专题14 发酵工程和细胞工程-【好题汇编】2025年高考生物一模试题分类汇编（新高考通用）

专题14发酵工程和细胞工程 考点概览 考点01发酵工程 考点02植物细胞工程 考点03 动物细胞工程 发酵工程考点01 一、单选题 1．（2025·四川巴中·一模）我国每年产生的农业秸秆数量巨大，秸秆直接焚烧会造成大气污染、土壤损伤，绿色处理秸秆能有效减少农业废弃物，促进可持续发展。下图为发酵工程中利用水稻、玉米等农业秸秆生产柠檬酸的简要流程图。下列相关叙述正确的是（　　）    A．生产柠檬酸的黑曲霉是异养厌氧型，其优良菌种只能从自然界中筛选出来 B．发酵时罐内pH不断下降而抑制杂菌生长，因此发酵培养基不需要灭菌 C．发酵结束后，对罐内发酵液可采取适当的过滤、沉淀措施获得柠檬酸 D．利用农作物秸秆为原料进行生产可解决柠檬酸发酵消耗大量粮食的问题 【答案】D 【分析】虽然各种培养基的具体配方不同，但一般都含有水、碳源（提供碳元素的物质）、氮源（提供氮元素的物质）和无机盐。另外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。例如，培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素，培养霉菌时需将培养基的pH调至酸性，培养细菌时需将pH调至中性或微碱性，培养厌氧微生物时则需要提供无氧的条件。 【详解】A、黑曲霉是好氧菌而非异养厌氧菌，在发酵过程中需要氧气参与代谢活动。优良菌种不仅可以从自然界中筛选，还可以通过诱变育种、基因工程等现代生物技术进行培育，A错误； B、虽然发酵时罐内pH不断下降能抑制部分杂菌生长，但这并不足以保证发酵过程不受杂菌污染。为了确保发酵的顺利进行和产品质量，发酵培养基仍然需要进行严格的灭菌处理，B错误； C、发酵结束后，发酵液中除了柠檬酸外还含有黑曲霉菌体及其他杂质。仅采取过滤、沉淀措施无法获得纯净的柠檬酸，还需要进行进一步的分离和提纯等操作，C错误； D、农作物秸秆来源广泛且数量巨大，以其为原料进行生产可以减少对大量粮食的消耗。这既解决了柠檬酸发酵消耗大量粮食的问题，又实现了农业废弃物的合理利用，具有良好的经济效益和生态效益，D正确。 故选D。 2．（2025·贵州铜仁·一模）某地发生少数人吃冰激凌后腹泻的现象，推测可能是冰激凌中大肠杆菌超标（1mL自来水检测出的菌落总数不可以超过100个），于是对冰激凌进行检测。下列叙述错误的是（　　） A．在检测过程中可配制特定的培养基来鉴别是否存在大肠杆菌 B．利用活菌计数必须对冰激凌融化后形成的原液进行梯度稀释 C．在检测过程中需要设置完成灭菌的空白培养基作为对照组 D．进行检测时也可以利用细菌计数板和显微镜进行直接计数 【答案】B 【分析】1、微生物常见的接种方法：平板划线法和稀释涂布平板法，稀释涂布平板法可用于微生物计数。 2、稀释涂布平板法统计菌落数的原理：当样品的稀释倍数足够高时，培养基表面生长的一个菌落来自于样品稀释液中的一个活菌，可通过统计平板上的菌落数来推测样品中的活菌数。 【详解】A、在微生物的检测过程中，可利用伊红 - 美蓝培养基鉴定大肠杆菌，大肠杆菌在该培养基上会形成具有特殊金属光泽的黑色菌落，A正确； B、对冰激凌融化后形成的原液可以使用滤膜法对细菌进行计数，不一定必须对原液进行梯度稀释，B错误； C、在检测过程中设置完成灭菌的空白培养基作为对照组，其目的是检测培养基是否被杂菌污染。若空白培养基上没有菌落生长，说明培养基灭菌合格，实验结果可靠，C正确； D、除了活菌计数法外，还可以利用细菌计数板和显微镜进行直接计数，D正确。 故选B。 3．（2025·河南驻马店·一模）尿素分解菌会使培养基中的酚红指示剂变红。为了从土壤中分离出尿素分解菌，使用以尿素为唯一氮源的选择培养基进行筛选，实验的具体分组和操作如下表所示。下列有关叙述错误的是（    ） 组别 具体组别 具体操作 实验组 实验组1 涂布接种的选择培养基 实验组2 涂布接种的选择培养基 实验组3 涂布接种的选择培养基 实验组4 涂布接种的牛肉膏蛋白胨培养基 对照组 对照组1 不涂布接种的选择培养基 对照组2 不涂布接种的牛肉膏蛋白胨培养基 A．对照组1与实验组1、2、3组对比以验证选择培养基是否被杂菌污染 B．实验组4与实验组1、2、3组对比以验证选择培养基是否具有选择作用 C．实验组1、2、3可分离得到尿素分解菌，实验组4菌落最多，理论上对照组无菌落 D．选择培养基中菌落的红色环带直径与菌落直径比值越小，分解尿素的能力越强 【答案】D 【分析】1、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验中，需要使用以尿素为唯一氮源的选择培养基，计数的关键是经梯度稀释后的学生倍数要合适，计数时通常选择菌落数在30-300之间的实验组平板进行计数。 2、培养基选择分解尿素的微生物的原理：培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。 【详解】A、对照组1是不涂布接种的选择培养基，实验组1、2、3是涂布接种的选择培养基。 如果选择培养基被杂菌污染，那么在未接种（对照组1）的情况下可能会出现菌落；而如果选择培养基没有被杂菌污染，未接种时应该无菌落。所以对照组1与实验组1、2、3组对比可以验证选择培养基是否被杂菌污染，A正确； B、实验组4是涂布接种的牛肉膏蛋白胨培养基，牛肉膏蛋白胨培养基是通用培养基，能为多种微生物提供氮源等营养；实验组1、2、3是涂布接种的选择培养基，且是以尿素为唯一氮源的选择培养基。 只有能利用尿素作为氮源的微生物才能在选择培养基上生长，而通用培养基上各种微生物都能生长。所以实验组4与实验组1、2、3组对比可以验证选择培养基是否具有选择作用，B正确； C、实验组4是牛肉膏蛋白胨培养基，能为多种微生物提供适宜营养，所以理论上接种后菌落最多。 实验组1、2、3是选择培养基，只有能分解尿素的尿素分解菌才能生长，其他不能利用尿素为氮源的杂菌被抑制，所以可以分离得到尿素分解菌。 由于对照组1验证了选择培养基未被杂菌污染，所以理论上对照组无菌落，C正确； D、选择培养基中菌落的红色环带直径与菌落直径比值越大,分解尿素的能力越强，D错误。 故选D。 4．（2025·山东济宁·一模）在微生物的培养过程中，下列实验操作规范的是（    ） A．制作培养基的过程中先灭菌再调整pH B．微生物培养过程中可以使用平板划线法进行计数 C．使用刚果红培养基选择性培养土壤中分解纤维素的微生物 D．待培养基冷却至50℃左右时在酒精灯火焰附近倒平板制备培养基 【答案】D 【分析】平板划线法：把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞，用接种环在平板表面上作多次由点到线的划线稀释而获得较多独立分布的单个细胞，并让其成长为单菌落的方法。 【详解】A、制作培养基时应先调整 pH，再进行灭菌。若先灭菌后调 pH，在调整 pH 过程中可能会引入杂菌，导致培养基被污染，A错误； B、平板划线法的目的主要是分离纯化微生物，不能用于准确计数。稀释涂布平板法可用于微生物计数，B错误； C、刚果红能与纤维素形成红色复合物，当纤维素被分解后，红色复合物无法形成，会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，所以刚果红培养基可用于鉴别土壤中分解纤维素的微生物，而不是选择性培养，选择培养基是在培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物生长，促进所需要的微生物生长，C错误； D、待培养基冷却至50℃右时在酒精灯火焰附近倒平板制备培养基，这样既可以防止培养基温度过高导致培养皿炸裂，又能在酒精灯火焰附近的无菌环境下操作，减少杂菌污染的机会，D正确。 故选D。 5．（2025·山西吕梁·一模）为检测医院排放的医疗废水中是否含有对链霉素（一种抗生素）有抗性的细菌，某学习小组进行了如下实验：①配制培养基（主要成分是蛋白胨、牛肉膏、NaCl和水），灭菌后倒平板，备用；②取少量医疗废水稀释一定倍数，分别接种到三个平板上；③将接种后的三个平板置于恒温培养箱培养24～48h；④定期观察并统计平板上菌落的数量、形态和颜色等。下列有关分析错误的是（    ） A．①过程中，培养基灭菌前需要将pH一般调至酸性 B．该培养基中能为细菌提供氮源的有蛋白胨和牛肉膏 C．②过程中，接种前三个平板均需要添加等量的链霉素 D．③过程中，还需要将一个未接种的平板置于恒温培养箱培养 【答案】A 【分析】微生物常见的接种的方法： （1）平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。 （2）稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。 【详解】A、由于细菌适宜的培养基为中性或弱碱性，所以灭菌前需用将培养基的pH调至中性或弱碱性，A错误； B、培养基中蛋白胨、酵母膏能为细菌提供氮源、维生素和生长因子，B正确； C、②过程中，接种前三个平板均需要添加等量的链霉素，目的是为了鉴别目的菌，C正确； D、将未接种的培养基置于恒温培养箱中培养，以检验培养基灭菌是否合格，若合格，则应没有任何菌落出现，D正确。 故选A。 6．（2025·河北沧州·一模）产黄青霉菌生产青霉素的发酵流程如下图所示，其中“补料”是指补充培养基，其成分有花生饼粉、玉米浆、葡萄糖、磷酸二氢钠等。下列关于该发酵过程的叙述，错误的是（    ） A．对产黄青霉菌分离纯化时采用的接种方法是稀释涂布平板法 B．“种母培养”时采用液体培养基有利于增加产黄青霉菌的数量 C．产黄青霉菌为异养厌氧型真菌，添加的磷酸二氢钠具有多种作用 D．向主发酵罐添加pH调节液是因为环境条件会影响青霉素的形成 【答案】C 【分析】稀释涂布平板法统计菌落数目：①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。 【详解】A、由图中平板上菌落的分布可推知,分离纯化菌种时采用的接种方法是稀释涂布平板法，A正确； B、由于发酵过程中需要的菌种数量大,因此将分离后的菌种先进行“种母培养”,采用液体培养基有利于增加产黄青霉菌的数量，B正确； C、培养基中含有花生饼粉、玉米浆、葡萄糖等有机碳源,且发酵过程中需要通入无菌空气,可推知产黄青霉菌的代谢类型为异养需氧型,磷酸二氢钠是培养基中的无机盐之一,除此之外还可以作为缓冲剂调节培养基的pH，C错误； D、环境条件会影响微生物的生长、繁殖和发酵产物(即青霉素)的形成,因此要严格控制，D正确。 故选C。 7．（2025·河北保定·一模）科研人员发现某个敞口被真菌M污染的培养皿中出现了大部分细菌能正常生长，唯独真菌 M 附近没有细菌生长的现象。科研人员认为这可能是真菌M产生了抑制细菌生长的物质。 为验证该猜想，科研人员做了如图所示的实验。下列有关分析正确的是（　　）    A．过程①使用了平板划线法接种真菌M， 该过程中接种环至少要灼烧4次 B．若甲、乙和丙组的滤纸片周围都出现了抑菌圈，则说明上述猜想正确 C．过程②应取平板a 中的单菌落置于培养基 b 中，其主要目的是选择培养 D．真菌M 在培养基b 中培养时，培养基中应加入琼脂 【答案】B 【分析】1、微生物常见的接种的方法： ①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。 ②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。 【详解】A、每次划线前均需灼烧接种环，根据图可知过程①使用了平板划线法接种真菌M共画线4次， 且该过程结束时还需要灼烧，所以该过程中接种环至少要灼烧5次，A错误； B、根据图示信息可知，甲、乙和丙组都是不同种类的细菌，若甲、乙和丙组的滤纸片周围都出现了抑菌圈，则说明真菌M可能产生了抑制细菌生长的物质，B正确； C、过程②应取平板a 中的单菌落置于培养基 b 中，其主要目的是扩大培养，获得更多的纯培养物，C错误； D、真菌M 在培养基b中培养时，培养基b是液体培养基，不应加入琼脂，D错误。 故选B。 8．（2025·内蒙古阿拉善盟·一模）MRS肉汤培养基是青贮微生物常用培养基，但成本较高，难以作为青贮添加剂的主要成分开发利用。为筛选廉价培养基，研究人员分离纯化青贮微生物，并分别接种到不同培养基中培养48h，得到如图结果。下列叙述错误的是（    ）    A．应将接种青贮微生物的培养基置于适宜温度下厌氧培养 B．本实验还可用血细胞计数板对青贮微生物的活菌数进行统计 C．培养初期，青贮微生物OD值较低可能与缺乏代谢所需酶有关 D．初步判断乳清粉培养基较适合作为青贮微生物的廉价培养基 【答案】B 【分析】由图可知，培养48h后，乳清粉培养基pH小于4.2，且OD值仅次于MRS培养基，说明其较适合作为青贮微生物的廉价培养基。 【详解】A、应将接种青贮微生物的培养基置于适宜温度下厌氧培养，保证青贮微生物正常发酵，A正确； B、血细胞计数板不能只计数活菌，B错误； C、培养初期，青贮微生物OD值较低可能与缺乏代谢所需酶导致微生物繁殖较慢有关，C正确； D、由图可知，培养48h后，乳清粉培养基pH小于4.2，且OD值仅次于MRS培养基，说明其较适合作为青贮微生物的廉价培养基，D正确。 故选B。 9．（2025·河北邯郸·一模）柠檬酸具有令人愉悦的酸味，入口爽快，安全无毒，被广泛用于食品和饮料中。利用发酵工程技术制备柠檬酸的流程如图所示，下列相关叙述正确的是（    ）    A．柠檬酸属于次生代谢物，过程①②的目的均为扩大培养 B．发酵罐内的发酵是工厂化生产柠檬酸的中心环节 C．利用干热灭菌箱对培养基进行灭菌是发酵工程生产中一个很重要的环节 D．发酵结束后，采取适当的过滤、沉淀措施可获得柠檬酸 【答案】B 【分析】发酵工程是指利用微生物的特定功能，通过现代工程技术，规模化生产对人类有用的产品。它涉及菌种的选育和培养、产物的分离和提纯等方面。具体包括：菌种的选育，扩大培养，培养基的配制、灭菌，接种，发酵，产品的分离、提纯等环节。 【详解】A、柠檬酸是微生物的初级代谢产物，不是次生代谢物，过程①是菌种的活化，过程②是扩大培养，A错误； B、发酵罐内的发酵是工厂化生产柠檬酸的中心环节，在发酵罐中微生物进行代谢产生柠檬酸，B正确； C、对培养基进行灭菌通常采用高压蒸汽灭菌法，而不是干热灭菌箱灭菌，干热灭菌箱常用于玻璃器皿等的灭菌，C错误； D、发酵结束后，需要通过过滤、离心等方法除去菌体等杂质，然后通过萃取、蒸馏、离子交换等方法对柠檬酸进行分离和纯化才能获得柠檬酸，仅过滤、沉淀措施不能获得柠檬酸，D错误。 故选B。 10．（2025·河北承德·一模）甜酒酿（醪糟）是江南地区的传统小吃，是用蒸熟的糯米拌上酿酒酵母发酵而成的一种甜米酒，其制作流程为：浸米→蒸米→凉饭→拌酿酒酵母→发酵→检查→甜酒酿。下列有关叙述正确的是（    ） A．“蒸米”的主要目的是通过杀灭杂菌，延长甜酒酿的保质期 B．“凉饭”后再拌入酿酒酵母，可避免高温杀死发酵所需菌种 C．“发酵”时应将拌有酿酒酵母的凉饭装满密闭的容器 D．在发酵过程中酒精的浓度会持续增加，pH值会持续降低 【答案】B 【分析】果酒的制作离不开酵母菌，酵母菌是兼性厌氧微生物，在有氧条件下，酵母菌进行有氧呼吸，大量繁殖，把糖分解成二氧化碳和水；在无氧条件下，酵母菌能进行酒精发酵。故果酒的制作原理是酵母菌无氧呼吸产生酒精。 【详解】A、“蒸米”的主要目的是使淀粉更易分解，便于微生物发酵，A错误； B、“凉饭”后再拌入酿酒酵母，可避免高温杀死发酵所需菌种，B正确； C、发酵时应将拌有酿酒酵母的凉饭装在密闭的容器中，但是不能装满容器，应该适当留出约1/3的空间，C错误； D、酵母菌细胞呼吸释放的二氧化碳使得pH值降低以及酒精含量增多，对发酵起抑制作用，从而导致一段时间后酵母菌发酵停止，因此酒精浓度不会持续增加，pH值不会持续降低，D错误。 故选B。 11．（2025·河北唐山·一模）无菌操作是生物实验中一项重要的基本操作。下列过程不需要严格无菌操作的是（    ） A．传统泡菜的制作 B．酵母菌的纯培养 C．动物细胞的传代培养 D．花药离体培养 【答案】A 【分析】在传统生物技术中，无需进行严格灭菌，根据目的菌种的代谢特征设置相应的培养条件。 【详解】在传统生物技术中，如传统泡菜的制作过程，不需要严格的无菌操作，通常是根据目的菌种的代谢特征设置相应的培养条件进行的，而实验室中的一些生物工程技术，如酵母菌的纯培养、动物细胞的传代培养、花药离体培养等需要严格的无菌操作，A正确，BCD错误。 故选A。 12．（2025·河北石家庄·一模）原生质体比正常植物细胞更易接受外源DNA，其制备过程主要包括取材→剪碎→酶解。下列叙述错误的是（    ） A．细胞壁可能会阻止外源DNA进入细胞 B．取材后需用酒精和次氯酸钠对材料灭菌 C．剪碎的目的是使酶与细胞充分接触 D．可用台盼蓝染液来鉴定原生质体活性 【答案】B 【分析】植物细胞壁的主要成分是纤维素和果胶，所以制备原生质体，需要用纤维素酶和果胶酶将细胞壁去除，这种去除细胞壁的方法称为酶解法。 【详解】A、细胞壁的存在可能阻碍外源DNA进入细胞，原生质体因去除了细胞壁，更易吸收外源DNA，A正确； B、酒精和次氯酸钠常用于消毒（减少微生物数量），而非灭菌，B错误； C、剪碎材料可增大接触面积，便于酶解细胞壁，C正确； D、台盼蓝可鉴别原生质体活性，活细胞不被染成蓝色，死细胞膜破损，被染成蓝色，D正确。 故选B。 13．（2025·宁夏银川·一模）下列有关发酵工程的说法正确的是（    ） A．在发酵罐中接种菌种量越高，其K值越大 B．啤酒发酵过程中大部分糖的分解和代谢物的生成在主发酵阶段完成 C．发酵工程中，发酵结束后可采用过滤、沉淀等方法将菌体干燥，并将菌体破碎后提取单细胞蛋白 D．为了防止杂菌污染，发酵工程的中心环节是灭菌 【答案】B 【分析】发酵工程是指利用微生物的特定功能，通过现代工程技术，规模化生产对人类有用的产品，主要包括微生物的代谢物、酶及菌体本身。发酵工程一般包括菌种的选育，扩大培养，培养基的配制、灭菌，接种，发酵、产品的分离、提纯等方面。发酵过程一般来说都是在常温常压下进行，条件温和、反应安全，原料简单、污染小，反应专一性强，因而可以得到较为专一的产物。发酵工程在医药、食品、农业、冶金、环境保护等许多领域都得到广泛应用。 【详解】A、K值表示环境容纳量，发酵罐的K值与空间大小、营养物质多少有关，与接种量无关，A错误； B、啤酒发酵的过程分为主发酵和后发酵两个阶段，酵母菌的繁殖、大部分糖的分解和代谢物的生成都在主发酵阶段完成，主发酵结束后在低温、密闭环境下储存一段时间属于后发酵，B正确； C、用单细胞蛋白制成的微生物饲料，其中的单细胞蛋白是微生物菌体，并不是通过发酵工程从微生物细胞中提取获得，C错误； D、发酵罐内发酵是发酵工程的中心环节，D错误。 故选B。 14．（2025·天津武清·一模）堆肥指利用自然界广泛存在的微生物，将固体废物中可降解的有机物转化为腐殖质的过程。下图为堆肥处理时材料内部温度的变化曲线若要从堆肥材料中筛选出能高效降解羽毛、蹄角等废弃物中角蛋白的嗜热菌，下列相关叙述错误的是（    ）    A．微生物呼吸作用释放的热量积累，导致堆肥内部温度逐渐升高 B．与a点相比b点时微生物的数量较多，与b点相比c点时微生物种类较多 C．c点时可对堆肥材料取样并用选择培养基对微生物进行培养和筛选 D．用平板划线法分离微生物时无需对微生物样液进行稀释，可直接划线操作 【答案】B 【分析】 平板划线法：①将接种环放到火焰上灼烧，直到接种环的金属丝烧红。②在火焰旁冷却接种环。同时，拔出试管的棉塞。③将试管口通过火焰。④在火焰附近用接种环蘸取一环菌液。⑤将试管口通过火焰，并塞上棉塞。⑥在火焰附近将皿盖打开一条缝隙，用接种环在培养基表面迅速划三至五条平行线，盖上皿盖。⑦灼烧接种环，待其冷却后，从第一次划线的末端开始作第二次划线。重复以上操作，作第三、四、五次划线，注意不要将最后一次划线与第一次的相连。 【详解】A、在堆肥过程中，微生物呼吸作用产生的能量大部分以热能的形式释放出来，热量积累会导致其堆肥内部逐渐升高，A正确； B、a点温度较低且微生物的分解作用刚刚开始，此时堆肥材料中的微生物的数量相对较少，b点时经过一段时间的代谢和增殖，b点处微生物的数量比a点多，b点到c点过程中，堆肥温度逐渐升高，并达到80℃左右，该温度条件下不耐热的微生物大量死亡，所以c点时微生物的种类数少于b点，B错误； C、筛选能高效降解羽毛、蹄角等废弃物中角蛋白的嗜热菌，因此既要耐高温，又要能够高效降解角蛋白，所以在c点取样，并且用角蛋白氮源培养基进行选择培养，C正确； D、用平板划线法分离微生物时无需对微生物样液进行稀释，可直接划线操作，通过连续多次划线即可达到分离微生物的目的，D正确。 故选B。 15．（2025·江西赣州·一模）研究发现，给脐橙施用枯草芽孢杆菌液态微生物肥、接种丛枝菌根真菌均可提升土壤供肥能力，实现果实增产提质。下列叙述正确的是（    ） A．获得微生物纯培养物是利用发酵工程大量生产微生物肥料的重要基础 B．培养枯草芽孢杆菌需将培养基调至酸性，培养丛枝菌根真菌需调至中性或弱碱性 C．通过称量重量与体积，测定糖类、总酚、类黄酮等初生代谢物含量对比果实品质 D．除微生物肥料外，还可利用其代谢物开发微生物农药，作为化学防治的重要手段 【答案】A 【分析】细菌通常要求在中性偏碱的环境中生长，霉菌通常要求在中性偏酸的环境中生长。 【详解】A、要利用发酵工程大量生产微生物肥料，首先需要获得微生物纯培养物，这样才能保证生产过程中微生物的纯度和特性，进而稳定地大量生产目标微生物化肥，A正确； B、细菌通常要求在中性偏碱的环境中生长，真菌一般是中性偏酸，因此培养枯草芽孢杆菌需将培养基调至中性或弱碱性，培养丛枝菌根真菌需调至酸性，B错误； C、总酚、类黄酮属于次生代谢产物，C错误； D、利用其代谢物开发微生物农药，作为生物防治的重要手段，D错误。 故选A。 16．（2025·福建龙岩·一模）果汁生产中常用酶解法处理以提高果汁的出汁率和澄清度等。科研人员研究复合酶（半纤维素酶和果胶酶）对费约果果汁出汁率和可溶性固形物（TSS）的影响（图1），在此基础上测定复合酶添加比例最佳时的影响数据（图2），下列叙述正确的是（　　） A．该实验的自变量是复合酶添加比例和添加量，因变量是果汁出汁率 B．该实验说明与单一酶处理相比，复合酶处理可以提高果汁出汁率和TSS C．该实验说明随着酶浓度增加，复合酶催化的反应速率加快 D．生产费约果果汁的最佳条件为复合酶添加比例2：1、酶添加量18g/L 【答案】D 【分析】果胶是植物细胞壁及胞间层的主要组成成分之一，它是由半乳糖醛酸聚合而成的一种高分子化合物，不溶于水。酶活性是指酶催化一定化学反应的能力，在一定条件下，酶活性可以用酶所催化的某一化学反应的反应速度来表示。 【详解】A、实验目的是研究复合酶（半纤维素酶和果胶酶）对费约果果汁出汁率和可溶性固形物（TSS）的影响。在图1中自变量是复合酶添加比例，在图2中自变量是复合酶添加量，因变量是果汁出汁率和可溶性固形物（TSS），A错误； B、题干中并没有将复合酶处理与单一酶处理进行对比的相关信息，所以无法得出复合酶处理与单一酶处理相比能提高果汁出汁率和TSS的结论，B错误； C、图中只是展示了不同复合酶添加比例和添加量下的果汁出汁率和TSS情况，并没有直接体现出随着酶浓度增加，复合酶催化的反应速率加快，C错误； D、从图1可以看出，复合酶添加比例为2:1时，果汁出汁率和TSS相对较高；从图2可以看出，酶添加量为18g/L时，果汁出汁率和TSS也相对较高，所以综合来看，生产费约果果汁的最佳条件为复合酶添加比例2:1、酶添加量18g/，D正确。 故选D。 17．（2025·福建龙岩·一模）喹啉是工业废水中的含氨污染物，易通过水体污染环境。科研人员欲从废水处理厂的活性污泥中筛选高效喹啉降解复合菌群，过程如下图。下列叙述错误的是（　　）    A．图中无机盐培养基是选择培养基，以喹啉作为唯一氮源 B．过程①接种前需对所用器具及培养基进行灭菌处理 C．过程②需要逐级提高无机盐培养基中喹啉浓度 D．过程③采用平板划线法观察并统计菌群数量 【答案】D 【分析】人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质称为培养基。其中，配制成的液体状态的基质称为液体培养基，配制成的固体状态的基质称为固体培养基。在液体培养基中加入凝固剂琼脂后，制成琼脂固体培养基，它是实验室中最常用的培养基；根据物理性质划分，富集培养基属于液体培养基； 【详解】A、图中无机盐培养基是选择培养基，以喹啉作为唯一氮源，其目的是增加目的菌的数量，A正确； B、过程①接种前需对所用器具及培养基进行灭菌处理，保证获得的菌种来自样品，B正确； C、过程②需要逐级提高无机盐培养基中喹啉浓度，进而获得能高效降解喹啉为细菌，C正确； D、过程③采用稀释涂布平板法观察并统计活菌数量，D错误。 故选D。 18．（2025·天津河东·一模）果酒的家庭制作与啤酒的工业化生产相比，共同点是（    ） A．发酵前都需要对原料进行灭菌 B．都需要进行菌种接种 C．都需要一定有氧环境供发酵菌种进行繁殖 D．发酵结束后都必须进行消毒以延长保存期 【答案】C 【分析】果酒的制作离不开酵母菌，酵母菌是兼性厌氧微生物，在有氧条件下，酵母菌进行有氧呼吸，大量繁殖，把糖分解成二氧化碳和水；在无氧条件下，酵母菌能进行酒精发酵。 【详解】A、工业化生产啤酒，为了避免在发酵过程中杂菌的污染，在发酵前需要对原料进行灭菌处理；家庭制作果酒时需要用到水果表面的酵母菌，所以不能对原料灭菌，A错误； B、果酒的家庭制作一般不需要菌种接种，利用的是果皮表面的野生酵母菌，而啤酒的工业化生产需进行菌种接种，B错误； C、果酒的家庭制作与啤酒的工业化生产时一般先通入适量氧气，让其进行有氧呼吸，大量繁殖，然后密封发酵，产生大量的酒精，C正确； D、家庭制作果酒发酵结束后不需要消毒处理，啤酒的工业化生产需要消毒，D错误。 故选C。 19．（2025·江西萍乡·一模）酸笋是我国南方地区一种非常受欢迎的食物，它具有独特的酸味和脆爽口感。在自然发酵过程中，酸笋中的乳酸菌作为主要微生物分解蛋白质产生硫化氢等物质，形成了螺蛳粉的特殊风味。下列叙述正确的是（    ） A．竹笋经过高压蒸汽灭菌后接种乳酸菌进行发酵，获得的酸笋品质更高 B．乳酸菌在线粒体中将葡萄糖分解产生的丙酮酸转化为乳酸和二氧化碳 C．可利用平板划线法对发酵液中的乳酸菌数量进行检测 D．发酵过程中乳酸积累使发酵液pH先降低后保持稳定 【答案】D 【分析】传统发酵技术的定义：直接利用原材料中天然存在的微生物，或利用前一次发酵保存下来的面团、卤汁等发酵物中的微生物进行进行发酵、制作食品的技术。 【详解】A、竹笋经过高压蒸汽灭菌可杀灭杂菌，但也会使竹笋软化，脆爽口感不易成形，降低酸笋的品质，A错误； B、乳酸菌是原核生物，没有线粒体，此外，乳酸发酵不产生二氧化碳，B错误； C、平板划线法不能计数，C错误； D、发酵过程中乳酸逐渐积累导致发酵液pH逐渐降低后保持稳定，D正确。 故选D。 20．（2025·黑龙江·一模）下列有关微生物培养的相关叙述错误的是（    ） A．获得纯培养物的关键是防止杂菌污染，紫外线消毒前喷洒苯酚可加强消毒效果 B．在稀释涂布时，涂布器应灼烧灭菌后再蘸取0.1ml菌液均匀地涂布在培养基表面 C．使用后的培养基在丢弃前一定要进行灭菌处理，以免污染环境 D．通过接种环在固体培养基表面连续划线可将聚集的菌种逐步稀释到培养基表面 【答案】B 【分析】微生物培养过程中要进行无菌操作，关键就在于防止外来杂菌的入侵，其中消毒和灭菌室常用的防止杂菌入侵的方法：消毒有煮沸消毒法、巴氏消毒法和化学药剂消毒法，灭菌有灼烧灭菌法，适用于接种工具；干热灭菌法适用于玻璃器皿和金属工具；高压蒸汽灭菌法适用于培养基及容器的灭菌。 【详解】A、获得纯培养物的关键确实是防止杂菌污染，紫外线消毒前喷洒苯酚，苯酚可以使微生物的蛋白质变性等，能加强消毒效果，A正确； B、在稀释涂布时，涂布器应先灼烧灭菌，待冷却后再蘸取0.1ml菌液均匀地涂布在培养基表面，如果未冷却就蘸取菌液，高温会杀死菌液中的微生物，B错误； C、使用后的培养基含有大量微生物，在丢弃前一定要进行灭菌处理，以免污染环境，C正确； D、通过接种环在固体培养基表面连续划线，随着划线的进行，接种环上的菌种数量逐渐减少，可将聚集的菌种逐步稀释到培养基表面，D正确。 故选B。 21．（2025·山东济宁·一模）酒酿是米酒的一种，由蒸熟的米冷却后加入酒曲发酵而成。在发酵过程中起主要作用的是酒曲中的好氧霉菌、酵母菌和乳酸菌。下列叙述正确的是（    ） A．酒酿制作过程中将米蒸熟的目的之一是杀灭杂菌 B．酒酿制作过程中产生的水主要来源于微生物无氧呼吸 C．好氧霉菌是需氧型生物，整个发酵过程要不断通入 D．将发酵温度从28℃提高到40℃，可明显缩短发酵时长 【答案】A 【分析】果酒的制作离不开酵母菌，酵母菌是兼性厌氧微生物，在有氧条件下，酵母菌进行有氧呼吸，大量繁殖；在无氧条件下，酵母菌能进行酒精发酵。 【详解】A、酒酿制作过程中将米蒸熟的目的之一是杀灭杂菌，同时也有利于制造无氧环境，A正确； B、酒酿制作过程中产生的水主要来源于微生物有氧呼吸，B错误； C、好氧霉菌是需氧型生物，其主要在发酵初期活动，整个发酵过程要不需要通入 O2，否则影响酒精的产生，C错误； D、酒精发酵需要适宜的温度(30℃左右)， 从28℃提高到40℃后微生物的酶活性会受到抑制，发酵时间应会延长，D错误。 故选A。 22．（2025·安徽·一模）防止杂菌污染，获得纯净的微生物培养物是研究和应用微生物的前提，也是发酵工程的重要基础。下列需要进行无菌操作的是（　　） ①葡萄酒制作完成后，打开瓶盖、盖上一层纱布，进行葡萄醋的发酵 ②将培养的酵母菌进行稀释，再利用血细胞计数板计数 ③为获得尿素分解菌，从农田中铲取土样 ④在培养基冷却凝固后，将培养皿倒过来放置、以便后续进行接种 ⑤将两种细胞去除细胞壁后获得的原生质体进行融合 ⑥对杂交瘤细胞进行克隆化培养和抗体检测 A．①③⑤ B．①④⑥ C．②③④ D．②⑤⑥ 【答案】D 【分析】常用的消毒灭菌方法多采用物理方法(如干热灭菌法、湿热灭菌法、射线杀菌法等)和化学方法两大类。 【详解】①葡萄酒制作完成后，打开瓶盖，盖上一层纱布，直接在空气中进行葡萄醋的发酵，不需要无菌操作，不符合题意； ②将培养的酵母菌进行稀释，再利用血细胞计数板计数需要无菌操作，以防污染影响实验结果，符合题意； ③为获得尿素分解菌，从农田中铲取土样时，不需要无菌操作，不符合题意； ④在培养基冷却凝固后，将培养皿倒过来放置，以便进行接种，此时培养基已经过灭菌处理，倒置时不需要无菌操作，不符合题意； ⑤将两种细胞去除细胞壁后获得的原生质体进行融合，需要无菌操作，符合题意； ⑥对杂交瘤细胞进行克隆化培养和抗体检测，需要无菌操作，以防污染，符合题意。 因此，②⑤⑥需要进行无菌操作，D项符合题意。 故选D。 23．（2025·黑龙江哈尔滨·一模）关于利用乳酸菌制作传统发酵食品，下列叙述正确的是（　　） A．制作泡菜的过程是无氧条件下乳酸菌单一菌种的发酵 B．制作酸奶的牛奶须经过高压蒸汽灭菌后再接种乳酸菌 C．腌制两天后，泡菜的风味逐渐显现应及时食用，此时泡菜中亚硝酸盐的含量较低 D．控制好发酵时间和温度，以避免过量乳酸影响酸奶或泡菜的口味和品质 【答案】D 【分析】泡菜的制作原理：泡菜的制作离不开乳酸菌。在无氧条件下，乳酸菌将葡萄糖分解成乳酸。亚硝酸盐随腌制时间先增加后下降。 【详解】A、制作泡菜是利用乳酸菌无氧呼吸产生乳酸，但传统发酵过程中有多种菌种存在，A错误； B、牛奶中含有营养物质，高压蒸汽灭菌会破坏牛奶中的营养物质，B错误； C、腌制两天后，泡菜中亚硝酸盐的含量较高，C错误； D、制作酸奶或泡菜时，控制好发酵时间，以避免过量乳酸影响酸奶或泡菜的口味和品质，D正确。 故选D。 24．（2025·河南驻马店·一模）青蒿素是传统的中药材，是治疗疟疾的重要药物。研究人员利用青蒿细胞悬浮培养技术进行工厂化生产青蒿素，实验流程和培养装置如下图所示。下列有关叙述错误的是（    ）    A．实验流程中可用果胶酶处理愈伤组织，解离细胞间的连接，有利于制备悬浮细胞 B．此装置可不受季节、耕地限制，生产原理是细胞增殖 C．装置中可增加排气管，充气管和排气管都置于溶液中 D．青蒿素是一种小分子有机物，属于次生代谢物 【答案】C 【分析】1、植物组织培养就是在无菌和人工控制的条件下，将离体的植物器官、组织、细胞，培养在人工配制的培养基上，给予适宜的培养条件，诱导其产生愈伤组织、丛芽，最终形成完整的植株。 2、植物组织培养的条件：①细胞离体和适宜的外界条件（如适宜温度、适时的光照、pH和无菌环境等）；②一定的营养（无机、有机成分）和植物激素（生长素和细胞分裂素）。 3、植物细胞培养是指在离体条件下对单个植物细胞或细胞团进行培养使其增殖的技术。 【详解】A、植物细胞壁的主要成分是纤维素和果胶，欲利用愈伤组织制备悬浮细胞，实验流程中可用果胶酶处理愈伤组织，解离细胞间的连接，A正确； B、植物细胞培养使用人工配制的培养液，可以人为控制其生长环境，故植物细胞培养几乎不受季节、耕地限制，生产原理是细胞增殖，B正确； C、装置中可增加排气管，排气管不置于溶液中；装置中的充气管应置于液面下方，以利于培养液中的溶氧量的增加，C错误； D、次生代谢不是生物生长 所必需的，一般在特定的组织或 器官中，并在一定的环境和时间 条件下才进行；青蒿素是一种小分子有机物，属于次生代谢物，D正确。 故选C。 25．（2025·江西·一模）柑橘是江西省的重要经济水果，但在贮藏和运输过程中，由真菌引起的采后病害严重危害柑橘产业。青绿霉病是最常见的病害，从柑橘果皮中筛选出拮抗细菌是有效的防治手段。拮抗细菌的筛选过程如下，下列说法正确的是（    ）    A．样本采集时需对果皮表面进行消毒，然后将果皮样本加到清水中洗脱细菌 B．图示细菌分离使用的技术为稀释涂布平板法，该方法还可用于细菌计数但结果偏大 C．初步筛选时将细菌和青绿霉真菌共培养，测量真菌生长直径，图中a抑制效果更好 D．为进一步评估拮抗菌的效果，可以测定其培养滤液对真菌生长和繁殖的抑制效果 【答案】D 【分析】稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。分为系列稀释操作和涂布平板操作两步。 【详解】A、避免杂菌污染，需将果皮样本加到无菌水中获取目的菌，A错误； B、稀释涂布平板法用于微生物的分离计数，统计结果比实际值偏小，这是因为当两个或多个细胞连在一起是，平板上观察到的只是一个菌落，B错误； C、为获得拮抗细菌，需将其与青绿霉真菌共同培养，检测其对真菌的抑制效果，真菌生长直径越小，抑制效果越好，因此b抑制效果好，C错误； D、通过测定拮抗菌培养滤液对真菌生长和繁殖的抑制作用，可以直观了解拮抗菌的抗菌活性，D正确。 故选D。 26．（2025·安徽滁州·一模）“葡萄美酿令人痴，一醉方休谁晓知。何日与君同畅饮，凝眸了却苦相思。”表达了诗人对葡萄美酒的喜爱以及对与友人共饮的美好期待。下列有关葡萄酒制作的叙述，正确的是（    ） A．制作葡萄酒之前，需要将发酵容器和葡萄进行灭菌处理 B．在葡萄酒的发酵过程中，发酵液中的H+浓度会有所升高 C．用带盖瓶子制作葡萄酒时，拧松瓶盖的间隔时间需相同 D．可以从以葡萄糖为唯一氮源的培养基中分离出酿酒酵母 【答案】B 【分析】果酒制作菌种是酵母菌，代谢类型是兼性厌氧型真菌，属于真核细胞，条件是18～25℃、前期需氧，后期不需氧。 【详解】A、家庭制作葡萄酒时要将容器进行灭菌处理，但不能对葡萄进行灭菌，否则会杀灭葡萄表面的酵母菌，使发酵无法进行，A错误； B、在制作葡萄酒的过程中，酵母菌呼吸作用会产生二氧化碳，二氧化碳与水结合形成碳酸，碳酸电离生成H+量增多，发酵液pH会逐渐降低，B正确； C、果酒发酵时，为了排出产生的气体，需要将瓶盖拧松放气，根据产生气体的多少，拧松瓶盖的间隔时间不一定相同，C错误； D、葡萄糖的元素组成为C、H、O，不含氮元素，不能充当氮源，D错误。 故选B。 27．（2024·湖南·一模）庆大霉素（GM）能抑制沙门氏菌的生长。研究人员为了探究LPC（用MRS培养植物乳杆菌后获得的上清液）对沙门氏菌生长的影响及作用机制，在接种沙门氏菌的平板上做了五组不同处理，实验结果如图所示。下列相关叙述正确的是（    ） A．在酒精灯火焰旁倒平板后用湿热灭菌法对培养基进行灭菌 B．需将含沙门氏菌的菌液稀释到适宜浓度后用平板划线法接种 C．MRS和GM均为对照组，分别为阴性对照和阳性对照 D．LPC抑制沙门氏菌的机制可能是因为LPC含有热稳定性高物质 【答案】C 【分析】培养基是人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质；根据物理性质分为固体培养基和液体培养基，培养基中一般含有水、碳源、氮源和无机盐。在提供上述几种主要营养物质的基础上，培养基还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物种和氧气的要求。 【详解】A、灭菌后倒平板，A错误； B、实验需在培养基上形成均匀分布的沙门氏菌的菌落，用平板划线法接种无法达到目的，B错误； C、本MRS和GM均为对照组，分别为阴性对照和阳性对照，C正确； D、Heat-LPC与LPC组的抑菌圈基本相同，说明加热不影响LPC，进而说明其热稳定性强，但这并不是LPC抑制沙门氏菌的机制，比较LPC与NaOH-LPC组，说明LPC抑制沙门氏菌的机制是因为其含有酸性物质，D错误。 故选C。 28．（2025·湖北武汉·一模）腐乳是我国古代劳动人民通过微生物发酵制作而成的一种大豆食品。酵母、毛霉等微生物分泌的多种酶将豆腐中的蛋白质分解成氨基酸等风味物质,使腐乳味道鲜美。下列叙述错误的是（    ） A．参与腐乳制作的酵母和毛霉均为真核生物 B．风味物质主要在微生物的细胞质基质中产生 C．酵母和毛霉主要通过胞吐的方式分泌胞外酶 D．腐乳制作过程主要利用了微生物的有氧发酵 【答案】B 【分析】传统制作腐乳，主要是毛霉起作用，豆腐块上的毛霉来自空气中的毛霉孢子。其原理是毛霉在豆腐块上生长时分泌蛋白酶，把豆腐中的蛋白质水解成小分子的肽和氨基酸，毛霉在豆腐上生长时还会分泌脂肪酶，把豆腐中的脂肪水解成甘油和脂肪酸。 【详解】A、参与腐乳制作的酵母和毛霉，均具有以核膜为界限的细胞核，均为真核生物，A正确； B、风味物质是在微生物分泌的胞外酶的作用下产生的，所以风味物质的产生是在微生物外部，并非细胞质基质，B错误； C、胞外酶是大分子物质，所以酵母和毛霉产生后，主要以胞吐的方式分泌出去，C正确； D、参与腐乳制作的微生物，主要是毛霉，其代谢类型为异养需氧型，所以腐乳制作过程主要利用了微生物的有氧发酵，D正确。 故选B。 29．（2025·山东菏泽·一模）《释名·释饮食》记载：“豉，嗜也。五味调和，需之而成，乃可甘嗜也。”豆豉主要用黄豆通过霉菌发酵制成。下列说法错误的是（    ） A．传统方法制作豆豉是以混合菌种的液体或半固体发酵为主 B．发酵时使用煮熟的黄豆，使蛋白质变性，易于被微生物利用 C．黄豆中的蛋白质会在霉菌作用下分解成多肽及氨基酸 D．发酵时加入盐和酒可以激发出豆豉的风味，同时抑制杂菌活力 【答案】A 【分析】直接利用原材料中天然存在的微生物，或利用前一次发酵保留下来的面团、卤汁等发酵物中的微生物进行发酵、制作食品的技术一般称为传统发酵技术。 【详解】A、传统豆豉的制作通常是以固态发酵及半固体发酵为主，而不是液体或半固体发酵，A错误； B、煮熟的黄豆会使蛋白质变性，使其更容易被霉菌分解和利用，B正确； C、在发酵过程中，霉菌会分解黄豆中的蛋白质，生成多肽和氨基酸，这些物质是豆豉风味的重要来源，C正确； D、盐和酒不仅可以增加豆豉的风味，还可以抑制杂菌的生长，确保发酵过程的顺利进行，D正确。 故选A。 30．（2025·广东汕头·一模）硝化细菌可用于改善水产养殖水体。研究人员利用配制的固体选择培养基从污水处理厂的污泥中筛选出一株自养型硝化细菌。下列物质在该培养基中存在的可能性最小的是（　　） A．NaNO2 B．Na2CO3 C．牛肉膏 D．琼脂 【答案】C 【分析】虽然各种培养基的具体配方不同，但一般都含有水、碳源（提供碳元素的物质）、氮源（提供氮元素的物质）和无机盐。另外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。例如，培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素，培养霉菌时需将培养基的pH调至酸性，培养细菌时需将pH调至中性或微碱性，培养厌氧微生物时则需要提供无氧的条件。 【详解】培养养化能自养型的硝化细菌的培养基中不需提供有机物，因此，牛肉膏是不会在该培养基中出现的，而NaNO2 、Na2CO3作为无机盐会在该培养基中出现，琼脂作为凝固剂是固体培养基中一定需要的，即C项符合题意，C正确。 故选C。 31．（2025·山西·一模）酸菜是一种发酵食品，随着贮藏期延长，腐败现象时有发生。研究人员从酸菜中筛选出抑菌效果最佳的乳酸菌株L3，它在发酵过程中会产生有机酸、细菌素等。对乳酸菌L3进行纯化培养及抑菌活力测定，其活菌相对数量、抑菌圈直径及培养液pH值变化如图所示。下列分析错误的是（    ）    A．可采用抽样检测法，利用细菌计数板直接进行L3活菌数量测定 B．测培养液pH值变化时，需用液体培养基且在厌氧环境下培养菌株L3 C．