1.2 微生物的培养技术及应用（分层作业）-【上好课】2024-2025学年高二生物同步精品课堂（人教版2019选择性必修3）

1.2 微生物的培养技术及应用 【三层刷题，基础+提升+真题，步步高升】 班级：___________ 姓名：___________ 用时：___________（建议用时：75min） 一、单选题 1．培养基可用于培养、分离、鉴定、保存微生物。下列叙述正确的是（　　） A．牛肉膏蛋白胨培养基和MS 培养基分别培养细菌和酵母菌 B．稀释涂布平板法常用于菌种的纯化和计数，不宜用于菌种的保藏 C．培养乳酸菌的培养基需要添加维生素，且需将其pH调至中性或弱碱性 D．添加青霉素和四环素的选择培养基可抑制细菌生长，选择培养出酵母菌和放线菌 2．下表是某培养基配方，下列说法错误的是（　　） 成分 蔗糖 NaNO3 K2HPO4 KCl Fe2SO4 琼脂 含量（g/L） 30 3 1 0.5 0.01 15 A．蔗糖可为该微生物提供碳源 B．高浓度的NaNO3可抑制细菌的生长 C．该培养基可用于微生物的分离、鉴定和计数 D．K2HPO4既可以提供无机盐也可以调pH 3．获得纯净的微生物培养物是研究和应用微生物的前提，也是发酵工程的重要基础。下列关于酵母菌纯培养实验的叙述，错误的是（    ） A．该实验包括配制培养基、灭菌、倒平板、接种、分离和培养等步骤 B．将皿盖完全打开后，用接种环在培养基表面连续划线以分离酵母菌 C．该实验应将接种后的平板和一个未接种的平板倒置后放入恒温培养箱中 D．用稀释涂布平板法接种酵母菌，通过计算菌落数可对酵母菌活菌进行计数 4．下列关于消毒与灭菌的方法和原理的叙述，正确的是（　　） A．牛奶、啤酒一般采用巴氏消毒法，即在80℃~90℃处理30min B．对培养皿进行灭菌处理既可用高压蒸汽灭菌法也可用干热灭菌法 C．高压蒸汽灭菌锅内残留少量冷空气有助于提高蒸汽温度，增强灭菌效果 D．干热灭菌通过破坏核酸的磷酸二酯键及蛋白质的氢键导致微生物的死亡 5．研究者欲筛选出在高盐条件下仍具有较高脱氮能力的反硝化微生物，该异养微生物可将硝酸盐和亚硝酸盐还原成氮气。于是按照取样→选择培养→筛选菌种→鉴定菌种→富集培养这几个环节获得了大量的目的菌种。下列叙述错误的是（    ） A．选择培养基应为固体培养基，可用Na2CO3作为碳源，NaNO3作为氮源 B．挑取能够在选择培养基上生长的菌落，经多次划线分离后，得到纯培养物 C．为了鉴定所得的菌种是否为反硝化微生物，可以测定微生物的氮气产生率 D．欲获得高效耐盐的目的菌，可将纯化后的菌株接入NaCl浓度较高的液体培养基中进一步培养 6．为研究“使用公筷对餐后菜品细菌数量的影响”，某研究小组进行了如下实验。相关操作或叙述正确的是（　　）    A．固体培养基X对菜品中的细菌有选择性，属于选择培养基 B．配制培养基X并在121℃、100kPa条件下处理15～30min C．在固体培养基X上可用平板划线法或涂布法接种细菌 D．根据菌落的特征可准确判断细菌的种类 7．瘤胃是牛、羊等反刍动物具有的特殊的器官，其中的微生物多为厌氧菌，接触空气后会死亡。如图表示从牛的瘤胃中分离和鉴定纤维素分解菌。下列叙述正确的是（　　） A．牛体内提取的瘤胃液不能使用干热灭菌，应使用湿热灭菌 B．甲和乙应使用纤维素为唯一碳源的牛肉膏蛋白胨培养基 C．乙和丁的接种方法均可分离纯化并进行计数 D．实验中培养基表面加入一层无菌石蜡能促进目的菌生长 8．从自然界中筛选具有优良性状的菌种的一般步骤为：采集样品→ 富集培养（使菌体数量增多）→纯种 分离→性能测定，如图a、b是采用两种接种方法接种后纯化培养的效果图。下列相关叙述错误的是（　　） A．可使用液体培养基进行富集培养 B．为获得纯种的目的菌种，需对采集的样品进行灭菌 C．获得图a所示结果的接种过程中，接种环需灼烧灭菌4次 D．利用图b计算出样品中菌体浓度为5．85×108个/mL，则接种稀释液的稀释倍数为106倍 9．某兴趣小组按下图所示步骤开展了“土壤中尿素分解菌的分离与计数”实验，相关叙述正确的是（    ）    A．步骤①应从酸性土壤中取样，土样及器具需进行灭菌处理 B．步骤②③所用的培养基均以尿素为唯一碳源 C．步骤⑤用滴管吸取0.1mL菌液滴加到培养基表面并均匀涂布 D．步骤⑥应每隔一段时间统计一次，选取菌落数目稳定时的记录作为结果 10．幽门螺杆菌（HP）是定植于胃部黏膜的异养微厌氧产脲酶菌，对胃黏膜细菌进行体外培养是诊断HP感染的“金标准”，临床上也可让待测者口服14C标记的尿素，尿素可被脲酶催化分解为NH3和14CO2，定时收集并检测待测者呼出气体中是否含14C可判断HP感染情况。下列相关叙述正确的是（    ） A．用以尿素为唯一氮源的培养基从胃黏膜中分离出HP，该过程所需设备、器具和试剂都要先进行高压蒸汽灭菌 B．体外培养HP时，应将培养基调为酸性，并在严格厌氧条件下进行培养 C．培养基中加入一定量的酚红试剂可进一步鉴定HP D．若待测者呼出的气体含14C，则该气体是由胃部HP产生，经食道由口腔呼出 11．科研团队检测了5种菌株的尿酸降解能力，测定菌落的直径为d、菌落周围出现的透明圈(由尿酸降解后形成)的直径为D(单位：mm)。下列相关叙述正确的是（　　） 菌株 菌落直径为d 透明圈直径为D L4 5.8 18.5 L5 7.9 19.3 L6 5.3 18.9 Y1 6.0 10.1 Y6 6.3 13.7 A．该实验所用培养基为液体培养基，以更好地满足五种菌株的营养需求 B．为避免上述五种菌株之间的相互干扰，应将菌种接种在培养皿的边缘 C．纯化这5种尿素降解菌时所用的培养基属于鉴别培养基，且只含有尿酸 D．根据实验结果分析，应选择继续扩大培养的菌株是L系列而不是Y系列 二、非选择题 12．ε-聚赖氨酸（ε-PL）能抑制多种微生物的活性，且人体可将其分解为赖氨酸，是一种优良的天然食品防腐剂。科研人员欲从土壤中分离能分泌ε-PL的微生物，实验过程如下图所示，其中①～⑤表示过程，Ⅰ～Ⅲ表示菌落。已知ε-PL可使亚甲基蓝褪色，形成透明圈。请回答下列问题： (1)为防止杂菌污染，实验前实验者双手需经 消毒处理，实验室也需采用 进行消毒。 (2)实验开始时，实验人员称取2．5g土样，加入盛有25mLSG培养基的锥形瓶中，置于30℃、220 r/min恒温箱中振荡培养2d，该步骤的目的是 ；振荡培养的好处是 。 (3)SG培养基为一种分离培养基，其组成成分如下表所示。该培养基中可为微生物生长提供氮源的物质为 ；结合上述信息，据表分析可知，适宜在SG培养基中生长的微生物，其代谢类型为 。   表 SG培养基组成成分（单位：g／L） 成分 甘油 酵母膏 NaH2PO4 MgSO4·7H2O （NH4）2SO4 H2O pH 含量 10 0．10 0．68 0．25 0．66 1000 7．0 (4)过程①中使用的接种工具为 ；与SG培养基相比，甲培养基需要添加的物质有 。从用途角度分析，甲培养基属于 培养基。 (5)过程③接种，应挑选 菌落，原因是 。 一、单选题 13．T2噬菌体能专一侵染大肠杆菌，进入宿主细胞的噬菌体不会被杀病毒剂灭活，在裂解宿主细胞后能继续感染并裂解周围的大肠杆菌。在培养基平板上，一个被感染的细菌最终会形成一个噬菌斑。利用这一原理可以检测受污染水样中大肠杆菌的数量，具体操作步骤如图所示，实验统计的平均噬菌斑数量为56个。下列叙述正确的是（  ）    A．