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热点01 成体干细胞的可塑性
近年研究发现,有些成体干细胞可跨越组织类型向其他组织类型分化,这被称为成体干细胞的可塑性,如造血干细胞可以向神经细胞分化。
如何解释这种发育学现象呢?有学者认为,造血干细胞存在着横向分化,如造血干细胞先分化成为神经干细胞,神经干细胞再进一步分化为神经细胞或神经胶质细胞;也有学者认为,成体干细胞的可塑性是细胞融合引发的假象。
一、真核细胞基因表达的调控
1.基因表达的转录调控
①转录增强调控:其他因素调控使相关基因转录增强,如下图中组蛋白修饰后与DNA结合紧密程度发生改变,若结合程度变小,则促进基因表达属于转录增强调控。
②转录抑制调控:其他因素调控使相关基因转录抑制。如诱导物诱导的阻遏蛋白对基因表达的调控、基因甲基化导致的基因不表达等均为转录抑制调控。
2.基因表达的转录后调控
①RNA干扰:mRNA转录后不能翻译,如图所示为miRNA导致的靶基因mRNA不翻译,进而被降解。
②蛋白质加工水平的调控:蛋白质分子的功能依赖于特定的空间结构,肽链合成后的加工与基因能否表达出特定的遗传性状密切相关,如分子伴侣调控的基因表达。
二、细胞分化
1.细胞分化的判断标准
(1)细胞水平:同一来源的细胞是否形成形态、结构和功能不同的细胞(与众不同)
(2)分子水平:是否有特殊基因的表达;是否含有特殊成分(奢侈基因表达)
2.细胞分化中的“变”:mRNA、蛋白质、细胞的形态结构和功能
3.细胞分化中的“不变”:DNA、tRNA、rRNA、细胞的数量
3、 动物细胞培养
1. 过程
2.培养条件
(1)无菌、无毒环境
(2)营养:除糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素之外,通常还需加入③ 血清、血浆 等一些天然成分。
(3)适宜的温度:36.5 ℃±0.5 ℃;适宜的pH:7.2~7.4。
(4)气体环境:5%的二氧化碳培养箱,维持培养液的pH。
(建议用时:40分钟)
一、选择题
1.(2024·北京海淀·二模)研究者将M病毒膜蛋白注射小鼠,分离小鼠脾细胞并将其与S细胞融合,通过筛选获得单个稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞。下列相关叙述正确的是( )
A.用动物细胞培养液培养M病毒,通过离心可获得膜蛋白作为抗原
B.可用M病毒膜蛋白多次免疫小鼠,以获得更多的浆细胞
C.S细胞应具备产生抗体和无限增殖的能力
D.体外培养单个杂交瘤细胞获得大量抗体体现了细胞的全能性
【答案】B
【分析】单克隆抗体制备流程:先给小鼠注射特定抗原使之发生免疫反应,之后从小鼠脾脏中获取已经免疫的B淋巴细胞;诱导B细胞和骨髓瘤细胞融合,利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞;进行抗体检测,筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞;进行克隆化培养,即用培养基培养和注入小鼠腹腔中培养;最后从培养液或小鼠腹水中获取单克隆抗体。
【详解】A、M病毒必须寄生在活细胞中才能完成生命活动,故不能用动物细胞培养液培养M病毒,A错误;
B、可用M病毒膜蛋白(抗原)多次免疫小鼠,以获得更多的能产生特异性抗体的浆细胞,B正确;
C、S细胞不是杂交瘤细胞,具有无限繁殖的特点,不具有产生抗体的特点,C错误;
D、体外培养单个杂交瘤细胞由于没有发育完整有机体或分化为任何细胞,因此不能体现细胞的全能性,D错误。
故选B。
2.(2024·北京西城·二模)线粒体正常的形态和数量与其融合、裂变相关,该过程受DRP-1和FZO-1等基因的调控。衰老过程中,肌肉细胞线粒体形态数量发生变化、线粒体碎片化增加。下图是研究运动对衰老线虫肌肉细胞线粒体影响的结果。说法正确的是( )
注:颜色越深代表细胞中线粒体碎片化程度越高,drp-1、fzo-1代表相关基因突变体
A.线粒体是细胞合成ATP的唯一场所
B.运动可减缓衰老引起的线粒体碎片化
C.敲除DRP-1基因会加重线粒体碎片化
D.线粒体融合与裂变不是运动益处所必需
【答案】B
【分析】线粒体是有氧呼吸的主要场所。有氧呼吸过程分为三个阶段,第一阶段是葡萄糖酵解形成丙酮酸和[H],发生在细胞质基质中;有氧呼吸的第二阶段是丙酮酸和水反应产生二氧化碳和[H],发生在线粒体基质中;有氧呼吸的第三阶段是[H]与氧气反应形成水,发生在线粒体内膜上。无氧呼吸只在细胞质基质中进行,有氧呼吸释放的能量远远多于无氧呼吸。
【详解】A、除了线粒体可以产生ATP外,线虫肌肉细胞中细胞质基质也可以产生ATP,A错误;
B、根据图示信息,颜色越深代表细胞中线粒体碎片化程度越高,无论是10日龄,还是5日龄,运动组与对照组相比较,线粒体的碎片化细胞比例均降低,说明运动可减缓衰老引起的线粒体碎片化,B正确;
C、依据图示信息,DRP-1基因突变体,与野生型相比较,线粒体碎片化细胞比例上升,说明DRP-1基因突变会加重线粒体碎片化,但并不能得出敲除DRP-1基因会加重线粒体碎片化的结论,C错误;