菌株L3在2h进入快速增长期，24h是产细菌素的最佳发酵时间 D．通过进一步研究细菌素的特性，有望将其开发为天然食品防腐剂 【答案】A 【分析】微生物常见的接种的方法：①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。 【详解】A、对细菌进行数量统计时，可以采用抽样检测法，利用专用工具——细菌计数板，在显微镜下观察、计数，统计的结果是活菌数和死菌数的总和，而不仅仅是活菌数量，A错误； B、测培养液pH值变化时，需用液体培养基培养才行，乳酸菌是厌氧型细菌，需要在厌氧环境下培养，B正确； C、从图中可以读到的信息有，乳酸菌株L3在2h进入快速增长期，18h时活菌相对数量不再增加，接近K值；抑菌圈直径越大，抑菌效果越好，24h时抑菌圈直径最大，所以产细菌素的最佳发酵时间是24h，抑菌效果最好，C正确； D、可以看出，细菌素有显著抑菌作用，如对细菌素的抑菌特性、培养条件等进行进一步研究，有望将细菌素开发为天然食品防腐剂，D正确。 故选A。 32．（2025·吉林延边·一模）获得纯净的微生物培养物是发酵工程的基础。下列相关叙述中正确的是（    ） A．在实验前，需对培养皿和培养基进行干热灭菌，保证没有其他微生物的干扰 B．稀释涂布平板法统计活菌数量时，统计的菌落数一般比活菌的实际数目低 C．若利用平板划线法接种，完成平板划线后需立即将平板倒置于适宜条件下培养 D．通过观察未接种培养基表面是否有菌落，可判断接种的培养基是否起到选择作用 【答案】B 【分析】微生物常见的接种的方法：①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养基表面，经培养后可形成单个菌落。培养基可用高压蒸汽灭菌锅进行灭菌。 【详解】A、培养基的灭菌方法是湿热灭菌，常用高压蒸汽灭菌，A错误； B、在用稀释涂布平板法计数稀释涂布平板法统计活菌数量时时，统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，原因是两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，B正确； C、完成平板划线后，待菌液被培养基吸收后，再将培养基倒置（防止培养基中水分过快挥发等）放入恒温培养箱中进行培养，C错误； D、通过观察空白对照（未接种的培养基）表面是否有菌落，可判断培养基在制备过程中是否被杂菌污染，而不是判断该培养基是否起到选择作用，D错误。 故选B。 33．（2025·全国·一模）在造纸工业中，传统的化学制浆方法会产生大量含有木质素的废水，并且化学处理过程对环境有一定的污染。漆酶能够选择性地降解木质素，也能催化水溶蓝（一种有机物，溶于水后溶液呈现蓝色）分解成H2O和CO2。科研人员为了分离出高效降解木质素的菌株（含有漆酶），先后使用两种培养基，即以木质素为唯一碳源的培养基（甲）、在培养基甲的基础上添加水溶蓝的培养基（乙），使用的接种工具为接种环。下列相关叙述错误的是（    ） A．在造纸工业中，引入漆酶可以降低化学药剂的使用量 B．在培养基乙上生长的单菌落周围会出现大小不等的蓝色环带 C．进行接种操作时，接种工具使用前后都要进行灼烧灭菌 D．若不使用培养基甲，则获得的目的菌不一定能产生漆酶 【答案】B 【分析】在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称为选择培养基。 【详解】A、在造纸工业中，传统的化学制浆方法会产生大量含有木质素的废水，并且化学处理过程会使用大量化学药剂，引入漆酶可以选择性地降解木质素，从而降低化学药剂的使用量，A正确； B、高效降解木质素的菌株(含有漆酶)能催化水溶蓝降解，因此在培养基乙上生长的单菌落周围会出现大小不等的无色透明圈，B错误； C、实验过程中，接种环使用前后都要进行灼烧灭菌，C正确； D、由于水溶蓝是含碳有机物，培养基乙中木质素不是唯一碳源，因此获得的目的菌不一定能产生漆酶，D正确。 故选B。 34．（2025·安徽马鞍山·一模）科研人员利用微生物发酵技术来生产γ-CGT酶。将发酵液的相对溶氧量（DO）控制在恒定的20%、40%、60%，每隔一段时间检测菌体干重和γ-CGT酶产量，结果如下图所示。下列叙述正确的是（　　）    A．在实验前常采用干热灭菌法对操作器具和培养基进行灭菌 B．欲提高γ-CGT酶产量，相对溶氧量应控制在恒定的60% C．DO值控制在恒定的20%、40%时，该微生物在一定时间内种群数量呈“S”形增长 D．实验中种群数量达K值后，限制种群数量不再增加的主要是非密度制约因素 【答案】C 【分析】本实验的自变量是培养时间，溶氧量，因变量是细胞干重、γ-CGT酶产量 【详解】A、干热灭菌法适用于耐高温且不易变质的物品（如玻璃器皿），但培养基通常采用高压蒸汽灭菌法（湿热灭菌法），A错误； B、根据实验结果图，γ-CGT酶产量在相对溶氧量为40%时达到最高，而不是60%。因此，60%并不是最佳溶氧量，B错误； C、根据实验结果图，菌体干重（反映种群数量）在20%和40%的溶氧量下随时间增长呈现“S”形曲线，C正确； D、种群数量达到K值（环境容纳量）后，限制种群数量增加的主要是密度制约因素（如营养竞争、代谢废物积累等)，D错误。 故选C。 35．（2025·广东茂名·一模）实验小组采用鲜血琼脂平板，从环境中筛选获得高效降解血红蛋白的菌株，下列操作不恰当的是（　　） A．取样——应从屠宰场地下水道中取样 B．分离——可用平板划线法对菌株分离 C．筛选——通过溶血圈直径大小比较菌株降解能力 D．培养——利用添加琼脂的培养基大规模培养菌株 【答案】D 【分析】微生物常见的接种的方法： (1)平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落； (2)稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。 【详解】A、屠宰场地下水道中含有较多血红蛋白等物质，更有可能存在高效降解血红蛋白的菌株，从这里取样是合理的，A不符合题意； B、平板划线法是常用的分离微生物的方法之一，可以将聚集的菌株逐步稀释分散，从而获得单个菌落实现分离，B不符合题意； C、高效降解血红蛋白的菌株会使周围的血红蛋白被降解，从而形成溶血圈，溶血圈直径越大，通常说明菌株降解血红蛋白的能力越强，可以通过比较溶血圈直径大小来筛选降解能力强的菌株，C不符合题意； D、添加琼脂的培养基是固体培养基，固体培养基一般用于分离、鉴定、计数等，大规模培养菌株通常使用液体培养基，这样可以使菌体与营养物质充分接触，更有利于菌体的生长繁殖，D符合题意； 故选D。 36．（2025·安徽黄山·一模）毛豆腐是徽州地区的特色美食，其发酵菌种主要是毛霉（异养需氧型）。毛豆腐制作方法是先将切好的豆腐块平整放在竹条上，每块之间留有间隙，适宜条件下放置3至5天，当豆腐表面长出一层均匀细密的绒毛，即可煎炸食用。下列叙述错误的是（    ） A．豆腐为毛霉生长提供了水、碳源、氮源和无机盐等营养物质 B．毛霉产生的蛋白酶，使蛋白质分解而易于消化吸收 C．为使毛霉发酵充分，须提供适宜的温度、湿度、无菌等条件 D．制作时每块豆腐之间留有间隙有利于毛霉菌丝的生长 【答案】C 【分析】腐乳制作的原理：腐乳的发酵在多种微生物的协同作用下进行，其中起主要作用的是毛霉，它是一种丝状真菌，新陈代谢类型是异养需氧型；毛霉等微生物产生的蛋白酶可以将豆腐中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸；脂肪酶可以将脂肪水解成甘油和脂肪酸。 【详解】A、豆腐含有水、蛋白质、脂质等成分，能为毛霉生长提供水、碳源（如糖类等有机物）、氮源（蛋白质等含氮物质）和无机盐等营养物质，A正确； B、毛霉能产生蛋白酶，蛋白酶可将豆腐中的蛋白质分解为小分子的肽和氨基酸，从而使蛋白质更易于消化吸收，B正确； C、毛霉发酵需要适宜的温度、湿度等条件，但是毛豆腐制作并非是在无菌条件下，因为本身就是利用环境中的毛霉等微生物进行发酵，C错误； D、毛霉是异养需氧型生物，制作时每块豆腐之间留有间隙，可以增加氧气含量，有利于毛霉菌丝的生长，D正确。 故选C。 37．（2025·江苏南通·一模）下图是核桃紫米酸奶的制作工艺流程，相关叙述错误的是（　　） A．核桃仁中蛋白质含量相对较高，是制作植物酸奶的良好原料 B．核桃紫米乳冷却后添加植物乳杆菌，先通气后密封发酵产生乳酸 C．酸奶灌装前进行巴氏消毒，既能防止发酵过度又能保持营养价值 D．可通过调整紫米和核桃的比例来调整核桃紫米酸奶的营养和口味 【答案】B 【分析】消毒是指使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物（不包括芽孢和孢子），灭菌则是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。 【详解】A、核桃仁中蛋白质含量丰富，是制作植物酸奶的良好原料，A正确； B、植物乳杆菌属于厌氧菌，核桃紫米乳冷却后添加植物乳杆菌，密封发酵产生乳酸，B错误； C、巴氏消毒法是指在62~65℃消毒30min或在80~90℃消毒30s~1min，可以杀死牛奶中的绝大多数微生物，并且牛奶的营养成分不被破坏，酸奶灌装前进行巴氏消毒，既能防止发酵过度又能保持营养价值，C正确； D、可通过调整紫米和核桃的比例来调整核桃紫米酸奶的营养和口味，D正确。 故选B。 38．（2025·江苏南通·一模）解钾菌能将土壤中难溶性含钾化合物分解，转变为可溶性化合物。下表是研究人员从餐厨垃圾废液中筛选解钾细菌的培养基配方，相关叙述正确的是（　　） 成分 钾长石粉 蔗糖 Na2HPO4 CaCO3 （NH4）2SO4 NaCl 酵母膏 MgSO4·7H20 含量/g·L-1 10 10 2 1 1 0.1 0.5 0.5 A．培养基中的钾长石粉属于可溶性钾，为目的菌提供无机盐 B．按表中配方配制好的培养基应先灭菌再将pH调至弱碱性 C．餐厨垃圾废液梯度稀释后涂布于选择培养基表面倒置培养 D．应选择透明圈直径与菌落直径比值较小的菌落进一步进行纯化 【答案】C 【分析】培养基的营养构成：各种培养基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐，筛选和分离微生物需要使用选择培养基，微生物接种的方法很多，最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法，微生物培养的关键是无菌操作。 【详解】A、解钾菌能将土壤中难溶性含钾化合物分解，转变为可溶性化合物。培养基中的钾长石粉属于不溶性钾，钾长石粉为唯一钾源，目的是筛选出解钾菌，A错误； B、按表中配方配制好的培养基应先将pH调至弱碱性再灭菌，B错误； C、餐厨垃圾废液梯度稀释后涂布于选择培养基表面倒置培养，培养基皿底有标记，C正确； D、应选择透明圈直径与菌落直径比值较大的菌落，进一步进行纯化，比值较大，解钾细菌分解能力越强，D错误。 故选C。 39．（2025·河南安阳·一模）酸乳是牛奶在乳酸链球菌和保加利亚乳杆菌等作用下发酵形成的。它具有爽口的酸味，且极易消化吸收，有调理肠道的作用，所以深受人们欢迎。其制备工艺为鲜乳→杀菌→接种→发酵→后熟→成品。下列相关叙述正确的是（　　） A．酸乳具有酸味的原因是含有乳酸，发酵产生乳酸的第二阶段伴随少量ATP的生成 B．酸乳有调理肠道的作用是因为后熟过程未经高温处理，活性乳酸菌可改善肠道微生态 C．用于鲜乳的原液首先必须进行高温处理，其目的是消毒，以保证接种后的正常发酵 D．平板划线法和稀释涂布平板法均可获得单一菌种，后者统计结果可能比实际值偏大 【答案】B 【分析】平板划线操作：（1）平板划线操作的第一步之前要灼烧接种环，目的是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养基；（2）平板划线除首次划线外，每次划线前都要灼烧接种环，目的是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种；（3）平板划线结束时要灼烧接种环，其目的是避免接种环上残留的菌种污染环境和感染操作者。 【详解】A、发酵产生乳酸的第二阶段是无氧呼吸第二阶段，该阶段不产生ATP，A错误； B、后熟过程未经高温处理，乳酸菌未失活，可改善肠道微生态，故酸乳有调理肠道的作用，B正确； C、用于鲜乳的原液首先必须进行高温处理，其目的是灭菌，以保证接种后的正常发酵，C错误； D、平板划线法和稀释涂布平板法均可获得单一菌种，但稀释涂布平板法统计结果可能偏小，这是因为当两个或多个菌落长在一起时，只能计为一个菌落，D错误。 故选B。 40．（2025·福建厦门·一模）科学家从海南红树林底泥中分离到具有抗菌活性的放线菌A．为探究不同培养基对A抗菌活性的影响，他们开展了下列实验：步骤①将A置于下列六种培养基上进行培养；步骤②分别对六种培养基培养产物进行研磨，得到粗提液；步骤③将粗提液滴加到大小相同的滤纸片上，并置于长满金黄色葡萄球菌的平板上，一段时间后测量抑菌圈直径。结果如图所示。下列叙述错误的是（　　） A．分离纯化放线菌A时可使用稀释涂布平板法 B．步骤①中的无关变量有培养温度、培养基成分等 C．步骤③滴加到滤纸片上的粗提液应完全等量 D．GS和YG培养基诱导A产生抗菌物质的能力最强 【答案】B 【分析】微生物的分离和纯化，是将特定的 微生物个体从群体中或从混杂的微生物群体中分离出来的技术叫作分离；在特定环境中只让一种来自同一祖先的微生物群体生存的技术叫作纯化。分离与纯化是研究微生物的基本方法。常用的分离和纯化方法是 平板划线法和稀释涂布平板法。 【详解】A、分离纯化微生物常用的方法有稀释涂布平板法和平板划线法等，所以分离纯化放线菌A时可使用稀释涂布平板法，A正确； B、步骤①是将A置于六种培养基上进行培养，该实验的自变量是培养基的种类，培养温度是无关变量，而培养基成分是自变量，不属于无关变量，B错误； C、步骤③将粗提液滴加到滤纸片上，为了保证单一变量原则，滴加到滤纸片上的粗提液应完全等量，C正确； D、从图中可以看出，GS和YG培养基对应的抑菌圈直径最大，说明这两种培养基诱导A产生抗菌物质的能力最强，D正确。 故选B。 41．（2025·云南昆明·一模）某除草剂（含氮有机物）不易被降解，且长期使用会导致土壤污染。为修复被该除草剂污染的土壤，科研人员按照下图程序选育能降解该除草剂的细菌，已知含该除草剂的培养基不透明。下列叙述错误的是（    ）    A．从长期施用该除草剂的农田中获取土壤样品有利于获得目的菌 B．完成Ⅰ的操作，接种环至少需进行6次灼烧灭菌 C．Ⅱ过程的培养基上生长的微生物都是以该除草剂作为氮源的微生物 D．Ⅱ中透明圈直径/菌落直径的比值越大，菌落中菌株降解除草剂的能力越强 【答案】C 【分析】微生物常用的接种方法：稀释涂布平板法和平板划线法，前者还可以对微生物进行数量统计。 【详解】A、实验目的是选育能降解该除草剂的细菌，长期施用该除草剂的农田土壤中含有更多能降解该除草剂的细菌，A正确； B、结合图示可知，操作Ⅰ共划线五次，第一次划线前灼烧灭菌一次，每一次划线后灼烧灭菌一次，因此共灼烧灭菌6次，B正确； C、某除草剂为含氮有机物，为筛选能降解该除草剂的微生物，培养基中应该以该除草剂为唯一的氮源，能降解除草剂的微生物形成的菌落会有透明圈，故Ⅱ过程的培养基上生长的微生物并非都是以该除草剂作为氮源的微生物，C错误； D、能降解除草剂的微生物形成的菌落会有透明圈，透明圈直径/菌落直径的比值越大，菌落中菌株降解除草剂的能力越强，D正确。 故选C。 42．（2025·江苏·一模）如图是老陈醋的生产流程，下列相关叙述正确的是（　　） A．蒸熟的高粱米应先加入大曲再冷却 B．“糖化”是将高粱中的淀粉等大分子氧化分解为小分子，为酒精发酵提供原料 C．“醋醅”中含有的醋酸菌，是一种异养的单细胞真核生物 D．“醋酸发酵”步骤中每天翻料两次，可为醋酸菌提供更多氧气 【答案】D 【分析】参与陈醋制作的微生物是醋酸菌，是细菌，其新陈代谢类型是异养需氧型。陈醋制作的原理：当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将高粱中的糖分解成醋酸；当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。 【详解】A、高粱蒸熟后温度较高，不冷却直接投入发酵菌种会造成菌种大量死亡，影响发酵效率，应先冷却再加入大曲，A错误； B、糖化是将淀粉等大分子物质通过水解酶的作用转化为可发酵的小分子糖（如葡萄糖），而不是氧化分解，B错误； C、醋酸菌是细菌，是一种异养的单细胞原核生物，C错误； D、醋酸发酵需要氧气，所以每天翻料两次，可为醋酸菌提供更多氧气，D正确。 故选D。 二、多选题 43．（2025·河北石家庄·一模）蛭弧菌能使污水中的嗜水气单胞菌（异养型）裂解，将其接种在长满嗜水气单胞菌的平板上会出现噬菌斑。某兴趣小组将嗜水气单胞菌接种到固体培养基上，培养形成薄层，再接种采集的污水用以分离蛭弧菌。下列叙述错误的是（    ） A．可用干热灭菌法对平板进行灭菌 B．可用涂布平板法接种嗜水气单胞菌 C．出现噬菌斑一定是蛭弧菌作用的结果 D．污水可为自然环境中的嗜水气单胞菌提供碳源 【答案】AC 【分析】微生物常见的接种的方法: （1）平板划线法:将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板,接种,划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分,微生物往 往连在一起生长， 随着线的延伸，菌数逐渐减少,最后可能形成单个菌落。 （2）稀释涂布平板法:将待分离的菌液经过大量稀释后,均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。 【详解】A、平板应该指的是凝固后的培养基，不能用干热灭菌，A错误； B、接种方法有稀释涂布平板法和平板划线法，可用涂布平板法接种嗜水气单胞菌，B正确； C、出现噬菌斑说明有能分解嗜水气单胞菌的微生物，不一定是蛭弧菌作用的结果，C错误； D、污水中含有氨氮，可以为微生物提供氮源，D正确。 故选AC。 44．（2025·河北承德·一模）科研人员筛选抗链霉素的大肠杆菌突变株的实验过程如下： ①将灭菌的空培养皿斜放（一边垫起），倒入10 mL不含药物的底层培养基（如图甲所示） ②待培养基凝固后将培养皿平放，再倒入10 mL含有链霉素的上层培养基，使其迅速冷却（如图乙所示） ③将经诱变处理后的大肠杆菌悬液0.1 mL接种到图乙所示平板上 ④将平板倒置于恒温培养箱中培养2天，观察平板上大肠杆菌的生长情况 下列叙述正确的是（    ） A．可采用高压蒸汽灭菌法对培养皿和培养基灭菌 B．随着图乙中箭头方向，平板上所含链霉素的量逐渐增大 C．据图丙可知，科研人员利用涂布器将大肠杆菌悬液接种于平板上 D．选择图丙平板上1～2个生长在平板左侧的单个菌落继续培养 【答案】ABC 【分析】培养基从用途上分为鉴别培养基和选择培养基，这两种用途的培养基通常都是固体培养基，需要在培养基中加入起凝固作用的琼脂。鉴别培养基是用于鉴定特定菌种是否存在的培养基，如鉴别大肠杆菌需要在培养基中加入伊红美蓝，如果出现黑色菌落，则说明存在大肠杆菌菌落；选择培养基是用于筛选所需类型的培养基，如为了筛选到抗链霉素的大肠杆菌突变株，需要在培养基中加入起选择作用链霉素。根据题干中操作方法，如果能在较高浓度链霉素的培养基中形成菌落则为抗链霉素的菌株。 【详解】A、 高压蒸汽灭菌，不仅可杀死一般的细菌、真菌等微生物，对芽孢、孢子也有杀灭效果，可采用高压蒸汽灭菌法对培养皿和培养基灭菌，A正确； B、随着图乙中箭头方向，乙图中右侧链霉素浓度越来越大， 平板上所含链霉素的量逐渐增大，B正确； C、稀释涂布平板法是将待测样品制成均匀的系列稀释液，尽量使样品中的微生物细胞分散开，使成单个细胞存在，据图丙可知，科研人员利用涂布器将大肠杆菌悬液接种于平板上，C正确； D、图丙平板从左侧到右侧链霉素的浓度逐渐增大，生长在偏右侧的大肠杆菌菌落的抗药性强，因此应选择图丙平板上1～2个生长在平板偏右侧的单个菌落继续培养，D错误。 故选ABC。 45．（2025·山东青岛·一模）发酵工程能生产各种酶制剂，如通过黑曲霉发酵能生产淀粉酶。下列说法正确的是（    ） A．深层通气液体发酵可提高淀粉酶的产量 B．利用黑曲霉的发酵过程也能生产酱油和柠檬酸 C．平板划线法分离到的单菌落可直接接种到发酵罐发酵 D．用过滤、沉淀等方法获得产品是发酵工程的中心环节 【答案】AB 【分析】发酵工程是指利用微生物的特定功能，通过现代工程技术，规模化生产对人类有用的产品。它涉及菌种的选育和培养、产物的分离和提纯等方面。具体包括：菌种的选育，扩大培养，培养基的配制、灭菌，接种，发酵，产品的分离、提纯等环节。 【详解】A、黑曲霉属于好氧菌，深层通气液体发酵通过提供充足的氧气和无菌环境，能够促进其代谢活动，从而显著提高淀粉酶的产量，A正确； B、黑曲霉在发酵过程中可以生产柠檬酸（其代谢产物），而酱油的生产虽以米曲霉为主，但黑曲霉也可能参与部分酱油发酵（如辅助分解原料），B正确； C、平板划线法分离到的单菌落需进行扩大培养，再接种到发酵罐中进行发酵生产，C错误； D、发酵过程是发酵工程的中心环节，发酵过程中需要随时取样检测培养液中的细菌数目、产物浓度等，还要及时添加必需的培养基组分，以满足菌种的营养需要。同时还要严格控制温度、pH、溶氧、通气量与转速等发酵条件，D错误。 故选AB。 46．（2025·黑龙江吉林·一模）果酒是以水果为原料，经微生物发酵而成的低度饮料酒，而乳酸菌是天然参与到果酒发酵中的重要菌群。乳酸菌的生长繁殖与代谢产物对发酵过程及产品品质都具有极其重要的影响。利用多种酵母与乳酸菌混合发酵可以增加葡萄酒中酚类物质含量与香气成分。下图为以香蕉为原料采用两种不同发酵处理过程中酵母菌和乳酸菌生物量的变化。下列相关说法合理的是（    ）    A．香蕉果汁发酵过程分别利用酵母菌和乳酸菌的需氧型和厌氧型代谢特点 B．发酵过程中取样检测两种微生物数量变化时可用平板划线法、稀释涂布平板法等方法 C．自然发酵过程中，乳酸菌先快速增殖，可能与其对维生素等物质的吸收速率高有关 D．两种发酵处理下，酵母菌和乳酸菌的生长规律有差异，推测发酵过程中二者存在种间竞争 【答案】CD 【分析】醋酸菌在有氧的条件下将乙醇氧化为醋酸，酵母菌代谢类型是异氧兼性厌氧型，酒精发酵时一般将温度控制在18～30℃。 【详解】A、香蕉果汁发酵过程利用了酵母菌无氧呼吸产生酒精的特点，乳酸菌为厌氧菌，无氧呼吸可产生乳酸，A错误； B、平板划线法不能计数菌体数量，因此取样检测两种微生物数量变化时不能用平板划线法，B错误； C、维生素是乳酸菌生长繁殖所必需的，由图可知，自然发酵过程中，乳酸菌先快速增殖，可能与其对维生素等物质的吸收速率高有关，C正确； D、由图甲可知，酵母菌数量增加时，乳酸菌的含量很低，当酵母菌数量有所减少时，乳酸菌的数量增加，培养9天后，由于营养物质的减少，二者的数量都减少，由图乙可知，乳酸菌数量多时，酵母菌的数量少，当乳酸菌的数量减少时，酵母菌数量开始增加，因此推测发酵过程中二者存在种间竞争，D正确。 故选CD。 47．（2025·山东济宁·一模）野生型大肠杆菌可在基本培养基上生长，营养缺陷型大肠杆菌则需在基本培养基中添加某些物质才能生长。A菌株为甲硫氨酸和生物素缺陷型突变体，B菌株为苏氨酸、亮氨酸、硫胺素缺陷型突变体，C菌株为亮氨酸、甲硫氨酸和硫胺素缺陷型突变体。A和B菌株混合培养可获得野生型菌落。链霉素可以抑制A、B菌株分裂，科研人员用B菌株与经链霉素处理的A菌株混合培养，能得到野生型菌落；用A菌株与经链霉素处理的B菌株混合培养，不能得到野生型菌落。相关分析合理的是（    ） A．菌株A和B都是由野生型菌株基因突变而来 B．实验中所用的基本培养基应不含上述五种营养物质 C．野生型菌落的产生是DNA从A菌落转移到B菌落的结果 D．将A和C菌株混合培养可以得到野生型菌落 【答案】ABC 【分析】根据题意可知：菌株A是甲硫氨酸和生物素缺陷型突变体，菌株B为苏氨酸、亮氨酸、硫胺素缺陷型突变体，该实验的目的是探究菌株A和B混合培养长野生型菌落的原因，营养缺陷型的菌株不能在基本培养基中生存，需要添加相应的营养物质，据此分析作答。 【详解】A、A菌株为甲硫氨酸和生物素缺陷型突变体，B菌株为苏氨酸、亮氨酸、硫胺素缺陷型突变体，A和B菌株混合培养可获得野生型菌落，推测营养缺陷型的大肠杆菌突变体菌株A和B都是由野生型菌株基因突变（大肠杆菌为原核生物，其变异类型为基因突变）而来，A正确； B、A菌株为甲硫氨酸和生物素缺陷型突变体，B菌株为苏氨酸、亮氨酸、硫胺素缺陷型突变体，为区分野生型菌体和突变体A和B，实验中所用的基本培养基应不含上述五种营养物质，保证能在此培养基上生长的是野生型菌体，B正确； C、A菌株为甲硫氨酸和生物素缺陷型突变体，B菌株为苏氨酸、亮氨酸、硫胺素缺陷型突变体，链霉素可以抑制A、B菌株分裂，经链霉素处理的A菌株不能在分裂，用B菌株与经链霉素处理的A菌株混合培养，能得到野生型菌落，说明B菌株中获得了苏氨酸、亮氨酸、硫胺素的能力，因此可说明野生型菌落的产生是DNA从A菌落转移到B菌落的结果，C正确； D、A菌株为甲硫氨酸和生物素缺陷型突变体，C菌株为亮氨酸、甲硫氨酸和硫胺素缺陷型突变体，二者都没有合成甲硫氨酸的能力，因此将二者混合培养不能得到野生型菌落，D错误。 故选ABC。 48．（2025·山东菏泽·一模）庆大霉素（GM）能抑制沙门氏菌的生长。研究人员为了探究LPC（用MRS培养基培养植物乳杆菌后获得的上清液）对沙门氏菌生长的影响及作用机制，在接种沙门氏菌的平板上做了五组不同处理，实验结果如图所示。下列说法正确的是（    ） A．需将含沙门氏菌的菌液稀释到适宜浓度后用平板划线法接种 B．设置MRS是为了排除MRS培养基成分对实验结果的影响 C．Heat-LPC与LPC对比结果说明LPC的热稳定性比较强 D．LPC抑制沙门氏菌的机制可能是因为LPC含有酸性物质 【答案】BCD 【分析】培养基是人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质；根据物理性质分为固体培养基和液体培养基，培养基中一般含有水、碳源、氮源和无机盐。在提供上述几种主要营养物质的基础上，培养基还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物种和氧气的要求。 【详解】A、本实验需在培养基上形成均匀分布的沙门氏菌的菌落，是用稀释涂布平板法获得的结果，A错误； B、MRS培养基中的成分可能对该实验造成干扰，设置MRS是为了排除无关变量的影响，B正确； C、Heat-LPC经过了高温处理，但是该组的抑菌圈与LPC组的基本相同，说明加热不影响LPC，进而说明其热稳定性强，C正确； D、NaOH-LPC组没有抑菌圈，与MRS组相同，该组在LPC中加入了NaOH后调节到了中性，加入的NaOH与LPC中的酸性物质反应，使其失去了抑菌的作用，因而推测LPC抑菌是因为其含有酸性物质，D正确。 故选BCD。 49．（2025·江西新余·一模）聚羟基脂肪酸酯（PHA）是由嗜盐细菌合成的一种胞内聚酯，它具有类似于合成塑料的理化特性，且废弃后易被生物降解，可用于制造无污染的“绿色塑料”。某科研团队拟从含盐量高的餐厨垃圾渗沥液处理系统中筛选分离出PHA合成能力较强的耐盐菌株，流程图如下。下列说法正确的是（    ） 注：乙培养基中加入尼罗红，尼罗红是细胞内储存的脂类物质的荧光染色剂，在紫外光的照射下可显示红色。 A．配制甲培养基时可适当提高培养基的盐浓度，接种后应置于摇床中振荡培养 B．乙属于鉴别培养基，且采用平板划线法进行接种 C．①过程是扩大培养，②过程中应挑选有红色荧光的菌落进行培养 D．可用诱变或基因编辑等方法选育PHA合成能力更强的耐盐菌株 【答案】AD 【分析】培养基是人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质；根据物理性质分为固体培养基和液体培养基，培养基中一般含有水、碳源、氮源和无机盐。在提供上述几种主要营养物质的基础上，培养基还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质和氧气的要求。 【详解】A、分析题意，本实验的目的是从含盐量高的餐厨垃圾渗沥液处理系统中筛选分离出PHA合成能力较强的耐盐菌株，故配制甲培养基时可适当提高培养基的盐浓度，接种后应置于摇床中振荡培养，提高溶解氧含量，A正确； B、乙属于选择培养基，利用培养基中的高盐环境选择PHA合成能力较强的耐盐菌株，B错误； C、①过程是选择培养，②过程为扩大培养，扩大培养之后，通过气相色谱法挑选有红色荧光的菌落进行培养，C错误； D、诱变育种的原理是基因突变，能够产生新基因，进而产生新性状，而基因工程可导入外源基因，故可用诱变或基因工程方法选育PHA合成能力更强的耐盐菌株，D正确。 故选AD。 50．（2025·湖南岳阳·一模）鱼茶是一种传统特色食品，味酸而微咸，富含多种必需氨基酸。鱼茶的发酵菌群主要是乳酸菌，如下图是某同学绘制的鱼茶发酵过程中各菌种数量及发酵液pH的变化曲线。下列叙述不正确的是（    ）    A．传统鱼茶制作需严格灭菌 B．乳酸菌发酵时积累NADH导致pH变小 C．醋酸菌和酵母菌消失的原因都是因为氧气已耗尽 D．利用显微镜直接计数可快速直观检测微生物数量 【答案】ABC 【分析】酵母菌是兼性厌氧型生物，醋酸菌是需氧型生物。 【详解】A、传统泡菜制作和鱼茶发酵过程都是传统发酵过程，一般利用的是自然条件下的微生物，不需要严格灭菌，A错误； B、乳酸菌发酵不会积累NADH，会积累乳酸导致pH变小，B错误； C、酵母菌可进行无氧呼吸，消失的原因是养料耗尽、代谢废物积累等，C错误； D、显微镜直接计数可利用血细胞计数板等快速观察并统计微生物的数量，D正确。 故选ABC。 三、非选择题 51．（2025·山西·一模）维生素K2在预防骨质疏松、心血管疾病等方面具有重要作用。科研人员以解淀粉芽孢杆菌（GSA-184）为研究对象，通过优化发酵工艺，提高了维生素K2的产量。请回答下列问题： (1)从土壤中筛选芽孢杆菌时，利用的培养基成分含有酵母浸粉、蛋白胨、NaCl和水等。其中蛋白胨提供的主要营养为 和维生素等。 (2)科研人员进行了优化培养基碳源的实验，实验结果如右图所示。据图判断，若对菌株GSA-184扩大培养，所用培养基的最佳碳源是 ；若想大量获取维生素K2，所用培养基的最佳碳源是 。 (3)科研人员探究了菌株GSA-184在不控制pH和控制pH为7.0条件下的发酵情况，实验结果如图甲和图乙所示。两种条件下的溶解氧在发酵3h内从100%附近急剧下降到2%附近，说明 ；在图甲中，发酵80h后溶解氧开始从0%附近逐渐上升，可能的原因是 。对比图甲和图乙说明， 条件下有助于维持菌体的活性，从而提高维生素K2产量。 【答案】(1)碳源、氮源 (2) L-阿拉伯糖 甘油 (3) 该菌株为需氧型，发酵初期菌体繁殖耗氧量很大 发酵罐内的pH较高，菌体活性降低且菌体数量下降，耗氧量逐渐减少 稳定而合理的pH（或“控制pH为7.0”） 【分析】培养基是人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质；根据物理性质分为固体培养基和液体培养基，培养基中一般含有水、碳源、氮源和无机盐。在提供上述几种主要营养物质的基础上，培养基还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质和氧气的要求。例如，培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素，培养霉菌时需将培养基的pH调至酸性，培养细菌时需将pH调至中性或微碱性，培养厌氧微生物时则需要提供无氧的条件。 【详解】（1）在微生物培养基中，蛋白胨含有丰富的营养成分，其主要为微生物生长提供氮源、碳源和维生素等。因为蛋白胨是将蛋白质经过酶解等处理得到的，其中的含氮有机物可作为氮源，同时其中的碳元素也可为微生物提供碳源等； （2）扩大培养菌株GSA-184，目的是让菌株数量增多，也就是要使活菌生物量达到最大。从图中可以看出，在以L-阿拉伯糖为碳源时，活菌生物量的数值最高。所以若对菌株GSA-184扩大培养，所用培养基的最佳碳源是L-阿拉伯糖；若想大量获取维生素K2，就要找使维生素K2产量最高的碳源。从图中可知，当以甘油为碳源时，维生素K2产量的数值最大。所以若想大量获取维生素K2，所用培养基的最佳碳源是甘油； （3）两种条件下的溶解氧在发酵3h内从100%附近急剧下降到2%附近，这说明该菌株为需氧型，发酵初期菌体繁殖耗氧量很大；在图甲中，发酵80h后溶解氧开始从0%附近逐渐上升，可能的原因发酵罐内的pH较高，菌体活性降低且菌体数量减少，耗氧量逐渐减少；对比图甲（不控制pH）和图乙（控制pH为7.0），可以发现控制pH为7.0时，维生素K2产量更高，活菌生物量在后期也能维持相对较好的水平，这说明控制pH为7.0条件下有助于维持菌体的活性，从而提高维生素K2产量。 52．（2025·山东青岛·一模）绿花百合生长在海拔1400米至2250米的山坡林下，花呈绿白色，气味芳香，观赏性强，具有较高的研究和开发利用价值，是国家二级重点保护野生植物。 (1)绿花百合所在生物群落中决定地上植物分层的环境因素主要是 ；决定植物地下分层的环境因素则是 等。绿花百合除观赏外，它的鳞茎也可供药用，这体现了生物多样性的 价值。 (2)百合叶螟会在百合叶子背面产卵，导致叶子出现褐色的斑点，影响其生长和美观。调查虫卵密度的常用方法是 。百合叶螟大量繁殖会导致百合大量死亡，从生态平衡的角度分析，生态系统的 平衡受到破坏。 (3)研究小组研究了百合叶螟种群数量与被捕食率、补充率的关系，模型如图所示。被捕食率是指百合叶螟被其天敌捕食的比率；补充率是指在没有被捕食的情况下，百合叶螟增长的比率。当其种群数量介于m与n之间时，种群数量会逐渐稳定在 （填“m”或“n”），判断依据是 。 (4)某研究小组从百合生长的土壤中分离到一种单细胞真菌，配制了5mL样液，对样液进行100倍稀释后，用血细胞计数板对其进行计数，结果如图。样液中真菌的个数约为 个。 【答案】(1) 光照、温度 水分、无机盐 直接 (2) 样方法 结构 (3) m 被捕食率大于补充率，种群数量会逐渐下降而后稳定在m (4)3109 【分析】题图分析：图中显示的种群数量变化情况为，m点之前种群数量增加，m点之后种群数量下降，逐渐在m点稳定下来，n点时种群数量达到平衡，高于n点之后种群数量增大，p点达到新的平衡点，高于p点之后，种群数量下降，然后在p点稳定。 【详解】（1）绿花百合所在生物群落中决定地上植物分层的环境因素主要是光照、温度；决定植物地下分层的环境因素则是水、无机盐等。绿花百合除观赏外，它的鳞茎也可供药用，这体现了生物多样性的直接价值。 （2）虫卵几乎无活动能力，所以调查虫卵密度的常用方法是样方法。百合叶螟大量繁殖会导致百合大量死亡，会打破生态系统的各组分的平衡，进而使生态系统的结构平衡遭到破坏。 （3）当吹绵蚧种群数量介于m与n之间时，补充率小于被捕食率，种群数量减少，最后维持在m点。 （4）据图可知，一个中方格内有24个单细胞真菌，因此一个大方格内单细胞真菌的数量为2425=600个，一个方格的样本的体积为0.1mm3，0.1mm3=0.0001cm3=0.0001mL，则1mL样液中真菌的数量为600104100=6108个，5mL样液中，单细胞真菌的数量为56108=3109个。 53．（2025·宁夏银川·一模）尿素含氮量高，化学性质相对稳定，是现代农业生产中一种重要的氮肥，但若不经细菌的分解，就不能更好地被植物利用，某科研小组为了将土壤中分解尿素的细菌纯化培养，进行了如下操作，请回答相关问题： 成分 KH2PO4 Na2HPO4 MgSO4·7H2O 葡萄糖 尿素 琼脂 含量（g） 1.4 2.1 0.2 10.0 1.0 15.0 操作将上述物质溶解后，用蒸馏水定容至1000毫升 (1)上表是尿素分解菌的选择培养基配方，选择培养基是指 。本实验中有两组对照，一组是未接种的牛肉膏蛋白胨培养基平板和选择培养基平板，另一组是已接种的牛肉膏蛋白胨培养基平板和选择培养基平板。设置前一组的平板上如果 ，说明培养基在使用前未被杂菌污染；后一组的平板上如果 ，可以说明选择培养基具有选择作用。 (2)将5g土壤溶于45mL无菌水，再稀释倍，按图[    ] （填数字及名称）接种方式将0.1mL样品接种到3个培养基上，统计菌落数目为134、131、137，据此可得出每克土壤中的纤维素分解菌活菌数约为 个。    (3)分解尿素的细菌能合成 ，催化尿素分解产生的可以作为细菌生长的氮源。如果培养基中加入了酚红指示剂，尿素分解的产物会使培养基的pH升高，酚红指示剂将变红，根据功能划分该培养基属于 培养基。 (4)土壤中的某些固氮菌可以利用空气中的氮气作为氮源（如圆褐固氮菌能将大气中的氮气转化为，请设计实验进一步确定平板上分离得到的细菌是否是固氮菌。（写出简要思路及预期结果） 。 【答案】(1) 在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基 没有菌落生长 牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数显著多于选择培养基 (2) 1稀释涂布平板法 (3) 脲酶 鉴别 (4)将平板上分离得到的细菌接种到无氮源的培养基上培养一段时间后，观察是否有出现菌落。若能长出菌落，说明该菌为固氮菌，否则不是固氮菌 【分析】1、实验室的培养基按照功能划分，可以分为选择培养基和鉴别培养基。选择培养基是在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基称为选择培养基。 2、微生物常见的接种的方法：①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养.在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。 【详解】（1）根据分析，选择培养基是指在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基称为选择培养基。本实验中有两组对照，一组是未接种的牛肉膏蛋白胨培养基平板和选择培养基平板，可证明灭菌是否彻底；另一组是已接种的牛肉膏蛋白胨培养基平板。前一组的平板上如果没有菌落生长，可以说明培养基在使用前未被杂菌污染；后一组的平板上如果菌落数显著多于同一稀释度的选择培养基平板上的，可以说明选择培养基具有选择作用。 （2）统计菌落数目一般使用稀释涂布平板法，将5g土壤溶于45mL无菌水，再稀释105倍，按图[1]稀释涂布平板法接种方式，将0.1mL样品接种到3个培养基上，统计菌落数目为134、131、137，据此可得出每克土壤中的纤维素分解菌活菌数约为（ 134+131+137）÷3÷0.1×10×105=1.34×109 个。 （3）分解尿素的细菌能合成脲酶，催化尿素分解产生的 NH3 可以作为细菌生长的氮源。如果培养基中加入了酚红指示剂，尿素分解的产物 NH3 会使培养基的pH升高，酚红指示剂将变红，根据功能划分该培养基属于鉴别培养基。 （4）土壤中的某些固氮菌可以利用空气中的氮气作为氮源，设计实验时用到的是无氮源培养基，然后检测是否有固氮菌即可。简要思路、预期结果和结论：将平板上分离得到的细菌接种到无氮源的培养基上培养，若能生长，说明该菌为固氮菌，否则不是固氮菌，进一步确定平板上分离得到的细菌是否是固氮菌。 54．（2025·江西·一模）刺梨是一种落叶灌木，其果实富含维生素C（VC）、维生素P和超氧化物歧化酶（SOD），VC含量是苹果的800倍，被称为“维生素C大王”。为提高刺梨的经济价值，研究人员以刺梨果实为原料制备刺梨果醋，工艺流程如下： 将新鲜成熟的刺梨果清洗干净→切块、榨汁、过滤、酶解→加入白砂糖、并加入活化酵母菌→Ⅰ阶段发酵→直接加入一定量活性醋酸菌→Ⅱ阶段醋酸发酵→处理→装罐→刺梨果醋。 回答下列问题： (1)酶解时，加入的酶是 ；Ⅰ阶段发酵过程中，需定期排气的原因是 。判断Ⅰ阶段发酵结束的主要指标是 。 (2)Ⅱ阶段醋酸发酵中，每日2次彻底搅拌发酵液，搅拌的目的是 。Ⅱ阶段醋酸发酵结束后需经“处理”才能装罐，“处理”主要指 。 (3)实验中，在酒精发酵第7d及醋酸发酵第3~7d取发酵样液，分别命名为原汁、果酒、Ⅱ-3d、Ⅱ-4d、Ⅱ-5d、Ⅱ-6d、Ⅱ-7d。如图为不同发酵阶段刺梨发酵液的总酸含量和pH变化。果酒发酵过程中的pH变化较小，这是因为 ，在醋酸发酵0~3d中，总酸含量增加幅度小，可能原因是 。    【答案】(1) 纤维素酶、果胶酶 酒精发酵过程中会产生CO2（因此需要定期排气） 糖度不再变化（酒精不再增加） (2) 增加发酵液的溶解氧，保证醋酸菌的活性 ；（让发酵液与醋酸菌充分接触，）使发酵更充分 消毒（除菌过滤） (3) 酵母菌主导的发酵主要代谢产物是乙醇，产酸性物质很少 醋酸菌适应发酵基质较为缓慢，此时产乙酸能力低 【分析】参与果醋制作的微生物是醋酸菌，其新陈代谢类型是异养需氧型。果醋制作的原理：当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将果汁中的果糖分解成醋酸。