对培养基、培养皿都要用到干热灭菌 B．步骤3常使用的接种工具是接种环或涂布器 C．待检测受污染水样中目标菌的浓度为1120个/mL D．噬菌体感染并裂解细菌的特性有利于减少污水中细菌的数量 14．影印接种法是一种用于研究微生物抗药性和筛选突变体的实验技术。为检测某种氨基酸缺陷型菌株，实验人员的实验过程如图所示，其中基本培养基中缺乏某种氨基酸，而完全培养基中含有该种氨基酸。下列叙述正确的是(　　) A．影印接种法和稀释涂布平板法相似，每个菌落都由单个菌体发育而来 B．过程②培养时丝绒布先转印至完全培养基上再转印到基本培养基上 C．应从完全培养基上挑选出氨基酸缺陷型菌株用于后续的培养和研究 D．实验结束后对培养皿进行消毒处理后即可再次使用或者废弃 15．从土壤中分离五种能分解纤维素的细菌菌株，培养基中出现了因分解纤维素而产生的透明圈，操作过程如图所示。下列叙述错误的是（    ）    A．分解纤维素能力最强的是E菌株，应对其扩大培养 B．配制培养基时，一般需要将培养基调至中性或弱碱性 C．实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围物品相接触 D．若平板中平均菌落数为120个，则1g土壤中含能分解纤维素的细菌1.2×107个 16．研究人员发现某除草剂（含氮有机物）不易被降解，且长期使用会导致土壤污染。为修复被该除草剂污染的土壤，科研人员按下图程序选育能降解该除草剂的细菌，已知含该除草剂的培养基不透明。下列叙述正确的是（    ） A．操作Ⅱ应该将接种环灼烧灭菌5次 B．经过一段时间的培养，培养皿中应该只存在有透明圈的菌落 C．图中操作I的接种方法为平板划线法，该方法可用于细菌计数 D．筛选能降解该除草剂的细菌的培养基中该除草剂是唯一的氮源 17．水体中氮素的去除对清洁水体有重要意义，异养硝化细菌能将硝酸铵转化为氨，科研工作者从污水中筛选出异养硝化细菌ZW2和ZW5菌株，并研究其转化能力，结果如图。相关叙述正确的是（    ）    A．进行ZW2和ZW5菌株初步筛选时，采用平板划线法接种并计数 B．初步筛选并培养后，一般依据菌落形状等特征来区分不同的微生物 C．分离ZW2和ZW5菌株时，培养基中需要添加刚果红作为指示剂 D．ZW2菌株的转化能力较ZW5强，可以扩大化培养用于水体净化 18．研究人员为分离出产酒精能力强的酵母菌菌株，进行了如图I所示实验，甲、乙、丙、丁锥形瓶内分别加入100mL完全培养基，图Ⅱ是实验结果。相关叙述正确的是（    ） A．传统葡萄酒制作过程中，需要对发酵液、发酵瓶进行严格灭菌 B．菌种计数过程中，需要对试管口、涂布器等进行直接灼烧灭菌 C．本研究中葡萄酒过滤液的活菌数约为6.8×106个/L，此数值可能低于实际的活菌数 D．图Ⅱ丙瓶的结果可能是因为酒精发酵瓶密封不严，丁组酵母菌产酒精能力比乙强 19．塑化剂 （DEHP， 化学式为（C24H38O4）可提高塑料制品的性能，在生产上被广泛使用。但残留于土壤、水源里的 DEHP 不易被降解，属于2B类致癌物。我国科研工作者已从土壤中成功筛选出可降解 DEHP 的降解菌，如铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌等，筛选实验的主要步骤如图。下列相关叙述错误的是（    ） A．接种前固体培养基和摇瓶内的培养基需高温灭菌以防杂菌污染，但土壤样品不能灭菌处理 B．图中虚线框培养瓶中的培养基属于液体选择培养基，DEHP 应为唯一碳源 C．培养若干天后，应选择DEHP 含量高的培养液进行接种以进一步扩增目的菌 D．若筛选出的目的菌为枯草芽孢杆菌，对其扩大培养易选用液体培养基，温度宜控制在30~37℃范围 二、非选择题 20．畜禽养殖会产生大量的氨气、硫化氢、甲烷等有毒有害气体，某科研团队采集新鲜羊粪养殖蚯蚓后产生的蚓粪，从中筛选出能高效除臭的细菌，以减轻养殖废弃物对环境的污染。实验先筛选耐氨水和Na2S的细菌，再用瓶装腐熟发酵法检测细菌去除NH3和H2S的能力。筛选的主要步骤如图1所示，不同菌株除臭效果如图2所示，筛选出高效除臭菌接种量与除臭效果的关系如图3所示，请回答下列问题：    (1)培养基甲为添加 的牛肉膏蛋白胨培养基，按照功能分类属于 。步骤②培养目的是 。 (2)结合图2分析，除臭效果最好的是 号细菌。除臭菌可利用氨和硫化氢合成 ，等生物大分子。 (3)由图3可知，一般选用除臭菌的相对接种量为 ，原因是 。 (4)科研人员进一步发现，3号和4号混合菌除臭效果更佳。为探究3号和4号混合菌除臭效果最佳的菌种比例，设计如下实验： 实验步骤的目的 简要操作过程 设置不同菌液配比为自变量 分别配制相同浓度的3号和4号菌液，①_________并分组编号，分别向装有相同质量新鲜羊粪的发酵罐中喷洒10mL不同配比的混合菌液，每组做3个重复实验 设置对照组 向装有相同质量的新鲜羊粪的发酵罐中喷洒②________ ③________ 对照组和实验组均放置在相同且适宜的环境中发酵相同时间 除臭效果检测 ④____ ① ；② ；③ ；④ 。 一、单选题 1．（2024·浙江·高考真题）脲酶催化尿素水解，产生的氨可作为细菌的氮源。脲酶被去除镍后失去活性。下列叙述错误的是（    ） A．镍是组成脲酶的重要元素 B．镍能提高尿素水解反应的活化能 C．产脲酶细菌可在以NH4Cl为唯一氮源的培养基生长繁殖 D．以尿素为唯一氮源的培养基可用于筛选产脲酶细菌 2．（2024·江苏·高考真题）酵母菌是基因工程中常用的表达系统。下列相关叙述正确的是（    ） A．酵母菌培养液使用前要灭活所有细菌，但不能灭活真菌 B．酵母菌是真核细胞，需放置在CO2培养箱中进行培养 C．可用稀释涂布平板法对酵母菌计数 D．该表达系统不能对合成的蛋白质进行加工和修饰 3．（2024·海南·高考真题）某小组为检测1株粗糙脉孢霉突变株的氨基酸缺陷类型，在相同培养温度和时间的条件下进行实验，结果见表。下列有关叙述错误的是（    ） 组别 培养条件 实验结果 ① 基础培养基 无法生长 ② 基础培养基+甲、乙、丙3种氨基酸 正常生长 ③ 基础培养基+甲、乙2种氨基酸 无法生长 ④ 基础培养基+甲、丙2种氨基酸 正常生长 ⑤ 基础培养基+乙、丙2种氨基酸 正常生长 A．组别①是②③④⑤的对照组 B．培养温度和时间属于无关变量 C．①②结果表明，甲、乙、丙3种氨基酸中有该突变株正常生长所必需的氨基酸 D．①~⑤结果表明，该突变株为氨基酸甲缺陷型 4．（2024·重庆·高考真题）养殖场粪便是农家肥的重要来源，其中某些微生物可使氨氮化合物转化为尿素进而产生NH3，影响畜禽健康。为筛选粪便中能利用氨氮化合物且减少NH3产生的微生物。兴趣小组按图进行实验获得目的菌株，正确的是（    ） A．①通常在等比稀释后用平板划线法获取单个菌落 B．②挑取在2种培养基上均能生长的用于后续的实验 C．③可通过添加脲酶并检测活性，筛选得到甲、乙 D．粪便中添加菌株甲比乙更有利于NH3的减少 5．（2024·山东·高考真题）酵母菌在合成色氨酸时需要3种酶X、Y和Z，trpX、trpY和trpZ分别为相应酶的编码基因突变的色氨酸依赖型突变体。已知3种酶均不能进出细胞，而色氨酸合成途径的中间产物积累到一定程度时可分泌到胞外。将这3种突变体均匀划线接种到含有少量色氨酸的培养基上，生长情况如图。据图分析，3种酶在该合成途径中的作用顺序为（　　） A．X→Y→Z B．Z→Y→X C．