1.2.1 微生物的培养技术及应用-【晨读晚练】2024-2025学年高二生物知识速记与提升（人教版2019选择性必修3）

1．2 微生物的培养技术及应用（第一课时） （必背要点+必知重难+知识检测） 一、培养基 1．培养基的概念：人们按照微生物对 营养物养物质 的不同需求，配制出供其 生养物长繁殖 的营养基质。 2．培养基的作用：用以 培养、分养物离、鉴定、保存 微生物或 积累养物其代谢物 。 培养基种类 划分标准 特点 用途 液养物体 培养基 物理性质 不含 凝固剂 (如琼脂)，呈液体状态 工业生产 固养物体 培养基 含 凝固剂 (琼脂)，呈固体状态 微生物 分离、鉴定 、 活菌计数 、菌种保藏 3．种类 4.营养成分 (1)一般组成： 水、碳源、氮养物源和无机盐 等营养物质。 (2)特殊需求：满足微生物生长对 p养物H 、特殊营养物质以及 氧气养物 的需求。 ①培养乳酸杆菌时，需要在培养基中添加 养物维生素 。 ②培养霉菌时，一般需要将培养基调至 酸养物 性。 ③培养细菌时，一般需要将培养基调至 中性养物或弱碱 性。 ④培养厌氧微生物时，则需要提供 养物养物无氧 的条件。 二、无菌技术 1．无菌技术的目的：获得 纯净的微生养物物培养物，无菌技术关键防止 外来杂菌养物污染 。 2．消毒与灭菌 项目 消毒 灭菌 概念 使用较为温和的物理、化学或生物等方法杀死物体 表面或内养物部 的一部分微生物(不包括芽孢和孢子) 使用强烈的理化方法杀死物体内外 所有的微生养物物 (包括芽孢和孢子) 常用方法 养物煮沸 消毒法、 巴养物氏 消毒法、化学药剂消毒法等 湿热养物 灭菌、干热灭菌、 灼养物烧 灭菌 适用对象 操作空间、双手等 接种环、接种针、玻璃器皿、培养基等 3.具体操作 (1)对实验操作的 空养物间 、操作者的衣着和手，进行 清洁养物和消毒 。 (2)将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行 灭养物菌 。 (3)实验操作时应避免已经 灭菌处养物理 的材料用具与 周围的物养物品 相接触 (4)为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在 超净养物工作台并在酒精灯火焰 附近进行。 三、微生物的纯培养 1．培养物、纯培养物与纯培养的概念 项目 概念 培养物 接种于培养基内，在合适条件下形成的含 特定种类微生物 的群体 纯培养物 由 单一养养物物个体 繁殖所获得的微生物群体 纯培养 获得 纯培养养物养物物 的过程 2．微生物纯培养步骤：微生物的纯培养包括配制培养基、灭菌、接种、分离和培养等步 3．酵母菌的纯培养 (1)原理：微生物群体分散或稀释成单个细胞，单个细胞繁殖成单个菌落。 ①菌落：分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖形成肉眼可见的、有一定形态结构的 子细胞群养物体 ，这就是菌落。 ②获得单菌落的方法：采用 平养物板划线 法和 稀释涂布养物平板 法将单个微生物分散在固体培养基上，之后经培养得到的单菌落一般是由单个微生物繁殖形成的纯培养物。 (2)方法步骤 ①制备培养基 a．配制培养基：马铃薯、葡萄糖、琼脂、蒸馏水。 b．灭菌：培养基用 高压蒸汽灭养物菌 ；培养皿用 养物干热灭菌箱灭菌 。 c．倒平板：待培养基冷却至50 ℃左右，在酒精灯火焰附近倒平板。 ②接种和分离酵母菌 a．平板划线法的原理 通过接种环在固体培养基表面 连续划养物线 的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。经数次划线后培养，可以分离得到 单养物菌落 。 b．培养酵母菌 纯培养的原理 由 单一个养物体 繁殖所获得的微生物群体称为纯培养物，获得 纯养物培养物 的过程就是纯培养 纯培养方法 平板养物划线法 和稀释涂布平板法 纯培养过程 制备培养基 配制养物培养基 →灭菌→ 倒养物养物平板 接种和分离酵母菌 用 平板划线 法在固体培养基表面接种酵母菌，经 数次划线 后培养，可以分离得到单菌落 培养酵母菌 待菌液被 培养基养物 吸收，将接种后的平板和一个未接种的平板 养物倒置 ，放入28 ℃左右的恒温培养箱中培养 24养物～48 h 一、培养基 1．培养基的配制原则 (1)目的要明确：不同的微生物 需求养物 不同，根据 培养物养目的 进行配制。 (2)营养要协调：营养物质的 浓度养物 和 比养物例 要适宜。 (3)pH要适宜：为维持pH的 相对恒养物定 ，可在培养基中加入 缓冲养物剂 ，常用磷酸氢二钾—磷酸二氢钾。　　　　 