选修三回扣 基因工程、发酵工程、细胞工程

生物考前回扣指导——选修3 《发酵工程》山东高考核心考点 《发酵工程》典型例题： 西汉元帝时代的史游在《急就篇》中记载： “芜黄盐豉醯酢酱”。其中以黄豆、蚕豆等通过含米曲霉 (好氧菌)的曲料发酵制成的酱称豆瓣酱。下列说法错误的是（ A ） A.大豆与曲料混合装坛时加适量食盐以抑制杂菌生长 B.初步发酵后含米曲霉等微生物的曲料需适当通风 C.黄豆、蚕豆中的蛋白质经米曲霉分解产生氨基酸和多肽 D.传统豆瓣酱制作工艺无需将曲料中的米曲霉进行纯化 D B 《发酵工程》必备知识课本回扣： 1.课本第5页：腐乳制作的原理？ 哪些微生物参与了豆腐的发酵？主要是什么菌？ 2.第6页：泡菜制作流程中的注意事+笔记。 3.第7页：醋酸菌的特点、产醋酸的两个方程式。果酒果醋制作的流程、注意事项、笔记。 4.第10-11页：什么是消毒？常用的消毒方法？巴氏消毒的特点？ 什么是灭菌？常用的灭菌方法？ 5.12页第一段：酵母菌纯培养的两种方法？ 12页图中倒平板的基本步骤、笔记。 6.13页：平板划线法的基本流程、笔记。17页：稀释涂布平板法的基本流程、笔记。 7.18页：第一段第1句：什么时候平板倒置？然后放入哪里？ 第二段第1句：稀释涂布平板法的2个用途？ 第二段第2-3句：稀释涂布平板法的原理? 当样品的稀释度足够高时…………就能推测出含有多少活菌。 第二段第4句：为了保证结果的准确，一般选择…………。 第三段第3句：在同一稀释浓度下…… 8.18页：第四段：稀释涂布平板法统计的菌落数往往比活菌的实际数目偏少的原因？ 显微镜直接计数要利用什么？其统计的结果一般是什么？ 9.18页左栏小字部分：细菌计数板和血细胞计数板的区别？分别用来对谁进行计数？ 10.18页最最左下角的一段内容。20页拓展题第1题、第2题。 11.22页第二段：发酵工程的基本环节？22-23页绿色方框里面的全部内容、笔记。 12.24-25页：啤酒生产流程图①—⑧的内容全部背熟、理解。+笔记。 13.24页哪些内容在主发酵完成？后发酵要……。25页精酿啤酒一般不添加……不进行…… 14.24-27发酵工程应用的实例（课本上勾画的重点阅读、理解）。 15.28页拓展题第1题。 《细胞工程》山东高考核心考点 《细胞工程》典型例题： 某研究团队将iPS 细胞诱导分化而来的神经胶质细胞注射到具有人中风和痴呆症状的模型小鼠大脑，成功修复其大脑损伤。下列有关说法错误的是（C） A.体外培养iPS 细胞时，需定期更换培养液以营造无毒环境 B.神经胶质细胞具有支持、保护、营养和修复神经元的功能 C.iPS 细胞诱导分化成神经胶质细胞的过程体现了细胞全能性 D. 由iPS 细胞产生的特定细胞，可在新药的测试中发挥重要作用 对右图所示生物学概念模型的理解或分析，错误的是（AB） A.若图示植物体细胞杂交过程，则杂种植株④一定高度不育 B.若图示体外受精的过程，则需要对①、②均进行获能处理 C.若图示单克隆抗体制备过程，则①、②表示 B淋巴细胞和骨髓瘤细胞 D.若图示动物体细胞核移植技术则重构胚③需用电刺激或蛋白酶合成抑制剂激活 《细胞工程》必备知识课本回扣： 1.植物组织培养技术：植物组织培养的原理？植物组织培养的核心步骤是？什么是脱分化？36页基本步骤中的注意事项。 2.植物体细胞杂交技术：37页去除细胞壁用什么酶？人工诱导植物原生质体融合的方法？38页植物体细胞杂交的意义？ 3.植物细胞培养技术：41页什么是出生代谢产物并举例？什么是此生代谢产物？41页什么是植物细胞培养技术？用该技术生产次生代谢产物有什么优势？不占用……不受…… 1.动物细胞培养技术：44页动物细胞培养的条件及件需要注意的细节。什么是细胞贴壁？什么是接触抑制？