Y→X→Z D．Z→X→Y 6．（2024·宁夏四川·高考真题）合理使用消毒液有助于减少传染病的传播。某同学比较了3款消毒液A、B、C杀灭细菌的效果，结果如图所示。回答下列问题。 (1)该同学采用显微镜直接计数法和菌落计数法分别测定同一样品的细菌数量，发现测得的细菌数量前者大于后者，其原因是 。 (2)该同学从100 mL细菌原液中取1 mL加入无菌水中得到10 mL稀释菌液，再从稀释菌液中取200 μL涂布平板，菌落计数的结果为100，据此推算细菌原液中细菌浓度为 个/mL。 (3)菌落计数过程中，涂布器应先在酒精灯上灼烧，冷却后再涂布。灼烧的目的是 ，冷却的目的是 。 (4)据图可知杀菌效果最好的消毒液是 ，判断依据是 。（答出两点即可） (5)鉴别培养基可用于反映消毒液杀灭大肠杆菌的效果。大肠杆菌在伊红美蓝培养基上生长的菌落呈 色。 原创精品资源学科网独家享有版权，侵权必究！2 学科网（北京）股份有限公司1 学科网（北京）股份有限公司 $$ 1.2 微生物的培养技术及应用 【三层刷题，基础+提升+真题，步步高升】 班级：___________ 姓名：___________ 用时：___________（建议用时：75min） 一、单选题 1．培养基可用于培养、分离、鉴定、保存微生物。下列叙述正确的是（　　） A．牛肉膏蛋白胨培养基和MS 培养基分别培养细菌和酵母菌 B．稀释涂布平板法常用于菌种的纯化和计数，不宜用于菌种的保藏 C．培养乳酸菌的培养基需要添加维生素，且需将其pH调至中性或弱碱性 D．添加青霉素和四环素的选择培养基可抑制细菌生长，选择培养出酵母菌和放线菌 【答案】B 【分析】培养基按照物理性质分为固态、液态和半固态。按照化学性质分为天然和合成培养基。按照功能分为选择和鉴别培养基。 【详解】A、 牛肉膏蛋白胨培养基可用于培养细菌，MS培养基用于植物组织培养，酵母菌常用麦芽汁琼脂培养基培养，A错误； B、 稀释涂布平板法能将微生物分散成单个细胞，形成单个菌落，常用于菌种的纯化和计数，由于该方法不能长期保存菌种，所以不宜用于菌种的保藏，B正确； C、 乳酸菌是厌氧菌，培养乳酸菌的培养基需要添加维生素，且需将其pH调至酸性，C错误； D、 青霉素和四环素可抑制细菌和放线菌生长，D错误。 故选B。 2．下表是某培养基配方，下列说法错误的是（　　） 成分 蔗糖 NaNO3 K2HPO4 KCl Fe2SO4 琼脂 含量（g/L） 30 3 1 0.5 0.01 15 A．蔗糖可为该微生物提供碳源 B．高浓度的NaNO3可抑制细菌的生长 C．该培养基可用于微生物的分离、鉴定和计数 D．K2HPO4既可以提供无机盐也可以调pH 【答案】C 【分析】菌落：是指由单个微生物细胞或一堆同种细胞在适宜固体培养基表面或内部生长繁殖到一定程度，形成以母细胞为中心的一团肉眼可见的、有一定形态、构造等特征的子细胞集团。各种微生物在一定条件下形成的菌落特征，如大小、形状、边缘、表面、质地、颜色等，具有一定的稳定性，是衡量菌种纯度、辨认和鉴定菌种的重要依据。 【详解】A、蔗糖中含有碳元素，且为有机物，因而可为该微生物提供碳源，A正确； B、培养基中NaNO3的浓度高，为高渗培养基，会导致细菌细胞脱水，进而抑制细菌的生长，B正确； C、该培养基中加入了琼脂，为固体培养基，可用于微生物的分离和计数，但不可用于鉴定，因为鉴定培养基中需要加入特定的试剂，C错误； D、K2HPO4是弱酸强碱盐，可以提供无机盐也可以调pH，D正确。 故选C。 3．获得纯净的微生物培养物是研究和应用微生物的前提，也是发酵工程的重要基础。下列关于酵母菌纯培养实验的叙述，错误的是（    ） A．该实验包括配制培养基、灭菌、倒平板、接种、分离和培养等步骤 B．将皿盖完全打开后，用接种环在培养基表面连续划线以分离酵母菌 C．该实验应将接种后的平板和一个未接种的平板倒置后放入恒温培养箱中 D．用稀释涂布平板法接种酵母菌，通过计算菌落数可对酵母菌活菌进行计数 【答案】B 【分析】微生物常见的接种的方法：①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养基表面，经培养后可形成单个菌落。培养基可用高压蒸汽灭菌锅进行灭菌。 【详解】A、该实验包括配制培养基、灭菌、倒平板、接种、分离和培养等一系列步骤，应该按照步骤进行严格操作，A正确； B、皿盖不能完全打开，只是打开合适的缝隙便于操作即可，完全打开容易造成杂菌污染，B错误； C、进行酵母菌的纯培养时，完成平板划线后，待菌液被培养基吸收后再将平板倒置放在恒温培养箱中静置培养，此时加入一个未接种的平板倒置培养可以起到对照作用，C正确； D、可用稀释涂布平板法对微生物进行分离计数，通过计算菌落数可对酵母菌活菌进行计数，也可直接用显微镜对某些微生物计数，而平板划线法不能用于微生物计数，D正确。 故选B。 4．下列关于消毒与灭菌的方法和原理的叙述，正确的是（　　） A．牛奶、啤酒一般采用巴氏消毒法，即在80℃~90℃处理30min B．对培养皿进行灭菌处理既可用高压蒸汽灭菌法也可用干热灭菌法 C．高压蒸汽灭菌锅内残留少量冷空气有助于提高蒸汽温度，增强灭菌效果 D．干热灭菌通过破坏核酸的磷酸二酯键及蛋白质的氢键导致微生物的死亡 【答案】B 【分析】灭菌指用强烈的物理或化学方法杀灭所有微生物，包括致病的和非致病的，以及细菌的芽孢。常用的灭菌方法：灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌法。高压蒸汽灭菌适用于对一般培养基和玻璃器皿的灭菌，干热灭菌适用于空玻璃器皿的灭菌，微生物接种时的金属接种工具和试管口可以用灼烧灭菌。 【详解】A、煮沸消毒法是在100℃煮沸5～6分钟可以杀死微生物细胞和一部分芽孢，但对于牛奶这些不耐高温的液体，使用巴氏消毒法，在75～90℃中保温15秒，不仅可以杀死牛奶中的微生物，还可以使牛奶的营养成分不被破坏，A错误; B、培养皿、吸管可用干热灭菌法灭菌，也可用高压蒸汽灭菌法灭菌，B正确; C、用高压蒸汽灭菌锅对培养基灭菌时，开始阶段需打开排气阀排尽锅内冷空气，否则可能灭菌的温度达不到要求，C错误; D、干热灭菌通过破坏核酸的氢键及蛋白质的氢键导致微生物的死亡，D错误。 故选B。 5．研究者欲筛选出在高盐条件下仍具有较高脱氮能力的反硝化微生物，该异养微生物可将硝酸盐和亚硝酸盐还原成氮气。于是按照取样→选择培养→筛选菌种→鉴定菌种→富集培养这几个环节获得了大量的目的菌种。下列叙述错误的是（    ） A．选择培养基应为固体培养基，可用Na2CO3作为碳源，NaNO3作为氮源 B．挑取能够在选择培养基上生长的菌落，经多次划线分离后，得到纯培养物 C．为了鉴定所得的菌种是否为反硝化微生物，可以测定微生物的氮气产生率 D．欲获得高效耐盐的目的菌，可将纯化后的菌株接入NaCl浓度较高的液体培养基中进一步培养 【答案】A 【分析】1、实验室中筛选微生物的原理是：人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、pH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。 2、微生物培养基的基本成分包括水、无机盐、碳源、氮源及特殊生长因子。培养基按物理性质分为固体、半固体、液体培养基；按用途分为选择培养基和鉴别培养基。 