2.特定培养基的设计原理与应用实例 特定培养基 的设计原理 应用实例 具体处理 分离菌种 依据营养需求 不添加碳源 自养微生物(硝化细菌等) 不添加氮源 固氮微生物(圆褐固氮菌等) 以尿素为唯一氮源 能分解尿素的微生物 以石油为唯一碳源 能分解石油的微生物 加入某种化学物质，其不作为营养物质，对目标微生物无害，但会抑制或杀死其他微生物 加入青霉素、四环素或链霉素 抑制细菌和放线菌生长→分离酵母菌、霉菌等 加入10%的酚 抑制细菌和霉菌生长→分离放线菌 利用特殊环境 置于无氧条件下 厌氧型和兼性厌氧型微生物→分离乳酸菌、酵母菌等 置于高盐环境中 其他菌在高盐环境中易失水而不能生存→分离金黄色葡萄球菌 置于高温环境中 其他微生物因酶失活而无法生存→分离耐高温微生物 3．培养基的注意事项 (1)营养物质浓度 养物养物低 不能满足微生物营养需要， 过养物养物高 对微生物的生长有抑制作用。 (2)各种微生物适宜生长的pH范围不同，如细菌的适宜pH约为6.5～7.5、放线菌的适宜pH约为7.5～8.5、真菌的适宜pH约为5.0～6.0。　 二、无菌技术 1．常用方法的方法及适用对象 (1)不 2．消毒与灭菌的比较 类别 消毒 灭菌 条件 使用 较为温养物和 的物理或化学方法 使用强烈的 理化养物方法 结果 杀死 物体表面或内部 的部分微生物(不包括 芽孢和孢子 ) 杀死 物体内养物外所有 的微生物，包括芽孢和孢子 常用方法 煮沸消毒法、化学药剂(如酒精、氯气等)消毒法、紫外线消毒法、巴氏消毒 灼烧灭菌、干热灭菌、湿热灭菌 主要区别 芽孢和孢子是否存活 相同点 消毒和灭菌的实质都是使微生物的 蛋白质或养物核酸 变性 三、微生物的纯培养 1．倒平板的操作步骤 2．倒平板的注意事项 (1)培养基要冷却 到50养物 ℃左右 时开始倒平板，温度过高会烫手，过低培养基又会凝固。 (2)要使锥形瓶的瓶口通过酒精灯火焰，通过 灼℃左右烧 灭菌，防止瓶口的微生物 污℃左染培养基 。 (3)倒平板时，将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，不要 完全℃左右打开 ，以免杂菌污染培养基。 (4)平板凝固后，要将平板倒置。因为平板冷凝后，皿盖上会 凝℃左右结水珠 ，平板倒置后，既可避免培养基表面的 水分过快地℃左右挥发 ，又可防止皿盖上的 水珠落入℃左右培养基 ，造成污染。 (5)在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿℃左右底 之间的部位，那么这个平板不能用来培养微生物。因为空气中的微生物可能在 皿盖与皿底 之间的培养基上滋生。 (6)整个操作过程要在 酒精灯火℃左右焰 旁进行，避免杂菌污染。 3．平板划线的操作步骤 【问题引导】 (1)倒平板时，培养基冷凝后，为什么要将平板倒置？ 培养基冷凝后，皿盖上会凝结水珠，将平板倒置既可以防止皿盖的水珠落入培养基，又可以避免培养基中的水分过快地挥发。上会凝结水珠，将平板倒置既可以防止皿盖的水珠落入上会凝结水珠，将平板倒 (2)接种操作时每次划线接种前与接种后都要灼烧接种环或接种针，其目的分别是什么？ 划线前灼烧是为了杀死上次划线结束后残留的菌种。划线结束后灼烧，能及时杀死接种环或接种针上残留的菌种，避免污染环 境和感染操作者。 (3)接种结束后，为什么要将一个未接种的培养基和一个接种的培养基放在一起培养？未接种的培养基表面如果有菌落生长，说明了什么？ 培养未接种培养基的作用是对照，未接种的培养基在恒温箱中保温1～2__d后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，若有 菌落形成，说明培养基灭菌不彻底，或培养基被污染了，需要重新制备。 4．平板划线操作的注意事项 (1)蘸取菌液及每次划线之前都需要灼烧接种环，划线操作结束后仍需灼烧接种环，灼烧的目的不同。 项目 目的 蘸取菌液前灼烧 避免接种环上可能存在的微生物污染菌种 每次划线前灼烧 杀死上一次划线结束后接种环上残留的菌种，使下一次划线时接种环上的菌种直接来源于上一次划线的末端 最后一次划线结束后灼烧 及时杀死接种环上残留的菌种，避免菌种污染环境和感染操作者 (2)在灼烧接种环之后，要 等 其冷却 再进行划线，以免温度过高杀死菌种。 (3)除第一次划线外，每次划线都从上一次划线的末端开始，这样能使细菌的数 目 随着划线次数的增加而 逐渐 减少 ，最终能得到由 单个细 胞繁殖 而来的菌落。 (4)划线的最后一区域不要 与 第一区域相连 。 (5)划线时用力大小要适当，防止用力过大将 培养 基划破 。　　　　　　　　　　　　　 5．酵母菌的纯培养 (1)实验原理 (2)方法步骤 (3)结果分析与评价 ①未接种酵母菌的培养基表面不应出现菌落。若出现则说明培养基或实验器械 灭 菌不彻底 ，或操作过程有杂菌污染。 ②规范操作的情况下，在接种酵母菌的培养基表面可以看到单菌落，这些菌落的 颜色 、形状和大小 基本一致。如果观察到 不 同形态 的菌落，说明受到了杂菌污染。 （限时：15min） 一、单选题 1．（2008·全国·高考真题）下列关于细菌的叙述，错误的是（    ） A．硝化细菌能以NH3，作为氮源和能源物质 B．某些细菌可以利用光能固定CO2合成有机物 C．生长因子是某些细菌生长过程中需要额外补充的营养物质 D．含伊红和美蓝试剂的培养基不能用来鉴别牛奶中的大肠杆菌 2．下表是某同学培养微生物时配制的培养基，关于此培养基的说法，错误的是（    ） 编号 ① ② ③ ④ ⑤ 成分 含量 0.4g 4.0g 0.5g 0.5g 100mL A．此培养基只能用来培养自养型微生物 B．此表中的营养成分共有三类，即水、无机盐、氮源 C．表中各成分的质量按照所培养的微生物的营养需要来确定 D．若除去①，再在此培养基中加入有机碳源，则可用于培养大肠杆菌 3．防止杂菌入侵，获得纯净培养物，是研究和应用微生物的前提。下列叙述错误的是（    ） A．接种室、接种箱或超净工作台在使用前，可以用紫外线照射30min，以杀死物体表面或空气中的微生物，在照射前，适当喷洒石碳酸或煤酚皂液等消毒液，可以加强消毒效果 B．牛奶使用巴氏消毒法处理，在100℃煮30min，可以杀死牛奶中的微生物，且牛奶的营养成分不被破坏 C．在实验室中，不可吃东西、喝水，离开实验室一定要洗手，以防止被微生物感染 D．使用后的培养基丢弃前一定要进行灭菌处理，以免污染环境 4．为研究“使用公筷对餐后菜品细菌数量的影响”，某研究小组进行了如下实验。相关操作或叙述正确的是（　　） A．固体培养基X对菜品中的细菌有选择性，属于选择培养基 B．配制培养基X并在121℃、100kPa条件下处理15～30min C．在固体培养基X上可用平板划线法或涂布法接种细菌 D．根据菌落的特征可准确判断细菌的种类 5．（2024·江苏·高考真题）某同学进行下列实验时，相关操作合理的是（    ） A．从试管取菌种前，先在火焰旁拔棉塞，再将试管口迅速通过火焰以灭菌 B．观察黑藻的细胞质流动时，在高倍镜下先调粗准焦螺旋，再调细准焦螺旋 C．探究温度对酶活性的影响时，先将酶与底物混合，然后在不同温度下水浴处理 D．鉴定脂肪时，子叶临时切片先用体积分数为50%的乙醇浸泡，再用苏丹Ⅲ染液染色 6．酵母菌的纯培养包括配制培养基、灭菌、接种、分离和培养等步骤。下列相关叙述正确的是（    ） A．倒平板时冷却后的培养皿需倒置主要是为了方便观察 B．利用平板划线法接种时，接种环只蘸取一次酵母菌液 C．在配制固体培养基时需要先进行灭菌，再对pH进行调节 D．纯培养物是由单一酵母菌繁殖所获得的酵母菌群体分泌的代谢物 7．为探究某细菌对A、B、C三种生长因子的需求，研究小组采用生长图形法进行实验，首先把该菌的悬浮液与不含A、B、C的基本培养基混合后倒成平板，然后在平板上划分数区，A、B、C三种生长因子添加区域及培养结果如图所示。下列叙述正确的是（    ） A．生长图形法不能用于筛选某些菌种 B．添加生长因子后需再次进行灭菌处理 C．图示结果表明该菌需要生长因子A和C D．实验所用培养基和器具可以采用干热灭菌法灭菌 8．（2016·江苏·高考真题）漆酶属于木质降解酶类，在环境修复、农业生产等领域有着广泛用途。下图是分离、纯化和保存漆酶菌株的过程，相关叙述错误的是（    ） A．生活污水中含有大量微生物，是分离产漆酶菌株的首选样品 B．筛选培养基中需要加入漆酶的底物，通过菌落特征挑出产漆酶的菌落 C．在涂布平板上长出的菌落，在通过划线进一步纯化 D．在适宜温度下，接种后的斜面培养基上菌落长成后，可在低温下临时保存菌株 9．娄底市某中学为宣传正确佩戴口罩可降低呼吸道传染疾病的风险进行了相关实验。实验中将牛肉膏蛋白胨培养基置于距正确佩戴口罩的实验者口部前方50 cm处，然后对着培养基讲话1 min或咳嗽2次，再进行微生物培养和观察。下列叙述错误的是（    ） A．实验中牛肉膏蛋白胨应为固体培养基，并进行严格灭菌 B．实验者对培养基进行处理后，放入20 ℃恒温培养箱中培养1~2 d C．