碳源 蛋白质、核酸 (3) 不 当稀释倍数为107时，平板上菌落平均数为4，不在30～300之间的范围 (4)培养基高盐环境使杂菌渗透失水而死亡；pH为10的碱性环境使杂菌酶变性失活，生长受到抑制 【来源】四川省广元市苍溪县四川省苍溪中学校2023-2024学年高二下学期4月期中生物试题 【分析】微生物常见的接种方法：稀释涂布平板法和平板划线法，前者可以对菌落数进行计数，后者不可计数。 【详解】（1）在摇床上振荡培养可以增加培养液中的溶解氧，培养所得的菌落更多，说明分解聚氯乙烯的微生物为好氧型微生物；对培养基一般采用湿热灭菌法，其中高压蒸汽灭菌法效果最好；菌落特征包括菌落的形态、大小、颜色等。 （2）聚氯乙烯是一种有机物，可以作为微生物的碳源，为选育对聚氯乙烯的耐受能力高和分解效率强的菌株，培养基中需要以聚氯乙烯为唯一碳源；氮源在细胞内还能合成含氮物质，如核酸、蛋白质等含氮的生物大分子。 （3）假设在107稀释倍数下平板上菌落平均数为C，根据溶液中活菌数的计算方法，可知C/0.1×107×103=4×1011，求得C为4，不在30～300之间的范围内，故该稀释倍数不符合要求。 （4）菌株B嗜盐、耐酸碱能力强，可以在盐浓度为60g/L，pH为10的培养基中正常发酵，但一般的微生物发酵在高盐浓度培养基中会渗透失水而死亡，在pH为10的碱性环境使杂菌酶变性失活，生长受到抑制，因此该发酵系统不需要灭菌，菌株B也能正常发酵60天以上。 12．(23-24高二下·四川眉山青神县青神中学校·期中) 难治性幽门螺杆菌感染(RHPI) 是指经过标准四联抗菌治疗≥3次后仍以失败告终的病例。中医药名方“半夏泻心汤”具有消炎抗菌、保护胃黏膜、调节肠道的作用。本实验探究半夏泻心汤分阶段综合治疗 RHPI 的效果。科研人员选取122例RHPI患者作为研究对象，随机平分成两组。实验过程如下表，并分别统计RHPI患者的幽门螺杆菌治疗情况(图1) 和复感情况(图2)。 第一准备阶段 第二关键阶段 第三巩固阶段 对照组 铝碳酸镁片；双歧杆菌三联活菌胶囊枸橼酸莫沙必利片复方消化酶胶囊 四联抗菌治疗：阿莫西林胶囊、雷贝拉唑钠肠溶片胶体果胶铋胶囊克拉霉素片 前两周持续服用双歧杆菌三联活菌胶囊；后两周持续服用胶体果胶铋胶囊 实验组 半夏泻心汤治疗 四联抗菌治疗(同上) 半夏泻心汤治疗 (1)部分 RHPI患者使用抗菌药物效果不佳的可能原因是 (写出一点)。 (2)本实验选取 122 例患者应在年龄、病程等特征上保持一致，是为了 ；实验组第三巩固阶段要用半夏泻心汤治疗 周。 (3)据图可知采用半夏泻心汤治疗幽门螺杆菌的根除率为 (用百分数表示，保留一位小数)；利用半夏泻心汤分阶段综合治疗 RHPI (有效/无效)。 (4)半夏泻心汤中有一味药材是甘草，科研人员想继续探究甘草是否具有杀死幽门螺杆菌的作用，请写出实验思路： 。 【答案】(1)部分患者感染的是药物不敏感型幽门螺杆菌 (2) 排除无关变量对实验结果的影响 4/四 (3) 88.5% 有效 (4)配置培养幽门螺杆菌的培养基，经灭菌后平均分为两组，一组加入灭菌后的甘草，另一组加入等量的无菌水，两组用涂布法接种等量的幽门螺杆菌，在适宜条件下培养，一段时间后观察两组培养基上菌落的数量 【来源】四川省眉山市青神县青神中学校2023-2024学年高二下学期4月期中生物试题 【分析】实验中遵循的原则：对照原则；单一变量原则和等量原则；科学性原则。 【详解】（1）由于菌体中存在对药物不敏感的变异型，导致部分RHPI患者使用抗菌药物效果不佳。 （2）本实验选取 122 例患者应在年龄、病程等特征上保持一致，是为了实验中保证单一变量，排除无关变量对实验结果的影响。根据对照组的处理方式“前两周持续服用双歧杆菌三联活菌胶囊；后两周持续服用胶体果胶铋胶囊”，则实验组的服药时间应与对照组相同，故实验组第三巩固阶段要用半夏泻心汤治疗四周。 （3）根据图1可知，实验组中54人根除了幽门螺杆菌，而7人未根除，因此根除率为54÷（54+7）×100%≈88.5%。由图1可知，利用半夏泻心汤分阶段综合治疗RHPI的根除率大于对照组，且根据图2可知，未复感染的人数也明显大于对照组，说明利用半夏泻心汤分阶段综合治疗RHPI是有效的。 （4）若想继续探究甘草是否具有杀死幽门螺杆菌的作用，则实验自变量为是否有甘草，因变量为幽门螺杆菌存活量，因此实验思路为：配置培养幽门螺杆菌的培养基，经灭菌后平均分为两组，一组加入灭菌后的甘草，另一组加入等量的无菌水，两组用涂布法接种等量的幽门螺杆菌，在适宜条件下培养，一段时间后观察两组培养基上菌落的数量。 13．(23-24高二下·四川南充嘉陵第一中学·期中)尿素是一种重要的农业氮肥，但尿素并不能直接被农作物吸收，只有当土壤中的细菌将尿素分解成氨之后，才能被植物利用。如图是研究人员从红棕壤中筛选高效分解尿素细菌的过程示意图，请回答下列问题： (1)步骤②的目的是 。 (2)步骤③采用的接种方法是 。 (3)如何确定该培养基能够对土壤中微生物起到筛选作用? 。 (4)统计的菌落数往往比活菌的实际数目 ，除了上述的活菌计数法外， 也是测定微生物数量的常用方法。 (5)步骤④用在培养基中加 鉴定，如何比较细菌分解尿素的能力? 。 【答案】(1)增加目的菌的浓度 (2)稀释涂布平板法 (3)使用完全培养基作对照，如果接种后的完全培养基上的菌落数明显多于选择培养基上的菌落数，说明选择培养基起到了筛选作用（合理叙述即可） (4) 低 显微镜直接计数法 (5) 在培养基中加入酚红指示剂 细菌分解尿素能力越强，pH越高，溶液颜色越红（合理叙述即可） 【来源】四川省南充市嘉陵第一中学2023-2024学年高二下学期4月期中生物试题 【分析】稀释涂布平板计数是根据微生物在固体培养基上所形成的单个菌落，即是由一个单细胞繁殖而成这一培养特征设计的计数方法，即一个菌落代表一个单细胞。 计数时，首先将待测样品制成均匀的系列稀释液，尽量使样品中的微生物细胞分散开，使成单个细胞存在(否则一个菌落就不只是代表一个细胞)，再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的培养基内。经培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可计算出样品中的含菌数。 【详解】（1）步骤②是在选择培养基中，只有能分解尿素的细菌才能存活，因此可以增加目的菌的浓度。 （2）步骤3平板中的菌落分散分布，采用的是稀释涂布平板法。 （3）使用完全培养基作对照，如果接种后的完全培养基上的菌落数明显多于选择培养基上的菌落数，说明选择培养基起到了筛选作用。在液体选择培养基中培养的目的是增加目的菌的浓度。步骤③平板中的菌落分散分布，采用的接种方法是稀释涂布平板法。要确定该培养基能够对土壤中微生物起到筛选作用，可使用完全培养基作对照，如果接种后的完全培养基上的菌落数明显多于选择培养基上的菌落数，说明选择培养基起到了筛选作用。 （4）统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，因为当两个或多个细胞连在一起时，在平板上观察到的只是一个菌落，除了上述的活菌计数法外，显微镜直接计数也是测定微生物数量的常用方法。 （5）能分解尿素的微生物能产生脲酶，脲酶催化尿素分解成氨使培养基碱性增强，向培养基中加入酚红指示剂，酚红变红。在培养基中加入酚红指示剂，细菌分解尿素能力越强，pH越高，溶液颜色越红。 14．(23-24高二下·四川成都蓉城名校联盟·期中)某地土壤有机物A污染严重，某生物兴趣小组提出，土壤中可能存在以有机物A为唯一碳源的微生物。