【详解】A、反硝化微生物是异养微生物，选择培养基中的碳源应为有机碳源，A错误； B、使用平板划线法接种可得到单个菌落，也就是纯培养物，因此挑取能够在选择培养基上生长的菌落，经多次划线分离后，得到纯培养物，B正确； C、为了鉴定所得的菌种是否为反硝化微生物，可以测定微生物的氮气产生率，C正确； D、欲获得高效耐盐的目的菌株，可将纯化后的各菌株接入NaCl浓度比较高的液体富集培养基中进一步培养，D正确。 故选A。 6．为研究“使用公筷对餐后菜品细菌数量的影响”，某研究小组进行了如下实验。相关操作或叙述正确的是（　　）    A．固体培养基X对菜品中的细菌有选择性，属于选择培养基 B．配制培养基X并在121℃、100kPa条件下处理15～30min C．在固体培养基X上可用平板划线法或涂布法接种细菌 D．根据菌落的特征可准确判断细菌的种类 【答案】B 【分析】培养基是人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。无菌技术是获得纯微生物培养物的前提。 【详解】A、实验目的是研究“使用公筷对餐后菜品细菌数量的影响”，固体培养基X没有做任何处理，不属于选择培养基，所以对菜品中的细菌没有选择性，A错误； B、为了排除微生物污染，对配制的培养基X需要采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌，即在121℃、100kPa条件下处理15～30min，B正确； C、据题意可知，在固体培养基X上接种后，还需要对微生物进行计数，因此接种细菌，只能用涂布法，不能用平板划线法，C错误； D、在一定的培养条件下，不同种微生物表现出各自稳定的菌落特征，根据菌落的形状、大小、颜色等特征，可以初步区分出不同种微生物，但不能准确判断，D错误。 故选B。 7．瘤胃是牛、羊等反刍动物具有的特殊的器官，其中的微生物多为厌氧菌，接触空气后会死亡。如图表示从牛的瘤胃中分离和鉴定纤维素分解菌。下列叙述正确的是（　　） A．牛体内提取的瘤胃液不能使用干热灭菌，应使用湿热灭菌 B．甲和乙应使用纤维素为唯一碳源的牛肉膏蛋白胨培养基 C．乙和丁的接种方法均可分离纯化并进行计数 D．实验中培养基表面加入一层无菌石蜡能促进目的菌生长 【答案】D 【分析】刚果红可以与像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物，但与纤维二糖和葡萄糖无法发生这种反应。在含有纤维素的培养基中添加刚果红，刚果红与纤维素形成红色复合物，当纤维素被纤维素分解菌分解后，复合物无法形成，培养基中就会出现以这些菌为中心的透明圈。 【详解】A、从牛体内提取的瘤胃液不能灭菌，否则不能分离出目标微生物，A错误； B、蛋白胨为微生物生长提供的主要营养是碳源、氮源和维生素等，甲和乙的培养基应以纤维素为唯一碳源培养目的菌，B错误； C、乙和丁的接种方法分别是平板划线法和涂布平板法，平板划线法不能用于计数，C错误； D、由于瘤胃液中微生物多为厌氧菌，培养基表面加入一层无菌石蜡能促进目的菌生长，D正确。 故选D。 8．从自然界中筛选具有优良性状的菌种的一般步骤为：采集样品→ 富集培养（使菌体数量增多）→纯种 分离→性能测定，如图a、b是采用两种接种方法接种后纯化培养的效果图。下列相关叙述错误的是（　　） A．可使用液体培养基进行富集培养 B．为获得纯种的目的菌种，需对采集的样品进行灭菌 C．获得图a所示结果的接种过程中，接种环需灼烧灭菌4次 D．利用图b计算出样品中菌体浓度为5．85×108个/mL，则接种稀释液的稀释倍数为106倍 【答案】B 【分析】每克样品中的菌落数= (C÷V )×M，其中C代表某一稀释度下的平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)， M代表稀释的倍数。 【详解】A、与使用固体培养基相比，使用液体培养基培养菌种时，菌体可以分布在整个培养基中，可充分利用其中的营养物质，提高培养液中氧气含量，菌体数量增加的更快，A正确； B、需要从采集的样品分离得到目的菌种，不能对样品进行灭菌，B错误； C、图a所示结果的接种次数为3次，接种环需灭菌4次，C正确； D、利用稀释涂布平板法计算菌体浓度的方法为：菌落数÷接种液体积×稀释倍数，而用于计数的平板的菌落数应在30-300之间，因此58.5个÷0.1ml×稀释倍数=5.85×108个/ml，计算得出稀释倍数为106倍，D正确。 故选B。 9．某兴趣小组按下图所示步骤开展了“土壤中尿素分解菌的分离与计数”实验，相关叙述正确的是（    ）    A．步骤①应从酸性土壤中取样，土样及器具需进行灭菌处理 B．步骤②③所用的培养基均以尿素为唯一碳源 C．步骤⑤用滴管吸取0.1mL菌液滴加到培养基表面并均匀涂布 D．步骤⑥应每隔一段时间统计一次，选取菌落数目稳定时的记录作为结果 【答案】D 【分析】培养基选择分解尿素的微生物的原理：只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，故选择培养基应以尿素为唯一氮源，缺乏尿酶的微生物由于不能分解尿素缺乏氮源而不能生长发育繁殖而受到抑制，所以用此培养基就能够选择出分离尿素的微生物。 【详解】A、可从酸碱度接近中性的潮湿土壤，铲去表层，选择距地表约3cm的土壤层筛选分解尿素的细菌，且为避免杀灭菌种，不能对土壤进行灭菌，A错误； B、步骤②为富集培养，培养基为完全培养基，B错误； C、对微生物计数需要用稀释涂布平板法，该方法中用移液枪吸取0.1mL菌液滴加到培养基表面并均匀涂布，C错误； D、为避免遗漏菌落，计数时应每隔一段时间h统计一次，待菌落数稳定时记录结果，避免遗漏菌落数，D正确。 故选D。 10．幽门螺杆菌（HP）是定植于胃部黏膜的异养微厌氧产脲酶菌，对胃黏膜细菌进行体外培养是诊断HP感染的“金标准”，临床上也可让待测者口服14C标记的尿素，尿素可被脲酶催化分解为NH3和14CO2，定时收集并检测待测者呼出气体中是否含14C可判断HP感染情况。下列相关叙述正确的是（    ） A．用以尿素为唯一氮源的培养基从胃黏膜中分离出HP，该过程所需设备、器具和试剂都要先进行高压蒸汽灭菌 B．体外培养HP时，应将培养基调为酸性，并在严格厌氧条件下进行培养 C．培养基中加入一定量的酚红试剂可进一步鉴定HP D．若待测者呼出的气体含14C，则该气体是由胃部HP产生，经食道由口腔呼出 【答案】C 【分析】分解尿素的细菌的鉴定：细菌合成的脲酶将尿素分解成氨，氨会使培养基的碱性增强。在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂培养细菌，若指示剂变红，可确定该种细菌能够分解尿素。 【详解】A、接种室、接种箱等常用紫外线消毒法处理，接种环等常用灼烧灭菌法处理，吸管、培养皿等常用干热灭菌法处理，培养基及多种器材用高压蒸汽灭菌法处理，A错误； B、由题干信息可知，幽门螺杆菌（HP）是定植于胃部黏膜的异养微厌氧产脲酶菌，所以不需要严格在厌氧条件下进行培养，B错误； C、培养基中加入一定量的酚红试剂，若指示剂变红，可确定该种细菌能够分解尿素，可进一步鉴定HP，C正确； D、通过口服14C尿素胶囊，进入胃部后，如果胃部存在HP（幽门螺杆菌），则此菌就会产生脲酶水解尿素，尿素被水解后形成二氧化碳随血液进入肺部并以气体排出，D错误。 故选C。 11．科研团队检测了5种菌株的尿酸降解能力，测定菌落的直径为d、菌落周围出现的透明圈(由尿酸降解后形成)的直径为D(单位：mm)。