63 选择性必修3 第九单元 第47讲 微生物的培养技术及应用-【名师导航】2025年高考生物一轮总复习讲义（江苏专用）

第47讲　微生物的培养技术及应用 　1．阐明在发酵工程中灭菌是获得纯净的微生物培养物的前提。　2．阐明无菌技术是在操作过程中，保持无菌物品与无菌区域不被微生物污染的技术。　3．举例说明通过调整培养基的配方可有目的地培养某种微生物。　4．概述平板划线法和稀释涂布平板法是实验室中进行微生物分离和纯化的常用方法。　5．概述稀释涂布平板法和显微镜计数法是测定微生物数量的常用方法。 考点1　微生物的基本培养技术 一、培养基的配制 1．概念：人们按照微生物对________的不同需求，配制出供其________的营养基质。 2．营养组成 (1)一般都含有__、____、____和无机盐等。 (2)需要满足微生物生长对____、特殊营养物质以及____的需求。 微生物 对培养基的需求 乳酸杆菌 添加______ 霉菌 一般将培养基调至__性 细菌 一般将培养基调至__________性 厌氧微生物 提供____的条件 3.种类 (1)按物理性质分 (2)按用途分 1．(人教选择性必修3 P10“旁栏思考”)培养基中加入氮源的原因是__________ _____________________________________________________________________。 二、无菌技术 1．关键：____________。 2．目的：______________________。 3．常见物品的消毒或灭菌方法 (1)消毒方法及适用对象 (2)灭菌方法及适用对象 2．(人教选择性必修3 P10“相关信息”)利用某些微生物可以净化污水、污泥，原因是______________________________________________________________ _____________________________________________________________________。 4．酵母菌的纯培养 3．(人教选择性必修3 P12“探究·实践”)倒平板操作中，平板冷凝后，要将平板倒置，其主要原因是_________________________________________________ _____________________________________________________________________。 1．平板划线实验成功的关键点 2．平板划线法操作中几次灼烧接种环的目的 1．在培养细菌时，要将培养基调至中性或弱酸性。 (　　) 2．蛋白胨中含有糖、维生素和有机氮等营养物质。 (　　) 3．玻璃器皿、金属用具等可以采用干热灭菌法。 (　　) 4．微生物的纯培养步骤为配制培养基→接种→灭菌→分离和培养等。 (　　) 5．待灭菌后的培养基冷却至50 ℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板。 (　　) 6．酵母菌的纯培养的马铃薯葡萄糖培养基上的葡萄糖也可用蔗糖代替。 (　　) 扩展青霉是腐烂苹果中常见的微生物之一，其次级代谢物棒曲霉素(Pat)是一种具有致突变作用的毒素。为研究腐烂苹果中Pat的分布，研究人员进行了如图所示的实验，其中“病健交界处”为腐烂部位与未腐烂部位的交界处，取样分离的5个部位分别为①号、②号、③号、④号、⑤号。 研究人员测定了病斑直径为1、2、3 cm的苹果中①～⑤号部位的Pat含量，请推测最可能的结果。 _____________________________________________________________________ _____________________________________________________________________ _____________________________________________________________________。 　