小组同学计划分离并计数土壤中分解有机物A的微生物。回答下列问题： (1)在制备培养基时，一般都含有水、无机盐和 （答出2点即可）等营养物质。在提供上述几种主要营养物质的基础上，培养基还需要满足微生物生长对特殊营养物质的需求，如在培养乳酸杆菌时，需要在培养基中添加 。 (2)小组同学欲统计土壤样品中能分解化合物A的活菌数目，可用 法接种，统计结果一般比实际活菌数偏 。下图中 不是该方法得到的培养结果。 (3)由于小组同学是第一次做相关实验，故将稀释倍数范围适当放宽进行平板培养，这样做是为保证 。微生物培养过程中，选取 时的记录作为结果。 【答案】(1) 碳源、氮源 维生素 (2) 稀释涂布平板 小（或“少”） C (3) 能从中选出菌落数为30~300的平板进行计数（或“能从中选出菌落数目合适的平板进行计数”） 菌落数目稳定 【来源】四川省成都市蓉城名校联盟2023-2024学年高二下学期4月期中生物试题 【分析】虽然各种微生物培养基的配方不同，但一般都含有水、碳源、氮源和无机盐等营养物质。在提供上述几种主要营养物质的基础上，培养基还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。 【详解】（1）各种培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐等营养物质。有些微生物在培养时还需要加入一些特殊物质，如在培养乳酸杆菌时，需要在培养基中添加维生素。 （2）统计活菌数的接种方法是稀释涂布平板法，因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，故统计结果一般比实际活菌数偏小。稀释涂布平板法菌落的分布一般是相对均匀分布的，如图A、B、D，而不会呈线型分布，如图C，因此C不是用稀释涂布平板法接种获得的。 （3）第一次做实验，适当放宽稀释倍数进行平板培养，可保证选出菌落数为30~300的平板，这样计数的误差相对较小。计数时选取菌落数目稳定时的记录作为结果更准确，这样可以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。 15．(23-24高二·四川雅安四校联考·期中)白色污染问题已引起全社会广泛关注，降解塑料的研究和开发是解决白色污染的理想途径之一。地膜的主要成分是聚乙烯[化学式为（C2H4）n]。残留在土壤中的地膜难以被降解，为筛选出高效降解地膜的细菌，研究人员进行了如图所示的操作。X培养基是选择培养基，聚乙烯分解菌在该培养基上会形成透明圈。回答下列问题：    (1)在筛选聚乙烯分解菌过程中，应选择 的土壤，制作培养基时，应使用 灭菌法对培养基进行灭菌。 (2)为了证明所配制X培养基具有选择作用，在恒温培养前，需要将接种后的X培养基平板和接种后的完全培养基平板同时进行培养，待两种培养基平板上的菌落生长稳定时，比较两种平板培养基上的菌落数。若结果为 ，则可证明上述观点。 (3)可挑选X培养基中的 （填序号）中的单菌落接种到Y培养基上进行培养。配制Y培养基时，其pH一般调至 。 (4)用稀释涂布平板法对细菌进行计数时，所统计的菌落数往往会比活菌的实际数目偏小，原因是 。在5个平板上各接种稀释倍数为103的菌液样品0.1mL，培养一段时间后，平板上的菌落数分别为28、50、52、54、313，则每升原菌液样品中细菌数为 个。 【答案】(1) 含废旧地膜丰富 高压蒸汽 (2)X培养基平板上的菌落数明显少于完全培养基平板上的菌落数 (3) ⑤ 中性或弱碱性 (4) 当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落 5.2×108  【来源】四川省雅安市四校联考2023-2024学年高二下期期中考试生物试题 【分析】微生物常见的接种的方法 ①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。 ②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。 【详解】（1）要筛选聚乙烯分解菌，应选择含废旧地膜丰富的土壤，制作培养基时，应使用高压蒸汽灭菌法对培养基进行灭菌。 （2）为了证明所配制X培养基具有选择作用，在恒温培养前，需要将接种后的X培养基平板和接种后的完全培养基平板同时进行培养，待两种培养基平板上的菌落生长稳定时，比较两种平板培养基上的菌落数。如果X培养基平板上的菌落数明显少于完全培养基平板上的菌落数，说明该培养基具有选择作用。 （3）⑤的透明圈最大，说明其降解地膜的效果最好，可挑选该菌落接种到Y培养基上。在培养细菌时，一般需要将培养基调至中性或弱碱性。 （4）由于当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，所以当用稀释涂布平板法对细菌进行计数时，所统计的菌落数往往会比活菌的实际数目偏小。平板上的菌落数应介于30-300之间，故28、313数值无效，所以每升原菌液样品中的细菌数为（50+52+54）/3÷0.1×103×103=5.2×108个/L。 16．(23-24高二下·四川成都外国语学校·期中)化合物S被广泛应用于医药、食品和化工工业、用菌株C可生产S，S的产量与菌株C培养所利用的碳源关系密切。为此，某小组通过实验比较不同碳源对菌体生长和S产量的影响，结果见表。回答下列问题。 碳源 细胞干重（g/L） S产量（g/L） 葡萄糖 3.12 0.15 淀粉 0.01 0.00 制糖废液 2.30 0.18 (1)通常在实验室培养微生物时，需要对所需的玻璃器皿进行灭菌，常用灭菌的方法是 。 (2)由实验结果可知，菌株C生长的最适碳源是 ；用菌株C生产S的最适碳源是 。菌株C的生长除需要碳源外，还需要 （答出1点即可）等营养物质。 (3)由实验结果可知，碳源为淀粉时菌株C不能生长，其直接原因是 。 (4)若以制糖废液作为碳源，为进一步确定生产S的最适碳源浓度，某同学进行了相关实验。请简要写出实验思路： 。 【答案】(1)干热灭菌 (2) 葡萄糖 制糖废液 氮源、无机盐、水 (3)缺少淀粉酶 (4)分别配制一系列不同浓度梯度的以制糖废液为唯一碳源的培养基，培养菌株C，其他条件相同且适宜，一段时间后，测定并比较不同浓度制糖废液中的S的产量，S产量最高时对应的制糖废液浓度即为生产S的最适碳源浓度 【来源】四川省成都市外国语学校2023-2024学年高二下学期期中考试生物试题 【分析】1、实验室常用的灭菌方法：（1）灼烧灭菌：将微生物的接种工具，如接种环、接种针或其他金属工具，直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧，可以迅速彻底地灭菌；（2）干热灭菌：能耐高温的，需要保持干燥的物品，如玻璃器皿（吸管、培养皿）和金属用具等，可以采用这种方法灭菌；（3）高压蒸汽灭菌：将灭菌物品放置在盛有适量水的高压蒸汽灭菌锅内，为达到良好的灭菌效果，一般在压力为100 kPa，温度为121℃的条件下，维持15～30 min。 2、培养基的营养构成：各种培养基的具体配方不同，但一般都含有水、碳源、氮源和无机盐；不同培养基还要满足不同微生物对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。 