第1章 第2节 第1课时 微生物的基本培养技术-【优化探究】2025-2026学年新教材高中生物学选择性必修3同步导学案配套PPT课件（人教版）单选

　发酵工程 第1章　 第2节　微生物的培养技术及应用 第1课时　微生物的基本培养技术   [目标导学]　1.概述培养基的成分和配制方法。2.区分消毒和灭菌，掌握不同物品的灭菌方法。3.概述微生物纯培养的基本操作要求。 内容索引 NEIRONGSUOYIN 学习任务二　无菌技术 学习任务一　培养基的配制 课时作业 巩固提升 备选题库 教师独具 学习任务三　微生物的纯培养 培养基的配制 学习任务一 1．培养基的概念：人们按照微生物对____________的不同需求，配制出供其____________的营养基质。 2．作用：用以________、分离、________、保存微生物或积累其____________。 梳理 归纳教材知识 营养物质　 生长繁殖 培养　 鉴定　 代谢物 液体　 琼脂　 固体 4．培养基的营养组成 (1)一般组成：_______________________等营养物质。 (2)特殊需求：满足微生物生长对________、特殊营养物质以及________的需求。 ①培养乳酸杆菌时，需要在培养基中添加________。 ②培养霉菌时，一般需要将培养基调至_______性。 ③培养细菌时，一般需要将培养基调至______________性。 ④培养厌氧微生物时，则需要提供________的条件。 水、碳源、氮源和无机盐 pH　 氧气　 酸　 维生素　 中性或弱碱　 无氧 [正误辨析] (1)牛肉膏和蛋白胨来源于动物，含有糖、维生素和有机氮等营养物质。(　　) (2)所有微生物在培养时，培养基中都需加入氮源。(　　) (3)培养厌氧微生物时，除需要提供无机碳源之外，还需要提供无氧的条件。(　　) √ × × 1．下表是牛肉膏蛋白胨培养基的配方，分析回答下列问题。 探究 要点合作突破 材料 牛肉膏 蛋白胨 NaCl 琼脂 水 用量 5 g 10 g 5 g 20 g 定容至1 000 mL (1)根据培养基的物理性质，该培养基属于哪类培养基，理由是什么？ 提示：固体培养基；该培养基的配方中含有琼脂。 (2)牛肉膏、蛋白胨提供的主要营养分别是什么？ 提示：牛肉膏主要提供的是碳源、氮源、磷酸盐和维生素等；蛋白胨主要提供的是碳源、氮源和维生素等。 (3)该培养基培养的微生物同化作用类型是什么？理由是什么？ 提示：异养微生物。该微生物所需的碳源和氮源是有机物。 2．培养微生物时，培养基中是否必须有碳源和氮源？ 提示：不一定。例如，培养自养型微生物时，一般不需要添加碳源，微生物可以利用空气中的二氧化碳；培养固氮微生物时，一般不需要添加氮源，微生物可以利用空气中的氮气。 [归纳总结] 　几种微生物的营养和能量来源 微生物 碳源 氮源 能源 蓝细菌 CO2   光能 硝化细菌 CO2 NH3 NH3的氧化 根瘤菌 糖类等有机物 N2 有机物 大肠杆菌 糖类、蛋白质等有机物 蛋白质等 有机物 1．关于微生物的营养，下列说法正确的是(　　) A．同一种物质不可能既作碳源又作氮源 B．凡是碳源都能提供能量 C．除水以外的无机物仅提供无机盐 D．无机氮源也可能提供能量 强化 题点对应训练 D 解析：对一些微生物来说，含C、H、O、N的有机化合物可以既是碳源，又是氮源，A错误；CO2是光能自养细菌的碳源，但不能提供能量，B错误；除水以外的无机物种类繁多、功能多样，如CO2可作为自养微生物的碳源，C错误；硝化细菌所利用的氮源是无机氮源——氨气，同时氨气的氧化过程也为硝化细菌提供用以化能合成作用的能量，D正确。 2．下列有关以CO2为唯一碳源的自养微生物所需营养物质的描述，错误的是(　　) A．铵盐和硝酸盐等无机氮为该微生物提供必要的氮元素 B.碳源物质不是该微生物的能源物质 C．水、无机盐也是该微生物不可缺少的营养物质 D．琼脂是该微生物的营养要素之一 D 解析：铵盐和硝酸盐等无机氮为该微生物提供必要的氮元素，A正确；该微生物是以CO2为唯一碳源的自养微生物，CO2不是该微生物的能源物质，B正确；水、无机盐也是该微生物不可缺少的营养物质，C正确；琼脂是凝固剂，不是该微生物的营养要素之一，D错误。 [易错提醒] (1)微生物最常用的碳源是糖类，尤其是葡萄糖；最常用的无机氮源是铵盐和硝酸盐。 (2)对异养微生物来说，含C、H、O、N的化合物既是碳源，又是氮源和能源。   无菌技术 学习任务二 1．目的：获得纯净的微生物培养物。 2．关键：____________。 梳理 归纳教材知识 防止杂菌污染 3．