第2节 第1课时 微生物的基本培养技术-【金版新学案】2024-2025学年高中生物选择性必修3同步课堂高效讲义配套课件（人教版2019 单选）

第1课时　微生物的基本培养技术 　 第1章　第2节　微生物的培养技术及应用 学习目标 1．基于对牛肉膏蛋白胨培养基的实例分析，说明培养基的概念、种类及营养成分的种类和作用。　 2．对比分析消毒和灭菌方法异同，认同灭菌是获得纯净的微生物培养物的前提。　 3．运用微生物培养原理和无菌技术，通过平板划线接种并分离得到酵母菌单菌落，对实验结果进行分析与评价。 知识点一　培养基的配制 1 知识点二　无菌技术 2 知识点三　微生物的纯培养 3 课时测评 6 学习小结 4 内容索引 随堂达标演练 5 培养基的配制 知识点一 返回 新知导学 1．培养基的概念：人们按照微生物对__________的不同需求，配制出供其__________的营养基质——培养基，用以培养、_____、鉴定、_____微生物或积累其代谢物。 2．培养基的种类 种类 划分标准 培养基特点 作用 _____培养基 __________ 加凝固剂，如_____ 微生物的分离与鉴定，活菌计数，保藏菌种 _____培养基 不加凝固剂 常用于工业生产 营养物质 生长繁殖 分离 保存 固体 液体 物理性质 琼脂 3．培养基的营养构成 (1)主要营养物质：水、 (提供碳元素的物质)、 (提供氮元素的物质)和无机盐。 (2)某种常见的细菌培养基——牛肉膏蛋白胨培养基的营养构成 组分 含量 提供的主要营养 牛肉膏 5 g 等 蛋白胨 10 g 等 NaCl 5 g 无机盐 H2O 定容至1 000 mL 水 碳源 氮源 碳源、氮源、磷酸盐和维生素 碳源、氮源和维生素 (3)其他条件：pH、 和氧气。如下表： 特殊营养物质 微生物 乳酸杆菌 霉菌 细菌 厌氧微生物 特殊需求 添加_______ pH调至______ pH调至_____________ 无氧 维生素 酸性 中性或弱碱性 精通教材 1．培养基的配制原则有哪些？ 提示：目的要明确；营养要协调；pH要适宜。 2．说出培养基中琼脂的作用。 提示：固体培养基中的琼脂仅作为凝固剂，不能为微生物生长提供能量和碳源。 合作探究 任务　分析培养基的种类和营养构成 1．下表是某培养基的配方，回答下列问题。 (1)根据培养基的物理性质，该培养基属于哪类培养基，依据是什么？ 提示：固体培养基。该培养基的配方中含有凝固剂琼脂。 (2)为什么培养基需要氮源？该培养基中主要提供碳源和氮源的物质是什么？ 提示：培养基中的氮元素是微生物合成蛋白质、核酸等物质所必需的。牛肉膏和蛋白胨主要提供碳源和氮源。 材料 牛肉膏 蛋白胨 NaCl 琼脂 水 用量 5 g 10 g 5 g 20 g 定容至1 000 mL (3)说出该培养基培养的微生物同化作用类型，及判断依据。 提示：异养型微生物，该微生物的碳源和氮源是有机物，不能自己合成有机物。 (4)培养微生物时，培养基中是否必须有碳源和氮源？ 提示：不一定，例如培养自养微生物时，一般不需要添加碳源，微生物可以利用空气中的二氧化碳；培养固氮微生物时，一般不需要添加氮源，微生物可以利用空气中的氮气。 材料 牛肉膏 蛋白胨 NaCl 琼脂 水 用量 5 g 10 g 5 g 20 g 定容至1 000 mL 2．下表是某微生物培养基的成分，请分析该培养基可用来培养哪种微生物？若除去①，此培养基可用来培养圆褐固氮菌吗？ 提示：此培养基可用来培养自养型微生物。若除去①圆褐固氮菌虽可以固氮，但其同化作用类型为异养型，培养基中必须提供含碳有机物，所以该培养基不能用来培养圆褐固氮菌。 编号 ① ② ③ ④ ⑤ 成分 (NH4)2SO4 KH2PO4 FeSO4 CaCl2 H2O 含量 0.4 g 4.0 g 0.5 g 0.5 g 100 mL 培养基营养成分的作用和主要来源 核心归纳 应用1．(2024·云南昆明高二期末)下表是培养某种微生物的培养基配方，下列说法正确的是 A．该培养基中含有碳源、氮源、水和无机盐四类物质 B．该培养基可用来培养硝化细菌，不能用来培养酵母菌 C．该培养基在培养硝化细菌时，需要密封 D．要用该培养基培养酵母菌，需要加入葡萄糖作为氮源 √ 成分 NH4NO3 KH2PO4 CaCl2 FeSO4 维生素 蒸馏水 含量 0.5 g 3.0 g 0.5 g 0.5 g 少许 定容至1 000 mL 该培养基中不含有碳源，而酵母菌是异养生物，硝化细菌是自养生物，其可以利用空气中CO2来合成有机物，因此该培养基可用来培养硝化细菌，不能用来培养酵母菌，A错误，B正确；硝化细菌需要利用空气中的CO2来合成有机物，因此该培养基在培养硝化细菌时，不能密封，C错误；要用该培养基培养酵母菌，需要加入葡萄糖作为碳源，D错误。 成分 NH4NO3 KH2PO4 CaCl2 FeSO4 维生素 蒸馏水 含量 0.5 g 3.0 g 0.5 g 0.5 g 少许 定容至1 000 mL 特别提醒 不是所有微生物的培养基中都需要加入碳源、氮源 1．自养微生物能利用无机碳源(如空气中的CO2)，故培养基中不用添加碳源。 2．固氮微生物可利用N2作为氮源，故培养基中不用加入氮源。 3．对异养微生物来说，含C、H、O、N的有机化合物(尿素除外)既可能是碳源，又可能是氮源。 应用2．(2024·陕西西安高二期末)下列有关微生物培养基的配制表述错误的是 A．培养硝化细菌的培养基中添加的铵盐可作为能量来源 B．尿素固体培养基中的K2HPO4能用于维持培养基的pH C．培养光能自养型蓝细菌的培养基中不需提供有机碳源 D．马铃薯琼脂固体培养基中的琼脂能作为酵母菌的碳源 √ 硝化细菌是化能自养型生物，可利用氧化NH3获得能量，将无机物转化为有机物，故培养硝化细菌的培养基中的铵盐可作为能量来源，A正确；尿素固体培养基中的K2HPO4能用于维持培养基的pH，保证微生物所需的酸碱环境，B正确；培养光能自养型蓝细菌的培养基中不需提供有机碳源，蓝细菌可利用二氧化碳和水合成有机物，C正确；琼脂的作用是凝固剂，不能作为碳源，D错误。 规律方法 几种微生物的营养和能量来源 微生物 碳源 氮源 能源 蓝细菌 CO2 光能 硝化细菌 CO2 NH3 NH3的氧化 根瘤菌 糖类等有机物 N2 有机物 大肠杆菌 糖类、蛋白质等有机物 蛋白质等 有机物 返回 无菌技术 知识点二 返回 新知导学 1．消毒和灭菌 杂菌污染　 较为温和的物理、 化学　 巴氏消　 所有的微　 湿热灭菌　 灼烧灭菌 毒法 生物 2．