无菌技术 1．(2023·江苏南京六合高级中学校联考期中)无菌技术是获得纯净微生物培养物的关键。下列相关叙述正确的是(　　) A．实验过程中所有器皿、培养基及生物材料均需进行灭菌处理 B．酒精能使细胞中的蛋白质变性失活，70%的酒精用来灭菌效果最好 C．试管口、瓶口等易被污染的部位，接种时可通过火焰灼烧来灭菌 D．不耐高温的牛奶可使用巴氏消毒法，其优点是能够杀死全部微生物，保留牛奶风味 2．(多选)(2023·辽宁校联考三模)聚乙烯醇(PVA)是存在于化工污水中的一种难以降解的大分子有机物，PVA分解菌能产生PVA酶分解PVA，PVA与碘作用时能产生蓝绿色复合物，当PVA被分解时蓝绿色复合物消失，形成白色透明斑，下表是筛选出能高效分解PVA的细菌的培养基配方。下列叙述不正确的是(　　) 成分 MgSO4 蛋白质 PVA 水 用量 5g 10g 7g 1 000 mL A．制备该培养基时，一般在倒平板后将培养基调至中性或弱碱性 B．该培养基以PVA为唯一碳源，能有效筛选出分解PVA的细菌菌落 C．涂布时，用涂布器蘸取少量菌液并均匀地涂布在培养基表面 D．在确定菌株降解PVA能力时，培养基中PVA浓度为无关变量，白色透明斑的直径为因变量 　微生物的实验室培养 3．(2023·山东等级考)平板接种常用在微生物培养中。下列说法正确的是(　　) A．不含氮源的平板不能用于微生物培养 B．平板涂布时涂布器使用前必须进行消毒 C．接种后未长出菌落的培养基可以直接丢弃 D．利用以尿素为唯一氮源的平板能分离出合成脲酶的微生物 4．(2023·江苏南通统考模拟预测)下列有关纯培养酵母菌实验的叙述，正确的是(　　) A．配制好的培养基转移到锥形瓶中，加棉塞并用皮筋扎紧后，放入高压灭菌锅中灭菌 B．灭菌后的培养基在酒精灯火焰附近倒入培养皿，待冷却到50 ℃左右将培养皿倒置 C．通过接种环在固体培养基表面连续划线，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面 D．划线完成后，待菌液被培养基吸收，将平板放入适宜条件下培养，观察并计数 考点2　微生物的选择培养和计数 一、选择培养基 二、微生物的选择培养 1．土壤取样 铲取土样，将样品装入纸袋中。 2．等比稀释 将10 g土样加入盛有____ mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀。取1 mL上清液加入盛有__________无菌水的试管中，依次________。 3．涂布平板 4．培养观察 (1)待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板倒置，放入__________ ℃的恒温培养箱中培养1～2 d。 (2)在涂布有合适浓度菌液的平板上可以观察到分离的______。 1．(人教选择性必修3 P18“探究·实践”)统计菌落种类和数目时要每隔24 h观察统计一次，直到各类菌落数目稳定。若培养时间不足或培养时间太长，分别会导致的结果是___________________________________________________、 _____________________________________________________________________ _____________________________________________________________________ _____________________________________________________________________ _____________________________________________________________________。 三、微生物的数量测定 1．