内容正文:
第2课时 微生物的培养技术及应用
【课标要求】1.获得纯净的微生物培养物是发酵工程的基础。2.阐明在发酵工程中灭菌是获得纯净的微生物培养物的基础。3.阐明无菌技术是在操作过程中,保持无菌物品和无菌区域不被微生物污染的技术。4.举例说明通过调整培养基的配方可有目的地培养某种微生物。5.概述平板划线法和稀释涂布平板法是实验室中进行微生物分离和纯化的常用方法。6.概述稀释涂布平板法和显微镜计数法是测定微生物数量的常用方法。
考点1 微生物的培养技术及应用
整合必备知识
1.培养基的配制
(1)培养基的概念、用途和类型
①概念:人们按照微生物对营养物质的不同需求,配制出的供其生长繁殖的营养基质。
②用途:用以培养、分离、鉴定、保存微生物或积累其代谢物。
③种类:按物理性质分
(2)培养基的配方
①主要营养物质:水、碳源、氮源、无机盐。
②其他条件:pH、特殊营养物质和氧气。如下表:
微生物
乳酸杆菌
霉菌
细菌
厌氧微生物
特殊需求
添加维生素
pH调至酸性
pH调至中性或弱碱性
无氧
2.无菌技术
(1)目的:获得纯净的微生物培养物。
(2)关键:防止杂菌污染。
(3)消毒与灭菌的比较
项目
消毒
灭菌
作用强度
较为温和的物理、化学或生物等方法
强烈的理化方法
作用程度
杀死物体表面或内部一部分微生物
杀死物体内外的所有微生物
芽孢和孢子
一般不能杀灭
能杀灭
(4)注意事项
①实验操作时,应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品接触。
②为避免周围环境中微生物的污染,实验操作应在超净工作台上并在酒精灯火焰附近进行。
[深挖教材]
(选择性必修3 P10“旁栏思考”)
(1)为什么培养基需要氮源?
提示:培养基中的氮元素是微生物合成蛋白质、核酸等物质所必需的。
(2)无菌技术除用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外,还有什么作用?
提示:无菌技术还能有效避免操作者被微生物感染。
【深挖教材·选择性必修3 P11“资料卡”】
常见的消毒和灭菌方法
(3)消毒方法及适用对象
①煮沸消毒法:日常食品、罐装食品等。
②巴氏消毒法:牛奶等不耐高温的液体等。
③化学药物消毒法:用酒精擦拭操作者双手、动植物表面,用氯气消毒水源等。
④紫外线消毒法:接种室、接种箱或超净工作台等。
(4)灭菌方法及适用对象
①灼烧灭菌:接种工具,接种过程中的试管口、瓶口等。
②干热灭菌:玻璃器皿、金属用具等。
③高压蒸汽灭菌(湿热灭菌):培养基等。
3.微生物的纯培养
(1)概念辨析
(2)酵母菌纯培养的操作步骤
[深化理解]
倒平板时的注意事项
①琼脂是一种多糖,在98 ℃以上熔化,在44 ℃以下凝固。倒平板时高于50 ℃则会烫手,低于50 ℃时若不及时操作,琼脂会凝固。
②可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶,感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时,就可以进行倒平板了。
(3)平板划线法操作步骤
[深挖教材]
(5)(选择性必修3 P13“探究·实践”)在未接种的培养基表面是否有菌落生长?如果有,说明了什么?
提示:在未接种的培养基表面应该没有菌落生长,如果有,说明培养基被杂菌污染。
【深挖教材·选择性必修3 P14“拓展应用”】
(6)某生物兴趣小组将从葡萄皮上成功分离来的野生酵母菌分别接种于3个盛有等量同种液体培养基的锥形瓶中,并放置在摇床上培养,摇床转速分别为210 r/min、230 r/min和250 r/min。培养时间与酵母菌种群密度的关系如图所示。请分析并回答下列问题。
①摇床转速不同,意味着培养条件有什么不同?
提示:意味着培养液中O2含量不同。
②从图中数据你可以得出什么结论?其原因是什么?
提示:培养液中O2含量越高,酵母菌种群密度越大。
③为什么培养8 h后,其中2个锥形瓶中酵母菌的种群密度基本达到稳定?