具体操作 (1)对操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和 。 (2)将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行 。 (3)为避免周围环境中微生物的污染，许多实验操作都应在超净工作台上并在 附近进行。 (4)实验操作时应注意避免已经灭菌处理的材料用具与 接触。 消毒 灭菌 酒精灯火焰 周围的物品 3．连线无菌技术的常用方法及适用对象 精通教材 1．消毒和灭菌的原理是什么？能否杀死所有的微生物？ 提示：消毒和灭菌都是使微生物的蛋白质或核酸变性，借此杀死微生物。灭菌可杀死处理材料中的全部微生物(包括芽孢和孢子)，而消毒仅杀死部分微生物(一般不包括芽孢和孢子)。 2．下图为接种环灼烧灭菌的示意图，思考下列问题。 (1)酒精灯火焰A、B代表充分燃烧层的是 。 (2)灭菌先后的正确顺序是 (用序号和箭头表示)。 A ③→①→② 合作探究 任务　分析无菌技术的类型和应用 获得纯净微生物培养物的关键是防止杂菌污染。无菌技术主要包括消毒和灭菌。思考下列问题。 (1)消毒和灭菌的结果有什么不同？ 提示：消毒仅杀死物体表面或内部的部分微生物；灭菌可杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。 (2)牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高温瞬时消毒法，与煮沸消毒法相比，这两种方法的优点是什么？ 提示：在达到消毒目的的同时，营养物质损失较少。 (3)常用酒精擦拭双手是日常防护致病菌感染的措施之一，这是消毒还是灭菌？体积分数为70%和95%的酒精，哪种效果更好？为什么？ 提示：酒精擦拭属于消毒，酒精消毒时，70%的酒精杀菌效果最好。浓度过高，使菌体表面蛋白质凝固成一层保护膜，酒精分子不能渗入其中；浓度过低，杀菌能力减弱。 消毒和灭菌的主要方法及应用范围 核心归纳 项目 主要方法 应用范围 消 毒 巴氏消毒法 63～65 ℃消毒30 min或72～76 ℃处理15 s或80～85 ℃处理10～15 s 牛奶、啤酒等不耐高温的液体 煮沸消毒法 100 ℃煮沸5～6 min 家庭餐具等生活用品 紫外线消毒 紫外线照射30 min 接种室、接种箱或超净工作台 化学药物消毒 用体积分数为70%～75%的酒精、氯气、苯酚或煤酚皂溶液等处理 皮肤、伤口、动植物组织表面消毒和空气、水消毒 项目 主要方法 应用范围 灭 菌 灼烧灭菌 直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧 涂布器、接种环、接种针或其他金属用具、试管口或瓶口等 干热灭菌 160～170 ℃的热空气中维持1～2 h 耐高温的和需要保持干燥的物品，如玻璃器皿、金属用具等 高压蒸汽灭菌(湿热灭菌) 100 kPa、121 ℃维持15～30 min 培养基及多种器材、物品 应用1．(2024·山东东营高二开学考试)微生物的实验室培养要进行严格的灭菌和消毒。下列关于灭菌和消毒的叙述，正确的是 A．灭菌和消毒均可以杀死环境中的一切微生物，包括芽孢和孢子 B．无菌操作时，对操作的空间、操作者的衣着和手进行灭菌 C．灼烧灭菌的对象是金属器具，不可以是玻璃器具 D．消毒和灭菌的原理是基本相同的，程度有所不同 √ 灭菌是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子；消毒只能杀死物体表面或内部一部分微生物，不能杀死芽孢和孢子，A错误。对操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁消毒，B错误。灼烧灭菌的对象可以是金属器具和玻璃器具，C错误。消毒和灭菌的原理基本相同，都是使微生物的核酸或蛋白质变性，灭菌更彻底，D正确。 知识拓展 芽孢和孢子 1．芽孢：有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体(不是繁殖体)，叫作芽孢。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌。 2．孢子：细菌、原生动物、真菌和植物等产生的一种有繁殖或休眠作用的生殖细胞。孢子的特点是能直接长成新个体。 应用2．(2024·甘肃天水高三期末)实验室常用高压蒸汽灭菌锅进行灭菌，下列叙述正确的是 A．放入待灭菌物品后，关闭排气阀，即可打开电源加热 B．一般在压力为100 kPa、温度121 ℃的条件下灭菌10 min C．高压蒸汽灭菌法可以杀灭物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子 D．若压力达到设定要求时，锅内没有达到相应温度，说明灭菌锅的温度计测量有误 √ 放入待灭菌物品后，加热灭菌锅，打开排气阀，排除锅内冷空气，A错误；为达到良好的灭菌效果，一般在压力为100 kPa，温度为121 ℃的条件下，维持15～30 min，B错误；高压蒸汽灭菌法是常用的湿热灭菌法之一，可以杀灭物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子，C正确；若压力达到设定要求，而锅内没有达到相应温度，最可能的原因是未将锅内冷空气排尽，D错误。 特别提醒 高压蒸汽湿热灭菌的2个注意点 1．高压蒸汽灭菌开始之前要将锅内的冷空气排尽。因为空气的膨胀压大于水蒸气的膨胀压，所以，当水蒸气中含有空气时，在同一压力下，含空气蒸汽的温度低于饱和蒸汽的温度。 2．灭菌完毕后，要待压力降到0时才能打开排气阀，否则会导致锅内压力突然下降，使容器内的培养基由于内外压力不平衡而冲出瓶口或试管口，造成棉塞沾染培养基而发生污染。 返回 微生物的纯培养 知识点三 返回 新知导学 1．纯培养的相关概念 (1)培养物：在微生物学中，将接种于培养基内，在合适条件下形成的含_________微生物的群体称为培养物。 (2)纯培养物与纯培养：由_________繁殖所获得的微生物群体称为纯培养物，获得纯培养物的过程就是纯培养。 2．步骤：微生物的纯培养包括____________、_____、 _____ 、_____和_____等步骤。 特定种类 单一个体 配制培养基 灭菌 接种 分离 培养 3．酵母菌的纯培养 (1)实验原理 ①分散的微生物在适宜的____________表面或内部可以繁殖形成肉眼可见的、有一定形态结构的___________，这就是菌落。 ②采用____________和_______________能将单个微生物分散在固体培养基上，之后经培养得到的单菌落一般是由____________繁殖形成的纯培养物。 固体培养基 子细胞群体 平板划线法 稀释涂布平板法 单个微生物 (2)方法步骤 琼脂　 蒸馏水　 干热灭菌箱　 50 ℃　 酒精灯火焰　 单　 恒温 4．倒平板的具体操作 右手　 左手　 通过　 稍大于　 立即　 倒过来　 下　 上 5．平板划线法的具体操作 灼烧　 火焰旁　 火焰 接种环　 三至五条平行线 接种环 末端　 第一次 精通教材 1．培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时，才能用来倒平板。可用什么办法来估计培养基的温度？ 提示：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉温度下降到刚刚不烫手即可。 2．在第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？ 提示：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。 合作探究 任务　分析平板划线操作过程 1．结合倒平板的操作程序思考下列问题。 (1)如图一所示，为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 提示：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。 (2)图二所示，平板冷凝后，为什么要将平板倒置？ 提示：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，将平板倒置，既可以防止皿盖上的水珠落入培养基，又可以避免培养基中的水分过快挥发。 (3)在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？ 提示：不能用这个平板培养微生物。防止空气中的微生物在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。 2．下图是平板划线操作的示意图，据图回答下列问题： (1)用字母和箭头表示平板划线操作的正确步骤。 提示：d→b→f→a→e→c→h→g。 (2)为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，为什么仍然需要灼烧接种环？ 提示：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到单个菌落，划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。 (3)在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？ 提示：以免接种环温度太高，杀死菌种。 (4)若要按照如图h进行划线，那么在接种划线的操作过程中，共灼烧了几次接种环？ 提示：图h中共划了5个区域，在每次划线前后均需要对接种环灼烧灭菌，因此共需要灼烧接种环6次。 (5)接种结束后，为什么要将一个未接种的培养基和一个已接种的培养基放在一起培养，未接种的培养基表面如果有菌落生长，说明了什么？ 提示：培养未接种的培养基的作用是对照，未接种的培养基在恒温箱中保温1～2 d后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的。若有菌落形成，说明培养基灭菌不彻底，或培养基被污染了，需要重新制备。 1．配制培养基的注意事项 (1)如果需要调节培养基的pH，应该在定容完成之后，灭菌之前进行操作。 (2)培养基灭菌后需要冷却至50 ℃左右时才能倒平板。温度过高会烫手，且培养基凝固后皿盖上凝结的冷凝水过多，易落入培养基造成污染；温度过低，培养基会凝固。 (3)倒平板时，要使锥形瓶的瓶口通过火焰。通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。 (4)将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，不要完全打开，以免杂菌污染培养基。 (5)整个操作过程要在酒精灯火焰旁进行，避免杂菌污染。 核心归纳 2．平板划线操作的注意事项 (1)灼烧接种环，待其冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种。 (2)接种环蘸取菌液前后，要将试管口通过火焰；划线操作全程都要在酒精灯火焰旁进行。 (3)第二次及其以后的划线操作总是从上一次划线末端开始，能使微生物的数目随着划线次数的增加而逐渐减少，最终得到由单个细菌繁殖而来的菌落。划线时最后一区不要与第一区相连。 (4)划线时用力大小要适当，避免用力过大将培养基划破。 (5)操作第一步即取菌种之前以及每次划线之前都需要将接种环进行火焰灼烧灭菌，划线操作结束时，仍需灼烧接种环。 3．实验结果的分析 (1)若未接种的培养基表面有菌落生长，则说明培养基被污染，应该重新制备；若无菌落生长，则说明未被污染。 (2)在接种酵母菌的培养基上可观察到独立的菌落，这些菌落在颜色、形状和大小上相似，酵母菌菌落一般表面光滑、多呈乳白色。 (3)若在培养基中观察到不同形态的菌落，原因可能是菌液中混入了其他杂菌，或在实验操作过程中被杂菌污染。 应用1．下图表示培养和纯化X细菌的部分操作步骤，下列叙述正确的是 A．对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行灭菌处理 B．步骤①倒平板操作时，倒好后应立即将其倒过来放置 C．步骤②应多个方向划线，使接种物逐渐稀释，培养后出现单个菌落 D．步骤③划线结束后在培养皿盖上做好标注 √ 图中①是倒平板，②是进行平板划线，③是培养。对实验操作的空间、操作者的衣着和手需要进行消毒处理，A错误；倒完平板后立即盖上培养皿盖，待培养基冷却凝固后将平板倒过来放置，B错误；步骤②应多个方向划线，使接种物逐渐稀释，培养后出现单个菌落，C正确；图中操作结束后需在培养皿底标注菌种及接种日期等信息，而不是在培养皿盖上做标注，D错误。 应用2．(2024·广西桂林高二开学考试)微生物的纯培养包括配制培养基、灭菌、接种、分离和培养等步骤。