稀释涂布平板法 (1)计数原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的______，就能推测出样品中大约含有多少活菌。 (2)计数标准：为了保证结果准确，一般选择菌落数为____________的平板进行计数。 (3)计数方法：通常选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得菌落数为____________、适于计数的平板。在__________下，应至少对3个平板进行重复计数，然后求出______。 (4)当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，统计结果一般用______表示。 2．显微镜直接计数法 (1)计数原理：利用特定的__________或____________，在显微镜下观察、计数，然后再计算一定体积的样品中微生物的数量。 (2)优点：是一种常用的、快速直观的测定微生物数量的方法。 2．(人教选择性必修3 P18“相关信息”)血细胞计数板常用于________的酵母菌细胞、霉菌孢子等的计数；细菌计数板常用于________的细菌等的计数。 四、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 选择培养基四种常见制备方法或实例 (1)加入某些特定的物质(前提是培养基具备全部营养成分) (2)改变培养基的营养成分 (3)利用培养基“特定化学成分”分离 (4)通过某些“特殊环境”分离 1．选择培养基可以鉴定某种微生物的种类。 (　　) 2．脲酶催化尿素分解产生NH3。 (　　) 3．对细菌进行计数时，可以用平板划线法。 (　　) 4．筛选能分解尿素的细菌所利用的培养基中，尿素是唯一的氮源。 (　　) 5．刚果红与纤维素形成红色复合物，可以通过是否产生透明圈来分离纤维素分解菌。 (　　) 6．用细菌计数板可对细菌等较小的细胞进行观察和计数。 (　　) 某小组将人工合成的一段DNA转入大肠杆菌，使大肠杆菌产生能降解W的酶(酶E)。为了比较酶E与天然酶降解W能力的差异，该小组拟进行如下实验，请完善相关内容： 在含有一定浓度W的固体培养基上，A处滴加含有酶E的缓冲液，B处滴加含有相同浓度天然酶的缓冲液，该实验的自变量为________________。若要排除缓冲液可能具有的降解作用，在C处滴加______________，三处滴加量相同，一段时间后，测量透明圈的直径。若C处没有出现透明圈，则说明_______ ___________________；若A处的透明圈直径大于B处，说明_________________ _________；若A处透明圈直径小于B处，说明______________________________；若A与B处透明圈直径大小相等，说明__________________________________ _____________________________________________________________________。 　微生物的选择培养 1．(2023·江苏海安高级中学高三月考)漆酶属于木质素降解酶类，在环境修复、农业生产等领域有着广泛用途。下图是分离、纯化和保存漆酶菌株的过程，下列相关叙述不正确的是(　　) A．生活污水中含有大量微生物，是分离产漆酶菌株的首选样品 B．选择培养基中需要加入漆酶的底物，通过菌落特征挑出产漆酶的菌落 C．在涂布平板上长出的菌落，再通过划线进一步纯化 D．斜面培养基中含有大量营养物质，可在适宜温度下临时保存菌株 2．(2023·江苏扬州统考三模)野生型谷氨酸棒状杆菌能在基本培养基上生长，精氨酸依赖型谷氨酸棒状杆菌因缺乏将鸟氨酸转化为精氨酸的酶不能在基本培养基上生长，但可作为鸟氨酸生产的优良菌种。下图为纯化精氨酸依赖型谷氨酸棒状杆菌(目的菌)的部分流程图，下列相关叙述正确的是(　　) A．步骤A诱导菌种基因突变可增加突变株的数量 B．步骤B用平板划线法将菌种接种在②的表面 C．培养基③因缺少精氨酸导致菌落数目比④少 D．