主要方法   消毒 灭菌 概念 使用较为________的物理、化学或生物等方法杀死物体________或内部一部分微生物 使用________的理化方法杀死物体内外________的微生物，包括______________ 常用 方法 ________消毒法、巴氏消毒法、____________消毒法、紫外线消毒法等 ________灭菌、干热灭菌、湿热灭菌等 适用 对象 操作的空间、操作者的双手和衣着等 接种环、接种针、玻璃器皿、培养基等 温和　 表面　 强烈　 所有　 芽孢和孢子　 煮沸　 化学药物　 灼烧 4.注意事项 (1)做好消毒和灭菌工作后，应注意避免已经灭菌处理的材料用具与____________接触。 (2)为了避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在超净工作台上并在____________附近进行。 周围的物品 酒精灯火焰 [正误辨析] (1)消毒的原则是既杀死材料表面的微生物，又减少消毒剂对细胞的伤害。(　　) (2)灭菌相比消毒对微生物的杀灭更彻底。(　　) (3)用紫外线进行消毒时适量喷洒苯酚或煤酚皂溶液等消毒液，不能加强消毒效果。(　　) (4)无菌操作的对象只要是没有生物活性的材料(如培养基、接种环等)，都可以采用干热灭菌法进行灭菌。(　　) √ √ × × 1．某同学在实验过程中不小心将灭菌的培养皿和未灭菌的培养皿混合了，那么这些培养皿还能用于实验吗？为什么？ 提示：不能。已灭菌的材料用具不能与周围的物品接触，以防止被污染。 探究 要点合作突破 2．常用酒精擦拭双手是消毒还是灭菌？体积分数为70%和95%的酒精，哪种效果更好？为什么？ 提示：酒精擦拭属于消毒。酒精消毒时，体积分数为70%的酒精杀菌效果最好。浓度过高，使菌体表面蛋白质凝固成一层保护膜，酒精分子不能渗入其中；浓度过低，杀菌能力减弱。 3．牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高温瞬时消毒法，与煮沸消毒法相比，这两种方法的优点是什么？ 提示：在达到消毒目的的同时，营养物质损失较少。 4．(教材P10“相关信息”改编)用于生物消毒的微生物具有什么特点？ 提示：用于生物消毒的微生物能产生杀死其他微生物的代谢产物或是寄生性的微生物。 [归纳总结] 消毒和灭菌的主要方法及应用范围 项目 主要方法 应用范围 消 毒 巴氏消毒法 63～65 ℃消毒30 min或72～76 ℃处理15 s或80～85 ℃处理10～15 s 牛奶、啤酒等不耐高温的液体 煮沸消毒法 100 ℃煮沸5～6 min 家庭餐具等生活用品 项目 主要方法 应用范围 消 毒 紫外线消毒 紫外线照射30 min 接种室、接种箱或超净工作台 化学药物消毒 用体积分数为70%的酒精、氯气、苯酚或煤酚皂溶液等处理 皮肤、伤口、动植物组织表面消毒和空气、水消毒 项目 主要方法 应用范围 灭 菌 灼烧灭菌 直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧 涂布器、接种环、接种针或其他金属用具、试管口或瓶口等 干热灭菌 160～170 ℃的热空气中维持1～2 h 耐高温的和需要保持干燥的物品，如玻璃器皿、金属用具等 高压蒸汽灭菌 (湿热灭菌) 100 kPa、121 ℃维持15～30 min 培养基及多种器材、物品   3．下列有关无菌技术的说法，正确的是(　　) A．无菌技术的关键是杀灭实验室中所有的微生物 B．培养微生物的试剂和器具都要进行湿热灭菌 C．经巴氏消毒法处理的食品，因微生物未被彻底消灭，不能在常温下长期保存 D．无菌技术中，若处理对象为液体，则只能消毒，不能灭菌 强化 题点对应训练 C 解析：无菌技术的关键是防止杂菌污染，A错误；培养微生物的培养基一般用湿热灭菌，微生物的接种工具，如接种针、接种环或其他金属器具一般用灼烧灭菌，B错误；经巴氏消毒法处理的食品，因微生物未被彻底消灭，不能在常温下长期保存，C正确；无菌技术中，若处理对象为液体，可以用湿热灭菌法灭菌，D错误。 4．培养基、培养皿、接种针、实验操作者的双手、空气、牛奶所采用的灭菌或消毒方法依次是(　　) ①化学消毒　②灼烧灭菌　③干热灭菌　④紫外线消毒 ⑤湿热灭菌　⑥巴氏消毒法 A．⑤③②①④⑥　　　　　 B．⑤③②⑥④① C．⑤⑥②③④① D．③④②①⑥⑤ A 解析：实验操作者的双手可以用化学药剂进行消毒，如用酒精擦拭双手；接种针可以用灼烧灭菌达到迅速彻底的灭菌效果；培养皿需要保持干燥、能耐高温，需用干热灭菌；空气可以用紫外线消毒；培养基可以采用湿热灭菌；巴氏消毒法用于牛奶及其制品的消毒，基本不会破坏其营养成分。综上依次对应的是⑤③②①④⑥，A正确。 [知识拓展] 芽孢和孢子的辨析 芽孢：有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体(不是繁殖体)，叫作芽孢。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。 