下列关于酵母菌的纯培养的叙述错误的是 A．采用平板划线法和稀释涂布平板法均可分离酵母菌 B．可用湿热灭菌法对培养酵母菌的马铃薯琼脂培养基进行灭菌 C．通过接种环连续蘸取菌液在固体培养基表面划线的操作，可将菌种逐步稀释 D．完成平板划线后，待菌液被培养基吸收，再将接种后的平板进行培养 √ 对于微生物进行分离的方法有平板划线法和稀释涂布平板法，A正确；可用湿热灭菌法(通常是高压蒸汽灭菌法)对培养酵母菌的马铃薯琼脂培养基进行灭菌，B正确；通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面，该过程中只蘸取一次菌液，C错误；完成平板划线后，待菌液被培养基吸收，将接种后的平板(和一个未接种的平板)倒置培养，D正确。 应用3．在分离纯化大肠杆菌实验中，划线接种(甲)、培养结果(乙)如图所示。下列叙述错误的是 A．甲中a区域为划线的起始位置 B．接种前应对培养基进行高压蒸汽灭菌 C．接种过程中至少需要对接种环灼烧5次 D．连续划线的目的是获得单个细菌，以便形成单菌落 √ 乙图呈现的培养结果是：从d区域到a区域菌落 逐渐减少，而形成单菌落的区域是划线的末端 ，所以a区域应为划线的终点位置，A错误；在 培养微生物时必须进行无菌操作，培养基可通 过高压蒸汽灭菌来保证无菌，B正确；划线前后都要对接种环灼烧，共划线4次，所以需要灼烧5次，C正确；平板划线法是分离单菌落的常用方法，划线将细菌分散，到划线的末端可以获得单菌落，D正确。 特别提醒 培养基中微生物数目过多或连成一片的原因 1．菌液浓度过高。 2．培养过程中被杂菌污染。 3．利用接种环划线时，每次划线前未灼烧灭菌。 返回 学　习　小　结 返回 思维导图 要语必背 1.培养基中一般都含有水、碳源、氮源和无机盐等营养物质。 2.获得纯净的微生物培养物的关键是防止杂菌污染。消毒是指使用较为温和的物理、化学或生物等方法杀死物体表面或内部一部分微生物。灭菌是指使用强烈的理化方法杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。 3.由单一个体繁殖所获得的微生物群体称为纯培养物，获得纯培养物的过程就是纯培养。 4.菌落是单个或少数同种微生物在适宜的固体培养基表面或内部繁殖形成的肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体。 5.微生物纯化方法主要采用平板划线法和稀释涂布平板法。 返回 随 堂 达 标 演 练 返回 1．下列有关微生物培养基种类及配制原则的叙述，正确的是 A．任何培养基都必须含有碳源、氮源、水、无机盐及特殊的营养物质 B．液体培养基可用于观察菌落，固体培养基可用于工业生产 C．微生物的生长除受营养因素影响外，还受pH、O2、渗透压等的影响 D．淀粉可作为所有微生物的碳源 √ 培养基不一定都含有碳源、氮源，如培养自养型微生物的培养基中不需加入碳源，培养固氮微生物的培养基中不需加入氮源，A错误；一般固体培养基可用于观察菌落，液体培养基可用于工业生产，B错误；某些微生物不能利用淀粉，而只能利用葡萄糖、果糖、蔗糖和麦芽糖等糖类，D错误。 2．防止外来杂菌的入侵，获得纯净的培养物，是研究和应用微生物的前提。下列叙述错误的是 A．实验室里可以用紫外线或化学药剂进行消毒 B．接种环、接种针等金属用具，直接在酒精灯火焰的内焰部位灼烧灭菌 C．在实验室中，切记不可吃东西、喝水，离开实验室时一定要洗手，防止被微生物感染 D．使用后的培养基丢弃前一定要进行灭菌处理，以免污染环境 √ 实验室里可以用紫外线或化学药剂进行消毒，A正确；灼烧灭菌应该在酒精灯火焰的外焰部位灼烧，B错误；为防止被微生物感染，切记不可在实验室中吃东西、喝水，离开实验室时一定要洗手，C正确；使用后的培养基丢弃前一定要进行灭菌处理，以免污染环境，D正确。 3．下图为实验室中酵母菌纯培养的部分操作步骤，下列说法错误的是 A．①②③步骤操作时需要在酒精灯火焰旁进行 B．步骤①中待倒入的培养基冷却后盖上培养皿的皿盖 C．步骤③中，每次划线前后都需对接种环进行灭菌处理 D．划线接种结束后，将图④平板倒置后放入培养箱中培养 √ 由图可知，①是倒平板，②是用 接种环蘸取菌液，③是进行平板 划线，④是培养。①②③步骤操 作时需要在酒精灯火焰旁进行， 以防止污染环境和感染操作者，A正确；倒完平板后应立即盖上培养皿的皿盖，冷却后将平板倒过来放置，B错误；第一次划线前灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养基，除第一次划线外，每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过增加划线次数，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到单菌落，最后一次划线后也需要对接种环进行灭菌处理，C正确；划线接种结束后，将平板倒置后放入培养箱中培养，防止培养皿皿盖上的水珠落入培养基造成污染，D正确。 4．下列有关微生物的分离与培养的叙述，错误的是 A．获得纯净培养物的关键是防止杂菌污染 B．倒置平板可防止培养皿皿盖上的冷凝水落入培养基 C．倒平板时将培养皿的皿盖拿开，以便于将锥形瓶中的培养基倒入培养皿 D．检验培养基是否被杂菌污染的最有效方法是将未接种的培养基放在恒温培养箱中培养 √ 倒平板时用食指和拇指夹住培养皿的皿盖并开启一条缝隙，使其恰好能让锥形瓶瓶口伸入，随后倒入培养基，C错误。 5．(2021·北京卷)人体皮肤表面存在着多种微生物，某同学拟从中分离出葡萄球菌。下述操作不正确的是 A．对配制的培养基进行高压蒸汽灭菌 B．使用无菌棉拭子从皮肤表面取样 C．用取样后的棉拭子在固体培养基上涂布 D．观察菌落的形态和颜色等进行初步判断 √ 培养基通常采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌，A正确；使用无菌棉拭子从皮肤表面取样，防止杂菌污染，B正确；取样后的棉拭子需要进行选择培养→依次等比稀释→再将稀释液涂布到选择培养基上，C错误；菌落形态包括菌落的大小、形状、边缘、光泽、质地、颜色和透明程度等，每一种细菌在一定条件下形成固定的菌落特征，故可通过观察菌落的形态和颜色等进行初步判断，D正确。 6．(创新情境)牛奶是微生物生长的良好培养基。牛奶在饮用前都要经过巴氏消毒，以杀死有害微生物。