提示:这时候已经达到了环境容纳量。
【易错辨析】 ////////////////////////////////
(1)倒平板时,应将打开的皿盖放到一边,以免培养基溅到皿盖上。(×)
提示:倒平板时,用拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙,将培养基倒入培养皿,立即盖上皿盖。
(2)为了防止污染,接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落。(×)
提示:接种环经火焰灭菌后应先冷却,防止杀死菌种。
(3)培养霉菌时需将培养基的pH调至中性或弱碱性。(×)
提示:培养霉菌时需将培养基的pH调至酸性。
提升关键能力
下图是平板划线操作的示意图,据图回答下列问题:
(1)用图中字母和箭头表示平板划线操作的正确步骤:d→b→f→a→e→c→h→g。
(2)在划线操作结束时,仍然需要灼烧接种环吗?为什么?
提示:需要。划线结束后灼烧接种环,能及时杀死接种环上残留的菌种,避免污染环境和感染操作者。
(3)在第二次以及其后的划线操作时,为什么总是从上一次划线的末端开始划线?
提示:划线后,线条末端细菌的数目比线条起始处要少,每次从上一次划线的末端开始,能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少,最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。
(4)接种结束后,为什么要将一个未接种的培养基和一个已接种的培养基放在一起培养,未接种的培养基表面如果有菌落生长,说明了什么?
提示:培养未接种的培养基的作用是对照,未接种的培养基经过培养后无菌落生长,说明培养基的制备是成功的;若有菌落形成,说明培养基灭菌不彻底,或培养基被污染了,需要重新制备。
落实素养题组
1.(2023·华中师大附中模拟)某研究小组的两位同学为研究手机表面和马桶按钮上的微生物,分别取样并进行了微生物培养实验,其过程和结果如下图所示。下列相关说法正确的是( )
A.为了防止杂菌污染,在实验前需要对培养皿、试管和菌悬液等进行灭菌
B.若甲同学还分别检测了两物体表面的微生物数量,则检测值可能比实际值偏小
C.图中的特殊处理是指将无菌棉插入到蒸馏水中,多次换水并振荡
D.造成两甲、乙实验结果不同的原因可能是培养基不同或接种方法不同
解析:选B。在实验前不能对菌悬液进行灭菌,A错误;甲和乙同学用的都是稀释涂布平板法,当两个或多个菌落长在一起时,只能计为一个菌落,检测值可能比实际值偏小,B正确;制菌悬液时要用无菌水,C错误;两实验结果截然不同,可能是取样部位或取样时间不同,D错误。
2.下图为微生物的实验室培养的有关操作,下列相关叙述错误的是( )
A.步骤①中,需将接种工具灼烧至变红,以杀灭杂菌
B.步骤②中,将接种工具冷却时不宜距酒精灯火焰太远
C.图中接种方法的目的是使菌种逐渐稀释,经培养后获得单个菌落
D.接种后应将培养皿倒置培养,培养后可以根据结果进行微生物计数
解析:选D。步骤①中,接种前灼烧接种环至变红,目的是杀灭接种环上可能引起污染的微生物,A正确;步骤②中,将接种工具冷却时不宜距酒精灯火焰太远,防止受到杂菌污染,B正确;图中所示的接种方法是平板划线法,目的是使接种的菌种逐渐稀释,经培养后获得由单个细菌繁殖而来的菌落,C正确;图示的平板划线法不能用于微生物的计数,D错误。
3.白地霉侵染是导致柑橘酸腐病的主要原因,实验证明桔梅奇酵母通过分泌普切明酸对白地霉具有生物防治能力。已知铁是真菌生长的必需元素,是胞内重要酶活性中心的组成部分。普切明酸是桔梅奇酵母产生的一种水溶性铁螯合剂,能快速在培养基中扩散并与其中的Fe3+形成稳定红色复合物。研究配制的含有不同浓度FeCl3的培养基如下表所示。实验结果为随FeCl3浓度增大,抑菌圈红色加深但变窄,如下图所示。相关叙述正确的是( )
成分
MgSO4
NaH2PO4
蛋白胨
FeCl3溶液
水
琼脂
用量
5 g
7 g
15 g
500 mL
7 g
20 g
A.蛋白胨可以提供碳源、氮源、维生素,琼脂不是营养物质