下列相关叙述正确的是（　　） 菌株 菌落直径为d 透明圈直径为D L4 5.8 18.5 L5 7.9 19.3 L6 5.3 18.9 Y1 6.0 10.1 Y6 6.3 13.7 A．该实验所用培养基为液体培养基，以更好地满足五种菌株的营养需求 B．为避免上述五种菌株之间的相互干扰，应将菌种接种在培养皿的边缘 C．纯化这5种尿素降解菌时所用的培养基属于鉴别培养基，且只含有尿酸 D．根据实验结果分析，应选择继续扩大培养的菌株是L系列而不是Y系列 【答案】D 【分析】培养基根据是否添加琼脂，分为液体培养基和固体培养基，液体培养基主要用于扩大培养，固体培养基主要用于分离纯化。 【详解】A、液体培养基不适合用于菌落直径和透明圈直径的测定，固体培养基更合适，A错误； B、为避免菌株之间相互干扰，应将菌种接种在不同的区域，而不是培养皿边缘，B错误； C、纯化菌株时所用的培养基属于鉴别培养基，但不可能只含有尿酸，因为菌株生长还需要其他营养物质，C错误； D、透明圈直径与菌落直径的比值越大，说明尿酸降解能力越强。计算可得L4菌株的透明圈直径与菌落直径的比值为18.5/5.8≈3.2，L5菌株的19.3/7.9≈2.4，L6菌株的18.9/5.3≈3.6 ，Y1菌株的10.1/6.0≈1.7，Y6菌株的13.7/6.3≈2.2，L系列的比值总体大于Y系列，所以应选择继续扩大培养的菌株是L系列而不是Y系列，D正确。 故选D。 二、非选择题 12．ε-聚赖氨酸（ε-PL）能抑制多种微生物的活性，且人体可将其分解为赖氨酸，是一种优良的天然食品防腐剂。科研人员欲从土壤中分离能分泌ε-PL的微生物，实验过程如下图所示，其中①～⑤表示过程，Ⅰ～Ⅲ表示菌落。已知ε-PL可使亚甲基蓝褪色，形成透明圈。请回答下列问题： (1)为防止杂菌污染，实验前实验者双手需经 消毒处理，实验室也需采用 进行消毒。 (2)实验开始时，实验人员称取2．5g土样，加入盛有25mLSG培养基的锥形瓶中，置于30℃、220 r/min恒温箱中振荡培养2d，该步骤的目的是 ；振荡培养的好处是 。 (3)SG培养基为一种分离培养基，其组成成分如下表所示。该培养基中可为微生物生长提供氮源的物质为 ；结合上述信息，据表分析可知，适宜在SG培养基中生长的微生物，其代谢类型为 。   表 SG培养基组成成分（单位：g／L） 成分 甘油 酵母膏 NaH2PO4 MgSO4·7H2O （NH4）2SO4 H2O pH 含量 10 0．10 0．68 0．25 0．66 1000 7．0 (4)过程①中使用的接种工具为 ；与SG培养基相比，甲培养基需要添加的物质有 。从用途角度分析，甲培养基属于 培养基。 (5)过程③接种，应挑选 菌落，原因是 。 【答案】(1) 70%酒精 紫外线照射 (2) 扩大培养分泌ε-PL的微生物 增加溶解氧，提高菌体与营养物质的接触，促进生长 (3) 酵母膏和（NH4）2SO4 异养需氧型 (4) 涂布器 琼脂和亚甲基蓝 鉴别 (5) Ⅱ 透明圈更大（透明圈直径与菌落直径比值更大），分泌ε-PL的量更多 【分析】1、消毒的常用方法：日常生活中经常用到煮沸消毒法，在100°C煮沸5~ 6min，可以杀死微生物的营养细胞和一部分芽孢。对于一些不耐高温的液体，如牛奶，则可使用巴氏消毒法，即在62~65°C消毒30min或80~ 90°C处理 30s~ 1min，可以杀死牛奶中的绝大多数微生物，并且不破坏牛奶的营养成分。此外，人们也常使用化学药物进行消毒，如用酒精擦拭双手、用氯气消毒水源等。除了以上方法，还常用紫外线进行消毒。例如，接种室、接种箱或超净工作台在使用前，可以用紫外线照射30min，以杀死物体表面或空气中的微生物。在照射前，适量喷洒石炭酸或谋酚皂溶液等消毒液，可以加强消毒效果。 2、稀释涂布平板法：该法是将已熔化并冷却至约50℃（减少冷凝水）的琼脂培养基，先倒入无菌培养皿中，制成无菌平板。待充分冷却凝固后，将一定量（约0.1 ml）的某一稀释度的样品悬液滴加在平板表面， 再用三角形无菌玻璃涂棒涂布，使菌液均匀分散在整个平板表面，倒置温箱培养后挑取单个菌落。 【详解】（1）由分析可知，实验前实验者双手需经70%酒精消毒处理，实验室也需采用紫外线照射（先喷洒煤酚皂、石炭酸溶液再紫外线照射）的方法进行消毒。 （2）将土样放入SG液体培养基，目的是扩大培养分泌ε-PL的微生物，使其数量增多。该过程中振荡培养的目的是增大培养液中溶解氧的含量，提高菌体与营养物质的接触，促进其生长。 （3）据表可知，酵母膏和（NH4）2SO4中都含氮元素，因此该培养基中可为微生物生长提供氮源的物质为酵母膏和（NH4）2SO4。根据SG培养基的成分可知，该培养基既有碳源又有氮源，因此适宜在SG培养基中生长的微生物，其代谢类型为异养需氧型。 （4）根据平板中的菌落均匀分布，可知采用的接种方法为稀释涂布平板法，因此过程①中使用的接种工具为涂布器。涂布接种后，并不立即将平板倒置，可以利于涂布的菌液被培养基吸收。与SG培养基相比，甲培养基为固体，需要添加琼脂，已知ε-PL可使亚甲基蓝褪色，形成透明圈，故甲培养基还需要添加亚甲基蓝。从用途角度分析，甲培养基属于鉴别培养基。 （5）由于ε-PL可使亚甲基蓝褪色，形成透明圈，故应选择透明圈最大（透明圈直径与菌落直径比值更大）的菌落Ⅱ进行接种、培养，因为透明圈越大，说明该菌落分泌ε-PL的能力越强，分泌ε-聚赖氨酸（ε-PL）量更多。 一、单选题 13．T2噬菌体能专一侵染大肠杆菌，进入宿主细胞的噬菌体不会被杀病毒剂灭活，在裂解宿主细胞后能继续感染并裂解周围的大肠杆菌。在培养基平板上，一个被感染的细菌最终会形成一个噬菌斑。利用这一原理可以检测受污染水样中大肠杆菌的数量，具体操作步骤如图所示，实验统计的平均噬菌斑数量为56个。下列叙述正确的是（  ）    A．对培养基、培养皿都要用到干热灭菌 B．步骤3常使用的接种工具是接种环或涂布器 C．待检测受污染水样中目标菌的浓度为1120个/mL D．噬菌体感染并裂解细菌的特性有利于减少污水中细菌的数量 【答案】D 【分析】微生物接种最常用的方法是平板划线法和稀释涂布平板法，其中稀释涂布平板法接种可用来微生物计数。 【详解】A、培养皿需采用干热灭菌法进行灭菌，但培养基要用到湿热灭菌法，A错误； B、因为需要进行计数，步骤3常使用的接种工具只能是涂布器，不能是接种环，B错误； C、由题意可知，所有0.1mL的水样中的大肠杆菌最终都被接种到了平板上，由此可知待测水样中的大肠杆菌浓度为560个/mL，C错误； D、由题意可知，噬菌体感染并裂解细菌的特性，有利于减少污水中细菌的数量，D正确。 故选D。 14．影印接种法是一种用于研究微生物抗药性和筛选突变体的实验技术。为检测某种氨基酸缺陷型菌株，实验人员的实验过程如图所示，其中基本培养基中缺乏某种氨基酸，而完全培养基中含有该种氨基酸。下列叙述正确的是(　　) A．影印接种法和稀释涂布平板法相似，每个菌落都由单个菌体发育而来 B．过程②培养时丝绒布先转印至完全培养基上再转印到基本培养基上 C．应从完全培养基上挑选出氨基酸缺陷型菌株用于后续的培养和研究 D．实验结束后对培养皿进行消毒处理后即可再次使用或者废弃 【答案】C 【分析】图中首先利用稀释涂布平板法分离细菌，然后运用“影印法”将菌种接种到两种培养基中：基本培养基、完全培养基，则在基本培养基中，氨基酸缺陷型菌株不能生长，而在完全培养基中能够生长，因此可以选择出氨基酸缺陷型菌株。 