为检测自制酸奶是否被杂菌污染，先将酸奶进行一定程度的稀释，回答下列问题： (1)牛奶用巴氏消毒的好处是________________________________________ _______。 牛奶的营养成分不被破坏(或营养成分没有 损失) 巴氏消毒的方法是指63～65 ℃消毒30 min或72～76 ℃处理15 s或80～85 ℃处理10～15 s，使用这种方法对生鲜牛奶进行消毒的好处是牛奶的营养成分不被破坏。 (2)取最终的牛奶稀释液在培养基上划线，应选择的工具是下图中的________(填选项)。 A 划线时所用的接种工具是接种环，即图中的A。 (3)理想情况下，培养一段时间后可在培养基表面形成菌落，如果培养基上出现_______________________________的菌落，说明自制酸奶已被杂菌污染。 (形状、大小、颜色、光泽度)不同 如果培养基上出现(形状、大小、颜色、光泽度)不同的菌落，说明自制酸奶已被杂菌污染。 (4)已知酸奶中的有益菌主要是乳酸菌，纯化乳酸菌时划线操作正确的是________(填选项)。 B A图很难得到由单个菌株增殖而来的菌落；B图划线从上次划线末端开始，容易得到由单个菌株增殖而来的菌落；C图划线没有从上次划线的末端开始，接种环上没有菌种，不能得到由单个菌株增殖而来的菌落；D图划线不是从上次划线末端开始，不容易得到由单个菌株增殖而来的菌落。 返回 课　时　测　评 返回 知识点一　培养基的配制 1．(2024·江西南昌高三开学考试)培养基是人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。下列关于培养基的叙述错误的是 A．制作固体培养基时可加入琼脂作为凝固剂 B．培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素 C．培养霉菌时需要将培养基调至碱性 D．对培养基进行灭菌可以采用湿热灭菌 √ 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 向液体培养基中加入琼脂可以制作成固体培养基，A正确；培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素，B正确；培养霉菌时需要将培养基调至酸性环境，C错误；对培养基进行灭菌可以利用高压蒸汽灭菌，属于湿热灭菌，D正确。 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 2．下列关于培养基的叙述，正确的是 A．培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质 B．培养基都含有水、碳源、氮源、无机盐等 C．牛肉膏蛋白胨培养基属于合成培养基，营养全面 D．微生物在培养基上生长，都需要将pH维持在中性 √ 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 培养基是为微生物的生长繁殖提供碳源、氮源、水和无机盐等营养的基质，A正确；微生物培养基的主要营养物质有碳源、氮源、水和无机盐等，有的自养型微生物的碳源是二氧化碳，固氮菌的氮源是氮气，此时培养基中不需要加碳源或氮源，B错误；牛肉膏蛋白胨培养基属于天然培养基，营养全面，C错误；不同微生物生长的最适pH不同，如霉菌一般适合在酸性环境中生长，细菌一般适合在中性或弱碱性环境中生长，D错误。 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 知识点二　无菌技术 3．(2024·河北保定高三期末)在生产、生活和科研实践中，经常通过消毒和灭菌来避免杂菌的污染。下列相关叙述错误的是 A．玻璃器皿和金属用具可利用干热灭菌箱进行干热灭菌 B．巴氏消毒法处理牛奶，能减少牛奶中营养物质的损失 C．无水酒精能加速蛋白质脱水，常用酒精对病毒进行灭菌 D．由于紫外线能破坏DNA结构，病房中常采用紫外线进行消毒 √ 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 玻璃器皿和金属用具常用干热灭菌法灭菌，A正确；巴氏消毒法既能杀死牛奶中绝大多数的微生物，又不破坏牛奶中的营养物质，B正确；70%～75%的酒精能加速蛋白质的脱水，从而达到消毒的目的，C错误；紫外线通过破坏蛋白质和DNA结构来杀死微生物，常用于密闭空间内空气的消毒，D正确。 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 4．(2024·海南高三期末)无菌技术主要包括消毒和灭菌，是微生物学实验成功的关键。下列有关叙述错误的是 A．获得纯净的微生物培养物的关键是防止杂菌污染 B．倒平板和接种操作都需要在酒精灯的火焰附近进行 C．平板划线时，若划线区域有五个，则接种环至少需要灼烧五次 D．与紫外线照射相比，高压蒸汽灭菌防止杂菌污染的效果更好 √ 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 要获得纯净的微生物培养物必须要保证没有杂菌污染，A正确；为了防止杂菌污染，倒平板和接种操作都需要在酒精灯的火焰附近进行，B正确；第一次划线前灼烧一次，每次划线后灼烧一次，因此若划线区域有五个，则接种环至少需要灼烧六次，C错误；与紫外线照射相比，高压蒸汽灭菌法灭菌更彻底，防止杂菌污染的效果更好，D正确。 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 知识点三　酵母菌的纯培养 5．(2024·广东深圳一模)在“酵母菌纯培养”的实验课中，学生进行平板划线的实践操作。下列叙述错误的是 A．开始接种前和划线完毕后都要将接种环进行灼烧 B．棉塞拔出后和塞上前装有培养液的试管口都要通过火焰 C．在酒精灯火焰附近用接种环蘸取一环菌液 D．将皿盖完全打开后用接种环在培养基表面连续划线 √ 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 接种前将接种环放在酒精灯火焰上灼烧灭菌，并需要在酒精灯火焰旁冷却才能接种，划线完毕后要将接种环进行灼烧，以防止污染环境和感染操作者，A正确；接种环蘸取菌液前，需将试管口通过火焰，蘸取菌液后，需将试管口通过火焰并塞上棉塞，通过灼烧防止杂菌污染，B正确；酒精灯火焰旁存在无菌区域，在酒精灯火焰附近用接种环蘸取一环菌液，C正确；划线操作时，为了防止杂菌污染，培养皿盖不能完全打开，操作时需要在酒精灯火焰旁进行，酒精灯火焰旁存在无菌区域，D错误。 