D、由野生型实验可以看出,无论是10日龄,还是5日龄,运动组与对照组相比较,线粒体的碎片化细胞比例均降低,说明运动可减缓衰老引起的线粒体碎片化,但是线粒体融合与裂变是否为运动益处所必需,无法判断,D错误。
故选B。
3.(2024·北京顺义·一模)科研工作者在果蝇眼中发现一种蛋白E,将E基因导入即将发育为腿的幼虫细胞中,诱导此处产生了构成眼的不同类型的细胞群,最终在腿的中部形成了眼。据此推测正确的是( )
A.发育为腿的幼虫细胞因缺少E基因而不能发育为眼
B.构成果蝇眼的不同类型的细胞中所含蛋白质完全相同
C.蛋白E启动了不同类型细胞群中特异基因的表达
D.蛋白E激活相同基因使发育为腿的细胞转化为眼的不同类型细胞
【答案】C
【分析】细胞分化是指在个体发育中,由一个或一种细胞增殖产生的后代,在形态,结构和生理功能上发生稳定性差异的过程。细胞分化的实质:基因的选择性表达。
【详解】A、发育为腿的幼虫细胞中本来就有E基因,只是没有表达,A错误;
B、构成果蝇眼的不同类型的细胞,由于基因的选择性表达,所含蛋白质不完全相同,B错误;
C、蛋白E诱导腿部产生了构成眼的不同类型的细胞群,说明蛋白E启动了不同类型细胞群中特异基因的表达,导致细胞分化,C正确;
D、蛋白E激活不同基因使发育为腿的细胞转化为眼的不同类型细胞,D错误。
故选C。
4.(2024·北京朝阳·一模)研究者构建敲除B基因的人胚胎干细胞系,诱导其向平滑肌细胞分化,发现敲除B基因明显降低平滑肌细胞标志基因的表达水平。发生形态转变的细胞占比少于对照细胞系。以下关于“人胚胎干细胞”的叙述错误的是( )
A.分化为平滑肌细胞过程中遗传物质未改变
B.与平滑肌细胞形态差异是由于某些蛋白质不同
C.向平滑肌细胞分化过程中B基因起抑制作用
D.向平滑肌细胞分化过程中分化潜能逐渐降低
【答案】C
【分析】细胞分化是指在个体发育中,由一个或一种细胞增殖产生的后代,在形态,结构和生理功能上发生稳定性差异的过程。细胞分化的实质:基因的选择性表达。
【详解】A、细胞分化的实质是基因的选择性表达,分化为平滑肌细胞过程中遗传物质未改变,A正确;
B、分化过程中发生了基因的选择性表达,与平滑肌细胞形态差异是由于某些蛋白质不同,B正确;
C、分析题意,敲除B基因明显降低平滑肌细胞标志基因的表达水平,发生形态转变的细胞占比少于对照细胞系,说明向平滑肌细胞分化过程中B基因起促进作用,C错误;
D、向平滑肌细胞分化过程中分化潜能逐渐降低,分化程度增加,D正确。
故选C。
5.(2025·北京通州·模拟预测)高血糖环境中,在DNA甲基转移酶催化下使视网膜细胞线粒体DNA碱基甲基化水平升高,引起视网膜细胞线粒体损伤和功能异常。下列叙述错误的是( )
A.线粒体DNA甲基化水平升高,可以影响相关基因的表达
B.高血糖环境中线粒体DNA复制时遵循碱基互补配对原则
C.高血糖环境引起的甲基化改变患者线粒体DNA碱基序列
D.糖尿病患者容易发生视网膜细胞线粒体DNA基甲基化水平升高
【答案】C
【分析】生物体基因的碱基序列保持不变,但基因表达和表型发生可遗传变化的现象,叫作表观遗传。
【详解】A、线粒体DNA甲基化水平升高,可抑制相关基因的转录,从而影响基因的表达,A正确;
B、高血糖环境中,线粒体DNA在复制时也遵循碱基互补配对原则,B正确;
C、高血糖环境,部分胞嘧啶加上活化的甲基被修饰为5'-甲基胞嘧啶,没有改变患者线粒体DNA碱基序列,C错误;
D、高血糖环境中,在DNA甲基转移酶催化下使视网膜细胞线粒体DNA碱基甲基化水平升高,则糖尿病患者容易发生视网膜细胞线粒体DNA基甲基化水平升高,D正确。
故选C。
6.(2024·北京西城·一模)FTO蛋白可擦除N基因mRNA的甲基化修饰,避免mRNA被Y蛋白识别而降解,从而提高了鱼类的抗病能力。相关分析正确的是( )
A.Y蛋白能识别mRNA甲基化修饰 B.mRNA甲基化会影响其转录
C.mRNA甲基化会提高其稳定性 D.N基因表达会降低鱼类抗病能力
【答案】A
【分析】表观遗传是指生物体基因的碱基序列不变,而基因表达与表型发生可遗传变化的现象,即不依赖于DNA序列的基因表达状态与表型的改变。
【详解】A、题意显示,FTO蛋白可擦除N基因mRNA的甲基化修饰,避免mRNA被Y蛋白识别而降解,说明Y蛋白能识别mRNA甲基化修饰,A正确;
B、mRNA甲基化会影响其翻译过程,B错误;
C、FTO蛋白可擦除N基因mRNA的甲基化修饰,避免mRNA被Y蛋白识别而降解,说明mRNA甲基化会被Y蛋白识别而降解,其稳定性降低,C错误;
D、FTO蛋白可擦除N基因mRNA的甲基化修饰,避免mRNA被Y蛋白识别而降解,此时mRNA翻译的N蛋白质会提高鱼类的抗病能力,D错误。
故选A。
7.(2024·北京朝阳·二模)肿瘤细胞通过细胞膜上的PD-L1蛋白与机体T细胞膜上PD-1蛋白结合,抑制T细胞激活,实现免疫逃逸。科研人员制备靶向PD-L1的单克隆抗体治疗肿瘤,下列说法错误的是( )
A.需用PD-1免疫小鼠以获得B细胞
B.用灭活的病毒诱导产生杂交瘤细胞
C.杂交瘤细胞的培养液中需添加动物血清
D.利用抗原-抗体结合的原理制备靶向药物
【答案】A