孢子：细菌、原生动物、真菌和植物等产生的一种有繁殖或休眠作用的生殖细胞。孢子的特点是能直接长成新个体。 微生物的纯培养 学习任务三 1．相关概念 (1)培养物：在微生物学中，将接种于培养基内，在合适条件下形成的含特定种类______________称为培养物。 (2)纯培养物：由____________繁殖所获得的微生物群体。 (3)纯培养：获得____________的过程。 2．微生物纯培养步骤：微生物的纯培养包括____________、______、______、______和______等步骤。 梳理 归纳教材知识 微生物的群体 单一个体 纯培养物 配制培养基　 灭菌 接种　 分离　 培养 3．酵母菌的纯培养 (1)原理：微生物群体分散或稀释成单个细胞，单个细胞繁殖成单个菌落。 菌落：分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖形成肉眼可见的、有一定形态结构的______________，这就是菌落。 获得单菌落的方法：采用____________法和______________法将单个微生物分散在固体培养基上，之后经培养得到的单菌落一般是由单个微生物繁殖形成的纯培养物。 子细胞群体　 平板划线　 稀释涂布平板 (2)方法步骤 ①制备培养基 a.配制培养基：马铃薯、葡萄糖、琼脂、蒸馏水。 b.灭菌：培养基用________________；培养皿用________________。 c.倒平板：待培养基冷却至50 ℃左右，在酒精灯火焰附近倒平板。具体操作如下： 高压蒸汽灭菌　 干热灭菌箱灭菌 火焰　 大于瓶口的　 缝隙 ②接种和分离酵母菌 a.平板划线法的原理 通过接种环在固体培养基表面____________的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。经数次划线后培养，可以分离得到____________。 连续划线　 单菌落　 b.平板划线法的具体操作 ③培养酵母菌 完成平板划线后，待菌液被培养基吸收，将接种后的平板和____________________倒置，放入________左右(培养温度因酵母菌种类的不同而稍有差异)的恒温培养箱中培养________ h。 一个未接种的平板　 28 ℃　 24～48 [正误辨析] (1)培养基分装到培养皿后再进行湿热灭菌。(　　) (2)配制培养基时应先灭菌再调pH。(　　) × × 1．结合倒平板的操作程序，请探究下列问题。 (1)如图1所示，为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 提示：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。 探究 要点合作突破 (2)如图2所示，从防止杂菌污染的角度思考，为什么培养基冷却凝固后将平板倒置？ 提示：可以防止皿盖上的冷凝水落入培养基，造成杂菌污染。 (3)培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时才能用来倒平板。可用什么办法来估计培养基的温度？ 提示：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉温度下降到刚刚不烫手即可。 2．如图是平板划线操作的示意图，据图回答下列问题。 (1)用字母和箭头表示平板划线操作的正确步骤：______________________________。 d→b→f→a→e→c→g (2)为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？ 提示：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物。每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到单个菌落。需要。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。 (3)在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？ 提示：以免接种环温度太高，杀死菌种。 (4)在第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？ 提示：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。 [归纳总结] 1．配制培养基的注意事项 (1)如果需要调节培养基的pH，应该在定容完成之后，灭菌之前进行操作。 (2)培养基灭菌后要冷却到50 ℃左右时开始倒平板。