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 6．(2024·广东广州一模)超市中酸奶的配料表显示其有乳酸杆菌、嗜热链球菌等乳酸菌。研究小组计划将酸奶中的不同乳酸菌进行分离纯化，下列操作的顺序正确的是 ①高压蒸汽灭菌、倒固体平板　②将酸奶进行依次等比稀释　③准备水、培养皿并配制培养基　④挑取单菌落接种到斜面培养基　⑤用涂布器涂布并进行37 ℃厌氧培养 A．①→②→③→④→⑤ B．③→①→②→⑤→④ C．①→③→②→⑤→④ D．②→③→①→④→⑤ √ 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 微生物的分离纯化的操作顺序为：准备水、培养皿并配制培养基→高压蒸汽灭菌、倒固体平板→将酸奶进行依次等比稀释→用涂布器涂布并进行37 ℃厌氧培养→挑取单菌落接种到斜面培养基。故顺序③→①→②→⑤→④，B符合题意。 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 7．(2024·山东烟台期中)某种个体较大的细菌不能在固体培养基上生长，需用液体培养基来获得纯培养物。在含该菌种的锥形瓶中各取1 mL培养液分别加入若干支盛有9 mL培养液的a组平行试管(记作a1、a2、a3……an)中，在平行试管中各取1 mL依次加入若干支盛有9 mL培养液的b组平行试管中(a1→b1、a2→b2、a3→b3、……an→bn)，重复上述操作(b→c→d→e)，培养一段时间后检测各组试管中细菌的生长情况。下列说法错误的是 A．若e组平行试管中只有e3出现了细菌生长，则该试管中可能获得了纯培养物 B．某稀释倍数下有细菌生长的试管所占比例越高，获得纯培养物的概率就越大 C．若d组各平行试管都有细菌生长而e组都没有，则应取d组～e组之间的稀释倍数继续培养 D．不可用显微镜计数某稀释倍数下各试管中生长的细菌来计算锥形瓶中的细菌数量 √ 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 若e组平行试管中只有e3出现了细菌生长，说明该稀释液中稀释得到了单个细菌，则该试管中可能获得了纯培养物，A正确。某稀释倍数下有细菌生长的试管所占比例越低，获得纯培养物的概率就越大，B错误。若d组各平行试管都有细菌生长(说明稀释倍数较低，获得纯培养物的概率低)，而e组都没有细菌生长(说明稀释倍数过高，各个试管中没有得到细菌)，则应取d组～e组之间的稀释倍数继续培养，C正确。根据题意可知，经过稀释操作后，需培养一段时间后再检测各组试管中细菌的生长情况。若试管中存在细菌，在培养期间细菌会增殖，故不能用显微镜计数某稀释倍数下各试管中生长的细菌来计算锥形瓶中的细菌数量，D正确。 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 8．下列关于“酵母菌的纯培养”实验的叙述，错误的是 A．马铃薯捣烂后的滤液中含有酵母菌生长所需的多种营养成分 B．接种环灭菌时，顶端的环和环后的部分柄均需通过火焰灼烧 C．平板划线时，接种环应在固体培养基表面轻轻地连续划线 D．完成平板划线后，应将平板立刻倒置培养以免污染培养基 √ 完成平板划线后，待菌液被培养基吸收，再将平板倒置培养，D错误。 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 9．灭菌和无菌操作是获得微生物纯培养物的基础，在接种、培养、分离酵母菌时，下列操作正确的是 A．试管高压蒸汽灭菌时加脱脂棉花 B．将接种后的培养皿倒置在恒温培养箱中培养酵母菌 C．为了防止污染，接种环经火焰灼烧灭菌后应趁热快速挑取菌落 D．倒平板时，应将培养皿的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上 √ 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 试管用高压蒸汽灭菌法灭菌前要加棉花堵塞，但不能用脱脂棉花，因脱脂棉易吸水，容易引起杂菌污染，A错误；将接种后的培养皿倒置在恒温培养箱中培养酵母菌，B正确；接种环经火焰灼烧灭菌之后还需要冷却后才能挑取菌落，C错误；倒平板时，用拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，将培养基(10～20 mL)倒入培养皿，立即盖上培养皿的皿盖，D错误。 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 10．如图中4支试管分别代表4种微生物在半固体培养基中的生长状态，其中乙试管代表幽门螺杆菌的生长状态，下表表示2号培养基的成分与含量，下列叙述错误的是 A．甲、丙、丁三个试管中的微生物可能分别是固氮菌、产甲烷菌、酵母菌 B．将幽门螺杆菌转移到2号培养基继续培养，由于培养基营养新鲜而更有利于它的生长 C．幽门螺杆菌的代谢类型可能是微厌氧异养型 D．丁试管中的微生物在2号培养基内不能生长，但与圆褐固氮菌同时接种在2号培养基上可以正常生长 √ 成分 葡萄糖 KH2PO4 MgSO4 NaCl CaSO4 CaCO3 琼脂 蒸馏水 含量 10 g 0.2 g 0.2 g 0.2 g 0.2 g 5 g 3.5 g 1 L 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 根据对空气的依赖程度可以判断：甲是 固氮菌，严格好氧型，在上部氧气充分 的条件下生长；丙是产甲烷菌，严格厌 氧，只会集中在试管底部；丁是酵母菌， 兼性厌氧，在试管中相对均匀分布，A正确。乙是幽门螺杆菌，2号培养基缺少氮源，故幽门螺杆菌无法生长，B错误。根据幽门螺杆菌在试管中的分布可以看出在试管的上部和下部没有菌，说明在大气或绝对厌氧环境下不能生长，说明幽门螺杆菌是微需氧菌，所以代谢类型为微厌氧异养型，C正确。2号培养基中没有氮源，所以酵母菌无法在2号培养基中进行培养，如果和圆褐固氮菌一起培养，则圆褐固氮菌能固定大气中的氮气，提供氮源，可以正常生长，D正确。 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 11．(2024·山东日照模拟)某种除草剂(一种含氮有机物，在水中溶解度低，含一定量该除草剂的培养基不透明)在土壤中不易降解，长期使用会污染土壤。