B.白地霉采用了平板划线法,桔梅奇酵母采用了涂布平板法
C.结果表明,FeCl3浓度增大,普切明酸与Fe3+结合的数量减少
D.结果表明,FeCl3不能降低桔梅奇酵母对白地霉的防治效果
解析:选A。蛋白胨可以提供碳源、氮源、维生素,琼脂是凝固剂的一种,并不是营养物质,在培养液中加入琼脂可以使液体培养基成为琼脂固体培养基,A正确;白地霉的接种采用了涂布平板法,桔梅奇酵母应使用了平板划线法,B错误;普切明酸与Fe3+形成红色复合物,随培养基中FeCl3浓度的增加,抑菌圈红色加深但变窄,说明普切明酸与Fe3+结合的数量增多,对白地霉的生物防治能力下降,故FeCl3能降低桔梅奇酵母对白地霉的防治效果,C、D错误。
考点2 微生物的选择培养与计数
整合必备知识
1.区分选择培养基与鉴别培养基
种类
特点
用途
举例
选择
培养基
允许特定种类的微生物生长,同时抑制或阻止其他种类微生物生长
从众多微生物中分离所需的微生物
加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌
鉴别
培养基
根据微生物的代谢特点在培养基中加入某种指示剂或化学药品,进而产生特定的颜色或其他变化
鉴别不同种类的微生物
用伊红—亚甲蓝培养基鉴别大肠杆菌
[提醒]
常见选择培养基举例:
(1)缺少氮源的培养基可以筛选能利用大气中N2的微生物。
(2)含青霉素的培养基可淘汰细菌,筛选出真菌。
(3)无有机碳源的培养基可筛选出自养微生物。
[深挖教材]
(1)(选择性必修3 P16“思考·讨论”)如果让你配制一种培养基,将土壤稀释液中能分解尿素的细菌分离出来,培养基的配方该如何设计?
提示:设计一种选择培养基,用尿素作为唯一氮源,可以将分解尿素的细菌分离出来。
2.微生物的选择培养和数量测定
(1)稀释涂布平板法步骤
①系列稀释操作:该操作常用在将细胞接种到培养基之前,通过液体稀释的方法分散细胞,随着稀释程度的增大,单位体积中的微生物细胞数量减少,细胞得以分散。
操作步骤:
②涂布平板操作步骤
(2)微生物的数量测定方法
①显微镜直接计数法
②间接计数法——活菌计数法(即稀释涂布平板法)
原理:当样品的稀释度足够高时,培养基表面生长的一个单菌落,来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数,就能推测出样品中大约含有多少活菌。
根据图示回答以下问题:
a.为了保证结果准确,一般选择菌落数为30~300的平板进行计数。
b.为什么用此种方法统计的菌落数目往往比活菌的实际数目少?
提示:因为当两个或多个细胞连在一起时,平板上观察到的只是一个菌落。
c.某同学在稀释倍数为106的培养基中测得平板上菌落数的平均值为234个(涂布平板时所用稀释液的体积为0.1 mL),那么稀释倍数为106的试管中细菌的浓度是2.34×103个/mL,稀释倍数为10的锥形瓶中细菌的浓度为2.34×108个/mL,所以每克样品中的细菌数是2.34×109个。
3.土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
(1)实验原理
①土壤中的细菌之所以能分解尿素,是因为它们能合成脲酶;
②配制以尿素为唯一氮源的培养基,能够在该培养基中生长的细菌就是能分解尿素的细菌。
(2)实验流程
①土壤取样
从酸碱度接近中性的潮湿土壤中,铲去表层土,取距地表3~8 cm的土壤层。
②样品的稀释
通常选用一定稀释范围的样品液进行培养,以保证获得菌落数为30~300的平板进行计数。
③微生物的培养与观察
a.接种:用稀释涂布平板法接种;
b.培养条件:30~37 ℃培养1~2 d;
c.观察:根据菌落的特征区分微生物;
d.计数:每隔24 h统计一次菌落数目,选取菌落数目稳定时的记录作为结果。
④计算
计算单位体积中的菌体数。
(3)实验结果分析与评价
【深挖教材·选择性必修3 P19“探究·实践”】
(2)结合对照组,分析培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是否筛选出一些菌落?