【详解】A、影印接种法和稀释涂布平板法都是微生物学实验中常用的接种方法，用于分离和纯化微生物，菌落不都是由单个菌体发育而来，当两个或多个细胞连在一起时，平板上形成的可能是一个菌落，A错误； B、进行②过程培养时，为了防止将完全培养基中特定营养成分带入基本培养基，应先将丝绒布先转印至基本培养基上再“复印”至完全培养基上，B错误； C、在基本培养基中氨基酸缺陷型菌株不能生长，而在完全培养基中能够生长，比较基本培养基和完全培养基中的菌落可知氨基酸缺陷型菌株应从基本培养基上没有、完全培养基上对应位置有的菌落中挑选，然后用于后续的培养和研究，C正确； D、培养皿在使用后通常需要进行灭菌处理，而不是消毒处理。灭菌处理能够更彻底地杀死所有微生物，包括芽孢和孢子等难以杀死的微生物形态。而消毒处理可能只能杀死大部分微生物，但无法确保完全无菌。因此，为了实验的安全性和准确性，培养皿在使用后应该进行灭菌处理，D错误。 故选C。 15．从土壤中分离五种能分解纤维素的细菌菌株，培养基中出现了因分解纤维素而产生的透明圈，操作过程如图所示。下列叙述错误的是（    ）    A．分解纤维素能力最强的是E菌株，应对其扩大培养 B．配制培养基时，一般需要将培养基调至中性或弱碱性 C．实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围物品相接触 D．若平板中平均菌落数为120个，则1g土壤中含能分解纤维素的细菌1.2×107个 【答案】D 【分析】筛选纤维素分解菌应用以纤维素为唯一碳源的选择培养基，刚果红可以与纤维素形成红色复合物，纤维素分解菌产生的纤维素酶可以水解纤维素而使菌落周围出现透明圈，所以可以用刚果红染液鉴别纤维素分解菌。 【详解】A、因为E菌落外围的透明圈和E菌落直径的比例最大，所以分解纤维素能力最强的是E菌株，应对其扩大培养，A正确； B、纤维素分解菌是细菌，在培养细菌时一般需要将培养基调至中性或弱碱性，B正确； C、周围物品可能会含有杂菌，为防止污染，实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围物品相接触，C正确； D、若平板中平均菌落数为120个，图示实验所用的涂布菌液稀释了105倍，则1g土壤中含有细菌120÷0.1×105=1.2×108个，D错误。 故选D。 16．研究人员发现某除草剂（含氮有机物）不易被降解，且长期使用会导致土壤污染。为修复被该除草剂污染的土壤，科研人员按下图程序选育能降解该除草剂的细菌，已知含该除草剂的培养基不透明。下列叙述正确的是（    ） A．操作Ⅱ应该将接种环灼烧灭菌5次 B．经过一段时间的培养，培养皿中应该只存在有透明圈的菌落 C．图中操作I的接种方法为平板划线法，该方法可用于细菌计数 D．筛选能降解该除草剂的细菌的培养基中该除草剂是唯一的氮源 【答案】D 【分析】微生物常用的接种方法：稀释涂布平板法和平板划线法。 【详解】A、结合图示可知，操作Ⅱ共划线五次，第一次划线前灼烧灭菌一次，每一次划线后灼烧灭菌一次，因此共灼烧灭菌6次，A错误； BD、某除草剂为含氮有机物，为少选能降解该除草剂的微生物，培养基中应该以该除草剂为唯一的氮源，能降解除草剂的微生物形成的菌落会有透明圈，但该培养基中也可能存在能固定空气中氮气的微生物，这些菌落形成的菌落没有透明圈，B错误，D正确； C、平板划线法无法进行细菌计数，稀释涂布平板法可对细菌进行计数，C错误； 故选D。 17．水体中氮素的去除对清洁水体有重要意义，异养硝化细菌能将硝酸铵转化为氨，科研工作者从污水中筛选出异养硝化细菌ZW2和ZW5菌株，并研究其转化能力，结果如图。相关叙述正确的是（    ）    A．进行ZW2和ZW5菌株初步筛选时，采用平板划线法接种并计数 B．初步筛选并培养后，一般依据菌落形状等特征来区分不同的微生物 C．分离ZW2和ZW5菌株时，培养基中需要添加刚果红作为指示剂 D．ZW2菌株的转化能力较ZW5强，可以扩大化培养用于水体净化 【答案】B 【分析】分离微生物常用的方法： （1）平板划线法：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面； （2）稀释涂布平板法：将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。其中，稀释涂布平板法还可以用于对微生物进行计数。 【详解】A、分离微生物常用的方法有平板划线法和稀释涂布平板法，故进行ZW2和ZW5菌株初步筛选时，通常采用平板划线法或稀释涂布平板法进行接种，A错误； B、可根据菌落的形状、大小、隆起程度和颜色等方面的特征区别不同微生物，故初步筛选时，一般依据菌落特征来区分不同的微生物，B正确； C、由题干信息可知，异养硝化细菌能将硝酸铵转化为氨，科研工作者从污水中筛选出异养硝化细菌ZW2和ZW5菌株，并研究其转化能力，所以分离ZW2和ZW5菌株时，培养基中需要添加酚红作为指示剂，C错误； D、由图分析可知，ZW5菌落周围的红色圈面积大，说明其降解硝酸铵产生氨的能力更强，故如果要得到目标菌，应该选择ZW5菌落进一步纯化，D错误。 故选B。 18．研究人员为分离出产酒精能力强的酵母菌菌株，进行了如图I所示实验，甲、乙、丙、丁锥形瓶内分别加入100mL完全培养基，图Ⅱ是实验结果。相关叙述正确的是（    ） A．传统葡萄酒制作过程中，需要对发酵液、发酵瓶进行严格灭菌 B．菌种计数过程中，需要对试管口、涂布器等进行直接灼烧灭菌 C．本研究中葡萄酒过滤液的活菌数约为6.8×106个/L，此数值可能低于实际的活菌数 D．图Ⅱ丙瓶的结果可能是因为酒精发酵瓶密封不严，丁组酵母菌产酒精能力比乙强 【答案】D 【分析】果酒制作过程中的相关实验操作：材料的选择和处理→灭菌→榨汁→发酵。利用葡萄皮表面野生型酵母菌在缺氧的环境下发酵产酒精。若对菌液计数，需选取菌落数处于30~300的培养皿计数。 【详解】A、在传统葡萄酒发酵过程中，利用的是葡萄皮表面的天然酵母菌，不需要严格灭菌，A错误； B、涂布器应先浸在酒精中然后在酒精灯火焰上灼烧，待酒精燃尽，涂布器冷却后才能使用，B错误； C、若对菌液计数，需选取菌落数处于30~300的培养皿计数。先求平均菌落数为（62+68+74）÷3=68，68÷0.1×104×1000=6.8×109个/L，计数过程中两个或两个以上细胞连在一起，平板上生长出一个菌落，所以计算得到的活菌数目比实际值偏小，C错误； D、乙、丙、丁挑取不同的菌落培养，丙瓶与乙、丁瓶相同条件培养，但培养液没有酒精产生，且瓶内活菌数量不低，丙瓶出现的原因可能是培养瓶密封不严，进行有氧呼吸；丁组的活菌数比乙组少，但是产生的酒精和乙组一样多，所以丁组产生酒精能力比乙强，D正确。 故选D。 19．塑化剂 （DEHP， 化学式为（C24H38O4）可提高塑料制品的性能，在生产上被广泛使用。但残留于土壤、水源里的 DEHP 不易被降解，属于2B类致癌物。我国科研工作者已从土壤中成功筛选出可降解 DEHP 的降解菌，如铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌等，筛选实验的主要步骤如图。下列相关叙述错误的是（    ） A．接种前固体培养基和摇瓶内的培养基需高温灭菌以防杂菌污染，但土壤样品不能灭菌处理 B．图中虚线框培养瓶中的培养基属于液体选择培养基，DEHP 应为唯一碳源 C．