目的菌E扩大培养后可用于工业化生产鸟氨酸 　微生物的分离和计数 3．(2023·辽宁选择性考试)细菌气溶胶是由悬浮于大气或附着于颗粒物表面的细菌形成的。利用空气微生物采样器对某市人员密集型公共场所采样并检测细菌气溶胶的浓度(菌落数/m3)。下列叙述错误的是(　　) A．采样前需对空气微生物采样器进行无菌处理 B．细菌气溶胶样品恒温培养时需将平板倒置 C．同一稀释度下至少对3个平板计数并取平均值 D．稀释涂布平板法检测的细菌气溶胶浓度比实际值高 4．(多选)(2023·江苏南通高三统考阶段练习)如图为“土壤中分解尿素的细菌的分离和计数”实验中样品稀释示意图。据图分析正确的是(　　) A．某一稀释度下至少涂3个平板，该实验方法统计得到的结果常会比实际活菌数目少 B．3号试管中的样品溶液稀释倍数为104倍 C．5号试管的结果表明每克土壤中的菌株数为1.7×108个 D．该实验需设置牛肉膏蛋白胨培养基作对照，用以判断选择培养基是否有选择作用 1．核心概念 (1)培养基：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。 (2)消毒：是指使用较为温和的物理、化学或生物等方法杀死物体表面或内部一部分微生物。 (3)灭菌：是指使用强烈的理化方法杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。 (4)菌落：分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体。 (5)选择培养基：在微生物学中，是指允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。 2．结论语句 (1)土壤中的某些细菌能分解尿素，是因为它们能合成脲酶，脲酶催化尿素分解产生NH3，NH3可作为细菌生长的氮源。 (2)当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，统计的菌落数往往比活菌的实际数目少。 (3)在同一稀释度下，应至少对3个平板进行重复计数，然后求出平均值。 1．(2023·江苏选择性考试)下列关于细菌和酵母菌实验的叙述正确的是(　　) A．通常酵母菌培养基比细菌培养基有更高的碳氮比 B．通常细菌的生长速度比酵母菌快，菌落比酵母菌落大 C．通常细菌培养基用高压蒸汽灭菌法灭菌，酵母菌培养基用过滤除菌法除菌 D．血细胞计数板既可用于酵母菌的数量测定，也可用于细菌的数量测定 2．(2022·江苏选择性考试)下列是某同学分离高产脲酶菌的实验设计，不合理的是(　　) A．选择农田或公园土壤作为样品分离目的菌株 B．在选择培养基中需添加尿素作为唯一氮源 C．适当稀释样品是为了在平板上形成单菌落 D．可分解酚红指示剂使其褪色的菌株是产脲酶菌 3．(多选)(2021·江苏选择性考试)为提高一株石油降解菌的净化能力，将菌涂布于石油为唯一碳源的固体培养基上，以致死率为90%的辐照剂量诱变处理，下列叙述不合理的是(　　) A．将培养基分装于培养皿中后灭菌，可降低培养基污染的概率 B．涂布用的菌浓度应控制在30～300个/mL C．需通过预实验考察辐射时间对存活率的影响，以确定最佳诱变时间 D．挑取培养基上长出的较大单菌落，纯化后进行降解效率分析 4．(2020·江苏高考)产脂肪酶酵母可用于含油废水处理。为筛选产脂肪酶酵母菌株，科研人员开展了相关研究。请回答下列问题： (1)常规微生物实验中，下列物品及其灭菌方法错误的是________(填编号)。 编号 ① ② ③ ④ 物品 培养基 接种环 培养皿 涂布器 灭菌方法 高压蒸汽 火焰灼烧 干热 臭氧 (2)称取1.0 g某土壤样品，转入99 mL无菌水中，制备成菌悬液，经________后，获得细胞密度不同的菌悬液。分别取0.1 mL菌悬液涂布在固体培养基上，其中10倍稀释的菌悬液培养后平均长出了46个酵母菌落，则该样本中每克土壤约含酵母菌________个。 (3)为了进一步提高酵母菌产酶能力，对分离所得的菌株，采用射线辐照进行________育种。将辐照处理后的酵母菌涂布在以________为唯一碳源的固体培养基上，培养一段时间后，按照菌落直径大小进行初筛，选择直径________的菌落，纯化后获得A、B两突变菌株。 (4)在处理含油废水的同时，可获得单细胞蛋白，实现污染物资源化。为评价A、B两菌株的相关性能，进行了培养研究，结果如图。据图分析，应选择菌株________进行后续相关研究，理由是____________________________________ _____________________________________________________________________。 【研读教材】 自主诊断 考点1　一、1．营养物质　生长繁殖　2．(1)水　碳源　氮源　(2)pH　O2　维生素　酸　中性或弱碱　无氧 二、1．防止杂菌污染　2．获得纯净的微生物培养物　4．高压蒸汽灭菌　干热灭菌　平板划线法　倒置　未接种　28 考点2　一、抑制或阻止　NH3　尿素 二、2．90　9 mL　等比稀释　3．0.1　酒精　冷却　4．(1)30～37　(2)单菌落 三、1．(1)菌落数　(2)30～300　(3)30～300　同一稀释度　平均值　(4)菌落数　2．(1)细菌计数板　血细胞计数板 四、脲酶　尿素　中性　菌落数目稳定时 2 / 15 学科网（北京）股份有限公司 第47讲　微生物的培养技术及应用 考点1 研读教材·夯实必备知识 教材隐性知识 1．提示：培养基中的氮元素是微生物合成蛋白质、核酸等物质所必需的 2．提示：有的微生物能够寄生于多种细菌体内，使细菌裂解 3．提示：防止冷凝后形成的水珠滴落在培养基上(污染培养基和破坏菌落)，防止培养基水分过快蒸发 澄清概念 1．×　提示：在培养细菌时，一般需要将培养基调至中性或弱碱性。 2．√　3．√ 4．×　提示：微生物的纯培养步骤为配制培养基→灭菌→接种→分离和培养等。 5．√　6．√ 思考探究·达成学科素养 提示：病斑越大，相同部位的Pat含量越高；相同病斑情况下，离病斑越远的部位，Pat含量越低 考向演练·提升关键能力 1．C　2．ABC　3．D　4．C 考点2 研读教材·夯实必备知识 教材隐性知识 1．提示：遗漏菌落的种类和数目　菌落粘连影响计数、培养基表面干燥脱水、微生物衰败，菌落特征不易观察 2．提示：相对较大　相对较小 澄清概念 1．×　提示：选择培养基可以筛选分离出某种微生物。 2．√　 3．×　提示：对细菌计数可以采用稀释涂布平板法或显微镜直接计数法。 4．√　5．√　6．√ 思考探究·达成学科素养 提示：酶的种类　缓冲液　缓冲液不能降解W　酶E降解W的能力大于天然酶　酶E降解W的能力小于天然酶　酶E降解W的能力与天然酶相当 考向演练·提升关键能力 1．A　2．C　3．D　4．ABD 真题感悟·明确考向 1．A　2．D　3．AB 4．(1)④　(2)梯度稀释　4.6×105(或460 000)　(3)诱变　脂肪(或油脂)　较大　(4)B　该菌株增殖速度快，单细胞蛋白产量高；降解脂肪能力强，净化效果好 $$ 课时分层作业(四十七) 1．A　[用稀释涂布平板法进行微生物计数时，由于两个或多个细菌常形成一个菌落，因此结果往往比实际值低，A正确；培养基配制过程是计算、称量、溶化、定容、调pH、灭菌、倒平板，B错误；高压蒸汽灭菌后，待压力表指针降至“0”点，温度下降后，打开排气阀，开盖取物，C错误；获得纯种微生物后，利用平板划线法接种至斜面培养基上，进行低温保存，D错误。故选A。] 2．D　[分离并获得该突变株的培养过程包括配制培养基、灭菌、接种、分离和培养等步骤，A错误；分析题意，本实验目的是筛选产β苯乙醇的酵母菌突变株，培养基的主要能源物质应是碳源和氮源，B错误；培养基的灭菌方法是高压蒸汽灭菌(湿热灭菌)，接种工具如接种环等应采用灼烧灭菌，C错误；酵母菌培养时应在有氧条件下进行，以使其大量繁殖，故培养阶段需保证培养液适宜的pH和充足的溶氧量，D正确。