当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。 【详解】（1）酶解时，加入的酶是纤维素酶和果胶酶，以去除植物细胞的细胞壁；Ⅰ阶段发酵，主要是进行酒精发酵，在该过程中会产生CO2，气体增多，会导致发酵罐压力增大，为防止发酵罐内压力过高，所以要定期排气。判断Ⅰ阶段发酵结束的主要指标可以以反应物，也可以以产物，当糖度不再变化，或酒精不再增加时，就说明了Ⅰ阶段发酵结束。 （2）Ⅱ阶段醋酸发酵中，由于醋酸菌是需氧型生物，所以为了保证醋酸菌的活性，要通过搅拌增加发酵液中的溶解氧，同时，搅拌也可以使发酵液与醋酸菌充分接触，保证了发酵的充分、彻底。Ⅱ阶段醋酸发酵结束后需要经消毒处理才能装罐，以保证食品的安全。 （3）在果酒的发酵过程中，发酵产物是酒精和CO2，CO2还可以通过换气排出，所以果酒发酵的主要产物是酒精，产酸物质很少，故pH变化较小。在醋酸发酵0~3d中，总酸含量增加幅度之所以较小，可能是由于醋酸菌适应发酵液（发酵基质）比较慢，导致产酸能力弱。 55．（2025·河北沧州·一模）辛基酚(OP)是一种重要的精细化工原料和中间体，其生物毒性、激素活性及生物富集性均得到了国内外研究者的广泛证实，给人类健康和生态安全带来了巨大威胁。OP多存在于工业污泥、污水中。某实验小组欲利用生物方法处理污泥中的OP，他们从污水处理厂的生活污泥中，经过不断重复的污泥驯化和筛选工作，分离出具有OP降解能力的菌种，并命名为TW30。回答下列问题： (1)OP进行生物降解的优势是 (答两点)。 OP在城市污泥中的生物降解活性会受到 (答两点)等多方面因素的影响。所以，控制不同的条件，多角度的研究OP的生物降解十分有必要。 (2)在进行污泥的驯化中，需将采集的活性污泥沉降半小时，然后取1mL上清液加入到装有9mL 的试管中，以此类推，分别制成101、102、103、104、105不同稀释浓度的菌悬液，该方法称为 法。分别用灭菌的移液枪吸取不同稀释浓度的菌悬液，涂布于预先标号的固体培养基上，用无菌的玻璃涂布棒在培养基平板表面轻轻地涂布均匀，获得单菌落。此方法可用于计数，其原理是 。使用后的培养基应 处理后，才能扔掉，目的是 。 (3)4-t-OP(含OP物)在水中的溶解度极低，实验小组将配制浓度为5mg/L的无机盐溶液分为三组，分别添加等量的丙酮、丙酮和4-t-OP混合液以及4-t-OP的过饱和溶液，再按2%的体积分数投加菌悬液，每12h测OD370值(波长为370nm下的光密度测量值，OD值越大代表菌体数量越多)，结果如图所示。本实验说明菌株TW30无法以 为唯一碳源生长，而在4-t-OP过饱和溶液及4-t-OP+丙酮培养液中却生长良好，可能原因是TW30菌能以 为唯一碳源生长，且对其利用率较高； TW30在4-t-OP+丙酮下生长最好，由此得出 。 【答案】(1) 成本低、操作方便、去除效率较高、无二次污染等(任答两点，其他合理答案也可) 污染物结构、微生物的生物特性及环境条件(任答两点，其他合理答案也可) (2) 无菌水 梯度稀释 当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌 灭菌 杀死培养基上残留的微生物，避免其污染环境 (3) 丙酮 4-t-OP TW30在4-t-OP存在的条件下才能利用丙酮(其他合理答案也可) 【分析】微生物常见的接种的方法：①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落；②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。 【详解】（1）分析题意可知，OP是一种重要的精细化工原料和中间体，给人类健康和生态安全带来了巨大威胁，OP进行生物降解的优势是成本低、操作方便、去除效率较高、无二次污染等；OP在城市污泥中的生物降解活性会受到污染物结构、微生物的生物特性及环境条件，故在处理时应考虑不同的控制条件，以取得最好效果。 （2）微生物培养的关键是无菌技术，故稀释时应将上清液加入到无菌水试管中；采用逐步稀释的方法分别制成101、102、103、104、105不同稀释浓度的菌悬液，该方法称为梯度稀释法；可用于计数的接种方法是稀释涂布平板法，其原理是当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌；为杀死培养基上残留的微生物，避免其污染环境，使用后的培养基应进行灭菌处理。 （3）分析题意可知，OD值越大代表菌体数量越多，图示横坐标是时间，纵坐标是OD值，图中丙酮组的菌株TW30OD值较少，说明TW30无法以丙酮为唯一碳源生长；在4-t-OP过饱和溶液及4-t-OP+丙酮培养液中却生长良好，可能原因是TW30菌能以4-t-OP为唯一碳源生长，且对其利用率较高；与丙酮组相比， TW30在4-t-OP+丙酮下生长最好，而仅有丙酮组却生长较差，故可由此得出TW30在4-t-OP存在的条件下才能利用丙酮。 56．（2025·江西上饶·一模）牛和羊的瘤胃中生活着多种微生物，其中许多微生物能分解尿素。某研究小组欲从瘤胃内筛选出能高效降解尿素的细菌，设计了如下实验。请分析并回答下列问题： 实验步骤： Ⅰ、取样：从刚宰杀的牛的瘤胃中取样，将样品装入事先灭过菌的锥形瓶中。 Ⅱ、培养基的配制和灭菌： 配制全营养LB固体培养基。配方：水、蛋白胨、酵母提取物、NaCl、琼脂糖（一种凝固剂）。配制尿素固体培养基。配方：水、葡萄糖、NaCl、K2HPO4、尿素、琼脂糖。 Ⅲ、制备瘤胃稀释液并接种，如下图1所示。 Ⅳ、在无氧条件下进行微生物的培养、观察与计数。 (1)全营养LB固体培养基和尿素固体培养基都含有微生物生长所需的基本营养物质，除水外还有 。（至少答两点） (2)该小组采用 法对瘤胃中分解尿素的细菌进行分离和计数。在无菌条件下，利用该方法进行分离计数时，需要用到图2中的实验器材有 。 (3)为检测该培养基灭菌是否彻底，应采用的检测方法是 。为了判断尿素培养基是否具有选择作用，实验时还需要同时接种全营养平板，如果同一浓度梯度下，尿素培养基上的菌落数 （“大于”、“等于”或“小于”）全营养培养基上的菌落数，则说明尿素培养基具有选择作用。 (4)为了避免混淆，本实验中使用的平板需要在培养皿的 （“皿盖”或“皿底”）做好标记。然后在 （“18~25℃”或“25~30℃”或“30~37℃”）的恒温培养箱中需培养1-2d，每隔24h统计一次菌落数目，选择菌落数目稳定时的记录作为结果，其目的是 。 (5)若将最后一个试管中的稀释液分别涂布到3个尿素平板上培养，培养后平板上出现的菌落数如图1所示，则5mL瘤胃样品中含有目标活菌数约为 。该方法统计获得的菌落数比实际的活菌数 ，原因是 。 【答案】(1)碳源、氮源、无机盐 (2) （稀释）涂布平板 ①③④ (3) 将未接种的培养基放在恒温培养箱中培养，检验是否有菌落产生 小于 (4) 皿底 30~37℃ 为了防止培养时间不足导致菌落遗漏 (5) 3.5×1010个 少 当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落 【分析】 稀释涂布平板法：稀释涂布平板法除了可以用于分离微生物外，也常用来统计样品中活菌的数目。当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测样品大约含有多少活菌。 【详解】（1）虽然各种培养基的配方不同，但是一般都含有水、碳源、氮源和无机盐等微生物生长所需的基本营养物质。 （2）据图可知，接种后平板上培养出了菌落，且菌落可用于计数，故接种方法为稀释涂布平板法。稀释涂布平板法操作时需要在酒精灯火焰旁边操作，故需要用到①酒精灯（③培养皿）④涂布器。 （3）将未接种的培养基（或空白培养基）放在恒温培养箱中保温1-2天，检验是否有菌落产生，用于检测该培养基灭菌是否彻底。若有菌落产生，说明灭菌不彻底，需要重新配置培养基。选择培养基允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长，故同一浓度梯度下，尿素培养基上的菌落数小于全营养培养基上的菌落数，则说明尿素培养基具有选择作用。 （4）本实验使用的平板较多，为了避免混淆，最好使用前在培养皿上做好标记，由于培养基倒置培养，所以皿底上标记号组别、培养日期和平板上培养样品的稀释度等。为了防止培养时间不足导致菌落遗漏，在恒温培养箱中需培养1-2d，每隔24h统计一次菌落数目，选择菌落数目稳定时的记录作为结果。一般选择菌落数为30～300的平板进行计数。由于分离的菌是从牛的瘤胃中取样的，故培养箱的温度设定在30—37℃为宜。 （5）5号试管的稀释倍数为107，5mL瘤胃样品中含有目标活菌数=（68+75+67）÷3÷0.1×107×5=3.5×1010（个）。当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，故使用稀释涂布平板法统计获得的菌落数比实际的活菌数偏少。 57．（2025·广东深圳·一模）苦草是一种适应能力强的沉水植物，可以有效修复受多环芳烃（PAHs）污染的沉积物，回答下列问题： (1)苦草富集的内生菌能促进PAHs的分解，降低PAHs对苦草的毒害，而苦草可以向内生菌提供养料，推测内生菌与苦草之间的种间关系是 ，二者相互作用并不断演化的过程称为 。 (2)为研究苦草分解PAHs的机制，研究人员开展了如下实验。 ①选取多株长势优良的苦草，并重点检查苦草的 （填部位），避免采集过程的影响。 ②将处理后的苦草分成三组，对苦草根表面和沉积物进行下表中的处理，根据整个实验分析，推断表格中a和b的处理分别是 。 处理组 苦草根表面 沉积物 Ⅰ 不灭菌 灭菌 Ⅱ 灭菌 不灭菌 Ⅲ a b ③在三种处理条件下分别进行PAHs分解的模拟实验，15天后所测得结果如图，据图分析， （填“苦草根表面”或“沉积物”）的微生物在PAHs降解过程中发挥着更大的作用。根据实验结果，从种间关系的角度提出进一步研究的假说 。 (3)综合上述分析，从生态学的角度就增强PAHs污染修复效果提出合理方案 。 【答案】(1) 互利共生 协同进化 (2) 根部 灭菌 苦草根表面 苦草（根表面）能够改善沉积物中PAHs分解菌的生长环境，或促进沉积物中PAHs分解菌的生长 (3)适当增加苦草的种群数量；改善沉积物中PAHs分解菌的生存环境（合理即可） 【分析】种间关系主要有：原始合作、互利共生、种间竞争、捕食和寄生等。 【详解】（1）依据题干信息，苦草富集的内生菌能促进PAHs的分解，降低PAHs对苦草的毒害，而苦草可以向内生菌提供养料，可知，内生菌与苦草之间的种间关系是互利共生，二者相互作用并不断演化的过程，称为协同进化。 （2）①结合实验过程可知，应选取多株长势优良的苦草，并重点检查苦草的根部，避免采集过程的影响。 ②枯草根部的内生菌能促进PAHs的分解，将处理后的苦草分成三组，对苦草根表面和沉积物进行下表中的处理，结合Ⅰ组、Ⅱ组的实验处理，可知对Ⅲ组中的a和b的处理应为灭菌处理。 ③据图可知，Ⅰ组处理组的多环芳烃含量最低，说明改组的分解能力最强，Ⅰ组的苦草根表面没有进行灭菌，进而说明苦草根表面的微生物在PAHs降解过程中发挥着更大的作用。从种间关系的角度来看，可以进一步提出如下假说：苦草（根表面）能够改善沉积物中PAHs分解菌的生长环境，或者说，苦草（根表面）能够促进沉积物中PAHs分解菌的生长。 （3）结合小问2，可知，PAHs的降解与枯草、PAHs分解菌有关，所以从生态学角度来看，适当增加枯草的种群数量；改善沉积物中PAHs分解菌的生存环境，可以增强PAHs的污染修复效果。 58．（2025·安徽马鞍山·一模）脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON）具有一定的致癌性，DON广泛存在于谷物类原料及其制品中。为筛选具有高效降解DON能力的微生物，科研人员进行了相关实验，部分流程为：土壤稀释液→MSD培养基富集培养→筛选→分离→纯化→鉴定。回答下列问题。 (1)富集培养时，以DON为唯一碳源的MSD培养基从功能上属于 。科研人员通过平板划线法将培养液中的微生物接种在固体培养基上，实验操作进行连续划线的目的是 。 (2)通过筛选获得了由两种微生物组成的混合菌体。为了鉴定两种微生物，科研人员对两者16SrDNA序列进行PCR扩增。在PCR反应体系中加Mg2+作用是 。对PCR扩增结果进行凝胶电泳分析，出现多种条带，可能原因是 。 (3)改进实验后，结果显示该混合菌体由Y1和S1两种微生物组成。为明确DON被降解的原因，科研人员提出一种假设：混合菌体分泌了相关物质将DON降解。请设计实验验证以上假说，写出实验思路。 。 (4)实验表明混合菌体分泌了相关物质将DON降解。当科研人员将Y1和S1单独接种在DON培养基上时，发现两者均不能很好的降解DON，推测其原因是 。 【答案】(1) 选择培养基 将聚集的菌种逐步分散到培养基的表面 (2) 激活DNA聚合酶 引物特异性不强、引物较短、引物浓度较高、复性温度较低等（答出一点即可） (3)取混合微生物培养液添加到含有一定量的DON溶液中，一段时间后检测溶液中DON含量 (4)降解DON可能需要多步反应，Y1和S1分泌的物质可以将对方无法分解的中间产物进一步分解，分解产物可以作为下一反应的底物，两者分泌的物质起到协同作用（合理即可） 【分析】微生物的纯培养包括配制培养基、灭菌、接种、分离和培养等步骤。 【详解】（1）以DON为唯一碳源的MSD培养基从功能上属于选择培养基，筛选能利用DON的微生物；通过平板划线法将培养液中的微生物接种在固体培养基上，实验操作进行连续划线的目的是将聚集的菌种逐步分散到培养基的表面，最终分散出单个微生物。 （2）在PCR反应体系中加Mg2+作用是激活DNA聚合酶，使其更高效地发挥作用；对PCR扩增结果进行凝胶电泳分析，出现多种条带，可能原因是引物特异性不强、引物较短、引物浓度较高、复性温度较低等，使得扩增产物特异性不强，即多种片段。 （3）为了验证“混合菌体分泌了相关物质将DON降解”的假说，可取混合微生物培养液添加到含有一定量的DON溶液中，一段时间后检测溶液中DON含量，若DON含量下降可证明假说成立。 （4）实验表明混合菌体分泌了相关物质将DON降解，而将Y1和S1单独接种在DON培养基上时，发现两者均不能很好的降解DON，其原因可能是降解DON可能需要多步反应，Y1和S1分泌的物质可以将对方无法分解的中间产物进一步分解，分解产物可以作为下一反应的底物，两者分泌的物质起到协同作用。 植物细胞工程考点02 一、单选题 1．（2025·贵州铜仁·一模）离心技术在生物学研究中应用广泛。下列有关教材实验中离心目的叙述错误的是（　　） A．采取逐渐提高离心速率的方法可以分离出不同大小的细胞器 B．离心后通过区分试管中DNA条带位置可证明DNA复制方式 C．利用离心技术诱导不同植物的原生质体融合可获得杂种细胞 D．DNA粗提取实验利用高速离心可在上清液收集粗提取的DNA 【答案】D 【分析】根据离心方式的不同，可分为差速离心法和密度梯度离心法等。 （1）差速离心：又叫分级离心法； 是生化分离中最为常用的离心分离方法。它指采用低速和高速两种离心方式交替使用，用不同强度的离心力使具有不同密度的物质分级分离的方法。离心后把上清液与沉淀分开，然后再将上清液加高转速离心，分离出第二部分沉淀，如此往复加高转速，逐级分离出所需要的物质。 （2）密度梯度离心：也叫区带离心； 即离心是在具有连续密度梯度的介质中进行。将试样铺放在一个密度变化范围较小、梯度斜度变化比较平缓的密度梯度介质表面，在离心力场作用下试样中的颗粒按照各自的沉降速率移动到梯度介质中的不同位置，而形成一系列试样组分区带，使不同沉降速率的颗粒得以分离。 【详解】A、差速离心法是采取逐渐提高离心速率的方法，利用不同的离心速度所产生的不同离心力，将各种细胞器分离开来。因为不同大小的细胞器质量不同，在离心力作用下沉降的速度不同，A正确； B、在证明DNA复制方式的实验中，通过密度梯度离心，根据DNA条带在试管中的位置（轻带、中带、重带等）来判断DNA复制的方式是半保留复制、全保留复制还是弥散复制等，B正确； C、诱导不同植物的原生质体融合的方法有物理法（如离心、振动、电激等）和化学法（如聚乙二醇）等，利用离心技术可以促使不同植物的原生质体相互靠近并融合，从而获得杂种细胞，C正确； D、在DNA粗提取实验中，DNA在高浓度的NaCl溶液（如2mol/L）中溶解度较高，而在低浓度的NaCl溶液（如0.14mol/L）中溶解度较低会析出。高速离心后，DNA应该在沉淀物中，D错误。 故选D。 2．（2025·山西·一模）1958年，美国科学家斯图尔德取胡萝卜部分韧皮部，放入含有植物激素、无机盐和糖类等物质的培养基中培养，最终长成了一株新的植株，如图所示，①～⑥表示过程。下列叙述错误的是（　　）    A．①所取的韧皮部组织要进行严格灭菌，防止杂菌污染 B．②为脱分化，使已分化的细胞失去其特有的结构和功能 C．经②③形成不定形的薄壁组织团块，该过程一般不需要光 D．生长素与细胞分裂素的使用比例会影响细胞的发育方向 【答案】A 【分析】离体的植物组织或细胞，在培养一段时间后，会通过细胞分裂形成愈伤组织。愈伤组织的细胞排列疏松而无规则，是一种高度液泡化的呈无定形状态的薄壁细胞。由高度分化的植物组织或细胞产生愈伤组织的过程，称为植物细胞的脱分化。脱分化产生的愈伤组织继续进行培养，又可以重新分化成根或芽等器官，这个过程叫做再分化。再分化形成的试管苗，移栽到地里，可以发育成完整的植株体。 【详解】A、①所取的韧皮部组织要进行消毒，不能灭菌，否则外植体的细胞会死亡，A错误； B、②为脱分化，使已分化的细胞失去其特有的结构和功能，全能性增强，B正确； C、②③为脱分化形成愈伤组织的过程，愈伤组织的细胞排列疏松而无规则，是一种高度液泡化的呈无定形状态的薄壁细胞，脱分化过程一般不需要光，C正确； D、生长素和细胞分裂素的浓度、比例会影响细胞的发育方向，当生长素含量偏高时有利于生根，而生长素含量偏低时，可促进生芽，D正确。 故选A。 3．（2025·内蒙古阿拉善盟·一模）紫杉醇是一种重要的抗癌药物，主要来源于红豆杉属植物。为了提高紫杉醇的产量，研究人员利用植物细胞培养技术进行生产，部分流程如图。下列叙述正确的是（    ） A．激素的种类、浓度和比例等会影响过程① B．生产过程中需要对外植体作彻底的灭菌处理 C．紫杉醇在细胞内大量积累有利于提高其产量 D．该生产过程利用的原理是植物细胞的全能性 【答案】A 【分析】图中①表示脱分化，②表示细胞悬浮培养，③表示次生代谢产物的分离。 【详解】A、激素的种类、浓度和比例等会影响过程①脱分化，A正确； B、生产过程中需要对外植体作彻底的消毒处理，B错误； C、紫杉醇是次生代谢产物，不利于细胞的生长，不能在细胞内大量积累，C错误； D、该生产过程没有获得完整植株或各种细胞，没有利用植物细胞的全能性，D错误。 故选A。 4．（2025·山东青岛·一模）野生大豆的SAMS基因具有提高抗逆性的作用。水稻是一种盐敏感型作物，为提高水稻的抗盐碱胁迫能力，研究者将野生大豆的SAMS基因转入水稻细胞内，从而培养出转基因水稻株系，具体过程如图。下列说法错误的是（    ） A．图示过程中发生了两次转化 B．Ⅰ和Ⅲ都需使用固体培养基 C．Ⅰ中的筛选可使用PCR技术 D．获得的转基因水稻苗都具备抗盐碱能力 【答案】D 【分析】将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法。 【详解】A、转化是指目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程，图示过程需要两次转化，分别为，一是将目的基因（SAMS基因）转化质粒的T-DNA分子上，二是指被插入目的基因的T-DNA转化到受体细胞的染色体DNA分子上，A正确； B、Ⅰ和Ⅲ分别用于培养农杆菌和植物组织培养的再分化过程，均需要使用固体培养基，B正确； C、PCR技术可用于目的基因和基因表达载体的筛选，C正确； D、SAMS基因具有提高抗逆性的作用，获得的转基因水稻幼苗不一定都具有抗盐碱的能力，所以需要将转基因水稻置于盐碱的环境中，进行筛选与鉴定，D错误。 故选D。 5．（2025·河北石家庄·一模）芸薹（2n＝20）与黑芥（2n＝16）杂交，子代经人工诱导染色体数加倍形成芥菜（4n＝36），如图为培育过程中检测到的部分细胞相关数据，a~f代表不同种类的细胞。下列叙述正确的是（    ）    A．b一定为芸墓的花粉细胞 B．芥菜中一定能检测到无叶绿体的e C．f中一定存在同源染色体的互换 D．若用体细胞杂交技术培育芥菜，需选择a和c 【答案】B 【分析】图示分析，a为黑芥产生的生殖细胞，b是芸薹产生的生殖细胞，c是黑芥的体细胞，d是芸薹的体细胞，e是芥菜体细胞，f是芸薹细胞处于有丝后期。 【详解】A、b染色体组数为1，核DNA数为10，可能是芸墓的花粉细胞，也可能是芸墓的卵细胞，A错误； B、e染色体组数为4，核DNA数为36，为芥菜体细胞，芥菜叶肉细胞含有叶绿体，根、茎等细胞没有叶绿体，B正确； C、f染色体组数是4，核DNA数为40，应该是处于有丝分裂后期的芸薹细胞，同源染色体的互换发生在减数分裂过程中，C错误； D、a是黑芥产生的生殖细胞，c是黑芥的体细胞，d是芸薹的体细胞，若用体细胞杂交技术培育芥菜，需选择c和d，D错误。 故选B。 6．（2025·河北唐山·一模）无菌操作是生物实验中一项重要的基本操作。下列过程不需要严格无菌操作的是（    ） A．传统泡菜的制作 B．酵母菌的纯培养 C．动物细胞的传代培养 D．花药离体培养 【答案】A 【分析】在传统生物技术中，无需进行严格灭菌，根据目的菌种的代谢特征设置相应的培养条件。 【详解】在传统生物技术中，如传统泡菜的制作过程，不需要严格的无菌操作，通常是根据目的菌种的代谢特征设置相应的培养条件进行的，而实验室中的一些生物工程技术，如酵母菌的纯培养、动物细胞的传代培养、花药离体培养等需要严格的无菌操作，A正确，BCD错误。 故选A。 7．（2025·广东梅州·一模）在愈伤组织生芽过程中，CK（细胞分裂素）通过ARRs（A）基因和WUS（W）基因起作用。现将A基因功能缺失但正常表达W基因的突变体（突变体a）、缺乏A基因但能过量表达W基因（材料甲）和野生型三组愈伤组织在高CK培养基中培养，三组愈伤组织分化生芽的比例如图，由上述实验结果不能得出的结论是（    ）    A．A基因在愈伤组织分化生芽的过程中起作用 B．W基因的表达产物调控A基因的表达 C．A基因功能缺失但正常表达W基因不能促进生芽 D．过量表达W基因可使生芽时间提前 【答案】B 【分析】植物组织培养依据的原理为植物体细胞的全能性，即已经分化的细胞仍然具有发育成完整植株的潜能；生长素和细胞分裂素能促进细胞分裂分化，在培养的不同时期对两者的比例会有不同要求，在再分化过程中，生长素比例高，促进根的分化，细胞分裂素比例高，促进芽的分化。植物组织培养的条件：①细胞离体和适宜的外界条件（如适宜温度、适时的光照、pH和无菌环境等）；②一定的营养（无机、有机成分）和植物激素（生长素和细胞分裂素）。 【详解】A、据题图中的数据可知，突变体a的愈伤组织不能分化出芽，而野生型的愈伤组织可以，说明A基因在愈伤组织分化生芽的过程中发挥作用，A不符合题意； B、实验缺乏检测A基因表达量的数据，不能说明W基因的表达产物调控A基因的表达，B符合题意； C、根据图示，A基因功能缺失突变体a愈伤组织分化生芽率为0，说明A基因功能缺失但正常表达W基因不能促进生芽，C不符合题意； D、由材料甲曲线和野生型曲线比较可知，过量表达W基因可使生芽时间提前，D不符合题意。 故选B。 8．（2025·江西赣州·一模）下列关于菊花的组织培养及幼苗移栽的叙述，错误的是（    ） A．MS培养基的碳源一般用蔗糖而不用葡萄糖，以减少微生物污染 B．MS培养基、NAA溶液、6-BA溶液均可配制成母液，以减少称量的误差 C．接种好外植体的锥形瓶应先置于18~22℃的培养箱中黑暗培养一段时间 D．移栽前将试管苗置于装有消过毒的蛭石的无菌箱中恒温培养 【答案】D 【分析】MS培养基，主要用于植物细胞的组织培养。 【详解】A、培养微生物时一般用葡萄糖作为能源物质，蔗糖不是微生物利用的直接能源，所以使用蔗糖可以有效减少培养基的污染，A正确； B、在实际生产中，可以把需要生产的药物的浓缩物即母液先生产出，以便于储存和节约空间，再将高效高浓度的药剂用几倍或少量的水兑成浓度较高的药液，最后通过进一步的稀释得到我们最终所需要的产品，MS培养基、NAA溶液、6-BA溶液均可配制成母液，以减少称量的误差，B正确； C、脱分化需要避光，接种好外植体的锥形瓶应先置于18~22℃的培养箱中黑暗培养一段时间，以便更好地形成愈伤组织，C正确； D、移栽前先打开封口膜或瓶盖，让试管苗在培养箱中生长几日，用流动清水清洗根部培养基后移植到消过毒的蛭石或珍珠岩等环境炼苗，待其长壮再移栽入土，D错误。 故选D。 9．（2025·福建龙岩·一模）DHA俗称脑黄金，是构成人脑神经细胞膜的成分，若摄入不足会造成心脑血管方面的疾病。科研人员利用富含DHA但生长缓慢的绿色巴夫藻和不含DHA但生长迅速的四鞭藻，培育出DHA含量高又生长迅速的融合藻株，下列有关培育过程的叙述正确的是（　　） A．细胞融合之前必须用胰蛋白酶处理两种藻，获得有活力的原生质体 B．两种原生质体融合成功的标志是观察到细胞核融合 C．细胞融合实验完成后，融合体系中含有的细胞类型有3种 D．通过第一次筛选获得的融合藻株还需进行克隆化培养和DHA检测 【答案】D 【分析】植物体细胞杂交是指将不同来源的植物体细胞，在一定条件下融合成杂种细胞，并把杂种细胞培育成新植物体的技术。在进行体细胞杂交之前，必须先利用纤维素酶和果胶酶去除这层细胞壁，获得原生质体。 【详解】A、两种藻是植物，所以细胞融合之前应用纤维素酶和果胶酶处理两种藻，获得有活力的原生质体，A错误； B、两种原生质体融合成功的标志是杂种细胞再生出新的细胞壁，B错误； C、细胞融合实验完成后，融合体系中含有的细胞类型有5种，四倍体的绿色巴夫藻，四倍体四鞭藻，融合的绿色巴夫藻-四鞭藻的融合体，未融合的两种藻，C错误； D、通过第一次筛选获得的融合藻株还需进行克隆化培养和DHA检测，以获得DHA含量高又生长迅速的融合藻株，D正确。 故选D。 10．（2025·甘肃兰州·一模）植物细胞工程中，原生质体融合后形成愈伤组织；但部分愈伤组织在生根阶段褐化死亡。以下分析错误的是（    ） A．获得原生质体时需使用胰蛋白酶处理 B．褐化可能是细胞中酚类物质氧化导致的 C．脱分化阶段不需要光，再分化阶段需要光 D．杂种细胞再生细胞壁是融合成功的标志 【答案】A 【分析】植物体细胞杂交是指将不同种的植物体细胞，在一定条件下融合成杂种细胞，并把杂种细胞培育成新的植物体的技术。诱导原生质体融合的方法：物理法（离心、振动、电激等）和化学法（聚乙二醇等）。植物体细胞杂交的意义：克服远缘杂交不亲和的障碍，扩大亲本范围，培育作物新品种。 【详解】A、植物细胞壁的成分主要是纤维素和果胶，获得原生质体时需使用纤维素酶和果胶酶处理，A错误； B、植物细胞在受到损伤或压力时，细胞内的酚类物质会被氧化，形成醌类物质，导致组织褐化，故褐化可能是细胞中酚类物质氧化导致的，B正确； C、一般而言，在脱分化阶段不需要光，再分化阶段需要光，以利于形成叶绿素，C正确； D、杂种细胞融合成功的标志是再生细胞壁，D正确。 故选A。 11．（2025·四川内江·一模）花椰菜（2n=18）种植时容易遭受病菌侵害形成病斑，紫罗兰（2n=14）具有一定的抗病性。科研人员利用植物体细胞杂交技术培育具有抗病性状的花椰菜新品种如图1所示。通过蛋白质电泳技术分析了亲本及待测植株中某些特异性蛋白，结果如图2所示。下列有关叙述正确的是（    ） A．图1培育杂种植株所用的技术体现了细胞膜具有一定流动性原理和细胞核的全能性 B．②过程可用电融合法或灭活病毒诱导细胞融合，杂种细胞再生出细胞壁是融合成功的标志 C．若只考虑两两融合，图1培育出的植株体细胞中最多含有72条染色体 D．可将病菌悬浮液均匀喷施于图2中的3和5植株叶片上，一段时间后，测定病斑面积占叶片总面积的百分比，筛选出抗病性强的杂种植株 【答案】C 【分析】1、植物体细胞杂交技术：就是将不同种的植物体细胞原生质体在一定条件下融合成杂种细胞，并把杂种细胞培育成完整植物体的技术。植物体细胞杂交的终点是培育成杂种植株，而不是形成杂种细胞就结束；杂种植株的特征：具备两种植物的遗传特征，原因是杂种植株中含有两种植物的遗传物质；植物体细胞杂交克服了远缘杂交不亲和的障碍。 2、根据图谱分析，4号和5号个体含有紫罗兰和花椰菜两种类型的蛋白质，说明是杂种细胞，而1、2、3号个体只有紫罗兰中的蛋白质，说明不是杂种细胞。 【详解】A、图1培育杂种植株过程中包括原生质体融合，体现了细胞膜具有一定的流动性，杂种细胞发育形成完整的植株，体现植物细胞的全能性，A错误； B、植物细胞不能用灭活病毒诱导细胞融合，杂交细胞再生出新的细胞壁是植物细胞融合成功的标志之一，发育成完整植株是植物体细胞杂交技术成功的标志，B错误； C、若只考虑两两融合，两个花椰菜细胞融合则最多有36条染色体，在有丝分裂后期最多有72条染色体，C正确； D、根据图谱分析4号和5号个体含有紫罗兰和花椰菜两种类型的蛋白质，是杂种植株，可将病菌悬浮液均匀喷施于4、5号杂种植株叶片上，一段时间后，测定病斑面积占叶片总面积的百分比，筛选出抗病性强的杂种植株，D错误。 故选C。 12．（2025·江西萍乡·一模）“白雪公主”草莓被誉为“水果皇后”，具有广阔的市场前景和较高的经济价值。草莓是无性繁殖的植物，感染病毒后容易传染给后代。病毒在草莓体内逐年积累，会导致产量降低，品质变差。如图是育种工作者选育高品质“白雪公主”草莓的过程。下列叙述正确的是（    ） A．获得外植体时需要用纤维素酶和果胶酶处理草莓植株 B．选用茎尖做外植体是因为其含病毒极少甚至不含病毒 C．培育无病毒草莓苗时不用控制培养基中植物激素的比例 D．常需要用95%的酒精对愈伤组织消毒后再诱导其再分化 【答案】B 【分析】植物组织培养就是在无菌和人工控制的条件下，将离体的植物器官、组织、细胞，培养在人工配制的培养基上，给予适宜的培养条件，诱导其产生愈伤组织、丛芽，最终形成完整的植株。 【详解】A、获得外植体时不需要用纤维素酶和果胶酶处理草莓植株，A错误； B、茎尖的病毒极少甚至没有病毒，所以常用茎尖作为外植体，B正确； C、外植体经过脱分化形成愈伤组织或愈伤组织经过再分化长芽、生根过程中对细胞分裂素和生长素的需求不同，因此要控制培养基中植物激素的比例，有助于获得目标植株，C错误； D、对外植体或愈伤组织的消毒通常采用体积分数为70%的酒精和5%的次氯酸钠溶液，消毒后需用无菌水进行冲洗，D错误。 故选B。 13．（2025·吉林延边·一模）关于生物工程技术过程中出现细胞融合的操作，下列叙述正确的是（    ） A．植物体细胞杂交技术，可直接用聚乙二醇处理两种植物细胞进行膜融合 B．单克隆抗体制备技术，两两融合的细胞都能在选择培养基上存活 C．动物体细胞核移植技术，融合细胞可直接移植到受体母牛子宫内获得克隆牛 D．体外受精技术，常以在显微镜下观察到雌、雄原核或两个极体作为受精的标志 【答案】D 【分析】植物体细胞杂交时，首先用酶解法去壁，一般使用纤维素酶和果胶酶处理；然后诱导原生质体融合，采用的方法一般包括物理法（离心、振荡、电融合法）、化学法（用聚乙二醇处理）；培养融合的原生质体再生出新的细胞壁，形成杂种细胞。然后杂种细胞经过植物组织培养技术可以培养形成杂种植株。 【详解】A、若为植物体细胞杂交技术由于植物细胞的最外层是细胞壁，因此用聚乙二醇处理两种植物细胞后不会直接出现膜融合，应首先用酶解法去壁，A错误； B、单克隆抗体制备技术中，同种融合的细胞会死亡，只有杂交瘤细胞才能存活，B错误； C、若为动物体细胞核移植技术，融合得到的细胞需培养到桑椹胚（桑葚胚）或囊胚，然后移植到受体母牛子宫内获得克隆牛，C错误； D、若为体外受精技术，细胞融合时可在显微镜下观察到雌、雄原核或透明带和卵细胞膜之间的两个极体，D正确。 故选D。 14．（2025·河南驻马店·一模）青蒿素是传统的中药材，是治疗疟疾的重要药物。研究人员利用青蒿细胞悬浮培养技术进行工厂化生产青蒿素，实验流程和培养装置如下图所示。下列有关叙述错误的是（    ）    A．实验流程中可用果胶酶处理愈伤组织，解离细胞间的连接，有利于制备悬浮细胞 B．此装置可不受季节、耕地限制，生产原理是细胞增殖 C．装置中可增加排气管，充气管和排气管都置于溶液中 D．青蒿素是一种小分子有机物，属于次生代谢物 【答案】C 【分析】1、植物组织培养就是在无菌和人工控制的条件下，将离体的植物器官、组织、细胞，培养在人工配制的培养基上，给予适宜的培养条件，诱导其产生愈伤组织、丛芽，最终形成完整的植株。 2、植物组织培养的条件：①细胞离体和适宜的外界条件（如适宜温度、适时的光照、pH和无菌环境等）；②一定的营养（无机、有机成分）和植物激素（生长素和细胞分裂素）。 3、植物细胞培养是指在离体条件下对单个植物细胞或细胞团进行培养使其增殖的技术。 【详解】A、植物细胞壁的主要成分是纤维素和果胶，欲利用愈伤组织制备悬浮细胞，实验流程中可用果胶酶处理愈伤组织，解离细胞间的连接，A正确； B、植物细胞培养使用人工配制的培养液，可以人为控制其生长环境，故植物细胞培养几乎不受季节、耕地限制，生产原理是细胞增殖，B正确； C、装置中可增加排气管，排气管不置于溶液中；装置中的充气管应置于液面下方，以利于培养液中的溶氧量的增加，C错误； D、次生代谢不是生物生长 所必需的，一般在特定的组织或 器官中，并在一定的环境和时间 条件下才进行；青蒿素是一种小分子有机物，属于次生代谢物，D正确。 故选C。 15．（2025·江西·一模）由于花椰菜杂种优势在提高花椰菜产量方面发挥着巨大的作用，而利用细胞质雄性不育系生产杂交种子，可以简化制种程序。利用原生质体非对称融合技术比较容易实现胞质雄性不育基因的转移，某研究利用该技术成功获得了含有胞质雄性不育基因的花椰菜植株，制作流程如下，下列说法错误的是（    ）    注：UV处理可以随机破坏染色体结构，使其发生断裂、丢失等，使细胞不再分裂 A．原生质体非对称融合技术使得杂种植株性状更接近于供体植株 B．②过程的原理是细胞膜具有一定的流动性，常用PEG融合法 C．培养一段时间后可通过观察叶绿体初步判断是否为异源原生质体 D．为鉴定再生植株成功获得细胞质雄性不育基因，可利用PCR进行鉴定 【答案】A 【分析】植物组织培养的条件：（1）细胞离体和适宜的外界条件（如适宜温度、适时的光照、pH和无菌环境等）；（2）一定的营养（无机、有机成分）和植物激素（生长素和细胞分裂素）。 【详解】A、供体细胞经UV处理失去了部分遗传物质，而受体细胞遗传物质完整，因此杂种植株性状更接近于受体植株，A错误； B、②过程为原生质体融合，其原理是细胞膜具有一定的流动性，常用方法有PEG融合法、电融合法等，B正确； C、供体细胞有叶绿体，受体细胞无叶绿体，供体细胞经UV处理，一段时间后失去活性，融合细胞具有叶绿体，且能保持活性，故可通过观察叶绿体初步判断是否为异源原生质体，C正确； D、提取再生植株基因组，针对细胞质雄性不育基因设计引物进行PCR，结合电泳技术观察有无目的条带判断是否获得目的基因，D正确。 故选A。 16．（2025·江西·一模）下列关于细胞工程的叙述，正确的是（    ） A．小麦胚经诱导形成幼苗体现了植物细胞的全能性 B．菊花组织培养中三次更换的培养基成分和目的相同 C．动物体细胞核移植的受体细胞必须是M Ⅰ 期的卵母细胞 D．胚胎干细胞分化产生的不同类型细胞中的mRNA有差异 【答案】D 【分析】1、细胞的全能性是指高度分化的细胞发育成完整个体的潜能，故全能性是指由细胞到个体的过程；植物种子是植物的幼体，故由种子发育成植株的过程不体现全能性。 2、胚胎干细胞是早期胚胎（原肠胚期之前）或原始性腺中分离出来的一类细胞，它具有体外培养无限增殖、自我更新和多向分化的特性。无论在体外还是体内环境，ES细胞都能被诱导分化为机体几乎所有的细胞类型。 【详解】A、细胞的全能性是指高度分化的细胞发育成完整个体的潜能；小麦胚本身就是一个完整的个体，其发育成植株的过程不能体现植物细胞的全能性，A错误； B、菊花组织培养中三次更换的培养基成分和目的均有所不同，B错误； C、动物体细胞核移植的受体细胞必须是减数分裂第二次分离中期（M Ⅱ期）的卵母细胞，C错误； D、细胞分化的实质是基因的选择性表达，胚胎干细胞形成的不同类型细胞中的mRNA有所不同，D正确。 故选D。 17．（2025·福建厦门·一模）板蓝根（2n=14）具抗菌等作用。某课题组以甘蓝型油菜（2n=38）与板蓝根作为原材料，通过体细胞杂交培育了抗病菌的板蓝根-油菜杂交种。部分杂交种细胞染色体组成以及分裂过程中细胞两极染色体数目占比如表所示，下列叙述正确的是（　　） 杂交种 体细胞染色体数 减数分裂Ⅰ后期细胞两极染色体数目比的细胞占比（%） 26:26 28:24 23:29 27:25 其它 AS1 52 63.4 10.6 7.2 14.8 0.0 AS6 52-62 32.3 9.6 8.2 11.0 38.8 AS7 52-58 40.3 9.6 7.2 12.5 30.5 A．可以用PEG或灭活的病毒诱导板蓝根细胞和油菜细胞融合 B．板蓝根—油菜杂种AS1属于二倍体，体细胞中有两个染色体组 C．若要将获得的AS1、AS6和AS7等杂交种作为有性杂交的亲本，最好选择AS1 D．ASI有10.6%的细胞两极染色体数目比为28：24，可能是有部分染色单体未分离 【答案】C 【分析】1、植物体细胞杂交是指将不同来源的植物体细胞，在一定条件下融合成杂种细胞，并把杂种细胞培育成新植物体的技术； 2、人工诱导原生质体融合的方法基本可以分为两类：物理法和化学法，物理法包括电融合法、离心法；化学法包括聚乙二醇融合法、高Ca2+——高PH融合法等； 3、植物体细胞杂交的一般步骤是：①先利用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁获得原生质体；②人工诱导原生质体融合；③融合后的杂种细胞再经过诱导脱分化形成愈伤组织；④通过植物组织培养发育成完整的杂种植株。 【详解】A、植物体细胞杂交中，诱导植物细胞融合的方法有物理法（离心、振动、电激等）和化学法（PEG 融合法等），而灭活的病毒只能用于诱导动物细胞融合，不能用于诱导植物细胞融合，所以不能用灭活的病毒诱导板蓝根细胞和油菜细胞融合，A错误； B、板蓝根是二倍体（2n = 14），甘蓝型油菜是二倍体（2n = 38），通过体细胞杂交培育的板蓝根 - 油菜杂种 AS1 体细胞染色体数为 52 条，是由两个不同物种的体细胞融合形成的，属于异源四倍体，体细胞中有四个染色体组，而不是两个染色体组，B错误； C、从表格数据来看，AS1 体细胞染色体数为 52 条，在减数分裂Ⅰ后期细胞两极染色体数目比相对较为集中，且“其它”占比为 0，说明其染色体组成相对稳定；而 AS6 体细胞染色体数为 52 - 62 条，AS7 体细胞染色体数为 52 - 58 条，它们的染色体数不稳定，且“其它”占比较大，说明减数分裂时染色体行为异常的细胞较多。所以若要将获得的 AS1、AS6 和 AS7 等杂交种作为有性杂交的亲本，最好选择 AS1，C正确； D、减数分裂Ⅰ后期发生同源染色体分离，着丝点并不分裂，不存在染色单体分离的情况。AS1有10.6%的细胞两极染色体数目比为28：24，可能是减数分裂Ⅰ后期同源染色体分离异常导致的，而不是部分染色单体未分离，D错误。 故选C。 18．（2025·广东汕头·一模）某团队通过植物组织培养技术开展东湖菊花种苗快速繁殖及脱毒研究，打造“汕头金菊”产业名片。若取菊花茎段进行组织培养，茎段未能诱导出愈伤组织，其原因不包括（　　） A．茎段接种时倒插 B．激素配比不合理 C．外植体消毒过度 D．培养时遮光处理 【答案】D 【分析】植物组织培养技术是指将离体的植物器官、组织或细胞等，人工配制的培养基上，给予适当的培养条件，诱导其生成完整植株的技术。 【详解】A、将菊花茎段切断形态学下端插入诱导愈伤组织的培养基中，不应倒插，不符合题意，A错误； B、培养基中植物激素的浓度、比例等都会影响植物细胞的发育方向，如生长素和细胞分裂素比例高时，可以促进生根，比例适中时有利于产生愈伤组织，不符合题意，B错误； C、外植体需要用70%的酒精消毒30s，立即用无菌水冲洗2-3次；再用5%的次氯酸钠消毒30min后，立即用无菌水冲洗2-3次，若消毒过度会影响植物组织的活性，因而可能导致无愈伤组织产生，不符合题意，C错误； D、诱导愈伤组织的形成过程通常需要避光处理，这不会导致没有愈伤组织产生，符合题意，D正确。 故选D。 19．（2025·山西·一模）生菜是我们餐桌上的常见蔬菜，而生菜原生质体的研究，可用于基因功能探索、信号转导研究等多个领域。2024年12月，我国某大学研究团队通过优化主要影响因素，成功建立了从生菜茎尖组织等获得高产高活力原生质体的方法，流程如下。下列叙述错误的是（    ） A．茎尖组织的细胞壁较薄，纤维素含量较低，利于去壁 B．用酶解法去壁时，主要用到的酶通常是纤维素酶和果胶酶 C．只要对原生质体混合液不断过滤即可获得纯净的原生质体 D．获得的原生质体需置于等渗溶液中，是为保证其活力基本稳定 【答案】C 【分析】植物细胞壁的主要成分是纤维素和果胶，可以用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁，从而得到原生质体。 