【分析】1、动物细胞融合指用自然或人工方法使两个或多个不同的动物细胞融合成一个细胞的过程的技术。诱导动物细胞融合的方法有PEG(聚乙二醇)融合法,电融合法、离心,灭活病毒诱导法等。
2、把一种B淋巴细胞与能在体外大量增殖的骨髓瘤细胞融合,实际操作中有多种融合情况,B淋巴细胞与B淋巴细胞融合、骨髓瘤细胞与骨髓瘤细胞融合、B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合,其中B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合所得到的杂交瘤细胞就可能大量增殖,产生足够数量的特定抗体。
【详解】A、科研人员制备靶向PD-L1的单克隆抗体治疗肿瘤,所以需用PD-L1免疫小鼠以获得B细胞,A错误;
B、诱导动物细胞融合的方法有物理、化学和生物方法,其中生物方法是用灭活的病毒诱导产生杂交瘤细胞,B正确;
C、动物细胞培养时需要添加血清,补充人工培养基缺乏的物质,所以杂交瘤细胞的培养液中需添加动物血清,C正确;
D、PD-L1的单克隆抗体治疗肿瘤利用的原理是抗原-抗体结合,利用抗体与靶抗原结合的特性携带其进入肿瘤细胞从而发挥作用,D正确。
故选A。
8.(2024·北京昌平·二模)我国科研人员在太空中进行细胞电融合实验,获得烟草黄花品种叶肉细胞与烟草革新一号叶肉细胞的杂交细胞,又成功完成小鼠淋巴细胞和人骨髓瘤细胞杂交实验。相关叙述不正确的是( )
A.两个电融合实验中,融合前都需用一定浓度的特定酶预处理实验材料
B.细胞经电融合处理后,需进一步筛选,以淘汰未融合细胞和多核细胞
C.电融合处理后的烟草细胞经组织培养,可获得具双亲优良性状的植株
D.经电融合获得的人、鼠杂交瘤细胞,培养过程中体现了细胞的全能性
【答案】D
【分析】植物体细胞杂交是指将不同来源的植物体细胞,在一定条件下融合成杂种细胞,并把杂种细胞培育成新植物体的技术。动物细胞融合技术是使两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的技术。融合后形成的杂交细胞具有原来两个或多个细胞的遗传信息。
【详解】A、因植物细胞外面的细胞壁阻碍了细胞间的杂交,因此在诱导两个品种烟草的叶肉细胞融合之前,先要用纤维素酶和果胶酶去除植物细胞的细胞壁;动物细胞虽然没有细胞壁,但为了防止人骨髓瘤细胞在培养过程中出现贴壁生长,在诱导小鼠淋巴细胞和人骨髓瘤细胞电融合前,也需用一定浓度的特定酶预处理实验材料,A正确;
B、融合后的细胞最初是多核的,经过有丝分裂后,细胞核才能融合,细胞经电融合处理后,需进一步筛选,以淘汰未融合细胞和多核细胞,B正确;
C、电融合处理后的烟草细胞经组织培养,可获得完整的植株。由于该植株的遗传物质来自双亲,所以能具有双亲的优良性状,C正确;
D、经电融合获得的人、鼠杂交瘤细胞,培养过程中体现了细胞膜的流动性,没有体现细胞的全能性,D错误。
故选D。
9.(2024·北京海淀·二模)体外培养发现绝大多数的克隆胚胎在囊胚阶段出现发育阻滞。Wnt通路抑制剂处理克隆囊胚后,供体的核移植胚胎出生率可大幅提高。下列相关叙述不正确的是( )
A.胚胎发育早期依次经历卵裂、囊胚和桑葚胚
B.动物克隆需用到动物细胞培养、核移植和胚胎移植等技术
C.Wnt信号通路持续异常激活可阻碍克隆胚胎发育过程
D.胚胎发育过程中部分细胞的凋亡是基因选择性表达的结果
【答案】A
【分析】胚胎移植的基本程序主要包括:①对供、受体的选择和处理(选择遗传特性和生产性能优秀的供体,有健康的体质和正常繁殖能力的受体。用激素进行同期发情处理,用促性腺激素对供体母牛做超数排卵处理);②配种或人工授精;③对胚胎的收集、检查、培养或保存(对胚胎进行质量检查,此时的胚胎应发育到桑椹或胚囊胚阶段);④对胚胎进行移植;⑤移植后的检查。
【详解】A、胚胎发育早期依次经历卵裂、桑葚胚和囊胚,A错误;
B、动物克隆需用到动物细胞培养、核移植和胚胎移植等技术,B正确;
C、Wnt通路抑制剂处理克隆囊胚后,供体的核移植胚胎出生率可大幅提高,因此Wnt信号通路持续异常激活可阻碍克隆胚胎发育过程,C正确;
D、胚胎发育过程中部分细胞的凋亡是基因选择性表达的结果,是基因控制的主动死亡的结果,D正确。
故选A。
10.(2023·北京顺义·二模)近年兴起的“科技食品”细胞培养肉是通过体外培养动物细胞制造出来的肉类,其生产流程如下图所示,相关叙述不正确的是( )
A.肌卫星细胞应具有较强的细胞增殖和肌肉分化能力
B.用纤维素酶处理剪碎的肌肉组织以分离肌卫星细胞
C.无血清培养基的组分明确可控、病毒感染风险小
D.生产细胞培养肉存在食品安全、技术滥用的风险
【答案】B
【分析】由题意可知,细胞培养肉是将肌肉细胞经分离脱分化得到肌卫星细胞后,在无血清培养基上进行培养,随后经加工形成的。
【详解】A、由图可知,肌卫星细胞由肌肉细胞脱分化得到,属于干细胞,应具有较强的细胞增殖和肌肉分化能力,A正确;
B、用胰蛋白酶酶处理剪碎的肌肉组织以分离肌卫星细胞,B错误;
C、无血清培养基是人工合成培养基,组分明确可控、病毒感染风险小,C正确;
D、生产细胞培养肉存在食品安全(如未经检测流入市场)、技术滥用(如用于其他领域)的风险,D正确。
故选B。
二、非选择题
