内容正文:
第二章 动物细胞工程
第2节 动物细胞融合技术和单克隆抗体
(第二课时)
1
目录 /CONTENTS
01
动物细胞融合技术
02
制备单克隆抗体
03
单克隆抗体的应用
04
习题检测
学习目标:
1.举例说出动物细胞融合的概念、原理及应用。
2.阐明利用动物细胞融合技术制备单克隆抗体的过程。
3.认同单克隆抗体在临床上有重要的应用价值。
新课导入
植物体细胞杂交
植物细胞融合
植物组织培养
植物体细胞杂交技术打破生殖隔离,实现远缘杂交育种,培育植物新品种。
提问:有没有技术让不同种动物的体细胞杂交,培育出集中不同细胞优势于一身的动物细胞呢?
新课导入
实例:1970年,人—鼠细胞荧光标记融合实验
人细胞
鼠细胞
红色荧光染料标记的膜蛋白
绿色荧光染料标记的膜蛋白
细胞融合
人鼠杂交细胞
37°
培养40min
细胞融合
实验表明:细胞膜具有一定的流动性
新课导入
思考:动物细胞进行融合,与植物有哪些不同之处?
无需去除细胞壁;
全能性受限制,不能培育成新的动物个体。
显微镜下的
动物细胞融合
目录
01
一、动物细胞融合技术
一、动物细胞融合技术
1. 动物细胞融合技术
(1)概念:
指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的技术。
细胞膜具有一定的流动性。
(2)原理:
(3)诱导细胞融合的三种方法:
物理法:电融合法
化学法:聚乙二醇(PEG)融合法
生物法:灭活病毒诱导法
——动物细胞融合特有
灭活是指用物理或化学手段使病毒或细菌失去感染能力,并不破坏病毒的抗原结构。
(4)过程:
细胞膜融合
细胞核融合
细胞质融合
细胞融合的实质:
一、动物细胞融合技术
思考:19世纪30年代,科学家曾在肺结核、天花和麻疹等疾病的病人的病理组织中观察到多核细胞。如何解释这一现象?
病人体内病毒等诱导多个体细胞融合形成了多核细胞。
肺结核病人病理切片
原理是什么?
灭活病毒诱导法
一、动物细胞融合技术
病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用,使细胞相互凝集,细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布,细胞膜打开,细胞发生融合。
灭活病毒诱导法原理
用灭活的病毒诱导动物细胞融合过程:
病毒颗粒
灭活的病毒颗粒粘附于细胞表面,使细胞互相凝聚
细胞膜融合
细胞核融合
形成杂交细胞
细胞膜打开
细胞质融合
融合完成的标志
一、动物细胞融合技术
(5)结果:
突破了有性杂交方法的局限,使远缘杂交(种间、属间、科间、动植物之间)成为可能。
(6)意义:
形成单核的杂交细胞。即融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞。
(7)应用:
研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和培育生物新品种等的重要手段,特别是利用动物细胞融合技术发展起来的杂交瘤细胞技术,为制造单克隆抗体开辟了新途径。
一、动物细胞融合技术
1、动物细胞完成融合实质及完成的标志是什么?
【思考讨论】
当两个细胞核融合后形成具有单核的杂交细胞,标志动物细胞融合完成。
2、不灭活的病毒能否作为诱导剂?
不能。用病毒作为诱导剂时,必须事先灭活,使病毒失去感染和增殖能力,但不破坏病毒的抗原结构。而不灭活的病毒会感染细胞,不能诱导细胞融合。
一、动物细胞融合技术
动物细胞融合与受精作用的区别
注意说明
(1)受精作用:是在同种生物之间进行的,精子与卵细胞的融合不需要任何诱导剂,受精卵内具备同种生物的两个亲本的遗传物质。
(2)动物细胞融合可在不同物种间进行,由于物种间存在生殖隔离,所以自然条件下不能融合成杂交细胞,必须有诱导剂才能融合。形成的杂交细胞具备两个亲本细胞的遗传物质,从而体现两个亲本的遗传特性。
受精作用
动物细胞融合
一、动物细胞融合技术
植物体细胞杂交 动物细胞融合
原理
细胞融合前的处理方法
诱导细胞融合的方法
细胞融合成功的标志
意义
主要用途
细胞膜具有一定的流动性、
植物细胞的全能性
细胞膜具有一定的流动性
用果胶酶和纤维素酶去除细胞壁
用胰蛋白酶或胶原蛋白酶使细胞分散成单个细胞
聚乙二醇(PEG)融合法、电融合法、离心法;高Ca2+-高pH融合法
聚乙二醇(PEG)融合法、电融合法、灭活病毒诱导法
再生出细胞壁
细胞核的融合
打破生殖隔离,实现远缘杂交育种,培育植物新品种
突破了有性杂交的局限,使远缘杂交成为可能
获得完整的杂种植株
主要用于制造单克隆抗体
习题检测
1.与植物原生质体相比,动物细胞融合特有的诱因因素有聚乙二醇(PEG)、灭活的病毒( )
2.灭活的含义是指用物理或化学手段使病毒或细菌失去感染能力,但是不破坏它们的抗原结( )
二倍体动物细胞融合后的杂交细胞仍然是二倍体细胞( )
×
√
√
习题检测
1.下列关于动物细胞融合技术及意义的叙述,不正确的是(