44页左下角能否用胃蛋白酶来分散细胞？ 2.动物细胞融合与单克隆抗体：48页灭活病毒诱导动物细胞融合的原理？48-49页图中绿色方框里面的全部内容。 3.动物细胞核移植技术：52页什么是动物细胞核移植？ 核移植技术的原理？动物细胞核的全能性。52页最左侧卵母细胞去核指的是去掉什么？53页图动物细胞核移植的基本流程？ 4.胚胎工程的理论基础：56页黑体字：胚胎工程的主要技术有哪些？体外受精、胚胎移植、胚胎分割。56页什么是受精？ 包括哪两个阶段？ 哺乳动物受精的场所？ 56页什么是精子获能？ 56页左下角：精子获能的两种方式？ 57页第二段：卵子排出后在哪里进一步成熟？培养到什么时期才具备受精的能力？ 57页防止多精入卵的两道屏障？ 58页左上角小字儿：受精的标志？胚胎早期发育的基本阶段？ 58页什么是卵裂？哪一部分细胞属于全能细胞？哪个阶段的细胞开始出现分化？ 58页内细胞团细胞和滋养层细胞分别发育成哪一部分？什么是孵化？ 5.胚胎工程技术：60页体外受精技术的三个步骤？体外受精的意义? 61页：什么是胚胎移植？其中什么是供体？什么是受体？ 61页图胚胎移植的流程图。 胚胎移植的两次检查：①收集胚胎后，检查胚胎质量。②胚胎移植后，对受体进行妊娠检查。 61页笔记：如何同期发情处理：通常用孕激素对供体、受体进行同期发情处理。 同期发情处理的目的：使供、受体生殖器官生理变化相同，生理环境相同。 62页最左边的小字：如何进行超数排卵：对供体母牛注射促性腺激素进行超数排卵。 超数排卵的目的是：使卵巢排出更多的成熟卵子。 61页笔记：胚胎移植的生理学基础： 胚胎能移入受体的基础：同期发情处理，使供、受体生殖器官生理变化相同，生理环境相同。 胚胎收集的基础：早期胚胎处于游离状态。 胚胎在受体内存活的基础：不发生免疫排斥反应。 胚胎在受体内发育的基础：供体胚胎可与受体子宫建立正常的生理和组织联系，但其遗传特性不受影响。 62页：胚胎移植的实质是什么？胚胎移植的优势是什么？ 62页：什么的胚胎分割？+62页黑体字后面那一整句话。 62页最后一段：进行胚胎分割时应该选择什么样的胚胎？分割囊胚的注意事项？为什么要对囊胚内细胞团均等分割？有利于胚胎的恢复和进一步发育。 63页：胚胎分割的意义？3条。 63页图2-25中的全部内容。 《基因工程》山东高考核心考点 《基因工程》典型例题： 潍坊二模25.(12分)A蛋白是某种激素合成的关键酶。为鉴定该激素合成的部位及生理作用，科研团队利用无缝克隆技术将A蛋白结合蛋白基因 (P基因)与葡萄糖苷酸酶基因(GUS基因)融合，构建A蛋白检测探针，通过农杆菌转化法导入拟南芥进行实验。相关原理、过程及质粒的结构如下图所示。 注：①bar为抗草甘膦(一种除草剂)基因；Tet²为四环素抗性基因；Amp²为氨苄青霉素抗性基因 为引物 ③BamHⅠ、SmaⅠ、BclⅠ为限制酶 (1)无缝克隆时所需的酶除T5 核酸外切酶外还有 DNA聚合酶和DNA连接酶 。用无缝克隆技术构建GUS-P融合基因的关键是 R₂引物5'端序列与 F1（或P基因左侧序列） 互补。 (2)利用双酶切法将融合基因插入Ti质粒，选用的限制酶为 BclI和SmaI 。扩增融合基因所需的引物 和 F₂应选用下列引物组合为 ①④ 。 ① ② ③ ④ (3)利用农杆菌转化法将融合基因导入农杆菌、拟南芥细胞的过程中，需要筛选两次，这两次筛选分别是 先筛选出能在含有四环素培养基上生长而不能在含有氨苄青霉素培养基上生长的农杆菌； 再用含有草甘膦的培养基筛选出导入融合基因的拟南芥细胞 。 (4)葡萄糖苷酸酶可以水解 X -Gluc 呈蓝色，将转基因拟南芥置于不同培养液中培养一段时间，然后分离不同部位的组织分别加入X-Gluc 进行鉴定，结果如下表所示: 部位 根 茎 叶 完全培养液 蓝色 浅蓝 浅蓝 缺磷培养液 深蓝 蓝色 浅蓝 分析表明，该激素最主要的合成部位是 根 ，通过实验结果分析该激素的生理作用是 促进植物对磷元素的吸收 。 