故选D。] 3．B　[据图可知，图中的微生物接种方法是平板划线法，A错误；培养基中的尿素被分解后呈碱性，可使酚红指示剂变为红色，B正确；该接种方法中随着划线次数增加，菌落数目减少，该实验Ⅲ区有单菌落，可以达到菌种纯化目的，C错误；可用湿热灭菌法对盛有培养基的培养皿和试管等进行灭菌，D错误。故选B。] 4．B　[利用稀释涂布平板法准确估计菌落数目的关键是有恰当的稀释度，涂布平板后菌落数要在30～300之间，A正确；若要判断选择培养基是否起到了选择作用，需要设置接种的牛肉膏蛋白胨培养基作为对照，当选择培养基上的菌落数少于牛肉膏蛋白胨培养基时，说明起到了选择作用，B错误；实验每隔24 h统计一次菌落数目，并以菌落数目稳定时的记录作为结果，C正确；超净工作台和酒精灯火焰旁都有无菌区域，操作时可以防止杂菌污染，D正确。故选B。] 5．D　[平板倒置，既可防止皿盖上凝结的水滴滴入培养基造成污染，又可避免培养基表面的水分过快挥发，A正确。将未接种的平板培养并观察有无菌落，若未接种的培养基表面有菌落生长，则培养基灭菌不合格，若未接种的培养基表面无菌落生长，则培养基灭菌合格，B正确。同一稀释度下至少要涂布三个平板，进行重复实验，并且要培养到菌落数稳定时计数，菌落数在30～300之间，C正确。尿素分解菌可以产生脲酶，脲酶可以催化尿素分解为NH3，NH3呈碱性遇酚红指示剂变为红色，故尿素分解菌鉴定时，在培养基中加入酚红指示剂，指示剂变红则能初步鉴定；若对纤维素分解菌鉴定时，需在培养基中加入刚果红试剂，D错误。故选D。] 6．D　[对培养基进行灭菌后需冷却再倒平板，倒平板时应在酒精灯旁进行，可以尽可能减少培养基污染，A正确；接种后的培养基需要倒置放置，这样可以防止培养基中水分过快蒸发，同时防止冷凝形成的水珠倒流冲散菌落，B正确；图3所示为涂布平板法进行接种，纸片上的抗生素浓度越大，所形成的抑菌圈就越大，故Ⅳ号纸片上的抗生素浓度最高，C正确；Ⅳ的抑菌圈中出现了少数几个菌落说明这几个菌落出现了抗药性，抗药性的获得是由于这些细菌发生了基因突变，抗生素只是将具有抗药性突变的细菌从中筛选出来，D错误。故选D。] 7．A　[污水中含多种有机污染物，可为大肠杆菌提供碳源等营养，选择污水是因为污水中含有大量的大肠杆菌，能从中分离获得大肠杆菌噬菌体，A正确；大肠杆菌噬菌体是病毒，只能寄生在活的大肠杆菌细胞中，不能利用培养基中的蛋白质等成分增殖，B错误；检测滤液中是否有大肠杆菌噬菌体，要以噬菌斑为观察指标，噬菌斑在固体培养基上形成，所以应该用含有大肠杆菌的固体培养基培养噬菌体，C错误；步骤②的培养结果菌落分布均匀，所以用的接种方法是稀释涂布平板法，D错误。故选A。] 8．D　[根据图示和题意可知，步骤③稀释涂布平板法接种到以A为唯一碳源和氮源的选择培养基上，乙的组分为无机盐、水、A和B，在乙培养基上要得到单菌落，则其中B为琼脂，为了提高准确度，实验需设平行重复实验，且需要另外设置空白对照，检测培养基配制是否合格，A错误。实验时，从淤泥中分离得到能高效降解A的细菌菌株，则图步骤①为淤泥取样进行稀释，可以取淤泥加无菌水制成菌悬液，淤泥中有菌种，因此不能进行灭菌处理；盛有培养基的摇瓶通常采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌，B错误。识图分析可知，步骤③稀释涂布平板法接种到以A为唯一碳源和氮源的选择培养基上，因此步骤③的接种工具是涂布器，且大小不同的菌落是分解菌分解能力不同导致的，C错误。利用稀释涂布平板法对细菌进行计数，要保证每个平板上长出的菌落数不超过150，假设稀释倍数为a，在每个平板上涂布0.1 mL稀释后的菌液，则有150×a÷0.1＝1.5×107，则稀释倍数a＝104，D正确。故选D。] 9．