其原因是琼脂是一种多糖，在98 ℃以上熔化，在44 ℃以下凝固，倒平板时温度高于50 ℃会烫手，低于50 ℃时，若不及时操作，琼脂会凝固。 (3)在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，那么这个平板不能用来培养微生物，因为空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。 2．平板划线操作的注意事项 (1)蘸取菌液前及每次划线后都需灼烧接种环，划线操作结束后仍需灼烧接种环，每次灼烧的目的不完全相同。 (2)灼烧接种环后，要等其冷却后才能伸入菌液中或在培养基表面进行划线，以免温度过高而杀死菌种。 (3)最后一次的划线不要与第一次的划线相连，否则无法达到纯化效果。 (4)划线时的力度大小应适宜，防止因用力过大而将培养基划破。 (5)接种环蘸取菌液前后，要将试管口通过火焰；划线操作全程都要在酒精灯火焰旁进行。 3．实验结果的分析 (1)若未接种的培养基表面有菌落生长，则说明培养基被污染，应该重新制备；若无菌落生长，则说明未被污染。 (2)在接种酵母菌的培养基上可观察到独立的菌落，这些菌落在颜色、形状和大小上相似，酵母菌菌落一般表面光滑、多呈乳白色。 (3)若在培养基中观察到不同形态的菌落，原因可能是菌液中混入了其他杂菌，或在实验操作过程中被杂菌污染。 5．如图表示实验室培养和纯化大肠杆菌过程中的部分操作步骤，下列说法正确的是(　　) A．步骤①后需将培养基灭菌并调节pH B．步骤①②③操作时需要在酒精灯火焰附近进行 C．步骤③到④的过程中，接种环共灼烧处理了5次 D．图中步骤①结束后需倒置平板，④结束后不需要 强化 题点对应训练 B 解析：步骤①表示倒平板，培养基需要先调节pH后灭菌，冷却后倒平板，A错误；为防止杂菌污染，步骤①②③操作时需要酒精灯火焰附近进行，B正确；接种环在每次接种前和接种结束后都要通过灼烧来灭菌，所以步骤③到步骤④的过程中5次划线操作前都要灼烧灭菌，接种结束后还需灼烧灭菌1次，防止造成污染，由此可见，步骤③到步骤④的过程中共需灼烧接种环6次，C错误；步骤④操作结束后需在培养皿的底上做好标记并倒置后放入培养箱中进行培养，D错误。 6．在分离纯化大肠杆菌实验中，划线接种(甲)、培养结果(乙)如图所示。下列有关叙述错误的是(　　) A.甲中a区域为划线的起始位置 B．接种前应对培养基进行高压蒸汽灭菌 C．接种过程中至少需要对接种环灼烧5次 D．连续划线的目的是获得单个细菌，以便形成单菌落 A 解析：乙图呈现的培养结果是从d区域到a区域菌落逐渐减少，而形成单菌落的区域是划线的末端，所以a区域应为划线的终点位置，A错误；在培养微生物时必须进行无菌操作，接种前应对培养基进行高压蒸汽灭菌，B正确；划线前后都要对接种环灼烧，共划线4次，所以需要灼烧5次，C正确；平板划线法是分离单菌落的常用方法，划线将细菌分散，到划线的末端可以获得单菌落，D正确。 课堂小结 备选题库 教师独具 1．下列有关微生物培养基种类及配制原则的叙述，正确的是(　　) A．任何培养基都必须含有碳源、氮源、水、无机盐及特殊的营养物质 B．液体培养基可用于观察菌落，固体培养基可用于工业生产 C．微生物的生长除受营养因素影响外，还受pH、O2、渗透压等的影响 D．淀粉可作为所有微生物的碳源 2 3 1 4 C 解析：培养基不一定都含有碳源、氮源，如培养自养型微生物的培养基中不需加入碳源，培养自生固氮菌的培养基中不需加入氮源，A错误；一般固体培养基可用于观察菌落，液体培养基可用于工业生产，B错误；某些微生物不能利用淀粉，而只能利用葡萄糖、果糖、蔗糖和麦芽糖等糖类，D错误。 2 3 1 4 2．下列关于倒平板的叙述，错误的是(　　) A．待培养基冷却至50 ℃左右时倒平板 B．倒平板整个过程应在酒精灯火焰旁进行 C．完全打开培养皿皿盖，右手将锥形瓶中的培养基倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖 D．为避免水滴滴入培养基，平板应倒过来放置 2 3 1 4 C 解析：倒平板时，用拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，而不是完全打开皿盖，目的是防止杂菌污染，C错误。 2 3 1 4 3．如图表示实验室中酵母菌纯培养的部分操作步骤，下列说法错误的是(　　)   A.①②③步骤操作时需要在酒精灯火焰旁进行 B．步骤①中待倒入的培养基冷却后盖上培养皿的皿盖 C．步骤③中，每次划线前后都需对接种环进行灭菌处理 D．划线接种结束后，将图④平板倒置后放入培养箱中培养 2 3 1 4 B 解析：由图可知，①是倒平板，②是用接种环蘸取菌液，③是进行平板划线，④是培养。