第一个空：RcoRI和BamHⅠ 第二个空：RcoRI和BclI 《基因工程》必备知识课本回扣： 基因工程的操作过程考点 1.课本71页：限制酶：（1）作用：识别特定的脱氧核苷酸序列，并在特定位点切割磷酸二酯键。 （2）产物：黏性末端或平末端 （3）原核生物存在限制酶的意义：切割外源DNA、使之失效，从而达到保护自身的目的 （4）双酶切的优点：防止目的基因、载体自身环化和反向连接，保证目的基因和载体正确连接 （5）同尾酶切割的末端能连接的原因：具有相同的黏性末端。 （6）限制酶选择注意事项：不能破坏目的基因、复制原点、启动子、终止子，至少保留一个标记基因，在启动子和终止子之间，注意连接方向确定两端的限制酶种类。 2.DNA连接酶：E.coliDNA连接酶只能连接黏性末端；T4DNA连接酶既能连接黏性末端也能连接平末端但连接平末端效率较低。注意务必审题看末端类型选合适的DNA连接酶。 3.77页：PCR的原理、三个步骤的名称和使用的温度及目的、条件、一般3个循环得到目标产物（包括从一个DNA中扩增目的基因和5’端修饰的）。 （1）原理：DNA半保留复制。 条件：一定的缓冲液（需加入Mg2+激活DNA聚合酶）、2种引物、模板DNA、耐高温的DNA聚合酶（Taq酶）、四种脱氧核苷酸（四种dNTP） （2）过程：课本78-79页图下面的文字：如何变性？如何复性？如何延伸？ （3）RT-PCR（也叫逆转录PCR）需要逆转录酶、TaqDNA聚合酶。 4.77-79页：引物的选择、作用、修饰、具体的设计、计算 5.80页：基因表达载体的构建：核心步骤、目的、组成、启动子和终止子和标记基因的作用，注意启动子与起始密码子的区别。 6.80-81页：将目的基因导入受体细胞的方法：转化的概念、导入各种细胞的方法名称、农杆菌转化法的原理， 7.82页：目的基因的检测与鉴定：分子水平检测的目的及方法、个体水平的检测。 8.课本90页：特别注意乳腺生物反应器的操作。 91页：转基因克隆猪中为什么选用猪器官、如何操作。 9.蛋白质工程：蛋白质工程的概念、目标、基本思路，注意直接操作对象为基因，基因编辑技术合成蛋白质应属于蛋白质工程。 10.102页左下角防治基因污染。 课本74页实验：DNA的粗提取与鉴定 1.DNA粗提取与鉴定的原理： ①DNA不溶于酒精，某些蛋白质溶于酒精（预冷的体积分数95%），可以初步分离DNA与蛋白质。 ②DNA在不同浓度的NaCl溶液中的溶解度不同，溶于2mol/L的NaCl溶液，去除杂质； ③鉴定原理：DNA遇二苯胺试剂在沸水浴加热5分钟呈现蓝色。注意二苯胺试剂配制用到冰乙酸和浓硫酸，棕色瓶保存，临用前加入乙醛溶液（提高反应灵敏度）。 2.实验材料：可选用新鲜洋葱、香蕉、菜花、菠菜、猪肝、鸡血细胞，但是不能用猪血细胞（哺乳动物成熟红细胞没有细胞核和众多细胞器），注意实验前可将材料置于低温、暗处保存，降低多糖含量。 3.课本117页研磨液成分：①若用菜花硬度较高，可加入纤维素酶；②SDS使蛋白质变性，与DNA分离，瓦解细胞膜，洗洁精和洗衣粉中含有；③EDTA是DNA酶抑制剂，可防止细胞破碎后DNA酶降解DNA；④Tris提供缓冲体系，DNA在缓冲体系中呈稳定状态；⑤加入2mol/L的HCl调至PH至8。 4.方法步骤、注意事项课本74-75页。 课本84页实验：DNA片段的扩增及电泳鉴定 1.实验原理：课本84页第一段+第二段，读熟、理解。2.操作步骤1-8阅读。 3.课本85页右下角“注意”4条内容读熟、理解。 85页右下角的2个思考题。 学科网（北京）股份有限公司 $$