实验中还应设置不戴口罩直接讲话或咳嗽进行实验对照 D．培养结束后可根据菌落的形状、大小、颜色等特征初步区分不同种的微生物 二、非选择题 10．科研人员进行了土壤中某种固氮菌的分离和纯化培养，实验流程如图1所示。农药、除草剂的长期使用，会使土壤受到严重污染。某科研小组为筛选能分解除草剂草甘膦的微生物，其流程示意图如图2所示。回答下列问题： (1)图1中，“？”处是 ，纯化培养时采用的接种方法是 ，该方法可用于菌落数的统计，原因是 。 (2)图1中纯化培养所利用的培养基在营养成分和物理性质上的特点分别是 ，图1和图2中的两个培养基在用途方面的共同点是 。 (3)图2中的接种方法需要连续划线，且除第一次划线外，后面的每一次划线都要从上一次划线的末端开始，目的是 。结果有的菌落周围有透明圈而有的没有，原因是 。 4 / 4 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①菌落：分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖形成肉眼可见的、有一定形态结构的 子细胞群体 ，这就是菌落。 ②获得单菌落的方法：采用 平板划线 法和 稀释涂布平板 法将单个微生物分散在固体培养基上，之后经培养得到的单菌落一般是由单个微生物繁殖形成的纯培养物。 (2)方法步骤 ①制备培养基 a．配制培养基：马铃薯、葡萄糖、琼脂、蒸馏水。 b．灭菌：培养基用 高压蒸汽灭菌 ；培养皿用 干热灭菌箱灭菌 。 c．倒平板：待培养基冷却至50 ℃左右，在酒精灯火焰附近倒平板。 ②接种和分离酵母菌 a．平板划线法的原理 通过接种环在固体培养基表面 连续划线 的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。经数次划线后培养，可以分离得到 单菌落 。 b．培养酵母菌 纯培养的原理 由 单一个体 繁殖所获得的微生物群体称为纯培养物，获得 纯培养物 的过程就是纯培养 纯培养方法 平板划线法 和稀释涂布平板法 纯培养过程 制备培养基 配制培养基 →灭菌→ 倒平板 接种和分离酵母菌 用 平板划线 法在固体培养基表面接种酵母菌，经 数次划线 后培养，可以分离得到单菌落 培养酵母菌 待菌液被 培养基 吸收，将接种后的平板和一个未接种的平板 倒置 ，放入28 ℃左右的恒温培养箱中培养 24～48 h 一、培养基 1．培养基的配制原则 (1)目的要明确：不同的微生物 需求 不同，根据 培养目的 进行配制。 (2)营养要协调：营养物质的 浓度 和 比例 要适宜。 (3)pH要适宜：为维持pH的 相对恒定 ，可在培养基中加入 缓冲剂 ，常用磷酸氢二钾—磷酸二氢钾。　　　　 2.特定培养基的设计原理与应用实例 特定培养基 的设计原理 应用实例 具体处理 分离菌种 依据营养需求 不添加碳源 自养微生物(硝化细菌等) 不添加氮源 固氮微生物(圆褐固氮菌等) 以尿素为唯一氮源 能分解尿素的微生物 以石油为唯一碳源 能分解石油的微生物 加入某种化学物质，其不作为营养物质，对目标微生物无害，但会抑制或杀死其他微生物 加入青霉素、四环素或链霉素 抑制细菌和放线菌生长→分离酵母菌、霉菌等 加入10%的酚 抑制细菌和霉菌生长→分离放线菌 利用特殊环境 置于无氧条件下 厌氧型和兼性厌氧型微生物→分离乳酸菌、酵母菌等 置于高盐环境中 其他菌在高盐环境中易失水而不能生存→分离金黄色葡萄球菌 置于高温环境中 其他微生物因酶失活而无法生存→分离耐高温微生物 3．培养基的注意事项 (1)营养物质浓度 过低 不能满足微生物营养需要， 过高 对微生物的生长有抑制作用。 (2)各种微生物适宜生长的pH范围不同，如细菌的适宜pH约为6.5～7.5、放线菌的适宜pH约为7.5～8.5、真菌的适宜pH约为5.0～6.0。　 二、无菌技术 1．常用方法的方法及适用对象 (1)不 2．消毒与灭菌的比较 类别 消毒 灭菌 条件 使用 较为温和 的物理或化学方法 使用强烈的 理化方法 结果 杀死 物体表面或内部 的部分微生物(不包括 芽孢和孢子 ) 杀死 物体内外所有 的微生物，包括芽孢和孢子 常用方法 煮沸消毒法、化学药剂(如酒精、氯气等)消毒法、紫外线消毒法、巴氏消毒 灼烧灭菌、干热灭菌、湿热灭菌 主要区别 芽孢和孢子是否存活 相同点 消毒和灭菌的实质都是使微生物的 蛋白质或核酸 变性 三、微生物的纯培养 1．倒平板的操作步骤 2．倒平板的注意事项 (1)培养基要冷却 到50 ℃左右 时开始倒平板，温度过高会烫手，过低培养基又会凝固。 (2)要使锥形瓶的瓶口通过酒精灯火焰，通过 灼烧 灭菌，防止瓶口的微生物 污染培养基 。 (3)倒平板时，将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，不要 完全打开 ，以免杂菌污染培养基。 (4)平板凝固后，要将平板倒置。因为平板冷凝后，皿盖上会 凝结水珠 ，平板倒置后，既可避免培养基表面的 水分过快地挥发 ，又可防止皿盖上的 水珠落入培养基 ，造成污染。 (5)在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底 之间的部位，那么这个平板不能用来培养微生物。因为空气中的微生物可能在 皿盖与皿底 之间的培养基上滋生。 (6)整个操作过程要在 酒精灯火焰 旁进行，避免杂菌污染。 3．平板划线的操作步骤 【问题引导】 (1)倒平板时，培养基冷凝后，为什么要将平板倒置？ 培养基冷凝后，皿盖上会凝结水珠，将平板倒置既可以防止皿盖的水珠落入培养基，又可以避免培养基中的水分过快地挥发。 (2)接种操作时每次划线接种前与接种后都要灼烧接种环或接种针，其目的分别是什么？ 划线前灼烧是为了杀死上次划线结束后残留的菌种。划线结束后灼烧，能及时杀死接种环或接种针上残留的菌种，避免污染环境和感染操作者。 (3)接种结束后，为什么要将一个未接种的培养基和一个接种的培养基放在一起培养？未接种的培养基表面如果有菌落生长，说明了什么？ 培养未接种培养基的作用是对照，未接种的培养基在恒温箱中保温1～2__d后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，若有菌落形成，说明培养基灭菌不彻底，或培养基被污染了，需要重新制备。 4．平板划线操作的注意事项 (1)蘸取菌液及每次划线之前都需要灼烧接种环，划线操作结束后仍需灼烧接种环，灼烧的目的不同。 项目 目的 蘸取菌液前灼烧 避免接种环上可能存在的微生物污染菌种 每次划线前灼烧 杀死上一次划线结束后接种环上残留的菌种，使下一次划线时接种环上的菌种直接来源于上一次划线的末端 最后一次划线结束后灼烧 及时杀死接种环上残留的菌种，避免菌种污染环境和感染操作者 (2)在灼烧接种环之后，要 等其冷却 再进行划线，以免温度过高杀死菌种。 (3)除第一次划线外，每次划线都从上一次划线的末端开始，这样能使 细菌的数目 随着划线次数的增加而 逐渐减少 ，最终能得到由 单个细胞繁殖 而来的菌落。 (4)划线的最后一区域不要 与第一区域相连 。 (5)划线时用力大小要适当，防止用力过大将 培养基划破 。　　　　　　　　　　　　　 5．酵母菌的纯培养 (1)实验原理 (2)方法步骤 (3)结果分析与评价 ①未接种酵母菌的培养基表面不应出现菌落。若出现则说明培养基或实验器械 灭菌不彻底 ，或操作过程有杂菌污染。 ②规范操作的情况下，在接种酵母菌的培养基表面可以看到单菌落，这些菌落的 颜色、形状和大小 基本一致。如果观察到 不同形态 的菌落，说明受到了杂菌污染。 （限时：15min） 一、单选题 1．（2008·全国·高考真题）下列关于细菌的叙述，错误的是（    ） A．硝化细菌能以NH3，作为氮源和能源物质 B．某些细菌可以利用光能固定CO2合成有机物 C．生长因子是某些细菌生长过程中需要额外补充的营养物质 D．含伊红和美蓝试剂的培养基不能用来鉴别牛奶中的大肠杆菌 【答案】D 【分析】培养基的营养构成：各种培养基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐．培养基的分类： ①按物理性质分，分为液体培养基和固体培养基，固体培养基中含有凝固剂，一般是琼脂； ②按化学成分分，分为天然培养基和合成培养。两者的区别是天然培养基成分不确定，合成培养基成分的含量是确定的； ③按用途分，分为选择培养基和鉴别培养基．选择培养基主要是培养、分离特定的微生物，培养酵母菌可在培养基中加入青霉素；鉴别培养基可以鉴定不同的微生物，比如鉴别饮用水中是否含有大肠杆菌，可以用伊红-美蓝培养基，如果菌落呈深紫色，并带有金属光泽，说明有大肠杆菌。 【详解】A、硝化细菌是自养细菌，能利用氨氧化分解时所释放的能量为自身生命活动合成ATP，故氨可作能源物质，同时也可把氨转化成氨基酸或核酸、ATP等物质，故也可作氮源，A正确； B、某些细菌如光合作用细菌就能完成利用光能固定二氧化碳来合成有机物，B正确； C、生长因子的概念就是微生物生长过程中自身不能合成，必须需要补充的一部分小分子有机物，C正确； D、含伊红和美蓝的培养基是专门用来鉴定大肠杆菌的培养基，使用时，将带菌材料接种在灭菌的伊红-美蓝培养基中，如果材料中含有大肠杆菌，就会在培养基上长出具有金属光泽的紫黑色菌落，D错误。 