【详解】（1）通常在实验室培养微生物时，为防止实验用的玻璃器皿等物品中原有的微生物污染培养物，需要使用强烈的理化因素杀死物体内外一切微生物的细胞、芽孢和孢子，即对所需的玻璃器皿进行灭菌，玻璃器皿常用的灭菌的方法是干热灭菌。 （2）由实验结果可知，与以制糖废液为碳源相比，以葡萄糖为碳源时菌株C的细胞干重最大，说明最适于菌株C生长的碳源是葡萄糖；而以制糖废液为碳源时，用菌株C生产S的产量高于以葡萄糖为碳源时的产量，说明最适于生产S的碳源是制糖废液；微生物的生长一般都需要水、碳源、氮源和无机盐，还需要满足微生物生长对pH、氧气以及特殊营养物质的要求，故菌株C的生长除需要碳源外，还需要氮源、无机盐、水等营养物质。 （3）淀粉属于多糖，不能直接被细胞吸收利用，分析表格可以看出在以淀粉为碳源的培养基中，菌株C不能生长，原因可能是菌株C不能合成淀粉酶或菌株C不能分泌淀粉酶，因而不能利用淀粉。 （4）要测定生产S的最适制糖废液为碳源的浓度，实验自变量为制糖废液的浓度，可分别配制一系列不同浓度梯度的以制糖废液为唯一碳源的培养基，培养菌株C，其他条件相同且适宜，一段时间后，测定并比较不同浓度制糖废液中的S的产量，S产量最高时对应的制糖废液浓度，即为生产S的最适碳源浓度。 17．石油泄漏会对给周边生态环境带来严重的损害，还将影响居民的健康生活。为解决石油污染问题，某科研小组尝试从被石油严重污染的土壤中分离出能高效分解石油的细菌，过程如下图所示。回答下列问题：    (1)防止杂菌污染是研究和应用微生物的前提，对培养基和涂布器常用的灭菌方法分别是 。过程③的培养基成分与普通液体培养基相比，最大的区别是 。 (2)进行过程④之前，常需要检验培养基平板灭菌是否合格，方法是 。 (3)通过统计过程④培养基中菌落数，可对石油分解菌进行计数原理是 。某同学用该法进行操作时，将1mL样品稀释100倍，在3个平板上分别接种0.1mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为49、58和52，据此可得出每升该样品中的活菌数为 。 (4)为筛选出高效分解石油的细菌，进行过程④→⑤的操作思路是 。 【答案】(1) 湿热灭菌（高压蒸汽灭菌）、灼烧灭菌 以石油为唯一碳源 (2)将未接种的平板倒置于恒温箱中培养24h，观察是否有菌落出现 (3) 当样品稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中一个活菌 5．3×107 (4)从过程④的培养基中挑选单菌落，分别接种于过程⑤的液体培养基中，一段时间后测定并比较石油的剩余量 【来源】四川省成都市第七中学2023—2024学年高二下学期期中考试生物试题 【分析】1、在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称做选择培养基。 2、统计菌落数目的方法： （1）显微镜直接计数法 ①原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量；②方法：用计数板计数； ③缺点：不能区分死菌与活菌。 （2）间接计数法（活菌计数法） ①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。②操作a、设置重复组，增强实验的说服力与准确性；b、为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数；③计算公式：每克样品中的菌株数=（c÷V）×M，其中c代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积（mL），M代表稀释倍数。 【详解】（1）常采用高压蒸汽灭菌法对培养基进行灭菌，采用灼烧灭菌法对涂布器进行灭菌。由题干信息分析可知，该实验的目的是分离和纯化高效分解石油的细菌，故步骤③的培养基成分与普通液体培养基相比，步骤③培养基为选择培养基，最大的区别是步骤③培养基中以石油为唯一碳源，从而分离出能分解石油的细菌。 （2）进行过程④之前常需要检验培养基平板灭菌是否合格的方法是：随机取若干灭菌后的平板倒置于恒温箱中培养24h，观察是否有菌落出现：若有菌落出现，则证明灭菌不合格。 （3）过程④为通过稀释涂布平板法对石油分解菌进行计数，其原理是当样品稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中一个活菌。将1mL样品稀释100倍在3个平板上分别接人0.1mL稀释液；经适当培养后3个平板上的菌落数分别为49、58和52，据此可得出每升样品中的活菌数为（49+58+52）÷3÷0.1×1000×100=5.3×107（个）。 （4）为筛选出高效分解石油的细菌，可从过程④的培养基中挑选单菌落，分别接种于过程⑤的液体培养基中，一段时间后测定并比较石油的剩余量，石油剩余量越少说明其分解石油的效率越高。 18．(23-24高二下·四川阆中中学校·期中)菌落总数可作为判定食品被污染程度的标志，也可以用于观察细菌在食品中繁殖的动态，以便对送检样品进行卫生学评估提供证据。如图是某样品培养简化流程图，请分析回答下列问题： (1)该培养基配制过程中，其基本步骤包括按照培养基配方准确计算、称量、溶化、调节pH、 法灭菌等。 (2)样品稀释时取1 mL原液加入9 mL无菌水中，稀释10倍。涂布器一般是在酒精中浸泡，然后在酒精火焰上引燃灭菌，该操作的目的是 。 (3)本实验中微生物计数的原理是基于 ，运用这种方法统计的结果往往较实际值偏 ，原因 。 (4)菌落计数的具体培养结果如表。选取菌落数30～300的培养皿作为菌落总数的测定标准。当只有一个稀释梯度的平均菌落数符合此范围，以该培养皿菌落数×稀释倍数报告。当有两个梯度菌落值在30～300之间，报告结果由二者菌落数比值决定，若比值不大于2，则取平均数；若比值大于2，则报告稀释度较低(稀释次数越多，稀释度越高)的培养皿菌落数。请填写例次2、3中“？”处的菌落总数分别为 、 。 例次 不同稀释度及平均菌落数 两稀释度菌落数之比 菌落总数 101 102 103 1 1 365 164 20 － 16 400 2 2 760 295 46 1.6 ？ 3 2 890 271 60 2.2 ？ 【答案】(1)湿热灭菌/高压蒸汽灭菌 (2)杀灭杂菌 (3) 一个菌落代表一个活菌或当样品稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌 小 当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落 (4) 37750 27100 【来源】四川省阆中中学校2023-2024学年高二下学期期中考试生物试题 【分析】各种培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及温度的要求。根据培养基中是否含有琼脂，即琼脂的多少可以将培养基分为固体培养基、液体培养基和半固体培养基。制备固体培养基的方法：计算、称量、溶化、灭菌、倒平板。 【详解】（1）配制培养基时应按照培养基配方准确称量各组分，将其溶解、定容后，调节培养基的pH，并进行高压蒸汽灭菌。 （2）将1mL样品稀释10倍，需加入9mL无菌水，涂布器一般是在酒精中浸泡，然后酒精火焰上引燃灭菌，该操作的目的杀死杂菌，防止杂菌污染，目的是保证平板中的微生物来自菌种。 （3）当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，因此一个菌落可代表一个活菌，这是稀释涂布平板法的原理。