11.(2024·北京·模拟预测)学习以下材料,回答(1)~(4)题。
神经干细胞的“内卷”之战
“本是同根生,相煎何太急”——小小细胞也会“内卷”,这是真的吗?人体在胚胎发育期,为了争夺有限的空间、能量以及营养因子,高速分裂的细胞很可能会发生激烈的“内卷之战”。高等级细胞会剥夺大量的资源,甚至剥夺底层细胞的生存权利。对于生命体来说,大脑是最复杂、最重要的器官,而且在大脑发有期间,往往会产生过量的细胞。因此研究人员推测大脑的神经干细胞之间也存在激烈的竞争。
研究人员在小鼠中利用不同荧光嵌合标记的原理,开发了新的标记和追踪系统,这样就可以在这种基因嵌合体胚胎小鼠的大脑中,使不同基因型的神经干细胞分别表达不同的荧光蛋白。特别是在同一母细胞分裂形成的相邻“姐妹干细胞”中实现了不同基因嵌合诱导表达并评价其生理效应。
经过短期和长期的追踪,研究人员发现那些携带不同基因型、散发不同荧光色的神经干细胞,展示出不同的命运。有的干细胞发生明显的克隆性扩增,有的干细胞则走向凋亡甚至被临近的细胞吞噬。研究人员进一步鉴定出两个驱动神经干细胞竞争的因子——Axin2和p53(如图),并证明二者之间至少存在上下游因果调控关系。
进一步研究发现Axin2和p53的同时缺失在削弱神经干细胞之间的竞争之后,小鼠大脑皮层的面积和厚度均显著增加,且神经元数目也明显增多。这表明Axin2和p53可能在神经发育过程中协调测量细胞适应性,调节自然细胞竞争,优化大脑大小。这也是首次在哺乳动物中证明细胞竞争对于组织器官大小存在着调控作用。有趣的是,研究人员并未在p53缺失的小鼠中观察到大脑的明显变化,说明削弱干细胞竞争所导致脑器官变大还需进一步深入探究。
(1)在胚胎发育早期,动物和人的神经干细胞经过增殖分化发育形成 细胞,组成了神经系统。
(2)研究人员首次揭示干细胞竞争在大脑发育中发挥的潜在作用,为脑发育尤其是大脑皮层发育带来了全新概念,在此过程中失败者干细胞会被清除掉,而优胜者干细胞则会发生显著的扩增,决定神经干细胞生存的正负调控因子分别是 。
(3)关于调控因子的表达对干细胞竞争以及大脑发有的调控机制,研究人员提出了以下4种模型:
注:→表示促进,表示抑制。
请根据上述研究判断哪个模型是最合理的,并阐述理由: 。
(4)一些科学家认为:干细胞竞争仅是在基因嵌合体小鼠相邻神经干细胞中由人工诱导出的基因型差异所导致的。请提出在自然发育的胚胎小鼠中也存在通过上述机制调控干细胞竞争的简要实验思路 。
【答案】(1)神经元、神经胶质/神经胶质细胞、神经元
(2)Axin2,p53
(3)模型4。理由:双缺失神经干细胞能够存活并增殖,与p53缺失细胞相似,说明p53位于Axin2下游;Axin2和Trp53同时缺失的小鼠大脑皮层的面积和厚度显著增加,但p53缺失小鼠中没有观察到大脑的明显变化,说明Axin2存在对大脑发育的单独调控机制
(4)分析野生型小鼠神经干细胞的细胞竞争情况与Axin2、p53基因的表达情况
【分析】1、组成神经系统的细胞主要包括神经元和神经胶质细胞两大类。
2、分析图可知,Axin2缺失会导致神经干细胞凋亡,p53缺失会导致神经干细胞发生明显的克隆性扩增,说明在神经干细胞的生存中,Axin2是作为正调控因子起作用的,p53是作为负调控因子起作用。
【详解】(1)神经干细胞经过增殖分化发育形成神经元和神经胶质细胞,组成了神经系统。
(2)Axin2缺失会导致神经干细胞凋亡,成为失败者干细胞;p53缺失会导致神经干细胞发生成为优胜者干细胞,说明决定神经干细胞生存的正负调控因子分别是Axin2、p53。
(3)根据题干和图分析可知,双缺失神经干细胞能够存活并增殖,且与p53缺失细胞相似,说明p53位于Axin2下游;Axin2和p53同时缺失的小鼠大脑皮层的面积和厚度显著增加,但p53缺失小鼠中没有观察到大脑的明显变化,说明Axin2存在对大脑发育的单独调控机制。因此最合理的模型为模型4。
(4)若要验证自然发育的胚胎小鼠中也存在通过上述机制调控干细胞竞争,可分析野生型小鼠神经干细胞的细胞竞争情况与Axin2、p53基因的表达情况
12.(2024·北京海淀·二模)女性更年期雌激素水平下降,糖尿病发病率升高。为研究相关机制,研究者进行了系列实验。
(1)雌激素有助于胰岛素对血糖的调节,胰岛素可促进血糖进入肝、肌肉并合成 ,进而降低血糖。
(2)研究者利用转基因技术获得了雌激素受体(R)基因敲除小鼠。向野生型和R基因敲除小鼠注射葡萄糖,短时间内检测发现两者血液中胰岛素水平的增加量相似。而向两种小鼠注射等量胰岛素5分钟后,检测骨骼肌组织中胰岛素含量,结果如图1.结合以上信息,从胰岛素合成和运输的角度分析,说明雌激素 。
(3)研究发现,骨骼肌血管内表面的细胞(内皮细胞)表达R蛋白。研究者推测雌激素通过调节内皮细胞相关基因表达,影响胰岛素发挥作用,进行了下列实验。
①为检测内皮细胞中受雌激素调节的基因,研究人员利用转GFP-核糖体蛋白融合基因的小鼠进行如下实验:
施加雌激素引起内皮细胞中 的种类及含量变化。通过分析比对,研究人员认为囊泡运输相关蛋白基因S为内皮细胞中受雌激素调节的重要靶基因。
②为验证上述结果,研究人员以骨骼肌血管内皮细胞为材料,进行了下表所示实验,结果如图3.