①②③步骤操作时需要在酒精灯火焰旁进行，以防止杂菌污染，A正确；倒完平板后应立即盖上培养皿的皿盖，冷却后将平板倒过来放置，B错误；第一次划线前灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养基，除第一次划线外，每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过增加划线次数，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到单菌落，最后一次划线后也需要对接种环进行灭菌处理，C正确；划线接种结束后，将平板倒置后放入培养箱中培养，可以防止培养皿皿盖上的水珠落入培养基造成污染，D正确。 2 3 1 4 4．某兴趣小组欲对葡萄皮上的野生酵母菌进行纯培养。回答下列问题。 (1)酵母菌的纯培养可使用________________(填“牛肉膏蛋白胨”或“马铃薯琼脂”)培养基，培养基中还应加入链霉素以抑制____________的生长。该培养基应采用____________灭菌法灭菌。 2 3 1 4 (2)采用平板划线法将葡萄皮上的野生酵母菌接种到平板上，之后经培养得到的单菌落一般是由________________形成的纯培养物。上述方法能分离得到单菌落的原理是__________________________。 (3)如图为不同初始氧气浓度下，利用等量酵母菌进行发酵产酒精实验的相关曲线。其中，初始氧气浓度较高的是________，判断依据是________________________________________。 2 3 1 4 答案：(1)马铃薯琼脂　细菌(原核微生物)　湿热 (2)单个微生物繁殖　通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面，经数次划线培养，可以分离得到单菌落 (3)a　初始氧气浓度高，酵母菌进行有氧呼吸的时间长，酒精发酵的起始时间较晚(或初始氧气浓度高，酵母菌有氧呼吸大量繁殖，在酒精发酵的初期，产生酒精的速率较快) 2 3 1 4 解析：(1)马铃薯琼脂培养基常用于真菌的筛选，因此酵母菌的纯培养可使用马铃薯琼脂培养基，链霉素可抑制细菌的生长，因此培养基中加入链霉素可以抑制细菌(原核微生物)的生长，可筛选出真菌。培养基应采用湿热灭菌法灭菌。 (2)单菌落一般是由单个微生物繁殖形成的纯培养物。平板划线法通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面，经数次划线培养，可以分离得到单菌落。 2 3 1 4 (3)初始氧气浓度高时，酵母菌进行有氧呼吸的时间长，酒精发酵的起始时间较晚(或初始氧气浓度高，酵母菌有氧呼吸大量繁殖，在酒精发酵的初期，产生酒精的速率较快)，因此初始氧气浓度较高的是a。 2 3 1 4 课时作业 巩固提升 [基础巩固练] 1．下列关于微生物培养基的叙述，正确的是(　　) A．培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质 B．培养基中的营养物质浓度越高，对微生物的生长越有利 C．固体培养基中加入少量水即可制成液体培养基 D．在培养细菌时，一般需要将培养基调至酸性 2 3 5 6 7 8 9 11 12 1 4 10 13 14 A 解析：如果培养基中营养物质浓度过高，会导致微生物失水死亡，对其生长不利，B错误；固体培养基中含有凝固剂琼脂，加入水不会制成液体培养基，C错误；在培养细菌时，一般需要将培养基调至中性或弱碱性，D错误。 2 3 5 6 7 8 9 11 12 1 4 10 13 14 2．如表是某同学培养微生物时配制的培养基，下列关于此培养基的说法，错误的是(　　) 2 3 5 6 7 8 9 11 12 1 4 10 13 14 D 编号 ① ② ③ ④ ⑤ 成分 (NH4)2SO4 KH2PO4 FeSO4 CaCl2 H2O 含量 0.4 g 4.0 g 0.5 g 0.5 g 100 mL A.此培养基可用来培养自养型微生物 B．此表中的营养成分共有三类，即水、无机盐、氮源 C．表中各成分的质量按照所培养的微生物的营养需要来确定 D．若除去①，此培养基可用于培养大肠杆菌 解析：由表中成分可知，该培养基中未添加有机碳源，故此培养基可用来培养自养型微生物，A正确；分析表格可知，表中的营养成分共有三类，即水、无机盐、氮源，B正确；培养基中各成分的质量按照所培养的微生物的营养需要来确定，C正确；大肠杆菌是异养型生物，且不能固氮，因此若除去①，培养大肠杆菌还需要添加氮源和有机碳源，D错误。 2 3 5 6 7 8 9 11 12 1 4 10 13 14 3．消毒和灭菌是微生物培养中常用的操作方法。下列说法不正确的是(　　) A．