【详解】A、茎尖组织细胞分化程度低，细胞壁较薄，纤维素含量较低，在获取原生质体时更利于去除细胞壁，A正确； B、植物细胞壁的主要成分是纤维素和果胶，所以用酶解法去壁时，主要用到的酶通常是纤维素酶和果胶酶，B正确； C、过滤虽然可以去除细胞碎片，但并不能保证获得纯净的原生质体，还需要进一步的纯化步骤，如离心等，C错误； D、原生质体没有细胞壁的保护，将其置于等渗溶液中可以维持原生质体的渗透压平衡，防止细胞破裂或皱缩，从而保持其活力，D正确。 故选C。 20．（2025·吉林延边·一模）红豆杉是濒危植物，其树皮产生的紫杉醇对癌症有一定的疗效。下图是植物组织培养和细胞培养的流程图，图中②为愈伤组织，通过B过程可最终产生新的植株。通过C过程可产生大量细胞。下列相关叙述中正确的是（    ） A．A和B过程所用的培养基的物理性质及成分均相同 B．②是不定形的薄壁组织团块，既能分裂又能分化 C．培养过程中所用的培养基，需添加动物血清等成分 D．获得④⑤的过程，均利用了植物细胞具有全能性的原理 【答案】B 【分析】植物组织培养过程是：离体的植物器官、组织或细胞脱分化形成愈伤组织，然后再分化生成根、芽，最终形成植物体。植物组织培养依据的原理是植物细胞的全能性。 【详解】A、②为愈伤组织，因此A过程是脱分化，B过程为再分化过程，A、B过程所用的培养基的物理性质相同，均为固体培养基，但成分上有差异，A错误； B、②为愈伤组织，经脱分化形成，可形成完整的植株，在该过程中既有细胞分裂，也有细胞分化，B正确； C、该过程是植物细胞工程，培养基无需添加动物血清，C错误； D、获得④完整植株的过程依据的原理是细胞的全能性。通过C过程可产生大量细胞即⑤，故获得⑤过程利用的原理是细胞增殖，D错误。 故选B。 21．（2025·河北沧州·一模）大丽花为菊科大丽花属，是多年生草本植物。大丽花为世界名花之一，除具观赏价值外，还具有药用价值。大丽花在栽培过程中易受病毒感染，造成品质退化。研究小组尝试通过植物组织培养技术获得脱毒苗，操作流程如图所示。下列相关叙述正确的是（　　）    A．应选取大丽花植株无病毒的茎尖作为外植体，并用酒精溶液浸泡30min B．过程①为再分化，目的是使细胞失去原特有的结构和功能，该过程无需光照 C．过程②的实质是基因选择性表达，该过程可能会发生基因突变或基因重组 D．2号和3号培养基中细胞分裂素与生长素用量的比值分别为等于1和大于1 【答案】D 【分析】图示分析，①为外植体脱分化形成愈伤组织过程，②为愈伤组织经过再分化形成丛壮苗的过程，③为丛壮苗在生根培养基中形成试管苗过程。 【详解】A、茎尖病毒很少或几乎不含病毒，作为外植体培养脱毒苗，外植体需要在酒精中浸泡30s，A错误； B、过程①为外植体经过脱分化过程形成愈伤组织，目的是使细胞失去原特有的结构和功能，该过程不需要光照，B错误； C、过程②为再分化过程，实质是基因选择性表达，该过程可能会发生基因突变或染色体变异，但不会发生基因重组，C错误； D、脱分化过程所用的培养基细胞分裂素与生长素用量的比值等于1，发芽培养基中细胞分裂素与生长素用量的比值大于1，D正确。 故选D。 22．（2025·陕西西安·一模）如图表示植株A(杂合子Aa)和植株B培育植株①②③④⑤的过程，下列说法正确的是（　　） A．培育植株①的过程为单倍体育种，获得的植株为纯合子 B．选择植物的愈伤组织进行诱变处理获得优质的突变体③，未体现细胞的全能性 C．通常在等渗的培养液中，采用化学法、物理法或灭活的病毒诱导原生质体融合 D．正常情况下，植株①②④⑤与植株A基因型相同的概率分别是0、0、1、0 【答案】D 【分析】题图分析：对植株A的花粉经过离体培养得到的植株①单倍体植株，而后对该单倍体幼苗经秋水仙素处理得到的植物②是纯合二倍体，该过程属于单倍体育种；植株③的获得采用了植物组织培养技术，该植株的获得利用了诱变育种方法；植株④采用了植物组织培养技术，属于细胞工程育种；植株⑤的培育采用了植物体细胞杂交技术。 【详解】A、单倍体育种包括花药离体培养和秋水仙素处理两个环节，对植株A（杂合子Aa）的花粉（A或a）经过离体培养得到的植株①为单倍体植株（A或a），秋水仙素处理单倍体植株①，获得的植株②（AA或aa）为纯合子，A错误； B、选择植物的愈伤组织进行诱变处理获得优质的突变体，通过组织培养技术获得植株③，体现了细胞的全能性，B错误； C、灭活的病毒是诱导动物细胞融合的方法，C错误； D、植株①是通过花药离体培养获得的单倍体植株（A或a），秋水仙素处理得到植株②（AA或aa）；植株④是通过植物组织培养获得的，其基因型为Aa；植株⑤是通过植物体细胞杂交的方法获得的，其遗传物质是由植株A和植株B组成的，与植株A的基因型不同，因此植株①②④⑤与植株A基因型相同的概率分别是0、0、1、0，D正确。 故选D。 23．（2025·山东枣庄·一模）下列关于细胞工程的说法正确的是（　　） A．体外培养的动物细胞形态相比体内正常细胞可能会发生改变 B．作物脱毒苗培养时先诱导愈伤组织生根，再诱导生芽 C．iPS细胞都是通过将外源基因导入体细胞获得的 D．离心法收集细胞只能用于传代培养细胞的收集 【答案】A 【分析】1、动物细胞培养需要满足以下条件①无菌、无毒的环境：培养液应进行无菌处理。通常还要在培养液中添加一定量的抗生素，以防培养过程中的污染。此外，应定期更换培养液，防止代谢产物积累对细胞自身造成危害。②营养：合成培养基成分：糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等。通常需加入血清、血浆等天然成分。③温度：适宜温度：哺乳动物多是36.5℃+0.5℃；pH：7.2～7.4。④气体环境：95%空气+5%CO2。 2、物组织培养技术过程：离体的植物组织，器官或细胞（外植体）→愈伤组织→胚状体→植株（新植体）。原理：植物细胞的全能性。条件：（1）细胞离体和适宜的外界条件（如适宜温度、适时的光照、pH和无菌环境等）；（2）一定的营养（无机、有机成分）和植物激素（生长素和细胞分裂素）。 【详解】A、体外培养的动物细胞由于缺少体内环境稳定的生理和生化条件，可能形态、功能发生改变，如变扁平或失去特异性等，比体内正常细胞可能会发生改变，A正确； B、作物脱毒苗培养过程中，通常是先诱导愈伤组织形成芽，然后再诱导生根。这是因为在植物组织培养过程中，愈伤组织的再分化通常是先进行芽的诱导，再进行生根的诱导，两者的顺序不能颠倒。因此，题干中的说法是错误的，B错误； C、iPS细胞（诱导多能干细胞）并不一定都需要通过外源基因导入体细胞获得。除了通过引入特定外源基因来诱导体细胞去分化外，还有一些非基因导入的方法，如使用小分子化合物或通过蛋白质转染等手段，同样可以将体细胞诱导为多能干细胞，C错误； D、在传代培养时可用胰蛋白酶使细胞从瓶壁上脱离，悬浮培养的细胞也可直接用离心法收集，离心法收集细胞不是只能用于传代培养细胞的收集，也可用于收集药物处理过的细胞等，D错误； 故选A。 24．（2025·云南曲靖·一模）下列关于植物组织培养技术和动物细胞核移植技术的说法，错误的是（    ） A．两项技术均说明细胞具有全能性 B．两项技术均可用于濒危物种的保护 C．植物细胞全能性表达需要离体、一定的营养物质、植物激素等条件 D．去核的受体卵母细胞中可能含有促进供体细胞核表达全能性的物质和条件 【答案】A 【分析】细胞经分裂和分化后，仍然具有产生完整生物体或分化成其他各种细胞的潜能，即细胞具有全能性。但是，在生物的生长发育过程中，并不是所有的细胞都表现出全能性，比如，芽原基的细胞只能发育为芽，叶原基的细胞只能发育为叶。这是因为在特定的时间和空间条件下，细胞中的基因会选择性地表达。 【详解】A、动物细胞核移植技术说明动物细胞核有全能性，A错误； B、植物组织培养技术和动物细胞核移植技术都能获得个体，两项技术均可用于濒危物种的保护，B正确； C、植物细胞离体后才能表达出全能性，离体后的细胞无法从个体的其它细胞获得营养物质和激素，因此，在细胞培养过程还要提供营养物质和植物激素等条件，C正确； D、动物体细胞无法体现全能性，利用核移植技术把体细胞的核移植到去核的受体卵母细胞，形成重组细胞，重组细胞可发育成动物个体，说明去核的受体卵母细胞中可能含有促进供体细胞核表达全能性的物质和条件，D正确。 故选A。 25．（2025·云南昆明·一模）紫草素是一种紫红色萘醌类天然色素（），具有抗炎、免疫抑制等作用，主要在紫草根部产生。下图为紫草素的提取流程图。有关叙述正确的是（    ） A．将灭菌处理后紫草外植体的1/3-1/2正向插入无菌的培养基中 B．过程①的培养基中需添加生长素、细胞分裂素、蔗糖、血清等 C．利用上述方法获取紫草素可以保护植物资源 D．上述获取紫草素的过程体现了植物细胞的全能性 【答案】C 【分析】植物组织培养的原理是植物细胞具有全能性，其过程为：离体的植物组织、器官或细胞经过脱分化过程形成愈伤组织（高度液泡化，无定形状态薄壁细胞组成的排列疏松、无规则的组织），愈伤组织经过再分化过程形成胚状体，进一步发育成为植株。 【详解】A、外植体只需消毒，不能灭菌，灭菌之后外植体细胞就会死亡，A错误； B、①过程中，需要在培养基中加入一定比例的生长素和细胞分裂素等植物激素才能获得愈伤组织，动物细胞培养的培养基才需要添加动物血清，B错误； ①过程为脱分化，即失去其特有的结构和功能，转变成未分化的细胞，形成具有全能性的愈伤组织，B正确； C、利用植物组织培养的原理方法获取紫草素不会破坏植物，可以保护植物资源，C正确； D、依据题图可以发现，该流程主要通过促进细胞增殖来提高紫草素的产量，也就是依据细胞增殖的原理，而不是细胞的全能性，D错误。 故选C。 26．（2025·广东珠海·一模）在现代生物学工程中常使用“杂交”技术，下列叙述错误的是（    ） A．植物体细胞杂交培育新物种原理是基因重组 B．动物体细胞杂交技术可用于生产单克隆抗体 C．DNA分子杂交可检测目的基因是否发生突变 D．抗原-抗体杂交可检测是否感染病原微生物 【答案】A 【分析】现代生物技术的应用中，有许多技术是需要筛选和检测的，如制备单克隆抗体时，需要用选择培养基筛选出杂交瘤细胞，还需要进行抗体阳性检测得到能产生单克隆抗体的杂交瘤细胞；植物体细胞杂交过程中，需要筛选出杂种细胞进行组织培养；转基因技术中，需要筛选重组子和检测目的基因是否导入和表达。 【详解】A、植物体细胞杂交培育新物种的原理是细胞膜的流动性和植物细胞的全能性，并非基因重组。基因重组一般发生在有性生殖过程中，而植物体细胞杂交是将不同种植物的体细胞融合，再经植物组织培养形成新个体，不属于有性生殖，A错误； B、动物体细胞杂交技术主要用于制备单克隆抗体，它是将骨髓瘤细胞与已免疫的B淋巴细胞融合，筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞，进而生产单克隆抗体，B正确； C、DNA分子杂交是用放射性同位素（或荧光分子）标记的含有目的基因DNA片段作为探针，检测目的基因是否导入受体细胞，以及是否转录出相应的mRNA等。若目的基因发生突变，其碱基序列改变，与探针杂交时就可能出现异常，从而可检测目的基因是否发生突变，C正确； D、抗原-抗体杂交利用抗原与抗体特异性结合的原理，若检测出特定的抗原-抗体结合反应，说明体内存在相应的病原微生物抗原，即可检测是否感染病原微生物，D正确。 故选A。 27．（2025·河南安阳·一模）阿尔茨海默病（AD）是一种复杂的神经退行性疾病，β-淀粉样蛋白在大脑中的积累和沉积是AD发病和发展的主要因素。科研人员将蛋白酶与单克隆抗体结合制备了催化性抗体，同时它还具有免疫活性，微量使用对AD就有一定的治疗效果。下列相关叙述正确的是（　　） A．杂交瘤细胞制备时可使用灭活病毒、高Ca2+—高pH诱导细胞融合 B．杂交瘤细胞产生的单克隆抗体只能从生物体的腹腔中大量提取 C．催化性抗体效果显著的原因为单克隆抗体特异性强、酶有高效性 D．杂交瘤细胞传代培养过程中会发生细胞贴壁现象及接触抑制现象 【答案】C 【分析】单克隆抗体制备流程：先给小鼠注射特定抗原使之发生免疫反应，之后从小鼠脾脏中获取已经免疫的B淋巴细胞；诱导B细胞和骨髓瘤细胞融合，利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞；进行抗体检测，筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞；进行克隆化培养，即用培养基培养和注入小鼠腹腔中培养；最后从培养液或小鼠腹水中获取单克隆抗体。 【详解】A、杂交瘤细胞制备时可使用灭活病毒诱导细胞融合，高Ca2+—高pH属于诱导植物原生质体融合的方法，A错误； B、杂交瘤细胞产生的单克隆抗体也可在体外培养，从培养液中提取，B错误； C、单克隆抗体能与抗原特异性结合，特异性强，而酶的催化作用具有高效性，故催化性抗体效果显著的原因为单克隆抗体特异性强、酶有高效性，C正确； D、杂交瘤细胞在培养过程中悬浮生长，无细胞贴壁现象及接触抑制现象，D错误。 故选C。 28．（2025·河南安阳·一模）在植物的改良过程中，通过原生质体融合进行植物体细胞杂交已成为产生新基因型和操纵倍性的重要工具。科研人员将基因型为Aa的二倍体柑橘植株进行自身原生质体融合，所得四倍体植株再与原二倍体柑橘杂交，最后从杂交植株上得到了无子柑橘。嫁接时接上去的芽或枝叫作接穗，承受接穗的植株叫作砧木。下列相关叙述正确的是（　　） A．原生质体融合后得到的四倍体植株茎秆粗壮，可作为嫁接过程中的接穗 B．杂交植株上得到无子柑橘的原因是抑制了减数分裂过程中纺锤体的形成 C．利用细胞膜的信息交流功能，有活力的原生质体在台盼蓝溶液中不被染色 D．理论上，四倍体植株与原二倍体柑橘杂交的后代中基因型为aaa的个体占1/12 【答案】D 【分析】多倍体育种原理：利用染色体变异，方法：最常用的是利用秋水仙素处理萌发的种子或幼苗。秋水仙素能抑制有丝分裂时纺锤丝的形成，染色体不能移动，使得已经加倍的染色体无法平均分配，细胞也无法分裂。当秋水仙素的作用解除后，细胞又恢复正常的生长，然后再复制分裂，就能得到染色体数目加倍的细胞。 【详解】A、分析题意可知，嫁接时接上去的芽或枝叫作接穗，承受接穗的植株叫作砧木，原生质体融合后得到的四倍体植株茎秆粗壮，可作为嫁接过程中的砧木，A错误； B、杂交植株上得到无子柑橘的原因是含有三个染色体组，联会紊乱导致无法产生种子，B错误； C、利用细胞膜的控制物质进出细胞功能，有活力的原生质体在台盼蓝溶液中不被染色，C错误； D、理论上，四倍体植株（AAaa，产生的配子及比例是AA∶Aa∶aa=1∶4∶1）与原二倍体柑橘（Aa，配子及比例是A∶a=1∶1）杂交的后代中基因型为aaa的个体占1/6×1/2=1/12，D正确。 故选D。 29．（2025·辽宁大连·一模）我国科研人员用重组DNA技术和植物组织培养技术培育出转入人血清白蛋白基因的水稻植株，并成功从其种子的胚乳中提取出高纯度的人血清白蛋白。下列叙述错误的是（    ） A．需将人血清白蛋白基因导入受精卵 B．脱分化过程一般不需要光照 C．转为再分化培养时需要更换培养基 D．该过程可以体现植物细胞的全能性 【答案】A 【分析】1、植物组织培养过程是：离体的植物器官、组织或细胞脱分化形成愈伤组织，然后再分化生成根、芽，最终形成植物体。植物组织培养依据的原理是植物细胞的全能性。愈伤组织的细胞排列疏松而无规则，是一种高度液泡化的呈无定形状态的薄壁细胞。 2、植物细胞工程技术的应用：植物繁殖的新途径（包括微型繁殖，作物脱毒、人工种子等）、作物新品种的培育（单倍体育种、突变体的利用）、细胞产物的工厂化生产。 【详解】A、题中是利用植物组织培养技术培育水稻植株，通常是将目的基因导入植物的体细胞（如叶肉细胞等），再通过植物组织培养技术培育成完整植株，而不是导入受精卵，植物细胞具有全能性，体细胞能培育成完整植株，A错误； B、脱分化一般不需要光照，光照可能会影响细胞脱分化形成愈伤组织，B正确； C、再分化过程与脱分化过程所需的营养物质和植物激素等条件不同，因此转为再分化培养时需要更换培养基，以满足再分化过程的需求，C正确； D、该过程中从转入人血清白蛋白基因的水稻体细胞培育成完整的水稻植株，体现了植物细胞的全能性，D正确。 故选A。 30．（2025·辽宁大连·一模）黑曲霉多不耐高温，发酵获得柠檬酸的过程需大量冷却水控制温度，生产成本高。现利用原生质体融合技术获得耐高温高产黑曲霉，过程如图所示。下列叙述正确的是（    ）    A．处理①培养基中黄色圈大的菌落不一定为高产菌株 B．处理②、③用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁 C．处理④升高温度即可筛选出耐高温高产黑曲霉 D．发酵结束后通过适当的过滤、沉淀等方法获得柠檬酸 【答案】A 【分析】发酵工程是指利用微生物的特定功能，通过现代工程技术，规模化生产对人类有用的产品。它涉及菌种的选育和培养、产物的分离和提纯等方面。具体包括：菌种的选育，扩大培养，培养基的配制、灭菌，接种，发酵，产品的分离、提纯等环节。 【详解】A、诱变的原理是基因突变，而基因突变具有不定向性，故处理①培养基中黄色圈大的菌落不一定为高产菌株，A正确； B、黑曲霉的细胞壁成分不是纤维素和果胶，故处理②、③不可以用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁，B错误； C、处理④升高温度后海需要进一步验证才能筛选出耐高温高产黑曲霉，C错误； D、发酵工程生产的产品有两类：一类是代谢产物，另一类是菌体本身。如果产品是菌体，可采用过滤，沉淀等方法将菌体从培养液中分离出来；如果产品是代谢产物，可用萃取、蒸馏、离子交换等方法进行提取，可见题图发酵结束后不能通过适当的过滤、沉淀等方法获得柠檬酸，D错误。 故选A。 31．（2025·湖北十堰·一模）研究人员用花椰菜胚轴和紫罗兰叶片细胞进行体细胞杂交，得到再生植株(编号为1~5)。对这5株植株进行亲本重要抗性蛋白检测，培育过程和检测结果如图所示。下列有关叙述正确的是（　　） A．过程①可用聚乙二醇处理胚轴细胞以获得原生质体 B．过程②融合后，可用高倍显微镜观察以筛选杂种细胞 C．过程③要将愈伤组织移植到消过毒的蛭石上以获得再生植株 D．植株5为杂种植株，植株2中紫罗兰的染色体全部丢失 【答案】B 【分析】植物体细胞杂交技术：就是将不同种的植物体细胞原生质体在一定条件下融合成杂种细胞，并把杂种细胞培育成完整植物体的技术。植物体细胞杂交的终点是培育成杂种植株，而不是形成杂种细胞就结束；杂种植株的特征：具备两种植物的遗传特征，原因是杂种植株中含有两种植物的遗传物质；植物体细胞杂交克服了远缘杂交不亲和的障碍。 【详解】A、植物细胞壁的主要成分是纤维素和果胶，过程①可用纤维素酶和果胶酶处理植物细胞，以除去细胞壁获得原生质体，A错误； B、用于融合的两个细胞，一个是紫罗兰的叶肉细胞，一个是花椰菜的胚轴细胞，其中供体细胞特有的结构是叶绿体，可通过观察叶绿体的有无作为初步筛选杂种细胞的标志，B正确； C、过程③要将愈伤组织移植到特定培养基上再分化形成幼苗，然后在移植到消过毒的蛭石上以炼苗，C错误； D、Ⅰ是花椰菜，Ⅱ是紫罗兰，4号和5号植株中检测到了花椰菜和紫罗兰的特异性蛋白，因此为杂种植株，植株2中只含花椰菜的特异性蛋白，可能是紫罗兰中含抗性蛋白基因的染色体丢失，不一定是紫罗兰的染色体全部丢失，D错误。 故选B。 32．（2025·湖北十堰·一模）某实验小组在MS培养基中添加不同比例的萘乙酸(NAA)和细胞分裂素6-苄氨基嘌呤(6-BA)，以研究其对铁线莲愈伤组织的诱导率和生长的影响，结果如表所示。下列有关分析正确的是（　　） 培养基类型 NAA/(mg·L-1) 6-BA/(mg·L-1) 诱导率/% 生长状况 甲 0 2.0 45.7 淡黄色，疏松 乙 0.1 2.0 71.4 淡黄色，疏松 丙 0 4.0 77.1 黄色，生长速率快，过度致密 丁 0.1 4.0 22.9 黄褐色，过度致密 A．接种前，要对铁线莲的外植体进行灭菌处理 B．不添加萘乙酸时，适当增加细胞分裂素浓度有助于愈伤组织的形成和生长 C．诱导愈伤组织期间需要给予光照以促进叶绿素合成 D．铁线莲愈伤组织的诱导取决于外源生长素的浓度 【答案】B 【分析】植物组织培养技术: 1、过程：植物组织培养的过程为：离体的植物组织，器官或细胞经过脱分化（避光）形成愈伤组织；愈伤组织经过再分化（需光）过程形成胚状体，进一步发育形成植株。决定植物脱分化和再分化的关键因素是植物激素的种类和比例，特别是生长素和细胞分裂素的协同作用在组织培养过程中非常重要。 2、原理：植物细胞的全能性。 3、条件：①细胞离体和适宜的外界条件（如适宜温度、适时的光照、pH和无菌环境等）。②一定的营养（无机、有机成分）和植物激素（生长素和细胞分裂素） 【详解】A、接种前，要对铁线莲的外植体进行消毒处理，A错误； B、与甲组相比，丙组的诱导率更高，愈伤组织生长速度更快，因此不添加萘乙酸时，适当增加细胞分裂素浓度有助于愈伤组织的形成和生长，B正确； C、脱分化阶段，一般不需要给予光照，再分化阶段，要给予光照以促进叶绿素的合成，C错误； D、铁线莲愈伤组织的诱导取决于外源生长素和细胞分裂素的浓度，D错误。 故选B。 33．（2025·辽宁沈阳·一模）迷迭香中的萜类物质用途广泛。欲实现其工厂化生产，需高效诱导外植体形成愈伤组织。下表为6-BA和NAA不同浓度组合下其愈伤组织的诱导率（诱导出愈伤组织的外植体数占接种外植体总数的百分比）。下列说法正确的是（    ） 组别 不同浓度组合（mg/L） 诱导率（%） 6-BA NAA 1 4.0 0.1 58.85 2 4.0 0.5 89.84 3 5.0 0.1 64.12 4 5.0 0.5 86.30 5 6.0 0.1 67.66 6 6.0 0.5 82.22 A．迷迭香在整个生长发育过程中一直合成萜类物质 B．细胞产物工厂化生产主要通过提高单个细胞中萜类含量来实现 C．NAA浓度相同的条件下，愈伤组织诱导率与6-BA浓度呈正相关 D．与6-BA相比，NAA对愈伤组织形成的影响更显著 【答案】D 【分析】植物组织培养过程是：离体的植物器官、组织或细胞脱分化形成愈伤组织，然后再分化生成根、芽，最终形成植物体。植物组织培养依据的原理是植物细胞的全能性。 【详解】A、迷迭香中的萜类物质是植物细胞在特定阶段或条件下合成的次生代谢物，而不是在整个生长发育过程中一直合成，A错误； B、细胞产物的工厂化生产主要是通过提高细胞的数量（如通过扩大培养规模）或优化培养条件来增加总产量，而不是仅仅提高单个细胞中的产物含量，B错误； C、据题表格数据分析可知，在NAA浓度相同的条件下（如0.1mg/L或0.5mg/L），6-BA浓度的增加并没有导致愈伤组织诱导率一直增加。例如，在NAA为0.5mg/L时，6-BA从4.0mg/L增加到6.0mg/L，愈伤组织诱导率随6-BA的浓度增加而降低，C错误； D、据题表格数据分析可知，当NAA浓度从0.1mg/L增加到0.5mg/L时，愈伤组织诱导率普遍有大幅度的提高（例如组别1到组别2，从58.85%提高到89.84%；组别3到组别4，从64.12%提高到86.30%）。而相比之下，6−BA浓度的变化对愈伤组织诱导率的影响相对较小（例如组别1到组别3再到组别5，在NAA浓度为0.1mg/L时，诱导率从58.85%增加到64.12%再增加到67.66%，变化幅度不大），说明与6-BA相比，NAA对愈伤组织形成的影响更显著，D正确。 故选D。 34．（2025·湖南株洲·一模）图示为利用生物技术生产药用植物次生代谢物的过程。下列叙述正确的是（    ） A．过程①②③均需要利用转基因技术 B．过程①②均需经历脱分化、再分化 C．过程③是利用发酵工程生产紫杉醇，利用酵母菌发酵需在有氧条件下进行 D．次生代谢物是植物生长所必需的，但含量少，应选择产量高的细胞进行培养 【答案】C 【分析】由于植物细胞的次生代谢物含量很低，从植物组织提取会大量破坏植物资源，有些产物又不能或难以通过化学合成途径得到，因此人们期望利用植物细胞培养来获得目标产物，这个过程就是细胞产物的工厂化生产。 【详解】A、①②不需要转基因技术，③需要转基因技术将产生紫杉醇的基因导入微生物细胞中，A错误； B、①需要脱分化和再分化，②不需要再分化，B错误； C、有氧条件下有利于酵母菌大量繁殖，生产更多的紫杉醇，C正确； D、次生代谢物不是植物生长所必需的，D错误。 故选C。 二、多选题 35．（2025·河北沧州·一模）中华猕猴桃果实大、抗寒能力弱，狗枣猕猴桃果实小、耐低温。研究人员尝试培育抗寒能力强且果实大的猕猴桃新品种。方案1，中华猕猴桃和狗枣猕猴桃进行体细胞杂交；方案2，对中华猕猴桃或狗枣猕猴桃的体细胞进行诱变处理，再培育成植株。下列叙述正确的是（    ） A．方案1和2中均需要先用纤维素酶和果胶酶处理猕猴桃的体细胞 B．方案1可以采用离心法或PEG处理诱导两种猕猴桃的原生质体融合 C．方案2宜选择两种猕猴桃的愈伤组织进行处理，且需筛选大量细胞 D．方案1需使用的化学试剂有生长素、细胞分裂素、秋水仙素等 【答案】BC 【分析】植物体细胞杂交技术:就是将不同种的植物体细胞原生质体在一定条件 下融合成杂种细胞，并把杂种细胞培育成完整植物体的技术。 【详解】A、方案1体细胞杂交，需要去除细胞壁，用纤维素酶和果胶酶处理得到原生质体；方案2是诱变处理不需要用纤维素酶和果胶酶处理，A错误； B、方案1可以采用离心法或PEG（聚乙二醇）处理诱导两种猕猴桃的原生质体融合，B正确； C、诱变育种通常处理的是分裂中的细胞，比如愈伤组织，因为DNA复制时更容易发生突变。诱变育种原理是突变，突变具有不定向性，故需要筛选大量细胞，C正确； D、方案1杂交细胞需要通过植物组织培养成为植株，植物组织培养需要生长素和细胞分裂素来调节脱分化和再分化。而秋水仙素可能是在多倍体育种中使用的，植物组织培养过程中不需要秋水仙素，D错误。 故选BC。 36．（2025·河北唐山·一模）甲植物具有耐盐碱效应，乙植物具有高产效应。下图是利用甲、乙两种植物细胞获得高产且耐盐碱植株的部分流程图，下列叙述正确的是（    ） A．进行①处理时可用纤维素酶和果胶酶 B．进行②诱导时可选用电融合法或PEG融合法 C．③过程通常需要一定强度的光照条件 D．将杂种细胞培育成的植物体即为高产且耐盐碱的植株 【答案】AB 【分析】植物体细胞杂交的原理是细胞膜的流动性和细胞的全能性，其主要操作流程为去除细胞壁后诱导原生质体融合，有的原生质体融合的方法有离心、电刺激、聚乙二醇等试剂诱导 ，获得杂种细胞经过植物组织培养技术获得杂种植株，该方法的典型优点是克服远缘杂交不亲和的障碍。题图分析：①是酶解法去除细胞壁，②是诱导原生质体融合，③是杂种细胞脱分化形成愈伤组织，④是经过耐盐培养筛选获得的具有耐盐特性的胚状体。 【详解】A、①是去除细胞壁获得甲和乙植物细胞的原生质体，由于植物细胞的主要成分是纤维素和果胶，因此该过程需要用到纤维素酶和果胶酶，A正确； B、②过程为原生质体融合，常见的方法有电融合法或PEG融合法，B正确； C、③过程为杂种细胞脱分化形成愈伤组织，该过程一般不需要光照，再分化过程需要一定强度的光照条件，C错误； D、由于植物体细胞杂交过程中会有部分染色体的丢失，因此杂种细胞培育成的植物体不一定为高产且耐盐碱的植株，D错误。 故选AB。 三、非选择题 37．（2025·贵州铜仁·一模）植物在遭受生物或非生物胁迫时，往往会积累次生代谢产物来应对外界伤害。紫杉醇是存在于红豆杉属植物体内的一种次生代谢产物，具有高抗癌活性。研究发现从红豆杉愈伤组织细胞就可以提取紫杉醇。 回答下列问题： (1)在利用植物组织培养技术生产紫杉醇的过程中，最好选择红豆杉的 （幼嫩茎段/成熟茎段）作为外植体进行培养，原因是 。 (2)在一定激素和营养等条件的诱导下，外植体细胞会失去其特有的结构和功能，转变成未分化的细胞，这个转变过程称为 。未分化的细胞进而形成愈伤组织，将愈伤组织悬浮培养可获得紫杉醇。 (3)研究人员在利用植物组织培养技术生产紫杉醇的过程中发现紫杉醇的产量很低。结合题干信息，提出一种提高紫杉醇产量的措施 。目前利用基因工程构建稳定高产紫杉醇的工程菌研究取得很大进展，写出利用紫杉醇合成酶基因构建基因表达载体的思路 。 【答案】(1) 幼嫩茎段 幼嫩茎段细胞的全能性高于成熟茎段（或幼嫩茎段细胞的分化程度低，全能性高） (2)脱分化 (3) 培养过程中模拟生物或非生物胁迫环境 先用一定的限制酶切割载体，使它出现一个切口，然后用同种限制酶或能产生相同末端的限制酶切割含有紫杉醇合成酶基因的DNA片段，再利用DNA连接酶将目的基因片段拼接到载体的切口处 【分析】植物组织培养技术： （1）过程：离体的植物组织，器官或细胞（外植体）→愈伤组织→胚状体→植株（新植体）。 （2）原理：植物细胞的全能性。 （3）条件：①细胞离体和适宜的外界条件（如适宜温度、适时的光照、pH和无菌环境等）；②一定的营养（无机、有机成分）和植物激素（生长素和细胞分裂素）。 【详解】（1）在利用植物组织培养技术生产紫杉醇的过程中，最好选择红豆杉的幼嫩茎段作为外植体进行培养，原因是幼嫩茎段细胞的全能性高于成熟茎段（或幼嫩茎段细胞的分化程度低，全能性高）。在植物组织培养过程中更容易被诱导形成愈伤组织，进而用于生产紫杉醇。 （2）在植物组织培养中，外植体细胞在一定条件下失去其特有的结构和功能，转变成未分化细胞的过程就是脱分化，脱分化形成的未分化细胞会进一步形成愈伤组织，将愈伤组织悬浮培养可获得紫杉醇。 （3）研究人员在利用植物组织培养技术生产紫杉醇的过程中发现紫杉醇的产量很低，提高紫杉醇产量的措施为培养过程中模拟生物或非生物胁迫因素，诱导红豆杉愈伤组织细胞积累更多的紫杉醇。因为题干提到植物在遭受生物或非生物胁迫时会积累次生代谢产物，所以通过添加胁迫因素可促使愈伤组织细胞产生更多的紫杉醇。利用紫杉醇合成酶基因构建基因表达载体的思路：先用一定的限制酶切割载体，使它出现一个切口，然后用同种限制酶或能产生相同末端的限制酶切割含有紫杉醇合成酶基因的DNA片段，再利用DNA连接酶将目的基因片段拼接到载体的切口处，形成基因表达载体。 38．（2025·山东青岛·一模）银杏叶中的黄酮醇具有重要的药用价值。为探究红蓝光质比例对银杏幼苗光合特性及黄酮醇含量的影响，科研人员以银杏幼苗为实验材料，在适宜的光照强度下，设置红蓝光组合比例分别为1∶1（1R1B）、1∶3（1R3B）、1∶5（1R5B）和白光（W，对照）4种光质处理，处理20d后检测银杏净光合速率、气孔导度、胞间CO2浓度及总黄酮醇含量，结果如图所示。 (1)由图可知，实验组的净光合速率都比对照组高，原因是 。实验组净光合速率的变化主要由非气孔因素导致，原因是 。 (2)不同比例红蓝光对银杏叶总黄酮醇含量的影响为 。黄酮醇是银杏叶细胞的次生代谢物，与传统的从银杏叶中提取黄酮醇相比， 技术可实现黄酮醇的工厂化生产，培养过程中需要定期更换培养液的目的 。（答出两点） (3)除光质外，光照和黑暗交替频率也可以影响银杏的光合产物积累量。研究人员采用光照、黑暗交替进行的方式处理生理状态相同的银杏幼苗，其中光照和黑暗的总时长相同。结果发现随着光暗交替次数的增加和交换频率的加快，银杏幼苗有机物的积累量逐渐增加，请从光合作用的过程角度分析，出现上述现象的原因 。 【答案】(1) 光合色素主要吸收红光和蓝紫光，实验组气孔导度和胞间CO2浓度高 净光合速率与气孔导度、胞间CO2浓度的变化趋势不完全相同 (2) 随蓝光比例的增加，总黄酮醇含量先增加后减少，并在1R3B 处理时最高 植物细胞培养 提供营养；排除代谢废物 (3)随着光暗交替频率的加快，光反应产生的NADPH和ATP能够被暗反应充分利用 【分析】1、温度对光合作用的影响：在最适温度下酶的活性最强，光合作用强度最大，当温度低于最适温度，光合作用强度随温度的增加而加强，当温度高于最适温度，光合作用强度随温度的增加而减弱。 2、二氧化碳浓度对光合作用的影响：在一定范围内，光合作用强度随二氧化碳浓度的增加而增强．当二氧化碳浓度增加到一定的值，光合作用强度不再增强。 3、光照强度对光合作用的影响：在一定范围内，光合作用强度随光照强度的增加而增强．当光照强度增加到一定的值，光合作用强度不再增强。 【详解】（1）光合色素主要吸收红光和蓝紫光，由图可知，对照组为白光处理，实验组为不同比例组合的红光蓝光处理，因此实验组有利于提高光反应速率，且实验组气孔导度和胞间CO2浓度高，促进暗反应的进行，因此实验组的净光合速率都比对照组高。由图可知，与对照组 相比，实验组净光合速率与气孔导度、胞间CO2浓度的变化趋势不完全相同，实验组净光合速率的变化主要由非气孔因素导致。 （2）由图可知，随蓝光比例的增加，总黄酮醇含量先增加后减少，并在1R3B 处理时最高。与传统的从银杏叶中提取黄酮醇相比，植物组织培养技术可实现黄酮醇的工厂化生产，培养过程中需要定期更换培养液可以提供营养物质，并防止代谢产物积累对细胞自身造成危害。 （3）随着光暗交替频率的加快，光反应产生的NADPH和ATP能够被暗反应充分利用，从而促进光合作用的进行。 39．（2025·江西萍乡·一模）甘蓝型油菜引入我国历史较短，其遗传基础狭隘。菘蓝是传统中药材，具有广谱抗病毒特性。研究人员利用甘蓝型油菜（体细胞中染色体数为38）与菘蓝（体细胞中染色体数为14）进行体细胞杂交，培育抗病毒的甘蓝型油菜—菘蓝单体附加系，过程如图1。回答下列问题：    (1)实验前需要在 （填“高渗”或“低渗”）溶液中制备甘蓝型油菜和菘蓝的原生质体，两种原生质体融合成功的标志是 。 (2)图1中F1产生配子的染色体组成为 （只用字母表示）。最终获得的不同抗病毒甘蓝型油菜—菘蓝单体附加系体细胞中染色体数目 （填“一定”或“不一定”）相同。研究人员不让甘蓝型油菜和菘蓝直接通过有性杂交培育新品种的原因是 。 (3)研究发现，S基因编码的S蛋白是菘蓝具有抗病毒功效的关键蛋白，由E基因编码的E肽能增强S蛋白的抗病毒功效。研究人员尝试利用基因工程技术培育转基因抗病毒甘蓝型油菜。图2是S基因和E—S融合基因的结构，利用PCR技术从菘蓝基因组中分离S基因时需要设计引物，引物的作用是 。结合图2分析，若只将S基因导入甘蓝型油菜细胞中，为顺利构建表达载体，利用PCR技术分离S基因时需要在引物1的5'端加入 酶识别序列，在引物2的5'端加入 酶识别序列。已知E基因的编码链序列为5'—ATGAGCTACGGCCGTAAAAAGAGACGCCAACGTAGA—3'，若要在S蛋白的前端引入E短肽，需要构建E—S融合基因，扩增E—S融合基因时，利用E基因和S基因的核酸序列设计的引物3的序列为 （写出引物5'端的12个碱基，并标注5'端和3'端）。构建基因表达载体时优先选择甘蓝型油菜的特异性启动子的优点是 。    【答案】(1) 高渗 融合的原生质体再生出新的细胞壁 (2) PQR 不一定 甘蓝型油菜和菘蓝属于两个不同的物种，二者之间存在生殖隔离，不能通过有性杂交产生可育后代 (3) 与模板DNA单链互补配对实现连接，并且使DNA聚合酶能够从引物的3'端开始连接脱氧核苷酸 BamH Ⅰ Xbo Ⅰ 5'-GGATCCATGAGC-3' 有利于S基因或E-S联合基因在甘蓝型油菜细胞中表达 【分析】植物体细胞杂交是将不同植物的细胞通过细胞融合技术形成杂种细胞，进而利用植物组织培养将杂种细胞培育成多倍体的杂种植株。植物体细胞杂交是首先用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁，获得原生质体；用物理法（离心、振动、电刺激）或者化学法（聚乙二醇）诱导细胞融合，获得融合的原生质体；原生质体再生出细胞壁，获得杂种细胞；杂种细胞经过脱分化和再分化获得杂种植株。 【详解】（1）在制备原生质体时，为了防止原生质体吸水涨破，需要在高渗溶液中进行，因为原生质体没有细胞壁的保护，在低渗溶液中会大量吸水而涨破，所以实验前需要在高渗溶液中制备甘蓝型油菜和菘蓝的原生质体，两种原生质体融合成功的标志是融合的原生质体再生出新的细胞壁。细胞壁是植物细胞特有的结构，当融合后的杂种细胞再生出细胞壁，就意味着融合过程完成，形成了具有新的细胞结构和功能的杂种细胞。 （2）甘蓝型油菜（体细胞中染色体数为38，染色体组成为PPQQ），菘蓝（体细胞中染色体数为14，染色体组成为RR），二者杂交得到的F1的染色体组成为PPQQRR，F1产生配子的染色体组成为PQR。最终获得的不同抗病毒甘蓝型油菜-菘蓝单体附加系，是在甘蓝型油菜的染色体组基础上附加了菘蓝的一条染色体，由于附加的菘蓝染色体不同，所以不同的单体附加系体细胞中染色体数目不一定相同。甘蓝型油菜和菘蓝属于两个不同的物种，二者之间存在生殖隔离，不能通过有性杂交产生可育后代，所以研究人员不让甘蓝型油菜和菘蓝直接通过有性杂交培育新品种。 （3）引物的作用是与模板DNA单链互补配对实现连接，并且使DNA聚合酶能够从引物的3'端开始连接脱氧核苷酸，从而引导子链的合成。在PCR技术中，DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，只能从引物的3'端延伸DNA链，所以引物是PCR反应中必不可少的部分。从图2可知，若要将S基因构建到表达载体中，载体上有BamH Ⅰ和Xbo Ⅰ酶切位点，为了使S基因能准确插入载体，利用PCR技术分离S基因时需要在引物1的5'端加入BamH Ⅰ酶识别序列，这样才能与载体上的BamH Ⅰ酶切位点进行连接，同理，在引物2的5'端加入Xbo Ⅰ酶识别序列，以便与载体上的Xbo Ⅰ酶切位点连接。已知E基因的编码链序列为5'-ATGAGCTACGGCCGTAAAAAGAGACGCCAACGTAGA-3'，BamH Ⅰ酶识别序列为5'-GGATCC-3'，若要在S蛋白的前端引入E短肽，需要构建E-S融合基因，根据碱基互补配对原则，扩增E-S融合基因时，引物3的序列（5'端的12个碱基）为5'-GGATCCATGAGC-3'。构建基因表达载体时优先选择甘蓝型油菜的特异性启动子，其优点是有利于S基因或E-S联合基因在甘蓝型油菜细胞中表达，从而提高基因表达的效率和针对性。 动物细胞工程考点03 一、单选题 1．（2025·内蒙古阿拉善盟·一模）科研人员利用iPS细胞（诱导多能干细胞）与心肌细胞融合形成杂交细胞，研究其生物学特性，为心肌梗死后的细胞移植治疗提供一种新思路。下列叙述错误的是（    ） A．进行心肌细胞培养时，可用胰蛋白酶处理心肌组织 B．可用PEG诱导细胞融合，并用特定的选择培养基进行筛选 C．杂交细胞既有iPS细胞的增殖能力，又有心肌细胞的特点 D．鉴定杂交细胞时，可通过PCR检测其基因的转录和翻译情况 【答案】D 【分析】由题意可知，科研人员利用iPS细胞（诱导多能干细胞）与心肌细胞融合形成杂交细胞，则杂交细胞既有iPS细胞的增殖能力，又有心肌细胞的特点。 【详解】A、进行心肌细胞培养时，可用胰蛋白酶处理心肌组织，以获得分散的细胞，A正确； B、可用PEG诱导细胞融合，并用特定的选择培养基进行筛选，以筛选出融合细胞，B正确； C、杂交细胞有iPS细胞（诱导多能干细胞）与心肌细胞融合形成，其既有iPS细胞的增殖能力，又有心肌细胞的特点，C正确； D、PCR不能检测翻译情况，D错误。 故选D。 2．（2025·河北唐山·一模）某牧场引进一对产肉性能优异的公羊和母羊，科研人员采用体外受精等技术短时间内获得了具有优良性状的大量后代，此过程不涉及的操作是（    ） A．卵母细胞的采集 B．细胞核移植 C．同期发情处理 D．胚胎移植 【答案】B 【分析】胚胎移植的基本程序主要包括: ①对供、受体的选择和处理（选择遗传特性和生产性能优秀的供体，有健康的体质和正常繁殖能力的受体）。用激素进行同期发情处理，用促性腺激素对供体母牛做超数排卵处理。②配种或人工授精。③对胚胎的收集、检查、培养或保存（对胚胎进行质量检查，此时的胚胎应发育到桑葚胚或胚囊胚阶段。④对胚胎进行移植。⑤移植后的检查。 【详解】A、体外受精需要从母体中采集大量的卵母细胞，在体外培养成熟后与获能的精子完成受精形成受精卵，A正确； B、采用体外受精等技术短时间内获得了具有优良性状的大量后代不涉及细胞核抑制，动物克隆需要涉及细胞核移植，B错误； C、体外培养获得的早期胚胎需要移植到同期发情处理的代孕母中获得试管动物，C正确； D、由于科学技术的限制，目前还不能进行全体外培养，胚胎在体发育到一定阶段必须进行胚胎移植，D正确。 故选B。 3．（2025·河北唐山·一模）无菌操作是生物实验中一项重要的基本操作。下列过程不需要严格无菌操作的是（    ） A．传统泡菜的制作 B．酵母菌的纯培养 C．动物细胞的传代培养 D．花药离体培养 【答案】A 【分析】在传统生物技术中，无需进行严格灭菌，根据目的菌种的代谢特征设置相应的培养条件。 【详解】在传统生物技术中，如传统泡菜的制作过程，不需要严格的无菌操作，通常是根据目的菌种的代谢特征设置相应的培养条件进行的，而实验室中的一些生物工程技术，如酵母菌的纯培养、动物细胞的传代培养、花药离体培养等需要严格的无菌操作，A正确，BCD错误。 故选A。 4．（2025·广东深圳·一模）线粒体置换技术是将线粒体异常的卵子的纺锤体移植到去除纺锤体的正常卵子中获得线粒体置换的重构卵子。纺锤体移植实质上移入正常细胞的是（    ） A．线粒体 B．纺锤体 C．染色体 D．中心体 【答案】C 【分析】动物核移植是将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为动物个体。核移植得到的动物称克隆动物。 