培养若干天后，应选择DEHP 含量高的培养液进行接种以进一步扩增目的菌 D．若筛选出的目的菌为枯草芽孢杆菌，对其扩大培养易选用液体培养基，温度宜控制在30~37℃范围 【答案】C 【分析】选择培养基在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称为选择培养基。虽然各种培养基的具体配方不同，但一般都含有水、碳源（提供碳元素的物质）、氮源（提供氮元素的物质）和无机盐。另外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。 【详解】A、接种前固体培养基和摇瓶内的培养基需高温灭菌以防杂菌污染，土壤不能灭菌以免杀死微生物，A正确； B、在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称为选择培养基，要筛选降解DEHP的微生物，DEHP应为唯一碳源，培养基为选择培养基， B正确； C、培养若干天后，应选择培养瓶中DEHP含量低（说明被分解的多）的培养液接入新培养液中以扩增目的菌，C错误； D、枯草芽孢杆菌为细菌，其培养温度为30~37C范围，故若筛选出的目的菌为枯草芽孢秆菌，对其扩大培养易选用液体培养基，温度宜控制在30~37℃范围，D正确。故选C。 二、非选择题 20．畜禽养殖会产生大量的氨气、硫化氢、甲烷等有毒有害气体，某科研团队采集新鲜羊粪养殖蚯蚓后产生的蚓粪，从中筛选出能高效除臭的细菌，以减轻养殖废弃物对环境的污染。实验先筛选耐氨水和Na2S的细菌，再用瓶装腐熟发酵法检测细菌去除NH3和H2S的能力。筛选的主要步骤如图1所示，不同菌株除臭效果如图2所示，筛选出高效除臭菌接种量与除臭效果的关系如图3所示，请回答下列问题：    (1)培养基甲为添加 的牛肉膏蛋白胨培养基，按照功能分类属于 。步骤②培养目的是 。 (2)结合图2分析，除臭效果最好的是 号细菌。除臭菌可利用氨和硫化氢合成 ，等生物大分子。 (3)由图3可知，一般选用除臭菌的相对接种量为 ，原因是 。 (4)科研人员进一步发现，3号和4号混合菌除臭效果更佳。为探究3号和4号混合菌除臭效果最佳的菌种比例，设计如下实验： 实验步骤的目的 简要操作过程 设置不同菌液配比为自变量 分别配制相同浓度的3号和4号菌液，①_________并分组编号，分别向装有相同质量新鲜羊粪的发酵罐中喷洒10mL不同配比的混合菌液，每组做3个重复实验 设置对照组 向装有相同质量的新鲜羊粪的发酵罐中喷洒②________ ③________ 对照组和实验组均放置在相同且适宜的环境中发酵相同时间 除臭效果检测 ④____ ① ；② ；③ ；④ 。 【答案】(1) 氨水和Na2S（或浓度高的氨水和Na2S） 选择培养基 增加耐氨、耐硫的细菌数量 (2) 3 蛋白质 (3) 2.5 NH3和H2S的降解率高，避免了菌种浪费，节约成本 (4) 将3号和4号菌液按不同配比均匀混合 10mL无菌水 设置无关变量 计算各组的NH3和H2S的降解率 【分析】纯化微生物：（1）原理：在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞，使其长成单个的菌落，这个单个菌落就是一个纯化的细菌菌落。（2）微生物常见的接种的方法：①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。 【详解】（1）培养基甲是为了筛选出耐氨、耐硫的细菌，因此培养基甲为添加富含氨水和Na2S　　　　　　　　　　　　　的牛肉膏蛋白胨培养基；耐氨、耐硫的细菌才能在该培养基上生长，按照功能分类该培养基属于选择培养基；步骤②中的培养基为液体培养基，该培养目的是增加耐氨、耐硫的细菌数量。 （2）结合图2分析，除臭效果最好的是3号细菌，用该细菌处理后，NH3和H2S两种物质的降解率都比较高。蛋白质（大分子）的组成元素是C、H、O、N，往往还有S元素，因此除臭菌可利用氨和硫化氢合成蛋白质等生物大分子。 （3）由图3可知，接种2.5时，NH3和H2S的降解率高，且不浪费菌种，因此一般选用除臭菌的相对接种量为2.5。 （4）为探究3号和4号混合菌除臭效果最佳的菌种比例，该实验自变量为不同配比的混合菌液，因变量为NH3和H2S的降解率。故实验步骤如下： 设置不同菌液配比为自变量：分别配制相同浓度的3号和4号菌液，将3号和4号菌液按不同配比均匀混合并分组编号，分别向装有相同质量新鲜羊粪的发酵罐中喷洒10mL不同配比的混合菌液，每组做3个重复实验。 设置对照组：向装有相同质量的新鲜羊粪的发酵罐中喷洒10mL无菌水。 设置无关变量：对照组和实验组均放置在相同且适宜的环境中发酵相同时间。 除臭效果检测：计算各组的NH3和H2S的降解率。 一、单选题 1．（2024·浙江·高考真题）脲酶催化尿素水解，产生的氨可作为细菌的氮源。脲酶被去除镍后失去活性。下列叙述错误的是（    ） A．镍是组成脲酶的重要元素 B．镍能提高尿素水解反应的活化能 C．产脲酶细菌可在以NH4Cl为唯一氮源的培养基生长繁殖 D．以尿素为唯一氮源的培养基可用于筛选产脲酶细菌 【答案】B 【分析】1、在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称为选择培养基。 2、只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，利用以尿素作为唯一氮源的选择培养基，可以从土壤中分离出分解尿素的细菌。 【详解】A、根据题意，脲酶被去除镍后失去活性，说明镍是组成脲酶的重要元素，A正确； B、脲酶催化尿素水解的机理为降低化学反应所需的活化能，镍作为脲酶的重要组成元素，应该与降低尿素水解反应的活化能有关，B错误； C、产脲酶细菌可利用NH4Cl里的氮源进行代谢活动，因此产脲酶细菌可在以NH4Cl为唯一氮源的培养基生长繁殖，C正确； D、产脲酶细菌能利用脲酶催化尿素分解产生NH3，NH3可作为细菌生长的氮源，不能产脲酶的细菌则无法分解尿素获得氮源，因此以尿素为唯一氮源的培养基可用于筛选产脲酶细菌，D正确。 故选B。 2．（2024·江苏·高考真题）酵母菌是基因工程中常用的表达系统。下列相关叙述正确的是（    ） A．酵母菌培养液使用前要灭活所有细菌，但不能灭活真菌 B．酵母菌是真核细胞，需放置在CO2培养箱中进行培养 C．可用稀释涂布平板法对酵母菌计数 D．该表达系统不能对合成的蛋白质进行加工和修饰 【答案】C 【分析】 微生物常见的接种的方法： （1）平板划线法：把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞用接种环在平板培养基，通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞，经培养后生长繁殖成单菌落，通常把这种单菌落当作待分离微生物的纯种。 （2）稀释涂布平板法：将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落。 【详解】A、酵母菌培养液使用前要灭活所有细菌和真菌，A错误； B、将含有酵母菌的培养基放置在28℃恒温培养箱中进行培养，B错误； C、稀释涂布平板法常用来统计样品中活菌的数目，当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌，由此可知，可用稀释涂布平板法对酵母菌计数，C正确； D、酵母菌是真核细胞，具有高尔基体和内质网，可以对合成的蛋白质进行加工和修饰，D错误。 