接种疫苗前要对注射区域进行消毒 B．在100 ℃条件下煮沸5～6 min属于灭菌方法，可以杀死微生物的营养细胞和一部分芽孢 C．微生物接种技术的方法不同，但核心都是要防止杂菌污染，保证培养物的纯度 D．实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围物品相接触 2 3 5 6 7 8 9 11 12 1 4 10 13 14 B 解析：在100 ℃条件下煮沸5～6 min属于煮沸消毒法，B错误。 2 3 5 6 7 8 9 11 12 1 4 10 13 14 4．许多生物学实验十分重视无菌操作，防止杂菌污染。下列操作正确的是(　　) A．对无菌室、超净台和实验员可采用紫外线杀菌 B．家庭制作酸奶时，要将容器和鲜牛奶进行灭菌 C．加入培养基中的指示剂和染料不需要灭菌 D．灼烧灭菌法杀死微生物的营养体和芽孢 2 3 5 6 7 8 9 11 12 1 4 10 13 14 D 解析：对无菌室、超净台可采用紫外线杀菌，对实验员可用酒精擦拭双手进行消毒，A错误；家庭制作酸奶时，要将容器煮沸消毒，鲜牛奶不进行灭菌，B错误；加入培养基中的指示剂和染料也需要灭菌，否则可能会污染培养基，C错误；灼烧灭菌法可杀死物体内外所有的微生物(包括微生物的营养体、芽孢和孢子)，D正确。 2 3 5 6 7 8 9 11 12 1 4 10 13 14 5．灭菌和无菌操作是获得微生物纯培养物的基础，在接种、培养、分离酵母菌时，下列操作正确的是(　　) A．用浸泡在体积分数为70%的酒精中的涂布器直接涂布 B．将接种后的培养皿倒置在恒温培养箱中培养酵母菌 C．为了防止污染，接种环经火焰灼烧灭菌后应趁热快速挑取菌落 D．倒平板时，应将培养皿的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上 2 3 5 6 7 8 9 11 12 1 4 10 13 14 B 解析：将浸泡在体积分数为70%的酒精中的涂布器拿出后还需要经过灼烧灭菌及冷却后才能进行涂布，A错误；将接种后的培养皿倒置在恒温培养箱中培养酵母菌，B正确；接种环经火焰灼烧灭菌之后还需要冷却后才能挑取菌落，C错误；倒平板时，用拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，将培养基(10～20 mL)倒入培养皿，立即盖上培养皿的皿盖，D错误。 2 3 5 6 7 8 9 11 12 1 4 10 13 14 6．下列关于“酵母菌的纯培养”实验的叙述，错误的是(　　) A.马铃薯捣烂后的滤液中含有酵母菌生长所需的多种营养成分 B．接种环灭菌时，顶端的环和环后的部分柄均需通过火焰灼烧 C．平板划线时，接种环应在固体培养基表面轻轻地连续划线 D．完成平板划线后，应将平板立刻倒置培养以免污染培养基 解析：完成平板划线后，待菌液被培养基吸收，再将平板倒置培养，D错误。 2 3 5 6 7 8 9 11 12 1 4 10 13 14 D 7．下列有关微生物的分离与培养的叙述，错误的是(　　) A．获得纯净培养物的关键是防止杂菌污染 B．倒置平板可防止培养皿皿盖上的冷凝水落入培养基 C．倒平板时将培养皿的皿盖拿开，以便于将锥形瓶中的培养基倒入培养皿 D．检验培养基是否被杂菌污染的最有效方法是将未接种的培养基放在恒温培养箱中培养 2 3 5 6 7 8 9 11 12 1 4 10 13 14 C 解析：倒平板时用食指和拇指夹住培养皿的皿盖并开启一条缝隙，使其恰好能让锥形瓶瓶口伸入，随后倒入培养基，立即盖上皿盖，C错误。 2 3 5 6 7 8 9 11 12 1 4 10 13 14 [素能培优练] 8．渥堆是六堡茶生产的关键工艺，渥堆期间微生物分泌的多酚氧化酶可催化茶叶中的儿茶素(C15H14O6)形成黄红色的氧化聚合物。要从渥堆茶叶样品中筛选产多酚氧化酶的细菌，表中培养基配方设计最合理的是(注：“－”表示不添加；“＋”表示添加。)(　　) 2 3 5 6 7 8 9 11 12 1 4 10 13 14 B   组分(g/ L)名称 儿茶素 牛肉膏 葡萄糖 蛋白胨 KNO3 NaCl 琼脂 2 5 20 1 10 5 18 A 甲 － － ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ B 乙 ＋ ＋ － － ＋ ＋ ＋ C 丙 ＋ － ＋ － － ＋ ＋ D 丁 ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ － － 解析：甲培养基没有儿茶素，无法筛选，A错误；乙培养基为固体培养基，且含有碳源、氮源、无机盐、水、儿茶素，B正确；丙培养基没有氮源，产多酚氧化酶的细菌无法生存，C错误；丁未加入琼脂，液体培养基无法筛选，D错误。 