但在涂布过程中，当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，因此运用这种方法统计的结果往往较实际值偏小；菌种具有种的特异性，因此，可以依据菌落的形状、大小、颜色 、隆起程度等菌落特征对微生物进行初步鉴定。 （4）结合题干可知，报告菌落总数时，应选取菌落数30～300的培养皿作为菌落总数的测定标准。当有两个梯度菌落值在30～300之间时，报告结果由二者菌落数比值决定，若比值不大于2，则取平均数；若比值大于2，则报告稀释度较低的培养皿菌落数。因此例次2应选择102和103的菌落数求平均，该培养皿菌落数为（295÷10+46）÷2=37.75，故例次2的菌落总数为该培养皿菌落数×稀释倍数，既37.75×1000=37750，例次3应选取102的菌落数报告，则3菌落总数为271×100=27100。 2 / 53 / 学科网（北京）股份有限公司 $$ 专题2 微生物的培养技术及应用 考点概览 考点01微生物的基本培养技术 考点02 微生物的选择培养和计数 微生物的基本培养技术考点01 1．（24-25高二下·四川眉山·期中）下列说法错误的是（    ） A．当所需微生物在混合菌种中不是优势种时，可通过稀释涂布平板法将其分离 B．纤维素为唯一碳源的固体培养基中添加刚果红可以初步分离和鉴定纤维素分解菌 C．当所选质粒上标记基因为氨苄青霉素抗性基因时，作为受体大肠杆菌应不含氨苄青霉素抗性基因，以便于筛选 D．植物组织培养过程中将获得的外植体用75%的酒精和次氯酸钠溶液消毒 2．（23-24高二下·四川自贡·期中）微生物培养最基本的要求是无菌操作，下列对培养基、培养皿、接种环、双手、空气、牛奶所采用的灭菌或消毒方法的正确顺序依次是（    ） ①化学消毒②湿热灭菌③干热灭菌④紫外线灭菌⑤灼烧灭菌⑥巴氏消毒法 A．⑤③⑤①④⑥ B．③②⑤④①⑥ C．②③⑤①④⑥ D．②②⑤④①⑥ 3．（23-24高二下·四川广安·期中）抗生素I-IV均可治疗黄色葡萄球菌（Sau）引起的肺炎，为选出最佳疗效的抗生素，研究者将分别含等剂量抗生素的四张大小相同的滤纸片置于Sau均匀分布的平板培养基上，在适宜条件下培养48h，结果如图。下列相关叙述错误的是（    ） A．配制培养基时应将培养基的pH调至微酸性 B．测量菌落和抑菌圈直径时应直接在皿底上测量 C．抗生素IV治疗Sau感染引起的肺炎效果最好 D．抑菌圈中出现的菌落可能是Sau发生了基因突变 4．（23-24高二下·四川达州·期中）一次性口罩的主要成分为聚丙烯纤维（PP），某科研团队准备从土壤中筛选出高效降解一次性口罩的细菌，进行了如图所示的实验。下列说法错误的是（　　） A．图示所用培养基是以PP作为唯一碳源的选择培养基 B．图示所用接种方法分别为稀释涂布平板法，需要在酒精灯火焰旁进行 C．在三个平板滴加0.1ml的稀释液，经适当培养后平板上菌落数分别是75、76、77，则1g土壤中活菌数约为7.6×108 D．用稀释涂布平板法进行微生物数量统计一般比实际值偏低 5．（23-24高二下·四川内江·期中）研究人员用无机盐、琼脂和石油配制的培养基从被石油污染的土壤中筛选出一种石油降解菌。对此，以下表述错误的是（　　） A．这种培养基是一种选择培养基 B．利用这种石油降解菌可以降解石油，修复土壤 C．相对于未被污染的土壤，从被石油污染的土壤中更容易分享到石油降解菌 D．利用平板划线法统计菌落数目时，统计的菌落数比接种活菌的实际数目更小 6．（23-24高二下·四川内江·期中）微生物的纯培养既需要适宜的培养基，又要防止杂菌污染。下列相关表达正确的是（　　） A．培养基中的营养物质浓度越高，对微生物的生长越有利 B．消毒和灭菌是防止杂菌污染的常用手段，二者程度不存在差异 C．微生物的纯培养物就是不含有代谢废物的微生物培养物 D．配制培养基时，应先调节pH，然后再进行灭菌处理 7．（23-24高二下·四川南充·期中）微生物培养时常利用无菌技术避免杂菌的污染。下列相关叙述错误的是（    ） A．配制好的培养基应放入干热灭菌箱中进行干热灭菌 B．实验中避免已灭菌处理的材料用具与周围物品接触 C．接种前后的接种环都要在酒精灯火焰上进行灼烧 D．实验结束后对实验室喷洒苯酚或煤酚皂溶液同时配合紫外线照射 8．（23-24高二下·四川成都·期中）纤维素被纤维素分解菌分解后可以用来生产乙醇。实验室中常用刚果红培养基鉴别纤维素分解菌，其原理是在含纤维素的培养基中添加刚果红，刚果红会与纤维素形成红色复合物，若纤维素被分解，则不能形成该复合物，培养基中就会出现以这些菌落为中心的透明圈。下列相关叙述正确的是（    ） A．刚果红培养基中除了纤维素、刚果红，还必须添加足量碳源物质 B．实验中需要将富集培养后的待测菌液直接涂布在刚果红培养基中 C．应选择菌落直径与周围透明圈直径比值大的菌落进行纯化培养 D．在刚果红培养基上长出的有透明圈的菌落需要进一步确定其产纤维素酶的能力 9．（23-24高二下·四川德阳·期中）精氨酸依赖型菌株不能在缺少精氨酸的培养基上正常生长，但可作为鸟氨酸发酵的优良菌种。如图为野生型谷氨酸棒状杆菌经诱变获得精氨酸依赖型菌并进行筛选的过程示意图，其中乙获得的菌落是通过影印甲培养得来。下列相关叙述不正确的是（　　） A．野生型菌液的培养皿中不会出现菌落 B．乙培养基与甲相比可能缺少了精氨酸 C．紫外线照射可导致谷氨酸棒状杆菌发生可遗传变异 D．乙中的菌落A为鸟氨酸发酵的优良菌种 10．（23-24高二下·四川·期中）一次性口罩的主要成分为聚丙烯纤维(PP)，某科研团队准备从土壤中筛选出高效降解一次性口罩的细菌，进行了如图所示的实验。下列说法错误的是（    ） A．图示所用培养基是以PP作为唯一碳源的选择培养基 B．图示所用接种方法分别为稀释涂布平板法，需要在酒精灯火焰旁进行 C．在三个平板滴加0.1ml的稀释液，经适当培养后平板上菌落数分别是75、76、77，则1g土壤中活菌数约为7.6×107 D．用稀释涂布平板法进行微生物数量统计一般比实际值偏低 11．（23-24高二下·四川·期中）下列有关以CO2为唯一碳源的自养微生物营养的描述错误的是（    ） A．氮源物质为该微生物提供必要的氮素 B．碳源物质也是该微生物的能源物质 C．无机盐是该微生物不可缺少的营养物质 D．水是该微生物的营养要素之一 12．（23-24高二下·四川·期中）关于微生物的选择培养与数量测定，叙述正确的是（　　） A．平板划线和稀释涂布平板均可计数微生物 B．筛选尿素分解菌可以蛋白胨作为唯一氮源 C．同一稀释度下以30～300范围内的平板计数 D．显微镜直接计数的统计结果比实际活菌数低 13．（23-24高二下·四川广元·期中）用稀释涂布平板法来统计样品中的活菌数时，通过统计平板上的菌落数就能推测出样品中的活菌数。下列与稀释涂平板法的相关说法，正确的是（    ） A．可以用涂布器蘸取菌液均匀涂抹在固体培养基表面 B．样品中活菌数往往大于稀释涂布平板法的统计的结果 C．统计菌落数目时只要菌落数目在 30～300 之间的平板即可 D．统计土壤中细菌数量时一般选用的稀释倍数为 103、104、105 14．（23-24高二下·四川广元·期中）下表是某公司研发的一种微生物培养基配方。下列有关微生物培养的叙述，正确的是（    ） 成分 蛋白胨 乳糖 蔗糖 K2HPO4 显色剂 琼脂 含量 10.0g 5.0g 5.0g 2.0g 0.2g 12.0g 将上述物质溶解后，用蒸馏水定容至 1000 mL A．