提示:如果没有接种的培养基上没有菌落生长,说明培养基没有被杂菌污染。如果接种后的完全培养基上的菌落数明显多于选择培养基上的菌落数,说明选择培养基筛选出了一些尿素分解菌。
(3)你是否获得了某一稀释度下菌落数为30~300的平板?在这一稀释度下,是否至少有2个平板的菌落数接近?
提示:如果得到了两个或多个菌落数为30~300的平板,说明稀释度合适,操作比较成功,能够进行菌落的计数。
(4)你统计的每克土样中能分解尿素的细菌数是多少?与其他同学统计的结果接近吗?如果差异很大,可能是什么原因引起的?
提示:如果是用同一土样进行的操作,数据应该比较接近。如果差异很大,就需要从操作是否规范、培养基配制是否合理等方面查找原因。
(5)本活动初步筛选了能分解尿素的细菌,请进一步借助于生物化学的方法来鉴定所分离的菌种:分解尿素的细菌合成的脲酶可以将尿素分解成氨,氨会使培养基的碱性增强,在培养基中加入酚红指示剂培养细菌,若指示剂变红,可确定该细菌能够分解尿素。
【易错辨析】 ////////////////////////////////
(1)筛选分解尿素的细菌应以尿素作为培养基中的唯一氮源。(√)
(2)将土壤浸出液涂布在无菌的选择培养基上分离分解尿素的细菌,是否无菌操作影响较小。(√)
(3)利用稀释涂布平板法统计菌落数目时,统计的菌落数就是活菌的实际数。(×)
提示:因为当两个或多个细胞连在一起时,平板上观察到的只是一个菌落,因此统计的菌落数比活菌的实际数少。
(4)利用稀释涂布平板法和平板划线法均可实现细菌的分离和计数。(×)
提示:利用平板划线法只能分离细菌,不能进行计数。
提升关键能力
甲、乙两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数。在对应稀释倍数为106的培养基中,得到以下两种统计结果。
(1)甲同学在该浓度下涂布了一个平板,统计的菌落数为230,该同学的统计结果是否真实可靠?为什么?
提示:不可靠。为增加实验的说服力与准确性,应设置重复实验,在同一稀释度下至少涂布3个平板,统计结果后计算平均值。
(2)乙同学在该浓度下涂布了3个平板,统计的菌落数分别为21、212、256,该同学将21舍去,然后取平均值。该同学对实验结果的处理是否合理?为什么?
提示:不合理。微生物计数时,如果实验中出现重复实验的结果差别很大的情况,应分析实验过程中可能的影响因素,找出差异的原因,而不能简单地将结果舍弃后进行计数。
(3)在稀释涂布平板法中,为何需至少涂布3个平板?
提示:作为重复实验,统计时取平均值,以减少偶然因素对实验结果的影响,增强实验结果的说服力。
(4)为什么要选取菌落数目稳定时的记录作为结果?
提示:尽量缩小统计的菌落数与实际活菌数的差值,因为繁殖慢的菌体刚开始时看不出明显的菌落特征。
落实素养题组
1.科研人员采用富集培养方法从土壤中分离出能降解对羟基苯甲酸的微生物的实验过程,如图所示。下列说法正确的是( )
A.富集培养基以对羟基苯甲酸为唯一碳源,不能进行高压蒸汽灭菌
B.取少量样品重复培养的目的是使能降解对羟基苯甲酸的微生物比例增高
C.在图中1、2试管中都有微生物生长,说明该富集培养得到了欲分离的微生物
D.富集培养后通过平板划线法得到纯培养物
解析:选B。为“从土壤中分离能降解对羟基苯甲酸的微生物”,富集培养基应以对羟基苯甲酸为唯一碳源,培养基要进行高压蒸汽灭菌,A错误;实验中取少量样品进行重复培养,其目的是使能降解对羟基苯甲酸的微生物比例增高,B正确;在图中1、2试管中都有微生物生长,说明通过富集培养分离获得的既有能降解对羟基苯甲酸的微生物,也有其他微生物,即存在杂菌,C错误;图示所采用的是稀释涂布平板法,使聚集在一起的细菌细胞分散成单个细胞,从而能在培养基表面形成单个的菌落,以便纯化菌种,得到纯培养物,D错误。