故选D。 2．下表是某同学培养微生物时配制的培养基，关于此培养基的说法，错误的是（    ） 编号 ① ② ③ ④ ⑤ 成分 含量 0.4g 4.0g 0.5g 0.5g 100mL A．此培养基只能用来培养自养型微生物 B．此表中的营养成分共有三类，即水、无机盐、氮源 C．表中各成分的质量按照所培养的微生物的营养需要来确定 D．若除去①，再在此培养基中加入有机碳源，则可用于培养大肠杆菌 【答案】D 【分析】表中所示的营养成分中，除了水之外，（NH4）2SO4、KH2PO4、FeSO4和CaCl2都属于无机盐，其中（NH4）2SO4可为微生物的生长提供氮源。因缺乏有机物，该培养基可用来培养自养型微生物。 【详解】A、异养型微生物必须从环境中摄取现成的有机物才能生存，此培养基中没有任何有机物，因此可用来培养自养型微生物，A正确； B、此表中的营养成分共有三类，即水、无机盐、氮源，缺乏碳源，B正确； C、培养基是为了培养某种生物了配制的营养基质，据此可推测，表中各成分的重量按照所培养的微生物的营养需要来确定，C正确； D、除去①，再在此培养基中加入有机碳源，此培养基也不能用来培养大肠杆菌，因为缺少了氮源，D错误。 故选D。 3．防止杂菌入侵，获得纯净培养物，是研究和应用微生物的前提。下列叙述错误的是（    ） A．接种室、接种箱或超净工作台在使用前，可以用紫外线照射30min，以杀死物体表面或空气中的微生物，在照射前，适当喷洒石碳酸或煤酚皂液等消毒液，可以加强消毒效果 B．牛奶使用巴氏消毒法处理，在100℃煮30min，可以杀死牛奶中的微生物，且牛奶的营养成分不被破坏 C．在实验室中，不可吃东西、喝水，离开实验室一定要洗手，以防止被微生物感染 D．使用后的培养基丢弃前一定要进行灭菌处理，以免污染环境 【答案】B 【分析】微生物实验室培养的关键是防止杂菌污染，无菌操作分为消毒合灭菌，其中消毒只是杀死物体表面的微生物，而杀菌是杀死所有微生物，常用的灭菌方法有高压蒸汽灭菌、干热灭菌和灼烧灭菌。 【详解】A、在防止杂菌污染，研究和应用微生物时应进行消毒和灭菌，实验室可以用紫外线或化学药物进行消毒，因此接种室、接种箱或超净工作台在使用前，用紫外线照射 30min 能杀死物体表面或空气中的微生物，喷洒石碳酸或煤酚皂液等消毒液可加强消毒效果，A正确； B、巴氏消毒法处理的温度不是很高，一般在70-75℃煮30min或80℃煮15min，能杀死牛奶中的微生物且不破坏牛奶的营养成分，而不是在100℃煮30min，B错误； C、在实验室中，切不可吃东西、喝水，离开实验室时一定要洗手，这是为了防止被微生物感染，C正确； D、使用后的培养基丢弃前一定要进行灭菌处理，以免污染环境或感染操作者，D正确。 故选B。 4．为研究“使用公筷对餐后菜品细菌数量的影响”，某研究小组进行了如下实验。相关操作或叙述正确的是（　　） A．固体培养基X对菜品中的细菌有选择性，属于选择培养基 B．配制培养基X并在121℃、100kPa条件下处理15～30min C．在固体培养基X上可用平板划线法或涂布法接种细菌 D．根据菌落的特征可准确判断细菌的种类 【答案】B 【分析】培养基是人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。无菌技术是获得纯微生物培养物的前提。 【详解】A、实验目的是研究“使用公筷对餐后菜品细菌数量的影响”，固体培养基X没有做任何处理，不属于选择培养基，所以对菜品中的细菌没有选择性，A错误； B、为了排除微生物污染，对配制的培养基X需要采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌，即在121℃、100kPa条件下处理15～30min，B正确； C、据题意可知，在固体培养基X上接种后，还需要对微生物进行计数，因此接种细菌，只能用涂布法，不能用平板划线法，C错误； D、在一定的培养条件下，不同种微生物表现出各自稳定的菌落特征，根据菌落的形状、大小、颜色等特征，可以初步区分出不同种微生物，但不能准确判断，D错误。 故选B。 5．（2024·江苏·高考真题）某同学进行下列实验时，相关操作合理的是（    ） A．从试管取菌种前，先在火焰旁拔棉塞，再将试管口迅速通过火焰以灭菌 B．观察黑藻的细胞质流动时，在高倍镜下先调粗准焦螺旋，再调细准焦螺旋 C．探究温度对酶活性的影响时，先将酶与底物混合，然后在不同温度下水浴处理 D．