组别
注射RNA
转入基因
处理及检测
1
a
无
施加生理盐水或雌激素,检测R蛋白的含量、S基因的转录量
2
与R-mRNA互补的RNA
无
3
b
4
缺失核定位信号序列的R蛋白基因
注:核定位信号序列可引导R蛋白进入细胞核。
a、b处应分别为 。2~4组注入与R-mRNA互补的RNA的目的是排除 。在上述细胞培养基中加入荧光标记的胰岛素,施加雌激素后,1、3组的内皮细胞中可观察到荧光,而2、4组几乎无荧光分布。
(4)综合上述信息,完善下列雌激素调控胰岛素发挥作用的机制:雌激素与R结合,使R →促进S基因的转录→促进胰岛素 →胰岛素作用于骨骼肌细胞。
(5)有人提出通过注射雌激素可以用于治疗糖尿病。综合上述研究,你是否同意这种想法并说明理由 。
【答案】(1)糖原(肝糖原和肌糖原)
(2)不影响胰岛素的合成,促进胰岛素向骨骼肌组织运输
(3) 正在翻译的mRNA 与 R-mRNA不能互补的RNA、完整的R蛋白基因 内源R蛋白对S基因表达的影响
(4) 进入细胞核 在骨骼肌内皮细胞的转运
(5)不同意,注射雌激素会影响患者体内性激素平衡,带来副作用;
同意,对于雌激素水平低的女性糖尿病患者,注射适量雌激素能够降低血糖;
不完全同意,需要检测糖尿病患者体内雌激素水平,评估注射雌激素对糖尿病患 者的影响
【分析】胰岛素是唯一能降低血糖的激素,其作用分为两个方面:促进血糖氧化分解、合成糖原、转化成非糖类物质;抑制肝糖原的分解和非糖类物质转化。当胰岛素和其受体结合后,一方面促进葡萄糖的氧化分解、合成糖原和转化形成非糖类物质,另一方面使细胞膜上的葡萄糖转运蛋白增加,促进葡萄糖进入细胞,从而使血糖浓度降低。
【详解】(1)胰岛素能够降低血糖的途径之一是促进血糖进入肝、肌肉并合成肝糖原和肌糖原。
(2)分析图1,因变量是骨骼肌组织中胰岛素含量,野生型小鼠和基因敲除小鼠的胰岛素含量差别不大,但野生型小鼠注射胰岛素后胰岛素含量明显升高,而R基因敲除小鼠注射胰岛素后胰岛素增加不明显,说明雌激素不影响胰岛素的合成,促进胰岛素向骨骼肌组织运输。
(3)①mRNA是翻译的模板,分析题意,骨骼肌血管内表面的细胞(内皮细胞)表达R蛋白,结合后续的实验可推测,施加雌激素引起内皮细胞中正在翻译的mRNA的种类及含量变化。
②实验目的是验证囊泡运输相关蛋白基因S为内皮细胞中受雌激素调节的重要靶基因,实验的自变量是RNA能否正常发挥作用及转入基因的有无,实验设计应遵循对照与单一变量原则,故据此推测,a、b处应分别为与 R-mRNA不能互补的RNA、完整的R蛋白基因;2~4组注入与R-mRNA互补的RNA的目的是排除 内源R蛋白对S基因表达的影响。
(4)综合上述信息,雌激素调控胰岛素发挥作用的机制是:雌激素与R结合,使R进入细胞核→促进S基因的转录→促进胰岛素在骨骼肌内皮细胞的转运→胰岛素作用于骨骼肌细胞。
(5)有人提出通过注射雌激素可以用于治疗糖尿病,对于该观点,言之成理即可,故可表述为:
不同意,注射雌激素会影响患者体内性激素平衡,带来副作用;
同意,对于雌激素水平低的女性糖尿病患者,注射适量雌激素能够降低血糖;
不完全同意,需要检测糖尿病患者体内雌激素水平,评估注射雌激素对糖尿病患 者的影响
13.(2024·北京西城·二模)裸鼹鼠几乎不得癌症,其寿命可超过30年,同样大小的家鼠最长寿命为4年。为探究其原因,科研人员做了以下研究。
(1)将裸鼹鼠皮肤成纤维细胞置于 培养箱进行体外培养,经检测发现其分泌大量粘稠的高分子量透明质酸(HA),可抑制细胞过度增殖。
(2)研究者检测不同来源成纤维细胞中HA合成酶(HAS)的含量,结果如图1。另外,发现裸鼹鼠组织的HA降解酶(HAase)的活性远低于人和小鼠。结合图文信息,分析裸鼹鼠皮肤成纤维细胞分泌大量高分子量HA的原因是 。
结果显示,裸鼹鼠胚胎期HA合成酶低表达,推测其意义是 。
(3)为进一步研究高分子量HA能否提高小鼠的寿命,研究人员进行了下列实验(图2)。
NeoR:新霉素抗性基因;nmrHas2:裸鼹鼠 HA 合成酶 2 基因;CE:cre 重组酶-雌激素受体融合基因
注:启动子仅启动相邻基因的表达
①通过转基因技术获得转基因小鼠A:为了将目的基因插入小鼠6号染色体的特定位点,需在其两端设计与6号染色体同源序列,实现同源序列之间的重组。由此获得的转基因小鼠A暂时无法表达HA合成酶2,原因是 。
②B鼠为导入表达CE的纯合子,CE也插入6号染色体的相同位点。外源雌激素可诱导cre重组酶活化,活化的cre重组酶能识别并切除loxP位点间的序列。A、B鼠交配获得C、D鼠,请画出C鼠的基因组成情况 。
③利用C、D鼠进行实验,测得实验组小鼠HA含量升高,癌症概率降低、炎症反应减少,寿命也得到了延长。请写出对照组的选材 (“C”或“D”)及实验处理。
(4)请简述本研究的应用前景 。
【答案】(1)CO2
(2) 裸鼹鼠体内HA合成酶2表达量(含量)高,促进HA合成;而HA降解酶活性低,减少分解 避免对胚胎期细胞分裂的抑制作用,保障正常生长发育