2.如图为以苹果皮为材料分离、纯化用于果醋制作的菌种,已知所用培养基为米曲汁乙醇碳酸钙培养基——米曲汁1 000 mL、CaCO310 g、95%乙醇30 mL,在该培养基上,醋酸菌菌落周围会形成透明圈。下列说法正确的是( )
A.图中器具可用干热灭菌法灭菌,培养基用湿热灭菌法灭菌
B.②中的纯培养物来自苹果皮上的野生型酵母菌
C.分离计数的培养基需要用平板划线法至少制备3个
D.①扩大培养基中的菌种浓度约为8.1×108个/mL
解析:选A。锥形瓶、培养皿等器具可用干热灭菌法灭菌,培养基可用湿热灭菌法灭菌,A正确;图示过程为以苹果皮为材料分离、纯化用于果醋制作的菌种,②中的纯培养物来自苹果皮上的野生型醋酸菌,B错误;分离计数的培养基需要用稀释涂布平板法至少制备3个,平板划线法只能纯化不能计数,C错误;根据最后三个培养皿的菌落数为75、80、88,平均数为81,可求出菌种浓度为81÷0.1×107=8.1×109个/mL,故①扩大培养基中的菌种浓度约为8.1×109个/mL,D错误。
题后点击 两种纯化方法的比较
项目
平板划线法
稀释涂布平板法
分离结果
关键操作
接种环在固体培养基表面连续划线
①一系列的梯度稀释;②涂布平板操作
接种用具
接种环
涂布器
优点
可以观察菌落特征,对混合菌进行分离
可以计数,可以观察菌落特征
缺点
不能计数
操作复杂,需要涂布多个平板
共同点
都要用到固体培养基;都需进行无菌操作;都会在培养基表面形成单个的菌落;都可用于观察菌落特征
[高考真题·感悟试做]
1.(2023·广东高考)研究者拟从堆肥中取样并筛选能高效降解羽毛、蹄角等废弃物中角蛋白的嗜热菌。根据堆肥温度变化曲线和选择培养基筛选原理来判断,下列最可能筛选到目标菌的条件组合是( )
A.a点时取样、尿素氮源培养基
B.b点时取样、角蛋白氮源培养基
C.b点时取样、蛋白胨氮源培养基
D.c点时取样、角蛋白氮源培养基
解析:选D。由图可知,随着堆肥时间的延长,堆肥温度先升高后保持稳定,a点时堆肥温度最低,c点时堆肥温度最高。该实验的目的是筛选能高效降解羽毛、蹄角等废弃物中角蛋白的嗜热菌,应该用以角蛋白为唯一氮源的培养基进行筛选培养,且应该在高温条件下取样,即c点时取样,D符合题意。
2.(2023·山东高考)平板接种常用在微生物培养中。下列说法正确的是( )
A.不含氮源的平板不能用于微生物培养
B.平板涂布时涂布器使用前必须进行消毒
C.接种后未长出菌落的培养基可以直接丢弃
D.利用以尿素为唯一氮源的平板能分离出合成脲酶的微生物
解析:选D。不含氮源的平板可用于固氮菌的培养,A错误;平板涂布时涂布器使用前必须浸在酒精中,然后在火焰上灼烧灭菌,这种操作属于灭菌,不属于消毒,B错误;使用后的培养基即使未长出菌落也要在丢弃前进行灭菌处理,不能直接丢弃,以免污染环境,C错误;脲酶可以催化尿素分解,在以尿素为唯一氮源的平板上,能合成脲酶的微生物可以分解尿素获得氮源而进行生长繁殖,但是不能合成脲酶的微生物因缺乏氮源而无法生长,因此以尿素为唯一氮源的平板能分离出合成脲酶的微生物,D正确。
3.(2022·湖北高考)灭菌、消毒、无菌操作是生物学实验中常见的操作。下列叙述正确的是( )
A.动、植物细胞DNA的提取必须在无菌条件下进行
B.微生物、动物细胞培养基中需添加一定量的抗生素以防止污染
C.为防止蛋白质变性,不能用高压蒸汽灭菌法对牛肉膏蛋白胨培养基进行灭菌
D.可用高压蒸汽灭菌法对实验中所使用的微量离心管、细胞培养瓶等进行灭菌
解析:选D。动、植物细胞DNA的提取不需要在无菌条件下进行,A错误;动物细胞培养基中需添加一定量的抗生素以防止污染,而微生物的培养不能加入抗生素,B错误;一般用高压蒸汽灭菌法对牛肉膏蛋白胨培养基进行灭菌,以防止杂菌污染,C错误;可用高压蒸汽灭菌法对实验中所使用的微量离心管、细胞培养瓶等进行灭菌,以防止杂菌污染,D正确。