为修复被该除草剂污染的土壤，按下图过程选育能降解该除草剂的细菌。下列叙述正确的是 A．图中培养基在各种成分都溶化后且分装前进行灭菌 B．图中接种方法为平板划线法，该方法可用于细菌计数 C．实验过程中需要将培养皿中培养基调至中性或弱碱性 D．培养基上形成的两种菌落中的细菌所利用的氮源相同 √ 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 培养基在各种成分都溶化后，再分装到锥形瓶后进行灭菌，A错误；平板划线法不能记数，B错误；一般培养细菌时需要将培养基调至中性或弱碱性，C正确；培养基上形成的两种菌落中的细菌所利用的氮源不同，有透明圈的，是能够利用除草剂中的氮源，没有透明圈的，不能利用除草剂中的氮源，D错误。 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 12．(2024·广东东莞高三期末)科研人员将生活在滨海盐渍土的野生大豆的根瘤研磨，将研磨液置于酵母甘露醇肉汤(YMB)培养液中培养，获得耐盐固氮菌株。取普通大豆幼苗若干，甲组用菌株悬液接种，乙组不接种，用150 mmol/L NaCl处理两组幼苗，观察比较两组大豆生长状况。相关叙述错误的是 A．YMB培养基高压蒸汽灭菌完成后需要调节pH B．YMB培养基的作用是筛选和富集耐盐固氮菌 C．本实验目的是研究耐盐固氮菌能否改善盐胁迫下普通大豆的生长状况 D．若甲组大豆生长状况明显优于乙组，则耐盐固氮菌可用于提高盐碱地的利用率 √ 培养基 成分及含量/(g/L) pH 酵母甘露醇肉汤(YMB) 酵母提取物20.0、甘露醇5.0、K2HPO4 5.0，MgSO4 0.5、NaCl 0.186、CaCO3 1.2 6.8～7.2 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 YMB培养基应该先调节好pH再进行高压蒸汽灭菌，A错误。野生大豆的根瘤研磨液置于YMB培养液中培养，获得耐盐固氮菌株，说明该培养基的作用就是筛选和富集耐盐固氮菌，B正确。本实验甲组用菌株悬液接种，乙组不接种，自变量是是否接种耐盐固氮菌株，因变量是大豆植株的生长状况。通过这样的实验设计可以看出该实验的目的是研究耐盐固氮菌能否改善盐胁迫下普通大豆的生长状况，C正确。若甲组大豆生长状况明显优于乙组，说明耐盐固氮菌可以改善盐胁迫下普通大豆的生长状况，那么就可以将该固氮菌用于提高盐碱地的利用率，D正确。 培养基 成分及含量/(g/L) pH 酵母甘露醇肉汤(YMB) 酵母提取物20.0、甘露醇5.0、K2HPO4 5.0，MgSO4 0.5、NaCl 0.186、CaCO3 1.2 6.8～7.2 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 13．(2024·山东淄博高三期末)生物指示剂常用于对医 疗器械高压蒸汽灭菌的质量监测。将某批次的多支生 物指示剂(如图)与医疗器械一并放入压力锅中，待灭 菌完成后，挤破安瓿瓶，让含芽孢的菌片(嗜热脂肪 芽孢杆菌)与培养液接触，培养并检测结果。下列说法 错误的是 A．安瓿瓶内培养液的成分应适于嗜热脂肪芽孢杆菌的生长 B．制备生物指示剂时，安瓿瓶内的培养液需要进行灭菌处理 C．嗜热脂肪芽孢杆菌的热耐受性大于已知污染菌的热耐受性 D．当压力锅中的生物指示剂培养结果为阴性时说明医疗器械灭菌合格 √ 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 生物指示剂待灭菌完成后，挤破安瓿瓶，让嗜热脂肪 芽孢杆菌与培养液接触，培养并检测结果，则安瓿瓶 内培养液的成分应适于嗜热脂肪芽孢杆菌的生长，A 正确。制备生物指示剂时，为了防止污染，安瓿瓶内 的培养液需要进行灭菌处理，B正确。芽孢是细菌的 休眠体，芽孢壁厚，含水量极低，代谢缓慢，抗逆性强，能经受高温紫外线，电离辐射以及多种化学物质灭杀，可以帮助细菌度过不良环境。因此菌片中芽孢的耐热性大于器械上的已知污染菌，C正确。若灭菌与未灭菌的生物指示剂均不出现阳性变化，则说明灭菌前无有活性芽孢，也就无法说明灭菌效果，D错误。 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 14．(10分)回答下列与细菌培养相关的问题。 (1)在细菌培养时，培养基中能同时提供碳源、氮源的成分是________(填“蛋白胨”、“葡萄糖”或“NaNO3”)。通常，制备培养基时要根据所培养细菌的不同来调节培养基的pH，其原因是_________________________ __________。硝化细菌在没有碳源的培养基上_______(填“能够”或“不能”)生长，原因是________________________________________。 蛋白胨 不同细菌生长繁殖所需的最 能够 硝化细菌可以利用空气中的CO2作为碳源 适pH不同 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 蛋白胨中含有碳元素和氮元素，可为细菌生长提供碳源和氮源，葡萄糖不能提供氮源，NaNO3不能提供碳源。不同细菌生长繁殖所需要的最适pH不同，制备培养基时要根据所培养细菌种类的不同来调节pH。硝化细菌是自养生物，可通过化能合成作用利用空气中的CO2合成有机物，所以在没有碳源的培养基上也能生长。 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 (2)用平板培养细菌时一般需要将平板________(填“倒置”或“正置”)。 倒置 用平板培养细菌时，一般将平板倒置，防止皿盖上的水滴滴到培养基中造成污染。 (3)单个细菌在平板上会形成菌落，研究人员通常可根据菌落的形状、大小、颜色等特征来初步区分不同种的微生物，原因是__________________ ___________________________________________。 下，不同种微生物表现出各自稳定的菌落特征 在一定的培养条件下，不同微生物表现出各自稳定的菌落特征，因此研究人员可根据菌落的这些特征初步区分微生物的种类。 在一定的培养条件 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 (4)有些使用后的培养基在丢弃前需要经过________处理，这种处理可以杀死丢弃物中所有的微生物。 