【详解】分析题意，线粒体置换技术是将线粒体异常的卵子的纺锤体移植到去除纺锤体的正常卵子中获得线粒体置换的重构卵子，该过程中转移技术本质是进行了核基因（染色体）的转移，即实现了核遗传物质的转移，C符合题意。 故选C。 5．（2025·吉林延边·一模）关于生物工程技术过程中出现细胞融合的操作，下列叙述正确的是（    ） A．植物体细胞杂交技术，可直接用聚乙二醇处理两种植物细胞进行膜融合 B．单克隆抗体制备技术，两两融合的细胞都能在选择培养基上存活 C．动物体细胞核移植技术，融合细胞可直接移植到受体母牛子宫内获得克隆牛 D．体外受精技术，常以在显微镜下观察到雌、雄原核或两个极体作为受精的标志 【答案】D 【分析】植物体细胞杂交时，首先用酶解法去壁，一般使用纤维素酶和果胶酶处理；然后诱导原生质体融合，采用的方法一般包括物理法（离心、振荡、电融合法）、化学法（用聚乙二醇处理）；培养融合的原生质体再生出新的细胞壁，形成杂种细胞。然后杂种细胞经过植物组织培养技术可以培养形成杂种植株。 【详解】A、若为植物体细胞杂交技术由于植物细胞的最外层是细胞壁，因此用聚乙二醇处理两种植物细胞后不会直接出现膜融合，应首先用酶解法去壁，A错误； B、单克隆抗体制备技术中，同种融合的细胞会死亡，只有杂交瘤细胞才能存活，B错误； C、若为动物体细胞核移植技术，融合得到的细胞需培养到桑椹胚（桑葚胚）或囊胚，然后移植到受体母牛子宫内获得克隆牛，C错误； D、若为体外受精技术，细胞融合时可在显微镜下观察到雌、雄原核或透明带和卵细胞膜之间的两个极体，D正确。 故选D。 6．（2025·四川·一模）我国研究人员率先利用某组蛋白去甲基化酶(Kd4d)的mRNA，通过调控重构胚相关基因表达，解决了体细胞克隆猴胚胎发育率低这一技术难点，培育出了第一批灵长类动物——食蟹猴，流程如图所示。下列叙述正确的是（    ） A．动物胚胎细胞核移植的难度明显高于体细胞核移植 B．②过程目的是确保克隆动物的遗传物质全部来自供体细胞 C．⑤过程需用物理或化学方法激活才能完成细胞分裂和发育进程 D．Kd4d的mRNA 能降低组蛋白甲基化水平，提高克隆猴胚胎发育率 【答案】C 【分析】①卵母细胞的细胞质中含有一些能够促进细胞核全能性表达的物质，②过程是去除卵母细胞的细胞核，目的是为供体细胞的核提供一个去核的卵母细胞环境，保证细胞核全能性能够顺利表达，而细胞质中也存在有遗传物质DNA，因此克隆动物的遗传物质来自核供体和卵母细胞供体； ②重构胚需要用物理或化学方法激活，如电刺激等，这样才能使重构胚完成细胞分裂和发育进程。 【详解】A、胚胎细胞分化程度低，全能性相对较高，而体细胞分化程度高，恢复全能性更困难，因此动物体细胞核移植的难度高于胚胎细胞核移植，A错误； B、卵母细胞的细胞质中含有一些能够促进细胞核全能性表达的物质，②过程是去除卵母细胞的细胞核，目的是为供体细胞的核提供一个去核的卵母细胞环境，而细胞质中也存在有遗传物质DNA，因此克隆动物的细胞质遗传物质全部来自去核卵母细胞，无法保证克隆动物的遗传物质全部来自供体细胞，B错误； C、⑤过程（重构胚）需要用物理或化学方法激活，如电刺激等，这样才能使重构胚完成细胞分裂和发育进程，C正确； D、基因通过控制蛋白质的合成来调控生命活动，根据题干信息可知，Kd4d的mRNA能够合成某组蛋白去甲基化酶，在该酶的作用下，能降低组蛋白甲基化水平，调控重构胚相关基因表达，从而提高克隆猴胚胎发育率，并不是Kd4d的mRNA能降低组蛋白甲基化水平，D错误。 故选C。 7．（2025·江苏南通·一模）肝细胞中的延胡索酰乙酰乙酸水解酶基因突变会导致酪氨酸血症。下图是研究人员利用基因编辑技术纠正病人来源肝细胞，成功治疗酪氨酸血症小鼠的过程，为治疗人类酪氨酸血症奠定理论基础。相关叙述准确的是（　　） A．酪氨酸血症的发生说明基因能通过控制蛋白质的结构控制生物性状 B．过程②需在培养液中添加琼脂、葡萄糖、干扰素动物血清等物质 C．过程③需敲入正常的延胡索酰乙酰乙酸水解酶基因，并敲除相关抗原基因 D．基因编辑后的人源肝细胞植入小鼠分化为完整肝脏，是治疗小鼠酪氨酸血症的关键 【答案】C 【分析】在进行细胞培养时，首先要对新鲜取材的动物组织进行处理，或用机械的方法，或用胰蛋白酶、胶原蛋白酶等处理一段时间，将组织分散成单个细胞。然后，用培养液将细胞制成细胞悬液，再将细胞悬液放 入培养瓶或培养皿内，置于适宜环境中培养。 【详解】A、酪氨酸血症是由于肝细胞中的延胡索酰乙酰乙酸水解酶基因突变，导致酶不能正常合成，进而影响代谢过程，这说明基因能通过控制酶的合成来控制代谢，进而控制生物性状，而不是控制蛋白质的结构，A错误； B、动物细胞培养过程中，培养液中需要添加葡萄糖、动物血清等物质，但不需要添加琼脂，琼脂是用于植物组织培养的凝固剂，B错误； C、过程③基因编辑是为了纠正病人来源肝细胞，所以需要敲入正常的延胡索酰乙酰乙酸水解酶基因，同时敲除相关抗原基因，以避免免疫排斥反应，C正确； D、基因编辑后的人源肝细胞植入小鼠后，是通过肝细胞发挥正常功能来治疗小鼠酪氨酸血症，而不是分化为完整肝脏，D错误。 故选C。 8．（2025·江西·一模）下列关于细胞工程的叙述，正确的是（    ） A．小麦胚经诱导形成幼苗体现了植物细胞的全能性 B．菊花组织培养中三次更换的培养基成分和目的相同 C．动物体细胞核移植的受体细胞必须是M Ⅰ 期的卵母细胞 D．胚胎干细胞分化产生的不同类型细胞中的mRNA有差异 【答案】D 【分析】1、细胞的全能性是指高度分化的细胞发育成完整个体的潜能，故全能性是指由细胞到个体的过程；植物种子是植物的幼体，故由种子发育成植株的过程不体现全能性。 2、胚胎干细胞是早期胚胎（原肠胚期之前）或原始性腺中分离出来的一类细胞，它具有体外培养无限增殖、自我更新和多向分化的特性。无论在体外还是体内环境，ES细胞都能被诱导分化为机体几乎所有的细胞类型。 【详解】A、细胞的全能性是指高度分化的细胞发育成完整个体的潜能；小麦胚本身就是一个完整的个体，其发育成植株的过程不能体现植物细胞的全能性，A错误； B、菊花组织培养中三次更换的培养基成分和目的均有所不同，B错误； C、动物体细胞核移植的受体细胞必须是减数分裂第二次分离中期（M Ⅱ期）的卵母细胞，C错误； D、细胞分化的实质是基因的选择性表达，胚胎干细胞形成的不同类型细胞中的mRNA有所不同，D正确。 故选D。 9．（2025·山西吕梁·一模）我国科学家经过多年的反复试验，在世界上率先成功完成了非人灵长类动物克隆猴。研究人员将对卵母细胞进行去核操作的时间控制在10s之内，在15s之内将体细胞注入去核的卵母细胞，并创新思路将组蛋白去甲基化酶Kdm4d的mRNA注入重构胚，同时用组蛋白脱乙酰酶抑制剂（TSA）处理，具体培育流程如下图所示。下列说法错误的是（    ） 注：Kdm4d为组蛋白去甲基化酶、可以催化组蛋白脱去甲基化；TSA为组蛋白脱乙酰化酶抑制剂，可以干扰组蛋白脱去乙酰化。 A．除用灭活仙台病毒诱导方法外，还可用电融合法使两细胞融合 B．与克隆小猴的细胞相比，图示体细胞的组蛋白甲基化水平较高、乙酰化水平较低 C．“对卵母细胞进行去核操作”中的“去核”是指去除DNA-蛋白质复合物 D．注入Kdm4d的mRNA并进行TSA处理，一般不会改变重构胚中基因的碱基序列 【答案】C 【分析】生物体基因的碱基序列保持不变，但基因表达和表型发生可遗传变化的现象，叫作表观遗传，除了DNA甲基化，构成染色体的组蛋白发生甲基化、乙酰化等修饰也会影响基因的表达。 【详解】A、在动物细胞融合技术中，诱导细胞融合的方法有物理法（如电融合法）、化学法（如聚乙二醇融合法）和生物法（如灭活仙台病毒诱导法）等。所以除用灭活仙台病毒诱导方法外，还可用电融合法使两细胞融合，A正确； B、由题中信息可知，Kdm4d为组蛋白去甲基化酶，能催化组蛋白脱去甲基化，TSA为组蛋白脱乙酰化酶抑制剂，可干扰组蛋白脱去乙酰化。在克隆过程中对重构胚进行了相关处理，所以与克隆小猴的细胞相比，图示体细胞的组蛋白甲基化水平较高、乙酰化水平较低，B正确； C、去核是指去除纺锤体−染色体复合物，C错误； D、注入Kdm4d的mRNA并进行TSA处理，主要是对组蛋白的甲基化和乙酰化状态进行调控，属于表观遗传修饰，一般不会改变重构胚中基因的碱基序列，D正确。 故选C。 10．（2025·安徽滁州·一模）我国科学家为扩大大熊猫培育，进行了开创性研究。他们选择出生夭折的大熊猫作为供核个体，家兔细胞作为受体细胞，巧妙构建出大熊猫-兔重构胚。随后，科学家利用这一独特的重构胚进行了实验，实验处理及结果如下图所示。（注：CB为细胞松弛素，Colc为秋水仙素，均为细胞骨架抑制剂，使用时用DMSO溶剂溶解）。下列叙述错误的是（    ）    A．DMSO组的作用是作为对照，DMSO溶剂本身对核移植成功率有显著影响 B．取出生夭折的熊猫相应组织，剪碎后需要用胰蛋白酶（或胶原蛋白酶）处理 C．需要通过对家兔进行超数排卵处理，获得大量处于MⅡ期的去核卵母细胞 D．细胞松弛素能够提高核移植成功率，且其成功率高于对照组和其他实验组 【答案】A 【分析】动物细胞培养的流程：取动物组织块（动物胚胎或幼龄动物的器官或组织）→剪碎→用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养瓶中进行原代培养→贴满瓶壁的细胞重新用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞继续传代培养。 【详解】A、DMSO组的作用是作为对照，其目的是排除DMSO溶剂本身对核移植成功率的影响，根据实验中的数据不能得出DMSO溶剂本身对核移植成功率有显著影响的结论，A错误； B、取出生夭折的熊猫相应组织，剪碎后需要用胰蛋白酶（或胶原蛋白酶）处理，其目的是获得单细胞悬液，B正确； C、实验过程中需要通过对家兔进行超数排卵处理，其目的是获得大量处于MⅡ期的去核卵母细胞，为核移植提供更多的实验材料，C正确； D、实验数据显示，第1组的细胞数高于其他实验组和对照组，故实验结果表明细胞松弛素能够提高核移植成功率，D正确。 故选A。 11．（2025·山西·一模）图示多克隆抗体的制备流程。下列有关多克隆抗体与单克隆抗体的比较，错误的是（    ） A．多克隆抗体是从动物血清中获得的抗体混合物，单抗只有一种抗体 B．多克隆抗体可以识别同一抗原的不同结合位点，单抗只识别抗原的一个结合位点 C．多克隆抗体的获得无需筛选，单抗制备的过程中至少经历两次筛选 D．与单抗药物的制备相比，制备多克隆抗体药物的生产周期短，生产成本低 【答案】C 【分析】单克隆抗体的制备： （1）制备产生特异性抗体的B淋巴细胞：向免疫小鼠体内注射特定的抗原，然后从小鼠脾内获得相应的B淋巴细胞； （2）获得杂交瘤细胞：①将鼠的骨髓瘤细胞与脾细胞中形成的B淋巴细胞融合；②用特定的选择培养基筛选出杂交瘤细胞，该杂种细胞既能够增殖又能产生抗体； （3）克隆化培养和抗体检测； （4）将杂交瘤细胞在体外培养或注射到小鼠腹腔内增殖； （5）提取单克隆抗体：从细胞培养液或小鼠的腹水中提取。 【详解】AB、多克隆抗体是通过向动物体内注射特定抗原，然后从动物血清中收集得到的抗体混合物，其中包含多种针对该抗原不同结合位点的抗体；而单克隆抗体是由单个B淋巴细胞克隆形成的细胞群所产生的，只作用于某一特定抗原的一个结合位点，只有一种抗体，A、B均正确； C、多克隆抗体的获得是直接从注射特定抗原后的动物血清中收集纯化得到，需要特定抗原筛选；单克隆抗体的制备过程中至少经历了两次筛选，一次是筛选出杂交瘤细胞，另一次是筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞，C错误； D、多克隆抗体药物的制备相对简单，生产周期短，生产成本低；而单克隆抗体药物的制备过程复杂，生产周期长，成本高，D正确。 故选C。 12．（2025·山东枣庄·一模）下列关于细胞工程的说法正确的是（　　） A．体外培养的动物细胞形态相比体内正常细胞可能会发生改变 B．作物脱毒苗培养时先诱导愈伤组织生根，再诱导生芽 C．iPS细胞都是通过将外源基因导入体细胞获得的 D．离心法收集细胞只能用于传代培养细胞的收集 【答案】A 【分析】1、动物细胞培养需要满足以下条件①无菌、无毒的环境：培养液应进行无菌处理。通常还要在培养液中添加一定量的抗生素，以防培养过程中的污染。此外，应定期更换培养液，防止代谢产物积累对细胞自身造成危害。②营养：合成培养基成分：糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等。通常需加入血清、血浆等天然成分。③温度：适宜温度：哺乳动物多是36.5℃+0.5℃；pH：7.2～7.4。④气体环境：95%空气+5%CO2。 2、物组织培养技术过程：离体的植物组织，器官或细胞（外植体）→愈伤组织→胚状体→植株（新植体）。原理：植物细胞的全能性。条件：（1）细胞离体和适宜的外界条件（如适宜温度、适时的光照、pH和无菌环境等）；（2）一定的营养（无机、有机成分）和植物激素（生长素和细胞分裂素）。 【详解】A、体外培养的动物细胞由于缺少体内环境稳定的生理和生化条件，可能形态、功能发生改变，如变扁平或失去特异性等，比体内正常细胞可能会发生改变，A正确； B、作物脱毒苗培养过程中，通常是先诱导愈伤组织形成芽，然后再诱导生根。这是因为在植物组织培养过程中，愈伤组织的再分化通常是先进行芽的诱导，再进行生根的诱导，两者的顺序不能颠倒。因此，题干中的说法是错误的，B错误； C、iPS细胞（诱导多能干细胞）并不一定都需要通过外源基因导入体细胞获得。除了通过引入特定外源基因来诱导体细胞去分化外，还有一些非基因导入的方法，如使用小分子化合物或通过蛋白质转染等手段，同样可以将体细胞诱导为多能干细胞，C错误； D、在传代培养时可用胰蛋白酶使细胞从瓶壁上脱离，悬浮培养的细胞也可直接用离心法收集，离心法收集细胞不是只能用于传代培养细胞的收集，也可用于收集药物处理过的细胞等，D错误； 故选A。 13．（2025·安徽马鞍山·一模）抗人绒毛膜促性腺激素（HCG）单克隆抗体的研制对于早早孕检测和某些肿瘤的检测等具有广阔的应用前景，下图为其生产大致流程。在不同的条件下，该单克隆抗体与HCG结合能力有差异。下列叙述错误的是（　　） A．注射HCG的目的是获得能产生特定抗体的B淋巴细胞 B．制备细胞悬液时应取小鼠脾脏剪碎并用胰蛋白酶处理 C．筛选1的目的是筛选出抗HCG抗体呈阳性的杂交瘤细胞 D．抗HCG抗体可以筛选混合物中的HCG并使之纯化 【答案】C 【分析】1、单克隆抗体是由单个B淋巴细胞进行无性繁殖形成的细胞系所产生出的化学性质单一、特异性强的抗体.具有特异性强、灵敏度高，并可能大量制备的特点； 2、单克隆抗体的制备过程：首先用特定抗原注射小鼠体内，使其发生免疫，小鼠体内产生具有免疫能力的B淋巴细胞利用动物细胞融合技术将B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合，再经过三次筛选：①筛选能够产生单一抗体的B淋巴细胞②筛选得到杂交瘤细胞(去掉未杂交的细胞以及自身融合的细胞)③筛选出能够产生特异性抗体的细胞群。两次抗体检测：专一抗体检验阳性，获得能产生特异性抗体、又能大量增殖杂交瘤细胞，最后从培养液或小鼠腹水中提取单克隆抗体。 【详解】A、注射HCG的目的是使小鼠产生免疫反应，从而获得能产生特定抗体（抗HCG抗体）的B淋巴细胞，A正确； B、制备细胞悬液时，取小鼠脾脏剪碎后，用胰蛋白酶处理，可使细胞分散开来，B正确； C、筛选1是筛选出杂交瘤细胞，筛选2的目的才是筛选出抗HCG抗体呈阳性的杂交瘤细胞，C错误； D、抗HCG抗体可以与混合物中的HCG特异性结合，从而筛选出HCG并使之纯化，D正确。 故选C。 14．（2025·湖南邵阳·一模）科研人员从小鼠的皮肤细胞中提取出干细胞，并将这些干细胞重新编程为原始态的胚胎干细胞（ESCs）。随后将ESCs分化成为原始内胚层细胞和滋养层干细胞，并混合胚胎干细胞，将这三种细胞按照一定比例置于培养基培养3天，构建出胚胎模型，然后将其置于“人造机械子宫”中进行培养。下列叙述正确的是（    ） A．ESCs的培养需要在培养基中加入血清并提供95%的氧气和5%的CO2的气体环境 B．ESCs分化成原始内胚层细胞和滋养层干细胞是基因选择性表达的过程 C．构建出的胚胎模型相当于囊胚期胚胎，可对其进行移植、分割或保存 D．该胚胎模型的构建用到了胚胎工程的全部理论基础 【答案】B 【分析】动物细胞培养的过程：取动物组织块→剪碎组织→用胰蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养液中（原代培养）→放入二氧化碳培养箱培养→贴满瓶壁的细胞用酶分散为单个细胞，制成细胞悬液→转入培养液（传代培养）→放入二氧化碳培养箱培养。 【详解】A、ESCs的培养需要在培养基中加入血清并提供95%的空气和5%的CO2的气体环境，A错误； B、细胞分化的实质是基因选择性表达，ESCs分化成原始内胚层细胞和滋养层干细胞是基因选择性表达的过程，B正确； C、囊胚期胚胎具有内细胞团、滋养层细胞和囊胚腔等结构。题干中仅提到三种细胞混合培养构建胚胎模型，未明确其结构与囊胚期胚胎完全一致。不能简单认为相当于囊胚期胚胎，也就不能直接进行移植、分割或保存，C错误； D、胚胎工程的理论基础包括体外受精、早期胚胎培养、胚胎移植、胚胎分割等多方面。该胚胎模型构建仅涉及部分环节，未用到胚胎工程全部理论基础，D错误。 故选B。 15．（2025·云南曲靖·一模）下列关于植物组织培养技术和动物细胞核移植技术的说法，错误的是（    ） A．两项技术均说明细胞具有全能性 B．两项技术均可用于濒危物种的保护 C．植物细胞全能性表达需要离体、一定的营养物质、植物激素等条件 D．去核的受体卵母细胞中可能含有促进供体细胞核表达全能性的物质和条件 【答案】A 【分析】细胞经分裂和分化后，仍然具有产生完整生物体或分化成其他各种细胞的潜能，即细胞具有全能性。但是，在生物的生长发育过程中，并不是所有的细胞都表现出全能性，比如，芽原基的细胞只能发育为芽，叶原基的细胞只能发育为叶。这是因为在特定的时间和空间条件下，细胞中的基因会选择性地表达。 【详解】A、动物细胞核移植技术说明动物细胞核有全能性，A错误； B、植物组织培养技术和动物细胞核移植技术都能获得个体，两项技术均可用于濒危物种的保护，B正确； C、植物细胞离体后才能表达出全能性，离体后的细胞无法从个体的其它细胞获得营养物质和激素，因此，在细胞培养过程还要提供营养物质和植物激素等条件，C正确； D、动物体细胞无法体现全能性，利用核移植技术把体细胞的核移植到去核的受体卵母细胞，形成重组细胞，重组细胞可发育成动物个体，说明去核的受体卵母细胞中可能含有促进供体细胞核表达全能性的物质和条件，D正确。 故选A。 16．（2025·福建厦门·一模）下列关于动物细胞工程的叙述，正确的是（　　） A．动物细胞培养在CO2培养箱中进行，CO2的作用是刺激细胞呼吸 B．诱导多能干细胞（iPS细胞）通常是由胚胎干细胞诱导转化而来 C．灭活病毒能使细胞膜上的蛋白质和脂质重新排布，诱导细胞融合 D．动物细胞培养时，大多数种类的细胞能够悬浮在培养液中生长增殖 【答案】C 【分析】1、动物细胞培养： （1）概念：从动物体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后在适宜的培养条件下，让这些细胞生长和增殖的技术； （2）地位：动物细胞工程的基础； （3）条件：营养 ；无菌、无毒的环境 ；温度、pH和渗透压 ；气体环境 ； 2、动物细胞融合：也称细胞杂交，是指在一定的条件下将两个或多个动物细胞融合为一个细胞的过程，融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞，称为杂交细胞；诱导细胞融合的方法有三种：生物方法（病毒）、化学方法（聚乙二醇PEG）、物理方法（离心，震动，电刺激）。 【详解】A、动物细胞培养在CO2培养箱中进行，CO2的作用是维持培养液的pH，而不是刺激细胞呼吸，A错误； B、诱导多能干细胞（iPS细胞）通常是将体细胞经过诱导因子处理后转化而来，并非由胚胎干细胞诱导转化，胚胎干细胞本身就是一种多能干细胞，B错误； C、灭活病毒能使细胞膜上的蛋白质和脂质重新排布，从而诱导细胞融合，C正确； D、动物细胞培养时，大多数种类的细胞贴附在瓶壁上生长增殖，称为细胞贴壁，而不是悬浮在培养液中生长增殖，D错误。 故选C。 17．（2025·湖南岳阳·一模）为拯救濒危野化单峰骆驼，科研人员利用现代生物技术尝试进行人工培育，流程如下图所示。下列相关叙述正确的是（    ）    A．过程①中常用促性腺激素处理以便获得更多的卵母细胞 B．过程②中卵细胞膜和透明带先后发生生理反应阻止多精入卵 C．过程③应选用MⅡ期的卵母细胞，过程④移植的应为原肠胚 D．与F后代相比，E大多存在健康问题，表现出遗传和生理缺陷 【答案】A 【分析】胚胎工程指对动物早期胚胎或配子所进行的多种显微操作和处理技术，如体外受精、胚胎移植、胚胎分割、胚胎干细胞培养等技术。经过处理后获得的胚胎，还需移植到雌性动物体内产生后代，以满足人类的各种需求。 【详解】A、为了获得更多的卵母细胞，可以对B驯养单峰骆驼用促性腺激素处理进行超数排卵，A正确； B、过程②受精作用过程中先后发生透明带反应和卵细胞膜反应，防止多精入卵，B错误； C、过程③应选用MII期的卵母细胞，过程④移植的应为桑葚胚（桑椹胚）或囊胚，C错误； D、F后代是经过核移植获得的，而E后代正常精卵结合而来，与E后代相比，F常表现出发育困难和免疫失调等生理缺陷，D错误。 故选A。 18．（2025·新疆乌鲁木齐·一模）单克隆抗体在医学领域具有重要的应用价值。下列叙述错误的是（　　） A．制备单克隆抗体需运用动物细胞培养技术，培养过程需要O2和CO2 B．制备单克隆抗体需运用动物细胞融合技术，并用选择培养基进行筛选 C．单克隆抗体能够准确地识别抗原的细微差异，可用作诊断试剂 D．单克隆抗体能精准地运载药物，但自身不能用于治疗疾病 【答案】D 【分析】单克隆抗体能准确地识别抗原的细微差异，与特定抗原发生特异性结合，并且可以大量制备，因此被广泛用作诊断试剂，在多种疾病的诊断和病原体鉴定中发挥重要的作用。例如，利用同位素或荧光标记的单克隆抗体在特定组织中成像的技术，可定位诊断肿瘤、心血管畸形等疾病。除前面介绍的单克隆抗体可以运载药物外，单克隆抗体自身也能用于治疗疾病。 【详解】A 、制备单克隆抗体过程中，无论是骨髓瘤细胞的培养，还是杂交瘤细胞的培养，都需运用动物细胞培养技术，动物细胞培养过程中，需要O2进行细胞呼吸，为细胞代谢提供能量，CO2用于维持培养液的pH稳定，A正确； B、制备单克隆抗体需将骨髓瘤细胞与经过免疫的B淋巴细胞进行融合，运用动物细胞融合技术，融合后会形成多种细胞类型，如未融合细胞、同种细胞融合体等，所以要用选择培养基进行筛选，筛选出杂交瘤细胞，B正确； C、单克隆抗体具有特异性强、灵敏度高的特点，能够准确地识别抗原的细微差异，所以可用作诊断试剂，C正确； D、单克隆抗体不仅能精准地运载药物，其自身也可用于治疗疾病，D错误。 故选D。 19．（2025·陕西渭南·一模）2024年2月25日，世界首例体细胞克隆顶级种用藏羊“青青”在青海省诞生。研究人员采集种羊耳缘组织培养成耳纤维细胞作为核供体细胞，通过体细胞核移植获得种羊克隆胚胎。下列叙述正确的是（    ） A．在核移植前应去除MⅡ期卵母细胞的纺锤体——染色体复合物 B．在培养耳纤维细胞时可使用胃蛋白酶处理种羊耳缘组织 C．克隆动物与试管动物的生殖方式均为无性生殖 D．重组细胞会依次经历囊胚、桑葚胚、原肠胚等发育阶段 【答案】A 【分析】1、胚胎移植是指将通过体外受精及其他方式得到的胚胎，移植到同种的、生理状态相同的雌性动物体内，使之继续发育为新个体的技术； 2、胚胎分割是指采用机械方法将早期胚胎切割成2等份、4等份或8等份等，经移植获得同卵双胎或多胎的技术。来自同一胚胎的后代具有相同的遗传物质，因此胚胎分割可以看作动物无性繁殖或克隆的方法之一。 【详解】A、在移植时使用的是去核卵母细胞，因此在核移植前应去除MⅡ期卵母细胞的纺锤体——染色体复合物，A正确； B、使用无菌的胰蛋白酶消化耳缘组织间的胶原纤维，可使羊耳缘组织分散成单个细胞，B错误； C、克隆动物未经过精卵细胞的结合是无性生殖，而试管动物的生殖方式经过精卵细胞的结合是有性生殖，C错误； D、重组细胞会依次经历桑椹胚、囊胚、原肠胚等发育阶段，D错误。 故选A。 20．（2025·辽宁沈阳·一模）对杂交瘤细胞进行悬浮培养可大量生产单克隆抗体。下列叙述错误的是（    ） A．应对培养基和杂交瘤细胞进行严格灭菌 B．培养过程中提供的气体环境为95%空气和5%CO2 C．原代培养后直接用离心法收集杂交瘤细胞 D．可从细胞培养液中获取大量的单克隆抗体 【答案】A 【分析】动物细胞融合技术就是使两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的技术。融合后形成的杂交细胞具有原来两个或多个细胞的遗传信息。动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理相同。诱导动物细胞融合的常用方法有PEG融合法、电融合法和灭活病毒诱导法等。 【详解】A、对杂交瘤细胞进行悬浮培养时，应对培养基进行严格灭菌，对杂交瘤细胞不用灭菌，A错误； B、动物细胞培养所需气体主要有O2和CO2，在进行杂交瘤细胞培养时，通常采用培养皿或松盖培养瓶，并将它们置于含有95%空气和5%CO2的混合气体的CO2培养箱中进行培养，B正确； C、贴壁细胞需要重新用胰蛋白酶等处理，使之分散成单个细胞，然后再用离心法收集，悬浮培养的细胞直接用离心法收集。杂交瘤细胞进行的是悬浮培养，故原代培养后可直接用离心法收集杂交瘤细胞，C正确； D、抗体为分泌蛋白，杂交瘤细胞进行悬浮培养时，除了能大量增殖外，还能分泌抗体，且抗体分泌至培养液中，故可从细胞培养液中获取大量的单克隆抗体，D正确。 故选A。 21．（2025·陕西宝鸡·一模）CTLA-4和PD-1均是T细胞表面的受体分子，与特定分子结合后，能抑制T细胞活性甚至使T细胞凋亡，从而使机体肿瘤细胞免受T细胞攻击。抗CTLA-4或抗PD-1的单克隆抗体有较好的抗肿瘤效果。科研人员将两种不同的杂交瘤细胞融合得到双杂交瘤细胞（能够悬浮在液体培养基中生长繁殖），可以从培养液中筛选出同时抗CTLA-4和PD-1的双特异性抗体（如图），实验显示疗效更好。下列叙述正确的是（    ） A．双杂交瘤细胞需要CTLA-4和PD-1刺激，才能产生双特异性抗体 B．双特异性抗体与肿瘤细胞的结合具有更强的特异性，从而减少副作用 C．对培养到一定密度的双杂交瘤细胞进行传代培养时，需使用胰蛋白酶处理 D．双特异性抗体可以靶向作用两种受体分子，增强细胞免疫达到更好的抗肿瘤效果 【答案】D 【分析】单克隆抗体的制备过程：①给小鼠注射特定抗原使之发生免疫反应，然后从小鼠脾脏中获取已经免疫的B淋巴细胞；②诱导B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合；③利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞；④进行克隆化培养和专一抗体检测，筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞；⑤用培养基培养筛选出来的杂交瘤细胞或将其注入小鼠腹腔中培养，最后从培养液或小鼠腹水中获取单克隆抗体。 【详解】A、杂交瘤细胞是由已免疫的B细胞和骨髓瘤细胞融合，无需接触抗原就能产生双特异性抗体，A错误； B、由题意可知：CTLA-4和PD-1均是T细胞表面的受体分子，双克隆抗体应该与T细胞结合，而不是肿瘤细胞，B错误； C、杂交瘤细胞是悬浮培养的细胞，细胞之间并未接触，若要传代培养，细胞培养液直接离心，去除上清液培养基，加入新鲜培养基即可，不用胰蛋白酶处理，C错误； D、根据抗原-抗体特异性结合的原理可知，双特异性抗体可靶向作用于T细胞表面的CTLA-4和PD-1，避免这两类受体分子与特定分子结合后抑制T细胞活性甚至使T细胞凋亡，增强细胞免疫达到更好的抗肿瘤效果，D正确。 故选D。 22．（2025·安徽·一模）哺乳动物细胞合成DNA有D途径和S途径，氨基蝶呤可阻断细胞利用D途径合成DNA，S途径合成DNA需要次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶（简称HGPRT）和胸腺嘧啶核苷激酶（简称TK）的参与，这两种酶可以催化次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷分别产生肌苷酸和胸腺嘧啶脱氧核苷酸，它们可以用来合成DNA。在单克隆抗体制备过程中，一般用HAT培养基来筛选杂交瘤细胞，HAT培养基中通常会加入次黄嘌呤、氨基蝶呤和胸腺嘧啶核苷3种关键成分。B淋巴细胞中有HGPRT和TK两种酶，而骨髓瘤细胞没有这两种酶。下列叙述错误的是（    ） A．从功能上划分，单克隆抗体制备过程使用的HAT培养基属于选择培养基 B．在HAT培养基中，骨髓瘤细胞的D途径被阻断，也无S途径，不能合成DNA C．在HAT培养基中，杂交瘤细胞的D途径被阻断，但可利用S途径合成DNA D．经HAT培养基筛选得到的杂交瘤细胞即可用于大量生产单克隆抗体 【答案】D 【分析】单克隆抗体的制备过程：对动物注射抗原，从该动物的脾脏中获取能产生特定抗体的B淋巴细胞，将B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，筛选出能产生单一抗体的杂交瘤细胞，克隆化培养杂交瘤细胞（体内培养和体外培养），最后获取单克隆抗体。 【详解】A、HAT培养基可筛选出杂交瘤细胞，淘汰未融合细胞和同种核融合的细胞，属于选择培养基，A正确； B、骨髓瘤细胞的D途径被氨基蝶呤阻断，又无GPRT和TK两种酶，也无S途径，不能合成DNA，B正确； C、杂交瘤细胞的D途径被氨基蝶呤阻断，但从B淋巴细胞中获得了GPRT和TK两种酶，可利用培养基中的次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷经S途径合成DNA，C正确； D、经HAT培养基筛选的杂交瘤细胞还需进行专一抗体检测，呈阳性的杂交瘤细胞才可用于生产单克隆抗体，D错误。 故选D。 23．（2025·山西·一模）科学家提出将一种B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合后，筛选出既能迅速大量增殖、又能产生特定抗体的融合细胞，经培养可大量生产单克隆抗体。下列叙述错误的是（　　） A．每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体，是制备单克隆抗体的依据之一 B．注射特定抗原对机体进行免疫，目的是获得能产生特定抗体的B淋巴细胞 C．诱导细胞融合后用选择培养基筛选出杂交瘤细胞，将其直接培养来生产单克隆抗体 D．用单克隆抗体制备的抗体一药物偶联物，在临床上具有靶点精准、毒副作用小的优点 【答案】C 【分析】单克隆抗体的制备：用特定的抗原对小鼠进行免疫，并从该小鼠的脾中得到能产生特定抗体的B淋巴细胞，将多种B淋巴细胞与骨髓瘤细胞诱导融合，利用特定的选择培养基进行筛选：在该培养基上，未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡，只有融合的杂交瘤细胞才能生长。对上述经选择培养的杂交瘤细胞进行克隆化培养和抗体检测，经多次筛选，就可获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞。将抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞在体外条件下大规模培养，或注射到小鼠腹腔内增殖。从细胞培养液或小鼠腹水中获取大量的单克隆抗体。 【详解】A、由于一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体，因此将经过免疫的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合并筛选后，可获得能产生所需抗体的杂交瘤细胞，这是制备单克隆抗体的依据之一，A正确； B、注射特定抗原对机体进行免疫，目的是获得能产生特定抗体的B淋巴细胞，以保证与骨髓瘤细胞融合后可获得能产生所需抗体的杂交瘤细胞，B正确； C、诱导细胞融合后用选择培养基筛选出杂交瘤细胞，还需要进行克隆化培养和抗体检测，选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞，然后在将其培养来生产单克隆抗体，C错误； D、由于抗体和抗原的结合具有特异性，因此用单克隆抗体制备的抗体一药物偶联物，可选择性作用于与抗体结合的细胞，在临床上具有靶点精准、毒副作用小的优点，D正确。 故选C。 24．（2025·河北承德·一模）犬疱疹病毒病是一种由犬疱疹病毒引起的急性、全身出血性坏死的犬类传染病。gD蛋白是犬疱疹病毒囊膜的重要组成部分，可诱导机体产生免疫应答。研究人员首先利用转基因技术制备了gD蛋白，又以gD蛋白为抗原来制备单克隆抗体，以期快速检测该病毒，其主要技术路线如图所示。下列叙述错误的是（    ） A．与小鼠骨髓瘤细胞融合前，细胞甲需要通过原代和传代培养扩大细胞数量 B．与诱导原生质体融合相比，①过程特有的方法是灭活病毒诱导法 C．仅有杂交瘤细胞能在第1次筛选使用的培养基上生长 D．体外培养经抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞是获得大量单克隆抗体的方法之一 【答案】A 【分析】单克隆抗体制备流程：先给小鼠注射特定抗原使之发生免疫反应，之后从小鼠脾脏中获取已经免疫的B淋巴细胞；诱导B细胞和骨髓瘤细胞融合，利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞；进行抗体检测，筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞；进行克隆化培养，即用培养基培养和注入小鼠腹腔中培养；最后从培养液或小鼠腹水中获取单克隆抗体。 【详解】A、细胞甲是B细胞，所以不需要通过原代培养扩大细胞数量，A错误； B、与诱导原生质体融合（电刺激、聚乙二醇诱导）相比，①过程特有的方法是灭活病毒诱导法，B正确； C、仅有杂交瘤细胞能在第1次筛选使用的培养基（HAT培养基）上生长，C正确； D、经抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞在体外条件下大规模培养，或注射到小鼠腹腔内增殖，从细胞培养液或小鼠腹水中获取大量的单克隆抗体，D正确。 故选A。 25．（2025·山东青岛·一模）酶联免疫吸附测定是一种灵敏的免疫检测技术，过程如图。下列说法错误的是（    ） A．该技术可以用来检测特定抗原的浓度 B．两种抗体与特定抗原的同一区域结合 C．第二种抗体可以用蛋白质工程来制备 D．加入底物前需要漂洗掉未结合的抗体 【答案】B 【分析】据图分析，抗体和抗原特异性结合，再与酶标抗体结合，催化特定底物形成检测产物。 【详解】A、由图可知，加入酶标抗体的目的是酶催化检测底物反应，通过测定单位时间有色产物生成量来推测待测检测特定抗原的浓度，A正确； B、由图可知，两种抗体与特定抗原的不同区域结合，B错误； C、第二种抗体可以用蛋白质工程来制备，C正确； D、由图可知，第二种抗体具有蛋白酶可催化无色底物转变为有色底物，因此加入底物前需要漂洗掉未结合的抗体，D正确。 故选B。 26．（2025·甘肃兰州·一模）小鼠经特定抗原免疫的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合形成的杂交瘤细胞生产的鼠源性单克隆抗体可用于分子检测，但用于人类疾病治疗时往往有一定的副作用。如果对小鼠进行基因改造，使其表达人类抗体，由此获得的单克隆抗体人源化程度更高，则更适用于疾病治疗。下列相关叙述正确的是（    ） A．辅助性T细胞通过释放细胞因子直接促进B淋巴细胞增殖 B．将等量浆细胞和骨髓瘤细胞混合，经灭活病毒诱导后融合的细胞即为杂交瘤细胞 C．杂交瘤细胞筛选只需一次选择培养基处理，即可获得稳定分泌抗体的细胞群 D．将鼠源性单克隆抗体改造成人源性，可能降低人体发生免疫排斥的风险 【答案】D 【分析】单克隆抗体制备流程：先给小鼠注射特定抗原使之发生免疫反应，之后从小鼠脾脏中获取已经免疫的B淋巴细胞；诱导B细胞和骨髓瘤细胞融合，利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞；进行抗体检测，筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞；进行克隆化培养，即用培养基培养和注入小鼠腹腔中培养；最后从培养液或小鼠腹水中获取单克隆抗体。 【详解】A、B细胞增殖分化需要两个信号和细胞因子的刺激，A错误； B、将等量B淋巴细胞和骨髓瘤细胞混合，经灭活病毒诱导后融合的细胞，需要经过选择培养基筛选后才能获得杂交瘤细胞，B错误； C、杂交瘤细胞的筛选需要经过选择培养基筛选和专一抗体检验阳性等过程，以确保获得稳定分泌抗体的细胞群，C错误； D、不同生物体的组织相容性抗原不同，若将鼠源性单克隆抗体直接用于人，会产生免疫排斥反应，而将鼠源性单克隆抗体改造成人源性单克隆抗体，可减少人对鼠源性单克隆抗体的免疫排斥反应，D正确。 故选D。 27．（2025·广东江门·一模）由X染色体上的等位基因Gd⁴和Gd⁸所编码的葡萄糖—6—磷酸脱氢酶（G—6—PD）有A、B两种类型，可通过电泳区分。对某家族Ⅰ号个体皮肤组织的多细胞原始培养物进行电泳得结果一，然后将皮肤组织分离成单个细胞进行克隆培养，获得单细胞克隆培养物再电泳得结果二，如图所示。下列分析错误的是（    ）    A．推测该样本来源于女性，体细胞基因组成为Gd⁴Gd⁸ B．2、3号克隆细胞结果的差异是由基因表达差异导致 C．1—9号克隆细胞中均随机有一条X染色体失去活性 D．Ⅰ号个体和其儿子进行该检测所得到的结果相同 【答案】D 【分析】1、动物细胞培养过程：取动物组织块→剪碎组织→用胰蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养液中（原代培养）→放入二氧化碳培养箱培养→贴满瓶壁的细胞用酶分散为单个细胞，制成细胞悬液→转入培养液（传代培养）→放入二氧化碳培养箱培养。 2、动物细胞培养是动物细胞工程技术的基础。 3、动物细胞培养的原理是细胞增殖。 【详解】A、根据图示，结果一是某家族Ⅰ号个体皮肤组织的多细胞原始培养物进行电泳的条带，其含有酶A和酶B的条带，因此，酶A、B是由X染色体上的等位基因Gd⁴和Gd⁸所编码的，因此其含有两条X染色体，是女性，具有编码酶A、B的基因Gd⁴Gd⁸，A正确； B、单克隆培养的细胞，是通过有丝分裂得到的增殖的细胞，故单克隆培养的细胞1、2、4、5、8、9与3、6、7，所含基因相同，表达的基因不相同，B正确； C、结合题干，女性体细胞中的两个X色体会有一个随机失活（不是两个染色体都有活性），故一个细胞中6-磷酸葡萄糖脱氢酶，电泳后只显示一个条带，C错误； D、因为男性只有一条X染色体，而I号个体含有两条X染色体，因此Ⅰ号个体和其儿子进行该检测所得到的结果不相同，D错误。 故选D。 28．（2025·黑龙江吉林·一模）锈菌是一种真菌，可以通过无性菌丝的融合来进行体细胞杂交。小麦感染锈菌后会导致产量下降，对锈菌的遗传学研究可以为防治锈菌提供新思路。下列相关说法错误的是（    ） A．锈菌和小麦的寄生关系是长期协同进化的结果 B．锈菌体细胞杂交的过程中会使其细胞壁中的纤维素与果胶分子重排 C．锈菌体细胞杂交后可能会使细胞的染色体数目加倍，从而改变锈菌的表型 D．动物细胞可以在某些病毒的作用下，发生类似锈菌体细胞杂交的过程 【答案】B 【分析】不同物种之间、生物与无机环境之间在相互影响中不断进化和发展，这就是协同进化。 【详解】A、锈菌和小麦的寄生关系是长期协同进化的结果，A正确； B、绣菌是真菌，真菌细胞壁的成分是几丁质，不是纤维素和果胶，B错误； C、锈菌体细胞杂交后可能会使细胞的染色体数目加倍，从而改变锈菌的表型，C正确； D、动物细胞可以在某些病毒的作用下，发生类似锈菌体细胞杂交的过程，即动物细胞融合，D正确。 故选B。 29．（2025·山东济宁·一模）HER-2蛋白主要在胎儿时期表达，成年以后只在极少数组织内低水平表达。由曲妥珠单抗和药物DMI连接而成的抗体-药物偶联物T-DMI，对HER-2有很强的靶向性，可用于治疗HER-2过度表达的转移性乳腺癌。下列叙述正确的是（    ） A．需要向小鼠反复注射HER-2，以便在血清中获取免疫的B淋巴细胞 B．用灭活的病毒诱导细胞融合时细胞膜的蛋白质和脂质分子会重新排布 C．T-DMI中DMI与HER-2特异性结合是对癌细胞进行选择性杀伤的关键 D．用选择培养基可筛选出产生HER-2抗体的杂交瘤细胞 【答案】B 【分析】单克隆抗体制备流程：先给小鼠注射特定抗原使之发生免疫反应，之后从小鼠脾脏中获取已经免疫的B淋巴细胞；诱导B细胞和骨髓瘤细胞融合，利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞；进行抗体检测，筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞；进行克隆化培养，即用培养基培养和注入小鼠腹腔中培养；最后从培养液或小鼠腹水中获取单克隆抗体。 