2 3 5 6 7 8 9 11 12 1 4 10 13 14 9．生物指示剂常用于对医疗器械高压蒸汽灭菌的质量监测。将某批次的多支生物指示剂(如图)与医疗器械一并放入压力锅中，待灭菌完成后，挤破安瓿瓶，让含芽孢的菌片(嗜热脂肪芽孢杆菌)与培养液接触，培养并检测结果。下列说法错误的是(　　) A．安瓿瓶内培养液的成分应适于嗜热脂肪芽孢杆 菌的生长 B．制备生物指示剂时，安瓿瓶内的培养液需要进 行灭菌处理 C．嗜热脂肪芽孢杆菌的热耐受性大于已知污染菌的热耐受性 D．当压力锅中的生物指示剂培养结果为阴性时说明医疗器械灭菌合格 2 3 5 6 7 8 9 11 12 1 4 10 13 14 D 解析：生物指示剂待灭菌完成后，挤破安瓿瓶，让嗜 热脂肪芽孢杆菌与培养液接触，培养并检测结果，则 安瓿瓶内培养液的成分应适于嗜热脂肪芽孢杆菌的生 长，A正确；制备生物指示剂时，为了防止污染，安 瓿瓶内的培养液需要进行灭菌处理，B正确；芽孢是 细菌的休眠体，芽孢壁厚，含水量极低，代谢缓慢， 抗逆性强，能经受高温紫外线，电离辐射以及多种化 学物质灭杀。可以帮助细菌度过不良环境。因此菌片中芽孢的热耐受性大于器械上的可能污染菌，C正确；若灭菌与未灭菌的生物指示剂均不出现阳性变化，则说明灭菌前无有活性芽孢，也就无法说明灭菌效果，D错误。  2 3 5 6 7 8 9 11 12 1 4 10 13 14 10.如图所示为实验室使用某种接种方法在培养基上培养某种微生物的结果。下列相关说法正确的是(　　) A．该图不可能是用平板划线法进行接种的 B．在操作时，为防止杂菌污染，需进行严格 的消毒和灭菌 C．该种微生物有可能是流感病毒 D．该培养基上的菌落分布不均匀，代表纯化失败 2 3 5 6 7 8 9 11 12 1 4 10 13 14 B 解析：题图中菌落分布不均匀，部分菌落过于密集，最可能是用平板划线法进行接种的，A错误；在操作时，为防止杂菌污染，需进行严格的消毒和灭菌，B正确；病毒不能在普通培养基上生存繁殖，故该种微生物不可能是流感病毒，C错误；使用平板划线法时随划线次数的增加，菌落密度逐渐减小，因此菌落分布不均匀，不代表纯化失败，D错误。 2 3 5 6 7 8 9 11 12 1 4 10 13 14 11．生长图形法是一种测定微生物营养需求的简便方法。为探究某嗜热菌所需生长因子的种类，某研究小组把该菌的悬浮液与不含任何特殊营养物质但含有其他必需营养物质的培养基混合后倒平板，然后在平板上划分数区，将甲、乙、丙三种生长因子分别添加到不同区域，培养结果如图所示。下列说法不正确的是(　　) A．倒平板后直接培养可判断有无污染 B．将所有平板放置在适宜的37 ℃下倒置培养并观察 C．图示结果表明该菌需要特殊营养物质乙和丙 D．生长图形法还可用于某些菌种的筛选 2 3 5 6 7 8 9 11 12 1 4 10 13 14 B 解析：倒平板后不接种任何菌种直接进行培养观察有无菌落的出现，可以判断培养基有无污染，A正确；该菌为嗜热菌，应放置在其适宜的高温条件下培养，而不是37 ℃，B错误；图中嗜热菌在添加了乙、丙特殊营养物质的区域生长，故该菌需要的特殊营养物质是乙和丙，C正确；不同的菌种所需的特殊营养物质不同，利用生长图形法可用于某些菌种的筛选，菌种只会在提供其需要的生长因子的区域生长，D正确。 2 3 5 6 7 8 9 11 12 1 4 10 13 14 12．某中学为确定正确佩戴口罩可降低呼吸道传染疾病的风险进行了相关实验。实验中将牛肉膏蛋白胨培养基置于距正确佩戴口罩的实验者口部前方50 cm处，然后对着培养基讲话1 min或咳嗽2次，再进行微生物培养和观察。下列叙述错误的是(　　) A．实验中牛肉膏蛋白胨培养基应为固体培养基，并进行严格灭菌 B．实验者对培养基进行处理后，放入20 ℃恒温培养箱中培养1～2 d C．实验中还应设置不戴口罩直接讲话或咳嗽进行实验对照 D．培养结束后，可以根据菌落的形状、大小、颜色等特征初步区分不同种的微生物 2 3 5 6 7 8 9 11 12 1 4 10 13 14 B 解析：实验中牛肉膏蛋白胨培养基应为固体培养基，为了防止其他微生物的干扰，应进行严格灭菌处理，A正确；分析题意可知，本实验是为了确定正确佩戴口罩可降低呼吸道传染疾病的风险，而正常人体的体温约为37 ℃，因此应设置与人体体温基本相同的温度，即在37 ℃恒温培养箱中培养1～2 d，B错误；本实验的实验组为佩戴口罩对着培养基讲话1 min或咳嗽2次，实验中还应该设置不戴口罩直接讲话或咳嗽进行实验对照，C正确；不同微生物的菌落具有其特殊的特征，在实验培养结束后，可根据菌落的形状、大小、颜色等特征初步区分不同种的微生物，D正确。 2 3 5 6 7 8 9 11 12 1 4 10 13 14 13．