BCD　[鲜牛奶用巴氏消毒法，使用后的液体培养基需要用高压蒸汽灭菌法灭菌后再丢弃，防止对环境造成污染，A错误；NaCl属于无机盐，无机盐在培养基中具有调节和维持微生物细胞的渗透压的作用，因此肉汤培养基加入一定量NaCl的目的是维持微生物细胞的渗透压，B正确；振荡培养的目的是使微生物与营养物质充分接触，增加O2浓度，更有利于微生物生长，C正确；根据图示可知，利用接种环接种，故接种方法是平板划线法，金黄色葡萄球菌可破坏菌落周围的红细胞，产生透明的溶血圈，D正确。故选BCD。] 10．(1)稀释涂布平板　选择　(2)耐高温的DNA聚合酶　引物能与16S rRNA基因特异性结合(或引物是根据16S rRNA基因一段已知序列设计合成的)　琼脂糖凝胶电泳　(3)①A、C　褪色(透明)圈直径　②不会影响致病菌的生长，从而不会胁迫致病菌使其耐药性增强(或不易对致病菌形成选择压力而导致其耐药性增强) 3 / 3 学科网（北京）股份有限公司 $$ 课时分层作业(四十七)　微生物的培养技术及应用 1．(2023·江苏南京统考一模)人们在研究、利用微生物时，需用无菌技术培养获取纯种微生物，并对其进行计数或保存。下列有关叙述正确的是(　　) A．用稀释涂布平板法进行微生物计数时，结果往往比实际值低 B．培养基配制过程是计算、称量、溶化、调pH、定容、灭菌、倒平板 C．高压蒸汽灭菌后，打开排气阀，待压力表指针降至“0”后开盖取物 D．获得纯种微生物后，利用涂布平板法接种至斜面培养基上，进行低温保存 2．(2023·江苏无锡高三锡山高级中学校考期末)β苯乙醇是赋予白酒特征风味的物质。从某酒厂采集并筛选到一株产β苯乙醇的酵母菌突变株，然后将该突变株扩大培养后用于白酒生产。下列叙述正确的是(　　) A．该培养过程包括配制培养基、灭菌、分离和培养四个步骤 B．配制培养基时应加入β苯乙醇作为主要能源物质 C．所用培养基及接种工具分别采用湿热灭菌和干热灭菌 D．培养阶段需保证培养液适宜的pH和充足的溶氧量 3．(2023·江苏南京高三统考阶段练习)为纯化菌种，在鉴别培养基上接种尿素分解细菌，培养结果如图所示。下列叙述正确的是(　　) A．图示采用的接种方法为平板划线法和稀释涂布平板法 B．培养基中的尿素被分解后，可使酚红指示剂变为红色 C．该实验结果因单菌落太多，不能达到菌种纯化的目的 D．可用干热灭菌法对盛有培养基的培养皿和试管等进行灭菌 4．(2023·山东德州高二校考阶段练习)下列关于土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验操作的叙述，错误的是(　　) A．利用稀释涂布平板法准确估计菌落数目的关键是有恰当的稀释度 B．若要判断选择培养基是否起到了选择作用需要设置未接种的牛肉膏蛋白胨培养基作为对照 C．该实验每隔24 h统计一次菌落数目，并以菌落数目稳定时的记录作为结果 D．在超净工作台上和酒精灯火焰旁进行操作，是为了防止杂菌污染 5．(2023·江苏南京统考二模)下列有关微生物的培养与应用的叙述，错误的是(　　) A．湿热灭菌后倒的平板和接种后的平板均需倒置 B．将未接种的平板培养并观察有无菌落，以判断培养基灭菌是否合格 C．同一稀释度下至少要涂布三个平板，待菌落数稳定后计数 D．纤维素分解菌鉴定时，在培养基中加入酚红指示剂，若指示剂变红则能初步鉴定 6．(2023·河北邢台高三校联考开学考试)纸片扩散法是药敏试验中一种常用的方法。取少量大肠杆菌的培养液，均匀涂在培养皿内的培养基上，再放上4片含有链霉素(抗生素的一种)的圆形滤纸，然后在无菌适宜条件培养12～16 h，滤纸片周围出现抑制大肠杆菌生长的环圈(简称抑菌圈，见下图)。下列相关叙述错误的是(　　) A．图1中的培养基需冷却至50 ℃左右时再倒平板，该操作需要在酒精灯旁完成 B．图2中所示培养基的放置方式，能防止水分过快蒸发和冷凝水珠冲散菌落 C．图3培养皿上大肠杆菌的接种方式为涂布平板法，Ⅳ号纸片上抗生素浓度最高 D．图3所示的抑菌圈内出现大肠杆菌菌落的原因是链霉素使其发生了基因突变 7．(2022·江苏宿迁高三校考期中)大肠杆菌的体积大小通常在0.5～3 μm3，下图为分离培养获得大肠杆菌噬菌体的实验操作过程。相关叙述正确的是(　　) A．使用污水是因为其中含有大量大肠杆菌，能很容易地分离到大肠杆菌噬菌体 B．