鉴定脂肪时，子叶临时切片先用体积分数为50%的乙醇浸泡，再用苏丹Ⅲ染液染色 【答案】A 【分析】在进行实验操作时，需要遵循正确的操作规范和原则，以保证实验的准确性和安全性。 【详解】 A 、从试管取菌种前，先在火焰旁拔棉塞，再将试管口迅速通过火焰，这样可以避免菌种被污染，A正确； B、在高倍镜下观察时，只能调节细准焦螺旋，B错误； C、探究温度对酶活性的影响时，应先将酶和底物分别在不同温度下处理，然后再混合，若先将酶与底物混合，再在不同温度下水浴处理，会在达到设定温度前就发生反应，影响实验结果，C错误； D、鉴定脂肪时，子叶临时切片先用苏丹Ⅲ染液染色，然后用体积分数为50%的乙醇洗去浮色，D错误。 故选A。 6．酵母菌的纯培养包括配制培养基、灭菌、接种、分离和培养等步骤。下列相关叙述正确的是（    ） A．倒平板时冷却后的培养皿需倒置主要是为了方便观察 B．利用平板划线法接种时，接种环只蘸取一次酵母菌液 C．在配制固体培养基时需要先进行灭菌，再对pH进行调节 D．纯培养物是由单一酵母菌繁殖所获得的酵母菌群体分泌的代谢物 【答案】B 【分析】微生物常见的接种的方法①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落；②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。 【详解】A、倒平板时冷却后的培养皿须倒置主要是为了防止培养皿盖上的冷凝水滴落到培养基中造成污染，同时还可防止培养基中的水分过快挥发，A错误； B、通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面，该过程中只蘸取一次菌液，B正确； C、在配制固体培养基时需要先对pH进行调节，再进行灭菌，C错误； D、纯培养物是由单一个体繁殖所获得的微生物群体，D错误。 故选B。 7．为探究某细菌对A、B、C三种生长因子的需求，研究小组采用生长图形法进行实验，首先把该菌的悬浮液与不含A、B、C的基本培养基混合后倒成平板，然后在平板上划分数区，A、B、C三种生长因子添加区域及培养结果如图所示。下列叙述正确的是（    ） A．生长图形法不能用于筛选某些菌种 B．添加生长因子后需再次进行灭菌处理 C．图示结果表明该菌需要生长因子A和C D．实验所用培养基和器具可以采用干热灭菌法灭菌 【答案】C 【分析】培养基的概念及营养构成 (1)概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出的供其生长繁殖的营养基质。 (2)营养构成：各种培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求，例如，培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素，培养霉菌时需将培养基的pH调至酸性，培养细菌时需将pH调至中性或微碱性，培养厌氧微生物时则需要提供无氧的条件。 【详解】A、不同菌种所需生长因子不同，可利用生长图形法筛选菌种，A错误； B、根据题意，添加生长因子前，平板上已经存在该细菌，不能再次进行灭菌，B错误； C、由于只在A和C交接处有菌落生长，可判断该菌生长需要的生长因子是A和C，C正确； D、实验所用的培养基宜采用高压蒸汽灭菌法灭菌，D错误。 故选C。 8．（2016·江苏·高考真题）漆酶属于木质降解酶类，在环境修复、农业生产等领域有着广泛用途。下图是分离、纯化和保存漆酶菌株的过程，相关叙述错误的是（    ） A．生活污水中含有大量微生物，是分离产漆酶菌株的首选样品 B．筛选培养基中需要加入漆酶的底物，通过菌落特征挑出产漆酶的菌落 C．在涂布平板上长出的菌落，在通过划线进一步纯化 D．在适宜温度下，接种后的斜面培养基上菌落长成后，可在低温下临时保存菌株 【答案】A 【详解】A、生活污水中含有大量微生物，而漆酶属于木质降解酶类，因此污水中不一定含有产漆酶的菌株，A错误； B、筛选生活污水中含有大量微生物，筛选培养基中需要加入漆酶的底物，只有产生漆酶的微生物才能在该培养基上生长，进而通过菌落特征挑出产漆酶的菌落， B正确； C、在涂布平板上长出的菌落，再通过划线进一步纯化，C正确； D、在适宜温度下，接种后的斜面培养基上菌落长成后，可在低温下临时保存菌株，D正确。 故选A。 9．娄底市某中学为宣传正确佩戴口罩可降低呼吸道传染疾病的风险进行了相关实验。