该培养基属于固体培养基，能提供碳源的物质有乳糖和蔗糖 B．为防止杂菌污染，需在接种前对培养基和培养皿进行消毒处理 C．接种环蘸取菌液在该培养基上连续划线培养后，可分离大肠杆菌 D．在该培养基中添加尿素即为选择培养基，用于筛选产生脲酶的细菌 15．（23-24高二下·四川凉山·期中）在生产生活实践中人们经常需要用到消毒或杀菌的方法以避免微生物大量繁殖，下列关于培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、空气、牛奶适宜采用的消毒或杀菌方法依次是（    ） ①化学药物消毒②灼烧灭菌③干热灭菌④紫外线消毒⑤湿热灭菌⑥巴氏消毒 A．⑤③②④①⑥ B．③⑤②①④⑥ C．⑤③②①④⑥ D．③⑤④②①⑥ 16．（23-24高二下·四川泸州·期中）消毒、灭菌、无菌操作是生物学实验中常见的操作。相关叙述正确的是（    ） A．对菊花外植体消毒，要用无水酒精配合使用一定浓度的次氯酸钠溶液 B．可用干热灭菌法对实验中所使用的培养皿、金属用具等进行灭菌 C．为防止蛋白质变性，不能用湿热灭菌法对牛肉膏蛋白胨培养基进行灭菌 D．对操作者的双手、衣着以及操作空间等，采用紫外线进行消毒 17．（23-24高二下·四川南充·期中）下图是研究人员从石油污染的土壤中筛选高效降解石油的细菌（目的菌）流程图。下列叙述不正确的是（    ）    A．应选择②中培养瓶内石油含量显著降低的培养液继续③操作 B．④中可采用平板划线法对筛选得到的目的菌进行纯化 C．培养皿等用具在使用前后均需进行消毒处理 D．若要研究目的菌生长规律，可用培养液培养目的菌并用细菌计数板计数 18．（23-24高二下·四川南充·期中）某生物小组在初步筛选产耐高温淀粉酶分解菌时，将土壤样液接种在平板上，培养结果如图(D/d＝透明圈直径/菌落直径)。下列叙述错误的是（    ）    A．土壤可取自高温热泉环境 B．接种方法为稀释涂布平板法 C．培养温度应控制在37 ℃左右 D．菌落丙的淀粉酶活性较高 19．（23-24高二下·四川成都·期中）下图为实验室酵母菌的纯培养过程中的部分操作步骤，下列说法正确的是（    ） A．步骤①操作时，需待培养基冷却至50℃左右时倒入，然后立即将培养皿倒置 B．步骤②灼烧接种环后，立即在酒精灯火焰附近用接种环蘸取菌液 C．步骤③每次划线前都需对接种环灼烧灭菌，划线结束后不用再灼烧 D．完成平板划线后，待菌液被培养基吸收后，再倒置放入恒温培养箱中培养 20．（23-24高二下·四川成都·期中）无菌技术在微生物培养中非常重要，下列叙述正确的是（    ） A．消毒可杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子 B．耐高温且需要保持干燥的物品，可采用湿热灭菌法灭菌 C．无菌技术可以用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染 D．巴氏消毒法可杀死牛奶中全部微生物，且只破坏小部分营养成分 21．（23-24高二下·四川绵阳·期中）下列关于“酵母菌的纯培养"实验的叙述，正确的是（    ） A．酵母菌的纯培养物就是不含有代谢废物的酵母菌培养物 B．接种前后，接种环都要在酒精灯火焰上进行灼烧 C．平板划线时，涂布器应在固体培养基表面轻轻地连续划线 D．完成平板划线后，应将平板立刻倒置培养以免污染培养基 22．（23-24高二下·四川·期中）微生物培养过程中，要十分重视无菌操作，下列相关操作叙述错误的是（    ） A．涂布器可以采用酒精引燃方式灭菌 B．煮沸消毒可以杀死物体部分微生物 C．接种环在使用前后都需要灼烧灭菌 D．接种前需对实验者的双手进行灭菌 23．（23-24高二下·四川成都·期中）下列有关稀释涂布平板法计数和显微镜直接计数法计数的描述，正确的是（    ） A．为确保结果准确，每个平板的菌落都要计数并取平均值 B．可以用细菌计数板直接计数法检测大肠杆菌菌落的数量 C．两种方法均能在计数时观察到所研究微生物的形态特征 D．使用显微计数时，活菌数的实际值比稀释涂布平板法计数所得的结果偏大 24．（23-24高二下·四川成都·期中）在牛、羊等反刍动物的瘤胃中生活着多种微生物，其中有能分解纤维素的微生物。某科研团队按照如图所示的流程分离瘤胃中的纤维素分解菌，实验中需要甲、乙两种培养基，并在刚果红培养基平板上筛选到有透明降解圈的菌落。下列叙述错误的是（    ）    A．培养基表面均加入一层无菌的石蜡主要是为防止杂菌的污染 B．甲培养基中唯一的碳源是纤维素，则该培养基是选择培养基 C．制备乙培养基时，待灭菌的培养基冷却至50℃左右再倒平板 D．图中降解圈的大小与纤维素酶活性有关，菌落a降解能力最强 25．（23-24高二下·四川成都·期中）自生固氮菌是土壤中能独立固定空气中氮气的细菌，科研人员进行了土壤中自生固氮菌的分离和固氮能力测定的研究，部分实验流程如图所示。下列叙述错误的是（    ） A．步骤①土样应取自当地表层土壤；步骤③将土壤悬浮液稀释了1000倍 B．步骤②需振荡20min，主要目的是使土壤中的微生物充分释放到无菌水中 C．步骤④所用培养基的特点是不添加氮源，需要将培养基调至中性或微碱性 D．图中纯化培养采用了稀释涂布平板法，需用灭菌后的涂布器蘸取菌液进行涂布 26．（23-24高二下·四川成都·期中）为了观察手掌上附着的微生物，某小组成员将自己的手掌在配制的牛肉膏蛋白胨固体培养基上轻轻按压后，盖上培养皿盖，将平板倒置放在恒温培养箱中培养48h，结果如图所示。下列相关说法错误的是（    ） A．牛肉膏、蛋白胨均可为微生物生长提供碳源、氮源、维生素 B．为防止蛋白质变性，牛肉膏蛋白胨培养基不能用湿热灭菌法 C．倒置培养可以避免皿盖上凝结的水珠落入培养基造成污染 D．手掌上的某些微生物可能不能在该培养基上生长繁殖 27．（23-24高二下·四川成都·期中）下图表示用马铃薯琼脂培养基对酵母菌纯培养的部分操作步骤。下列相关叙述正确的是（    ） A．配制马铃薯琼脂培养基时，可不在酒精灯火焰旁 B．配制的培养基经高压蒸汽灭菌后，一般要调节pH再用于接种 C．平板划线法在每次划线前后都灼烧接种环的目的是防止杂菌污染 D．通过接种环连续蘸取菌液在固体培养基表面划线的操作，将菌种逐步稀释 28．（23-24高二下·四川成都·期中）进行土壤中尿素分解菌的选择培养时，利用的培养基组分及含量如表所示。下列分析错误的是（    ） 组分 KH2PO4 Na2HPO4 MgSO4·H2O 尿素 尿素 琼脂 H2O 含量 1.4g 2.1g 0.2g 10.0g 1.0g 15.0g 定容1000mL A．KH2PO4和Na2HPO4既可为微生物提供无机盐，又可调节培养基的pH B．葡萄糖、琼脂既可为尿素分解菌提供碳源，又可以提供能源 C．尿素既可为尿素分解菌提供氮源，又可对培养基中微生物起选择作用 D．上述培养基中生长的有些菌落可能没有利用培养基中唯一的氮源尿素 29．（23-24高二下·四川成都·期中）利用纤维素废弃物代替粮食生产酒精的研究工作前景广阔，其流程如图所示。下列说法错误的是（    ）    A．筛选纤维素分解菌需用到以纤维素为唯一碳源的培养基 B．纤维素分解菌和酵母菌都是真核生物，代谢类型都是异养需氧型 C．图中发酵阶段常用的菌种是酵母菌，发酵产物可以用酸性重铬酸钾来检验 D．筛选纤维素分解菌的过程中，用到的铁铲和纸袋等在使用前都需要灭菌 30．