4.(2023·全国乙卷)某研究小组设计了一个利用作物秸秆生产燃料乙醇的小型实验。其主要步骤是:先将粉碎的作物秸秆堆放在底部有小孔的托盘中,喷水浸润、接种菌T,培养一段时间后,再用清水淋洗秸秆堆(清水淋洗时菌T不会流失),在装有淋洗液的瓶中接种酵母菌,进行乙醇发酵(酒精发酵)。实验流程如图所示。
回答下列问题。
(1)在粉碎的秸秆中接种菌T,培养一段时间后发现菌T能够将秸秆中的纤维素大量分解,其原因是________________________________________________________________________。
(2)采用液体培养基培养酵母菌,可以用淋洗液为原料制备培养基,培养基中还需要加入氮源等营养成分,氮源的主要作用是________________________________________(答出1点即可)。通常,可采用高压蒸汽灭菌法对培养基进行灭菌。在使用该方法时,为了达到良好的灭菌效果,需要注意的事项有_____________________________________________(答出2点即可)。
(3)将酵母菌接种到灭菌后的培养基中,拧紧瓶盖,置于适宜温度下培养、发酵。拧紧瓶盖的主要目的是______________________________。但是在酵母菌发酵过程中,还需适时拧松瓶盖,原因是_____________________________________________________。发酵液中的乙醇可用________________溶液检测。
(4)本实验收集的淋洗液中的____________可以作为酵母菌生产乙醇的原料。与以粮食为原料发酵生产乙醇相比,本实验中乙醇生产方式的优点是__________________________。
解析:(1)纤维素的分解需要纤维素酶的催化。(2)氮源主要用于菌体细胞中蛋白质、核酸等含氮物质的合成。高压蒸汽灭菌法的注意事项:①待灭菌的物品不要装得太挤,以免妨碍蒸汽流通而影响灭菌效果;②锥形瓶与试管口不要与桶壁接触,以免冷凝水淋湿包裹瓶口的纸而透入棉塞;③充分排出锅内的冷空气;④灭菌结束后,切断热源,让灭菌锅内温度自然下降,当压力表的压力降到零时,打开排气阀,旋松螺栓,打开盖子,取出灭菌物品。如果提前打开排气阀,锅内压力突然下降,灭菌容器内的液体会冲出容器,造成污染。(3)酒精发酵离不开酵母菌,酵母菌是兼性厌氧型微生物,在有氧条件下,酵母菌进行有氧呼吸,大量繁殖,在无氧条件下,酵母菌进行酒精发酵。要使酵母菌进行酒精发酵,需要创造无氧环境。酵母菌进行无氧呼吸产生酒精的过程中,会不断产生二氧化碳,要适时拧松瓶盖放出CO2,以免发酵瓶破裂。在酸性条件下,橙色的重铬酸钾溶液可与乙醇发生化学反应,变成灰绿色。(4)菌T可分泌纤维素酶,纤维素酶可以将纤维素分解成葡萄糖。用秸秆替代粮食生产乙醇,一方面提高了能量利用率,减少了环境污染,另一方面减少了对粮食的消耗,从而保障粮食安全。
答案:(1)菌T可以分泌纤维素酶 (2)用于合成蛋白质、核酸等含氮物质 待灭菌的物品不宜放置过挤;锥形瓶与试管口不要与桶壁接触,以免冷凝水淋湿包裹瓶口的纸而透入棉塞;必须将锅内的冷空气充分排出;灭菌完毕后,不可立即打开排气阀,待压力表的压力降到零时,才能打开 (3)创造无氧环境,利于酒精的产生 酒精发酵过程中产生的CO2会导致瓶内压强升高,及时排出CO2可以防止发酵瓶破裂 酸性重铬酸钾 (4)葡萄糖 提高了能量利用率、减少了对环境的污染、保障粮食安全
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