实验中将牛肉膏蛋白胨培养基置于距正确佩戴口罩的实验者口部前方50 cm处，然后对着培养基讲话1 min或咳嗽2次，再进行微生物培养和观察。下列叙述错误的是（    ） A．实验中牛肉膏蛋白胨应为固体培养基，并进行严格灭菌 B．实验者对培养基进行处理后，放入20 ℃恒温培养箱中培养1~2 d C．实验中还应设置不戴口罩直接讲话或咳嗽进行实验对照 D．培养结束后可根据菌落的形状、大小、颜色等特征初步区分不同种的微生物 【答案】B 【分析】 各种培养基的配方不同，但一般都含有水、碳源（提供碳元素的物质）、氮源（提供氮元素的物质）和无机盐等营养物质。 培养基：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。 【详解】A、实验中牛肉膏蛋白胨培养基应为固体培养基，为了防止其他微生物的干扰，应进行严格灭菌处理，A正确； B、分析题意可知，本实验是为了确定正确佩戴口罩可降低呼吸道传染疾病的风险，而人体的体温约为37 ℃，因此应设置与人体体温基本相同的温度，即在37 ℃恒温培养箱中培养1~2 d，B错误； C、为宣传正确佩戴口罩可降低呼吸道传染疾病的风险，本实验的实验组为佩戴口罩对着培养基讲话1 min或咳嗽2次，实验中还应该设置不戴口罩直接讲话或咳嗽进行实验对照，C正确； D、不同微生物的菌落具有其特殊的特征，在实验培养结束后，可根据菌落的形状、大小、色泽等特征初步区分不同种的微生物，D正确。 故选B。 二、非选择题 10．科研人员进行了土壤中某种固氮菌的分离和纯化培养，实验流程如图1所示。农药、除草剂的长期使用，会使土壤受到严重污染。某科研小组为筛选能分解除草剂草甘膦的微生物，其流程示意图如图2所示。回答下列问题： (1)图1中，“？”处是 ，纯化培养时采用的接种方法是 ，该方法可用于菌落数的统计，原因是 。 (2)图1中纯化培养所利用的培养基在营养成分和物理性质上的特点分别是 ，图1和图2中的两个培养基在用途方面的共同点是 。 (3)图2中的接种方法需要连续划线，且除第一次划线外，后面的每一次划线都要从上一次划线的末端开始，目的是 。结果有的菌落周围有透明圈而有的没有，原因是 。 【答案】 (1)无菌水 稀释涂布平板法 当样品的稀释度足够高时，培养基表面可以获得由单个细菌繁殖而成的单菌落，通过统计菌落的数量可以推测所涂菌液中细菌的数量 (2)没有氮源，属于固体培养基 从多种微生物中分离出目的菌 (3)将聚集的菌种逐步稀释，分散到培养基表面，最终达到分离的效果 有的菌落中的细菌能分解草甘膦，菌落周围因为草甘膦被分解而出现透明圈，有的菌落中的细菌不能分解草甘膦，菌落周围不能形成透明圈 【分析】将微生物接种到固体培养基常用稀释涂布平板法，接种前先要将菌液进行一系列的梯度稀释，再将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，在一定的稀释度的菌液里，聚集在一起的微生物能分散成单个细胞，在适宜的条件下培养让菌体进行繁殖，能够在培养基表面形成单个菌落。稀释涂布平板操作：①将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中。取出时，要让多余的酒精在烧杯中滴尽。②取少量菌液，滴加到培养基表面。③将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽冷却8-10s。④用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基上，涂布时可转动培养皿，使菌液分布均匀。 【详解】（1）图1中是将土壤悬浮液取1mL，加入9mL无菌水进行稀释10倍。图1中微生物接种方式为稀释涂布平板法。该方法可以用于对菌落数进行计数，因为当样品的稀释度足够高时，培养基表面可以获得由单个细菌繁殖而成的单菌落，通过统计菌落的数量可以推测所涂菌液中细菌的数量。 （2）土壤中某种固氮菌的分离和纯化培养，培养基需要采用固体培养基，才可用于稀释涂布平板法，且因为是分离固氮菌，所以培养基中不加氮源。图1和图2中的两个培养基都是用于从多种微生物中分离目的菌种。 （3）图2中接种方法为平板划线法，且除第一次划线外，后面的每一次划线都要从上一次划线的末端开始，目的是将聚集的菌种逐步稀释，分散到培养基表面，最终达到分离的效果。图2中培养基时为了筛选出能分解除草剂草甘膦的微生物，所以有的菌落中的细菌能分解草甘膦，菌落周围因为草甘膦被分解而出现透明圈，有的菌落中的细菌不能分解草甘膦，菌落周围不能形成透明圈。 4 / 4 学科网（北京）股份有限公司 $$