1.2.2 微生物的选择培养和计数课件-2023-2024学年高二下学期生物人教版选择性必修3

第2节 微生物的培养技术及应用 二 微生物的选择培养和计数 第1章 发酵工程 高压蒸汽灭菌 液体培养基 （三）微生物的选择培养 平板划线法可以帮助你得到纯培养物，但如果你想知道一个平板上有多少菌落，或者想让你统计1ml菌液里边能分解尿素的细菌，平板划线法就无法完成任务了。还需要科学的测定微生物数量的方法——稀释涂布平板法。 稀释涂布平板法：将菌液进行一系列梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。 基本操作：（1）梯度稀释； （2）涂布平板。 稀释度足够高时，能在培养基表面形成单个菌落。 二、微生物的选择培养和计数 1ⅹ107 1ⅹ105 1ⅹ106 1ⅹ103 1ⅹ102 1ⅹ104 9mL无菌水 稀释涂布平板法及其操作过程 ①铲取土样，将样品装入纸袋中。 ②将10g土样加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀，制成菌液。取1mL上清液加入盛有9mL无菌水的试管中，依次等比稀释。 1ⅹ10 90mL无菌水 1mL ③取0.1mL菌液，滴加到培养基表面。 ④将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中。 ⑤将涂布器放在火焰上灼烧，待酒精燃尽、涂布器冷却后，再进行涂布。 ⑥用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使涂布均匀。 1mL 1mL 1mL 1mL 1mL 10g 注意：移液管要经过灭菌，并且操作应在酒精灯火焰附近完成。 浸 滴 灼 涂 注意： 1.10g土样加入盛有90mL无菌水中后，在计算1g土壤有多少细菌时，不要忽略； 2.涂布时，取的菌液是0.1ml，计算时也一定要考虑进去。 3.过程中所有操作都应在酒精灯火焰旁进行； 4.将涂布器从酒精中取出时，要让多于的酒精在烧杯中滴尽，然后再放在火焰上灼烧；不要将过热的涂布器放在盛有酒精的烧杯中，以免引燃酒精。 5.涂布时，转动培养皿，这样操作可以使受力更均衡，涂布均匀。 待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板倒置，放入30～37℃的恒温培养箱中培养1～2d，在涂布有合适浓度菌液的平板上就可以观察到分离的单菌落。 （二）微生物的选择培养 培养与观察 恒温培养箱 二、微生物的选择培养和计数 1.为培养和分离出酵母菌并淘汰杂菌，常在培养基中加入（ 　　） A. 较多的氮源物质 B. 较多的碳源物质 C. 青霉素类药物 D. 高浓度食盐 C 课堂练习 2.用稀释涂布平板法来统计样品中的活菌数时,通过统计平板上的菌落数就能推测出样品中的活菌数,原因是（ ） A.菌落中的细菌数目是固定的 B.平板上的一个菌落就是一个细菌数目相同 C.通过此方法统计的菌落数与活菌的实际 D.平板上的一个菌落一般来源于样品稀释液中的一个活菌 D （三）微生物的数量测定 1.间接计数法——稀释涂布平板法 （1）原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。 样品的稀释度将直接影响平板上的菌落数目。 稀释103倍 稀释104倍 稀释105倍 空白对照 二、微生物的选择培养和计数 （三）微生物的数量测定 1.间接计数法——稀释涂布平板法 （2）计数原则 ①一般选择菌落数为30～300的平板计数； ②在同一稀释度下，应至少对3个平板进行重复计数，然后求出平均值。 ③适当的稀释度、涂布是否均匀是成功统计菌落数目的关键。 分析实验结果时，要考虑重复组结果是否接近，如果相差太大，意味着操作有误，需重新实验。 （3）结果分析：①统计的菌落数往往比活菌的实际数目少； 原因：当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。 ②统计结果一般用菌落数而不是用活菌数来表示。 （三）微生物的数量测定 1.间接计数法——稀释涂布平板法 每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M M代表稀释倍数； C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数； V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL) （4）计算公式： 某同学在稀释倍数为106 的培养基中测得平板上菌落数的平均数为234，那么每g样品中的菌落数是（涂布平板时所用稀释液的体积为0.1mL) ( ) A. 2.34×108 B. 2.34×109 C. 234 D. 23.4 B 例题1： 甲同学做此实验在稀释倍数105获得3个平板，菌落数分别是80、90、100，涂布平板时均使用0.1ml菌液，试计算每克土壤中可以分离尿素的细菌数目？ （80+90+100）/3 0.1 × 105 =9×107个 例题2： 每毫升原液所含细菌数＝每小格平均细菌数×400×10000×