【详解】A、制备单克隆抗体时，需向小鼠多次注射抗原（HER-2），以激活B淋巴细胞，但免疫后的B淋巴细胞应从小鼠的脾脏中获取，而非血清（血清中含多克隆抗体，而非B细胞），A错误； B、灭活病毒诱导细胞融合的原理是病毒表面的糖蛋白促使细胞膜融合。此过程依赖细胞膜的流动性，导致膜蛋白和脂质分子重新排布，B正确； C、根据题意信息可知，T-DMI中，曲妥珠单抗（抗体）负责特异性结合HER-2，而DMI是连接的细胞毒药物。特异性靶向的关键在于抗体部分，而非DMI，C错误； D、选择培养基（如HAT培养基）的作用是筛选出杂交瘤细胞（融合的B细胞与骨髓瘤细胞），但无法直接筛选出分泌特定抗体的细胞。分泌抗体的杂交瘤细胞需通过后续的抗体检测进一步确认，D错误。 故选B。 30．（2025·黑龙江辽宁·一模）图为实验室制备抗体的两种途径，下列相关叙述不正确的是（　　）    A．途径一中可以用灭活病毒诱导B淋巴细胞和骨髓瘤细胞的融合 B．步骤一中进行了抗体检测，步骤二中对细胞进行了扩大培养 C．与b相比，a中抗体具有较高的纯度和特异性 D．途径二受限于免疫动物的数量和免疫反应强度，不适合大量生产 【答案】B 【分析】单克隆抗体：由单个B淋巴细胞进行无性繁殖形成的细胞系所产生出的化学性质单一、特异性强的抗体。具有特异性强、灵敏度高，并可能大量制备的特点。 【详解】A、B淋巴细胞与骨髓瘤细胞的融合，一般需要灭活的仙台病毒或聚乙二醇诱导融合，即可用灭活的病毒诱导动物细胞融合，A正确； B、步骤一中进行了克隆化培养即扩大培养，步骤二中进行了抗体检测，B错误； C、a制备的为单克隆抗体，b制备的为常规抗体，单克隆抗体与常规抗体相比，具有较高的纯度，特异性强，灵敏度高，C正确； D、途径二是从动物的血清中提取抗体，受限于免疫动物的数量和免疫反应强度，不适合大量生产，D正确。 故选B。 31．（2025·湖南·一模）鸭坦布苏病毒病是由鸭坦布苏病毒（DTMUV）引起的一种急性、病毒性传染病。研究人员制备了DTMUVE蛋白单克隆抗体4A1，其可与E蛋白发生免疫反应，不与鸭A型肝炎病毒、细小病毒和H9亚型禽流感病毒发生交叉反应；4A1株杂交瘤细胞株分泌的抗体对DTMUV具有中和活性，可完全清除感染小鼠血液中的DTMUV。下列相关叙述错误的是（　　） A．需获取注射过E蛋白的小鼠的B淋巴细胞 B．PEG可促进B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合 C．杂交瘤细胞株克隆培养时会出现接触抑制 D．单克隆抗体4A1能准确识别抗原的细微差异 【答案】C 【分析】动物细胞融合，又称细胞杂交，指将两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程，融合后形成具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞，称为杂交细胞。 【详解】A、根据题意可知，DTMUVE蛋白单克隆抗体4A1，其可与E蛋白发生免疫反应，将E蛋白注入小鼠体内，从小鼠脾脏中分离出已免疫的B淋巴细胞，该浆细胞能够分泌特定的抗体，A正确； B、用灭活的病毒或PEG处理，可促进已免疫的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，B正确； C、杂交瘤细胞株克隆培养时不会出现接触抑制，C错误； D、杂交瘤细胞株进行有丝分裂，产物是单克隆抗体，特异性强、灵敏度高，单克隆抗体4A1能准确识别抗原的细微差异，D正确。 故选C。 32．（2025·河南驻马店·一模）我国科学家成功培育了体细胞克隆猴。在处理重构胚时，将组蛋白脱乙酰酶抑制剂TSA、组蛋白去甲基化酶KDM4D的mRNA注入了重构胚，促进囊胚的发育，提高代孕母猴的妊娠率。下列叙述错误的是（    ） A．灭活的仙台病毒可以诱导细胞融合，体现了细胞膜的流动性 B．TSA能够抑制组蛋白脱乙酰酶的作用从而降低组蛋白的乙酰化水平 C．组蛋白去甲基化酶KDM4D能够降低组蛋白的甲基化水平 D．培育克隆猴对研究人类疾病致病机制和研发新药有重要意义 【答案】B 【分析】细胞核移植概念：将动物的一个细胞的细胞核移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育成动物个体。用核移植的方法得到的动物称为克隆动物。目前核移植技术中普遍使用的去核方法是显微直接去除法以及密度梯度离心，紫外光短时间照射、化学物质处理等方法。 【详解】A、灭活的仙台病毒诱导细胞融合的原理是：病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白等发生相互作用，使细胞膜相互融合，这体现了细胞膜的流动性，A正确； B、TSA能够抑制组蛋白脱乙酰酶的作用从而增加组蛋白的乙酰化水平，B错误； C、组蛋白去甲基化酶的作用就是去除组蛋白上的甲基基团，所以组蛋白去甲基化酶KDM4D能够降低组蛋白的甲基化水平，C正确； D、克隆猴与人类在基因等方面有较高的相似性，培育克隆猴可以构建疾病模型猴等，对于研究人类疾病致病机制和研发新药有重要意义，D正确。 故选B。 33．（2025·广东梅州·一模）双抗体夹心法是常用的检测抗原含量的方法，流程如图所示。其中固相抗体是由固相载体连接后的单克隆抗体。下列叙述正确的是（    ） A．该方法与只使用单克隆抗体相比，能增加可识别抗原的种类 B．酶标抗体作用是与待测抗原结合并催化其分解 C．固相抗体的使用数量应多于待测抗原的数量 D．若酶标抗体的使用量偏少会导致测量结果偏高 【答案】C 【分析】由图可知，酶标抗体和固相抗体都可与抗原特异性结合，固相抗体的作用是将抗原固定，酶标抗体是抗体和酶的结合，抗体与固定的抗原结合，酶可催化指示底物分解，通过检测酶促反应产物量，可测定酶的量，进而测定抗原量。 【详解】A、双抗体夹心法使用的固相抗体和酶标抗体都是单克隆抗体，它们各自识别抗原上的不同部位，该方法并不能增加可识别抗原的种类，只是通过两个抗体与抗原的结合来提高检测的准确性和灵敏度，A错误； B、酶标抗体的作用是与待测抗原结合，而其中的酶是用来催化无色底物反应生成有色产物，以便通过检测光信号来确定抗原含量，并非催化抗原分解，B错误； C、固相抗体要与待测抗原充分结合，才能保证后续检测的准确性，所以固相抗体的使用数量应多于待测抗原的数量，以确保抗原能够全部被结合，C正确； D、若酶标抗体的使用量偏少，与抗原结合的酶标抗体就少，催化产生的有色产物也少，检测到的光信号弱，会导致测量结果偏低，而不是偏高，D错误。 故选C。 34．（2025·江西上饶·一模）抗体—细胞毒素药物偶联物（T-DM1）由曲妥珠抗体、细胞毒素药物DM1偶联形成，是治疗乳腺癌的靶向药物，被纳入2023年医保目录名单，其作用机制如图。下列相关叙述错误的是（　　）    A．为了获得曲妥珠抗体，可选择HER2作为抗原刺激小鼠 B．T-DM1的连接物应在内环境和细胞内都保持稳定 C．曲妥珠抗体与HER2受体结合后，通过胞吞方式进入癌细胞 D．利用荧光标记的曲妥珠抗体可用于定位肿瘤的位置 【答案】B 【分析】由于单克隆抗体的特异性强，能特异性识别抗原，因此可以把抗癌细胞的单克隆抗体跟放射性同位素、药物等相结合，制成“生物导弹”。借助单克隆抗体的定位导向作用将药物定向带到癌细胞，在原位杀死癌细胞。疗效高，副作用小，位置准确。 【详解】A、分析图可知，曲妥珠抗体靶向作用的原理是其可与HER2受体特异性结合，因此要获得曲妥珠抗体，应选择HER2受体作为抗原刺激小鼠，A正确； B、结合图示可知，连接物在内环境中要保持稳定，但在乳腺癌细胞内要能被断开，从而使T-DM1发挥作用，而不伤害其他细胞，B错误； C、曲妥珠抗体与HER2受体结合后，以胞吞的方式进入癌细胞，C正确； D、曲妥珠抗体可与乳腺癌细胞表面的HER2受体特异性结合，所以利用荧光标记的曲妥珠抗体后，可用于定位肿瘤的位置，D正确。 故选B。 35．（2025·全国·一模）正常情况下，肿瘤细胞会被人体的免疫系统及时发现并清除，但肿瘤细胞会发生免疫逃逸现象，该现象与其表面的PD-L1密不可分。科学家利用图示流程制成抗PD-L1的偶联药物（抗PD-L1-ADC），该药物既能防止肿瘤细胞的免疫逃逸，也能靶向杀死肿瘤细胞。下列相关叙述错误的是（    ） A．图示给小鼠注射的特定抗原是肿瘤细胞上的PD-L1 B．图示①过程诱导细胞融合的方法都适用于植物细胞 C．图示②③过程完成后得到的杂交瘤细胞都能产生抗体 D．抗PD-L1-ADC能与肿瘤细胞结合，源于其抗体的特异性 【答案】B 【分析】单克隆抗体制备流程：先给小鼠注射特定抗原使之发生免疫反应，之后从小鼠脾脏中获取已经免疫的B淋巴细胞；诱导B细胞和骨髓瘤细胞融合，利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞；进行抗体检测，筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞；进行克隆化培养，即用培养基培养和注入小鼠腹腔中培养；最后从培养液或小鼠腹水中获取单克隆抗体。 【详解】A、为了获得抗 PD-L1的单克隆抗体，给小鼠注射的特定抗原是肿瘤细胞上的 PD-L1，A正确； B、图示①过程诱导细胞融合的方法有 PEG融合法、电融合法和灭活病毒诱导法，其中灭活病毒诱导法只适用于诱导动物细胞融合，B错误； C、②是筛选杂交瘤细胞，过程③对杂交瘤细胞进行克隆化培养和抗体检测，筛选获得的都是能分泌特定抗体的细胞，C正确； D、抗 PD-L1-ADC依赖于抗 PD-L1单克隆抗体与肿瘤细胞特异性结合，D正确。 故选B。 36．（2025·广东茂名·一模）在病人的病理组织中可观察到多核细胞，多核产生的直接原因最可能是（　　） A．细胞融合 B．细胞分裂 C．细胞分化 D．细胞自噬 【答案】A 【分析】病毒诱导了患者病理组织中多个体细胞的融合，从而导致多核细胞的产生。 【详解】病毒诱导了患者病理组织中多个体细胞的融合，从而导致多核细胞的产生。BCD错误，A正确。 故选A。 37．（2025·云南昆明·一模）碱性磷酸酶是抗肿瘤药物多柔比星前体的专一性活化酶，将碱性磷酸酶与单克隆抗体制成“生物导弹”，使多柔比星前体在肿瘤细胞处被活化，对其DNA造成损伤，抑制以DNA为模板进行的生理活动，达到治疗肿瘤的目的。下列叙述正确的是（    ） A．给小鼠注射多柔比星前体后，可从脾脏中得到能产生肿瘤抗体的B细胞 B．制备单克隆抗体的过程中需用特定的选择培养基和抗体检测进行筛选 C．“生物导弹”利用了碱性磷酸酶的定向制导作用和单克隆抗体的特异性杀伤能力 D．多柔比星前体活化后可直接抑制肿瘤细胞的DNA复制和翻译，而抑制其无限增殖 【答案】B 【分析】单克隆抗体的制备： （1）制备产生特异性抗体的B淋巴细胞：向免疫小鼠体内注射特定的抗原，然后从小鼠脾内获得相应的B淋巴细胞。 （2）获得杂交瘤细胞。①将鼠的骨髓瘤细胞与脾细胞中形成的B淋巴细胞融合。②用特定的选择培养基筛选出杂交瘤细胞，该杂种细胞既能够增殖又能产生抗体。 （3）克隆化培养和抗体检测。 （4）将杂交瘤细胞在体外培养或注射到小鼠腹腔内增殖。 （5）提取单克隆抗体：从细胞培养液或小鼠的腹水中提取。 【详解】A、给小鼠注射多柔比星前体后，可从脾脏中得到能产生抗多柔比星前体抗体的B细胞，A错误； B、制备单克隆抗体的过程中需用特定的选择培养基（获取B-瘤杂交瘤细胞）和抗体检测进行筛选，B正确；                 C、“生物导弹”利用了碱性磷酸酶的特异性杀伤能力和单克隆抗体的定向制导作用，C错误； D、依据题干信息，多柔比星前体在肿瘤细胞处被活化，对其DNA造成损伤，抑制以DNA为模板进行的生理活动，达到治疗肿瘤的目的，所以多柔比星前体活化后可直接抑制肿瘤细胞的DNA复制和转录，间接抑制翻译过程，进而抑制其无限增殖，D错误。 故选B。 38．（2025·广东珠海·一模）在现代生物学工程中常使用“杂交”技术，下列叙述错误的是（    ） A．植物体细胞杂交培育新物种原理是基因重组 B．动物体细胞杂交技术可用于生产单克隆抗体 C．DNA分子杂交可检测目的基因是否发生突变 D．抗原-抗体杂交可检测是否感染病原微生物 【答案】A 【分析】现代生物技术的应用中，有许多技术是需要筛选和检测的，如制备单克隆抗体时，需要用选择培养基筛选出杂交瘤细胞，还需要进行抗体阳性检测得到能产生单克隆抗体的杂交瘤细胞；植物体细胞杂交过程中，需要筛选出杂种细胞进行组织培养；转基因技术中，需要筛选重组子和检测目的基因是否导入和表达。 【详解】A、植物体细胞杂交培育新物种的原理是细胞膜的流动性和植物细胞的全能性，并非基因重组。基因重组一般发生在有性生殖过程中，而植物体细胞杂交是将不同种植物的体细胞融合，再经植物组织培养形成新个体，不属于有性生殖，A错误； B、动物体细胞杂交技术主要用于制备单克隆抗体，它是将骨髓瘤细胞与已免疫的B淋巴细胞融合，筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞，进而生产单克隆抗体，B正确； C、DNA分子杂交是用放射性同位素（或荧光分子）标记的含有目的基因DNA片段作为探针，检测目的基因是否导入受体细胞，以及是否转录出相应的mRNA等。若目的基因发生突变，其碱基序列改变，与探针杂交时就可能出现异常，从而可检测目的基因是否发生突变，C正确； D、抗原-抗体杂交利用抗原与抗体特异性结合的原理，若检测出特定的抗原-抗体结合反应，说明体内存在相应的病原微生物抗原，即可检测是否感染病原微生物，D正确。 故选A。 39．（2025·河南安阳·一模）阿尔茨海默病（AD）是一种复杂的神经退行性疾病，β-淀粉样蛋白在大脑中的积累和沉积是AD发病和发展的主要因素。科研人员将蛋白酶与单克隆抗体结合制备了催化性抗体，同时它还具有免疫活性，微量使用对AD就有一定的治疗效果。下列相关叙述正确的是（　　） A．杂交瘤细胞制备时可使用灭活病毒、高Ca2+—高pH诱导细胞融合 B．杂交瘤细胞产生的单克隆抗体只能从生物体的腹腔中大量提取 C．催化性抗体效果显著的原因为单克隆抗体特异性强、酶有高效性 D．杂交瘤细胞传代培养过程中会发生细胞贴壁现象及接触抑制现象 【答案】C 【分析】单克隆抗体制备流程：先给小鼠注射特定抗原使之发生免疫反应，之后从小鼠脾脏中获取已经免疫的B淋巴细胞；诱导B细胞和骨髓瘤细胞融合，利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞；进行抗体检测，筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞；进行克隆化培养，即用培养基培养和注入小鼠腹腔中培养；最后从培养液或小鼠腹水中获取单克隆抗体。 【详解】A、杂交瘤细胞制备时可使用灭活病毒诱导细胞融合，高Ca2+—高pH属于诱导植物原生质体融合的方法，A错误； B、杂交瘤细胞产生的单克隆抗体也可在体外培养，从培养液中提取，B错误； C、单克隆抗体能与抗原特异性结合，特异性强，而酶的催化作用具有高效性，故催化性抗体效果显著的原因为单克隆抗体特异性强、酶有高效性，C正确； D、杂交瘤细胞在培养过程中悬浮生长，无细胞贴壁现象及接触抑制现象，D错误。 故选C。 40．（2025·福建厦门·一模）多克隆抗体是抗原刺激机体产生免疫应答后，由机体产生的与抗原特异性结合的一组免疫球蛋白。它是多种单克隆抗体的混合物，可以直接从动物血清中提取。下列叙述错误的是（　　） A．单克隆抗体特异性高，多克隆抗体特异性低 B．单克隆抗体与多克隆抗体都由B细胞活化后产生 C．向动物多次注射同一抗原，可提高多克隆抗体的产量 D．与单克隆抗体相比，多克隆抗体的制备具有简便、产量高等特点 【答案】D 【分析】单克隆抗体的制备： （1）制备产生特异性抗体的B淋巴细胞：向免疫小鼠体内注射特定的抗原，然后从小鼠脾内获得相应的B淋巴细胞； （2）获得杂交瘤细胞：①将鼠的骨髓瘤细胞与脾细胞中形成的B淋巴细胞融合；②用特定的选择培养基筛选出杂交瘤细胞，该杂种细胞既能够增殖又能产生抗体； （3）克隆化培养和抗体检测； 4）将杂交瘤细胞在体外培养或注射到小鼠腹腔内增殖； （5）提取单克隆抗体：从细胞培养液或小鼠的腹水中提取。 【详解】A、单克隆抗体是由单一B淋巴细胞克隆形成的细胞群产生的，只作用于某一特定抗原决定簇，特异性高；多克隆抗体是多种单克隆抗体的混合物，特异性相对较低，A正确； B、无论是单克隆抗体还是多克隆抗体，本质都是免疫球蛋白，都是由B细胞受抗原刺激活化后增殖分化形成的浆细胞产生的，B正确； C、向动物多次注射同一抗原，可使动物体内的免疫系统持续受到刺激，促使更多的B细胞活化、增殖分化为浆细胞，从而提高多克隆抗体的产量，C正确； D、单克隆抗体的制备过程相对复杂，但可以大量生产纯度高、特异性强的抗体；多克隆抗体虽然可以直接从动物血清中提取，制备相对简便，但产量有限且特异性不如单克隆抗体，所以说多克隆抗体产量高不准确，D错误。 故选D。 41．（2025·江苏·一模）下列关于动物细胞融合和单克隆抗体制备的叙述，错误的是（　　） A．灭活的病毒可与细胞质膜发生作用，从而诱导细胞融合 B．用特定抗原免疫小鼠后；可从其骨髓中分离出浆细胞，用于细胞融合 C．产生特定抗体的杂交瘤细胞可在小鼠体内培养，从腹水中提取抗体 D．单克隆抗体可高度特异性地识别抗原，从而辅助肿瘤诊断 【答案】B 【分析】1、单克隆抗体的制备过程：首先用特定抗原注射小鼠体内，使其发生免疫，小鼠体内产生具有免疫能力的B淋巴细胞。利用动物细胞融合技术将B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合，在经过三次筛选：①筛选能够产生单一抗体的B淋巴细胞②筛选得到杂交瘤细胞（去掉未杂交的细胞以及自身融合的细胞）③筛选出能够产生特异性抗体的细胞群。两次抗体检测：专一抗体检验阳性，获得能产生特异性抗体、又能大量增殖杂交瘤细胞，最后从培养液或小鼠腹水中提取单克隆抗体；2、单克隆抗体的特点：特异性强、灵敏度高、并可大量制备。 【详解】A、某些灭活病毒表面的糖蛋白和一些酶与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞相互凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合，A正确； B、用特定抗原免疫小鼠后；可从其脾脏中分离出B细胞，用于细胞融合，B错误； C、产生特定抗体的杂交瘤细胞可在小鼠体内培养，在小鼠的腹水中获取单克隆抗体，C正确； D、根据抗原抗体特异性结合的原理，单克隆抗体可高度特异性地识别抗原，从而辅助肿瘤诊断，D正确。 故选B。 42．（2025·湖南岳阳·一模）下列有关生物技术的叙述，错误的是（    ） A．发酵工程的产品包括微生物的代谢物、酶及菌体本身 B．进行单个植物细胞培养必须先用酶水解细胞壁以获得原生质体 C．动物细胞融合与植物体细胞杂交都可用电融合法或PEG融合法诱导融合 D．可利用转基因“工程菌”修复被污染的土壤 【答案】B 【分析】发酵工程是指采用现代工程技术手段，利用微生物的某些特定功能，为人类生产有用的产品，或直接把微生物应用于工业生产过程的一种技术。发酵工程的内容包括菌种选育、培养基的配制、灭菌、种子扩大培养和接种、发酵过程和产品的分离提纯（生物分离工程）等方面。 【详解】A、发酵工程是指利用微生物的特定功能，通过现代工程技术，规模化生产对人类有用的产品，主要包括微生物的代谢物、酶及菌体本身，A正确； B、进行单个植物细胞培养时不需要用酶解法去除细胞壁，植物体细胞杂交过程中必须先用酶水解细胞壁以获得原生质体，B错误； C、动物细胞融合与植物体细胞杂交都可用电融合法或PEG融合法诱导融合，动物细胞融合还可利用灭火病毒诱导，C正确； D、工程菌是指用基因工程的方法，使外源基因得到高效率表达的菌类细胞株系，故可利用转基因“工程菌”修复被污染的土壤，D正确。 故选B。 43．（2025·浙江温州·一模）通过培养杂交瘤细胞制备单克隆抗体时，相关的细胞培养操作，错误的是（   ） A．细胞培养液中添加的血清可采用过滤方式除菌 B．采用封闭式培养有利于培养液pH保持相对稳定 C．进行克隆培养之前需调整培养液中细胞的密度 D．须筛选出抗原-抗体反应较灵敏的杂交瘤细胞株继续培养 【答案】B 【分析】制备单克隆抗体的流程为： ①向小鼠体内注射特定的抗原，使其发生免疫，然后从小鼠脾内获得能产生特定抗体的B淋巴细胞。 ②将小鼠的骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合，用特定的选择培养基筛选出杂交瘤细胞。 ③克隆化培养和抗体检测，从而筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞。④将最终筛选出的杂交瘤细胞在体外培养或注射到小鼠腹腔内增殖，从细胞培养液或小鼠的腹水中提取单克隆抗体。 【详解】 A、由于血清不耐热，无法通过高温的方法进行灭菌，因此细胞培养液中添加的血清通常采用过滤除菌的方法，A正确； B、细胞培养是不是封闭式的，所需要的气体环境是95%的空气和5%的CO2，B错误； C、为了保证克隆化培养过程中，细胞数量的快速增长，所以进行克隆培养之前需调整培养液中细胞的密度，C正确； D、须筛选出抗原-抗体反应较灵敏（即抗体检测呈阳性，且明显）的杂交瘤细胞株继续培养，D正确。 故选B。 44．（2025·湖北·一模）诱导多能干细胞（iPSC）可分化成类似间充质干细胞（iMSC）。iMSC能合成和分泌Ⅴ蛋白，用于治疗骨关节炎等疾病。下列叙述错误的是（    ） A．可用病毒作为载体将某些基因转入小鼠成纤维细胞以诱导产生iPSC B．iPSC在适宜条件下培养，需添加特定的物质才能使其转化为iMSC C．利用96孔板筛选转化成功的iMSC，需稀释至每孔至多1个细胞，并添加V蛋白 D．iMSC培养液需定期更换，并维持适宜温度、PH、渗透压和气体环境等条件 【答案】C 【分析】1、胚胎干细胞简称ES或EK细胞，是由早期胚胎或原始性腺分离出来的一类细胞，iPS与ES细胞一样，可通过定向诱导分化修补某些功能异常的细胞来治疗疾病。科学家已尝试采用多种方法来制备iPS细胞，包括借助载体将特定基因导入细胞中，直接将特定蛋白导入细胞中或者用小分子化合物等来诱导形成iPS细胞。iPS细胞最初是由成纤维细胞转化而来的，后来发现已分化的T细胞、B细胞等也能被诱导为iPS细胞。 2、动物细胞培养需要满足以下条件：（1）充足的营养供给--微量元素、无机盐、糖类、氨基酸、促生长因子、血清等；（2）适宜的温度：36.5℃±0.5℃；适宜的pH：7.2～7.4；（3）无菌、无毒的环境：培养液应进行无菌处理。通常还要在培养液中添加一定量的抗生素，以防培养过程中的污染。此外，应定期更换培养液，防止代谢产物积累对细胞自身造成危害；（4）气体环境：95%空气+5%CO2，O2是细胞代谢所必需的，CO2的主要作用是维持培养液的pH。 【详解】A、科学家已尝试采用多种方法来制备iPS细胞，包括借助载体将特定基因导入细胞中，直接将特定蛋白导入细胞中或者用小分子化合物等来诱导形成iPS细胞，因此可用病毒作为载体将某些基因转入小鼠成纤维细胞以诱导产生iPSC，A正确； B、诱导细胞分化需要培养过程中加入添加特定的物质（分化诱导因子）才能使其发生分化，因此iPSC在适宜条件下培养，需添加特定的物质才能使其转化为iMSC，B正确； C、利用96孔板筛选转化成功的iMSC，需稀释至每孔至多1个细胞，通过抗原-抗体杂交法检测，但是不需要添加V蛋白，C错误； D、根据动物细胞培养的条件，iMSC培养液需定期更换，以便清除代谢物，防止代谢产物的积累对细胞造成危害，并维持适宜温度、pH、渗透压提和气体环境等条件，以维持细胞正常的生存和代谢，D正确。 故选C。 45．（2025·广东茂名·一模）我国科学家诱导多能干细胞制备胰岛B细胞，并移植给1型糖尿病患者，取得了临床功能性治愈的疗效。下列叙述错误的是（　　） A．可通过患者体细胞诱导得到多能干细胞，避免发生免疫排斥反应 B．多能干细胞在诱导下，发生基因突变获得胰岛素基因 C．制备的胰岛B细胞在移植前，需检测在葡萄糖诱导下能否产生胰岛素 D．移植的胰岛B细胞中存在凋亡基因，也会发生细胞的编程性死亡 【答案】B 【分析】1、诱导多能干细胞（iPS细胞）：通过特定的因子导入和培养条件，可以从人的皮肤等体细胞出发，诱导其成为具有无限增殖能力并可分化为人体各种组织脏器的多能干细胞； 2、在正常情况下，胰岛B细胞对血糖水平的变化非常敏感，能够根据血糖水平的高低调节胰岛素的分泌。当血糖水平升高时，胰岛B细胞会增加胰岛素的分泌，帮助降低血糖水平；反之，当血糖水平降低时，则减少胰岛素的分泌，以避免低血糖； 3、细胞凋亡指为维持内环境稳定，由基因控制的细胞自主的有序的死亡。细胞凋亡与细胞坏死不同，细胞凋亡不是一件被动的过程，而是主动过程，它涉及一系列基因的激活、表达以及调控等的作用，它并不是病理条件下，自体损伤的一种现象，而是为更好地适应生存环境而主动争取的一种死亡过程。 【详解】A、利用患者体细胞诱导得到多能干细胞，其遗传物质与患者自身细胞相同，用这样的多能干细胞制备胰岛B细胞进行移植，免疫系统不会将其识别为外来异物，从而避免发生免疫排斥反应，A正确； B、多能干细胞本身就含有胰岛素基因，在诱导下是发生细胞分化，基因选择性表达，从而产生胰岛B细胞，而不是发生基因突变获得胰岛素基因，B错误； C、制备的胰岛B细胞的功能应该是能在葡萄糖诱导下产生胰岛素，所以在移植前需检测其在葡萄糖诱导下能否产生胰岛素，以确保其功能正常，C正确； D、细胞凋亡是由基因所决定的细胞自动结束生命的过程，也叫细胞编程性死亡，移植的胰岛B细胞作为正常细胞，细胞内存在凋亡基因，也会发生细胞的编程性死亡，D正确。 故选B。 二、多选题 46．（2025·河北保定·一模）为研究犬瘟热病毒（CDV） 血凝素（H 蛋白）的生物学功能，并研发针对H蛋白的诊断试剂和 治疗性单克隆抗体，某研究小组首次通过单B 细胞抗体技术制备了针对CDVH蛋白的单 克隆抗体M，部分制备过程如图所示。下列有关叙述正确的是（　　） A．使用显微注射技术将表达载体导入哺乳动物细胞 B．单克隆抗体M的制备利用了动物细胞融合技术 C．单克隆抗体自身可用于治疗疾病也可用于运载药物 D．筛选到的记忆B细胞只能合成和分泌与H蛋白特异性识别的抗体M 【答案】BCD 【分析】单克隆抗体能准确地识别抗原的细微差异，与特定抗原发生特异性结合，并且可以大量制备，因此被广泛用作诊断试剂，在多种疾病的诊断和病原体鉴定中发挥重要的作用。例如，利用同位素或荧光标记的单克隆抗体在特定组织中成像的技术，可定位诊断肿瘤、心血管畸形等疾病。除前面介绍的单克隆抗体可以运载药物外，单克隆抗体自身也能用于治疗疾病。 【详解】A、单克隆抗体的制备通常涉及到将B细胞与骨髓瘤细胞融合，形成杂交瘤细胞，而不是直接将表达载体导入哺乳动物细胞，A错误； B、制备单克隆抗体需将骨髓瘤细胞与经过免疫的B淋巴细胞进行融合，运用动物细胞融合技术，B正确； C、单克隆抗体不仅能精准地运载药物，其自身也可用于治疗疾病，C正确； D、记忆B细胞被筛选出来，因为它们能够合成和分泌与犬瘟热病毒（CDV）血凝素（H蛋白）特异性识别的单克隆抗体M，D正确。 故选BCD。 47．（2025·黑龙江·一模）微载体悬浮培养是将动物细胞黏附在微载体表面，在培养液中进行悬浮培养的技术。下列有关说法不正确的是（    ） A．在进行细胞培养时，应提供适合的气体条件 B．进行微载体悬浮培养时不会出现接触抑制 C．微载体悬浮培养的细胞进行传代培养时直接用离心法收集 D．为保证无毒的环境，应在培养液中加入干扰素 【答案】BCD 【分析】动物细胞培养是指从动物体内取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后在适宜的培养条件下，让这些细胞生长和增殖的技术。该技术是动物细胞工程的基础。 动物细胞培养的过程：取动物组织块→剪碎组织→用胰蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养液中（原代培养）→放入二氧化碳培养箱培养→贴满瓶壁的细胞用酶分散为单个细胞，制成细胞悬液→转入培养液（传代培养）→放入二氧化碳培养箱培养。 【详解】A、动物细胞培养时，需要适宜的气体条件，如5%的二氧化碳和95%的空气，二氧化碳用于维持培养液的pH，空气为细胞呼吸提供氧气，A正确； B、进行微载体悬浮培养时，若细胞之间接触的话，也会出现接触抑制，B错误； C、先用酶将细胞从微载体表面脱落下来，再离心收集细胞，C错误； D、干扰素主要是抗病毒、调节免疫等作用，不是用于保证无毒环境的，为了保证细胞培养的无毒条件，需对培养液和所有培养用具进行灭菌处理；保证在无菌环境下进行操作；定期更换培养液，以便清除代谢废物，D错误。 故选BCD。 48．（2025·黑龙江哈尔滨·一模）下图为全球首例非人灵长类克隆动物的培育过程，为了调节相关基因的表达，提高胚胎的发育率和妊娠率，研究人员将组蛋白去甲基化酶Kdm4d的mRNA注入了重构胚，同时用组蛋白脱乙酰酶抑制剂TSA处理了它。下列说法中错误的是（　　）    A．非人灵长类克隆动物成功率低的原因之一为供体细胞的细胞核难以完全恢复分化前的功能状态 B．应将采集到的卵母细胞培养到MII期再通过显微操作去除其核膜包被的细胞核 C．图中对于重构胚的处理使其中某些基因的甲基化程度和组蛋白的乙酰化程度增加，有利于重构胚的正常发育 D．在胚胎移植前，需要对代孕母猴注射糖皮质激素等免疫抑制剂，防止免疫排斥的发生 【答案】BCD 【分析】细胞核移植概念：将动物的一个细胞的细胞核移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育成动物个体。用核移植的方法得到的动物称为克隆动物。 【详解】A、在动物体细胞核移植中，非人灵长类动物的体细胞核移植非常困难，主要原因一方面是供体细胞的细胞核在去核卵母细胞中不能完全恢复其分化前的功能状态，这导致了胚胎发育率低；另一方面是对非人灵长类动物胚胎进行操作的技术尚不完善，A正确； B、将卵母细胞培养到MII期后进行去核操作，此时细胞核退化，出现的是纺锤体-染色体复合物，故去核的实质是去除卵母细胞中的纺锤体-染色体复合物，B错误； C、结合题意和图示操作可知，将组蛋白去甲基化和增加乙酰化，有利于重构胚的分裂和发育，使其完成细胞分裂和发育进程，C错误； D、代孕母猴在胚胎移植前应进行同期发情处理以使其与供体处于相同的生理状态，但由于受体对外来胚胎几乎不发生免疫排斥，因此不需要对代孕母猴注射免疫抑制剂，D错误。 故选BCD。 49．（2025·吉林延边·一模）科研人员利用下图所示流程培育出了乳汁中含有人凝血因子IX医用蛋白的二倍体转基因绵羊。下列相关叙述错误的是（    ）    A．从绵羊卵巢中采集的卵母细胞需要在体外培养至MⅡ期 B．进行③过程前卵母细胞通常需要进行去核处理 C．重组细胞需要置于含有95%O2和5%CO2的CO2培养箱中进行培养 D．进行⑤过程前需要利用滋养层细胞进行性别鉴定 【答案】CD 【分析】分析题图可知，A表示基因表达载体，①表示构建基因表达载体，②表示筛选含目的基因的重组细胞，③表示核移植，④表示早期胚胎培养，⑤表示胚胎移植。 【详解】A、从牛卵巢中采集的卵母细胞需要在体外培养至MⅡ期才具备与精子受精的能力，A正确； B、③过程为核移植技术，所以对移植用的卵母细胞要进行去核处理，B正确； C、重组细胞需要置于含有95%空气和5%O2的CO2培养箱中进行培养，C错误； D、子代个体的性别由重组细胞核内性染色体组成决定。由于该重组细胞的细胞核来自雌性绵羊的成纤维细胞，因此细胞内含有的性染色体为XX，最终发育成的转基因绵羊一定是雌性，在进行⑤之前不需要进行性别鉴定，D错误。 故选CD$$ 专题14 发酵工程和细胞工程 考点概览 考点01发酵工程 考点02植物细胞工程 考点03 动物细胞工程 发酵工程考点01 一、单选题 1．（2025·四川巴中·一模）我国每年产生的农业秸秆数量巨大，秸秆直接焚烧会造成大气污染、土壤损伤，绿色处理秸秆能有效减少农业废弃物，促进可持续发展。下图为发酵工程中利用水稻、玉米等农业秸秆生产柠檬酸的简要流程图。下列相关叙述正确的是（　　）    A．生产柠檬酸的黑曲霉是异养厌氧型，其优良菌种只能从自然界中筛选出来 B．发酵时罐内pH不断下降而抑制杂菌生长，因此发酵培养基不需要灭菌 C．发酵结束后，对罐内发酵液可采取适当的过滤、沉淀措施获得柠檬酸 D．利用农作物秸秆为原料进行生产可解决柠檬酸发酵消耗大量粮食的问题 2．（2025·贵州铜仁·一模）某地发生少数人吃冰激凌后腹泻的现象，推测可能是冰激凌中大肠杆菌超标（1mL自来水检测出的菌落总数不可以超过100个），于是对冰激凌进行检测。下列叙述错误的是（　　） A．在检测过程中可配制特定的培养基来鉴别是否存在大肠杆菌 B．利用活菌计数必须对冰激凌融化后形成的原液进行梯度稀释 C．在检测过程中需要设置完成灭菌的空白培养基作为对照组 D．进行检测时也可以利用细菌计数板和显微镜进行直接计数 3．（2025·河南驻马店·一模）尿素分解菌会使培养基中的酚红指示剂变红。为了从土壤中分离出尿素分解菌，使用以尿素为唯一氮源的选择培养基进行筛选，实验的具体分组和操作如下表所示。下列有关叙述错误的是（    ） 组别 具体组别 具体操作 实验组 实验组1 涂布接种的选择培养基 实验组2 涂布接种的选择培养基 实验组3 涂布接种的选择培养基 实验组4 涂布接种的牛肉膏蛋白胨培养基 对照组 对照组1 不涂布接种的选择培养基 对照组2 不涂布接种的牛肉膏蛋白胨培养基 A．对照组1与实验组1、2、3组对比以验证选择培养基是否被杂菌污染 B．实验组4与实验组1、2、3组对比以验证选择培养基是否具有选择作用 C．实验组1、2、3可分离得到尿素分解菌，实验组4菌落最多，理论上对照组无菌落 D．选择培养基中菌落的红色环带直径与菌落直径比值越小，分解尿素的能力越强 4．（2025·山东济宁·一模）在微生物的培养过程中，下列实验操作规范的是（    ） A．制作培养基的过程中先灭菌再调整pH B．微生物培养过程中可以使用平板划线法进行计数 C．使用刚果红培养基选择性培养土壤中分解纤维素的微生物 D．待培养基冷却至50℃左右时在酒精灯火焰附近倒平板制备培养基 5．（2025·山西吕梁·一模）为检测医院排放的医疗废水中是否含有对链霉素（一种抗生素）有抗性的细菌，某学习小组进行了如下实验：①配制培养基（主要成分是蛋白胨、牛肉膏、NaCl和水），灭菌后倒平板，备用；②取少量医疗废水稀释一定倍数，分别接种到三个平板上；③将接种后的三个平板置于恒温培养箱培养24～48h；④定期观察并统计平板上菌落的数量、形态和颜色等。下列有关分析错误的是（    ） A．①过程中，培养基灭菌前需要将pH一般调至酸性 B．该培养基中能为细菌提供氮源的有蛋白胨和牛肉膏 C．②过程中，接种前三个平板均需要添加等量的链霉素 D．③过程中，还需要将一个未接种的平板置于恒温培养箱培养 6．（2025·河北沧州·一模）产黄青霉菌生产青霉素的发酵流程如下图所示，其中“补料”是指补充培养基，其成分有花生饼粉、玉米浆、葡萄糖、磷酸二氢钠等。下列关于该发酵过程的叙述，错误的是（    ） A．对产黄青霉菌分离纯化时采用的接种方法是稀释涂布平板法 B．“种母培养”时采用液体培养基有利于增加产黄青霉菌的数量 C．产黄青霉菌为异养厌氧型真菌，添加的磷酸二氢钠具有多种作用 D．向主发酵罐添加pH调节液是因为环境条件会影响青霉素的形成 7．（2025·河北保定·一模）科研人员发现某个敞口被真菌M污染的培养皿中出现了大部分细菌能正常生长，唯独真菌 M 附近没有细菌生长的现象。科研人员认为这可能是真菌M产生了抑制细菌生长的物质。 为验证该猜想，科研人员做了如图所示的实验。下列有关分析正确的是（　　）    A．过程①使用了平板划线法接种真菌M， 该过程中接种环至少要灼烧4次 B．若甲、乙和丙组的滤纸片周围都出现了抑菌圈，则说明上述猜想正确 C．过程②应取平板a 中的单菌落置于培养基 b 中，其主要目的是选择培养 D．真菌M 在培养基b 中培养时，培养基中应加入琼脂 8．（2025·内蒙古阿拉善盟·一模）MRS肉汤培养基是青贮微生物常用培养基，但成本较高，难以作为青贮添加剂的主要成分开发利用。为筛选廉价培养基，研究人员分离纯化青贮微生物，并分别接种到不同培养基中培养48h，得到如图结果。下列叙述错误的是（    ）    A．应将接种青贮微生物的培养基置于适宜温度下厌氧培养 B．本实验还可用血细胞计数板对青贮微生物的活菌数进行统计 C．培养初期，青贮微生物OD值较低可能与缺乏代谢所需酶有关 D．初步判断乳清粉培养基较适合作为青贮微生物的廉价培养基 9．（2025·河北邯郸·一模）柠檬酸具有令人愉悦的酸味，入口爽快，安全无毒，被广泛用于食品和饮料中。利用发酵工程技术制备柠檬酸的流程如图所示，下列相关叙述正确的是（    ）    A．柠檬酸属于次生代谢物，过程①②的目的均为扩大培养 B．发酵罐内的发酵是工厂化生产柠檬酸的中心环节 C．利用干热灭菌箱对培养基进行灭菌是发酵工程生产中一个很重要的环节 D．发酵结束后，采取适当的过滤、沉淀措施可获得柠檬酸 10．（2025·河北承德·一模）甜酒酿（醪糟）是江南地区的传统小吃，是用蒸熟的糯米拌上酿酒酵母发酵而成的一种甜米酒，其制作流程为：浸米→蒸米→凉饭→拌酿酒酵母→发酵→检查→甜酒酿。下列有关叙述正确的是（    ） A．“蒸米”的主要目的是通过杀灭杂菌，延长甜酒酿的保质期 B．“凉饭”后再拌入酿酒酵母，可避免高温杀死发酵所需菌种 C．“发酵”时应将拌有酿酒酵母的凉饭装满密闭的容器 D．在发酵过程中酒精的浓度会持续增加，pH值会持续降低 11．（2025·河北唐山·一模）无菌操作是生物实验中一项重要的基本操作。下列过程不需要严格无菌操作的是（    ） A．传统泡菜的制作 B．酵母菌的纯培养 C．动物细胞的传代培养 D．花药离体培养 12．（2025·河北石家庄·一模）原生质体比正常植物细胞更易接受外源DNA，其制备过程主要包括取材→剪碎→酶解。下列叙述错误的是（    ） A．细胞壁可能会阻止外源DNA进入细胞 B．取材后需用酒精和次氯酸钠对材料灭菌 C．剪碎的目的是使酶与细胞充分接触 D．可用台盼蓝染液来鉴定原生质体活性 13．（2025·宁夏银川·一模）下列有关发酵工程的说法正确的是（    ） A．在发酵罐中接种菌种量越高，其K值越大 B．啤酒发酵过程中大部分糖的分解和代谢物的生成在主发酵阶段完成 C．发酵工程中，发酵结束后可采用过滤、沉淀等方法将菌体干燥，并将菌体破碎后提取单细胞蛋白 D．为了防止杂菌污染，发酵工程的中心环节是灭菌 14．（2025·天津武清·一模）堆肥指利用自然界广泛存在的微生物，将固体废物中可降解的有机物转化为腐殖质的过程。下图为堆肥处理时材料内部温度的变化曲线若要从堆肥材料中筛选出能高效降解羽毛、蹄角等废弃物中角蛋白的嗜热菌，下列相关叙述错误的是（    ）    A．微生物呼吸作用释放的热量积累，导致堆肥内部温度逐渐升高 B．与a点相比b点时微生物的数量较多，与b点相比c点时微生物种类较多 C．c点时可对堆肥材料取样并用选择培养基对微生物进行培养和筛选 D．用平板划线法分离微生物时无需对微生物样液进行稀释，可直接划线操作 15．（2025·江西赣州·一模）研究发现，给脐橙施用枯草芽孢杆菌液态微生物肥、接种丛枝菌根真菌均可提升土壤供肥能力，实现果实增产提质。下列叙述正确的是（    ） A．获得微生物纯培养物是利用发酵工程大量生产微生物肥料的重要基础 B．培养枯草芽孢杆菌需将培养基调至酸性，培养丛枝菌根真菌需调至中性或弱碱性 C．通过称量重量与体积，测定糖类、总酚、类黄酮等初生代谢物含量对比果实品质 D．除微生物肥料外，还可利用其代谢物开发微生物农药，作为化学防治的重要手段 16．（2025·福建龙岩·一模）果汁生产中常用酶解法处理以提高果汁的出汁率和澄清度等。科研人员研究复合酶（半纤维素酶和果胶酶）对费约果果汁出汁率和可溶性固形物（TSS）的影响（图1），在此基础上测定复合酶添加比例最佳时的影响数据（图2），下列叙述正确的是（　　） A．该实验的自变量是复合酶添加比例和添加量，因变量是果汁出汁率 B．该实验说明与单一酶处理相比，复合酶处理可以提高果汁出汁率和TSS C．该实验说明随着酶浓度增加，复合酶催化的反应速率加快 D．生产费约果果汁的最佳条件为复合酶添加比例2：1、酶添加量18g/L 17．（2025·福建龙岩·一模）喹啉是工业废水中的含氨污染物，易通过水体污染环境。科研人员欲从废水处理厂的活性污泥中筛选高效喹啉降解复合菌群，过程如下图。下列叙述错误的是（　　）    A．图中无机盐培养基是选择培养基，以喹啉作为唯一氮源 B．过程①接种前需对所用器具及培养基进行灭菌处理 C．过程②需要逐级提高无机盐培养基中喹啉浓度 D．过程③采用平板划线法观察并统计菌群数量 18．（2025·天津河东·一模）果酒的家庭制作与啤酒的工业化生产相比，共同点是（    ） A．发酵前都需要对原料进行灭菌 B．都需要进行菌种接种 C．都需要一定有氧环境供发酵菌种进行繁殖 D．发酵结束后都必须进行消毒以延长保存期 19．