步骤①的目的是让大肠杆菌噬菌体利用培养基中的蛋白质等成分迅速增殖 C．检测滤液中是否有大肠杆菌噬菌体，应该用含有大肠杆菌的液体培养基 D．步骤②表示平板划线法或稀释涂布平板法 8．(2022·江苏南京高三校联考阶段练习)某种物质A(一种含有C、H、N的有机物)难以降解，会对环境造成污染，只有某些细菌能降解A。研究人员按照如图所示流程从淤泥中分离得到能高效降解A的细菌菌株。实验过程中需要甲、乙两种培养基，甲的组分为无机盐、水和A，乙的组分为无机盐、水、A和B。下列表述正确的是(　　) A．乙组分的B物质为琼脂，为了提高准确度，实验需设平行重复实验，无需另外设置空白对照 B．实验时，淤泥及盛有培养基的摇瓶通常采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌 C．步骤③的接种工具是接种环，菌落数目稳定时，大小不同的菌落形成的起始时间一般不同 D．实验中初步估测摇瓶M中细菌细胞数为1.5×107个/mL，若要在每个平板上涂布0.1 mL稀释后的菌液，且保证每个平板上长出的菌落数不超过150个，则至少应将摇瓶M中的菌液稀释104倍 9．(多选)(2023·江苏如皋中学开学考试)鲜牛奶容易被金黄色葡萄球菌污染，该菌高度酎盐，可引起人类肺炎等疾病。在血平板(培养基添加适量血液)上生长时，可破坏菌落周围的红细胞，使其褪色，下图为检测鲜牛奶被金黄色葡萄球菌污染的操作流程，下列叙述正确的是(　　) A．使用后的液体培养基可以直接丢弃 B．肉汤培养基加入一定量NaCl的目的是维持微生物细胞的渗透压 C．振荡培养可以使微生物与营养物质充分接触，更有利于微生物的生长 D．血平板上的接种方法是平板划线法，血平板上出现周围透明的溶血圈 10．(2023·江苏南通高三统考阶段练习)中国科学家采集了某深海海域的沉积物样品，分离、鉴定得到其中的深海放线菌，以期获得具有前景的抗生素替代品。据此回答下列问题： (1)研究人员欲筛选出深海放线菌进行研究，取1 g沉积物样品接种在液体培养基中摇瓶培养，稀释后取菌液通过____________________________法接种到高氏一号(加数滴质量分数为10%的酚)培养基表面以获得单菌落。培养基中的酚能抑制细菌等杂菌的生长，而放线菌能在该培养基上正常生长，这种培养基属于________(填“选择”或“鉴别”)培养基。 (2)通过PCR技术扩增分离得到的放线菌的16S rRNA基因可进行菌株的种属鉴定。PCR技术中起关键作用的酶是____________________。该技术能在放线菌总的DNA中专一性扩增出16S rRNA基因的原因是_________________________ _____________________________________________________________________。 PCR产物一般可通过________________鉴定。 (3)紫色杆菌的紫色菌素(一种毒素，致死率高)能使培养基呈紫色，已知呋喃酮C30能明显抑制紫色菌素的产生。研究人员筛选出了放线菌菌株A，用甲醇将菌株A发酵产物提取后配制成溶液，对提取物能否抑制紫色菌素的产生进行了研究。 ①将紫色杆菌菌液均匀地涂布在培养基表面，待菌液干燥后，将无菌圆纸片贴于培养基表面，按图1所示在滤纸片上滴加溶液。该实验以________组为对照，通过比较A、B、C三组的________可知提取物是否能抑制紫色菌素的产生。 ②实验表明甲醇溶液不会影响紫色杆菌的繁殖，培养过程中对A、B、C三组紫色杆菌的数量进行监测，结果如图2所示，据图推测，深海放线菌A的提取物作为抗生素替代品的优点是_____________________________________________ _____________________________________________________________________。 2 / 5 学科网（北京）股份有限公司 $$