(3) 启动子未直接与HA合成酶2的基因相连 选材:D鼠,处理:注射外源雌激素
(4)高分子透明质酸未来可以应用于改善人类健康状况,治疗癌症和提升人类寿命等。
【分析】1、动物细胞培养所需气体主要有氧气和二氧化碳,氧气是细胞代谢所必需的,二氧化碳的主要作用是维持培养液的pH值。进行细胞培养时,通常采用培养皿或松盖培养瓶,将他们置于含有95%空气和5%二氧化碳混合气体的二氧化碳培养箱中进行培养
【详解】(1)动物细胞培养所需气体主要有氧气和二氧化碳,氧气是细胞代谢所必需的,二氧化碳的主要作用是维持培养液的pH值。进行细胞培养时,通常采用培养皿或松盖培养瓶,将他们置于含有95%空气和5%二氧化碳混合气体的二氧化碳培养箱中进行培养。将裸鼹鼠皮肤成纤维细胞置于CO2培养箱进行体外培养。
(2)根据图文信息可知,裸鼹鼠体内HA合成酶2表达量(含量)高,能够促进HA合成;而且HA降解酶活性低,减少分解,因此裸鼹鼠皮肤成纤维细胞分泌大量高分子量HA。根据题干信息可知,高分子量透明质酸(HA)可抑制细胞过度增殖。由此推测,裸鼹鼠胚胎期HA合成酶低表达,是为了避免对胚胎期细胞分裂的抑制作用,保障正常生长发育。
(3)通过将目的基因插入小鼠6号染色体的特定位点,需在其两端设计与6号染色体同源序列,实现同源序列之间的重组,由此获得的转基因小鼠A,由于启动子未直接与HA合成酶2的基因相连,因此转基因小鼠A暂时无法表达HA合成酶2。根据图示可知小鼠A、B的基因组成,将A、B鼠交配获得C、D鼠,C鼠基因组成如图所示:
根据题意信息可知,外源雌激素可诱导cre重组酶活化,活化的cre重组酶能识别并切除loxP位点间的序列。利用C、D鼠进行实验,测得实验组小鼠HA含量升高,癌症概率降低、炎症反应减少,寿命也得到了延长。因为D鼠没有loxP位点,因此C鼠为实验组,D鼠则是作为对照组,通过注射外源雌激素能够诱导cre重组酶活化,活化的cre重组酶能识别并切除loxP位点间的序列。
(4)根据题意可知,高分子量透明质酸可抑制细胞过度增殖,由此推测高分子透明质酸未来可以应用于改善人类健康状况,治疗癌症和提升人类寿命等。
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热点01 成体干细胞的可塑性
近年研究发现,有些成体干细胞可跨越组织类型向其他组织类型分化,这被称为成体干细胞的可塑性,如造血干细胞可以向神经细胞分化。
如何解释这种发育学现象呢?有学者认为,造血干细胞存在着横向分化,如造血干细胞先分化成为神经干细胞,神经干细胞再进一步分化为神经细胞或神经胶质细胞;也有学者认为,成体干细胞的可塑性是细胞融合引发的假象。
一、真核细胞基因表达的调控
1.基因表达的转录调控
①转录增强调控:其他因素调控使相关基因转录增强,如下图中组蛋白修饰后与DNA结合紧密程度发生改变,若结合程度变小,则促进基因表达属于转录增强调控。
②转录抑制调控:其他因素调控使相关基因转录抑制。如诱导物诱导的阻遏蛋白对基因表达的调控、基因甲基化导致的基因不表达等均为转录抑制调控。
2.基因表达的转录后调控
①RNA干扰:mRNA转录后不能翻译,如图所示为miRNA导致的靶基因mRNA不翻译,进而被降解。
②蛋白质加工水平的调控:蛋白质分子的功能依赖于特定的空间结构,肽链合成后的加工与基因能否表达出特定的遗传性状密切相关,如分子伴侣调控的基因表达。
二、细胞分化
1.细胞分化的判断标准
(1)细胞水平:同一来源的细胞是否形成形态、结构和功能不同的细胞(与众不同)
(2)分子水平:是否有特殊基因的表达;是否含有特殊成分(奢侈基因表达)
2.细胞分化中的“变”:mRNA、蛋白质、细胞的形态结构和功能
3.细胞分化中的“不变”:DNA、tRNA、rRNA、细胞的数量
3、 动物细胞培养
1. 过程
2.培养条件
(1)无菌、无毒环境
(2)营养:除糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素之外,通常还需加入③ 血清、血浆 等一些天然成分。
(3)适宜的温度:36.5 ℃±0.5 ℃;适宜的pH:7.2~7.4。
(4)气体环境:5%的二氧化碳培养箱,维持培养液的pH。
(建议用时:40分钟)
一、选择题
1.(2024·北京海淀·二模)研究者将M病毒膜蛋白注射小鼠,分离小鼠脾细胞并将其与S细胞融合,通过筛选获得单个稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞。下列相关叙述正确的是( )
A.用动物细胞培养液培养M病毒,通过离心可获得膜蛋白作为抗原
B.可用M病毒膜蛋白多次免疫小鼠,以获得更多的浆细胞
C.S细胞应具备产生抗体和无限增殖的能力
D.体外培养单个杂交瘤细胞获得大量抗体体现了细胞的全能性
2.(2024·北京西城·二模)线粒体正常的形态和数量与其融合、裂变相关,该过程受DRP-1和FZO-1等基因的调控。衰老过程中,肌肉细胞线粒体形态数量发生变化、线粒体碎片化增加。下图是研究运动对衰老线虫肌肉细胞线粒体影响的结果。说法正确的是( )