（2025·江西萍乡·一模）酸笋是我国南方地区一种非常受欢迎的食物，它具有独特的酸味和脆爽口感。在自然发酵过程中，酸笋中的乳酸菌作为主要微生物分解蛋白质产生硫化氢等物质，形成了螺蛳粉的特殊风味。下列叙述正确的是（    ） A．竹笋经过高压蒸汽灭菌后接种乳酸菌进行发酵，获得的酸笋品质更高 B．乳酸菌在线粒体中将葡萄糖分解产生的丙酮酸转化为乳酸和二氧化碳 C．可利用平板划线法对发酵液中的乳酸菌数量进行检测 D．发酵过程中乳酸积累使发酵液pH先降低后保持稳定 20．（2025·黑龙江·一模）下列有关微生物培养的相关叙述错误的是（    ） A．获得纯培养物的关键是防止杂菌污染，紫外线消毒前喷洒苯酚可加强消毒效果 B．在稀释涂布时，涂布器应灼烧灭菌后再蘸取0.1ml菌液均匀地涂布在培养基表面 C．使用后的培养基在丢弃前一定要进行灭菌处理，以免污染环境 D．通过接种环在固体培养基表面连续划线可将聚集的菌种逐步稀释到培养基表面 21．（2025·山东济宁·一模）酒酿是米酒的一种，由蒸熟的米冷却后加入酒曲发酵而成。在发酵过程中起主要作用的是酒曲中的好氧霉菌、酵母菌和乳酸菌。下列叙述正确的是（    ） A．酒酿制作过程中将米蒸熟的目的之一是杀灭杂菌 B．酒酿制作过程中产生的水主要来源于微生物无氧呼吸 C．好氧霉菌是需氧型生物，整个发酵过程要不断通入 D．将发酵温度从28℃提高到40℃，可明显缩短发酵时长 22．（2025·安徽·一模）防止杂菌污染，获得纯净的微生物培养物是研究和应用微生物的前提，也是发酵工程的重要基础。下列需要进行无菌操作的是（　　） ①葡萄酒制作完成后，打开瓶盖、盖上一层纱布，进行葡萄醋的发酵 ②将培养的酵母菌进行稀释，再利用血细胞计数板计数 ③为获得尿素分解菌，从农田中铲取土样 ④在培养基冷却凝固后，将培养皿倒过来放置、以便后续进行接种 ⑤将两种细胞去除细胞壁后获得的原生质体进行融合 ⑥对杂交瘤细胞进行克隆化培养和抗体检测 A．①③⑤ B．①④⑥ C．②③④ D．②⑤⑥ 23．（2025·黑龙江哈尔滨·一模）关于利用乳酸菌制作传统发酵食品，下列叙述正确的是（　　） A．制作泡菜的过程是无氧条件下乳酸菌单一菌种的发酵 B．制作酸奶的牛奶须经过高压蒸汽灭菌后再接种乳酸菌 C．腌制两天后，泡菜的风味逐渐显现应及时食用，此时泡菜中亚硝酸盐的含量较低 D．控制好发酵时间和温度，以避免过量乳酸影响酸奶或泡菜的口味和品质 24．（2025·河南驻马店·一模）青蒿素是传统的中药材，是治疗疟疾的重要药物。研究人员利用青蒿细胞悬浮培养技术进行工厂化生产青蒿素，实验流程和培养装置如下图所示。下列有关叙述错误的是（    ）    A．实验流程中可用果胶酶处理愈伤组织，解离细胞间的连接，有利于制备悬浮细胞 B．此装置可不受季节、耕地限制，生产原理是细胞增殖 C．装置中可增加排气管，充气管和排气管都置于溶液中 D．青蒿素是一种小分子有机物，属于次生代谢物 25．（2025·江西·一模）柑橘是江西省的重要经济水果，但在贮藏和运输过程中，由真菌引起的采后病害严重危害柑橘产业。青绿霉病是最常见的病害，从柑橘果皮中筛选出拮抗细菌是有效的防治手段。拮抗细菌的筛选过程如下，下列说法正确的是（    ）    A．样本采集时需对果皮表面进行消毒，然后将果皮样本加到清水中洗脱细菌 B．图示细菌分离使用的技术为稀释涂布平板法，该方法还可用于细菌计数但结果偏大 C．初步筛选时将细菌和青绿霉真菌共培养，测量真菌生长直径，图中a抑制效果更好 D．为进一步评估拮抗菌的效果，可以测定其培养滤液对真菌生长和繁殖的抑制效果 26．（2025·安徽滁州·一模）“葡萄美酿令人痴，一醉方休谁晓知。何日与君同畅饮，凝眸了却苦相思。”表达了诗人对葡萄美酒的喜爱以及对与友人共饮的美好期待。下列有关葡萄酒制作的叙述，正确的是（    ） A．制作葡萄酒之前，需要将发酵容器和葡萄进行灭菌处理 B．在葡萄酒的发酵过程中，发酵液中的H+浓度会有所升高 C．用带盖瓶子制作葡萄酒时，拧松瓶盖的间隔时间需相同 D．可以从以葡萄糖为唯一氮源的培养基中分离出酿酒酵母 27．（2024·湖南·一模）庆大霉素（GM）能抑制沙门氏菌的生长。研究人员为了探究LPC（用MRS培养植物乳杆菌后获得的上清液）对沙门氏菌生长的影响及作用机制，在接种沙门氏菌的平板上做了五组不同处理，实验结果如图所示。下列相关叙述正确的是（    ） A．在酒精灯火焰旁倒平板后用湿热灭菌法对培养基进行灭菌 B．需将含沙门氏菌的菌液稀释到适宜浓度后用平板划线法接种 C．MRS和GM均为对照组，分别为阴性对照和阳性对照 D．LPC抑制沙门氏菌的机制可能是因为LPC含有热稳定性高物质 28．（2025·湖北武汉·一模）腐乳是我国古代劳动人民通过微生物发酵制作而成的一种大豆食品。酵母、毛霉等微生物分泌的多种酶将豆腐中的蛋白质分解成氨基酸等风味物质,使腐乳味道鲜美。下列叙述错误的是（    ） A．参与腐乳制作的酵母和毛霉均为真核生物 B．风味物质主要在微生物的细胞质基质中产生 C．酵母和毛霉主要通过胞吐的方式分泌胞外酶 D．腐乳制作过程主要利用了微生物的有氧发酵 29．（2025·山东菏泽·一模）《释名·释饮食》记载：“豉，嗜也。五味调和，需之而成，乃可甘嗜也。”豆豉主要用黄豆通过霉菌发酵制成。下列说法错误的是（    ） A．传统方法制作豆豉是以混合菌种的液体或半固体发酵为主 B．发酵时使用煮熟的黄豆，使蛋白质变性，易于被微生物利用 C．黄豆中的蛋白质会在霉菌作用下分解成多肽及氨基酸 D．发酵时加入盐和酒可以激发出豆豉的风味，同时抑制杂菌活力 30．（2025·广东汕头·一模）硝化细菌可用于改善水产养殖水体。研究人员利用配制的固体选择培养基从污水处理厂的污泥中筛选出一株自养型硝化细菌。下列物质在该培养基中存在的可能性最小的是（　　） A．NaNO2 B．Na2CO3 C．牛肉膏 D．琼脂 31．（2025·山西·一模）酸菜是一种发酵食品，随着贮藏期延长，腐败现象时有发生。研究人员从酸菜中筛选出抑菌效果最佳的乳酸菌株L3，它在发酵过程中会产生有机酸、细菌素等。对乳酸菌L3进行纯化培养及抑菌活力测定，其活菌相对数量、抑菌圈直径及培养液pH值变化如图所示。下列分析错误的是（    ）    A．可采用抽样检测法，利用细菌计数板直接进行L3活菌数量测定 B．测培养液pH值变化时，需用液体培养基且在厌氧环境下培养菌株L3 C．菌株L3在2h进入快速增长期，24h是产细菌素的最佳发酵时间 D．通过进一步研究细菌素的特性，有望将其开发为天然食品防腐剂 32．（2025·吉林延边·一模）获得纯净的微生物培养物是发酵工程的基础。下列相关叙述中正确的是（    ） A．在实验前，需对培养皿和培养基进行干热灭菌，保证没有其他微生物的干扰 B．稀释涂布平板法统计活菌数量时，统计的菌落数一般比活菌的实际数目低 C．若利用平板划线法接种，完成平板划线后需立即将平板倒置于适宜条件下培养 D．通过观察未接种培养基表面是否有菌落，可判断接种的培养基是否起到选择作用 33．（2025·全国·一模）在造纸工业中，传统的化学制浆方法会产生大量含有木质素的废水，并且化学处理过程对环境有一定的污染。漆酶能够选择性地降解木质素，也能催化水溶蓝（一种有机物，溶于水后溶液呈现蓝色）分解成H2O和CO2。科研人员为了分离出高效降解木质素的菌株（含有漆酶），先后使用两种培养基，即以木质素为唯一碳源的培养基（甲）、在培养基甲的基础上添加水溶蓝的培养基（乙），使用的接种工具为接种环。下列相关叙述错误的是（    ） A．在造纸工业中，引入漆酶可以降低化学药剂的使用量 B．在培养基乙上生长的单菌落周围会出现大小不等的蓝色环带 C．进行接种操作时，接种工具使用前后都要进行灼烧灭菌 D．若不使用培养基甲，则获得的目的菌不一定能产生漆酶 34．（2025·安徽马鞍山·一模）科研人员利用微生物发酵技术来生产γ-CGT酶。将发酵液的相对溶氧量（DO）控制在恒定的20%、40%、60%，每隔一段时间检测菌体干重和γ-CGT酶产量，结果如下图所示。下列叙述正确的是（　　）    A．在实验前常采用干热灭菌法对操作器具和培养基进行灭菌 B．欲提高γ-CGT酶产量，相对溶氧量应控制在恒定的60% C．DO值控制在恒定的20%、40%时，该微生物在一定时间内种群数量呈“S”形增长 D．实验中种群数量达K值后，限制种群数量不再增加的主要是非密度制约因素 35．（2025·广东茂名·一模）实验小组采用鲜血琼脂平板，从环境中筛选获得高效降解血红蛋白的菌株，下列操作不恰当的是（　　） A．取样——应从屠宰场地下水道中取样 B．分离——可用平板划线法对菌株分离 C．筛选——通过溶血圈直径大小比较菌株降解能力 D．培养——利用添加琼脂的培养基大规模培养菌株 36．（2025·安徽黄山·一模）毛豆腐是徽州地区的特色美食，其发酵菌种主要是毛霉（异养需氧型）。毛豆腐制作方法是先将切好的豆腐块平整放在竹条上，每块之间留有间隙，适宜条件下放置3至5天，当豆腐表面长出一层均匀细密的绒毛，即可煎炸食用。下列叙述错误的是（    ） A．豆腐为毛霉生长提供了水、碳源、氮源和无机盐等营养物质 B．毛霉产生的蛋白酶，使蛋白质分解而易于消化吸收 C．为使毛霉发酵充分，须提供适宜的温度、湿度、无菌等条件 D．制作时每块豆腐之间留有间隙有利于毛霉菌丝的生长 37．（2025·江苏南通·一模）下图是核桃紫米酸奶的制作工艺流程，相关叙述错误的是（　　） A．核桃仁中蛋白质含量相对较高，是制作植物酸奶的良好原料 B．核桃紫米乳冷却后添加植物乳杆菌，先通气后密封发酵产生乳酸 C．酸奶灌装前进行巴氏消毒，既能防止发酵过度又能保持营养价值 D．可通过调整紫米和核桃的比例来调整核桃紫米酸奶的营养和口味 38．（2025·江苏南通·一模）解钾菌能将土壤中难溶性含钾化合物分解，转变为可溶性化合物。下表是研究人员从餐厨垃圾废液中筛选解钾细菌的培养基配方，相关叙述正确的是（　　） 成分 钾长石粉 蔗糖 Na2HPO4 CaCO3 （NH4）2SO4 NaCl 酵母膏 MgSO4·7H20 含量/g·L-1 10 10 2 1 1 0.1 0.5 0.5 A．培养基中的钾长石粉属于可溶性钾，为目的菌提供无机盐 B．按表中配方配制好的培养基应先灭菌再将pH调至弱碱性 C．餐厨垃圾废液梯度稀释后涂布于选择培养基表面倒置培养 D．应选择透明圈直径与菌落直径比值较小的菌落进一步进行纯化 39．（2025·河南安阳·一模）酸乳是牛奶在乳酸链球菌和保加利亚乳杆菌等作用下发酵形成的。它具有爽口的酸味，且极易消化吸收，有调理肠道的作用，所以深受人们欢迎。其制备工艺为鲜乳→杀菌→接种→发酵→后熟→成品。下列相关叙述正确的是（　　） A．酸乳具有酸味的原因是含有乳酸，发酵产生乳酸的第二阶段伴随少量ATP的生成 B．酸乳有调理肠道的作用是因为后熟过程未经高温处理，活性乳酸菌可改善肠道微生态 C．用于鲜乳的原液首先必须进行高温处理，其目的是消毒，以保证接种后的正常发酵 D．平板划线法和稀释涂布平板法均可获得单一菌种，后者统计结果可能比实际值偏大 40．（2025·福建厦门·一模）科学家从海南红树林底泥中分离到具有抗菌活性的放线菌A．为探究不同培养基对A抗菌活性的影响，他们开展了下列实验：步骤①将A置于下列六种培养基上进行培养；步骤②分别对六种培养基培养产物进行研磨，得到粗提液；步骤③将粗提液滴加到大小相同的滤纸片上，并置于长满金黄色葡萄球菌的平板上，一段时间后测量抑菌圈直径。结果如图所示。下列叙述错误的是（　　） A．分离纯化放线菌A时可使用稀释涂布平板法 B．步骤①中的无关变量有培养温度、培养基成分等 C．步骤③滴加到滤纸片上的粗提液应完全等量 D．GS和YG培养基诱导A产生抗菌物质的能力最强 41．（2025·云南昆明·一模）某除草剂（含氮有机物）不易被降解，且长期使用会导致土壤污染。为修复被该除草剂污染的土壤，科研人员按照下图程序选育能降解该除草剂的细菌，已知含该除草剂的培养基不透明。下列叙述错误的是（    ）    A．从长期施用该除草剂的农田中获取土壤样品有利于获得目的菌 B．完成Ⅰ的操作，接种环至少需进行6次灼烧灭菌 C．Ⅱ过程的培养基上生长的微生物都是以该除草剂作为氮源的微生物 D．Ⅱ中透明圈直径/菌落直径的比值越大，菌落中菌株降解除草剂的能力越强 42．（2025·江苏·一模）如图是老陈醋的生产流程，下列相关叙述正确的是（　　） A．蒸熟的高粱米应先加入大曲再冷却 B．“糖化”是将高粱中的淀粉等大分子氧化分解为小分子，为酒精发酵提供原料 C．“醋醅”中含有的醋酸菌，是一种异养的单细胞真核生物 D．“醋酸发酵”步骤中每天翻料两次，可为醋酸菌提供更多氧气 二、多选题 43．（2025·河北石家庄·一模）蛭弧菌能使污水中的嗜水气单胞菌（异养型）裂解，将其接种在长满嗜水气单胞菌的平板上会出现噬菌斑。某兴趣小组将嗜水气单胞菌接种到固体培养基上，培养形成薄层，再接种采集的污水用以分离蛭弧菌。下列叙述错误的是（    ） A．可用干热灭菌法对平板进行灭菌 B．可用涂布平板法接种嗜水气单胞菌 C．出现噬菌斑一定是蛭弧菌作用的结果 D．污水可为自然环境中的嗜水气单胞菌提供碳源 44．（2025·河北承德·一模）科研人员筛选抗链霉素的大肠杆菌突变株的实验过程如下： ①将灭菌的空培养皿斜放（一边垫起），倒入10 mL不含药物的底层培养基（如图甲所示） ②待培养基凝固后将培养皿平放，再倒入10 mL含有链霉素的上层培养基，使其迅速冷却（如图乙所示） ③将经诱变处理后的大肠杆菌悬液0.1 mL接种到图乙所示平板上 ④将平板倒置于恒温培养箱中培养2天，观察平板上大肠杆菌的生长情况 下列叙述正确的是（    ） A．可采用高压蒸汽灭菌法对培养皿和培养基灭菌 B．随着图乙中箭头方向，平板上所含链霉素的量逐渐增大 C．据图丙可知，科研人员利用涂布器将大肠杆菌悬液接种于平板上 D．选择图丙平板上1～2个生长在平板左侧的单个菌落继续培养 45．（2025·山东青岛·一模）发酵工程能生产各种酶制剂，如通过黑曲霉发酵能生产淀粉酶。下列说法正确的是（    ） A．深层通气液体发酵可提高淀粉酶的产量 B．利用黑曲霉的发酵过程也能生产酱油和柠檬酸 C．平板划线法分离到的单菌落可直接接种到发酵罐发酵 D．用过滤、沉淀等方法获得产品是发酵工程的中心环节 46．（2025·黑龙江吉林·一模）果酒是以水果为原料，经微生物发酵而成的低度饮料酒，而乳酸菌是天然参与到果酒发酵中的重要菌群。乳酸菌的生长繁殖与代谢产物对发酵过程及产品品质都具有极其重要的影响。利用多种酵母与乳酸菌混合发酵可以增加葡萄酒中酚类物质含量与香气成分。下图为以香蕉为原料采用两种不同发酵处理过程中酵母菌和乳酸菌生物量的变化。下列相关说法合理的是（    ）    A．香蕉果汁发酵过程分别利用酵母菌和乳酸菌的需氧型和厌氧型代谢特点 B．发酵过程中取样检测两种微生物数量变化时可用平板划线法、稀释涂布平板法等方法 C．自然发酵过程中，乳酸菌先快速增殖，可能与其对维生素等物质的吸收速率高有关 D．两种发酵处理下，酵母菌和乳酸菌的生长规律有差异，推测发酵过程中二者存在种间竞争 47．（2025·山东济宁·一模）野生型大肠杆菌可在基本培养基上生长，营养缺陷型大肠杆菌则需在基本培养基中添加某些物质才能生长。A菌株为甲硫氨酸和生物素缺陷型突变体，B菌株为苏氨酸、亮氨酸、硫胺素缺陷型突变体，C菌株为亮氨酸、甲硫氨酸和硫胺素缺陷型突变体。A和B菌株混合培养可获得野生型菌落。链霉素可以抑制A、B菌株分裂，科研人员用B菌株与经链霉素处理的A菌株混合培养，能得到野生型菌落；用A菌株与经链霉素处理的B菌株混合培养，不能得到野生型菌落。相关分析合理的是（    ） A．菌株A和B都是由野生型菌株基因突变而来 B．实验中所用的基本培养基应不含上述五种营养物质 C．野生型菌落的产生是DNA从A菌落转移到B菌落的结果 D．将A和C菌株混合培养可以得到野生型菌落 48．（2025·山东菏泽·一模）庆大霉素（GM）能抑制沙门氏菌的生长。研究人员为了探究LPC（用MRS培养基培养植物乳杆菌后获得的上清液）对沙门氏菌生长的影响及作用机制，在接种沙门氏菌的平板上做了五组不同处理，实验结果如图所示。下列说法正确的是（    ） A．需将含沙门氏菌的菌液稀释到适宜浓度后用平板划线法接种 B．设置MRS是为了排除MRS培养基成分对实验结果的影响 C．Heat-LPC与LPC对比结果说明LPC的热稳定性比较强 D．LPC抑制沙门氏菌的机制可能是因为LPC含有酸性物质 49．（2025·江西新余·一模）聚羟基脂肪酸酯（PHA）是由嗜盐细菌合成的一种胞内聚酯，它具有类似于合成塑料的理化特性，且废弃后易被生物降解，可用于制造无污染的“绿色塑料”。某科研团队拟从含盐量高的餐厨垃圾渗沥液处理系统中筛选分离出PHA合成能力较强的耐盐菌株，流程图如下。下列说法正确的是（    ） 注：乙培养基中加入尼罗红，尼罗红是细胞内储存的脂类物质的荧光染色剂，在紫外光的照射下可显示红色。 A．配制甲培养基时可适当提高培养基的盐浓度，接种后应置于摇床中振荡培养 B．乙属于鉴别培养基，且采用平板划线法进行接种 C．①过程是扩大培养，②过程中应挑选有红色荧光的菌落进行培养 D．可用诱变或基因编辑等方法选育PHA合成能力更强的耐盐菌株 50．（2025·湖南岳阳·一模）鱼茶是一种传统特色食品，味酸而微咸，富含多种必需氨基酸。鱼茶的发酵菌群主要是乳酸菌，如下图是某同学绘制的鱼茶发酵过程中各菌种数量及发酵液pH的变化曲线。下列叙述不正确的是（    ）    A．传统鱼茶制作需严格灭菌 B．乳酸菌发酵时积累NADH导致pH变小 C．醋酸菌和酵母菌消失的原因都是因为氧气已耗尽 D．利用显微镜直接计数可快速直观检测微生物数量 三、非选择题 51．（2025·山西·一模）维生素K2在预防骨质疏松、心血管疾病等方面具有重要作用。科研人员以解淀粉芽孢杆菌（GSA-184）为研究对象，通过优化发酵工艺，提高了维生素K2的产量。请回答下列问题： (1)从土壤中筛选芽孢杆菌时，利用的培养基成分含有酵母浸粉、蛋白胨、NaCl和水等。其中蛋白胨提供的主要营养为 和维生素等。 (2)科研人员进行了优化培养基碳源的实验，实验结果如右图所示。据图判断，若对菌株GSA-184扩大培养，所用培养基的最佳碳源是 ；若想大量获取维生素K2，所用培养基的最佳碳源是 。 (3)科研人员探究了菌株GSA-184在不控制pH和控制pH为7.0条件下的发酵情况，实验结果如图甲和图乙所示。两种条件下的溶解氧在发酵3h内从100%附近急剧下降到2%附近，说明 ；在图甲中，发酵80h后溶解氧开始从0%附近逐渐上升，可能的原因是 。对比图甲和图乙说明， 条件下有助于维持菌体的活性，从而提高维生素K2产量。 52．（2025·山东青岛·一模）绿花百合生长在海拔1400米至2250米的山坡林下，花呈绿白色，气味芳香，观赏性强，具有较高的研究和开发利用价值，是国家二级重点保护野生植物。 (1)绿花百合所在生物群落中决定地上植物分层的环境因素主要是 ；决定植物地下分层的环境因素则是 等。绿花百合除观赏外，它的鳞茎也可供药用，这体现了生物多样性的 价值。 (2)百合叶螟会在百合叶子背面产卵，导致叶子出现褐色的斑点，影响其生长和美观。调查虫卵密度的常用方法是 。百合叶螟大量繁殖会导致百合大量死亡，从生态平衡的角度分析，生态系统的 平衡受到破坏。 (3)研究小组研究了百合叶螟种群数量与被捕食率、补充率的关系，模型如图所示。被捕食率是指百合叶螟被其天敌捕食的比率；补充率是指在没有被捕食的情况下，百合叶螟增长的比率。当其种群数量介于m与n之间时，种群数量会逐渐稳定在 （填“m”或“n”），判断依据是 。 (4)某研究小组从百合生长的土壤中分离到一种单细胞真菌，配制了5mL样液，对样液进行100倍稀释后，用血细胞计数板对其进行计数，结果如图。样液中真菌的个数约为 个。 53．（2025·宁夏银川·一模）尿素含氮量高，化学性质相对稳定，是现代农业生产中一种重要的氮肥，但若不经细菌的分解，就不能更好地被植物利用，某科研小组为了将土壤中分解尿素的细菌纯化培养，进行了如下操作，请回答相关问题： 成分 KH2PO4 Na2HPO4 MgSO4·7H2O 葡萄糖 尿素 琼脂 含量（g） 1.4 2.1 0.2 10.0 1.0 15.0 操作将上述物质溶解后，用蒸馏水定容至1000毫升 (1)上表是尿素分解菌的选择培养基配方，选择培养基是指 。本实验中有两组对照，一组是未接种的牛肉膏蛋白胨培养基平板和选择培养基平板，另一组是已接种的牛肉膏蛋白胨培养基平板和选择培养基平板。设置前一组的平板上如果 ，说明培养基在使用前未被杂菌污染；后一组的平板上如果 ，可以说明选择培养基具有选择作用。 (2)将5g土壤溶于45mL无菌水，再稀释倍，按图[    ] （填数字及名称）接种方式将0.1mL样品接种到3个培养基上，统计菌落数目为134、131、137，据此可得出每克土壤中的纤维素分解菌活菌数约为 个。    (3)分解尿素的细菌能合成 ，催化尿素分解产生的可以作为细菌生长的氮源。如果培养基中加入了酚红指示剂，尿素分解的产物会使培养基的pH升高，酚红指示剂将变红，根据功能划分该培养基属于 培养基。 (4)土壤中的某些固氮菌可以利用空气中的氮气作为氮源（如圆褐固氮菌能将大气中的氮气转化为，请设计实验进一步确定平板上分离得到的细菌是否是固氮菌。（写出简要思路及预期结果） 。 54．（2025·江西·一模）刺梨是一种落叶灌木，其果实富含维生素C（VC）、维生素P和超氧化物歧化酶（SOD），VC含量是苹果的800倍，被称为“维生素C大王”。为提高刺梨的经济价值，研究人员以刺梨果实为原料制备刺梨果醋，工艺流程如下： 将新鲜成熟的刺梨果清洗干净→切块、榨汁、过滤、酶解→加入白砂糖、并加入活化酵母菌→Ⅰ阶段发酵→直接加入一定量活性醋酸菌→Ⅱ阶段醋酸发酵→处理→装罐→刺梨果醋。 回答下列问题： (1)酶解时，加入的酶是 ；Ⅰ阶段发酵过程中，需定期排气的原因是 。判断Ⅰ阶段发酵结束的主要指标是 。 (2)Ⅱ阶段醋酸发酵中，每日2次彻底搅拌发酵液，搅拌的目的是 。Ⅱ阶段醋酸发酵结束后需经“处理”才能装罐，“处理”主要指 。 (3)实验中，在酒精发酵第7d及醋酸发酵第3~7d取发酵样液，分别命名为原汁、果酒、Ⅱ-3d、Ⅱ-4d、Ⅱ-5d、Ⅱ-6d、Ⅱ-7d。如图为不同发酵阶段刺梨发酵液的总酸含量和pH变化。果酒发酵过程中的pH变化较小，这是因为 ，在醋酸发酵0~3d中，总酸含量增加幅度小，可能原因是 。    55．（2025·河北沧州·一模）辛基酚(OP)是一种重要的精细化工原料和中间体，其生物毒性、激素活性及生物富集性均得到了国内外研究者的广泛证实，给人类健康和生态安全带来了巨大威胁。OP多存在于工业污泥、污水中。某实验小组欲利用生物方法处理污泥中的OP，他们从污水处理厂的生活污泥中，经过不断重复的污泥驯化和筛选工作，分离出具有OP降解能力的菌种，并命名为TW30。回答下列问题： (1)OP进行生物降解的优势是 (答两点)。 OP在城市污泥中的生物降解活性会受到 (答两点)等多方面因素的影响。所以，控制不同的条件，多角度的研究OP的生物降解十分有必要。 (2)在进行污泥的驯化中，需将采集的活性污泥沉降半小时，然后取1mL上清液加入到装有9mL 的试管中，以此类推，分别制成101、102、103、104、105不同稀释浓度的菌悬液，该方法称为 法。分别用灭菌的移液枪吸取不同稀释浓度的菌悬液，涂布于预先标号的固体培养基上，用无菌的玻璃涂布棒在培养基平板表面轻轻地涂布均匀，获得单菌落。此方法可用于计数，其原理是 。使用后的培养基应 处理后，才能扔掉，目的是 。 (3)4-t-OP(含OP物)在水中的溶解度极低，实验小组将配制浓度为5mg/L的无机盐溶液分为三组，分别添加等量的丙酮、丙酮和4-t-OP混合液以及4-t-OP的过饱和溶液，再按2%的体积分数投加菌悬液，每12h测OD370值(波长为370nm下的光密度测量值，OD值越大代表菌体数量越多)，结果如图所示。本实验说明菌株TW30无法以 为唯一碳源生长，而在4-t-OP过饱和溶液及4-t-OP+丙酮培养液中却生长良好，可能原因是TW30菌能以 为唯一碳源生长，且对其利用率较高； TW30在4-t-OP+丙酮下生长最好，由此得出 。 56．（2025·江西上饶·一模）牛和羊的瘤胃中生活着多种微生物，其中许多微生物能分解尿素。某研究小组欲从瘤胃内筛选出能高效降解尿素的细菌，设计了如下实验。请分析并回答下列问题： 实验步骤： Ⅰ、取样：从刚宰杀的牛的瘤胃中取样，将样品装入事先灭过菌的锥形瓶中。 Ⅱ、培养基的配制和灭菌： 配制全营养LB固体培养基。配方：水、蛋白胨、酵母提取物、NaCl、琼脂糖（一种凝固剂）。配制尿素固体培养基。配方：水、葡萄糖、NaCl、K2HPO4、尿素、琼脂糖。 Ⅲ、制备瘤胃稀释液并接种，如下图1所示。 Ⅳ、在无氧条件下进行微生物的培养、观察与计数。 (1)全营养LB固体培养基和尿素固体培养基都含有微生物生长所需的基本营养物质，除水外还有 。（至少答两点） (2)该小组采用 法对瘤胃中分解尿素的细菌进行分离和计数。在无菌条件下，利用该方法进行分离计数时，需要用到图2中的实验器材有 。 (3)为检测该培养基灭菌是否彻底，应采用的检测方法是 。为了判断尿素培养基是否具有选择作用，实验时还需要同时接种全营养平板，如果同一浓度梯度下，尿素培养基上的菌落数 （“大于”、“等于”或“小于”）全营养培养基上的菌落数，则说明尿素培养基具有选择作用。 (4)为了避免混淆，本实验中使用的平板需要在培养皿的 （“皿盖”或“皿底”）做好标记。然后在 （“18~25℃”或“25~30℃”或“30~37℃”）的恒温培养箱中需培养1-2d，每隔24h统计一次菌落数目，选择菌落数目稳定时的记录作为结果，其目的是 。 (5)若将最后一个试管中的稀释液分别涂布到3个尿素平板上培养，培养后平板上出现的菌落数如图1所示，则5mL瘤胃样品中含有目标活菌数约为 。该方法统计获得的菌落数比实际的活菌数 ，原因是 。 57．（2025·广东深圳·一模）苦草是一种适应能力强的沉水植物，可以有效修复受多环芳烃（PAHs）污染的沉积物，回答下列问题： (1)苦草富集的内生菌能促进PAHs的分解，降低PAHs对苦草的毒害，而苦草可以向内生菌提供养料，推测内生菌与苦草之间的种间关系是 ，二者相互作用并不断演化的过程称为 。 (2)为研究苦草分解PAHs的机制，研究人员开展了如下实验。 ①选取多株长势优良的苦草，并重点检查苦草的 （填部位），避免采集过程的影响。 ②将处理后的苦草分成三组，对苦草根表面和沉积物进行下表中的处理，根据整个实验分析，推断表格中a和b的处理分别是 。 处理组 苦草根表面 沉积物 Ⅰ 不灭菌 灭菌 Ⅱ 灭菌 不灭菌 Ⅲ a b ③在三种处理条件下分别进行PAHs分解的模拟实验，15天后所测得结果如图，据图分析， （填“苦草根表面”或“沉积物”）的微生物在PAHs降解过程中发挥着更大的作用。根据实验结果，从种间关系的角度提出进一步研究的假说 。 (3)综合上述分析，从生态学的角度就增强PAHs污染修复效果提出合理方案 。 58．（2025·安徽马鞍山·一模）脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON）具有一定的致癌性，DON广泛存在于谷物类原料及其制品中。为筛选具有高效降解DON能力的微生物，科研人员进行了相关实验，部分流程为：土壤稀释液→MSD培养基富集培养→筛选→分离→纯化→鉴定。回答下列问题。 (1)富集培养时，以DON为唯一碳源的MSD培养基从功能上属于 。科研人员通过平板划线法将培养液中的微生物接种在固体培养基上，实验操作进行连续划线的目的是 。 (2)通过筛选获得了由两种微生物组成的混合菌体。为了鉴定两种微生物，科研人员对两者16SrDNA序列进行PCR扩增。在PCR反应体系中加Mg2+作用是 。对PCR扩增结果进行凝胶电泳分析，出现多种条带，可能原因是 。 (3)改进实验后，结果显示该混合菌体由Y1和S1两种微生物组成。为明确DON被降解的原因，科研人员提出一种假设：混合菌体分泌了相关物质将DON降解。请设计实验验证以上假说，写出实验思路。 。 (4)实验表明混合菌体分泌了相关物质将DON降解。当科研人员将Y1和S1单独接种在DON培养基上时，发现两者均不能很好的降解DON，推测其原因是 。 植物细胞工程考点02 一、单选题 1．（2025·贵州铜仁·一模）离心技术在生物学研究中应用广泛。下列有关教材实验中离心目的叙述错误的是（　　） A．采取逐渐提高离心速率的方法可以分离出不同大小的细胞器 B．离心后通过区分试管中DNA条带位置可证明DNA复制方式 C．利用离心技术诱导不同植物的原生质体融合可获得杂种细胞 D．DNA粗提取实验利用高速离心可在上清液收集粗提取的DNA 2．（2025·山西·一模）1958年，美国科学家斯图尔德取胡萝卜部分韧皮部，放入含有植物激素、无机盐和糖类等物质的培养基中培养，最终长成了一株新的植株，如图所示，①～⑥表示过程。下列叙述错误的是（　　）    A．①所取的韧皮部组织要进行严格灭菌，防止杂菌污染 B．②为脱分化，使已分化的细胞失去其特有的结构和功能 C．经②③形成不定形的薄壁组织团块，该过程一般不需要光 D．生长素与细胞分裂素的使用比例会影响细胞的发育方向 3．（2025·内蒙古阿拉善盟·一模）紫杉醇是一种重要的抗癌药物，主要来源于红豆杉属植物。为了提高紫杉醇的产量，研究人员利用植物细胞培养技术进行生产，部分流程如图。下列叙述正确的是（    ） A．激素的种类、浓度和比例等会影响过程① B．生产过程中需要对外植体作彻底的灭菌处理 C．紫杉醇在细胞内大量积累有利于提高其产量 D．该生产过程利用的原理是植物细胞的全能性 4．（2025·山东青岛·一模）野生大豆的SAMS基因具有提高抗逆性的作用。水稻是一种盐敏感型作物，为提高水稻的抗盐碱胁迫能力，研究者将野生大豆的SAMS基因转入水稻细胞内，从而培养出转基因水稻株系，具体过程如图。下列说法错误的是（    ） A．图示过程中发生了两次转化 B．Ⅰ和Ⅲ都需使用固体培养基 C．Ⅰ中的筛选可使用PCR技术 D．获得的转基因水稻苗都具备抗盐碱能力 5．（2025·河北石家庄·一模）芸薹（2n＝20）与黑芥（2n＝16）杂交，子代经人工诱导染色体数加倍形成芥菜（4n＝36），如图为培育过程中检测到的部分细胞相关数据，a~f代表不同种类的细胞。下列叙述正确的是（    ）    A．b一定为芸墓的花粉细胞 B．芥菜中一定能检测到无叶绿体的e C．f中一定存在同源染色体的互换 D．若用体细胞杂交技术培育芥菜，需选择a和c 6．（2025·河北唐山·一模）无菌操作是生物实验中一项重要的基本操作。下列过程不需要严格无菌操作的是（    ） A．传统泡菜的制作 B．酵母菌的纯培养 C．动物细胞的传代培养 D．花药离体培养 7．（2025·广东梅州·一模）在愈伤组织生芽过程中，CK（细胞分裂素）通过ARRs（A）基因和WUS（W）基因起作用。现将A基因功能缺失但正常表达W基因的突变体（突变体a）、缺乏A基因但能过量表达W基因（材料甲）和野生型三组愈伤组织在高CK培养基中培养，三组愈伤组织分化生芽的比例如图，由上述实验结果不能得出的结论是（    ）    A．A基因在愈伤组织分化生芽的过程中起作用 B．W基因的表达产物调控A基因的表达 C．A基因功能缺失但正常表达W基因不能促进生芽 D．过量表达W基因可使生芽时间提前 8．（2025·江西赣州·一模）下列关于菊花的组织培养及幼苗移栽的叙述，错误的是（    ） A．MS培养基的碳源一般用蔗糖而不用葡萄糖，以减少微生物污染 B．MS培养基、NAA溶液、6-BA溶液均可配制成母液，以减少称量的误差 C．接种好外植体的锥形瓶应先置于18~22℃的培养箱中黑暗培养一段时间 D．移栽前将试管苗置于装有消过毒的蛭石的无菌箱中恒温培养 9．（2025·福建龙岩·一模）DHA俗称脑黄金，是构成人脑神经细胞膜的成分，若摄入不足会造成心脑血管方面的疾病。科研人员利用富含DHA但生长缓慢的绿色巴夫藻和不含DHA但生长迅速的四鞭藻，培育出DHA含量高又生长迅速的融合藻株，下列有关培育过程的叙述正确的是（　　） A．细胞融合之前必须用胰蛋白酶处理两种藻，获得有活力的原生质体 B．两种原生质体融合成功的标志是观察到细胞核融合 C．细胞融合实验完成后，融合体系中含有的细胞类型有3种 D．通过第一次筛选获得的融合藻株还需进行克隆化培养和DHA检测 10．（2025·甘肃兰州·一模）植物细胞工程中，原生质体融合后形成愈伤组织；但部分愈伤组织在生根阶段褐化死亡。以下分析错误的是（    ） A．获得原生质体时需使用胰蛋白酶处理 B．褐化可能是细胞中酚类物质氧化导致的 C．脱分化阶段不需要光，再分化阶段需要光 D．杂种细胞再生细胞壁是融合成功的标志 11．（2025·四川内江·一模）花椰菜（2n=18）种植时容易遭受病菌侵害形成病斑，紫罗兰（2n=14）具有一定的抗病性。科研人员利用植物体细胞杂交技术培育具有抗病性状的花椰菜新品种如图1所示。通过蛋白质电泳技术分析了亲本及待测植株中某些特异性蛋白，结果如图2所示。下列有关叙述正确的是（    ） A．图1培育杂种植株所用的技术体现了细胞膜具有一定流动性原理和细胞核的全能性 B．②过程可用电融合法或灭活病毒诱导细胞融合，杂种细胞再生出细胞壁是融合成功的标志 C．若只考虑两两融合，图1培育出的植株体细胞中最多含有72条染色体 D．可将病菌悬浮液均匀喷施于图2中的3和5植株叶片上，一段时间后，测定病斑面积占叶片总面积的百分比，筛选出抗病性强的杂种植株 12．（2025·江西萍乡·一模）“白雪公主”草莓被誉为“水果皇后”，具有广阔的市场前景和较高的经济价值。草莓是无性繁殖的植物，感染病毒后容易传染给后代。病毒在草莓体内逐年积累，会导致产量降低，品质变差。如图是育种工作者选育高品质“白雪公主”草莓的过程。下列叙述正确的是（    ） A．获得外植体时需要用纤维素酶和果胶酶处理草莓植株 B．选用茎尖做外植体是因为其含病毒极少甚至不含病毒 C．培育无病毒草莓苗时不用控制培养基中植物激素的比例 D．常需要用95%的酒精对愈伤组织消毒后再诱导其再分化 13．（2025·吉林延边·一模）关于生物工程技术过程中出现细胞融合的操作，下列叙述正确的是（    ） A．植物体细胞杂交技术，可直接用聚乙二醇处理两种植物细胞进行膜融合 B．单克隆抗体制备技术，两两融合的细胞都能在选择培养基上存活 C．动物体细胞核移植技术，融合细胞可直接移植到受体母牛子宫内获得克隆牛 D．体外受精技术，常以在显微镜下观察到雌、雄原核或两个极体作为受精的标志 14．（2025·河南驻马店·一模）青蒿素是传统的中药材，是治疗疟疾的重要药物。研究人员利用青蒿细胞悬浮培养技术进行工厂化生产青蒿素，实验流程和培养装置如下图所示。下列有关叙述错误的是（    ）    A．实验流程中可用果胶酶处理愈伤组织，解离细胞间的连接，有利于制备悬浮细胞 B．此装置可不受季节、耕地限制，生产原理是细胞增殖 C．装置中可增加排气管，充气管和排气管都置于溶液中 D．青蒿素是一种小分子有机物，属于次生代谢物 15．（2025·江西·一模）由于花椰菜杂种优势在提高花椰菜产量方面发挥着巨大的作用，而利用细胞质雄性不育系生产杂交种子，可以简化制种程序。利用原生质体非对称融合技术比较容易实现胞质雄性不育基因的转移，某研究利用该技术成功获得了含有胞质雄性不育基因的花椰菜植株，制作流程如下，下列说法错误的是（    ）    注：UV处理可以随机破坏染色体结构，使其发生断裂、丢失等，使细胞不再分裂 A．原生质体非对称融合技术使得杂种植株性状更接近于供体植株 B．②过程的原理是细胞膜具有一定的流动性，常用PEG融合法 C．培养一段时间后可通过观察叶绿体初步判断是否为异源原生质体 D．为鉴定再生植株成功获得细胞质雄性不育基因，可利用PCR进行鉴定 16．（2025·江西·一模）下列关于细胞工程的叙述，正确的是（    ） A．小麦胚经诱导形成幼苗体现了植物细胞的全能性 B．菊花组织培养中三次更换的培养基成分和目的相同 C．动物体细胞核移植的受体细胞必须是M Ⅰ 期的卵母细胞 D．胚胎干细胞分化产生的不同类型细胞中的mRNA有差异 17．（2025·福建厦门·一模）板蓝根（2n=14）具抗菌等作用。某课题组以甘蓝型油菜（2n=38）与板蓝根作为原材料，通过体细胞杂交培育了抗病菌的板蓝根-油菜杂交种。部分杂交种细胞染色体组成以及分裂过程中细胞两极染色体数目占比如表所示，下列叙述正确的是（　　） 杂交种 体细胞染色体数 减数分裂Ⅰ后期细胞两极染色体数目比的细胞占比（%） 26:26 28:24 23:29 27:25 其它 AS1 52 63.4 10.6 7.2 14.8 0.0 AS6 52-62 32.3 9.6 8.2 11.0 38.8 AS7 52-58 40.3 9.6 7.2 12.5 30.5 A．可以用PEG或灭活的病毒诱导板蓝根细胞和油菜细胞融合 B．板蓝根—油菜杂种AS1属于二倍体，体细胞中有两个染色体组 C．若要将获得的AS1、AS6和AS7等杂交种作为有性杂交的亲本，最好选择AS1 D．ASI有10.6%的细胞两极染色体数目比为28：24，可能是有部分染色单体未分离 18．（2025·广东汕头·一模）某团队通过植物组织培养技术开展东湖菊花种苗快速繁殖及脱毒研究，打造“汕头金菊”产业名片。若取菊花茎段进行组织培养，茎段未能诱导出愈伤组织，其原因不包括（　　） A．茎段接种时倒插 B．激素配比不合理 C．外植体消毒过度 D．培养时遮光处理 19．（2025·山西·一模）生菜是我们餐桌上的常见蔬菜，而生菜原生质体的研究，可用于基因功能探索、信号转导研究等多个领域。2024年12月，我国某大学研究团队通过优化主要影响因素，成功建立了从生菜茎尖组织等获得高产高活力原生质体的方法，流程如下。下列叙述错误的是（    ） A．茎尖组织的细胞壁较薄，纤维素含量较低，利于去壁 B．用酶解法去壁时，主要用到的酶通常是纤维素酶和果胶酶 C．只要对原生质体混合液不断过滤即可获得纯净的原生质体 D．获得的原生质体需置于等渗溶液中，是为保证其活力基本稳定 20．（2025·吉林延边·一模）红豆杉是濒危植物，其树皮产生的紫杉醇对癌症有一定的疗效。下图是植物组织培养和细胞培养的流程图，图中②为愈伤组织，通过B过程可最终产生新的植株。通过C过程可产生大量细胞。下列相关叙述中正确的是（    ） A．A和B过程所用的培养基的物理性质及成分均相同 B．②是不定形的薄壁组织团块，既能分裂又能分化 C．培养过程中所用的培养基，需添加动物血清等成分 D．获得④⑤的过程，均利用了植物细胞具有全能性的原理 21．（2025·河北沧州·一模）大丽花为菊科大丽花属，是多年生草本植物。大丽花为世界名花之一，除具观赏价值外，还具有药用价值。大丽花在栽培过程中易受病毒感染，造成品质退化。研究小组尝试通过植物组织培养技术获得脱毒苗，操作流程如图所示。下列相关叙述正确的是（　　）    A．应选取大丽花植株无病毒的茎尖作为外植体，并用酒精溶液浸泡30min B．过程①为再分化，目的是使细胞失去原特有的结构和功能，该过程无需光照 C．过程②的实质是基因选择性表达，该过程可能会发生基因突变或基因重组 D．2号和3号培养基中细胞分裂素与生长素用量的比值分别为等于1和大于1 22．（2025·陕西西安·一模）如图表示植株A(杂合子Aa)和植株B培育植株①②③④⑤的过程，下列说法正确的是（　　） A．培育植株①的过程为单倍体育种，获得的植株为纯合子 B．选择植物的愈伤组织进行诱变处理获得优质的突变体③，未体现细胞的全能性 C．通常在等渗的培养液中，采用化学法、物理法或灭活的病毒诱导原生质体融合 D．正常情况下，植株①②④⑤与植株A基因型相同的概率分别是0、0、1、0 23．（2025·山东枣庄·一模）下列关于细胞工程的说法正确的是（　　） A．体外培养的动物细胞形态相比体内正常细胞可能会发生改变 B．作物脱毒苗培养时先诱导愈伤组织生根，再诱导生芽 C．iPS细胞都是通过将外源基因导入体细胞获得的 D．离心法收集细胞只能用于传代培养细胞的收集 24．（2025·云南曲靖·一模）下列关于植物组织培养技术和动物细胞核移植技术的说法，错误的是（    ） A．两项技术均说明细胞具有全能性 B．两项技术均可用于濒危物种的保护 C．植物细胞全能性表达需要离体、一定的营养物质、植物激素等条件 D．去核的受体卵母细胞中可能含有促进供体细胞核表达全能性的物质和条件 25．（2025·云南昆明·一模）紫草素是一种紫红色萘醌类天然色素（），具有抗炎、免疫抑制等作用，主要在紫草根部产生。下图为紫草素的提取流程图。有关叙述正确的是（    ） A．将灭菌处理后紫草外植体的1/3-1/2正向插入无菌的培养基中 B．过程①的培养基中需添加生长素、细胞分裂素、蔗糖、血清等 C．利用上述方法获取紫草素可以保护植物资源 D．上述获取紫草素的过程体现了植物细胞的全能性 26．（2025·广东珠海·一模）在现代生物学工程中常使用“杂交”技术，下列叙述错误的是（    ） A．植物体细胞杂交培育新物种原理是基因重组 B．动物体细胞杂交技术可用于生产单克隆抗体 C．DNA分子杂交可检测目的基因是否发生突变 D．抗原-抗体杂交可检测是否感染病原微生物 27．（2025·河南安阳·一模）阿尔茨海默病（AD）是一种复杂的神经退行性疾病，β-淀粉样蛋白在大脑中的积累和沉积是AD发病和发展的主要因素。科研人员将蛋白酶与单克隆抗体结合制备了催化性抗体，同时它还具有免疫活性，微量使用对AD就有一定的治疗效果。下列相关叙述正确的是（　　） A．杂交瘤细胞制备时可使用灭活病毒、高Ca2+—高pH诱导细胞融合 B．杂交瘤细胞产生的单克隆抗体只能从生物体的腹腔中大量提取 C．