故选C。 3．（2024·海南·高考真题）某小组为检测1株粗糙脉孢霉突变株的氨基酸缺陷类型，在相同培养温度和时间的条件下进行实验，结果见表。下列有关叙述错误的是（    ） 组别 培养条件 实验结果 ① 基础培养基 无法生长 ② 基础培养基+甲、乙、丙3种氨基酸 正常生长 ③ 基础培养基+甲、乙2种氨基酸 无法生长 ④ 基础培养基+甲、丙2种氨基酸 正常生长 ⑤ 基础培养基+乙、丙2种氨基酸 正常生长 A．组别①是②③④⑤的对照组 B．培养温度和时间属于无关变量 C．①②结果表明，甲、乙、丙3种氨基酸中有该突变株正常生长所必需的氨基酸 D．①~⑤结果表明，该突变株为氨基酸甲缺陷型 【答案】D 【分析】实验的自变量为培养条件（基础培养基中是否添加氨基酸及添加氨基酸的种类），因变量为粗糙脉孢霉突变株的生长状况，其他的培养条件为无关变量，应该保持相同且适宜。 【详解】A、由表可知：除了组别①之外，其他组别的基础培养基中都添加了氨基酸，因此组别①是②③④⑤的对照组，A正确； B、由题意表中信息可知：实验的自变量为培养条件，各组别的培养温度和时间均相同，说明培养温度和时间均属于无关变量，B正确； C、由①②结果可知：粗糙脉孢霉突变株在基础培养基中无法生长，但在添加了甲、乙、丙3种氨基酸的基础培养基中能正常生长，这表明甲、乙、丙3种氨基酸中有该突变株正常生长所必需的氨基酸，C正确； D、与组别①相比，在基础培养基中，若添加的氨基酸中含有丙种氨基酸，则粗糙脉孢霉突变株都能正常生长，但在只添加甲、乙2种氨基酸的基础培养基中无法生长，说明该突变株为氨基酸丙缺陷型，D错误。 故选D。 4．（2024·重庆·高考真题）养殖场粪便是农家肥的重要来源，其中某些微生物可使氨氮化合物转化为尿素进而产生NH3，影响畜禽健康。为筛选粪便中能利用氨氮化合物且减少NH3产生的微生物。兴趣小组按图进行实验获得目的菌株，正确的是（    ） A．①通常在等比稀释后用平板划线法获取单个菌落 B．②挑取在2种培养基上均能生长的用于后续的实验 C．③可通过添加脲酶并检测活性，筛选得到甲、乙 D．粪便中添加菌株甲比乙更有利于NH3的减少 【答案】C 【分析】由图可知，所筛选出的菌株之所以不能利用尿素，可能是由于不产生脲酶或分泌脲酶抑制剂。图中②筛选的是不能在尿素唯一氮源培养基上生长，而能在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌株用于后续的实验。 【详解】A、平板划线法无需稀释，A错误； B、由图可知，②筛选不能在尿素唯一氮源培养基上生长，而能在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌株用于后续的实验，B错误； C、所筛选出的菌株之所以不能利用尿素，可能是由于不产生脲酶或分泌脲酶抑制剂，所以③可通过添加脲酶并检测活性，筛选得到甲、乙，C正确； D、由图可知，甲不产生脲酶而乙可以产生脲酶，且乙同时分泌脲酶抑制剂，粪便中可能还含有其他能产生脲酶的菌株使甲能够产生NH3，所以粪便中添加菌株乙比甲更有利于NH3的减少，D错误。 故选C。 5．（2024·山东·高考真题）酵母菌在合成色氨酸时需要3种酶X、Y和Z，trpX、trpY和trpZ分别为相应酶的编码基因突变的色氨酸依赖型突变体。已知3种酶均不能进出细胞，而色氨酸合成途径的中间产物积累到一定程度时可分泌到胞外。将这3种突变体均匀划线接种到含有少量色氨酸的培养基上，生长情况如图。据图分析，3种酶在该合成途径中的作用顺序为（　　） A．X→Y→Z B．Z→Y→X C．Y→X→Z D．Z→X→Y 【答案】A 【分析】由图可知，接种时，相当于在培养基表面划了一个三角形的三条边。左边那条边线是用trpY突变型菌液划线接种的，右边那个边是用trpX突变型菌液接种的，最下面那个边是用trpZ突变型菌液划线接种的。最终结果是，trpY那条接种线左下方出现了又黑又粗的明显的菌落，trpX那条接种线两头出现了明显的菌落，而trpZ那条接种线，没有长出明显的菌落，。 【详解】ABCD、添加少量色氨酸，突变体菌株可以生长，色氨酸合成途径的中间产物积累后可排出胞外，进入培养基后，通过扩散，从而给其他突变型提供代谢原料，帮助其长出明显的菌落。trpX、trpY和trpZ分别为相应酶的编码基因突变的色氨酸依赖型突变体，据图可知，trpX不能为trpY和trpZ提供原料，trpY不能为trpZ提供原料，trpZ可以为trpX、trpY的生长提供原料，推测3种酶在该合成途径中的作用顺序为X→Y→Z。 故选A。 6．（2024·宁夏四川·高考真题）合理使用消毒液有助于减少传染病的传播。某同学比较了3款消毒液A、B、C杀灭细菌的效果，结果如图所示。回答下列问题。 (1)该同学采用显微镜直接计数法和菌落计数法分别测定同一样品的细菌数量，发现测得的细菌数量前者大于后者，其原因是 。 (2)该同学从100 mL细菌原液中取1 mL加入无菌水中得到10 mL稀释菌液，再从稀释菌液中取200 μL涂布平板，菌落计数的结果为100，据此推算细菌原液中细菌浓度为 个/mL。 (3)菌落计数过程中，涂布器应先在酒精灯上灼烧，冷却后再涂布。灼烧的目的是 ，冷却的目的是 。 (4)据图可知杀菌效果最好的消毒液是 ，判断依据是 。（答出两点即可） (5)鉴别培养基可用于反映消毒液杀灭大肠杆菌的效果。大肠杆菌在伊红美蓝培养基上生长的菌落呈 色。 【答案】(1)前者微生物分散的活菌和死菌一起计数，后者存在多个活菌形成一个菌落的情况且只计数活菌 (2)5000 (3) 杀死涂布器上可能存在的微生物，防止涂布器上可能存在的微生物污染 防止温度过高杀死菌种 (4) A A消毒液活菌数减少量最多，且杀菌时间较短，效率最高 (5)黑 【分析】【关键能力】 （1）信息获取与加工 题干关键信息 所学知识 信息加工 两种计数方法得到的数目不同 显微镜直接计数法和菌落计数法 显微镜直接计数法把死菌和活菌一起计数，菌落计数法计数只计活菌数，还可能存在多个活菌形成一个菌落的情况 涂布器应先在酒精灯上灼烧 消毒和灭菌的方法 菌落计数过程中，涂布器应先在酒精灯上灼烧，灼烧的目的是杀死涂布器上可能存在的微生物，防止涂布器上可能存在的微生物污染 鉴别培养基鉴别大肠杆菌 鉴别培养基 大肠杆菌在伊红美蓝培养基上生长的菌落呈黑色 （2）逻辑推理与论证 【详解】（1）显微镜直接计数法把死菌和活菌一起计数。菌落计数法计数只计活菌数，还可能存在多个活菌形成一个菌落的情况，故前者的数量多于后者。 （2）从100 mL细菌原液中取1 mL加入无菌水中得到10 mL稀释菌液，即稀释了10倍，1mL细菌原液中细菌浓度=（菌落数÷菌液体积）×稀释倍数=（100÷200 μL）×10个=5000个。 （3）菌落计数过程中，涂布器应先在酒精灯上灼烧，冷却后再涂布。灼烧的目的是杀死涂布器上可能存在的微生物，防止涂布器上可能存在的微生物污染，冷却的目的是防止温度过高杀死菌种。 （4）A消毒液活菌数减少量最多，且杀菌时间较短，效率最高，因此A消毒液杀菌效果最好。 （5）大肠杆菌在伊红美蓝培养基上生长的菌落呈黑色。 原创精品资源学科网独家享有版权，侵权必究！2 学科网（北京）股份有限公司1 学科网（北京）股份有限公司 $$