注:颜色越深代表细胞中线粒体碎片化程度越高,drp-1、fzo-1代表相关基因突变体
A.线粒体是细胞合成ATP的唯一场所
B.运动可减缓衰老引起的线粒体碎片化
C.敲除DRP-1基因会加重线粒体碎片化
D.线粒体融合与裂变不是运动益处所必需
3.(2024·北京顺义·一模)科研工作者在果蝇眼中发现一种蛋白E,将E基因导入即将发育为腿的幼虫细胞中,诱导此处产生了构成眼的不同类型的细胞群,最终在腿的中部形成了眼。据此推测正确的是( )
A.发育为腿的幼虫细胞因缺少E基因而不能发育为眼
B.构成果蝇眼的不同类型的细胞中所含蛋白质完全相同
C.蛋白E启动了不同类型细胞群中特异基因的表达
D.蛋白E激活相同基因使发育为腿的细胞转化为眼的不同类型细胞
4.(2024·北京朝阳·一模)研究者构建敲除B基因的人胚胎干细胞系,诱导其向平滑肌细胞分化,发现敲除B基因明显降低平滑肌细胞标志基因的表达水平。发生形态转变的细胞占比少于对照细胞系。以下关于“人胚胎干细胞”的叙述错误的是( )
A.分化为平滑肌细胞过程中遗传物质未改变
B.与平滑肌细胞形态差异是由于某些蛋白质不同
C.向平滑肌细胞分化过程中B基因起抑制作用
D.向平滑肌细胞分化过程中分化潜能逐渐降低
5.(2025·北京通州·模拟预测)高血糖环境中,在DNA甲基转移酶催化下使视网膜细胞线粒体DNA碱基甲基化水平升高,引起视网膜细胞线粒体损伤和功能异常。下列叙述错误的是( )
A.线粒体DNA甲基化水平升高,可以影响相关基因的表达
B.高血糖环境中线粒体DNA复制时遵循碱基互补配对原则
C.高血糖环境引起的甲基化改变患者线粒体DNA碱基序列
D.糖尿病患者容易发生视网膜细胞线粒体DNA基甲基化水平升高
6.(2024·北京西城·一模)FTO蛋白可擦除N基因mRNA的甲基化修饰,避免mRNA被Y蛋白识别而降解,从而提高了鱼类的抗病能力。相关分析正确的是( )
A.Y蛋白能识别mRNA甲基化修饰 B.mRNA甲基化会影响其转录
C.mRNA甲基化会提高其稳定性 D.N基因表达会降低鱼类抗病能力
7.(2024·北京朝阳·二模)肿瘤细胞通过细胞膜上的PD-L1蛋白与机体T细胞膜上PD-1蛋白结合,抑制T细胞激活,实现免疫逃逸。科研人员制备靶向PD-L1的单克隆抗体治疗肿瘤,下列说法错误的是( )
A.需用PD-1免疫小鼠以获得B细胞
B.用灭活的病毒诱导产生杂交瘤细胞
C.杂交瘤细胞的培养液中需添加动物血清
D.利用抗原-抗体结合的原理制备靶向药物
8.(2024·北京昌平·二模)我国科研人员在太空中进行细胞电融合实验,获得烟草黄花品种叶肉细胞与烟草革新一号叶肉细胞的杂交细胞,又成功完成小鼠淋巴细胞和人骨髓瘤细胞杂交实验。相关叙述不正确的是( )
A.两个电融合实验中,融合前都需用一定浓度的特定酶预处理实验材料
B.细胞经电融合处理后,需进一步筛选,以淘汰未融合细胞和多核细胞
C.电融合处理后的烟草细胞经组织培养,可获得具双亲优良性状的植株
D.经电融合获得的人、鼠杂交瘤细胞,培养过程中体现了细胞的全能性
9.(2024·北京海淀·二模)体外培养发现绝大多数的克隆胚胎在囊胚阶段出现发育阻滞。Wnt通路抑制剂处理克隆囊胚后,供体的核移植胚胎出生率可大幅提高。下列相关叙述不正确的是( )
A.胚胎发育早期依次经历卵裂、囊胚和桑葚胚
B.动物克隆需用到动物细胞培养、核移植和胚胎移植等技术
C.Wnt信号通路持续异常激活可阻碍克隆胚胎发育过程
D.胚胎发育过程中部分细胞的凋亡是基因选择性表达的结果
10.(2023·北京顺义·二模)近年兴起的“科技食品”细胞培养肉是通过体外培养动物细胞制造出来的肉类,其生产流程如下图所示,相关叙述不正确的是( )
A.肌卫星细胞应具有较强的细胞增殖和肌肉分化能力
B.用纤维素酶处理剪碎的肌肉组织以分离肌卫星细胞
C.无血清培养基的组分明确可控、病毒感染风险小
D.生产细胞培养肉存在食品安全、技术滥用的风险
二、非选择题
11.(2024·北京·模拟预测)学习以下材料,回答(1)~(4)题。
神经干细胞的“内卷”之战
“本是同根生,相煎何太急”——小小细胞也会“内卷”,这是真的吗?人体在胚胎发育期,为了争夺有限的空间、能量以及营养因子,高速分裂的细胞很可能会发生激烈的“内卷之战”。高等级细胞会剥夺大量的资源,甚至剥夺底层细胞的生存权利。对于生命体来说,大脑是最复杂、最重要的器官,而且在大脑发有期间,往往会产生过量的细胞。因此研究人员推测大脑的神经干细胞之间也存在激烈的竞争。
研究人员在小鼠中利用不同荧光嵌合标记的原理,开发了新的标记和追踪系统,这样就可以在这种基因嵌合体胚胎小鼠的大脑中,使不同基因型的神经干细胞分别表达不同的荧光蛋白。特别是在同一母细胞分裂形成的相邻“姐妹干细胞”中实现了不同基因嵌合诱导表达并评价其生理效应。
经过短期和长期的追踪,研究人员发现那些携带不同基因型、散发不同荧光色的神经干细胞,展示出不同的命运。有的干细胞发生明显的克隆性扩增,有的干细胞则走向凋亡甚至被临近的细胞吞噬。研究人员进一步鉴定出两个驱动神经干细胞竞争的因子——Axin2和p53(如图),并证明二者之间至少存在上下游因果调控关系。