（23-24高二下·四川绵阳·期中）下表是某公司研发的一种培养大肠杆菌菌群的培养基配方，下列相关叙述正确的是（    ） 成分 蛋白胨 乳糖 蔗糖 K2HPO4 指示剂 琼脂 含量(g) 10.0 5.0 5.0 2.0 0.2 12.0 将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000 mL A．根据用途划分，该培养基属于选择培养基 B．该培养基也可用来筛选土壤中的尿素分解菌 C．该培养基的制备流程为灭菌→加入琼脂→倒平板 D．该培养基中蛋白胨提供的主要营养有碳源、氮源和维生素等 31．（23-24高二下·四川雅安·期中）稻瘟菌引起的水稻稻瘟病是危害最为严重的真菌病害之一，每年都给水稻生产带来重大的经济损失。土壤中某些微生物能合成并分泌几丁质酶，能抑制稻瘟菌的生长，可用于水稻稻瘟病的防治。科研人员试图从土壤中筛选出能高效降解几丁质的菌株，通过微生物培养获得几丁质酶。下列相关叙述错误的是（    ） A．筛选土壤中目的微生物时需用以几丁质为唯一碳源的培养基 B．纯化培养时，可选择稀释涂布平板法或平板划线法接种 C．在以几丁质为唯一碳源的培养基上生长的菌落均能分泌几丁质酶 D．利用能分泌几丁质酶的微生物对水稻稻瘟病进行的防治属于生物防治 32．（23-24高二下·四川雅安·期中）鲜牛奶容易被金黄色葡萄球菌污染，该菌高度耐盐，可引起人类肺炎等疾病。该菌在血平板（培养基中添加适量血液）上生长时，会破坏菌落周围的红细胞而出现溶血圈。某小组检测鲜牛奶被金黄色葡萄球菌污染情况的操作流程如图所示。下列有关叙述错误的是（    ） A．鲜牛奶在饮用前可以用高压蒸汽灭菌法进行灭菌 B．肉汤培养基中加入NaCl可能会使某些菌渗透失水 C．振荡培养可使细菌与营养物质充分接触，利于其生长 D．该实验采用的是平板划线法 微生物的选择培养和计数考点02 1．（23-24高二下·四川自贡·期中）某污水处理厂欲处理一批含As3+和硝酸盐浓度较高的污水，研究人员通过对肠道微生物的分离与筛选，得到了耐砷的反硝化细菌，它在厌氧条件下能够将硝酸盐还原为N2O和N2。分离耐砷的反硝化细菌具体步骤如下： 采集健康人体的新鲜粪便样本。 (1)配制培养基以筛选 ：该培养基中含有适宜浓度的 ，从而有利于该菌的生长，抑制其他微生物的生长。此种培养基属于 培养基。 接种：取采集的人体新鲜粪便样品0.3g，接种至该培养基上。 (2)耐砷反硝化细菌的分离与纯化：取200～300μL上述培养液，均匀地涂布在已经添加了5mmol/Las3+和10mmol/LNO3-的细菌固体培养基上。在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，这样做的目的是 ；涂布完成后，将平板置于温度为37℃的恒温培养箱中培养24h。挑取长势比较良好、形态大小不同的菌落利用平板划线法进行分离纯化，用该种方法进行接种时，接种工具是 ，该接种工具的灭菌方法是 。操作时，在第二次及其以后的划线时，总是从上一次划线的 开始划线，目的是 。 2．（23-24高二下·四川南充·期中）扩展青霉是腐烂苹果中常见的微生物之一，其次级代谢产物棒曲霉素（Pat）是一种具有致突变作用的毒素。为研究腐烂苹果中Pat的分布，研究人员进行了如图所示的实验，其中“病健交界处”为腐烂部位与 未腐烂部位的交界处，取样分离的 5 个部位分别为①号、②号、③号、④号、⑤号。请回答下列问题： (1)苹果腐烂部位的微生物除扩展青霉外，还有枯草杆菌。两种微生物在结构上的本质区别是 。 (2)活化扩展青霉菌种使用的培养基成分如下表，根据物理性质划分该培养基属于 培养基，NaNO3的作用是 （答两点） 蔗糖 NaNO3 MgSO4 KCl FeSO4 KH2PO4 蒸馏水 30g 2g 0.5g 0.5g 0.01g 1g 1000mL (3)用平板划线法分离扩展青霉时，划线的某个平板培养后第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌落，其他区域的划线上却均无菌落。操作失误的原因可能是 。 (4)研究人员测定了病斑直径为1、2、3cm 的苹果中①～⑤号部位的 Pat 含量，请推测最可能的结果： 。 3．（23-24高二下·四川成都·期中）近年来，水环境中发现的不同程度的抗生素残留，不仅威胁水生生物的生存，还会损害微生物的生态平衡。氧氟沙星（OFL）（C18H2OFN3O4）是一种人工合成的广谱抗菌的氟喹诺酮类药物，某实验小组成功地从废水环境样品中分离得到能降解OFL的菌株A．筛选分离的操作过程如图所示。回答下列问题： (1)利用细菌处理去除废水中的抗生素，这种方法的不足之处是 ，因此需要筛选抗生素优势降解菌株。 (2)筛选能够降解OFL的菌株时，富集培养基中需要加入 作为唯一碳源或氮源。用于培养菌株A的固体培养基含有水、蛋白胨、酵母提取物和琼脂等成分，其中蛋白胨主要为菌株A提供碳源、氮源和 。 (3)过程Ⅱ中的总稀释次数为8次，在过程Ⅲ中，可以每隔24h统计一次菌落的数目，选取 时的记录作为结果，三个培养基中长出的菌落数量分别是145、163、154，故推测A中1mL培养液中细菌的数量为 个/mL。 (4)该实验小组欲进一步探究初始OFL浓度对菌株A降解OFL能力的影响，请帮助其设计实验并写出实验思路 。 4．（23-24高二下·四川内江·期中）某同学将5个手指尖在贴有“洗手前”标签的培养基（甲组）上轻轻按一下。然后用肥皂将该手洗干净，再将5个指尖在贴有“洗手后”标签的同种培养基（乙组）上轻轻按一下。将这两个培养皿放入37℃恒温培养箱中培养24h后，发现贴有“洗手后”标签的培养皿中菌落较少。请分析回答下列问题。 (1)这个实验中需要进行灭菌处理的材料用具有 。。 (2)“ 将指尖在培养基上轻轻按一下”相当于微生物培养中的 操作。 (3)实验结果说明肥皂洗手不能彻底清除手上的微生物，为避免手上微生物污染培养基，洗过的手还应当使用 等方法处理。 (4)有同学认为乙组培养基上有菌落产生，可能是因为培养基制作时灭菌不彻底。请你在本实验的基础上设计一个简单的实验来探究他的猜想是否正确。 实验思路及预测结果： 。 5．（23-24高二下·四川德阳·期中）如图为实验室培养和纯化醋酸菌的部分操作步骤，请回答下列问题： (1)该实验中纯化醋酸菌的接种方法是 ；完成步骤④的操作，接种环共需要 次灼烧处理，其中最后一次灼烧的目的是 。 (2)划线的某个平板经培养后，第一次划线区域的划线上都不间断地长满了菌落，第二次划线区域的第一条线上无菌落，其他划线上有菌落，造成划线上无菌落可能的操作失误有 （回答2个即可）。 (3)配制的培养基必须进行灭菌处理，目的是 。检测固体培养基灭菌效果的常用方法是 。 (4)为高效降解农业秸秆废弃物，研究人员利用从土壤中筛选获得的3株纤维素分解菌，在37℃条件下进行玉米秸秆降解实验，结果如表所示。在该条件下纤维素酶活力最高的是菌株 ，理由是 。 菌株 秸秆总重/g 秸秆残重/g 秸秆失重/% 纤维素降解率/% A 2.00 1.51 24.50 16.14 B 2.00 1.53 23.50 14.92 C 2.00 1.42 29.00 23.32 6．（23-24高二下·四川凉山·期中）自然界中不同微生物之间存在着复杂的相互作用。有些细菌具有溶菌特性，能够破坏其他细菌的结构使细胞内容物释出。科学家试图从某湖泊水样中分离出有溶菌特性的细菌。 (1)用于分离细菌的固体培养基包含水、葡萄糖、蛋白胨和琼脂等成分，其中蛋白胨主要为细菌提供 和维生素等。 (2)按照要求配制培养基后，需要立即进行灭菌，常用的灭菌方法为 ，在制备固体培养基的倒平板操作时，平板冷凝后，应将平板倒置，目的是 。 (3)下面的图1和图2是纯化培养该细菌菌种的结果图，其中图1对应的接种方法是 ，用该方法计算得到活菌数，往往比实际值 （填“偏低”或“偏高”），原因是 。 (4)不同种类的微生物，往往需要不同的培养温度和培养时间。同时，为了保证结果准确，一般选择菌落数为30～300的平板计数，本实验中，我们可以每隔24h统计一次菌落数目，选取菌落数目 时的记录作为结果。 (5)A菌通常被用做溶菌对象。研究者将含有一定浓度A菌的少量培养基倾倒在固体培养平板上，凝固形成薄层。培养一段时间后，薄层变浑浊（如图），表明 。 (6)制作果酒和果醋利用的微生物分别是 和 ，后者可在O2充足、缺少糖源时，直接将 转化为乙醛，再将乙醛变为乙酸。 7．（23-24高二下·四川成都·期中）研究发现，感染毛霉能诱导脐橙产生具有抗病活性的红色物质（CPRE）。为探究CPRE能否替代化学杀菌剂保护采收后的脐橙，科研人员进行了研究： (1)据下表配方配制培养基，溶解后分装到锥形瓶中，用 法灭菌后冷却至50℃左右。分别加入浓度为25、50、100、200μg/mL的CPRE无菌溶液，摇匀备用。以无菌水作为对照。本培养基的氮源来自于 。 马铃薯培养基配方 成分 马铃薯 葡萄糖 琼脂 蒸馏水 含量 200g 20g 15-20g 定容至1000mL (2)将含不同浓度CPRE的培养基分别涂于载玻片上凝固后，接种20μL指状青霉孢子悬浮液，在适宜条件下培养一段时间后，用显微镜观察孢子萌发情况。各组萌发率的计算公式为：视野内萌发孢子数/视野内孢子总数×100%；根据萌发率计算实验组的萌发抑制率，计算公式为 。 统计结果表明CPRE能抑制指状青霉孢子萌发，且随浓度的增加抑制效果增强。 (3)进一步研究发现，CPRE可抑制指状青霉的生长，且一定范围内随CPRE浓度的增加抑制效果增强。为了探究CPRE抑制指状青霉的机理，研究者进行了如下检测。 ①检测不同浓度CPRE处理，菌丝几丁质（真菌细胞壁的主要成分）含量和胞外AKP酶活性，结果如下图。图1和图2的结果表明，CPRE改变了细胞壁的结构和功能，判断依据是 。 注：AKP酶（碱性磷酸酶）由细胞合成后分泌到细胞壁与细胞膜的间隙。 ②再取对照组和实验组的指状青霉菌丝，用碘化丙啶进行染色（与DNA结合产生红色荧光的染料，碘化丙啶不能通过活细胞膜，但却能穿过破损的细胞膜而对核染色）。结果出现 ，证明CPRE破坏了细胞膜的完整性。 (4)请结合以上研究分析说明CPRE抵御指状青霉感染的作用机制： 。 8．（23-24高二下·四川泸州·期中）填充型淀粉塑料又称生物破坏性塑料，其制造工艺是在通用塑料中加入一定量的淀粉和其他少量添加剂，然后加工成型，淀粉含量不超过30%。填充型淀粉塑料技术成熟，因此目前国内可降解淀粉塑料产品大多为此类型。某垃圾处理中心工作人员从堆放填充型淀粉塑料的土壤中分离得到A和B两株可以降解填充型淀粉塑料的细菌，在此基础上采用平板培养法比较二者降解填充型淀粉塑料的能力。 实验所用的培养基成分如下。 培养基I：K2HPO4，MgSO4，NH4NO3，填充型淀粉塑料粉末，水。 操作步骤： ①将A、B菌株分别接种在两瓶液体培养基I中培养，得到A、B菌液； ②液体培养基I中添加物质X，分别制成平板I、平板Ⅱ、平板Ⅲ，并按图中所示在平板上打甲、乙两孔 ③在无菌条件下，将等量等浓度的A菌液和B菌液分别接种到三个平板的甲和乙两孔处，在相同且适宜条件下培养一段时间，比较两孔处的透明圈大小并作记录。（“+”表示有透明圈，“+”越多表示透明圈越大）    菌株 透明圈大小 平板I 平板Ⅱ 平板Ⅲ A +++ +++ ++ B ++ + ++ (1)培养基I能为菌株A、B提供的基本营养物质有 。从功能上划分，实验所用的培养基属于 培养基。 (2)要制成平板I、平板Ⅱ和平板Ⅲ，液体培养基I中添加物质X一般是 ，根据实验结果，分解填充型淀粉塑料应选用的菌株是 。 (3)在平板上打孔的过程可能会污染平板，为了减少这个情况的发生，请你换一种办法使菌株在平板上产生透明圈，请写出实验思路 。 (4)如果在5个平板上各接种稀释倍数为103的菌液样品0.1mL，培养一段时间后，平板上的菌落数分别为48、50、54、56、430，则每升原菌液样品中细菌数为 个。这种方法所统计的细菌数通常会比实际数目偏低，原因是 。 9．（23-24高二下·四川·期中）淀粉酶在大规模工业生产中有重要作用，但淀粉酶高温下易失活。科学家在热泉中的某嗜热菌中提取了高温淀粉酶。据此回答问题： (1)淀粉酶在高温下 遭到破坏，使酶失活。 (2)筛选能产生高温淀粉酶的嗜热菌需要使用 （功能）培养基。该培养基应该以 为唯一碳源。接种后，细菌若能分解淀粉，培养平板经碘液处理，会出现以菌落为中心的透明圈(如图)，实验结果见下表。 菌种 菌落直C(mm) 透明圈直径H(mm) H/C 细菌Ⅰ 5.1 11.2 2.2 细菌Ⅱ 8.1 13.0 1.6 在接种和纯化产高温淀粉酶的嗜热菌时，采用的方法是 。推测，两种细菌中产高温淀粉酶能力更强的是 ，理由是 。 10．（23-24高二下·四川广安·期中）某研究小组设计了一个利用作物秸秆生产燃料乙醇的小型实验。其主要步骤是：先将粉碎的作物秸秆堆放在底部有小孔的托盘中，喷水浸润、接种菌T，培养一段时间后，再用清水淋洗秸秆堆（清水淋洗时菌T不会流失），在装有淋洗液的瓶中接种酵母菌，进行乙醇发酵（酒精发酵）。实验流程如图所示。 回答下列问题。 (1)在粉碎的秸秆中接种菌T，培养一段时间后发现菌T能够将秸秆中的纤维素大量分解，其原因是 。 (2)采用液体培养基培养酵母菌，可以用淋洗液为原料制备培养基，培养基中还需要加入氮源等营养成分，氮源的主要作用是 （答出1点即可）。稀释涂布平板法的原理是 ，活菌的实际数目比统计的菌落数 ，原因 。 (3)在酵母菌发酵过程中，还需适时拧松瓶能，原因是 。发酵液中的乙醇可用 溶液检测。 (4)本实验收集的淋洗液中的葡萄糖可以作为酵母菌生产乙醇的原料，与以粮食为原料发酵生产乙醇相比，本实验中乙醇生产方式的优点是 。 11．（23-24高二下·四川广元·期中）难以降解的塑料（主要成分为聚氯乙烯）垃圾被分解形成的长度小于 5 毫米的塑料颗粒称为微塑料，可被植物、土壤动物吸收，但在体内很难被分解。研究发现，土壤中分离的某些微生物能够降解微塑料，研究人员试图从这些微生物中筛选出对微塑料耐受能力高，分解能力强的菌株，其流程如下。回答下列问题。 (1)步骤②用甲培养基进行扩大培养时发现，在摇床上振荡培养比不振荡所得到的菌落数更多，可能的原因是 。对培养基甲和乙应用 法进行灭菌，研究者可以通过观察乙上形成的菌落的 等菌落特征，来初步判断培养基上生长的细菌种类。 (2)为了选育对聚氯乙烯的耐受能力高和分解效率的菌株，可在培养液中将聚氯乙烯作为 ，不断提高其浓度并检测分解效率，经多次培养后获得目标菌株。除此之外培养基上还应添加一定量的 NH4NO3 作为氮源，氮源在菌体内可以参与合成 （答出2 种即可）等生物大分子。 (3)在培养过程中，定期采用稀释涂布平板法法接种微生物并对菌落进行计数。实验发现，当培养液中菌体数量为 4×1011个/L 时对某一浓度微塑料的分解效率最高，假设接种时所用的体积为 0.1mL，则选取 107 稀释倍数 （填“是”或“不”）合适，理由是 。 (4)研究过程中科学家还在土壤中发现一种嗜盐、耐酸碱能力强的菌株 B，能以植物秸秆为原料，发酵生产一种新型可降解塑料。