鲸死亡后会沉入海底，俗称“鲸落”。“鲸落”后期会形成一个以厌氧菌和硫细菌等为主体的生态系统。厌氧菌以“鲸落”肌肉中的脂肪为食，同时产生硫化氢等一些硫化物。硫细菌将硫化物氧化成硫酸盐，并以该过程中释放的能量合成有机物。请回答相关问题。 (1)培养微生物的培养基中一般都会含有水、无机盐、氮源和碳源，培养“鲸落”群落中厌氧菌的碳源必须是__________。要培养硫细菌，培养基中的成分需要特殊配制，主要体现在______________，这种培养基可以用来专一性培养硫细菌。 2 3 5 6 7 8 9 11 12 1 4 10 13 14 (2)在分离“鲸落”中的微生物时要制备固体培养基，在倒平板操作后，将平板倒置，这样做的目的是___________________。 (3)若想得到“鲸落”中某目标菌种，可用平板划线法进行纯化。若如图甲是接种培养后的菌落分布图，对应的平板划线操作示意图为________。图甲中的③更易获得单菌落 ，判断依据是__________。 2 3 5 6 7 8 9 11 12 1 4 10 13 14 答案：(1)含碳有机物(或脂肪)　碳源必须是含碳无机物(或碳酸盐)，同时加入硫化物 (2)防止培养皿皿盖上凝结的水珠落入培养皿造成污染 (3)丙　每次划线的菌种都来自上一次划线的末端，最后一次划线结束时更容易获得单菌落 2 3 5 6 7 8 9 11 12 1 4 10 13 14 解析：厌氧菌以“鲸落”肌肉中的脂肪为食，属于异养型微生物，故培养“鲸落”群落中厌氧菌的碳源必须是含碳有机物(或脂肪)。硫细菌将硫化物氧化成硫酸盐，并以该过程中释放的能量合成有机物，即硫细菌为自养型微生物，所以要培养硫细菌，培养基中的成分需要特殊配制，主要体现在碳源必须是含碳无机物(或碳酸盐)，同时加入硫化物。 2 3 5 6 7 8 9 11 12 1 4 10 13 14 14．在农业用地中发现一种广泛使用的除草剂(含氮有机化合物)在土壤中不易降解，长期使用可污染土壤。为修复被该除草剂污染的土壤，可按下面程序选育能降解该除草剂的细菌(已知该除草剂在水中溶解度一定，含该除草剂的培养基不透明)。 2 3 5 6 7 8 9 11 12 1 4 10 13 14 (1)制备土壤浸出液时，为避免菌体浓度过高，需将浸出液进行____________处理。 (2)要从富含(或长期使用)该除草剂的土壤中分离目的菌，上述培养皿中培养基的特点是固体培养基且_______________(填培养基成分应具备的主要特点)。若需要调节培养基pH，应该在各种成分都溶化后且分装________(填“前”或“后”)进行。对培养基进行灭菌，常采用的方法是__________________。 2 3 5 6 7 8 9 11 12 1 4 10 13 14 (3)图B、C所示方法能够纯化目的菌株的原因是_________________。 (4)经培养后发现，培养基上只出现少量带有透明带的菌落，大部分细菌在此培养基上不能生长的最可能原因是__________________。培养基中也出现了极少量没有透明带的菌落，原因是这些微生物_____________________________________________。 2 3 5 6 7 8 9 11 12 1 4 10 13 14 答案：(1)稀释 (2)以除草剂为唯一氮源　前　高压蒸汽灭菌 (3)连续划线可以将聚集的菌体逐步稀释分散开来，从而获得由单个菌体繁殖而来的子细胞群体(单菌落) (4)培养基中缺少这些细菌可利用的氮源　可以利用除草剂分解菌提供的代谢产物作为氮源而生长繁殖(或是固氮微生物，可以利用空气中的氮气作为氮源) 2 3 5 6 7 8 9 11 12 1 4 10 13 14 解析：(1)制备土壤浸出液时，为避免菌体浓度过高，将浓度高的溶液通过稀释的方法降低浓度。 (2)利用该培养基的目的是筛选能降解除草剂的细菌，需要使用选择培养基，即培养基中应加入除草剂作为唯一的氮源；调节培养基的pH应在分装前进行。常用高压蒸汽灭菌对培养基进行灭菌。 (3)图B、C所示方法为平板划线法，平板划线法能够纯化目的菌株的原因是连续划线可以将聚集的菌体逐步稀释分散开来，从而获得由单个菌体繁殖而来的子细胞群体(单菌落)。 2 3 5 6 7 8 9 11 12 1 4 10 13 14 (4)在以该除草剂作为唯一氮源的培养基上，不能降解该除草剂的细菌(除具有固氮能力的细菌外)是不能生长的，因此培养基上只出现少量带有透明带的菌落，大部分细菌在此培养基上不能生长。培养基中出现了极少量没有透明带的菌落，这些微生物可以利用除草剂分解菌提供的代谢产物作为氮源(或这些微生物是固氮微生物，可以利用空气中的氮气作为氮源)。   2 3 5 6 7 8 9 11 12 1 4 10 13 14 3．培养基种类 NH、NO等 $$