进一步研究发现Axin2和p53的同时缺失在削弱神经干细胞之间的竞争之后,小鼠大脑皮层的面积和厚度均显著增加,且神经元数目也明显增多。这表明Axin2和p53可能在神经发育过程中协调测量细胞适应性,调节自然细胞竞争,优化大脑大小。这也是首次在哺乳动物中证明细胞竞争对于组织器官大小存在着调控作用。有趣的是,研究人员并未在p53缺失的小鼠中观察到大脑的明显变化,说明削弱干细胞竞争所导致脑器官变大还需进一步深入探究。
(1)在胚胎发育早期,动物和人的神经干细胞经过增殖分化发育形成 细胞,组成了神经系统。
(2)研究人员首次揭示干细胞竞争在大脑发育中发挥的潜在作用,为脑发育尤其是大脑皮层发育带来了全新概念,在此过程中失败者干细胞会被清除掉,而优胜者干细胞则会发生显著的扩增,决定神经干细胞生存的正负调控因子分别是 。
(3)关于调控因子的表达对干细胞竞争以及大脑发有的调控机制,研究人员提出了以下4种模型:
注:→表示促进,表示抑制。
请根据上述研究判断哪个模型是最合理的,并阐述理由: 。
(4)一些科学家认为:干细胞竞争仅是在基因嵌合体小鼠相邻神经干细胞中由人工诱导出的基因型差异所导致的。请提出在自然发育的胚胎小鼠中也存在通过上述机制调控干细胞竞争的简要实验思路 。
12.(2024·北京海淀·二模)女性更年期雌激素水平下降,糖尿病发病率升高。为研究相关机制,研究者进行了系列实验。
(1)雌激素有助于胰岛素对血糖的调节,胰岛素可促进血糖进入肝、肌肉并合成 ,进而降低血糖。
(2)研究者利用转基因技术获得了雌激素受体(R)基因敲除小鼠。向野生型和R基因敲除小鼠注射葡萄糖,短时间内检测发现两者血液中胰岛素水平的增加量相似。而向两种小鼠注射等量胰岛素5分钟后,检测骨骼肌组织中胰岛素含量,结果如图1.结合以上信息,从胰岛素合成和运输的角度分析,说明雌激素 。
(3)研究发现,骨骼肌血管内表面的细胞(内皮细胞)表达R蛋白。研究者推测雌激素通过调节内皮细胞相关基因表达,影响胰岛素发挥作用,进行了下列实验。
①为检测内皮细胞中受雌激素调节的基因,研究人员利用转GFP-核糖体蛋白融合基因的小鼠进行如下实验:
施加雌激素引起内皮细胞中 的种类及含量变化。通过分析比对,研究人员认为囊泡运输相关蛋白基因S为内皮细胞中受雌激素调节的重要靶基因。
②为验证上述结果,研究人员以骨骼肌血管内皮细胞为材料,进行了下表所示实验,结果如图3.
组别
注射RNA
转入基因
处理及检测
1
a
无
施加生理盐水或雌激素,检测R蛋白的含量、S基因的转录量
2
与R-mRNA互补的RNA
无
3
b
4
缺失核定位信号序列的R蛋白基因
注:核定位信号序列可引导R蛋白进入细胞核。
a、b处应分别为 。2~4组注入与R-mRNA互补的RNA的目的是排除 。在上述细胞培养基中加入荧光标记的胰岛素,施加雌激素后,1、3组的内皮细胞中可观察到荧光,而2、4组几乎无荧光分布。
(4)综合上述信息,完善下列雌激素调控胰岛素发挥作用的机制:雌激素与R结合,使R →促进S基因的转录→促进胰岛素 →胰岛素作用于骨骼肌细胞。
(5)有人提出通过注射雌激素可以用于治疗糖尿病。综合上述研究,你是否同意这种想法并说明理由 。
13.(2024·北京西城·二模)裸鼹鼠几乎不得癌症,其寿命可超过30年,同样大小的家鼠最长寿命为4年。为探究其原因,科研人员做了以下研究。
(1)将裸鼹鼠皮肤成纤维细胞置于 培养箱进行体外培养,经检测发现其分泌大量粘稠的高分子量透明质酸(HA),可抑制细胞过度增殖。
(2)研究者检测不同来源成纤维细胞中HA合成酶(HAS)的含量,结果如图1。另外,发现裸鼹鼠组织的HA降解酶(HAase)的活性远低于人和小鼠。结合图文信息,分析裸鼹鼠皮肤成纤维细胞分泌大量高分子量HA的原因是 。
结果显示,裸鼹鼠胚胎期HA合成酶低表达,推测其意义是 。
(3)为进一步研究高分子量HA能否提高小鼠的寿命,研究人员进行了下列实验(图2)。
NeoR:新霉素抗性基因;nmrHas2:裸鼹鼠 HA 合成酶 2 基因;CE:cre 重组酶-雌激素受体融合基因
注:启动子仅启动相邻基因的表达
①通过转基因技术获得转基因小鼠A:为了将目的基因插入小鼠6号染色体的特定位点,需在其两端设计与6号染色体同源序列,实现同源序列之间的重组。由此获得的转基因小鼠A暂时无法表达HA合成酶2,原因是 。
②B鼠为导入表达CE的纯合子,CE也插入6号染色体的相同位点。外源雌激素可诱导cre重组酶活化,活化的cre重组酶能识别并切除loxP位点间的序列。A、B鼠交配获得C、D鼠,请画出C鼠的基因组成情况 。
③利用C、D鼠进行实验,测得实验组小鼠HA含量升高,癌症概率降低、炎症反应减少,寿命也得到了延长。请写出对照组的选材 (“C”或“D”)及实验处理。
(4)请简述本研究的应用前景 。
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