灭菌 消毒仅杀死物体表面或内部的部分微生物，灭菌可杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。使用后的培养基在丢弃前要进行灭菌处理，防止其中的微生物污染环境。 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 15．(14分)(2024·广东广州期中)ε-聚赖氨酸(ε-PL)能抑制多种微生物的活性，且人体可将其分解为赖氨酸，是一种优良的天然食品防腐剂。科研人员欲从土壤中分离能分泌ε-PL的微生物，做了如图所示的实验(Ⅰ～Ⅴ表示过程，①～③表示菌落)，已知ε-PL可使亚甲基蓝褪色，形成透明圈。 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 (1)图中第Ⅰ步最常用的接种方法是_______________。若经第Ⅱ步培养后发现菌落铺满了整个培养基、无法分辨出单菌落，则应在第Ⅰ步之前________，再进行接种。 稀释涂布平板法 稀释 据图可知，步骤Ⅰ为接种，结合培养Ⅱ后的平板上菌落呈现均匀分布可知，所用接种方法是稀释涂布平板法；若经第Ⅱ步培养后发现菌落铺满了整个培养基、无法分辨出单菌落，说明密度过大，故应在第I步之前先稀释，再进行接种。 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 (2)第Ⅲ步接种，应挑选_______(填“①”、“②”或“③”)号菌落。一般来说，在相同培养条件下，用不同微生物表现出的稳定的____________________________________来判断微生物种类。 ① 菌落特征(菌落的形状、大小和颜色等) 培养过程中由于ε-PL可使亚甲基蓝褪色，形成透明圈，因此应挑选透明圈直径大的菌落继续培养，故选①。不同微生物在固体培养基表面形成的菌落特征不同，一般来说，在相同培养条件下，用不同微生物表现出的稳定的菌落特征(菌落的形状、大小和颜色等)来判断微生物种类。 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 (3)本实验中用到了4种培养基，其中乙、丁培养基的作用分别是_______________________ ______________________。 选择产ε-PL的菌种、增加 目的菌数量和生产ε-PL 本实验中用到了4种培养基，甲培养基是液体培养基，能提供目的菌所需的全部营养，以保证目的菌的正常生长；乙培养基是固体培养基，用于选择产生ε-PL的菌种，通常需要添加琼脂等凝固剂；丙培养基是固体培养基，用于分离、纯化产生ε-PL的菌种；丁培养基是液体培养基，用于富集培养目的菌，即可对目的菌进行扩大培养，让目的菌增殖、生产ε-PL。 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 (4)为检测上述收集到的ε-PL对不同种类微生物的抑制能力，研究人员将大肠杆菌等菌种分别涂布于某培养基表面，再将浸有不同浓度ε-PL的滤纸圆片置于平板培养基表面，培养后测量清晰区(单位：mm)的宽度，得到了表所示的结果。 ε-PL浓度/mg·L-1微生物 20 30 40 50 60 70 大肠杆菌 ＋ ＋ 7.2 10.8 11.6 13.3 沙门氏菌 ＋ ＋ 6.5 9.2 10.9 13.0 酿酒酵母 7.2 9.1 12.6 13.4 14.8 － 红曲霉 ＋ ＋ ＋ ＋ 5.1 6.3 注：“＋”表示无清晰区，“－”表示未进行实验。 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 ①下列关于上述抑菌实验的叙述，正确的是_______。 A．结果显示ε-PL对酿酒酵母的抑制作用最强 B．ε-PL对四种微生物的抑制效果与浓度正相关 C．用于实验的培养基应该用液体的选择培养基 D．接种需在超净工作台上酒精灯火焰周围进行 ABD ε-PL浓度/mg·L-1微生物 20 30 40 50 60 70 大肠杆菌 ＋ ＋ 7.2 10.8 11.6 13.3 沙门氏菌 ＋ ＋ 6.5 9.2 10.9 13.0 酿酒酵母 7.2 9.1 12.6 13.4 14.8 － 红曲霉 ＋ ＋ ＋ ＋ 5.1 6.3 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 ②该实验在设置ε-PL浓度梯度方面还有不完善之处，请提出2条修改建议：____________________________________________________________ ___________________________。 ε-PL浓度/mg·L-1微生物 20 30 40 50 60 70 大肠杆菌 ＋ ＋ 7.2 10.8 11.6 13.3 沙门氏菌 ＋ ＋ 6.5 9.2 10.9 13.0 酿酒酵母 7.2 9.1 12.6 13.4 14.8 － 红曲霉 ＋ ＋ ＋ ＋ 5.1 6.3 增加空白对照组；增加ε-PL浓度大于70 mg·L-1的实验组；增加ε-PL浓度小于20 mg·L-1的实验组 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 表中结果显示：不同浓度的ε-PL处理下，酿酒酵母清晰区的宽度最大，说明ε-PL对酿酒酵母的抑制作用最强，A正确；表中数据显示随浓度增加，清晰区域宽度越大，即ε- PL对四种微生物的抑制效果与浓度正相关，B正确；用于实验的培养基应该用固体的选择培养基，C错误；为了避免周围环境中微生物的污染，接种应在超净工作台上并在酒精灯火焰附近进行，D正确。故选 ABD。该实验缺乏空白对照组，应增加空白对照组；同时增加ε- PL浓度大于70 mg·L-1的实验组、增加ε- PL浓度小于20 mg·L-1的实验组，这样结果更具有说服力。 ε-PL浓度/mg·L-1微生物 20 30 40 50 60 70 大肠杆菌 ＋ ＋ 7.2 10.8 11.6 13.3 沙门氏菌 ＋ ＋ 6.5 9.2 10.9 13.0 酿酒酵母 7.2 9.1 12.6 13.4 14.8 － 红曲霉 ＋ ＋ ＋ ＋ 5.1 6.3 返回 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 谢 谢 观 看 ！ 第 1 章 　 发 酵 工 程 NH、NO等 $$