催化性抗体效果显著的原因为单克隆抗体特异性强、酶有高效性 D．杂交瘤细胞传代培养过程中会发生细胞贴壁现象及接触抑制现象 28．（2025·河南安阳·一模）在植物的改良过程中，通过原生质体融合进行植物体细胞杂交已成为产生新基因型和操纵倍性的重要工具。科研人员将基因型为Aa的二倍体柑橘植株进行自身原生质体融合，所得四倍体植株再与原二倍体柑橘杂交，最后从杂交植株上得到了无子柑橘。嫁接时接上去的芽或枝叫作接穗，承受接穗的植株叫作砧木。下列相关叙述正确的是（　　） A．原生质体融合后得到的四倍体植株茎秆粗壮，可作为嫁接过程中的接穗 B．杂交植株上得到无子柑橘的原因是抑制了减数分裂过程中纺锤体的形成 C．利用细胞膜的信息交流功能，有活力的原生质体在台盼蓝溶液中不被染色 D．理论上，四倍体植株与原二倍体柑橘杂交的后代中基因型为aaa的个体占1/12 29．（2025·辽宁大连·一模）我国科研人员用重组DNA技术和植物组织培养技术培育出转入人血清白蛋白基因的水稻植株，并成功从其种子的胚乳中提取出高纯度的人血清白蛋白。下列叙述错误的是（    ） A．需将人血清白蛋白基因导入受精卵 B．脱分化过程一般不需要光照 C．转为再分化培养时需要更换培养基 D．该过程可以体现植物细胞的全能性 30．（2025·辽宁大连·一模）黑曲霉多不耐高温，发酵获得柠檬酸的过程需大量冷却水控制温度，生产成本高。现利用原生质体融合技术获得耐高温高产黑曲霉，过程如图所示。下列叙述正确的是（    ）    A．处理①培养基中黄色圈大的菌落不一定为高产菌株 B．处理②、③用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁 C．处理④升高温度即可筛选出耐高温高产黑曲霉 D．发酵结束后通过适当的过滤、沉淀等方法获得柠檬酸 31．（2025·湖北十堰·一模）研究人员用花椰菜胚轴和紫罗兰叶片细胞进行体细胞杂交，得到再生植株(编号为1~5)。对这5株植株进行亲本重要抗性蛋白检测，培育过程和检测结果如图所示。下列有关叙述正确的是（　　） A．过程①可用聚乙二醇处理胚轴细胞以获得原生质体 B．过程②融合后，可用高倍显微镜观察以筛选杂种细胞 C．过程③要将愈伤组织移植到消过毒的蛭石上以获得再生植株 D．植株5为杂种植株，植株2中紫罗兰的染色体全部丢失 32．（2025·湖北十堰·一模）某实验小组在MS培养基中添加不同比例的萘乙酸(NAA)和细胞分裂素6-苄氨基嘌呤(6-BA)，以研究其对铁线莲愈伤组织的诱导率和生长的影响，结果如表所示。下列有关分析正确的是（　　） 培养基类型 NAA/(mg·L-1) 6-BA/(mg·L-1) 诱导率/% 生长状况 甲 0 2.0 45.7 淡黄色，疏松 乙 0.1 2.0 71.4 淡黄色，疏松 丙 0 4.0 77.1 黄色，生长速率快，过度致密 丁 0.1 4.0 22.9 黄褐色，过度致密 A．接种前，要对铁线莲的外植体进行灭菌处理 B．不添加萘乙酸时，适当增加细胞分裂素浓度有助于愈伤组织的形成和生长 C．诱导愈伤组织期间需要给予光照以促进叶绿素合成 D．铁线莲愈伤组织的诱导取决于外源生长素的浓度 33．（2025·辽宁沈阳·一模）迷迭香中的萜类物质用途广泛。欲实现其工厂化生产，需高效诱导外植体形成愈伤组织。下表为6-BA和NAA不同浓度组合下其愈伤组织的诱导率（诱导出愈伤组织的外植体数占接种外植体总数的百分比）。下列说法正确的是（    ） 组别 不同浓度组合（mg/L） 诱导率（%） 6-BA NAA 1 4.0 0.1 58.85 2 4.0 0.5 89.84 3 5.0 0.1 64.12 4 5.0 0.5 86.30 5 6.0 0.1 67.66 6 6.0 0.5 82.22 A．迷迭香在整个生长发育过程中一直合成萜类物质 B．细胞产物工厂化生产主要通过提高单个细胞中萜类含量来实现 C．NAA浓度相同的条件下，愈伤组织诱导率与6-BA浓度呈正相关 D．与6-BA相比，NAA对愈伤组织形成的影响更显著 34．（2025·湖南株洲·一模）图示为利用生物技术生产药用植物次生代谢物的过程。下列叙述正确的是（    ） A．过程①②③均需要利用转基因技术 B．过程①②均需经历脱分化、再分化 C．过程③是利用发酵工程生产紫杉醇，利用酵母菌发酵需在有氧条件下进行 D．次生代谢物是植物生长所必需的，但含量少，应选择产量高的细胞进行培养 二、多选题 35．（2025·河北沧州·一模）中华猕猴桃果实大、抗寒能力弱，狗枣猕猴桃果实小、耐低温。研究人员尝试培育抗寒能力强且果实大的猕猴桃新品种。方案1，中华猕猴桃和狗枣猕猴桃进行体细胞杂交；方案2，对中华猕猴桃或狗枣猕猴桃的体细胞进行诱变处理，再培育成植株。下列叙述正确的是（    ） A．方案1和2中均需要先用纤维素酶和果胶酶处理猕猴桃的体细胞 B．方案1可以采用离心法或PEG处理诱导两种猕猴桃的原生质体融合 C．方案2宜选择两种猕猴桃的愈伤组织进行处理，且需筛选大量细胞 D．方案1需使用的化学试剂有生长素、细胞分裂素、秋水仙素等 36．（2025·河北唐山·一模）甲植物具有耐盐碱效应，乙植物具有高产效应。下图是利用甲、乙两种植物细胞获得高产且耐盐碱植株的部分流程图，下列叙述正确的是（    ） A．进行①处理时可用纤维素酶和果胶酶 B．进行②诱导时可选用电融合法或PEG融合法 C．③过程通常需要一定强度的光照条件 D．将杂种细胞培育成的植物体即为高产且耐盐碱的植株 三、非选择题 37．（2025·贵州铜仁·一模）植物在遭受生物或非生物胁迫时，往往会积累次生代谢产物来应对外界伤害。紫杉醇是存在于红豆杉属植物体内的一种次生代谢产物，具有高抗癌活性。研究发现从红豆杉愈伤组织细胞就可以提取紫杉醇。 回答下列问题： (1)在利用植物组织培养技术生产紫杉醇的过程中，最好选择红豆杉的 （幼嫩茎段/成熟茎段）作为外植体进行培养，原因是 。 (2)在一定激素和营养等条件的诱导下，外植体细胞会失去其特有的结构和功能，转变成未分化的细胞，这个转变过程称为 。未分化的细胞进而形成愈伤组织，将愈伤组织悬浮培养可获得紫杉醇。 (3)研究人员在利用植物组织培养技术生产紫杉醇的过程中发现紫杉醇的产量很低。结合题干信息，提出一种提高紫杉醇产量的措施 。目前利用基因工程构建稳定高产紫杉醇的工程菌研究取得很大进展，写出利用紫杉醇合成酶基因构建基因表达载体的思路 。 38．（2025·山东青岛·一模）银杏叶中的黄酮醇具有重要的药用价值。为探究红蓝光质比例对银杏幼苗光合特性及黄酮醇含量的影响，科研人员以银杏幼苗为实验材料，在适宜的光照强度下，设置红蓝光组合比例分别为1∶1（1R1B）、1∶3（1R3B）、1∶5（1R5B）和白光（W，对照）4种光质处理，处理20d后检测银杏净光合速率、气孔导度、胞间CO2浓度及总黄酮醇含量，结果如图所示。 (1)由图可知，实验组的净光合速率都比对照组高，原因是 。实验组净光合速率的变化主要由非气孔因素导致，原因是 。 (2)不同比例红蓝光对银杏叶总黄酮醇含量的影响为 。黄酮醇是银杏叶细胞的次生代谢物，与传统的从银杏叶中提取黄酮醇相比， 技术可实现黄酮醇的工厂化生产，培养过程中需要定期更换培养液的目的 。（答出两点） (3)除光质外，光照和黑暗交替频率也可以影响银杏的光合产物积累量。研究人员采用光照、黑暗交替进行的方式处理生理状态相同的银杏幼苗，其中光照和黑暗的总时长相同。结果发现随着光暗交替次数的增加和交换频率的加快，银杏幼苗有机物的积累量逐渐增加，请从光合作用的过程角度分析，出现上述现象的原因 。 39．（2025·江西萍乡·一模）甘蓝型油菜引入我国历史较短，其遗传基础狭隘。菘蓝是传统中药材，具有广谱抗病毒特性。研究人员利用甘蓝型油菜（体细胞中染色体数为38）与菘蓝（体细胞中染色体数为14）进行体细胞杂交，培育抗病毒的甘蓝型油菜—菘蓝单体附加系，过程如图1。回答下列问题：    (1)实验前需要在 （填“高渗”或“低渗”）溶液中制备甘蓝型油菜和菘蓝的原生质体，两种原生质体融合成功的标志是 。 (2)图1中F1产生配子的染色体组成为 （只用字母表示）。最终获得的不同抗病毒甘蓝型油菜—菘蓝单体附加系体细胞中染色体数目 （填“一定”或“不一定”）相同。研究人员不让甘蓝型油菜和菘蓝直接通过有性杂交培育新品种的原因是 。 (3)研究发现，S基因编码的S蛋白是菘蓝具有抗病毒功效的关键蛋白，由E基因编码的E肽能增强S蛋白的抗病毒功效。研究人员尝试利用基因工程技术培育转基因抗病毒甘蓝型油菜。图2是S基因和E—S融合基因的结构，利用PCR技术从菘蓝基因组中分离S基因时需要设计引物，引物的作用是 。结合图2分析，若只将S基因导入甘蓝型油菜细胞中，为顺利构建表达载体，利用PCR技术分离S基因时需要在引物1的5'端加入 酶识别序列，在引物2的5'端加入 酶识别序列。已知E基因的编码链序列为5'—ATGAGCTACGGCCGTAAAAAGAGACGCCAACGTAGA—3'，若要在S蛋白的前端引入E短肽，需要构建E—S融合基因，扩增E—S融合基因时，利用E基因和S基因的核酸序列设计的引物3的序列为 （写出引物5'端的12个碱基，并标注5'端和3'端）。构建基因表达载体时优先选择甘蓝型油菜的特异性启动子的优点是 。    动物细胞工程考点03 一、单选题 1．（2025·内蒙古阿拉善盟·一模）科研人员利用iPS细胞（诱导多能干细胞）与心肌细胞融合形成杂交细胞，研究其生物学特性，为心肌梗死后的细胞移植治疗提供一种新思路。下列叙述错误的是（    ） A．进行心肌细胞培养时，可用胰蛋白酶处理心肌组织 B．可用PEG诱导细胞融合，并用特定的选择培养基进行筛选 C．杂交细胞既有iPS细胞的增殖能力，又有心肌细胞的特点 D．鉴定杂交细胞时，可通过PCR检测其基因的转录和翻译情况 2．（2025·河北唐山·一模）某牧场引进一对产肉性能优异的公羊和母羊，科研人员采用体外受精等技术短时间内获得了具有优良性状的大量后代，此过程不涉及的操作是（    ） A．卵母细胞的采集 B．细胞核移植 C．同期发情处理 D．胚胎移植 3．（2025·河北唐山·一模）无菌操作是生物实验中一项重要的基本操作。下列过程不需要严格无菌操作的是（    ） A．传统泡菜的制作 B．酵母菌的纯培养 C．动物细胞的传代培养 D．花药离体培养 4．（2025·广东深圳·一模）线粒体置换技术是将线粒体异常的卵子的纺锤体移植到去除纺锤体的正常卵子中获得线粒体置换的重构卵子。纺锤体移植实质上移入正常细胞的是（    ） A．线粒体 B．纺锤体 C．染色体 D．中心体 5．（2025·吉林延边·一模）关于生物工程技术过程中出现细胞融合的操作，下列叙述正确的是（    ） A．植物体细胞杂交技术，可直接用聚乙二醇处理两种植物细胞进行膜融合 B．单克隆抗体制备技术，两两融合的细胞都能在选择培养基上存活 C．动物体细胞核移植技术，融合细胞可直接移植到受体母牛子宫内获得克隆牛 D．体外受精技术，常以在显微镜下观察到雌、雄原核或两个极体作为受精的标志 6．（2025·四川·一模）我国研究人员率先利用某组蛋白去甲基化酶(Kd4d)的mRNA，通过调控重构胚相关基因表达，解决了体细胞克隆猴胚胎发育率低这一技术难点，培育出了第一批灵长类动物——食蟹猴，流程如图所示。下列叙述正确的是（    ） A．动物胚胎细胞核移植的难度明显高于体细胞核移植 B．②过程目的是确保克隆动物的遗传物质全部来自供体细胞 C．⑤过程需用物理或化学方法激活才能完成细胞分裂和发育进程 D．Kd4d的mRNA 能降低组蛋白甲基化水平，提高克隆猴胚胎发育率 7．（2025·江苏南通·一模）肝细胞中的延胡索酰乙酰乙酸水解酶基因突变会导致酪氨酸血症。下图是研究人员利用基因编辑技术纠正病人来源肝细胞，成功治疗酪氨酸血症小鼠的过程，为治疗人类酪氨酸血症奠定理论基础。相关叙述准确的是（　　） A．酪氨酸血症的发生说明基因能通过控制蛋白质的结构控制生物性状 B．过程②需在培养液中添加琼脂、葡萄糖、干扰素动物血清等物质 C．过程③需敲入正常的延胡索酰乙酰乙酸水解酶基因，并敲除相关抗原基因 D．基因编辑后的人源肝细胞植入小鼠分化为完整肝脏，是治疗小鼠酪氨酸血症的关键 8．（2025·江西·一模）下列关于细胞工程的叙述，正确的是（    ） A．小麦胚经诱导形成幼苗体现了植物细胞的全能性 B．菊花组织培养中三次更换的培养基成分和目的相同 C．动物体细胞核移植的受体细胞必须是M Ⅰ 期的卵母细胞 D．胚胎干细胞分化产生的不同类型细胞中的mRNA有差异 9．（2025·山西吕梁·一模）我国科学家经过多年的反复试验，在世界上率先成功完成了非人灵长类动物克隆猴。研究人员将对卵母细胞进行去核操作的时间控制在10s之内，在15s之内将体细胞注入去核的卵母细胞，并创新思路将组蛋白去甲基化酶Kdm4d的mRNA注入重构胚，同时用组蛋白脱乙酰酶抑制剂（TSA）处理，具体培育流程如下图所示。下列说法错误的是（    ） 注：Kdm4d为组蛋白去甲基化酶、可以催化组蛋白脱去甲基化；TSA为组蛋白脱乙酰化酶抑制剂，可以干扰组蛋白脱去乙酰化。 A．除用灭活仙台病毒诱导方法外，还可用电融合法使两细胞融合 B．与克隆小猴的细胞相比，图示体细胞的组蛋白甲基化水平较高、乙酰化水平较低 C．“对卵母细胞进行去核操作”中的“去核”是指去除DNA-蛋白质复合物 D．注入Kdm4d的mRNA并进行TSA处理，一般不会改变重构胚中基因的碱基序列 10．（2025·安徽滁州·一模）我国科学家为扩大大熊猫培育，进行了开创性研究。他们选择出生夭折的大熊猫作为供核个体，家兔细胞作为受体细胞，巧妙构建出大熊猫-兔重构胚。随后，科学家利用这一独特的重构胚进行了实验，实验处理及结果如下图所示。（注：CB为细胞松弛素，Colc为秋水仙素，均为细胞骨架抑制剂，使用时用DMSO溶剂溶解）。下列叙述错误的是（    ）    A．DMSO组的作用是作为对照，DMSO溶剂本身对核移植成功率有显著影响 B．取出生夭折的熊猫相应组织，剪碎后需要用胰蛋白酶（或胶原蛋白酶）处理 C．需要通过对家兔进行超数排卵处理，获得大量处于MⅡ期的去核卵母细胞 D．细胞松弛素能够提高核移植成功率，且其成功率高于对照组和其他实验组 11．（2025·山西·一模）图示多克隆抗体的制备流程。下列有关多克隆抗体与单克隆抗体的比较，错误的是（    ） A．多克隆抗体是从动物血清中获得的抗体混合物，单抗只有一种抗体 B．多克隆抗体可以识别同一抗原的不同结合位点，单抗只识别抗原的一个结合位点 C．多克隆抗体的获得无需筛选，单抗制备的过程中至少经历两次筛选 D．与单抗药物的制备相比，制备多克隆抗体药物的生产周期短，生产成本低 12．（2025·山东枣庄·一模）下列关于细胞工程的说法正确的是（　　） A．体外培养的动物细胞形态相比体内正常细胞可能会发生改变 B．作物脱毒苗培养时先诱导愈伤组织生根，再诱导生芽 C．iPS细胞都是通过将外源基因导入体细胞获得的 D．离心法收集细胞只能用于传代培养细胞的收集 13．（2025·安徽马鞍山·一模）抗人绒毛膜促性腺激素（HCG）单克隆抗体的研制对于早早孕检测和某些肿瘤的检测等具有广阔的应用前景，下图为其生产大致流程。在不同的条件下，该单克隆抗体与HCG结合能力有差异。下列叙述错误的是（　　） A．注射HCG的目的是获得能产生特定抗体的B淋巴细胞 B．制备细胞悬液时应取小鼠脾脏剪碎并用胰蛋白酶处理 C．筛选1的目的是筛选出抗HCG抗体呈阳性的杂交瘤细胞 D．抗HCG抗体可以筛选混合物中的HCG并使之纯化 14．（2025·湖南邵阳·一模）科研人员从小鼠的皮肤细胞中提取出干细胞，并将这些干细胞重新编程为原始态的胚胎干细胞（ESCs）。随后将ESCs分化成为原始内胚层细胞和滋养层干细胞，并混合胚胎干细胞，将这三种细胞按照一定比例置于培养基培养3天，构建出胚胎模型，然后将其置于“人造机械子宫”中进行培养。下列叙述正确的是（    ） A．ESCs的培养需要在培养基中加入血清并提供95%的氧气和5%的CO2的气体环境 B．ESCs分化成原始内胚层细胞和滋养层干细胞是基因选择性表达的过程 C．构建出的胚胎模型相当于囊胚期胚胎，可对其进行移植、分割或保存 D．该胚胎模型的构建用到了胚胎工程的全部理论基础 15．（2025·云南曲靖·一模）下列关于植物组织培养技术和动物细胞核移植技术的说法，错误的是（    ） A．两项技术均说明细胞具有全能性 B．两项技术均可用于濒危物种的保护 C．植物细胞全能性表达需要离体、一定的营养物质、植物激素等条件 D．去核的受体卵母细胞中可能含有促进供体细胞核表达全能性的物质和条件 16．（2025·福建厦门·一模）下列关于动物细胞工程的叙述，正确的是（　　） A．动物细胞培养在CO2培养箱中进行，CO2的作用是刺激细胞呼吸 B．诱导多能干细胞（iPS细胞）通常是由胚胎干细胞诱导转化而来 C．灭活病毒能使细胞膜上的蛋白质和脂质重新排布，诱导细胞融合 D．动物细胞培养时，大多数种类的细胞能够悬浮在培养液中生长增殖 17．（2025·湖南岳阳·一模）为拯救濒危野化单峰骆驼，科研人员利用现代生物技术尝试进行人工培育，流程如下图所示。下列相关叙述正确的是（    ）    A．过程①中常用促性腺激素处理以便获得更多的卵母细胞 B．过程②中卵细胞膜和透明带先后发生生理反应阻止多精入卵 C．过程③应选用MⅡ期的卵母细胞，过程④移植的应为原肠胚 D．与F后代相比，E大多存在健康问题，表现出遗传和生理缺陷 18．（2025·新疆乌鲁木齐·一模）单克隆抗体在医学领域具有重要的应用价值。下列叙述错误的是（　　） A．制备单克隆抗体需运用动物细胞培养技术，培养过程需要O2和CO2 B．制备单克隆抗体需运用动物细胞融合技术，并用选择培养基进行筛选 C．单克隆抗体能够准确地识别抗原的细微差异，可用作诊断试剂 D．单克隆抗体能精准地运载药物，但自身不能用于治疗疾病 19．（2025·陕西渭南·一模）2024年2月25日，世界首例体细胞克隆顶级种用藏羊“青青”在青海省诞生。研究人员采集种羊耳缘组织培养成耳纤维细胞作为核供体细胞，通过体细胞核移植获得种羊克隆胚胎。下列叙述正确的是（    ） A．在核移植前应去除MⅡ期卵母细胞的纺锤体——染色体复合物 B．在培养耳纤维细胞时可使用胃蛋白酶处理种羊耳缘组织 C．克隆动物与试管动物的生殖方式均为无性生殖 D．重组细胞会依次经历囊胚、桑葚胚、原肠胚等发育阶段 20．（2025·辽宁沈阳·一模）对杂交瘤细胞进行悬浮培养可大量生产单克隆抗体。下列叙述错误的是（    ） A．应对培养基和杂交瘤细胞进行严格灭菌 B．培养过程中提供的气体环境为95%空气和5%CO2 C．原代培养后直接用离心法收集杂交瘤细胞 D．可从细胞培养液中获取大量的单克隆抗体 21．（2025·陕西宝鸡·一模）CTLA-4和PD-1均是T细胞表面的受体分子，与特定分子结合后，能抑制T细胞活性甚至使T细胞凋亡，从而使机体肿瘤细胞免受T细胞攻击。抗CTLA-4或抗PD-1的单克隆抗体有较好的抗肿瘤效果。科研人员将两种不同的杂交瘤细胞融合得到双杂交瘤细胞（能够悬浮在液体培养基中生长繁殖），可以从培养液中筛选出同时抗CTLA-4和PD-1的双特异性抗体（如图），实验显示疗效更好。下列叙述正确的是（    ） A．双杂交瘤细胞需要CTLA-4和PD-1刺激，才能产生双特异性抗体 B．双特异性抗体与肿瘤细胞的结合具有更强的特异性，从而减少副作用 C．对培养到一定密度的双杂交瘤细胞进行传代培养时，需使用胰蛋白酶处理 D．双特异性抗体可以靶向作用两种受体分子，增强细胞免疫达到更好的抗肿瘤效果 22．（2025·安徽·一模）哺乳动物细胞合成DNA有D途径和S途径，氨基蝶呤可阻断细胞利用D途径合成DNA，S途径合成DNA需要次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶（简称HGPRT）和胸腺嘧啶核苷激酶（简称TK）的参与，这两种酶可以催化次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷分别产生肌苷酸和胸腺嘧啶脱氧核苷酸，它们可以用来合成DNA。在单克隆抗体制备过程中，一般用HAT培养基来筛选杂交瘤细胞，HAT培养基中通常会加入次黄嘌呤、氨基蝶呤和胸腺嘧啶核苷3种关键成分。B淋巴细胞中有HGPRT和TK两种酶，而骨髓瘤细胞没有这两种酶。下列叙述错误的是（    ） A．从功能上划分，单克隆抗体制备过程使用的HAT培养基属于选择培养基 B．在HAT培养基中，骨髓瘤细胞的D途径被阻断，也无S途径，不能合成DNA C．在HAT培养基中，杂交瘤细胞的D途径被阻断，但可利用S途径合成DNA D．经HAT培养基筛选得到的杂交瘤细胞即可用于大量生产单克隆抗体 23．（2025·山西·一模）科学家提出将一种B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合后，筛选出既能迅速大量增殖、又能产生特定抗体的融合细胞，经培养可大量生产单克隆抗体。下列叙述错误的是（　　） A．每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体，是制备单克隆抗体的依据之一 B．注射特定抗原对机体进行免疫，目的是获得能产生特定抗体的B淋巴细胞 C．诱导细胞融合后用选择培养基筛选出杂交瘤细胞，将其直接培养来生产单克隆抗体 D．用单克隆抗体制备的抗体一药物偶联物，在临床上具有靶点精准、毒副作用小的优点 24．（2025·河北承德·一模）犬疱疹病毒病是一种由犬疱疹病毒引起的急性、全身出血性坏死的犬类传染病。gD蛋白是犬疱疹病毒囊膜的重要组成部分，可诱导机体产生免疫应答。研究人员首先利用转基因技术制备了gD蛋白，又以gD蛋白为抗原来制备单克隆抗体，以期快速检测该病毒，其主要技术路线如图所示。下列叙述错误的是（    ） A．与小鼠骨髓瘤细胞融合前，细胞甲需要通过原代和传代培养扩大细胞数量 B．与诱导原生质体融合相比，①过程特有的方法是灭活病毒诱导法 C．仅有杂交瘤细胞能在第1次筛选使用的培养基上生长 D．体外培养经抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞是获得大量单克隆抗体的方法之一 25．（2025·山东青岛·一模）酶联免疫吸附测定是一种灵敏的免疫检测技术，过程如图。下列说法错误的是（    ） A．该技术可以用来检测特定抗原的浓度 B．两种抗体与特定抗原的同一区域结合 C．第二种抗体可以用蛋白质工程来制备 D．加入底物前需要漂洗掉未结合的抗体 26．（2025·甘肃兰州·一模）小鼠经特定抗原免疫的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合形成的杂交瘤细胞生产的鼠源性单克隆抗体可用于分子检测，但用于人类疾病治疗时往往有一定的副作用。如果对小鼠进行基因改造，使其表达人类抗体，由此获得的单克隆抗体人源化程度更高，则更适用于疾病治疗。下列相关叙述正确的是（    ） A．辅助性T细胞通过释放细胞因子直接促进B淋巴细胞增殖 B．将等量浆细胞和骨髓瘤细胞混合，经灭活病毒诱导后融合的细胞即为杂交瘤细胞 C．杂交瘤细胞筛选只需一次选择培养基处理，即可获得稳定分泌抗体的细胞群 D．将鼠源性单克隆抗体改造成人源性，可能降低人体发生免疫排斥的风险 27．（2025·广东江门·一模）由X染色体上的等位基因Gd⁴和Gd⁸所编码的葡萄糖—6—磷酸脱氢酶（G—6—PD）有A、B两种类型，可通过电泳区分。对某家族Ⅰ号个体皮肤组织的多细胞原始培养物进行电泳得结果一，然后将皮肤组织分离成单个细胞进行克隆培养，获得单细胞克隆培养物再电泳得结果二，如图所示。下列分析错误的是（    ）    A．推测该样本来源于女性，体细胞基因组成为Gd⁴Gd⁸ B．2、3号克隆细胞结果的差异是由基因表达差异导致 C．1—9号克隆细胞中均随机有一条X染色体失去活性 D．Ⅰ号个体和其儿子进行该检测所得到的结果相同 28．（2025·黑龙江吉林·一模）锈菌是一种真菌，可以通过无性菌丝的融合来进行体细胞杂交。小麦感染锈菌后会导致产量下降，对锈菌的遗传学研究可以为防治锈菌提供新思路。下列相关说法错误的是（    ） A．锈菌和小麦的寄生关系是长期协同进化的结果 B．锈菌体细胞杂交的过程中会使其细胞壁中的纤维素与果胶分子重排 C．锈菌体细胞杂交后可能会使细胞的染色体数目加倍，从而改变锈菌的表型 D．动物细胞可以在某些病毒的作用下，发生类似锈菌体细胞杂交的过程 29．（2025·山东济宁·一模）HER-2蛋白主要在胎儿时期表达，成年以后只在极少数组织内低水平表达。由曲妥珠单抗和药物DMI连接而成的抗体-药物偶联物T-DMI，对HER-2有很强的靶向性，可用于治疗HER-2过度表达的转移性乳腺癌。下列叙述正确的是（    ） A．需要向小鼠反复注射HER-2，以便在血清中获取免疫的B淋巴细胞 B．用灭活的病毒诱导细胞融合时细胞膜的蛋白质和脂质分子会重新排布 C．T-DMI中DMI与HER-2特异性结合是对癌细胞进行选择性杀伤的关键 D．用选择培养基可筛选出产生HER-2抗体的杂交瘤细胞 30．（2025·黑龙江辽宁·一模）图为实验室制备抗体的两种途径，下列相关叙述不正确的是（　　）    A．途径一中可以用灭活病毒诱导B淋巴细胞和骨髓瘤细胞的融合 B．步骤一中进行了抗体检测，步骤二中对细胞进行了扩大培养 C．与b相比，a中抗体具有较高的纯度和特异性 D．途径二受限于免疫动物的数量和免疫反应强度，不适合大量生产 31．（2025·湖南·一模）鸭坦布苏病毒病是由鸭坦布苏病毒（DTMUV）引起的一种急性、病毒性传染病。研究人员制备了DTMUVE蛋白单克隆抗体4A1，其可与E蛋白发生免疫反应，不与鸭A型肝炎病毒、细小病毒和H9亚型禽流感病毒发生交叉反应；4A1株杂交瘤细胞株分泌的抗体对DTMUV具有中和活性，可完全清除感染小鼠血液中的DTMUV。下列相关叙述错误的是（　　） A．需获取注射过E蛋白的小鼠的B淋巴细胞 B．PEG可促进B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合 C．杂交瘤细胞株克隆培养时会出现接触抑制 D．单克隆抗体4A1能准确识别抗原的细微差异 32．（2025·河南驻马店·一模）我国科学家成功培育了体细胞克隆猴。在处理重构胚时，将组蛋白脱乙酰酶抑制剂TSA、组蛋白去甲基化酶KDM4D的mRNA注入了重构胚，促进囊胚的发育，提高代孕母猴的妊娠率。下列叙述错误的是（    ） A．灭活的仙台病毒可以诱导细胞融合，体现了细胞膜的流动性 B．TSA能够抑制组蛋白脱乙酰酶的作用从而降低组蛋白的乙酰化水平 C．组蛋白去甲基化酶KDM4D能够降低组蛋白的甲基化水平 D．培育克隆猴对研究人类疾病致病机制和研发新药有重要意义 33．（2025·广东梅州·一模）双抗体夹心法是常用的检测抗原含量的方法，流程如图所示。其中固相抗体是由固相载体连接后的单克隆抗体。下列叙述正确的是（    ） A．该方法与只使用单克隆抗体相比，能增加可识别抗原的种类 B．酶标抗体作用是与待测抗原结合并催化其分解 C．固相抗体的使用数量应多于待测抗原的数量 D．若酶标抗体的使用量偏少会导致测量结果偏高 34．（2025·江西上饶·一模）抗体—细胞毒素药物偶联物（T-DM1）由曲妥珠抗体、细胞毒素药物DM1偶联形成，是治疗乳腺癌的靶向药物，被纳入2023年医保目录名单，其作用机制如图。下列相关叙述错误的是（　　）    A．为了获得曲妥珠抗体，可选择HER2作为抗原刺激小鼠 B．T-DM1的连接物应在内环境和细胞内都保持稳定 C．曲妥珠抗体与HER2受体结合后，通过胞吞方式进入癌细胞 D．利用荧光标记的曲妥珠抗体可用于定位肿瘤的位置 35．（2025·全国·一模）正常情况下，肿瘤细胞会被人体的免疫系统及时发现并清除，但肿瘤细胞会发生免疫逃逸现象，该现象与其表面的PD-L1密不可分。科学家利用图示流程制成抗PD-L1的偶联药物（抗PD-L1-ADC），该药物既能防止肿瘤细胞的免疫逃逸，也能靶向杀死肿瘤细胞。下列相关叙述错误的是（    ） A．图示给小鼠注射的特定抗原是肿瘤细胞上的PD-L1 B．图示①过程诱导细胞融合的方法都适用于植物细胞 C．图示②③过程完成后得到的杂交瘤细胞都能产生抗体 D．抗PD-L1-ADC能与肿瘤细胞结合，源于其抗体的特异性 36．（2025·广东茂名·一模）在病人的病理组织中可观察到多核细胞，多核产生的直接原因最可能是（　　） A．细胞融合 B．细胞分裂 C．细胞分化 D．细胞自噬 37．（2025·云南昆明·一模）碱性磷酸酶是抗肿瘤药物多柔比星前体的专一性活化酶，将碱性磷酸酶与单克隆抗体制成“生物导弹”，使多柔比星前体在肿瘤细胞处被活化，对其DNA造成损伤，抑制以DNA为模板进行的生理活动，达到治疗肿瘤的目的。下列叙述正确的是（    ） A．给小鼠注射多柔比星前体后，可从脾脏中得到能产生肿瘤抗体的B细胞 B．制备单克隆抗体的过程中需用特定的选择培养基和抗体检测进行筛选 C．“生物导弹”利用了碱性磷酸酶的定向制导作用和单克隆抗体的特异性杀伤能力 D．多柔比星前体活化后可直接抑制肿瘤细胞的DNA复制和翻译，而抑制其无限增殖 38．（2025·广东珠海·一模）在现代生物学工程中常使用“杂交”技术，下列叙述错误的是（    ） A．植物体细胞杂交培育新物种原理是基因重组 B．动物体细胞杂交技术可用于生产单克隆抗体 C．DNA分子杂交可检测目的基因是否发生突变 D．抗原-抗体杂交可检测是否感染病原微生物 39．（2025·河南安阳·一模）阿尔茨海默病（AD）是一种复杂的神经退行性疾病，β-淀粉样蛋白在大脑中的积累和沉积是AD发病和发展的主要因素。科研人员将蛋白酶与单克隆抗体结合制备了催化性抗体，同时它还具有免疫活性，微量使用对AD就有一定的治疗效果。下列相关叙述正确的是（　　） A．杂交瘤细胞制备时可使用灭活病毒、高Ca2+—高pH诱导细胞融合 B．杂交瘤细胞产生的单克隆抗体只能从生物体的腹腔中大量提取 C．催化性抗体效果显著的原因为单克隆抗体特异性强、酶有高效性 D．杂交瘤细胞传代培养过程中会发生细胞贴壁现象及接触抑制现象 40．（2025·福建厦门·一模）多克隆抗体是抗原刺激机体产生免疫应答后，由机体产生的与抗原特异性结合的一组免疫球蛋白。它是多种单克隆抗体的混合物，可以直接从动物血清中提取。下列叙述错误的是（　　） A．单克隆抗体特异性高，多克隆抗体特异性低 B．单克隆抗体与多克隆抗体都由B细胞活化后产生 C．向动物多次注射同一抗原，可提高多克隆抗体的产量 D．与单克隆抗体相比，多克隆抗体的制备具有简便、产量高等特点 41．（2025·江苏·一模）下列关于动物细胞融合和单克隆抗体制备的叙述，错误的是（　　） A．灭活的病毒可与细胞质膜发生作用，从而诱导细胞融合 B．用特定抗原免疫小鼠后；可从其骨髓中分离出浆细胞，用于细胞融合 C．产生特定抗体的杂交瘤细胞可在小鼠体内培养，从腹水中提取抗体 D．单克隆抗体可高度特异性地识别抗原，从而辅助肿瘤诊断 42．（2025·湖南岳阳·一模）下列有关生物技术的叙述，错误的是（    ） A．发酵工程的产品包括微生物的代谢物、酶及菌体本身 B．进行单个植物细胞培养必须先用酶水解细胞壁以获得原生质体 C．动物细胞融合与植物体细胞杂交都可用电融合法或PEG融合法诱导融合 D．可利用转基因“工程菌”修复被污染的土壤 43．（2025·浙江温州·一模）通过培养杂交瘤细胞制备单克隆抗体时，相关的细胞培养操作，错误的是（   ） A．细胞培养液中添加的血清可采用过滤方式除菌 B．采用封闭式培养有利于培养液pH保持相对稳定 C．进行克隆培养之前需调整培养液中细胞的密度 D．须筛选出抗原-抗体反应较灵敏的杂交瘤细胞株继续培养 44．（2025·湖北·一模）诱导多能干细胞（iPSC）可分化成类似间充质干细胞（iMSC）。iMSC能合成和分泌Ⅴ蛋白，用于治疗骨关节炎等疾病。下列叙述错误的是（    ） A．可用病毒作为载体将某些基因转入小鼠成纤维细胞以诱导产生iPSC B．iPSC在适宜条件下培养，需添加特定的物质才能使其转化为iMSC C．利用96孔板筛选转化成功的iMSC，需稀释至每孔至多1个细胞，并添加V蛋白 D．iMSC培养液需定期更换，并维持适宜温度、PH、渗透压和气体环境等条件 45．（2025·广东茂名·一模）我国科学家诱导多能干细胞制备胰岛B细胞，并移植给1型糖尿病患者，取得了临床功能性治愈的疗效。下列叙述错误的是（　　） A．可通过患者体细胞诱导得到多能干细胞，避免发生免疫排斥反应 B．多能干细胞在诱导下，发生基因突变获得胰岛素基因 C．制备的胰岛B细胞在移植前，需检测在葡萄糖诱导下能否产生胰岛素 D．移植的胰岛B细胞中存在凋亡基因，也会发生细胞的编程性死亡 二、多选题 46．（2025·河北保定·一模）为研究犬瘟热病毒（CDV） 血凝素（H 蛋白）的生物学功能，并研发针对H蛋白的诊断试剂和 治疗性单克隆抗体，某研究小组首次通过单B 细胞抗体技术制备了针对CDVH蛋白的单 克隆抗体M，部分制备过程如图所示。下列有关叙述正确的是（　　） A．使用显微注射技术将表达载体导入哺乳动物细胞 B．单克隆抗体M的制备利用了动物细胞融合技术 C．单克隆抗体自身可用于治疗疾病也可用于运载药物 D．筛选到的记忆B细胞只能合成和分泌与H蛋白特异性识别的抗体M 47．（2025·黑龙江·一模）微载体悬浮培养是将动物细胞黏附在微载体表面，在培养液中进行悬浮培养的技术。下列有关说法不正确的是（    ） A．在进行细胞培养时，应提供适合的气体条件 B．进行微载体悬浮培养时不会出现接触抑制 C．微载体悬浮培养的细胞进行传代培养时直接用离心法收集 D．为保证无毒的环境，应在培养液中加入干扰素 48．（2025·黑龙江哈尔滨·一模）下图为全球首例非人灵长类克隆动物的培育过程，为了调节相关基因的表达，提高胚胎的发育率和妊娠率，研究人员将组蛋白去甲基化酶Kdm4d的mRNA注入了重构胚，同时用组蛋白脱乙酰酶抑制剂TSA处理了它。下列说法中错误的是（　　）    A．非人灵长类克隆动物成功率低的原因之一为供体细胞的细胞核难以完全恢复分化前的功能状态 B．应将采集到的卵母细胞培养到MII期再通过显微操作去除其核膜包被的细胞核 C．图中对于重构胚的处理使其中某些基因的甲基化程度和组蛋白的乙酰化程度增加，有利于重构胚的正常发育 D．在胚胎移植前，需要对代孕母猴注射糖皮质激素等免疫抑制剂，防止免疫排斥的发生 49．（2025·吉林延边·一模）科研人员利用下图所示流程培育出了乳汁中含有人凝血因子IX医用蛋白的二倍体转基因绵羊。下列相关叙述错误的是（    ）    A．从绵羊卵巢中采集的卵母细胞需要在体外培养至MⅡ期 B．进行③过程前卵母细胞通常需要进行去核处理 C．重组细胞需要置于含有95%O2和5%CO2的CO2培养箱中进行培养 D．进行⑤过程前需要利用滋养层细胞进行性别鉴定 50．（2025·江西赣州·一模）SLPI蛋白是免疫应答的重要调节因子。通过基因工程技术，利用大肠杆菌表达系统表达的猪源SLPI蛋白，可用于制备抗SLPI单克隆抗体，过程如下图。下列叙述错误的是（    ） A．工程菌生产的SLPI蛋白是单细胞蛋白 B．PEG可介导甲细胞和乙细胞特异性融合 C．所有融合细胞均可在HAT培养基中生长 D．SLPI蛋白可参与图中过程①和过程④ 51．（2025·江西萍乡·一模）如图表示双抗体夹心法检测抗原的过程，该方法是医学上常用的定量检测抗原的方法，利用细胞工程技术制备的单克隆抗体能增强该过程的有效性。下列叙述正确的是（    ） A．图示两种抗体与样品中待测抗原的结合位点不同 B．温度、pH等会影响双抗体夹心法检测抗原的结果 C．用双抗体夹心法检测抗原需要制备两种能与抗原结合的单克隆抗体 D．双抗体夹心法与只使用单克隆抗体相比，能增加可识别抗原的种类 52．（2025·江苏南通·一模）制备抗猴痘病毒A35R蛋白单克隆抗体的流程如下，相关叙述正确的是（　　） ①生产A35R重复串联蛋白→②免疫小鼠→③取血清抗体效价高的小鼠再次免疫→④从小鼠脾脏中取B淋巴细胞采用PEG诱导其与骨髓瘤细胞融合→⑤筛选杂交瘤细胞→⑥筛选稳定分泌抗A35R蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞→⑦生产单克隆抗体 A．过程②用A35R重复串联蛋白免疫小鼠的主要目的是减少抗原的用量 B．过程④PEG进入细胞促进核膜融合，其结构基础是核膜的流动性 C．过程⑤筛选得到的杂交瘤细胞有多种，不同种细胞的染色体数可能不等 D．过程⑥通过多次克隆化培养和抗体检测，才能获得足够数量的所需杂交瘤细胞 53．（2025·辽宁大连·一模）活化的T细胞表面的程序性死亡受体1（PD-1）与正常细胞表面程序性死亡配体1（PD-L1）一旦结合，T细胞即可“认清”对方，不触发免疫反应。肿瘤细胞可过量表达PD-L1进行免疫逃逸。肿瘤治疗时将化疗药物与抗PD-L1单克隆抗体结合，形成抗体-药物偶联物（抗PD-L1-ADC），效果比只使用抗PD-L1单克隆抗体更好。下列叙述正确的是（    ） A．制备抗PD-L1单克隆抗体时，第二种筛选过程需要用到PD-L1蛋白 B．体外条件下培养第二种筛选得到的杂交瘤细胞可获取大量所需抗体 C．抗PD-L1-ADC既可阻断PD-1与PD-L1结合，又能杀伤肿瘤细胞 D．若设计制备抗PD-1-ADC可产生与抗PD-L1-ADC相同的治疗效果 三、非选择题 54．（2025·河北沧州·一模）我国科学家利用分子生物学技术和体细胞核移植技术获得了世界首例高产赖氨酸转基因克隆牛，标志着国际克隆技术的又一次重大突破，过程如下图。回答下列问题：    (1)过程①的核心步骤是 。从序列数据库中检索获取了高产赖氨酸基因的碱基序列后，可以通过 的方法获得目的基因。在用PCR扩增目的基因时，需要在其两端加上两种限制酶的识别序列，限制酶识别序列应添加到引物的 （填“3′”或“5′”）端，不能添加到另一端的原因是 。 (2)为使高产赖氨酸基因只在克隆牛的乳腺细胞中表达，上述方法获得的目的基因片段需要和质粒上 等调控元件相连接。 (3)过程④必需利用 技术。最终黄白花母牛生下高产赖氨酸转基因克隆牛犊的性别及体色为 。在个体生物学水平上，高产赖氨酸转基因克隆牛培育成功的表现为 。 55．（2025·甘肃兰州·一模）2018年《细胞》期刊报道，中国科学家率先成功应用体细胞对非人灵长类动物进行克隆，获得两只克隆小黎——“中中”和“华华”。下图是该项技术的流程图，据图下列问题。    (1)科学家曾成功培育出胚胎细胞克隆猴，但“中中”和“华华”的出生仍然轰动世界，这是因为体细胞核移植的难度明显高于胚胎细胞核移植，其原因是 。 (2)体细胞核移植需借助去核的 细胞，因其细胞质中含有促进核基因 的物质。 (3)体外培养胎猴体细胞时，需定期更换培养液的原因是 。 (4)体细胞克隆猴的另外一个技术难点是胚胎发育率低。研究人员将组蛋白去甲基化酶Kdm4d的mRNA注入重构胚，可使胚胎的发育率明显提高，推测可能的原因是 。 (5)若获得的克隆动物与核供体动物性状不完全相同，分析其原因可能是 （答出一点）。 56．（2025·广东珠海·一模）糖尿病是危害全球人类健康的常见疾病，长期以来主要靠注射外源胰岛素进行治疗，严重影响患者的生活质量。我国科学家首次利用化学重编程多能干细胞（CiPSCs）分化而来的胰岛细胞自体移植到一名1型糖尿病（T1DM）患者体内，具体流程如图1所示。在一年跟踪随访中，该病例成功摆脱胰岛素依赖，各项诊断指标恢复至正常水平。 回答下列问题： (1)T1DM主要是由于免疫系统攻击并破坏胰岛B细胞导致胰岛素分泌不足，引发高血糖症，因此属于 ，CiPSCs能够被诱导形成胰岛细胞依据的原理是 。 (2)研究人员从患者体内抽取脂肪组织，经 分散成单个细胞制备成细胞悬液，然后进行细胞培养分离出脂肪干细胞。在诱导形成CiPSCs的过程中，需精确控制培养基的各种成分，与普通动物细胞培养基相比，不能添加 等天然成分，以免影响细胞分化进程。 (3)利用CiPSCs制备胰岛细胞后，研究人员将糖尿病模型小鼠分为A、B组，A组进行手术但不移植胰岛细胞，B组体内移植胰岛细胞，然后两组均进行腹腔注射葡萄糖实验，结果如图2所示，该实验的目的是 。经过长时间科学论证后，研究人员将胰岛细胞移植回患者体内，一年内定期进行口服耐糖检测（见图3），结果表明患者能摆脱胰岛素依赖，依据是 。（糖尿病的诊断阈值为血糖水平等于或高于200mg/dL）。 (4)传统诱导多能干细胞（iPSCs）常利用病毒等载体将4种转录因子的基因导入体细胞，其中的C-myc和Klf4是原癌基因。据此分析，化学分子诱导CiPSCs的优势是 。 57．（2025·广东·一模）噬菌体展示技术是将外源蛋白或多肽的DNA序列插入噬菌体外壳蛋白结构基因的适当位置，使外源基因随噬菌体外壳蛋白的表达而表达，同时，外源蛋白或多肽随噬菌体的重新组装而展示到噬菌体表面的生物技术。利用该技术可以获得单克隆抗体（最新技术）。请回答下列问题： (1)传统单克隆抗体的获得需先对小鼠进行 处理，整个过程中涉及的现代科学技术有 。 (2)外源DNA片段含 个游离的磷酸。为了得到大量的外源DNA，可使用PCR技术进行体外扩增，合成引物 （填“需要”或“不需要”）知道整个外源DNA序列。 (3)噬菌体展示技术获得的抗体还可用于定量检测抗原，如双抗体夹心法，具体原理如下图所示： 分析上图可知，固相抗体和酶标抗体均能与抗原结合，这是由于不同抗体可与同一抗原表面的 结合。该检测方法中，酶标抗体的作用是 ，可通过测定产物量来推测抗原量。 (4)试说说噬菌体展示技术可能的局限性： 。 试卷第1页，共3页 1 / 57 学科网（北京）股份有限公司 学科网（北京）股份有限公司 $$