实验时研究人员为其设计了一种盐浓度为 60g/L，pH 为 10 的培养基构成的发酵系统，该发酵系统不需要灭菌，菌株 B 也能正常发酵 60 天以上，该发酵系统不需要灭菌的原因是 （答出 2 种即可）。 12．（23-24高二下·四川眉山·期中） 难治性幽门螺杆菌感染(RHPI) 是指经过标准四联抗菌治疗≥3次后仍以失败告终的病例。中医药名方“半夏泻心汤”具有消炎抗菌、保护胃黏膜、调节肠道的作用。本实验探究半夏泻心汤分阶段综合治疗 RHPI 的效果。科研人员选取122例RHPI患者作为研究对象，随机平分成两组。实验过程如下表，并分别统计RHPI患者的幽门螺杆菌治疗情况(图1) 和复感情况(图2)。 第一准备阶段 第二关键阶段 第三巩固阶段 对照组 铝碳酸镁片；双歧杆菌三联活菌胶囊枸橼酸莫沙必利片复方消化酶胶囊 四联抗菌治疗：阿莫西林胶囊、雷贝拉唑钠肠溶片胶体果胶铋胶囊克拉霉素片 前两周持续服用双歧杆菌三联活菌胶囊；后两周持续服用胶体果胶铋胶囊 实验组 半夏泻心汤治疗 四联抗菌治疗(同上) 半夏泻心汤治疗 (1)部分 RHPI患者使用抗菌药物效果不佳的可能原因是 (写出一点)。 (2)本实验选取 122 例患者应在年龄、病程等特征上保持一致，是为了 ；实验组第三巩固阶段要用半夏泻心汤治疗 周。 (3)据图可知采用半夏泻心汤治疗幽门螺杆菌的根除率为 (用百分数表示，保留一位小数)；利用半夏泻心汤分阶段综合治疗 RHPI (有效/无效)。 (4)半夏泻心汤中有一味药材是甘草，科研人员想继续探究甘草是否具有杀死幽门螺杆菌的作用，请写出实验思路： 。 13．（23-24高二下·四川南充·期中）尿素是一种重要的农业氮肥，但尿素并不能直接被农作物吸收，只有当土壤中的细菌将尿素分解成氨之后，才能被植物利用。如图是研究人员从红棕壤中筛选高效分解尿素细菌的过程示意图，请回答下列问题： (1)步骤②的目的是 。 (2)步骤③采用的接种方法是 。 (3)如何确定该培养基能够对土壤中微生物起到筛选作用? 。 (4)统计的菌落数往往比活菌的实际数目 ，除了上述的活菌计数法外， 也是测定微生物数量的常用方法。 (5)步骤④用在培养基中加 鉴定，如何比较细菌分解尿素的能力? 。 14．（23-24高二下·四川成都·期中）某地土壤有机物A污染严重，某生物兴趣小组提出，土壤中可能存在以有机物A为唯一碳源的微生物。小组同学计划分离并计数土壤中分解有机物A的微生物。回答下列问题： (1)在制备培养基时，一般都含有水、无机盐和 （答出2点即可）等营养物质。在提供上述几种主要营养物质的基础上，培养基还需要满足微生物生长对特殊营养物质的需求，如在培养乳酸杆菌时，需要在培养基中添加 。 (2)小组同学欲统计土壤样品中能分解化合物A的活菌数目，可用 法接种，统计结果一般比实际活菌数偏 。下图中 不是该方法得到的培养结果。 (3)由于小组同学是第一次做相关实验，故将稀释倍数范围适当放宽进行平板培养，这样做是为保证 。微生物培养过程中，选取 时的记录作为结果。 15．（23-24高二下·四川雅安·期中）白色污染问题已引起全社会广泛关注，降解塑料的研究和开发是解决白色污染的理想途径之一。地膜的主要成分是聚乙烯[化学式为（C2H4）n]。残留在土壤中的地膜难以被降解，为筛选出高效降解地膜的细菌，研究人员进行了如图所示的操作。X培养基是选择培养基，聚乙烯分解菌在该培养基上会形成透明圈。回答下列问题：    (1)在筛选聚乙烯分解菌过程中，应选择 的土壤，制作培养基时，应使用 灭菌法对培养基进行灭菌。 (2)为了证明所配制X培养基具有选择作用，在恒温培养前，需要将接种后的X培养基平板和接种后的完全培养基平板同时进行培养，待两种培养基平板上的菌落生长稳定时，比较两种平板培养基上的菌落数。若结果为 ，则可证明上述观点。 (3)可挑选X培养基中的 （填序号）中的单菌落接种到Y培养基上进行培养。配制Y培养基时，其pH一般调至 。 (4)用稀释涂布平板法对细菌进行计数时，所统计的菌落数往往会比活菌的实际数目偏小，原因是 。在5个平板上各接种稀释倍数为103的菌液样品0.1mL，培养一段时间后，平板上的菌落数分别为28、50、52、54、313，则每升原菌液样品中细菌数为 个。 16．（23-24高二下·四川成都·期中）化合物S被广泛应用于医药、食品和化工工业、用菌株C可生产S，S的产量与菌株C培养所利用的碳源关系密切。为此，某小组通过实验比较不同碳源对菌体生长和S产量的影响，结果见表。回答下列问题。 碳源 细胞干重（g/L） S产量（g/L） 葡萄糖 3.12 0.15 淀粉 0.01 0.00 制糖废液 2.30 0.18 (1)通常在实验室培养微生物时，需要对所需的玻璃器皿进行灭菌，常用灭菌的方法是 。 (2)由实验结果可知，菌株C生长的最适碳源是 ；用菌株C生产S的最适碳源是 。菌株C的生长除需要碳源外，还需要 （答出1点即可）等营养物质。 (3)由实验结果可知，碳源为淀粉时菌株C不能生长，其直接原因是 。 (4)若以制糖废液作为碳源，为进一步确定生产S的最适碳源浓度，某同学进行了相关实验。请简要写出实验思路： 。 17．（23-24高二下·四川成都·期中）石油泄漏会对给周边生态环境带来严重的损害，还将影响居民的健康生活。为解决石油污染问题，某科研小组尝试从被石油严重污染的土壤中分离出能高效分解石油的细菌，过程如下图所示。回答下列问题：    (1)防止杂菌污染是研究和应用微生物的前提，对培养基和涂布器常用的灭菌方法分别是 。过程③的培养基成分与普通液体培养基相比，最大的区别是 。 (2)进行过程④之前，常需要检验培养基平板灭菌是否合格，方法是 。 (3)通过统计过程④培养基中菌落数，可对石油分解菌进行计数原理是 。某同学用该法进行操作时，将1mL样品稀释100倍，在3个平板上分别接种0.1mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为49、58和52，据此可得出每升该样品中的活菌数为 。 (4)为筛选出高效分解石油的细菌，进行过程④→⑤的操作思路是 。 18．（23-24高二下·四川南充·期中）菌落总数可作为判定食品被污染程度的标志，也可以用于观察细菌在食品中繁殖的动态，以便对送检样品进行卫生学评估提供证据。如图是某样品培养简化流程图，请分析回答下列问题： (1)该培养基配制过程中，其基本步骤包括按照培养基配方准确计算、称量、溶化、调节pH、 法灭菌等。 (2)样品稀释时取1 mL原液加入9 mL无菌水中，稀释10倍。涂布器一般是在酒精中浸泡，然后在酒精火焰上引燃灭菌，该操作的目的是 。 (3)本实验中微生物计数的原理是基于 ，运用这种方法统计的结果往往较实际值偏 ，原因 。 (4)菌落计数的具体培养结果如表。选取菌落数30～300的培养皿作为菌落总数的测定标准。当只有一个稀释梯度的平均菌落数符合此范围，以该培养皿菌落数×稀释倍数报告。当有两个梯度菌落值在30～300之间，报告结果由二者菌落数比值决定，若比值不大于2，则取平均数；若比值大于2，则报告稀释度较低(稀释次数越多，稀释度越高)的培养皿菌落数。请填写例次2、3中“？”处的菌落总数分别为 、 。 例次 不同稀释度及平均菌落数 两稀释度菌落数之比 菌落总数 101 102 103 1 1 365 164 20 － 16 400 2 2 760 295 46 1.6 ？ 3 2 890 271 60 2.2 ？ 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